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Determinacion de Proteinas en Alimentos
Determinacion de Proteinas en Alimentos
CONCEPTOS PREVIOS:
Métodos colorimétricos para la determinación de proteínas.
1.2. Método de Biuret
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los
grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con
4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad
de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de
manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy
baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados
muy concentrados (por ejemplo en suero).
El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en
1838, tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS, que significa primordial nivel
primario.
Las proteínas son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que exhiben una
amplia gama de estructuras y funciones.
Las proteínas como un grupo de biomoléculas, desempeñan una gran variedad de funciones,
algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras
trasportan y almacenan moléculas pequeñas.
Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son proteínas al
igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.
Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de
combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.
Las proteínas también se clasifican según su composición, las que se forman solo de residuos
de aminoácidos y no tienen otras biomoléculas son PROTEÍNAS SIMPLES; no todas las
proteínas son solubles en agua, de hecho las proteínas insolubles son esenciales para dar
soporte y mantener la integridad estructural de las células y organismos.
DETERMINACION DE PROTEINAS
I. OBJETIVOS:
* Determinar el nivel de proteína que posee un alimento a través del contenido de nitrógeno.
* El estudiante conocerá el fundamento del análisis de proteínas por los métodos: Kjeldahl y
Sorensen.
* El estudiante se familiarizará con los equipos y el procedimiento del análisis de proteínas
para los métodos de Kjeldahl y sorensen .
* El estudianteaprenderá a realizar los cálculos pertinentes para la determinación de nitrógeno
en proteínas.
* MATERIALES:
* Muestra.
* Destilador.
* Incinerador.
* Matraz Kjeldahl.
* matraz Erlenmeyer (250 ml)
* Bureta fina.
* Matraces de 100 y 1000 ml.
* Pipetas de 10 ml.
* Probetas de 25 ml.
* REACTIVOS:
* Acido sulfúrico 98%.
* Mezcla catalizadora: 3 gr de oxido de titanio (TiO2), 3 gr de sulfato cúprico (CuSO4) y 100 gr
de sulfato de potasio (K2SO4).
* Disolución de hidróxido de sodio al 50%.
* Disolución de acido clorhídrico (HCl) 0.1 mol/l.
* Indicador rojo de metilo.
* FASE DE TITULACION
* Titular el contenido de Erlenmeyer con una solución de ácido clorhídrico (HCl) al 0.1N (cada
ml de esta solución equivale a 1.4008 mg de Nitrógeno) hasta que vire de color (amarillo a rojo
o verde a azul) esto depende del indicador que se adiciona. Efectuar los cálculos de acuerdo a
la muestra utilizada y el factor de conversión de acuerdo a la muestra.
* FACTOR DE CONVERSIÓN DE NITRÓGENO EN ALIMENTOS
* Avena, cebada y centeno 5.83
* Arroz 5.95
* Trigo, harina refinada 5.70
* Trigo, grano entero 5.83
* Almendras 5.18
* Soya 5.71
* Leche y sus productos 6.40
* Otros(carne, Huevos, maíz) 6.25
El contenido porcentual de proteína P de la muestra se calcula:
P=a-b1.4008FM
* a: gasto en ml de la disolución del acido clorhídrico (0.1mol/l), en la muestra.
* b: gasto en ml de la solución de acido clorhídrico (0.1mol/l), en el blanco.
* F: factor de conversión para calcular el contenido proteico.
* M: peso en gramos de la muestra.
1.4008mg de Nitrógeno por cada ml de gasto de disolución valorada en ácido clorhídrico.
Fundamento:
Se basa en que el formaldehido va a actuar bloqueando los grupos aminos, dando como
resultado la liberación de los grupos carboxilos con el consiguiente aumento de la acidez, la
cual se valora con NaOH al 0.1N.
Procedimiento:
* Medir 10 de leche neutralizar con HCl al 0.1 N
* Agregar 20 ml de formaldehido neutro (neutralizado con NaOH 0.1N), se agrega el
formaldehido a la leche y desaparece el color rosado.
* Titular nuevamente con NaOH al 0.1 N
Cálculos:
%P=G x 0.1909 x 5
%P=12.24%
%A=V x N x F x 100M
%A=0.152%
V1=2.4 ml
%P=G x 0.1909 x 5
%P=2.4 x 0.1909 x 5
%P=2.2908%
V2=3.2 ml
%P=G x 0.1909 x 5
%P=3.2 x 0.1909 x 5
%P=3.0544%
V. DISCUSIONES:
* Para la determinación de proteínas en leche por el método de Sorenser, comparando
nuestros resultados con los de , en primer lugar con el V1 nos damos cuenta de que el % de
proteína obtenida no se asemeja al de la bibliografía por lo que podemos darnos cuenta de
que la leche fue adulterada o alterada por algún agente, por lo que realizamos nuevamente el
proceso, obtuvimos un V2 con el que dio como resultado un % de 3.0544 que si está dentro
del rango estipulado en .
* Este problema de los volúmenes lo asumimos por el viraje en l titulación, que depende de la
vista de la persona encargada del trabajo.
VI. CONCLUSIONES:
* El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado,
formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que se
destila recibiéndolo en:
a) Acido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado con
hidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o
b) Acido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico.
VII. CUESTIONARIO:
* ¿Qué es una proteína bruta?
El nitrógeno total o proteína bruta (N x 6,25) se determina por el método de Kjeldahl, que
consiste en convertir todo el N orgánico (de las proteínas en su mayoría) en N amoniacal
(como NH4SO4), destilar el amoniaco (en medio básico) y valorarlo con una disolución ácida
contrastada. El % de proteína se calcula multiplicado el % de N por el factor de 6,25.
* Señale los grupos de alimentos y los factores de conversión que se usa para el cálculo de
proteína total.
Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amoníaco, nitritos y nitratos y otros
como la urea, el biuret o el ácido úrico.
Los organismos que puede utilizar el NNP son los hongos, las plantas y algas, bacterias y
organismo que viven en simbiosis con ellos
VIII. BIBLIOGRAFIA:
* AOAC. 1995. Official Methods of Analysis. 16th edition. Association of Official Analytical
Chemists. Arlington, Va., U.S.A.
* F.L. HART – H.J. FISHER 1991. Análisis Moderno de los Alimentos. Editorial Acribia.
Zaragoza – España.
* MATISSEK, R.; SCHNEPEL, F. y STEINER, G. 1998. Análisis de los Alimentos.
Fundamentos-Métodos-Aplicaciones. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza-España.
* A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis.
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* Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett
Publishers. U.S.A. pp 209-212.
* Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed. McGraw-Hill
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* Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2ª. Ed. AVI U.S.A. pp
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* http://74.125.47.132/search?
q=cache:nDgT3sRd2A8J:www.uclm.es/profesorado/jmlemus/TEMA13.ppt+que+es+proteina+b
ruta+en+alimentos&cd=3&hl=es&ct=clnk&gl=pe
* http://web.uniovi.es/QFAnalitica/trans/LabAvQuimAn/Practica1.pdf
* http://es.wikipedia.org/wiki/Nitr%C3%B3geno_no_proteico