Universidad Rafael Landívar

Laboratorio de Bioquímica
Sección: 03
María Fernanda Samayoa S.
1095118

Aminoácidos
Titulación del ácido glutámico
Práctica 4 (Pre y Post-Laboratorio)

I Objetivos
• Conocer las distintas formas en que pueden existir los aminoácidos.
• Establecer en una gráfica el punto isoeléctrico de un aminoácido.

II Antecedentes
Aminoácidos
La hidrolisis de cada polipéptido genera un conjunto de aminoácidos, que se conoce como
composición de aminoácidos de la molécula. Los aminoácidos que se encuentran en el cuadro se
denominan estándar. Estas moléculas contienen un átomo de carbono central al que están unidos
un grupo amino, carboxilato, un átomo de hidrógeno y un grupo R. Existen excepciones como la
prolina, en la cual difiere de los otros aminoácidos estándar en que su grupo amino es secundario,
formados por un cierre es anillo entre el grupo R y el nitrógeno del grupo amino. (Mckee & R.
Mckee, 2009)

Los aminoácidos no estándar son residuos que se han modificado de forma química después de
haberse incorporado a un polipéptido o los aminoácidos que se encuentran en los seres vivos pero
que no se encuentran en las proteínas. A pH 7, el grupo carboxilo de un aminoácido se encuentran
en su forma de base conjugada y el grupo amino en su forma de ácido conjugado. Cada aminoácido
puede comportarse como un ácido o base, esta propiedad se le conoce con el término anfótero. Se
denominan zwitteriones a las moléculas neutras que llevan de forma simultánea un número igual
de cargas positivas y de cargas negativas. (Mckee & R. Mckee, 2009)

Clases de aminoácidos
Los aminoácidos se clasifican según su capacidad para interactuar con el agua. Utilizando este
criterio, pueden distinguirse cuatro clases:
Aminoácidos no polares: Contienen principalmente grupos R hidrocarbonados sin cargas
positivas o negativas. Dado que interactúan poco con el agua, los aminoácidos no polares tienen
un cometido importante en el mantenimiento de la estructura tridimensional de las proteínas. En
este grupo se encuentran dos tipos de cadenas R de hidrocarburos: los aromáticos y las alifáticas.
Aminoácidos polares: Los aminoácidos polares poseen grupos funcionales capaces de formar
enlaces de hidrógeno e interactúan de forma sencilla con el agua. La serina, la treonina, la tirosina,
la asparagina y la glutamina. La serina, la treonina y la tirosina contiene un grupo hidroxilo polar.
La asparagina y la glutamina son derivados amida de los aminoácidos ácidos.
Aminoácidos ácidos: Dos aminoácidos estándar poseen cadenas con grupos carboxilato. Las
cadenas laterales del ácido aspártico y del ácido glutámico tienen carga negativa a pH fisiológico,
por lo que se conocen como aspartato y glutamato.
Aminoácidos básicos: Los que son básicos a pH fisiológico llevan a carga positiva. Pueden formar
enlaces iónicos con los aminoácidos ácidos.
(Mckee & R. Mckee, 2009)

Aminoácidos con actividad biológica

Los aminoácidos también posees funciones biológicas.
1. Numerosos aminoácidos α o sus derivados actúa como mensajeros químicos. Como la
glicina, el glutamato, la serotonina y la melatonina son neurotransmisores. La tiroxina y
ácido indolacético son hormonas.
2. Son precursores de diversas moléculas complejas que contiene nitrógeno. En los ejemplos
se encuentran las bases nitrogenadas que componen nucleótidos, los ácidos nucleicos, el
hem (contienen hierro necesario para la actividad biológica) y la clorofila.
3. Los aminoácidos estándar y no estándar actúan como intermediarios metabólicos. Como
lo es la arginina, la citrulina y la ornitina que son componentes del ciclo de la urea. (Mckee
& R. Mckee, 2009)

Aminoácidos modificados en las proteínas

Entre estos se encuentran el ácido carboxiglutámico γ, un residuo de aminoácido que se une al
calcio que se encuentran en la protombina, proteína utilizada en la coagulación de la sangre. La 4-
hidroxiprolina y la 5-hidroxilisina son componentes estructurales importantes del colágeno, la cual
es la más abundante del tejido conjuntivo. (Mckee & R. Mckee, 2009)

Titulación de los aminoácidos

La forma iónica predominante de estas moléculas en solución depende del pH. La titulación de un
aminoácido ilustra el efecto del pH sobre su estructura, también es una herramienta útil para
determinar la reactividad de las cadenas laterales de los aminoácidos.
El punto isoeléctrico se puede calcular de la siguiente manera:
𝑝𝐾1 + 𝑝𝐾2
𝑝𝐼 =
2
(Mckee & R. Mckee, 2009)
Estereoisómeros de los aminoácidos
Las moléculas con un átomo de carbono asimétrico o quiral difieren sólo en la disposición espacial
de los átomos unidos al carbono. Las formas especulares de una molécula se denominan
enantiómeros. En los seres vivos de la mayoría de las moléculas asimétricos poseen sólo una forma
estereoisomérica. (Mckee & R. Mckee, 2009)

III Diagrama de flujo

 Tomar dos muestras de Colocarlas en los
INICIO
10 ml de glutamato. Erlenmeyers.

Al segundo, adicionar
Al primer Erlenmeyer
agua destilada al mismo
adicione NaOH hasta Llenar otra bureta con
volumen que el anterior.
llegar a pH 11. Anotar HCl.
Identificar y anotar el
volumen.
pH.

Titular la solución del

Titular 1er. Erlenmeyer
2do. Erlenmeyer FIN
con HCl.
agregando HCl.

Fuente: Manual de laboratorio

IV Resultados
Ecuación 1. Conversión de litros a moles
𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑢𝑙𝑡𝑜 = 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟𝑖𝑑𝑎𝑑

Ecuación 2. Punto Isoeléctrico

𝑝𝐾1 + 𝑝𝐾2
𝑝𝐼 =
2
(Mckee & R. Mckee, 2009)
Dato 1. Punto isoeléctrico teórico del ácido glutámico

2.19 + 9.67
𝑝𝐼 = = 5.93
2
(Mckee & R. Mckee, 2009)

Tabla 1. Adición de NaOH a muestra de glutamato

ml de NaOH pH (11) Moles de NaOH
1 4.97 0.0100
2 5.27 0.0120
3 5.50 0.0130
4 5.91 0.0140
6 6.44 0.0160
8 7.02 0.0180
 10 9.50 0.0200
11 10.15 0.0210
12 10.46 0.0220
13 10.70 0.0230
14 10.89 0.0240
14.5 11 0.02450
Fuente: Datos experimentales

Tabla 2. Adición de HCl a la muestra de glutamato

ml de HCl pH (4) Moles de HCl
3 10.25 0.01300
6 7.11 0.01600
9 6.25 0.01900
10 6.08 0.02000
13 5.77 0.02300
15 5.54 0.02500
18 5 0.02800
Fuente: Datos experimentales

Gráfico 1. Curva de titulación de glutamato con NaOH

Curva de titulación
Glutamato monosódico+NaOH
12

10
pH hasta llegar a 11

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006 0.0007
Moles de NaOH

Fuente: Datos experimentales

Tabla 3. Punto isoeléctrico del gráfico 1.
Punto isoeléctrico pKa 1 pKa 2
7.95 6.8 9.1
Fuente: Datos experimentales

Gráfico 2. Curva de titulación para glutamato con HCl

Curva de titulación
Glutamato monosódico + HCl
12

10

8
pH hasta 4

0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03
moles de HCl

Fuentes: Datos experimentales

Tabla 4. Punto isoeléctrico del gráfico 2.

Punto isoeléctrico pKa 1 pKa 2
6.45 6.1 6.8
Fuente: Datos experimentales

V Discusión de Resultados

En la segunda titulación, en la cual se le agregó HCl al glutamato, no se logró llegar a pH 4 por

falta de tiempo.
Se utilizo glutamato monosódico porque este es más estable que el ácido glutámico.
En la práctica se empezó a titular la solución de glutamato con hidróxido de sodio, el cual es una
base fuerte, y al mismo tiempo se midió el pH, con un potenciómetro, con cada mililitro de NaOH,
de la misma forma se realizó con el HCl (ácido fuerte). Con el NaOH se quiso llegar a un pH 11 y
con el HCl a un pH 4. Luego se realizó una curva de titulación con los resultados obtenidos, siendo
pH en el eje “y” y los moles de solución en el eje “x”. En las gráficas se presentaron ciertos cambios
repentinos a los cuales se llaman “puntos de inflexión”, es estos puntos a ese pH la sustancia que
esta siendo titulada tiene una carga neta 0, estos puntos de inflexión son los que son utilizados para
determinar los pKa. Luego de esto se obtuvieron los pK (Sánchez & Alvarez, 2018)a 1 y 2 de
cada gráfico. En la tabla 3 los pKa fueron 6.8 y 9.1, de la curva de titulación con el NaOH. En la
tabla 4 los pKa fueron 6.1 y 6.8 de la curva de titulación con el HCl. De la primera titulación se
obtuvo un punto isoeléctrico de 7.95 y de la segunda titulación un punto isoeléctrico de 6.54, se
obtuvieron estos datos con los pKa ya mencionados.

Los aminoácidos con cadenas laterales ionizables tienen curvas de titulación complejas. El ácido
glutámico tiene un grupo carboxilo en la cadena lateral. A pH bajo, el ácido glutámico posee una
carga neta de +1. Al añadir la base, el grupo carboxilo α pierde un protón para transformarse en
un grupo carboxilato. El glutamato ahora no tiene una carga neta. Al añadir un ácido, el grupo
carboxilo α gana un protón. (Mckee & R. Mckee, 2009)

Probablemente los puntos isoeléctricos puedan haber variado por la temperatura ya que el dato
teórico es a 25 °C (Mckee & R. Mckee, 2009) y los que se realizaron en el laboratorio
probablemente no. Otro error que podría haber sido el causante son las cantidades de solución que
utilizaron, esto hizo que variaran los datos de los moles obtenidos.

VI Cuestionario

1. Construya gráficas de titulación para los dos procesos anteriores. Identifique en ambas el
punto isoeléctrico.
Gráfico 1. Curva de titulación de glutamato con NaOH

Curva de titulación
Glutamato monosódico+NaOH
12

10
pH hasta llegar a 11

0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006 0.0007
Moles de NaOH

Fuente: Datos experimentales

6.8 + 9.1
𝑝𝐼 = = 7.95
2
Gráfico 2. Curva de titulación para glutamato con HCl

Curva de titulación
Glutamato monosódico + HCl
12

10

8
pH hasta 4

0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03
moles de HCl

Fuentes: Datos experimentales

6.1 + 6.8
𝑝𝐼 = = 6.45
2

2. Escriba la reacción de ionización del ácido glutámico.

(Mckee & R. Mckee, 2009)

VII Conclusiones

• La representación gráfica de la variación del pH de una solución por la adición de

equivalentes de una base fuerte (NaOH) y un ácido fuerte (HCl) proporcionó la medida de
pka de los grupos ionizables, también se localizó el punto isoeléctrico.
• Fue importante tener en cuenta que los pKa de los grupos funcionales del aminoácido se
encuentran localizados a distintos rangos del pH, por lo cual fue necesario realizar una
titulación que abarcara todo el rango de pH tanto ácido como básico.
 VIII Bibliografía
Chang, R. (2010). Química . México: McGraw-Hill.
Mckee, T., & R. Mckee, J. (2009). Bioquímica, las bases moleculares de la vida. D.F. : McGraw-
Hill Interamericana editores, S.A. de C.V.
Sánchez, C., & Alvarez, J. (2018). Reporte de Aminoacidos. Obtenido de StuDocu:
https://www.studocu.com/es/document/universidad-nacional/bioquimica/informe/reporte-
aminoacidos-nota-95/3736138/view

IX Anexos

Fig. 1 Adición de NaOH Fig. 2 Adición de HCl

Fig. 3 Sobrante de NaOH
Fig. 4 Sustancia utilizada para muestra