Agrobiotecnología

Curso 2011

Fitorremediación
Alejandro Mentaberry

Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires
Sumario
Alternativas actuales para eliminar contaminaciones
de metales pesados
Fitorremediación
- Ventajas
- Limitaciones
- Tipos de plantas más utilizadas

Tipos de fitorremediación
- Fitoextracción
- Rizofiltración
- Fitotransformación
- Fitodegradación de compuestos orgánicos
- Fitoestimulación
- Fitoestabilización
Agrobiotecnología
Plantas transgénicas para detectar compuestos
Fitorremediación inorgánicos tóxicos en el medio ambiente
Referencias
 Alternativas actuales para eliminar
contaminaciones de metales pesados

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Rangos de
concentración Elemento Rango de concentración Límite regulatorio

comúnmente Metales µg/Kg)a

(µ (mg/Kg) b

hallados y límites Plomo 1.000-6.900.000 600

permitidos para Cadmio 100-345.000 100

Arsénico 100-102.000 20
los contaminantes
Cromo 5,1-3.950.000 100
metálicos y los
Mercurio 0,1-1.800.000 270
radionucleótidos Cobre 30-550.000 600
más importantes Zinc 150-5.000.000 1.500

Radionucleótidos Unidades pCi . g-1

Uranio 0,2-16.000 c -------
0,06-18.700 d 250 f
Estronio 0,03-540.000 e -------

Cesio 0,02-46.900 e -------

Plutonio 0,00011-3.500.000 e -------

Tomado de: Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 1998.
Agrobiotecnología a Riley et al.
b Clean up Standards for contaminated sites. New Jersey, Department of Environmental Protection

(1996)
Fitorremediación c Microgramos por gramo
d Picocuries por gramo
e Picocuries por kilogramo
f Stern et al.
Alternativas
actuales para
eliminar
contaminaciones • Suelos
- Rellenado de terrenos
de metales
- Fijación química e impermeabilización
pesados superficial
- Lixiviación y reposición del suelo

• Aguas
- Precipitación o floculación
- Intercambio iónico
Agrobiotecnología - Osmosis inversa
Fitorremediación
- Microfiltración
Mercado potencial
• En los últimos 10 años se ha desarrollado un mercado
para la . importante para la biorremediación, principalmente en
descontaminación . Estados Unidos.
ambiental Productos tóxicos: ~ U$S 400.000 M
en Estados Unidos Metales pesados: ~ U$S 7.100 M
Metales pesados y tóxicos: ~ U$S 35.400 M
mediante las
tecnologías • El costo estimado para remediar los sitios utilizados
actuales . por el Departamento de Energía Atómica por métodos
. convencionales se calculó en U$S 142.000 M

• En 2005, el mercado norteamericano de remediación

. ambiental era de U$S 6.000 a 8.000 M por año.

• El mercado norteamericano de fitorremediación era de

. U$S 100-150 M anuales (0.5% del total de remediación).

• El mercado comercial de fitorremediación comprende

Agrobiotecnología . 80% de contaminantes orgánicos y 20% de inorgánicos.
Fitorremediación
• El mercado de fitorremediación creció de 3 y 5 veces
. entre 1999 y 2005.
La fitorremediación es económicamente competitiva
respecto de otras alternativas de remediación

Adaptado de Chappell, US Environmental Protection Agency,1998.

 Fitorremediación

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Fitorremediación
“Conjunto de métodos para degradar,
asimilar, metabolizar o detoxificar metales
pesados y compuestos orgánicos por
medio de la utilización de plantas.”

“Es el empleo de vegetación para

el tratamiento in situ de suelos,
sedimentos y aguas contaminadas.”

Se basa en los procesos que ocurren

naturalmente por los cuales las plantas
y los microorganismos rizosféricos
Agrobiotecnología
degradan y secuestran contaminantes
Fitorremediación orgánicos e inorgánicos
La fitorremediación permite detoxificar distintos sustratos

• Sustratos sólidos (suelos y sedimentos):

- sitios militares (TNT, metales, orgánicos)
- campos agrícolas (herbicidas, pesticidas, metales, selenio)
- sitios industriales (orgánicos, metales, arsénico)
- minas (metales)
- sitios de tratamiento de maderas (hidrocarburos aromáticos policíclicos; PAHs)

• Sustratos líquidos
- aguas residuales (nutrientes, metales)
- drenajes de agricultura (nutrientes, fertilizantes, metales,
arsénico, selenio, boro, pesticidas orgánicos y herbicidas)
- efluentes industriales (metales, selenio)
- efluentes de minería (metales)
- plumas subterráneas (metales, compuestos orgánicos)

• Sustratos gaseosos
- aire libre e interior (óxidos de nitrógeno, SO2, ozono, CO2, gases
neurotóxicos, partículas de hollín, e hidrocarburos halogenados volátiles)
Contaminantes orgánicos

• Son consecuencia de las actividades humanas:

- industria petroquímica (derrames de combustibles y solventes)
- actividades militares (explosivos y armas químicas)
- agricultura (pesticidas, herbicidas)
- industria química (efluentes)
- industria forestal y maderera (efluentes)

• Dependiendo de sus propiedades, pueden ser:

- degradados en la zona radicular

- incorporados a la planta degradación

secuestro
volatilización

• Ejemplos de descontaminaciones exitosas por fitorremediación:

Solventes orgánicos, herbicidas, explosivos, hidrocarburos
derivados del petróleo, bifenilos policlorinados (PCBs),
tricloroetileno (TCE), hidrocarburos aromáticos policíclicos (PAHs).
Contaminantes inorgánicos

• Pueden ser consecuencia de elementos naturales presentes en la corteza

. terrestre y/o en la atmósfera, o resultado de actividades humanas:
- minería
- industria
- transporte
- agricultura
- actividades militares

• No pueden ser degradados, pero pueden fitorremediarse mediante

. estabilización o secuestro en la parte cosechable de la planta.

• Ejemplos de descontaminaciones exitosas por fitorremediación:

Macronutrientes vegetales (nitrato y fosfato), elementos traza (Cr, Cu, Fe,

. Mn, Mo, Zn), elementos no esenciales (Cd, Co, F, Hg, Se, Pb, V y W), e
. isótopos radioactivos (238U, 137Cs y 90Sr), entre otros.
Fitorremediación
Ventajas

• Las plantas pueden ser utilizadas como bombas

extractoras de bajo costo para depurar suelos y aguas
contaminadas (costo 7-10 veces menor respecto de los
. métodos tradicionales).

- Las plantas emplean energía solar.

- El tratamiento es in situ.

• Algunos procesos degradativos ocurren en forma más rápida

con plantas que con microorganismos.

• Es un método apropiado para descontaminar superficies

grandes o para finalizar la descontaminación de áreas
restringidas en plazos largos.
Agrobiotecnología
• Es una metodología con buena aceptación pública.
Fitorremediación

• Se generan menos residuos secundarios.

Fitorremediación Limitaciones

• El proceso se limita a la profundidad de penetración

de las raíces o a aguas poco profundas.

• La fitotoxicidad es un limitante en áreas fuertemente

contaminadas.

• Los tiempos del proceso pueden ser muy prolongados.

• La biodisponibilidad de los compuestos o metales

es un factor limitante de la captación.

• Deben considerarse contaminaciones potenciales

de la cadena alimentaria y napas de agua.

Agrobiotecnología • Se requiere comprender mejor la naturaleza

de los productos de degradación (fitodegradación).
Fitorremediación

• Falta elaborar el marco regulatorio detallado.

Biología de la • Captación por las raíces:
acumulación - Movilización de los metales
• Quelación mediante fitosideróforos
de metales • Unión a proteínas quelantes (fitoquelatinas)
en plantas • Acidificación por exudado de H+
- Captación por la raíz
• Via apoplástica
• Vía simplástica
• Transporte:
- Almacenamiento en raíz o exportación al tallo por xilema
- Transporte por xilema o redistribución por floema
- Almacenamiento en vacuolas
• Mecanismos de evasión o tolerancia:
- Captación celular limitada (evasión)
- Metabolismo tolerante a metales pesados
- Detoxificación por quelación, compartimentalización
Agrobiotecnología o precipitación
• Mecanismos más probables:
Fitorremediación
- Compartimentalización en vacuolas y quelación con
fitoquelatinas (Cd2+, Zn2+, Cu2+ )
- Precipitación como fitatos (Zn2+)
Mecanismos pared celular
involucrados en
citoplasma
la quelación y
Contaminante
compartimentali- inorgánico
zación
secuestro
conjugación

adsorción vacuola
degradación
enzimática

Contaminante
orgánico
modificación
enzimática

Agrobiotecnología
secuestro
Adaptado de: Pilon-Smits, Annual Review in Plant Biollogy, 2005.
Fitorremediación
Mecanismos de tolerancia para contaminantes orgánicos e inorgánicos en plantas.
La detoxificación generalmente involucra la conjugación seguida del secuestro activo en la
vacuola y el apoplasto, donde el contaminante hace el menor daño. Los quelantes son:
glutatión (GSH), glucosa (Glu), metalotioneínas (MT), nicotinamina (NA), ácidos orgánicos (OA,
fitoquelatinas (PC). Los transportadores se representan por cajas con flechas.
Estrategias de
fitorremediación
utilizadas para
remediar agua,
suelo o aire hidroponia humedal artificial
(rizofiltración)
contaminados.
Plantas usadas como filtros

Plantas usadas como

barrera hidráulica
para prevenir la
contaminación de
napas y la dispersión
horizontal de plumas.
Agrobiotecnología

Fitorremediación

barrera hidráulica fitoextracción y filtración

fitoestabilizacion de aire
Adaptado de: Pilon-Smits, Annual Review in Plant Biology, 2005.
Diseño de
• Selección de la especie vegetal
sistemas de
fitorremediación
• Datos de toxicidad y de degradación de contaminantes

• Tasa de captación del contaminante y tiempo

de limpieza requerido

• Esquema y densidad de las plantaciones

• Costos de Irrigación, insumos agronómicos,

. mantenimiento y gastos de cosecha.

Agrobiotecnología • Zona de captura de agua y tasa de transpiración

Fitorremediación

• Análisis de riesgos contingentes (plagas, sequías, etc.)

Tipos de plantas • Freatófitas
más utilizadas - Plantas de raíces profundas
(álamo, sauce, algodonero).
• Pasturas
- Por su tipo de raíz retienen el suelo.
• Legumimosas
- Permiten enriquecer el suelo en N2.
• Acuáticas
- Permiten la degradación de contaminantes
en humedales artificiales.

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Algunas especies propuestas para fitorremediación

Brassica juncea Lotus corniculatus Hibiscus cannabinus

Thlapsi caerulescens Silene vulgaris Alyssum lesbiacum Festuca arundinacea

Ejemplos
Metal Planta Ubicación Métodoa Comentarios
de pruebas Pb Brassica juncea Trenton, N.J. FE-FEAQ La incorporación de
Pb2+ aplicando EDTA
de campo para resultó en la reducción del
28% en la contaminación
fitorremediación en el área en una
temporada de cosecha.

de metales Cd Thlapsi caerulescens Beltsville, Md. FE-FEC Fitoextracción de suelos

Zn Silene vulgaris enmendados con barros
sedimentarios.
La acumulación de Zn2+
en T. caerulescensfue
10 veces mayor que
en otras plantas.

Zn Brassica oleracea Rothamstead, FE-FEC Suelos enmendados con

Cd Raphanus sativus U.K. sedimentos.
Ni Thlapsi caerulescens
Cu Alyssum lesbiacum
Pb Alyssum murale
Cr Arabidopsis thaliana
Se Brassica juncea FE-FEC El contenido de B extraible
B Festuca arundinacea Los Baños, FV por agua se redujo entre
California 24% y 52%, y el de Se se
Hibiscus cannabinus
redujo entre 13% y 48%
Agrobiotecnología Lotus corniculatus por todas las especies.

U Helianthus annus Asthabula, Ohio RF Remoción de U de aguas

Fitorremediación subterráneas
Tomado de: Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1998.
a:Métodos de fitorremediación. FE: fitoextracción; FV: fitovolatilización; RF: rizofiltración;
FEAQ: fitoextracción asistida por quelantes; FEC: fitoextracción continua
Características
del contaminante • Contaminantes orgánicos:
que afectan No existen generalmente transportadores específicos en la planta. Se
mueven por difusión en los tejidos vegetales, según sus propiedades
la captación por químicas. La hidrofobicidad les permite atravesar fácilmente la bicapa
la planta lipídica pero se mueven con dificultad por los fluidos celulares.

• Contaminantes inorgánicos:
Incorporados por procesos biológicos mediante transportadores de
membrana, preexistentes porque son nutrientes o similares a ellos
(arsenato y selenato son incorporados por transportadores de fosfato).
Por ello, su captación es saturable.

• Los contaminantes inorgánicos causan en general toxicidad

. por daños en la estructura celular (estrés oxidativo por su
. actividad redox) y reemplazan a otros nutrientes esenciales.

• Los contaminantes orgánicos suelen ser menos tóxicos: no

. tienden a acumularse a altos niveles y son menos reactivos.
Agrobiotecnología
• En los suelos con mezcla de ambos contaminantes, el
Fitorremediación . crecimiento vegetal y la posibilidad de fitorremediación son
. más limitados
Factores físicos
y químicos que La biodisponibilidad depende de:
afectan la • Las propiedades químicas del contaminante (hidrofobicidad
biodisponibilidad . y volatilidad):
del contaminante Las moléculas con extrema hidrofobicidad (PCBs, PAHs, hidrocarburos) se
unen fuertemente a la materia orgánica y no se disuelven en el agua
(contaminantes “recalcitrantes”).

Los contaminantes no volátiles son fitodegradados o secuestrados, mientras

que los volátiles pueden liberarse a la atmósfera sin transformaciones.

• Las propiedades del suelo:

Los arcillosos (partículas pequeñas) retienen más agua que los arenosos y
tienen más sitios de unión para iones (cationes), al igual que los de mayor
concentración de materia orgánica (humus). Éstos pueden unir mayor
cantidad de contaminantes hidrofóbicos. La biodisponibilidad de los
contaminantes iónicos está afectada por el pH del suelo (pH ácido, aumenta
la biodisponibilidad de cationes)
Agrobiotecnología
• Las condiciones medioambientales:
Fitorremediación
La temperatura y la humedad afectan la biodisponibilidad (por ejemplo,
aumentando la migración de contaminantes disueltos en agua)
Factores
biológicos que Interacciones planta-microorganismo:
afectan la - La liberación de fotosintatos por la planta aumenta la población
biodisponibilidad . microbiana capaz de remediar.
del contaminante
- La liberación de metabolitos secundarios de la planta puede activar
. la expresión de genes relacionados a la degradación de
. contaminantes en los microorganismos o actuar como co-metabolitos
. para la degradación por los microorganismos.

La biodisponibilidad es modificada por liberación de:

• Biosurfactantes (ramnolípidos) liberados por bacterias que aumentan
. disponibilidad de compuestos hidrofóbicos
• Exhudados vegetales con compuestos que pueden promover la síntesis
. de biosurfactantes por las bacterias
• Enzimas (vegetales y bacterianas) que modifican las cadenas laterales de
. algunos compuestos orgánicos aumentando su biodisponibilidad.
Agrobiotecnología • Quelantes por plantas y bacterias (sideróforos, ácidos orgánicos y
. fenólicos) que aumentan disponibilidad de metales.
Fitorremediación • Secreción de H+ por las plantas que acidifican el suelo.
.
• Enzimas que convierten los metales a formas menos tóxicas o más
. biodisponibles (por ejemplo, Cr VI a Cr III)
Aspectos que
requieren Procesos que requieren aumentar los conocimientos
para aumentar la eficiencia de la fitorremediación:
de mayor
investigación
• Interacciones planta-microorganismo y otros procesos
. rizosféricos

• Captación por la planta

• Mecanismos de traslocación

• Mecanismos de tolerancia (compartimentalización,

. degradación)

• Quelantes vegetales involucrados en transporte y

. almacenamiento

Agrobiotecnología • Movimiento de los contaminantes en los ecosistemas

. vía el sistema suelo-agua-planta hacia niveles tróficos
Fitorremediación . superiores
 Tipos de fitorremediación

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Las bases
conceptuales de Fitorremediación Fitovolatilización
Acumulación o degradación
la fitorremediación en el tejido cosechable

se apoyan en
los mecanismos
presentes en
plantas que
Fitoestimulación
hiperacumulan Microorganismo
que degrada
Fitodegradación

metales toxinas

Toxina

Fitoextracción
Fitoestabilización

Agrobiotecnología

Fitorremediación

Adaptado de: Buchanan et al., Biochemisty and Molecular Biology of Plants, 2000.
Tipos de
• Fitoextracción
fitorremediación Las plantas se usan para concentrar metales en las partes
cosechables (principalmente, la parte aérea).
• Rizofiltración
Las raíces de las plantas se usan para adsorber, precipitar
y concentrar metales pesados a partir de efluentes líquidos
contaminados.
• Fitoestimulación
Se usan los exudados radiculares para promover el desarrollo
de microorganismos degradativos (bacterias y hongos).
• Fitoestabilización
Las plantas tolerantes a metales se usan para reducir la
movilidad de los mismos y evitar el pasaje a napas subterráneas
o al aire.
• Fitotransformación
- Fitodegradación: Las plantas acuáticas y terrestres captan,
Agrobiotecnología almacenan y degradan compuestos orgánicos para dar
subproductos no tóxicos o menos tóxicos.
Fitorremediación - Fitovolatilización: Las plantas captan y modifican metales
pesados o compuestos orgánicos y los liberan a la atmósfera
mediante la transpiración.
Las diferentes estrategias de fitorremediación
son adecuadas para distintos contaminantes

• Fitoextracción:
Usada principalmente para remediar metales y otros tóxicos inorgánicos .
. (Se, As, radionucleótidos).

• Rizofiltración:
Técnica relativamente cara de implementar, siendo útil para cantidades
. pequeñas de aguas residuales conteniendo compuestos inorgánicos
. peligrosos (radionucleótidos). Los humedales artificiales se utilizan para
. una amplia gama de contaminantes inorgánicos (metales, percloratos, cianuro,
. nitratos y fosfatos) y contaminantes orgánicos (explosivos y herbicidas).

• Fitoestimulación:
Es usado para remediar contaminantes orgánicos hidrofóbicos que no pueden
. ser incorporados por la planta pero que pueden ser degradados por los
. microorganismos (PCBs, PAHs e hidrocarburos derivados del petróleo).
Las diferentes estrategias de fitorremediación
son adecuadas para distintos contaminantes

• Fitoestabilización:
Este técnica es usada cuando se plantan coberturas vegetales en sitios
. conteniendo contaminantes orgánicos o inorgánicos; o cuando se usan
. árboles como barreras hidráulicas para permitir el filtrado de contaminantes
. orgánicos e inorgánicos.

• Fitodegradación:
Es útil para compuestos orgánicos que se movilizan dentro de la planta,
. (herbicidas, TNT, MTBE y TCE).

• Fitovolatilización:
Puede utilizarse para compuestos orgánicos con formas volátiles (TCE y
. MTBE) y para algunos compuestos inorgánicos que pueden existir en forma
. volátil (Se y Hg).
Fitoextracción • Se utiliza para el tratamiento de contaminaciones con
metales (Cd2+, Co2+, Cr2+, Ni2+, Hg2+, Pb2+, Se2+, Zn2+).
• Características deseables en la planta:
- Debe tolerar y acumular altas concentraciones de metales
en las partes cosechables
- Debe tener una alta tasa de crecimiento
- Debe producir un gran volumen de biomasa

Coeficiente de bioacumulación ± DE

Tallos Raíces
Metal Brassica Thlapsi Brassica Thlapsi
Cd2+ (5)1 175 ± 16 59 ± 12 20.574 ± 4295 4258 ± 168
Cu2+ (1) 159 ± 32 623 ± 265 55.809 ± 9221 60.716 ± 21510
Cr2+ (0,4) 80 ± 8 89 ± 15 5.486 ± 393 8.545 ± 4220
Ni2+ (1) 587 ± 115 2.739 ± 383 11.475 ± 125 8.425 ± 4220

Agrobiotecnología Pb2+ (5) 3±1 29 ± 23 1.432 ± 1409 7.011 ± 3616

Zn2+ (3) 49 ± 31 770 ± 320 1.816 ± 1739 2.990 ± 1424
1 Concentración inicial del metal en solución (mg/L) Tomado de: Salt et al., Biotechnology 1995.
Fitorremediación

Coeficiente de bioacumulación: relación entre la acumulación en el

tejido (µg/g de peso seco) y concentración en solución (mg/L) o en suelo.
Fitoextracción • Plantas típicas empleadas en fitoextracción:

- Girasol (Helianthus annuus)

- Mostaza de la India (Brassica juncea)
- Nabos (Brassica napus; B. rapa)
- Cebada (Hordeum vulgare)
- Lúpulo (Humulus lupulus)
- Ortigas (Urtica dioica; U. urens),
- Diente de León (Taraxacum officinale)

• Hiperacumuladores:

Agrobiotecnología - Thlapsi caerulescens

- Brassica juncea
Fitorremediación
- Pelargonium spp.
- Allysum lesbiacum
Fitoextracción Los metales en el suelo pueden estar
en distintas formas:

• Como iones o complejos insolubles

• Adsorbidos a constituyentes inorgánicos del suelo o unidos
a sitios de intercambio
• Unidos a moléculas orgánicas
• Como compuestos o precipitados insolubles
(óxidos, carbonatos, hidróxidos)
• Integrados a la estructura de los silicatos

Formas de incrementar la biodisponibilidad:

• Agregado de quelantes de metales

Agrobiotecnología
• Establecimiento de un pH moderadamente ácido
Fitorremediación • Disolución de surfactantes para contaminantes hidrofóbicos
• Agregado de microorganismos
Esquema de La línea sólida naranja ( ) representa la concentración de metal en
la biomasa, la línea discontinua ( ) representa la biomasa de tallo.
fitoextracción
Fitoextracción Fitoextracción Aplicación
continua y continua asistida por
quelantes
del quelante

asistida por
Fase de captación

quelantes de metal

Fase de
captación
de metal

Fase de crecimiento Cosecha Fase de crecimiento Cosecha

Adaptado de: D. E. Salt et al., Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1998.

Concentración de Pb2+ en tallos de Brassica juncea en un suelo

contaminado con plomo (600 mg/kg de suelo) tratado con EDTA.
Concentración de Pb2+ en tallos (µg/g)

Agrobiotecnología

Fitorremediación

EDTA aplicado (mmol/kg suelo)

Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin 1998.

Acumulación • El transporte de metales desde el citosol a la vacuola es un componente
de metales importante para la tolerancia a metales en las plantas.
• El intercambiador de Ca2+ CAX2 (Calcium Exchanger 2) de Arabidopsis
y tolerancia es un regulador clave de este proceso.
a manganeso • La expresión del gen cax2 en células de Saccharomyces cereviciae
suprime defectos en el crecimiento debidos a excesos de Ca2+ y Mn2+.
en plantas • Se transformaron plantas de tabaco con el gen cax2 dirigido por el
de tabaco promotor de 35S de CaMV. La secuencia se introdujo también en
antisentido para usar esta construcción como un control interno.
que expresan
el gen cax2
Vector Control
de Arabidopsis CAX2 Control
Vector cnb
CAX2 cnb
Ensayo de
tolerancia a Mn2+
en cepas de
Saccharomyces
cereviciae que
expresan el
intercambiador
Agrobiotecnología CAX2.

Fitorremediación
Control: cepa salvaje de S. cereviciae Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol. 2000.
cnb: cepa de S. cereviciae mutada en el gen de calcineurina (suceptibilidad a Mn2+)
Vector: cepas transformadas con el vector vacío
CAX2: cepas transformadas con el gen cax2
Acumulación Las plantas de tabaco que expresan CAX2 acumularon más Ca2+,
Cd2+ y Mn2+ y fueron más tolerantes a niveles elevados de Mn2+.
de metales
Vector CAX2

y tolerancia

µg/g peso seco

µ g/g peso seco

µ g/g peso seco

µ g/g peso seco
a manganeso
en plantas
de tabaco Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.
Concentración de iones en las raíces (izquierda) y en los tallos (derecha) de plantas transgénicas.
Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.

que expresan Vector: controles transformados con el vector vacío. C-14: línea transformada con el gen cax2. Los
ensayos se realizaron complementando el medio con 10 mM Cl2Ca, 0,1 µM Cl2Cd ó 0,1 mM Cl2Mn.

el gen cax2 A B

(nmoles/mg de proteína)
(nmoles/mg de proteína)

Transporte de iones
Transporte de iones

de Arabidopsis
Control
C-21
C-14

Tiempo (min) Tiempo (min)

Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000. Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000.

C
(nmoles/mg de proteína)
Transporte de iones

Agrobiotecnología

Fitorremediación Captación de iones en vacuola de células de

raíces de plantas que expresan el gen cax2.
A: transporte de Cd2+; 10 µM total Cd2+.
B: transporte de Mn2+; 100 µM total Mn2+.
Tiempo (min)
Tomado de: Hirschi et al., Plant Physiol., 2000. C: transporte de Ca2+; 10 µM total Ca2+.
Remoción
Las plantas acuáticas emplean dos mecanismos para
de metales separar metales y otros contaminantes (incluyendo
utilizando radioisótopos) de aguas polucionadas:
algas y plantas - Reacción superficial rápida independiente del metabolismo:
acuáticas proceso de difusión que finaliza cuando los iones metálicos
solubles se unen o adsorben a la pared celular. Puede remover
cantidades significativas en minutos.

- Reacción de incorporación intracelular lenta dependiente

del metabolismo: proceso de transferencia desde la pared
celular al interior de la célula. Demanda horas o días.

Agrobiotecnología

Fitorremediación

Lemna minor Microspora

Remoción
Modelo
de metales

Concentración de Ni 2+ (mg/L)
0,0 mg/L Pb 2+
Concentración inicial
utilizando de Ni2+ : 5 mg/L
5,0 mg/L Pb 2+

10,0 mg/L Pb 2+
Lemna minor

Tiempo (h)

Modelo

0,0 mg/L Ni2+

Concentración Pb2+ (mg/L)
Concentración inicial
2,5 mg/L Ni2+
de Pb2+ : 10 mg/L
5,0 mg/L Ni2+

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Tiempo (h)
Tomado de: Axtell et al., Bioresource Technology, 2003.
Rizofiltración
• Se emplea en el tratamiento de contaminaciones por:

- Metales (Pb2+, Cd2+, Zn2+, Ni2+, Cu2+)

- Radioisótopos (137Cd, 90Sr, U)
- Compuestos orgánicos hidrofílicos

• Características deseables en la planta:

- Debe tener raíces de crecimiento rápido y ramificación abundante.

- Debe poder remover metales tóxicos por períodos prolongados.
- No debe ser un translocador eficiente al tallo.

• La remoción tiene distintos componentes:

- Componente rápido: combinación de procesos físicos y químicos

(quelación, intercambio iónico, adsorción); puede ocurrir en raíces
muertas.

Agrobiotecnología - Componentes intermedios: Incluyen captura intracelular,

deposición en la vacuola y translocación a los tallos.
Fitorremediación
- Componente lento: precipitación mediada por la raíz; involucra
exudados de la raíz.
Rizofiltración
Las plantas -acuáticas son buenos candidatos
para encarar procesos de rizofiltración

• Plantas acuáticas sumergentes: • Plantas acuáticas emergentes:

- Algas - Scirpus validus
- Chara vulgaris - Typha latifolia
- Myriophyllum aquaticum - Ceratophyllum demersum
- Myriophyllum spicatum - Potamogeton pectinatus
- Hydrilla verticillata - Maranta arundinaceae
- Lemna spp

Flujo
vertical
Scirpus
validus

Agrobiotecnología
Capas
de
arena Esquema de
Fitorremediación
y rizofiltración
grava Eflujo basado en
Scirpus validus
Rizofiltración Agrobacterium rhizogenes es capaz de transformar raíces
de uranio y provocar el sobrecrecimiento de las mismas.

usando cultivos
de raíces de Tejido radicular de
Brassica juncea y
Brassica juncea de Chenopodium
amaranticolor.
y Chenopodium B. juncea C. amaranticolor

amaranticolor Se utilizaron raíces transformadas de ambas especies

para remover U de soluciones con baja concentración.
B. juncea C. amaranticolor

Tasa de
acumulación de
µg U/g tejido seco

µg U/g tejido seco

U en raíces de
Brassica juncea y
de Chenopodium
amaranticolor. Los
Agrobiotecnología valores se expresan
como µg U/g tejido
seco.
Fitorremediación

Concentración de U (µM) Concentración de U (µM)

Tomado de: Eapen et al., Environmental Research, 2003.

Rizofiltración • Se utilizaron raíces transformadas de ambas especies
de uranio para remover U de soluciones con alta concentración.

usando cultivos • Para todas las concentraciones utilizadas, el 90%

del U fue absorbido por las raíces dentro de las 10 h
de raíces de de tratamiento.
Brassica juncea
B. juncea
y Chenopodium C. amaranticolor

amaranticolor

µg U/g D.w.t. ( X10 3)

Tasa de acumulación
de U en raíces de
Brassica juncea y de
Chenopodium amaranticolor.
Los valores se expresan
como µg U/g tejido seco.

Agrobiotecnología Concentración de U (µM)

Tomado de: Eapen et al., Environmental Research, 2003.

Fitorremediación
Las raíces transformadas de ambas especies podrían
usarse como bioabsorbentes de uranio, para lo cual
podrían producirse a gran escala en biorreactores.
Fitotransformación
La fitotransformación comprende los procesos
de fitodegradación y fitovolatilización
Empleada en tratamientos de contaminación por:
• Herbicidas (atrazina, alaclor)
• Aromáticos (BTEX: benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos)
• Alifáticos clorinados (TCE: tricloroetileno; tetracloroetileno)
• Deshechos de nutrientes (NO3-, NH4+, PO43-)
• Deshechos explosivos (TNT; RDX: hexahidrotrinitrotriazina)

Depende de:
• Concentración del compuesto disuelto en el suelo

• Eficiencia de captura, que depende de:

• Tasa de transpiración, que depende de:
Agrobiotecnología
Fitorremediación
- las propiedades físico-químicas del compuesto
- especie química
- propiedades de la especie vegetal
- el tipo de planta
- área foliar
- nutrientes
- humedad del suelo
- temperatura
- viento
- humedad relativa
Fitotransformación • Una vez translocado, el compuesto puede tener
los siguientes destinos:
- Almacenamiento del producto (o de sus productos de
.degradación) vía conjugación o lignificación
- Metabolización a distintos productos de degradación
- Volatilización por la transpiración
- Mineralización (CO2 + H2O)

• Plantas típicas empleadas en fitotransformación:

- Arboles freatófitos (álamo, sauce, álamo americano)
- Pasturas (centeno, sorgo, festuca)
- Leguminosas (trébol, alfalfa, caupí)

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Fitodegradación de compuestos orgánicos
Las plantas pueden desarrollar una serie de reacciones
para metabolizar o mineralizar compuestos orgánicos
Enzimas Rol natural
Nitroreductasas Su función es la reducción de nitrato para
obtener nitrógeno destinado al crecimiento
celular
Deshalogenasas Están vinculadas a la degradación de
subproductos de etileno durante la
senescencia
Nitrilasas Detoxifican compuestos aromáticos
cianamidados naturales
Fosfatasas Su rol es el procesamiento de fosfato
durante el desarrollo
Lacasas Intervienen en la lignificación y
delignificación por adición de oxígeno
Peroxidasas Degradan en forma no específica
compuestos fenólicos, lignina, y otros
Aplicaciones en fitorremediación
Reducen grupos nitrato en explosivos
y otros compuestos nitroaromáticos y
remueven el nitrógeno del anillo
aromático
Deshalogenan solventes clorinados
Procesan grupos cianidados de los
anillos aromáticos en herbicidas y
otros compuestos cianidados
Procesan grupos fosfato de pesticidas
organofosfatados y de compuestos
que afectan el sistema nervioso
Completan la degradación del TNT.
Aparentemente involucradas en la
incorporación de fragmentos de anillos
aromáticos en la biomasa vegetal
Empleadas en el tratamiento de aguas
residuales para degradar fenoles
Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin, 1998.
Contaminación
• Las técnicas tradicionales se basan en la
con explosivos . incineración o en utilización de microorganismos
. e implican remoción del suelo

• La alternativa frente a las técnicas tradicionales fue

. usar sistemas de fitorremediación:

- Cultivos celulares de remolacha que degradan

nitroglicerina (GNT)
- Plantas acuáticas y cultivos de raíces que biotransforman
. trinitroglicerina (TNT)

• El éxito fue limitado, ya que la GNT sólo pudo ser

. denitrificado a di- y mononitroglicerol; la remoción
. completa de grupos nitratos no se logró nunca.

• Además, la degradación de TNT produjo la

Agrobiotecnología . acumulación de otra toxina: aminodinitrotolueno.

Fitorremediación • Otra desventaja es que las plantas captan y

. metabolizan los compuestos nitrogenados 10 veces
. más lentamente que los microorganismos.
Rutas de
degradación
del TNT
mediante
nitroreductasas
y lacasas
vegetales

Tomado de: McCutcheon, PBI Bulletin 1998.

Agrobiotecnología ADNT: aminodinitrotolueno;
DANT: diaminonitrotolueno;
Fitorremediación TAT: triaminotolueno;
TNT: trinitrotolueno
Detoxificación Crecimiento brotes de tabaco no transformado y transgénico
(NR 3-2) en medio líquido.
de TNT por Sin TNT TNT 0,25 mM

plantas de
tabaco
transformadas
con el gen de
nitroreductasa
de Enterobacter NT NR 3-2 NT NR 3-2

cloacae Crecimiento de plantas de tabaco no transformado y transgénicas (NR 3-2)

luego de la germinación en medio conteniendo explosivos.
Sin TNT TNT 0,05 mM TNT 0,1 mM

Agrobiotecnología

Fitorremediación

NT
NT NR
NR 3-2
3-2 NT
NT NR
NR 3-2
3-2 NT
NT NR
NR 3-2
3-2
Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.
Detoxificación de TNT por plantas de tabaco que expresan
el gen de nitroreductasa de Enterobacter cloacae

Crecimiento de raíces para brotes de plantas no transformadas (NT)

y transgénicas (NR 3-2) luego de 21 días de exposición a TNT

NT NR 3-2

TNT Longitud de las Indice de tolerancia Longitud de las Indice de tolerancia

(mM) raíces (cm ± e.s.) de las raíces (%) raíces (cm ± e.s.) de las raíces (%)

0 8,1 ± 0,1 100 8,1 ± 0,1 100

0,05 5,5 ± 0,6 68 6,2 ± 0,9 77

0,1 0,2 3 5,5 ± 0,9 68

Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.

e.s.= Error estándar
Indice de tolerancia = longitud de las raíces de brotes tratados con TNT/longitud de las raíces de brotes control x 100
Detoxificación de TNT por plantas de tabaco que expresan
el gen de nitroreductasa de Enterobacter cloacae

Estudios de toxicidad de TNT en plantas

no transformadas (NT) y transgénicas (NR 3-2)
NT NR 3-2

Peso Peso Ganancia / Peso Peso Ganancia /

TNT antes del después del pérdida de antes del después del pérdida de
(mM) TNT (g) TNT (g) peso (g) TNT (g) TNT (g) peso (g)

0 11,37 ± 0,17 16,9 ± 0,28 +5,52 ± 0,45 11,08 ± 0,05 16,88 ± 0,18 +5,79 ± 0,23

0,1 11,2 ± 0,14 11,3 ± 0,02 +0,13 ± 0,15 11,4 ± 0,95 14,65 ± 0,07 +3,24 ± 0,88

0,25 11,59 ± 0,01 7,59 ± 0,19 -4,00 ± 0,21 11,93 ± 0,18 13,95 ± 1,20 -2,02 ± 1,01

Tomado de: Hannik et al., Nature Biotechnology, 2001.

Detoxificación de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous

• El explosivo hexahidro 1,3,5-trinitro-1,3,5-triazina (RDX) es tóxico para todo tipo

. de organismos y un posible carcinógeno. Su degradación ambiental es muy lenta
. y su presencia en suelos y napas de agua constituye un problema grave.
• El RDX es tóxico para las plantas. El hongo Phanerochaete chrysosporium y las
. bacterias del género Rhodococcus son capaces de degradar RDX, pero no
. desarrollan suficiente biomasa para ser utilizados en procesos de biodegradación.
• La molécula responsable de la degradación es un citocromo P450. Como prueba
. de concepto, se aisló el gen de citocromo P450 XplA de Rhodococcus
. rhodocochrous y se lo expresó en plantas de Arabidopsis thaliana. Las plantas .
. fueron utilizadas en ensayos de detoxificación de suelos contaminados con RDX.

Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

4-nitro-2,4-diazabutanal
Ruta de degradación de RDX por el citocromo P450 codificado por el gen XplA de R.
rhodocochrous y ensayos de actividad realizados con proteína expresada en E. coli.
Los controles fueron realizados con proteína sometida a 100oC.
Detoxificación de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous
Caracterización de plantas transgénicas que expresan el gen XplA

Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

a) Análisis de Northern y Western blot de líneas de A. thaliana que expresan

el gen XplA en forma constitutiva.
b) Captación de RDX de medio acuoso por plántulas de A. thaliana. Los
resultados son el promedio de repeticiones de cinco experimentos.
Detoxificación de RDX por plantas de Arabidopsis que
expresan el gen XlpA de Rhodococcus rhodocochrous
Tomado de: Rylott et al., Nature Biotechnology, 2006.

Estudios en suelos contaminados con RDX empleando plantas wild type y transformadas
con 35S::XPLA. Se cultivaron plantas de A. thaliana de 8 semanas de edad en suelo conteniendo
50, 250, 500 y 2000 mg de RDX/Kg de suelo. Se muestran las mediciones de biomasa (tallos y
raíces) obtenidos en las diferentes condiciones experimentales (promedio de cinco ensayos).
El ciclo Principales interconversiones del mercurio en el medio ambiente

biogeoquímico
del mercurio
y de la
biomagnificación
de metilmercurio

Agrobiotecnología

Fitorremediación
Hg(0): mercurio elemental
Hg(II): mercurio iónico libre
RSHg: mercurio unido a azufre
MeHg: metilmercurio
Expresión
• No se conocen plantas capaces de detoxificar Hg.
de los genes
merA y mer B • En cambio, existen microorganismos presentes en los sitios
contaminados que poseen dos enzimas (organomercúrico
de Desulfovibrio liasa, gen merB, y mercúrico reductasa, gen merA) que
desulfuricans permiten convertir metilmercurio en Hg elemental,
en plantas detoxificado este metal.

transgénicas • Se transformaron plantas de Arabidopsis thaliana con los dos

de Arabidopsis genes mencionados aislados de Desulfovibrio desulfuricans.

thaliana
R-CH2-Hg+ + H+ R-CH3 + Hg(II)
MerB

Hg(II) + NADPH Hg(0) + NAD+ + H+

MerA
Agrobiotecnología
MerB: organomercúrico liasa
MerA: mercúrico reductasa
Fitorremediación
Expresión merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT merB merA/B-1 merA NT

de los genes
merA y mer B
0 µM 1 µM 5 µM 10 µM
de Desulfovibrio Plantas NT y transgénicas creciendo en medios con mercurio orgánico.
desulfuricans NT A/B-1 A/B-2 A/B-3 NT A/B-1 A/B-2 A/B-3

en plantas
transgénicas Fenotipos de resistencia a mercurio
orgánico de plantas control y de 3 líneas
de Arabidopsis transgénicas para merA/merB

thaliana 0 µM PMA 5 µM PMA

A/B-4 A/B-5 A/B-6 A/B-4 A/B-5 A/B-6
pg Hg(0).min-1/mg de

Tasas de volatilización de Hg(0)

Agrobiotecnología en plantas control y en 6 líneas
transgénicas de A. thaliana
tejido

Fitorremediación

Líneas de plantas
Tomado de: Bizily et al., Nature Biotechnology, 2000.
Fitorremediación de
Se transformaron cloroplastos de tabaco con dos versiones de esta construcción
organomercuriales con y sin región 3´ no traductible (3´ UTR) portando el operón MerAB
vía transformación
de cloroplastos →
16S→ →
trnI→ aadA merB merA →
trnA→

(genes merA P 3´UTR

y mer B de
Desulfovibrio
Efecto de la concentración de acetato de fenilmercurio en el crecimiento
desulfuricans) de plantas de tabaco controles (NT) y transgénicas (5A y 9)
NT 5A 9

Concentración de PMA
Agrobiotecnología

Fitorremediación

Tomado de: Ruiz et al., Plant Physiol., 2003.

Aumento de la
acumulación
y tolerancia a selenio
• La toxicidad del selenio (Se) se debe a la
en plantas
. incorporación inespecífica de selenocisteína
transgénicas
. (Se-Cys) a las proteínas.
de Arabidopsis
que expresan
la enzima
selenocisteína liasa I • Estrategia:
de ratón Expresar el gen de la selonocisteína liasa de ratón
en citoplasma y cloroplastos de Arabidopsis thaliana

Agrobiotecnología Se-Cys Se elemental + alanina

Se-Cys liasa

Fitorremediación
Aumento de la Incorporación de Se a proteínas
en brotes de Arabidopsis thaliana
acumulación

µg Se g protein -
no transgénicas (NT) y transgénicas
y tolerancia (citosólicas y plastídicas) Control

1
a selenio en
plantas NT

cit SL cp SL
transgénicas
de Arabidopsis Control

50 µM Se-Cys
thaliana Tolerancia

Largo de raíces (mm)

a Se-Cys
selenato y
selenito de 50 µM Se-Cys
brotes de 25 µM SeO2-3
Arabidopsis
no transgénicos
y transgénicos.
25 µM SeO2-3
Agrobiotecnología
50 µM SeO2-4

Fitorremediación

50 µM SeO2-4

Tomado de: Pilon et al., Plant Physiol., 2003. NT

cyt SL cp SL
Fitoestimulación
• Las plantas proveen el hábitat para el incremento
en el tamaño y actividad de poblaciones
microbianas.

• Los exudados vegetales estimulan las

transformaciones efectuadas por las bacterias
(inducción enzimática).

• La síntesis de carbón orgánico aumenta la tasa

de mineralización microbiana (enriquecimiento
de sustrato).

• El oxígeno que difunde con las raíces asegura

un medio adecuado para las transformaciones
. aeróbicas.
Agrobiotecnología
• Los hongos micorríticos asociados a las raíces
Fitorremediación vegetales metabolizan contaminantes orgánicos.
Fitoestimulación
• Empleado en el tratamiento de contaminación orgánica
causada por pesticidas (atrazina), compuestos
. aromáticos, e hidrocarburos aromáticos policíclicos
. (PAHs)

• Se basa en la liberación por la planta de exudados entre

los que se incluyen:
- ácidos orgánicos de cadena corta
- compuestos fenólicos
- bajas concentraciones de enzimas y péptidos

• Plantas típicas empleadas en fitoestimulación:

- Liberadoras de compuestos fenólicos (mora,

manzano, Maclura pomífera)
- Pastos con raíces fibrosas (centeno, festuca)
Agrobiotecnología para contaminantes hasta 1 metro de profundidad
- Arboles freatófitos para contaminantes hasta 3
Fitorremediación
metros de profundidad
- Plantas acuáticas para sedimentos
Fitoestabilización • Empleada en el tratamiento de contaminación por:

- Metales (Pb2+, Cd2+, Zn2+, As2+, Cu2+, Se2+, U)

- Compuestos orgánicos hidrofóbicos: hidrocarbonos
aromáticos policiclícos (PAHs), bifenilos
policlorados (PCBs), dioxinas, furanos,
pentaclorofenol, DDT, dieldrina

• Características deseables en la planta:

- Debe tolerar altos niveles de metales tóxicos
- Debe inmovilizar los metales vía captura
y posterior precipitación y reducción
- Debe acumular bajas concentraciones en las
raíces

• Plantas típicas empleadas en fitoestabilización:

- Arboles freatrófitos que transpiren grandes
Agrobiotecnología volúmenes de H2O
- Pastos con raíces fibrosas que estabilicen
Fitorremediación la erosión del suelo
- Plantas con sistemas radiculares robustos
capaces de absorber/unir contaminantes
Referencias 1. Pilon-Smits. Phytorremediation. Annual Review of Plant
Biology, 56:15-39. 2005.
2. Eapen and D’Souza. Prospects of genetic engineering of
plants for phytoremediation of toxic metals. Advances in
Biotechnology, 23:97-114, 2005.
3. Mejáre, M. and Bulow, L. Metal binding proteins and
peptides in bioremediation and phytoremediation of heavy
metals. Trends in Biotechnology, 19:67-73, 2001.
4. Kovalchuk, O., Titov, V. Hohn, B. and Kovalchuk, I. A
sensitive trangenic plant system to detect toxic inorganic
compounds in the environment. Nature Biotechnology,
19:568-572, 2001.
5. Salt, D. E., Smith, R.D., and Raskin I. Phytoremediation.
Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular
Biology, 49:643-668, 1998.
Agrobiotecnología
6. http://www.hawaii.edu/abrp/Technologies
Fitorremediación
7. http://www.envirotools.org/factsheets/phytoremediation.shtml