METODO ANALITICO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS.

PARÁMETROS DE VALIDACIÓN DEL SISTEMA PARA LA

CUANTIFICACIÓN DE LOS PRINCIPIOS ACTIVOS

Exactitud del método en espectrofotometría UV-visible:

El parámetro de la exactitud, se evaluará a 3 concentraciones de trabajo de 8,
12 y 16 (ppm), con soluciones de estándar secundario de cada principio activo
de Tiamina y piridoxina, adicionándole la solución de placebo se preparará una
curva de estándares, y se debe leer en el espectrofotómetro ,cada una por
duplicado.

CURVA DE ESTANDARES
Volumen
Alícuota Alícuota Conc.
ESTANDA Alícuota de Conc.
Sln Sln Madre PIRIDOXI
R PLACEBO DILUCIO TIAMINA
Madre P T NA
N
A 2 2 3 50 8 8
B 3 3 3 50 12 12
C 4 4 3 50 16 16

Tab. Esquema de preparación de muestras para prueba de exactitud.

Precisión del método en espectrofotometría UV-visible:

Para evaluar la precisión se trabajará con muestras de estándar primario de
Tiamina y piridoxina con un grado de pureza de…… %. El estudio de la precisión
se realizará mediante la evaluación de la repetibilidad (100%).
Se debe preparar la siguiente dilución empleando las soluciones madres de los
principios activos, y se leer por sextuplicado.

Tab. Esquema de preparación de muestra para prueba de precisión 100%

CURVA DE ESTANDARES
MUESTRA Alícuota Alícuota Volumen de Conc. Conc.
 Sln Madre Sln Madre
DILUCION PIRIDOXINA TIAMINA
P T
A 3 3 50 12 12

Precisión intermedia en espectrofotometría UV-visible

La precisión intermedia del sistema se realizará en dos días cada uno con
analistas diferentes, para evaluar las fuentes de variación en el análisis internalista
e Inter día, se trabajará con concentraciones al 100% (ppm) para ambos días.
En esta prueba se utilizaran muestras de un lote de PT (producto terminado) de
complejo B(Tiamina HCl 100mg/mL y piridoxina HCl 100mg/mL) simuladas en el
laboratorio.

Especificidad del método en espectrofotometría UV-visible:

La concentración declarada de tiamina HCl y piridoxina HCl por cada ampolla es
de 100mg/mL, a partir de ello se realizará una dilución de producto terminado en
agua y otra dilución en Buffer HCl 2,2.
Se prepara por sexduplicado y se lee en el espectrofotómetro uv-visible. Todo esto
para corroborar que el método es especifico y conocer su capacidad de producir
una señal medible del analito en presencia de los excipientes. Tambien se leerá la
solución placebo y realizará su predicción en el modelo que debe estar por debajo
del 40%, garantizando que no exista una respuesta analítica de este.

Alícuota de 1 mL de PT en ………….. 250 mL Agua Purificada

Alícuota de 3 mL de PT en ……………100mL de Diluyente (Buffer)

Tab. Esquema de preparación de muestras para prueba de precisión

intermedia
 CURVA DE ESTANDARES
Volumen
Alícuota Alícuota Conc. Conc.
ESTANDAR de
Sln Madre P Sln Madre T PIRIDOXINA TIAMINA
DILUCION
A 2 2 50 8 8
B 4 2 50 16 8
C 2 4 50 8 16
D 4 4 50 16 16
E 3 3 50 12 12

Robustez del método en espectrofotometría UV-visible:

Evaluaremos el error de predicción del método a 2 niveles de temperatura y a 2
niveles de iluminación externa.
Linealidad del sistema en espectrofotometría UV-visible
Para la determinación de la linealidad se deben preparar 9 soluciones estándar a
concentraciones de 0,4,8,12,16 y 20 ppm, se realizará un análisis por triplicado de
cada solución a una longitud de onda de 246 y 291 nm.

Tab. Esquema de preparación de muestras para prueba de linealidad del

sistema
CURVA DE ESTANDARES
Alícuota Volumen
Alícuota Conc. Conc.
ESTANDAR Sln Madre de
Sln Madre T PIRIDOXINA TIAMINA
P DILUCION
A 3 0 50 12 0
B 2 1 50 8 4
C 4 2 50 16 8
D 5 3 50 20 12
E 1 4 50 4 16
F 2 5 50 8 20
G 0 1 50 0 4
H 3 2 50 12 8

Linealidad del método en espectrofotometría UV-visible

La linealidad del método se realizará a diferentes niveles de concentración,
agregándoles volúmenes iguales de placebo, además se deben preparar por
……………….

CURVA DE ESTANDARES
Volumen
Alícuota Alícuota Conc.
ESTANDA Alícuota de Conc.
Sln Sln Madre PIRIDOXI
R PLACEBO DILUCIO TIAMINA
Madre P T NA
N
A 3 0 3 50 12 0
B 2 1 3 50 8 4
C 4 2 3 50 16 8
D 5 3 3 50 20 12
E 1 4 3 50 4 16
F 2 5 3 50 8 20
G 0 1 3 50 0 4
H 3 2 3 50 12 8