UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO – FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA (311B) – SEXTO SEMESTRE

PRÁCTICA No 2

DETERMINACIÓN DE ALCOHOL METÍLICO EN MUESTRAS BIOLÓGICAS

GENERALIDADES:

Cuando se sospecha de una intoxicación por alcohol metílico, deberán remitirse al

laboratorio para su análisis cualquiera de las siguientes muestras:
10mL de sangre sin anticoagulante.
100ml de orina
Contenido gástrico (vómitos)
Residuos de botellas de licor.

Si bien en todo caso es aconsejable no añadir conservantes, en este caso es

fundamental abstenerse de conservar la muestra con formol, formaldehido, o acido
fórmico, porque precisamente los métodos de investigación se basan en técnicas de
detección de ácido fórmico y formaldehido.

Su amplio uso en la industria aumenta el riesgo de exposición ocupacional por

inhalación de sus vapores o la absorción por piel. La principal causa de intoxicación
aguda en la población general adulta ocurre principalmente por el consumo de licor
adulterado; no obstante, su venta libre, fácil acceso, bajo costo (es tres veces más
económico que el alcohol etílico) y capacidad de producir similares efectos
embriagantes al etanol, hacen de él una sustancia ideal para la adulteración de las
bebidas alcohólicas
Alcohol metílico (metanol)
Es imposible diferenciarlo del alcohol etílico basándose exclusivamente en su
sabor y olor. La ingestión de metanol en lugar de etanol puede ser secundario a
la ingesta de bebidas alcohólicas de origen desconocido. Se absorbe
rápidamente en el tracto digestivo. La concentración máxima en sangre se
alcanza a los 30-60 min después del consumo. Se metaboliza en el hígado, más
lentamente que el etanol, por la actividad de la alcohol deshidrogenasa,
transformándolo a formaldehído y ácido fórmico. Ambos metabolitos causan
acidosis metabólica grave y daños orgánicos. La acidosis que se desarrolla es
incrementada por la acumulación de ácido láctico debido a una hipoxia celular
secundaria. La dosis letal de metanol es de 0,5-1 ml/kg.
Acidosis metabólica
Enviar esta página a un amigo Imprimir Facebook Twitter Pinterest
Es una afección en la cual hay demasiado ácido en los líquidos corporales.
Causas
La acidosis metabólica ocurre cuando el cuerpo produce demasiado ácido.
También puede ocurrir cuando los riñones no están eliminando suficiente ácido
del cuerpo.
Hay varios tipos de acidosis metabólica.
La acidosis diabética se presenta cuando sustancias ácidas, conocidas como
cuerpos cetónicos, se acumulan en el cuerpo. Esto ocurre con mayor frecuencia
cuando la diabetes tipo 1 no está controlada. También se conoce como
cetoacidosis diabética y CAD.
La acidosis hiperclorémica resulta de la excesiva pérdida de bicarbonato de
sodio del cuerpo. Esto puede suceder con la diarrea intensa.
La acidosis láctica resulta de la acumulación de ácido láctico. Puede ser causada
por: Alcohol, Cáncer, Ejercitarse por mucho tiempo, Insuficiencia hepática
Diagnóstico
Antecedentes o sospecha de exposición a la sustancia
Cuadro clínico compatible con la intoxicación aguda por metanol
Presencia de alteraciones visuales.
Aparición de acidosis metabólica.
Anión Gap elevado: (> 14 mEq/L)
La brecha aniónica1 o anion gap, en inglés23 es la diferencia entre los cationes y aniones medidos
en suero, plasma u orina. La magnitud de esta diferencia (brecha) en el suero es frecuentemente
usada en medicina para tratar de identificar la causa de acidosis metabólica.
El término "brecha aniónica" generalmente significa "brecha aniónica sérica o anión GAP" (en
suero), pero la brecha aniónica en orina es también un parámetro clínico útil.

El valor normal es de 12 mEq/L., siendo fundamentalmente las proteínas de carga negativa

y sobre todo la albúmina , la que contribuye en mayor medida a ésta cifra, ya que los
demás iones se neutralizan entre si (Cationes: potasio, calcio, magnesio, etc. contra
aniones: fosfato, sulfatos, ácidos orgánicos, etc.) en condiciones fisiológicas (15).

Cuando la brecha aniónica es elevada, 14 mEq/L. o mas, sugiere la presencia de acidosis

metabólica normoclorémica , debiéndose buscar aniones endógenos no registrados como
lactatos, cetonas, etc., o ácidos exógenos como sucede en la intoxicación con etilenglicol,
con sus correspondientes implicancias terapéuticas.

La confirmación se obtiene mediante la determinación de niveles de metanol en sangre

o niveles de formaldehido y ácido fórmico en orina/sangre
• Niveles séricos de > 20mg/dl son tóxicos
• Niveles séricos > 40 mg/dl son letales
• Niveles séricos bajos o ausentes de metanol no descartan la intoxicación

Materiales y reactivos:

 Soluciones:

 Solución de permanganato de potasio 0.2N

 Sulfito o bisulfito de sodio anhidro.
 Ácido cromotrópico.
 Ácido sulfúrico concentrado.
 Orina (muestra).
 Etanol (absoluto).
 Metanol (absoluto).
 Agua destilada.
 Acido pícrico.
 Fenilhidracina clorhidrato al 1%.
 Ferricianuro de potasio (1-10)
 Resorcinol (1-200)
 Cloruro férrico al 10%

 Otros:

 Tubos de centrifuga.
 Pipetas de 1, 2, 5 ml.
 Papel de filtro.
 Embudo.
 Agitador.
 Probetas de 10 ml.
PROCEDIMIENTO:

Se coloca la muestra a analizar en un balón de destilación, se agregan 20ml de

solución saturada de acido pícrico, 20mL de agua, unas perlas de vidrio y se somete a
destilación, recogiendo unos 10-15 mL del destilado en unos 2 mL de agua para evitar
pérdidas por volatilización.

OXIDACIÓN DEL DESTILADO: a la cantidad del destilado se añade 1 ml de ácido

sulfúrico al 25% y 4mL de KMnO4 0.2N; agitar y dejar reposar por diez minutos, filtrar
y decolorar el exceso de permanganato con bisulfito de sodio.
Al filtrado se le realizan las siguientes pruebas para reconocimiento de formaldehido:

CH3OH + MnO4- + 2H + HCOH+ MnO2 - +2 H2O

Cómo es su metabolismo?

El formaldehído se absorbe fácilmente por vía respiratoria (la absorción por vía
cutánea es muy poco eficaz, razón por la que el higienista debe prestar especial
atención a la protección respiratoria). Una vez en sangre, el formaldehído se
metaboliza con rapidez a ácido fórmico y finalmente a CO2 (dióxido de carbono)
y agua.
REACCIÓN CON ÁCIDO CROMOTRÓPICO:

En un tubo de ensayo que contenga 3 ml del filtrado se agregan unos mg de ácido

cromotrópico (lo que tome con la punta de una espátula) se agita la solución y se
agrega lentamente por las paredes del tubo inclinado para evitar que se mezclen los
líquidos 4 ml de ácido sulfúrico concentrado, la aparición en la zona de contacto de un
anillo de color púrpura indica la presencia de formaldehido en la muestra.
Limite de detección 1 ppm.

REACCIÓN DE HEHNER:

En un tubo de ensayo con 2ml del filtrado se añade 1ml de solución de FeCl3 al 10%,
se agita y se añade 5ml de leche, luego cuidadosamente por las paredes del tubo
inclinado se añade 4ml de H2SO4 concentrado; un anillo de color violeta en la interface
indica la presencia de formaldehido.
CONFIRMACIÓN:

A 2ml del filtrado contenidos en un tubo de ensayo añada unas gotas (8) se solución
de resorcinol (1-200), cuidadosamente por las paredes del tubo añada 4ml de H2SO4
concentrado, dejar en reposo por tres minutos, un anillo de color rosa en la interface
indica la presencia de formaldehido. Limite de detección 3ppm.

REACCIÓN CON EL REACTIVO DE SHIFF:

En un tubo de ensayo que contenga 1ml del reactivo de shiff se añaden algunas gotas
del filtrado, se deja en reposo, después de un rato entre dos minutos y media hora
aparecerá una coloración púrpura dependiendo de la cantidad de aldehído presente.
A la solución coloreada añada algunas gotas de HCL concentrado. La aparición de un
color azulado indica la presencia de formaldehido, el acetaldehído se decolora.

REACCIÓN DE SCHRYVER:

A 2ml del filtrado añada 2ml de fenilhidracina clorhidrato al 1%, luego 1ml de solución
recién preparada de ferricianuro de potasio (1-10) y unas gotas de HCL (c), la aparición
de una coloración rojo cereza indica la presencia del formaldehido.

Precauciones

Consultar la M.S.D.S para mayor información.

Tenga cuidado con:

 Ácido Sulfúrico (H2SO4): esta sustancia provoca quemaduras graves, es un

fuerte oxidante, ataca la ropa, madera y otros materiales carbonizándolos. En caso de
contacto con los ojos, lave inmediatamente y con abundante con agua y obtenga
atención médica inmediata. NUNCA le adicione agua a este producto. En caso de
accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico.

 Permanganato de potasio: con esta sustancia existe peligro de fuego en

contacto con materias combustibles. Nocivo por ingestión. Muy tóxico para los
organismos acuáticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio
ambiente acuático. Elimínese el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
Evítese su liberación al medio ambiente.
 Bisulfito de sodio: esta sustancia es nociva por ingestión. En contacto con ácidos
libera gases tóxicos. Evítese el contacto con los ojos. En caso de ingestión, acúdase
inmediatamente al médico y muéstrele la etiqueta o el envase.

 Etanol: esta sustancia es fácilmente inflamable. Manténgase el recipiente bien

cerrado. Conservar alejado de toda llama o fuente de chispas. No fumar.

Elementos de protección personal.

§ Bata de laboratorio e indumentaria resistente a ácidos.

§ Gafas de seguridad con protección lateral.
§ Guantes de caucho.