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Paso 1. En un tubo eppendorf de 1,5 ml. ppendorf Aadir 900ul solucin lisis celular 300ul sangre con EDTA
Incubar a T ambiente por10 min. Invirtiendo 2 a 3 veces el tubo. Paso 2. Centrifugar a 14000rpm por 30s.
Mezclar bien e incubar el tubo a 37 C ncubar por 15 min. Paso 5. (Paso opcional)
Agregar 1,5ul de solucin RNasas
Invertir 3 a5 veces el tubo e incubar a 37C por 15 min. Paso 3. Paso 6. Descartar el mximo de sobrenadante. Tratando de no remover el pellet formado en el fondo del tubo.
Aadir 100ul de solucin precipitacin de protenas
Diagnstico molecular
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Paso 13. Paso 9. Transferir 300ul del sobrenadante de del paso 7 y mezclar gentilmente hasta ver la hebra de ADN. Descartar el sobrenadante y dejar escurrir boca abajo sobre papel absorbente hasta secar.
Hebra de ADN.
Paso 14
Aadir 100ul de sol. de rehidratacin
Diagnstico molecular
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Universidad Santo Toms PROTOCOLO DE EXTRACCIN DE ADN VIRAL DE PLASMA A TRAVS DE COLUMNAS SLICA. Luis Colihuinca Llancapan Paso 1. Montar columna sobre un tubo colector. Paso 5. Traspasar la columna a otro tubo colector
Tubo N 2 Paso 6. Paso 2. En un tubo eppendorf de 1,5ml. Aadir 200ul buffer lisis + 4ul de poli-A + 50ul de proteinasa K, y 200ul de muestra. Agregar 500ul de buffer 1 de lavado (Inhibitor buffer)
Tubo N3 Paso 8.
Diagnstico molecular
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Universidad Santo Toms Paso 9. Traspasar la columna a otro tubo colector. Paso 12. Colocar la columna en otro tubo eppendorf. Agregar 50ul de buffer de elusin (Elution Buffer) Tubo N 4 Paso 10.
Aadir 450ul de buffer de lavado (Wash buffer)
Paso 13. Descartar la columna y guardar el eludo. Centrifugar 14000 rpm por 1 min.
Centrifugar 14000 rpm por 1 min. Para extraer todo el buffer en la columna.
Diagnstico molecular
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