Ingesta alta de cobre a largo plazo: efectos sobre la absorción, retención y homeostasis

del cobre en hombres 

Judith R Turnlund, William R. Keyes,Pronto Kyung Kim,Joseph M Domek  

The American Journal of Clinical Nutrition , Volumen 81, Número 4, abril de 2005, páginas 822–
828, https://doi.org/10.1093/ajcn/81.4.822
RESUMEN
Antecedentes: numerosos estudios han examinado el efecto de las ingestas bajas y adecuadas de
cobre en la absorción y retención, pero hay poca información disponible sobre la regulación de la
absorción y retención de cobre cuando la ingesta es alta.
Objetivo: se realizó un estudio en hombres para determinar el efecto de la ingesta alta de cobre a
largo plazo en la absorción, retención y homeostasis del cobre.
Diseño: Nueve hombres fueron confinados a una unidad de investigación metabólica (MRU) durante
18 días y fueron alimentados con un menú rotativo de 3 días que contenía un promedio de 1.6 mg
Cu / d. Continuaron el estudio en condiciones de vida libre durante 129 días, complementando sus
dietas habituales con 7 mg de Cu / día. Luego regresaron a la MRU durante 18 días y consumieron la
misma dieta que durante el primer período, excepto que la ingesta de cobre fue de 7.8 mg / día. El
isótopo estable 63 Cu fue alimentado a 3 sujetos e infundido en los otros 6 el día 7 de cada período de
MRU, y se realizaron recolecciones completas de orina y heces durante todo el estudio.  El cobre total
y 63 Cu se determinaron por espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente. La
absorción, la excreción y la retención de cobre se calcularon sobre la base de cobre dietético, urinario
y fecal y63 Cu.
Resultados: Los resultados fueron los siguientes al comparar la ingesta alta de cobre con la ingesta
habitual: la absorción fraccional de cobre fue significativamente menor, pero la cantidad absorbida fue
significativamente mayor; la excreción de los 63 Cu infundidos fue significativamente más rápida; y la
retención total fue significativamente mayor.
Conclusiones: la regulación homeostática de la absorción y retención de cobre ayudó a minimizar la
cantidad de cobre retenido con una alta ingesta de cobre, pero no fue suficiente para evitar la
retención de> 0.6 mg Cu / d.
Cobre , absorción , retención , homeostasis , isótopo estable , alto consumo de cobre.
Tema:
 

 proceso de absorción
 dieta
 homeostasis
 isótopos
 cobre
Sección de problemas:
 Vitaminas, minerales y fitoquímicos.
INTRODUCCIÓN

Un requerimiento promedio estimado de cobre de 0.7 mg / dy una cantidad diaria recomendada (RDA)
de 0.9 mg / d para adultos se introdujeron en 2001 en las nuevas ingestas dietéticas de referencia
( 1 ). Antes, no se disponía de datos suficientes para establecer una dosis diaria recomendada de
cobre, pero se sugirió un rango de ingesta diaria segura y adecuada. Las nuevas recomendaciones se
basaron en varios estudios realizados con ingestas de cobre bajas y adecuadas ( 2 - 4 ).

También se estableció una cantidad superior tolerable, pero había datos limitados disponibles para
establecer esta cantidad. Se utilizaron datos humanos, basados en el consumo crónico de gluconato
de cobre ( 1 ) como base para la cantidad superior. En ese estudio, se alimentaron 10 mg de Cu / d
durante 12 semanas y no se observó daño hepático ( 5 ), mientras que un informe de caso indicó que
la ingesta a largo plazo de 60 mg de Cu / d resultó en insuficiencia hepática aguda ( 6 ). Como no se
observó daño hepático a 10 mg / día, se sugirió como la cantidad a la que no se observaron efectos
adversos, por lo tanto, se estableció una cantidad superior de 10 mg / día. Numerosos estudios
informaron los efectos gastrointestinales de la ingesta de cobre <10 mg / día, incluidos dolor
abdominal, calambres, náuseas, diarrea y vómitos, por el consumo de bebidas o agua potable (1 ), y
la incidencia de estos efectos aumenta a concentraciones de cobre> 3 mg / L ( 7 ). Sin embargo, esas
observaciones tenían limitaciones y los efectos se consideraron transitorios. Se han realizado pocas
investigaciones para examinar el efecto de la alta ingesta de cobre sobre el estado del cobre, el
metabolismo y los efectos funcionales en condiciones controladas.

Hemos demostrado que, con una ingesta de cobre de 7,5 mg / día durante 24 días, la eficiencia de la
absorción fue considerablemente menor que con una menor ingesta, pero la cantidad absorbida
aumentó. La retención de cobre fue alta, con un promedio de 0.9 mg / d, pero la cantidad retenida
disminuyó con el tiempo ( 8 ). Presumimos que durante un período más largo se restablecería el
equilibrio normal cercano a 0. Un informe sobre el efecto de 6 mg de Cu / d durante 8 semanas sobre
las respuestas adaptativas encontró que se retuvo 0.75 mg de Cu / d, más que cuando las dietas
contenían menos cobre ( 9 ). La eficiencia de la absorción no se vio afectada en ese estudio, pero la
cantidad absorbida habría aumentado. Se informó otro estudio en el que se administró un suplemento
de 6 mg Cu / d durante 4 semanas, pero no se informó la absorción y retención de cobre ( 10) Este
informe describe el efecto de la alta ingesta de cobre a largo plazo en la absorción, retención y
homeostasis del cobre.

SUJETOS Y MÉTODOS
Asignaturas

Once hombres sanos fueron seleccionados para participar en el estudio. Se ha descrito el

reclutamiento, los procedimientos de selección, los criterios de exclusión y los procedimientos para el
consentimiento informado ( 11 ). El protocolo de estudio fue revisado y aprobado por el Comité de
Revisión de Sujetos Humanos de la Universidad de California, Davis, y por el Comité de Revisión de
Estudios Humanos del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos. Dos sujetos no
completaron el estudio y sus datos no están incluidos. Los participantes tenían edades comprendidas
entre 26 y 49 años. La altura media fue de 175 ± 7 cm. El peso corporal promedió 74 ± 13 kg al
comienzo del período metabólico A (MP-A) y 76 ± 13 kg al comienzo de MP-B y no difirió
significativamente entre MP-A y MP-B.

Diseño experimental

El estudio fue parte de un estudio más amplio sobre el efecto de la ingesta alta de cobre a largo plazo
en los índices de estado de cobre, función inmune y estado antioxidante ( 11).) Los hombres vivieron
en la unidad de investigación metabólica del Centro de Investigación de Nutrición Humana Occidental
durante 18 días (MP-A) mientras consumían una dieta que contenía 1,6 mg de Cu / d, seguido de un
período de vida libre de 129 días en el que consumieron sus dietas habituales junto con suplementos
de cobre que contienen 7 mg de Cu / d. Regresaron a la MRU durante otros 18 días (MP-B), y las dietas
se complementaron con 6.2 mg de Cu / d para un total de 7.8 mg de Cu / d.  Fueron supervisados por
el personal de enfermería en todo momento mientras vivían en la MRU. Durante el período de vida
libre, regresaron al centro una vez cada 2 semanas para recibir un suministro de suplementos,
verificar el cumplimiento, controlar el peso corporal y los signos vitales, e informar cualquier
inquietud. El peso corporal y los signos vitales se midieron diariamente a lo largo de las porciones
limitadas del estudio.

El protocolo para el estudio se muestra en la Figura 1 . Se realizaron recolecciones completas de

orina y heces a lo largo de las partes del estudio, y las heces se recolectaron dos veces durante la
parte de vida libre del estudio para monitorear el cumplimiento al tomar los suplementos de cobre. El
cabello se recogió el día 15 de cada parte del estudio en vivo.
FIGURA 1.

Diseño experimental. MP, período metabólico.

Dieta

Se utilizó un menú rotativo tridimensional que contenía al menos las cantidades recomendadas de
todos los nutrientes esenciales conocidos en ambas partes del estudio ( 11).) El contenido energético
diario de la dieta básica fue de 9.2 MJ (2200 kcal), con 87 g (15-16% de energía) de proteínas, 55% de
energía de carbohidratos y 30% de grasas. La proporción de ácidos grasos poliinsaturados a saturados
fue de 1.10, y la dieta contenía 196 mg de colesterol / día. La ingesta de energía se ajustó para cada
voluntario, en función del peso corporal y los registros de dieta, para que cada voluntario mantuviera
su peso inicial durante todo el estudio. Esto se hizo agregando energía a la dieta básica con el uso de
una bebida energética adicional que contenía maltodextrina, maicena, azúcar, crema batida, aceite de
semilla de algodón y agua. Si un sujeto ganó o perdió> 1% de su peso de referencia, su consumo de
energía se ajustó eliminando o agregando la bebida energética adicional en incrementos de 420 kJ
(100 kcal). Los pesos de referencia fueron el promedio de los pesos en los días 2 a 4 del estudio.

El contenido de cobre de la dieta se determinó mediante dilución de isótopos espectrometría de

masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-MS) como se describe más adelante. Se analizaron
cuatro compuestos de dieta de cada uno de los 3 días del menú. La dieta contenía 1,61 ± 0,05 mg Cu
en el día 1 del menú, 1,49 ± 0,03 mg en el día 2 del menú y 1,77 ± 0,03 mg en el día 3 del menú. La
ingesta media diaria de cobre fue de 1,62 ± 0,14 mg / día. En MP-B, la ingesta media de cobre fue de
7.76 ± 0.14 mg / d (7.75 ± 0.05, 7.63 ± 0.03 y 7.91 ± 0.04 mg para cada uno de los 3 días del menú,
respectivamente). Se añadió una solución que contenía sulfato de cobre a la bebida energética extra
de cada comida para lograr la ingesta dietética de cobre. La solución también proporcionó 2,7 mg de
Zn / d para lograr la dosis diaria recomendada de zinc. La cantidad de cobre fue la única variable
entre MP-A y MP-B. Durante el período de vida libre, Los sujetos recibieron instrucciones de consumir
suplementos que proporcionaran 7 mg de Cu / d como sulfato de cobre. Los suplementos se dividieron
entre la mañana y la cena. Los sujetos mantuvieron registros dietéticos durante 5 días antes del
estudio y durante 5 días durante el período de vida libre. Un sujeto experimentó náuseas al comienzo
de la parte de vida libre del estudio. No desayunó y las náuseas siguieron el suplemento de la
mañana. El problema se alivió cuando tomó el suplemento con su comida del mediodía. El SISTEMA
DE DATOS NUTRICIONALES PARA LA INVESTIGACIÓN, versión 4.01 (Centro de Coordinación de
Nutrición, Universidad de Minnesota, 1998) se utilizó para estimar la ingesta de cobre a partir de estos
registros. La ingesta de cobre se estimó en un promedio de alrededor de 1.6 mg / d de estos
registros. Los suplementos se dividieron entre la mañana y la cena. Los sujetos mantuvieron registros
dietéticos durante 5 días antes del estudio y durante 5 días durante el período de vida libre. Un sujeto
experimentó náuseas al comienzo de la parte de vida libre del estudio. No desayunó y las náuseas
siguieron el suplemento de la mañana. El problema se alivió cuando tomó el suplemento con su
comida del mediodía. El SISTEMA DE DATOS NUTRICIONALES PARA LA INVESTIGACIÓN, versión 4.01
(Centro de Coordinación de Nutrición, Universidad de Minnesota, 1998) se utilizó para estimar la
ingesta de cobre a partir de estos registros. La ingesta de cobre se estimó en un promedio de
alrededor de 1.6 mg / d de estos registros. Los suplementos se dividieron entre la mañana y la
cena. Los sujetos mantuvieron registros dietéticos durante 5 días antes del estudio y durante 5 días
durante el período de vida libre. Un sujeto experimentó náuseas al comienzo de la parte de vida libre
del estudio. No desayunó y las náuseas siguieron el suplemento de la mañana. El problema se alivió
cuando tomó el suplemento con su comida del mediodía. El SISTEMA DE DATOS NUTRICIONALES PARA
LA INVESTIGACIÓN, versión 4.01 (Centro de Coordinación de Nutrición, Universidad de Minnesota,
1998) se utilizó para estimar la ingesta de cobre a partir de estos registros.  La ingesta de cobre se
estimó en un promedio de alrededor de 1.6 mg / d de estos registros. No desayunó y las náuseas
siguieron el suplemento de la mañana. El problema se alivió cuando tomó el suplemento con su
comida del mediodía. El SISTEMA DE DATOS NUTRICIONALES PARA LA INVESTIGACIÓN, versión 4.01
(Centro de Coordinación de Nutrición, Universidad de Minnesota, 1998) se utilizó para estimar la
ingesta de cobre a partir de estos registros. La ingesta de cobre se estimó en un promedio de
alrededor de 1.6 mg / d de estos registros. No desayunó y las náuseas siguieron el suplemento de la
mañana. El problema se alivió cuando tomó el suplemento con su comida del mediodía. El SISTEMA
DE DATOS NUTRICIONALES PARA LA INVESTIGACIÓN, versión 4.01 (Centro de Coordinación de
Nutrición, Universidad de Minnesota, 1998) se utilizó para estimar la ingesta de cobre a partir de estos
registros. La ingesta de cobre se estimó en un promedio de alrededor de 1.6 mg / d de estos registros.

Preparación y administración de isótopos.

Se preparó una solución de cobre que contenía 63 Cu enriquecidos a partir de polvo de óxido cúprico
con una abundancia de 63 Cu de 99,89% (Oak Ridge National Laboratory, Oak Ridge, TN). La solución
se usó para preparar el diluyente de isótopos, el marcador oral y las soluciones de marcador
infundidas como se describió previamente ( 12 ). Las soluciones trazadoras orales contenían 0,27 mg
de solución de 63 Cu / g en MP-A y 2,25 mg de solución de 63 Cu / g en MP-B. Estos marcadores se
agregaron a la bebida energética extra de 3 de los sujetos 1 h antes de cada comida en el séptimo día
de cada período metabólico, para dosis orales totales de 0,82 mg 63 Cu en MP-A y 6,74 mg 63Cu en MP-
B. La solución reemplazó las soluciones de cobre natural (0.88 mg Cu en MP-A, 7.03 mg Cu en MP-B)
agregadas en los otros días del estudio. La solución de 63 Cu (5 g), que contenía 0,46 mg de 63 Cu, se
infundió en las venas de los brazos de 6 sujetos durante un período de 1 minuto. La infusión tuvo
lugar 15 minutos después de que el desayuno comenzó el séptimo día de cada período metabólico.
El disprosio, un marcador fecal no absorbido por el cuerpo ( 13 ), se administró el día en que se
administraron isótopos orales e intravenosos para confirmar la integridad de las colecciones
fecales. Se preparó para la administración disolviendo Dy 2 O 3 de alta pureza en ácido clorhídrico. El pH
se ajustó con NaOH y la solución se diluyó. La solución (1 g) que contenía 0,67 mg de Dy se añadió a
la bebida energética extra en cada comida el día 7.
Recolección y procesamiento de muestras.
Se tomaron precauciones para evitar la contaminación por oligoelementos durante todas las fases de
recolección, preparación y análisis de muestras como se describió anteriormente ( 11 ). Los
compuestos de cada uno de los 3 menús diarios se recogieron 4 veces, dos veces en cada período
metabólico MRU de 18 días, para la determinación del cobre. Se realizaron colecciones fecales
completas a lo largo de cada período metabólico de 18 días. Las heces se recolectaron en nuevos
contenedores de plástico en piscinas tridimensionales. Estaban congelados después de la
recolección. Los compuestos de dieta y las piscinas fecales se descongelaron, homogeneizaron,
congelaron y liofilizaron. Cuando estaban secos, se pesaron, se trituraron hasta obtener un polvo fino
y se mezclaron en grandes bolsas de plástico, se transfirieron a frascos de plástico y se almacenaron
en desecadores ( 14 ). Muestras de sangre para analizar en busca de cobre 63El enriquecimiento de Cu
se extrajo en tubos libres de oligoelementos que contenían heparina antes de la infusión de isótopos
(día 7); a las 5, 15 y 30 min y 1, 2, 4, 6, 11 y 16 h después de la administración; y diariamente del día
8 al día 18. La orina se recogió en piscinas de 8 ho 24 h en recipientes de plástico, se diluyó con agua
desionizada y se acidificó con un 1% de volumen de HCl concentrado.  Las submuestras de las
colecciones de 8 h se combinaron en grupos de 24 h, y todas las colecciones de 24 h se combinaron
en grupos de 3 d. Las muestras de orina y plasma se almacenaron a -20 ° C antes del análisis de
cobre. El cabello se recogió de un área en la parte posterior de la cabeza de aproximadamente 2 cm
de diámetro, como se describió anteriormente ( 11 ).
Preparación de muestras para mediciones de relación isotópica

Para minimizar la contaminación por oligoelementos, toda la preparación de la muestra se realizó en

una habitación limpia. Todos los artículos de vidrio y plástico se lavaron con ácido antes de su uso. Los
ácidos nítrico y clorhídrico ultrapuros (Seastar Chemicals, Sidney, Canadá) se utilizaron para
digestiones y diluciones. Los revestimientos y vasos utilizados para la digestión por microondas se
limpiaron mediante digestión con microondas con ácido nítrico como se describió anteriormente
( 15 ).

Se pesaron submuestras duplicadas de 0,2 g de cada combinación fecal tridimensional liofilizada y

compuesto de dieta en revestimientos de microondas, y un diluyente isotópico de 39,9 μg  63Se añadió
solución de Cu / g (0,25 g) a 1 submuestra. A continuación, se añadieron 6 ml de ácido nítrico
concentrado. Carriles de 10 muestras, una solución diluyente de isótopos y una muestra fecal de
referencia natural (preparada y utilizada por nuestro laboratorio) se digirieron en el horno de
microondas (MDS-2000; CEM Corporation, Matthews, NC). Después de la digestión y enfriamiento por
microondas, las muestras se despresurizaron, se transfirieron a vasos de precipitados de 30 ml, se
colocaron dentro de una campana de flujo laminar y se secaron. Se añadió HCl concentrado (1 ml) al
vaso de precipitados. Después de 30 minutos, se añadieron 5 ml de HCl 6 N. El cobre se separó del
resto de los minerales en la muestra y se purificó por cromatografía de intercambio aniónico, como se
describió anteriormente ( 14 ) con enjuague adicional de las columnas cargadas. Las muestras
purificadas se diluyeron a una concentración de ácido de HCL al 1% para el análisis ICP-MS.
Urinaria de cobre se preparó para la determinación de la relación de isótopos como sigue: partes
alícuotas de 50 ml de orina se pesaron en 100 mL vasos de precipitados, y 5 ml concentró HNO  3 se
añadió. La solución resultante se concentró a aproximadamente 10 ml, se transfirió a un vaso de
precipitados de 30 ml y se secó. Se añadió HCl concentrado (2 ml) para disolver los minerales. La
muestra disuelta se diluyó con 2 ml de HCl 6 N y se aplicó a columnas de intercambio aniónico.  El
procedimiento de elución utilizado fue similar a las separaciones de cobre fecal con enjuague
adicional con HCl 6 N después de cargar las muestras en las columnas.
Las muestras de plasma se prepararon para las determinaciones de la relación de isótopos con el uso
de un método de digestión por microondas modificado a partir de un procedimiento utilizado para las
relaciones de isótopos de molibdeno en plasma ( 15 ). Se pesaron alícuotas duplicadas de 0,5 g en
vasos de precipitados de politetrafluoroetileno de 10 ml que luego se colocaron encima de vasos de
precipitados de 5 ml dentro de revestimientos de microondas. Una solución que contiene 0.1 μg 63Se
añadió Cu a 1 parte alícuota de cada par. Se añadió ácido nítrico concentrado (6 ml) a la base de cada
revestimiento de digestión con microondas, y se añadieron 1,4 ml de ácido nítrico a cada vaso de
precipitados que contenía el plasma. Carriles de 10 muestras, 1 blanco y 1 muestra de referencia de
plasma (de un grupo de referencia preparado y utilizado en nuestro laboratorio), se digirieron en el
horno de digestión con microondas. Después de la digestión, se calentaron hasta sequedad en una
campana de flujo laminar en la sala limpia y se disolvieron en HCl 6 N. El cobre se separó y purificó
por cromatografía de intercambio aniónico similar a la dieta y muestras fecales, excepto que se usó
una columna más pequeña (3 mm de diámetro interno). Las columnas se enjuagaron con HCl 6 N (4
volúmenes de columna), luego con HCl 2,5 N (1 volumen de columna) y el cobre se eluyó con HCl 2,5
N (2 volúmenes de columna). Después de la separación y recolección,
Determinaciones de la relación de isótopos
La relación de isótopos de 63 Cu a 65 Cu ( 63 Cu: 65 Cu) se determinó en muestras de heces, dieta, orina
y plasma con el uso de un ICP-MS equipado con automuestreador AS-91, antorcha de cuarzo, conos de
níquel (ELAN 6000; PerkinElmer Sciex Instruments, Norwalk, CT) y nebulizador ultrasónico (U-5000AT;
CETAC Technologies Inc, Omaha). El inyector automático y la bomba peristáltica se alojaron dentro de
una caja de acrílico con una cortina de plástico que cubre la abertura para minimizar la contaminación
durante el análisis. El 63 Cu: 65 Cu se midió con 250 barridos y 10 réplicas para un tiempo de análisis de
1,5 minutos, con tiempos de lavado y lavado de 2 minutos. Los tiempos de permanencia fueron 20 ms
para 65 Cu y 10 ms para 63Cu. La potencia de radiofrecuencia fue de 1300 W, y el flujo de gas
nebulizador fue de 1.07 L / min. La concentración de cobre en las muestras fue típicamente de 30–80
ppb en HCl al 1%, lo que produjo intensidades totales de cobre ≈1 millones de conteos / s en el modo
analógico. La reproducibilidad promedio de las mediciones de 63 Cu: 65 Cu fue de 0.3%.
Se usó HCl ultrapuro al 1% como solución de enjuague y para determinaciones de fondo en
blanco. Los recuentos en blanco se restaron de los recuentos de muestras. La proporción de un
estándar de cobre natural (30 ppb Cu en HCl al 1%) se midió para corregir el sesgo de masa
instrumental. El valor natural de referencia para el 63 Cu: 65 Cu se dividió por la proporción medida
para determinar el factor de corrección de la proporción que se utilizó para corregir las proporciones
medidas el día del análisis. El promedio de 63 Cu: 65 Cu de todas las muestras naturales analizadas a lo
largo del estudio se promedió para cada matriz, y se realizaron correcciones de sesgo de masa de
matriz pequeña.
El marcador de 63 Cu y el contenido total de cobre de las muestras se determinaron por dilución de
isótopos mediante 63 Cu: 65 Cu de 2 alícuotas duplicadas (con y sin 63 Cu añadidos ), muestras
naturales de la misma matriz y la solución enriquecida con 63 Cu , junto con los pesos de las alícuotas
de muestra y el diluyente de isótopos agregado, la concentración del diluyente de isótopos y los pesos
totales de la piscina. Este cálculo se ha informado anteriormente ( 12 ).
Contenido de cobre y disprosio

Se han reportado concentraciones urinarias de cobre, determinadas por espectrofotometría de

absorción atómica en horno de grafito ( 11 ). También se ha informado el análisis de
espectrofotometría de absorción atómica de horno de grafito, limpieza y cenizas de muestras de
cabello ( 11 ).

Se prepararon muestras fecales para el análisis de disprosio como se describe para las mediciones de
la relación de isótopos. Después de someterse a digestión con microondas, las muestras se diluyeron
con agua desionizada a 25 ml en matraces volumétricos de polietileno. Antes del análisis, las
muestras se diluyeron adicionalmente con ácido nítrico al 1% (peso: peso) para alcanzar
concentraciones finales de 0–3 ppb Dy, luego se añadió rodio, un patrón interno, a una concentración
de 1 ppb. El análisis ICP-MS se realizó en las condiciones descritas previamente ( 16).) El
aseguramiento de la calidad, basado en la adición de disprosio a 9 muestras en el rango de
resultados, mostró que la recuperación promedio fue de 113.2% con una SD relativa (RSD) de 2.6%, y
los resultados analíticos fueron corregidos para la recuperación. La recuperación media del disprosio
en las colecciones fecales fue del 101,7% (rango: 89-108%) con 5,2% RSD para MP-A y 101,3%
(rango: 92-108%) con 4,6% RSD para MP-B.

Cálculos de absorción y excreción.

La absorción de cobre, la excreción, la retención y las pérdidas gastrointestinales endógenas se
calcularon sobre la base de la monitorización fecal como se describió anteriormente ( 12 ) Estos
cálculos suponen que la misma fracción de cobre en la dieta se absorbe como el marcador oral y que
la misma fracción de cobre en la dieta absorbida se excreta en el tracto gastrointestinal como el
marcador infundido. La absorción aparente de cobre se calculó restando la cantidad de marcador oral
recuperada en las heces en un período de 12 días después de la alimentación de la cantidad
alimentada. Esto incluye el marcador que fue absorbido y luego excretado durante esos 12 días. La
fracción de infundido 63El Cu excretado en las heces se midió en los períodos de 12 días después de la
infusión. La verdadera absorción de cobre se calculó corrigiendo la fracción de cobre aparentemente
absorbida por la fracción de 63 Cu excretada durante el mismo período de tiempo. Las pérdidas
gastrointestinales endógenas totales se basaron en cobre fecal total menos cobre dietético no
absorbido. El grupo de rotación rápida se calculó sobre la base de las pérdidas de cobre en la dieta
consumidas y absorbidas en los 12 días anteriores. El grupo de rotación lenta fueron las pérdidas
fecales endógenas no atribuidas a la excreción de cobre dietético absorbido en los primeros 12 días
después de la absorción. Se calculó restando el cobre excretado del cobre endógeno total.
Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó con la versión de computadora personal 8.2 del SISTEMA DE ANÁLISIS
ESTADÍSTICO ( 17 ). Se tabularon y compararon estadísticas descriptivas, que incluyen medias, DE y
gráficos. PROC GLM se utilizó para realizar análisis de varianza sobre el efecto de las 2 ingestas
dietéticas de cobre sobre la absorción y retención de cobre, la excreción fecal y urinaria de 63 Cu y el
cobre urinario total. Si se encontró una F significativa, se usó la prueba de Tukey para determinar qué
medios de tratamiento diferían. Se usó un nivel de significancia de 0.05 para todas las pruebas
estadísticas.
RESULTADOS
Excreción de 63 Cu
Las principales rutas de excreción de cobre son a través del tracto gastrointestinal y en la orina. La
mayoría de los 63 Cu infundidos que se excretaron aparecieron en las heces, y solo se encontró una
pequeña fracción en la orina. La excreción fecal media de 12-d 63 Cu fue significativamente mayor
( P <0.05) en MP-B (46%) que en MP-A (27%; SE = 2.3), como se muestra en la Tabla 1 . En
contraste, la excreción urinaria acumulada media de 63 Cu fue significativamente menor en MP-B
(1.3%) que en MP-A (2.1%; SE = 0.14). Los patrones de excreción se representan en la Figura 2 . El
total 12-d 63La excreción de Cu por ambas vías fue del 47% de la dosis infundida en MP-B en
comparación con el 29% en MP-A, que fue significativamente menor. Sin embargo, la excreción
urinaria total de cobre fue significativamente mayor en MP-B que en MP-A.

1
Las medias dentro de una fila con letras superíndice diferentes son significativamente
diferentes, P <0.05 (prueba de Tukey).
2
SE de mínimos cuadrados significa.
3
Promedio diario de excreción de cobre durante los últimos 12 días de cada período metabólico ( n =
9).
44
Porcentaje de dosis de 63 Cu infundidos excretados en los 12 días posteriores a la infusión ( n = 6).
55
Antes de la corrección por excreción endógena ( n = 3).
66
Estimada a partir de la absorción promedio de 63 Cu alimentados ajustada para la excreción promedio
de 63 Cu infundidos .
77
Promedio de los últimos 12 días de cada período metabólico ( n = 9).
FIGURA 2.

Patrones de excreción fecal y urinaria de 63 Cu después de la infusión de 460 μg 63 Cu en 6 sujetos. El

enriquecimiento fecal acumulado fue significativamente mayor durante el alto consumo de cobre
[período metabólico B (MP-B)], y el enriquecimiento urinario acumulativo fue significativamente
menor, P <0.05 (prueba de Tukey).
El enriquecimiento de plasma después de la infusión de 63 Cu se representa en la Figura 3 (A y B). El
patrón de enriquecimiento es similar en ambos períodos, pero a partir de las 48 h después de la
infusión y el enriquecimiento posterior difirió significativamente, con un promedio de 1.1% en MP-B y
1.6% en MP-A (SE = 0.02).

Plasma 63 Cu enriquecimiento después de la infusión de 460 μg 63 Cu en 6 sujetos. Los patrones de

enriquecimiento fueron similares en las primeras 24 h (A). Después de eso (B), el enriquecimiento
plasmático fue significativamente menor durante la ingesta alta de cobre, con un promedio de 1.1%
en el período metabólico B (MP-B) y 1.6% en MP-A, P <0.05 (SE = 0.02; prueba de Tukey). Tenga en
cuenta que los ejes y difieren entre las figuras.
Absorción de cobre
La absorción de cobre durante cada período dietético se muestra en la Tabla 1 . La fracción absorbida
fue significativamente mayor durante MP-A (29%) que durante MP-B (16%; SE = 1.0). Sin embargo, la
cantidad absorbida fue significativamente menor durante MP-A (0,48 mg) que durante MP-B (1,2 mg;
SE = 0,05). La absorción real, calculada como se explicó anteriormente, al combinar el cobre medio
absorbido en los sujetos alimentados con 63 Cu con el promedio excretado durante el mismo período
de tiempo en los sujetos infundidos, mostró un patrón similar ( Tabla 1 ), pero la diferencia relativa fue
menor.
Retención de cobre (balance)

La retención promedio de cobre, basada en cobre dietético, urinario y fecal, para cada período
metabólico también se muestra en la Tabla 1 . Tanto el cobre fecal como el urinario fueron más altos
cuando el cobre en la dieta fue alto. El cobre fecal promedió 7.1 mg / d en MP-B y 1.6 mg / d en MP-A
(SE = 0.10). El cobre urinario promedió 26 μg / d en MP-B y 20 μg / d en MP-A (SE = 0.9). La retención
de cobre fue notablemente mayor en MP-B (0,67 mg / d) que en MP-A (0,06 mg / d; SE = 0,27).

Volumen de ventas de cobre

Las pérdidas endógenas de cobre se calcularon para agrupaciones de recambio rápido y lento y las
pérdidas gastrointestinales endógenas totales para 9 sujetos durante los últimos 12 días de cada
período metabólico como se describió anteriormente. Cuando la ingesta de cobre en la dieta fue de
1,6 mg / día (MP-A), se eliminó un total de 0,58 mg de Cu / día endógeno en las heces. De eso, 0.18
mg de Cu / d endógeno fue contribuido por el grupo de rotación rápida y 0.40 mg de Cu / d endógeno
por el grupo de rotación lenta. Cuando la ingesta fue de 7.8 mg Cu / d (MP-B), las pérdidas
gastrointestinales endógenas totales fueron 1.56 mg Cu / d, con 1.04 mg Cu / d contribuido por el
grupo de rotación rápida y 0.52 mg Cu / d por el grupo de rotación lenta.

DISCUSIÓN

Estudiamos el metabolismo del cobre previamente con una ingesta alta durante 24 días, y no se
observaron cambios en los índices del estado del cobre ( 2 ). Sin embargo, la ingesta alta resultó en
cambios marcados en la absorción y retención ( 8 ). La eficiencia de la absorción disminuyó
notablemente, pero se absorbió más cobre y se retuvo considerablemente más cobre. El estudio
actual se realizó para determinar si, después de una ingesta alta de cobre a largo plazo, se
producirían cambios en el estado del cobre y si la absorción y la retención se adaptarían a la ingesta
alta a largo plazo.

En el presente estudio, se observaron cambios pequeños pero significativos en la actividad de

ceruloplasmina y la actividad de la superroxidasa dismutasa, pero las concentraciones plasmáticas de
cobre y ceruloplasmina no cambiaron, como se ha informado ( 11) También evaluamos varias
funciones que se han asociado con el cobre. Algunas de estas funciones sugirieron posibles efectos
adversos del alto consumo de cobre. La actividad de la bencilamina oxidasa, que según la hipótesis se
asocia con el daño celular intestinal, el aumento y las barras T urinarias, una medida indirecta del
daño oxidativo, aumentó. Varios índices de la función inmune cambiaron. Los neutrófilos
disminuyeron, los linfocitos aumentaron y el receptor de interleucina 2 disminuyó. Los títulos de
anticuerpos en suero después de la inmunización fueron mucho más bajos en los sujetos que
recibieron suplementos que en los sujetos de control que no recibieron suplementos ( 11 ). Todos
estos cambios sugieren un posible efecto adverso del alto consumo de cobre sobre la función inmune.

En nuestro estudio anterior con una alta ingesta de cobre durante 24 días, se retuvieron 0,94 mg Cu /
d durante 24 días, pero los equilibrios fueron muy variables y se volvieron menos positivos con el
tiempo. Presumimos que una vez que se alcanzara el equilibrio, el equilibrio volvería a estar cerca de
0. Sin embargo, cuando la ingesta fue alta durante un período de tiempo más largo en este estudio,
todavía se mantuvo un promedio de 0.67 mg de Cu. Debido a que las reservas totales de cobre en el
cuerpo son solo de 80 a 100 mg, la cantidad de cobre retenida aumentaría notablemente las reservas
de cobre y podría poner a una persona en riesgo de cirrosis. En condiciones como la enfermedad de
Wilson ( 18 ), la cirrosis infantil india ( 19 ) y la cirrosis biliar ( 20 ), las cantidades de cobre en el
hígado, el sitio de almacenamiento del cobre, son altas.

La retención de cobre está fuertemente regulada, pero las ingestas altas y bajas de cobre exceden los
mecanismos reguladores, lo que lleva al agotamiento del cobre ( 12 ) o al exceso de retención ( 8 ). Se
han identificado tres sitios de regulación. A medida que aumenta la ingesta de cobre, disminuye la
eficiencia de la absorción, pero aún se absorbe más cobre ( 8 , 12 ). Recientemente hemos
demostrado que parte del cobre que parece ser absorbido se retiene en las células de la mucosa
intestinal, por lo que no entra en la circulación sistémica y se elimina a través del tracto
gastrointestinal cuando las células intestinales se exfolian ( 21).) Finalmente, las pérdidas endógenas
de cobre disminuyen cuando la ingesta es baja, por lo que se elimina menos, y aumentan cuando la
ingesta es alta, por lo que se elimina más cobre ( 12 ).

En el presente estudio, la absorción aparente fue del 29% (0,48 mg Cu / d) cuando la ingesta fue de
1,6 mg Cu / d y del 16% (1,2 mg Cu / d) cuando la ingesta fue de 7,8 mg Cu / d. Cuando estos valores
de absorción se corrigen para la excreción endógena de cobre absorbido durante el tiempo de
recolección de la muestra, la absorción real fue del 40% (0,65 mg Cu / d) en comparación con el 29%
(2,2 mg Cu / d). Estos datos muestran 2 de los puntos de regulación. La cantidad inicial absorbida es
considerablemente mayor, pero una cantidad considerable se excreta inmediatamente en el tracto
gastrointestinal, por lo que la absorción aparente es menor. La cantidad retenida por las células
intestinales cuando la ingesta es alta (el otro punto de regulación) aún no se puede cuantificar, pero
finalmente se elimina en las heces junto con cobre dietético no absorbido y cobre endógeno.

La retención de cobre en este estudio fue de 0.06 mg / d, cerca de 0, cuando la ingesta dietética fue
de 1.6 mg Cu / d, pero aumentó a 0.67 mg / d cuando la ingesta dietética fue de 7.8 mg Cu / d.  Por lo
tanto, se produjo cierta adaptación a la alta ingesta alimentaria, ya que en nuestro estudio con una
alta ingesta durante 24 días, se retuvo más cobre, 0,94 mg / día. Sin embargo, 0,67 mg de Cu / d
todavía dio como resultado una cantidad significativa de cobre retenido, y a este ritmo el cobre
corporal total podría duplicarse en 100-150 d.

Dividimos el cobre excretado en 2 grupos, un grupo lento, la cantidad de cobre endógeno eliminado
que no se atribuyó al cobre recientemente absorbido, y un grupo rápido, la cantidad eliminada
rápidamente después de la ingesta. La cantidad en el grupo rápido aumentó más a medida que
aumentó el consumo de cobre que el grupo lento. La piscina rápida tenía el doble del tamaño de la
piscina lenta cuando la ingesta era alta; cuando la ingesta era baja, el grupo lento era más del doble
del grupo rápido. Esto da como resultado una rotación más rápida del cobre recién absorbido cuando
la ingesta es alta. La rápida excreción en el tracto gastrointestinal se ilustra en la Figura 2 . También
muestra que, cuando la ingesta es alta, se infunde 63La bilis elimina el Cu tan rápidamente que se
elimina menos isótopo circulante en la orina que el que se elimina cuando la ingesta es menor.

Los resultados de este estudio son consistentes con los resultados de otro estudio en el que se
determinaron la absorción, la retención y las piscinas lentas y rápidas ( 12 ). Los resultados de ese
estudio muestran que, cuando la ingesta es baja, se elimina poco cobre en la piscina rápida y esto
aumenta notablemente a medida que aumenta la ingesta. El grupo lento se ve afectado en mucho
menor medida. Los mecanismos reguladores homeostáticos funcionan relativamente bien hasta que
la ingesta excede 1.6 mg Cu / d, y después de eso la retención aumentó notablemente.  Los resultados
de otro estudio mostraron que incluso a 1.7 mg Cu / d, la retención se incrementó a 0.17 mg Cu / d
( 8 ).
La mayor parte del cobre que se absorbe se pierde por excreción en el tracto gastrointestinal. Aunque
la excreción gastrointestinal aumentó notablemente con una alta ingesta de cobre, el aumento no fue
suficiente para eliminar el exceso de cobre. La excreción de cobre de otras rutas también aumentó en
este estudio. El cobre urinario aumentó significativamente, de 20.3 a 25.6 μg / d ( 11 ), pero este
aumento no tuvo un efecto medible en la retención de cobre. El cobre del cabello también aumentó
significativamente, de 9.2 a 21.1 μg / g de cabello ( 11 ), y, aunque no podemos estimar las pérdidas
diarias por esta ruta, el efecto sobre la retención sería pequeño.

El enriquecimiento de cobre en plasma también refleja la regulación homeostática del metabolismo

del cobre. Aunque la concentración de cobre en plasma no cambió debido a la ingesta dietética,
el enriquecimiento de 63 Cu fue menor cuando la ingesta fue alta. Los patrones iniciales de
enriquecimiento fueron similares, pero los enriquecimientos fueron consistentemente más bajos
después de las primeras 24 h, lo que demuestra nuevamente que la dosis infundida se eliminó de la
circulación más rápidamente cuando la ingesta fue alta.

Este estudio muestra que los mecanismos homeostáticos que controlan la retención de cobre en
humanos no son suficientes para evitar la acumulación de cobre cuando la ingesta es alta, incluso
durante un período de varios meses. Como se indicó anteriormente, en este estudio se observaron
pocos cambios en los índices del estado del cobre, pero los cambios en varios marcadores funcionales
sugieren que la defensa antioxidante y la función inmune pueden haber sido negativamente afectadas
por la cantidad de cobre en la dieta ( 11 ). Es posible que estos efectos estén relacionados con la
acumulación de cobre durante la alta ingesta de cobre. Este hallazgo sugiere que la cantidad superior
actual para el cobre es más alta de lo deseable, y se debe considerar establecer una cantidad superior
más baja.

NOTAS AL PIE
2
Con el apoyo del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, Servicio de Investigación
Agrícola.

Agradecemos al personal de la unidad de investigación metabólica por su ayuda en la realización del

estudio y a Virginia Gildengoren por su asesoramiento estadístico.

JRT fue responsable de todos los aspectos del estudio. WRK, SKK y JMD contribuyeron a la recopilación
de datos y el análisis y la preparación del manuscrito. Ninguno de los autores tuvo ningún conflicto de
intereses.