Tecnológico de Estudios Superiores de Tianguistenco

División de Ingeniería Ambiental

Evaluación de los efectos sobre la viabilidad y el estrés oxidante en la línea

celular de epitelio pulmonar (A549) por la exposición a contaminantes
atmosféricos

Reporte de residencia que presenta

Saúl Méndez Gómez

Asesor externo

M. en C José Arturo Jiménez Chávez

Asesor interno

Q.F.B Alma Nayely Montes Pueblas

Agradecimientos

A Dios, por darme fuerza, esperanza, estar a un lado de mí: gracias por ser una guía en mi
camino durante esta etapa nueva de mi vida.

A la Dra. Andrea de Vizcaya, gracias por haber puesto su confianza en mí al dejarme realizar
este proyecto el laboratorio 26, pero sobre todo muchas gracias por permitirme ser parte de un
gran equipo de trabajo.

A mi asesor externo el M. en C. José Arturo Jiménez Chávez, por a verme apoyado en todo
momento con sus correcciones, comentarios y sugerencias, en la realización de mi proyecto y
enseñado un poco de su conocimiento.

A mi asesora interna la QFB. Alma Nayeli Montes Pueblas, por apoyarme con sus
observaciones, correcciones y observaciones durante la realización de mi proyecto.

A mi familia, mi mama, mi papa y mis hermanos, por su apoyo incondicional, sus consejos y
por darme fuerza para seguir avanzando con mis metas y sueños.

A la Bióloga Marisela Uribe, por todo su apoyo y las enseñanzas con las técnicas laboratorio,
por estar al pendiente de mí y mis experimentos, por tener un consejo o una sugerencia para
mejorar día con día en el laboratorio.

A mis profesores de la carrera, por a verme enseñado un poco de sus conocimiento, consejos
y experiencias profesionales durante todo este tiempo.

A mis compañeros de toda carrera, por a ver estado conmigo y aprendido con ellos en tiempos,
experiencias buenas y malas.
Resumen

Dentro los contaminantes más importantes en la Cuidad de México podemos encontrar a

aquellos que están suspendido en el aire (el material particulado menor a 2.5 micras, PM2.5; y
las nanopartículas, NP), los cuales han sido relacionados con efectos adversos a nivel
respiratorio, cardiovascular y mortalidad prematura en humanos. Los mecanismos de acción
aún no están completamente establecidos, se plantea que tales efectos adversos derivan del
estrés oxidante, como resultado de la exposición a los compuestos orgánicos e inorgánicos
contenidos en las partículas. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue determinar los
efectos citotóxico de los contaminantes particulados del aire sobre una línea celular de epitelio
pulmonar humano (A549). Se realizaron dos tipos de estudio de exposición de PM 2.5, uno in
vivo y otro in vitro. Para el estudio in vivo se utilizaron cobayos los cuales fueron expuestos
durante 15 días por 5 horas/día y divididos en diferentes grupos para la exposición mediante
un sistema concentrador de aerosoles variando la concentración y la eficiencia del
concentrador de PM2.5; como resultado del estudio de la concentración obtenida a partir de la
extrapolación de los datos se obtuvo una eficiencia de 483.8 µg/m3. Posteriormente para el
estudio in vitro se usaron células (A549), de las cuales se realizó su estandarización para
analizar el crecimiento durante 24, 48, 72 y 96 horas; de igual forma, se llevó a cabo la
determinación de la viabilidad de estas células mediante el ensayo de LDH (Lactato
deshidrogenasa), estas células se expusieron a PM2.5 o NP de SiO2 durante 24 h (5 – 40
µg/cm2), mostrándose daño significativo sobre la membrana de las células en las
concentraciones de 20 g/cm2 y 40µg/cm2. Los resultados que obtuvieron durante la
estandarización de la curva de crecimiento de la línea celular se pudo verificar que una de las
concentraciones viables es la de 50,000 células/cm2 para trabajar, seguido de la realización
de del ensayo de liberación de la LDH mostraron que las partículas al primer contacto con las
células A549 causan rompimiento en la membrana celular en los tiempos mencionados
anteriormente.
Abstract

Between the most important pollutants in Mexico City we can find those that are
suspended in the air (particulate matter less than 2.5 microns, PM2.5; and
nanoparticles, NP), which have been linked to adverse effects at the respiratory,
cardiovascular and premature mortality levels in humans. The mode of action are
not yet fully established, it is proposed that such adverse effects derive from
oxidative stress, as a result of exposure to the organic and inorganic compounds
contained in the particles. For the above reason, the objective of this work was to
determine the cytotoxic effects of particulate air pollutants on a human pulmonary
epithelium (A549) cell line. Two types of PM2.5 exposure studies were performed,
one in vivo and another in vitro. For the in vivo study, guinea pigs were used, which
were exposed for 15 days for 5 hours/day and divided into 8 different groups for
exposure through an aerosol concentrator system varying the concentration and
efficiency of the PM2.5 hub; as a result of the study of the obtained concentration by
the data extrapolation, the achieved concentration was 483.8 µg/m3. Subsequently
for the in vitro study, the standardization of the A549 cells was done to analyze the
cellular growth for 24 to 96 hours; in the same manner, the determination of the
viability of these cells was carried out by the LDH (Lactate dehydrogenase) assay,
these cells were exposed to PM2.5 or NP of SiO2 for 24 hours (5 - 40 µg/cm2), results
shown a significant damage to the cell membrane at the concentration of 20 µg/cm2
and 40 µg/cm2. The results obtained during the standardization of the cell line growth
curve were able to verify that the concentration of 50,000 cells/cm2 was viable to
work with it, followed by the LDH release test which shown a first contact damage in
the A549 cell membrane after particulate air pollutants exposure.