Universidad Nacional del Callao

Facultad de Ingeniería Química

1-1-2019
Plaqueo
Ambiental

Alumno:
León Horna, David
Grupo:
92 G
Profesora:
Ing. Herrera Sanchez, Sonia
 Universidad Nacional Del Callao Facultad de Ingeniería Química
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I. INTRODUCCIÓN

La atmósfera no tiene un microbiota autóctono, pero es un medio para la

dispersión de muchos tipos de microorganismos (esporas, bacterias, virus y
hongos), procedentes de otros ambientes. Algunos han creado adaptaciones
especializadas que favorecen su supervivencia y permanencia. Los
microorganismos dispersados por el aire tienen una gran importancia biológica y
económica. Producen enfermedades en plantas, animales y humanos, causan
alteración de alimentos y materiales orgánicos y contribuyen al deterioro y
corrosión de monumentos y metales. La Microbiología del aire comienza en el
siglo XIX, con Pasteur y Miquel que diseñaron métodos para estudiar los
microorganismos en el aire y descubrir la causa de algunas enfermedades.
Desde entonces numerosos investigadores han trabajado en este campo tanto
en el aire exterior como en recintos cerrados. Las enfermedades transmitidas por
el aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las respiratorias (neumonía,
tosferina, tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas (meningitis,
sarampión, varicela, micosis) y alérgicas.

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II. OBJETIVOS

 Determinar y evaluar la calidad del ambiente del laboratorio, si se

encuentra dentro del rango de límites máximos permisibles, tomando
como referencia la norma R.M 461 - 2007 MINSA.

 Observar la presencia de microorganismos en el aire mediante un método

cualitativo (Agar Plate Count).

 Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, el

número de aerobios mesófilos viables presentes en el aire.

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III. FUNDAMENTO TEORICO

1.- AEROBIOS MESÓFILOS

Definición:

Bacterias mesofólicas son las Bacteria que descompone la materia orgánica a

temperaturas que oscilan entre 30 y 40 C.
Bacteria que descompone la materia orgánica a temperaturas que oscilan entre
30 y 40 C. El agua es utilizada como medio de eliminación de excretas y otros
desechos; puede también contener microorganismos patógenos de asiento no
intestinales (flora de la piel por ejemplo); estos son los llamadas bacterias
mesofólicas.

BACTERIAS AEROBIAS MESÓFILOS:

Características

-Se multiplican en aerobiosis

-Temperatura de incubación entre los 20 y los 37°C
-Pueden ser patógenas o saprofitas
-Recuentos altos en alimentos estables a menudo indican materias primas
contaminadas o tratamientos no satisfactorios desde el punto de vista sanitario.
-En los productos perecederos pueden indicar también condiciones inadecuadas
de tiempo/temperatura durante su almacenamiento.
-La presencia de un número elevado de bacterias aerobias mesófilos que crecen
bien a temperatura corporal o próxima a ella, significa que puede haberse dado
condiciones favorables a la multiplicación de los microorganismos patógenos de
origen humano o animal.
-Todas las Bacterias patógenas conocidas vehiculadas por los alimentos son
mesófilos y en algunos casos contribuyen con su presencia a los recuentos en
placa encontrados.

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 DESARROLLO HISTÓRICO DE LA MICROBIOLOGÍA DEL AIRE

La existencia de una multitud de corpúsculos en el aire fue observada desde la

antigüedad. Lucretius (55 a.C.) observó las partículas de polvo brillando en un
rayo de sol en una habitación oscura y concluyó que su movimiento se debía al
bombardeo de innumerables e invisibles átomos en el aire, aunque fue necesario
esperar al descubrimiento del microscopio para ver que en el aire había
microorganismos vivos. Las esporas de los hongos fueron vistas por un botánico
napolitano, Valerius Cordus, en el siglo XVI, pero fue Micheli (1679-1737) quien
primero las dibujó observando las esporas de los mohos que se transmitían por
el aire (Miquel y Cambert, 1901). Leeuwenhoek (1722) observa y describe por
primera vez las bacterias en distintos ambientes y supone que «estos
animálculos pueden ser transportados por el viento mediante el polvo que flota
en el aire». Un siglo después, Ehrenberg, en sus numerosas memorias
publicadas de 1822 a 1858, demostró que tanto las partículas atmosféricas del
interior de las casas y hospitales como las del aire exterior de elevadas montañas
estaban compuestas de esporas criptogámicas. En esta misma época en
Francia, Gaultier de Claubry (1855), inaugura la investigación científica
estudiando las partículas atmosféricas mediante un procedimiento que las
retiene haciendo borbotear el aire en agua destilada. Pero fue Pasteur el que
perfeccionó los procedimientos empleados por este investigador y realizó los
primeros estudios precisos de las bacterias del aire, cuando demostró la no
existencia de la generación espontánea. El método utilizado consistió en hacer
pasar un volumen determinado de aire con ayuda de un aspirador por algodón-
pólvora colocado en un tubo de vidrio, que posteriormente se disolvía en alcohol-
éter.

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 ORIGEN DE LOS MICROORGANISMOS

En el aire hay microorganismos, aunque no se puede asegurar que existe un

verdadero «aeroplankton» que viven, se alimentan y se reproducen
permanentemente en él. Muchos microorganismos que viven en la hidrosfera y
litosfera pueden encontrarse en el aire. Son microbios alóctonos, procedentes
del suelo, agua y seres vivos que pueblan estos ambientes. Los movimientos del
aire y de los seres vivos son los que sitúan a los microorganismos en la
atmósfera. Junto al suelo hay una capa laminar de aire que impide el fácil paso
de microorganismos del suelo al aire. Para que pasen se necesita una fuerte
corriente de aire que levante polvo del suelo o agua de sus depósitos (mares,
ríos...). También las plantas los lanzan en sus movimientos de dehiscencia y
diseminación (polen, esporas...) y los animales en los actos respiratorios
normales y anormales (estornudos, gotas de Pflügge...). A menudo, tanto las
esporas como los microorganismos vegetativos entran en la atmósfera como
bioaerosoles, que pueden formarse por muchas causas: lluvia, movimiento del
agua en los ríos y mar, tratamiento de aguas residuales, aspersores de riego,
aire acondicionado o secreciones respiratorias del hombre y de los animales.
Ésta última es muy importante en la dispersión de bacterias patógenas y virus
animales. Los microorganismos también pueden encontrarse en el aire sobre
partículas de polvo o en el suelo (Atlas y Bartha, 2002).

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 TIPOS DE MICROORGANISMOS

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de microorganismos,

especialmente bacterias y hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del
origen, de la dirección e intensidad de las corrientes de aire y de la supervivencia
del microorganismo. Algunos microorganismos se encuentran en forma de
células vegetativas, pero lo más frecuente son las formas esporuladas, ya que
las esporas son metabólicamente menos activas y sobreviven mejor en la
atmósfera porque soportan la desecación. Las producen hongos, algas,
líquenes, algunos protozoos y algunas bacterias. En el aire se aíslan
frecuentemente bacterias esporuladas de los géneros Bacillus, Clostridium y
Actinomicetos (Underwood, 1992). Entre las bacterias también son muy
frecuentes los bacilos pleomórficos Gram positivos (Corynebacterium) y los
cocos Gram positivos (Micrococcus y Staphylococcus). Los bacilos Gram
negativos (Flavobacterium, Alcaligenes) se encuentran en menor proporción y
disminuyen con la altura (Gregory, 1973; Pelczar et al., 1993). Cladosporium es
el hongo que predomina en el aire, tanto sobre la tierra como sobre el mar,
aunque también es frecuente encontrar otros mohos, como Aspergillus,
Penicillium, Alternaria y Mucor (Takahashi, 1997) y la levadura Rhodotorula
(Underwood, 1992). Los virus también pueden encontrarse en el aire y ser
transportados por él. Numerosos virus humanos (Orto y Paramixovirus, Poxvirus,
Picornavirus) se transmiten por vía respiratoria, principalmente en ambientes
cerrados, y pueden formarse bioaerosoles de virus entéricos en las plantas de
tratamiento de aguas residuales. Por otro lado, pueden encontrarse virus de
vegetales en aerosoles procedentes de plantas infectadas. Se han descrito
numerosos géneros de algas aisladas del aire procedentes del suelo y de lagos
eutróficos. Así mismo, amebas de vida libre como Naegleria y Acanthamoeba
pueden ser aerolizadas de forma natural (lagos, manantiales termales) o artificial
(sistema de aire acondicionado o humidificadores) (Stetzenbach, 1997).

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 NÚMERO Y DISTRIBUCIÓN DE MICROORGANISMOS

El número de microorganismos de la atmósfera cambia según la altura (10-104

por m3), obteniéndose el más alto junto al suelo, sobre todo en los dos metros
inferiores, que constituyen el microclima del hombre, disminuyen hasta los 200
metros y luego se hacen más escasos hasta los 5.000 metros, su presencia es
rara hasta el límite de la troposfera y no se encuentran en la estratosfera. El
número de microorganismos del aire en las zonas pobladas depende de la
actividad en esa zona, tanto industrial o agrícola, como de los seres vivos y la
cantidad de polvo. El número de microorganismos es mayor en las zonas
pobladas y después en el mar, cerca de las costas. En las zonas desérticas no
hay más que lo que aportan los vientos de las zonas habitables próximas y en
los casquetes polares no hay nada. En las zonas con clima seco, el aire contiene
numerosos microorganismos y el número desciende después de la lluvia debido
a que ésta los arrastra por lavado del aire. Hay variaciones estacionales en el
número de microorganismos en la atmósfera. Los hongos son típicamente más
abundantes en verano que en el resto del año, mientras que las bacterias son
más abundantes en primavera y otoño debido a factores como la temperatura,
humedad relativa del aire, exposición a la luz solar, etc... (Bovallius et al., 1978).

 PERMANENCIA

El tiempo que permanecen los microorganismos en el aire depende de la forma,

tamaño y peso del microorganismo y de la existencia y potencia de las corrientes
aéreas que los sostengan y los eleven. Son factores adversos los obstáculos,

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que al oponerse a los vientos, disminuyen su velocidad y su potencia de arrastre,

y las precipitaciones, que arrastran al suelo las partículas suspendidas. La
sedimentación de los microorganismos por gravedad sólo es importante en el
aire en calma. Generalmente, hay demasiadas turbulencias para que esto
suceda, excepto en zonas de vegetación densa, donde la velocidad del viento
disminuye, o en condiciones estables durante la noche, cuando la capa laminar
limitante alcanza varios metros de altura.

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IV. MARCO EXPERIMENTAL

1. MATERIALES Y EQUIPOS

MECHERO DE BUNSEN TERMÓMETRO

PICETA PLACA PETRI

MUESTRA LEJIA

MEDIO AMBIENTE DEL LABORATORIO

AGAR PLATE COUNT PROBETA

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2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Fundir el medio de cultivo Agar Plate Count. Colocamos el Agar Plate

Count en un vaso de precipitado con agua de 250ml y lo sometemos a
calor hasta fundirlo (temperatura de 50° C A 60°C).

2. Colocar en la placa de 10-15 ml del medio de cultivo y dejar enfriar hasta

que este frio, evitar que se contamine durante el enfriamiento en todo
momento debe permanecer tapado.

3. Ubicar el lugar donde se realizará el plaqueo y de acuerdo al tipo de

bacteria a identificar colocar las placas y el tiempo necesario para
aerobios Mesófilos, mohos y levaduras. Dejar 15 minutos expuesta al
ambiente y luego cerrar. En mi caso, fue en el aula 101 de la Facultad
de Ingeniería Química.

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4. Identificar la placa y colocarlo en la incubadora para el crecimiento durante

24-72 horas a 37°C.

5. Después sacamos nuestra muestra de la incubadora y contamos colonias.

6. Una vez terminado el conteo, realizamos la asepsia de nuestra placa Petri,

metemos dicha placa en una bolsa ziplot y posteriormente en un baño
maría, aproximadamente 15 min a unos 80°C, esto hará que el contenido
de la placa se diluya, se deposite en la bolsa ziplot y podamos desecharlo.
Lavamos la placa Petri con lejía.

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V. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En nuestro caso solo encontramos 1282 colonias.

1282 𝑈𝐹𝐶/15𝑚𝑖𝑛

El resultado obtenido en el conteo nos indicó que el aula 102 (Fiq – Unac), al
menos la parte en la cual se expuso las muestras (parte delantera del aula) un
área no apta para realizar actividades.

-INFORME DE ENSAYO

 Análisis : Plaqueo ambiental

 Lugar : Aula 101 (FIQ - UNAC)
 Fecha de Muestreo : 23/09/2017

-RESULTADOS OBTENIDOS

Microorganismo Crecimiento Color Resultado(UFC/min)

Aerobios Satisfactorio Crema 1282 UFC/15min

mesófilos

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Mapeo de la zona en la que se colocó la muestra

Facultad de Ingeniería Química -

UNAC

Aula 102

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RESULTADOS EN EL LABORATORIO

ENSAYO/ AULA 101 (FIQ – LIMITE FORMA DE LA COLONIA

MANIPULADOR UNAC)
MAXIMO

PERMISIBLE

Aerobios Mesofilos 1282 UFC/15min 800 UFC/15min(1) Colonias filamentosas

Levaduras Colonias circulares

1. Ortiz G, Catalan V. Componentes biológicos ambientales. 2007;26–31.

Norma Usada Available from: www.riesgos-laborales.com

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VI. CONCLUSIONES

 El número de colonias de Aerobios Mesofilos, Mohos y Levaduras en

la placa petri fue 1282 ufc/15min.
 Comparando los resultados con el LMP que es de 800 UFC/15min se
puede decir que nuestra muestra: Aula 102 (FIQ – UNAC), es un área
no apta para realizar prácticas y actividades, ya que el resultado no
está dentro del LMP.

VII. RECOMENDACIONES

 Controlar correctamente el tiempo de exposición de la placa al ambiente

(15minutos), ya que este es un factor influyente en los resultados.

 Mantener una limpieza adecuada tanto en las superficies de trabajo como

en los utensilios que hay que emplear.

 No sacarnos en ningún momento ningún implemento personal porque

podríamos contaminar la muestra a tratar.

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VIII. ANEXO

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son los microorganismos patógenos que se encuentran en

ambientes donde se preparan alimentos?

Las bacterias son los patógenos más habituales en los alimentos, aunque no son
los únicos. Virus, mohos y levaduras también suelen frecuentar los alimentos.
Las bacterias pueden causar al consumidor infección e intoxicación, son dos
consecuencias diferentes. La infección se produce por la ingesta de alimentos
contaminados con bacterias vivas que entran en el huésped y provocan la
enfermedad. La intoxicación, en cambio, aparece cuando se ingieren alimentos
que antes se han contaminado con bacterias que producen toxinas, y estas
últimas son las que causan la enfermedad. Sin embargo, el denominador común
de todas ellas son los síntomas gastrointestinales que producen: dolor
abdominal, nauseas, vómitos, diarreas, calambres, fiebre, etc.

Entre las más habituales son las siguientes:

-Salmonella

-E. coli

-Listeria monocytogenes

-Campylobacter jejuni

-Staphylococcus aureus

-Shigella

-Yersinia enterocolítica

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2. ¿Cuáles son los LMP de los microorganismos que se encuentran

presentes en ambiente de trabajo en EEUU y la Comunidad Europea?

Diferentes organizaciones internacionales como la OMS y el CIBC (International

Council of Building Research), privadas como la ASHRAE (American Society of
Heating Refrigerating and Air Conditioning Engineers), y algunos países como
Suecia (The Swedish Council of Building Research), Estados Unidos, Canadá y
Australia han desarrollado guías y estandards de exposición. Referencias de la
necesidad de renovar el aire de ambientes cerrados con aire fresco se conocen
ya desde mediados del siglo XVIII recomendándose aportaciones de aire fresco
mínimas, por ocupante, para diluir las concentraciones de bioefluentes humanos
y evitar las molestias debidas a malos olores. En los años 70, ASHRAE publica
diversos trabajos recomendando una aportación de aire fresco mínima de 34
m3/h por persona para evitar los malos olores y un mínimo absoluto de 8.5 m3/h
por persona para mantener la concentración de dióxido de carbono por debajo
de 2500 ppm, que es la mitad del límite de exposición promedio permisible en un
ambiente laboral. En el más reciente ASHRAE Standard 62-1989 se recomienda
un mínimo de 25.5 m3/h por persona para aulas de clase, 34 m3/h para oficinas
y 42.5 m3/h para hospitales (zona de enfermos). Este estándar recomienda
también aumentar dichos volúmenes cuando hay problemas de mezcla del aire
en la zona de respiración o fuentes inhabituales de contaminación. Por otro lado,
no hay que olvidar que la finalidad primaria de un sistema de aire acondicionado
en un edificio de oficinas es proporcionar un buen nivel de confort térmico. Según
ASHRAE 55-1981, la temperatura interior debe mantenerse entre 20 y 24 ºC en
invierno y entre 23 y 26 ºC en verano. Este estándar no especifica la humedad
relativa, que se considera que debe estar entre el 20 y el 60% (preferiblemente
del 30 al 50%). En la Tabla 3 se presentan los valores indicados en la Ordenanza
General de Seguridad e Higiene en el Trabajo.

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