BALOTARIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA 2018 II PREGUNTAS DE CULTURA

GENERAL

1. Explique Ud. Cuál sería el uso en fisiología microbiana de la Microscopía de contraste de

fases, de campo oscuro, de luz fluorescente y microscopía de contraste de interferencia
diferencial, microscopía de fuerza atómica y microscopía confocal de barrido con láser.
Explique el fundamento de cada una de ellas.

● Microscopía de contraste de fases​: Nos permite la observación detallada de estructuras internas en

los microorganismos vivos. Sus ventajas son: no es necesario fijar el microorganismo, tampoco teñir
la muestra. El principio de la microscopía de contraste de fase se basa en la naturaleza ondulatoria de
los rayos de luz y en el hecho de que esos rayos pueden estar en fase o fuera de fase.Si el pico de la
onda de los rayos de luz de una fuente coincide con el pico de la onda de los rayos de luz de otra
fuente, los rayos interactúan para producir un reforzamiento (brillantes relativa). En cambio, si el pico
de la onda de otra fuente de luz coincide con la depresión de la onda de otra fuente de luz, los rayos
interactúan para producir interferencia (oscuridad relativa).En un microscopio de contraste de fase un
conjunto de rayos luminosos proviene de la fuente de luz.El otro conjunto proviene de la luz que se
refleja o difracta por una estructura particular de la muestra.Cuando los dos conjuntos de rayos de luz
-rayos directos y rayos reflejados o difractados se unen forma una imagen de la muestra en el ocular,
que contiene áreas que van desde relativamente luminosas (en fases) a matices de gris hasta negro
(fuera de fase).
● Microscopía de campo oscuro: ​Es utilizado para examinar microorganismos vivos que no son
visibles con un microscopio óptico común, que no pueden teñirse con los métodos estándares o que
resultan tan distorsionado por la tinción que sus características no pueden identificarse. El disco
bloque la luz que llegaría directamente al objetivo, en el que sólo ingresa la luz de fondo directa, la
muestra aparece iluminada contra un fondo negro, es decir el campo oscuro. El microscopio de campo
oscuro es utilizado para microorganismos no teñido suspendido en líquido.

● Microscopía de luz fluorescente: Se utiliza la capacidad de ciertas sustancias de absorber luz de

longitudes de onda corta (ultravioleta) y emitir una luz de una longitud de onda mayor (visible).La
muestra se tiñe con algunos colorantes fluorescentes denominados fluorocromos.

Al examinar mediante un microscopio de fluorescencia aparecen como objetos luminiscentes y

brillantes contra un fondo oscuro.
​● Microscopía de contraste interferencia diferencial: Estos utilizan diferencias en los índices de
refracción.Utiliza dos haces de luz en lugar de uno .Además, los prismas dividen cada haz, lo que
agrega colores contrastantes de la muestra .Las imagenes se muestran de colores brillantes y aparentan
ser tridimensionales.

● Microscopía de fuerza atómica: ​A la muestra se aplica una fuerza suave una sonda de metal y
diamante .A medida que la sonda se desplaza a lo largo de la superficie de la muestra se registran sus
movimientos y se produce una imagen tridimensional.Son utilizadas para formar imágenes de
sustancias biológicas (con un detalle casi atómico) y procesos moleculares(com ensambladura de la
fibrina, un componente de un coágulo sanguíneo).
● Microscopía confocal de barrido con láser​: Con está técnica se obtiene secciones ópticas de la
muestra para permitir un estudio tridimensional. y combina el microscopio de fluorescencia con una
imagen electrónica y puntos de luz suministrados.

Referencia: Tortora G., Funke B. y Case C. 2007. Introducción a la microbiología. 9a ed. -Buenos
aires:Médica Panamericana. 988 p
2. Explique las diferencias de pasteurización, UHT, tindalización, Esterilización húmeda y
esterilización seca. Indique sus parámetros de operación y en qué casos se deben usar.

● PASTEURIZACIÓN: La pasteurización es el proceso de calentamiento de alimentos

(generalmente líquidos), con el objeto de reducir los elementos patógenos que puedan existir. La
finalidad del tratamiento es la esterilización parcial de los líquidos alimenticios, alterando lo menos
posible la estructura física y los componentes químicos de éste. Es un proceso térmico aplicado a los
alimentos en el que se somete al alimento de interés a altas temperaturas por un intervalo corto de
tiempo. Se suele usar como parámetros de operación, temperaturas que van de 63°C a 68°C (el rango
puede variar dependiendo del tipo de alimento) por un espacio de 30 minutos, seguido de un proceso
de enfriamiento a 4°C. En la pasteurización el objetivo es solamente la disminución sensible de la
población de microorganismos buscando que alcancen niveles que no ocasionen intoxicaciones
alimentarias al consumirlas. Una desventaja de este proceso es el poco tiempo de vida de los
alimentos pues una vez abiertos se necesitan consumirlos casi en su totalidad. Otra desventaja del
proceso está la necesidad de contar con personal altamente cualificado para la realización de este
trabajo, que necesita controles estrictos durante todo el proceso de producción. En contraparte una
ventaja es que existe un cambio casi nulo de las propiedades organolépticas de los alimentos, es decir
el alimento pasteurizado tiene un sabor muy similar al del alimento crudo.

● PASTEURIZACIÓN UHT: ​Es un proceso de pasteurización a altas temperaturas por intervalos

cortos de tiempo. Como parámetros operacionales se suele tomar una temperatura de trabajo entre
130°C a 150°C durante 2 a 4 segundos seguido de un rápido enfriamiento hasta llegar a temperatura
ambiente. El proceso UHT o también denominada ultrapasteurización es un proceso que usa
tecnología de punta que permite eliminar la mayor parte de la flora bacteriana presente en los
alimentos sin alterar el contenido nutricional de los mismos. Los efectos de la ultrapasteurización
sobre la calidad nutricional de la leche, por ejemplo, son mínimos, no se presentan cambios en el
contenido graso, la lactosa o las sales, solo se presentan cambios marginales en el valor nutricional en
proteínas y vitaminas. La proteína más abundante en la leche, la caseína, no es afectada mayormente
por el tratamiento térmico; la desnaturalización ocurrida por causa del tratamiento térmico es mucho
menor que la causada por el mal manejo de la leche cruda que da paso a la acidificación de la leche
por la falta de frió y por el contrario, el tratamiento de ultrapasteurización facilita la digestibilidad de
algunas proteínas. Si bien es un proceso que produce alimentos de calidad y de vida prolongada en
anaquel, requiere un equipo complejo y una planta para empaque aséptico (materiales de empaque,
tanques, las bombas, etc.), además, operarios más experimentados y esterilidad en el empaque
aséptico. Además el sabor de los alimentos difieren un poco del alimento crudo (sin pasteurización)
debido a una caramelización parcial de los azúcares. (Zavala, 2009).

● TINDALIZACIÓN: Es un proceso que consiste en calentar los productos alimenticios de interés

de 90°C a 100°C durante media a una hora por tres días consecutivos. Entre cada etapa de
calentamiento se incuban a 37°C (para bacterias) con la finalidad de que se produzca una germinación
de las esporas residuales. Este calentamiento secuencial se debe a que en el proceso de calentamiento
se matan los microorganismos (células vegetativas), más no así a las esporas, las cuales germinan en
la etapa de incubación o reposo para luego se destruidas en el segundo calentamiento y/o en el
tercero, garantizando así la inocuidad del alimento. Es usado en alimentos cuya composición química
le impide soportar altas temperaturas durante tiempos prolongados. Sin embargo es una técnica que ya
va entrando en desuso debido al excesivo tiempo que requiere para su aplicación.

​ STERILIZACIÓN HÚMEDA​: Es un proceso de esterilización cuyo mecanismo de acción es la

E
desnaturalización de proteínas causada por la rotura de los puentes de hidrógeno de la estructura
secundaria y terciaria de las proteínas. Su efecto esterilizante se fundamenta en la acción del calor
transmitido por el vapor saturado a presión superior a la normal sobre los componentes celulares,
produciendo coagulación proteica, ruptura de DNA y RNA y pérdida de material de bajo peso
molecular, logrando así inactivación de los microorganismos. Estos efectos se deben principalmente a
dos razones: Primeramente el agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras
biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua. El agente esterilizante es el vapor de
agua saturado a una presión superior a la normal (el vapor de agua posee un coeficiente de
transferencia de calor mucho más elevado que el aire). El calor húmedo cuenta con la ventaja de que
puede penetrar más rápidamente que el calor seco porque las moléculas de agua conducen mejor el
calor que las moléculas de aire, motivo por el cual el calor húmedo es usado a temperaturas más bajas
y con un menor tiempo de exposición que el calor seco. Los parámetros críticos del proceso son
exposición en ciclos de vapor saturado son 134 ºC para un tiempo mínimo de 3 minutos y 121 ºC para
un tiempo de exposición mínimo de 15 minutos. Pueden ser utilizadas relaciones tiempo-temperatura
distintas de las mencionadas. Dentro de estos métodos podemos citar a: Tindalización (esterilización
fraccionada), agua hirviendo, pasteurización, olla de presión, esterilización por vapor a presión
(autoclave).
VENTAJAS: ​Es considerado el método más económico, rápido y sin efectos adversos por no dejar
residuos del agente esterilizante.
DESVENTAJAS:​ No es apto para aplicar en materiales que no soporten las condiciones del proceso.

● ESTERILIZACIÓN SECA: Es diferente al del calor húmedo. El calor seco (o desecación en

general) provoca desnaturalización de proteínas, lesiones por oxidación y efectos tóxicos por niveles
elevados de electrolitos. La acción letal es el resultado del calor transmitido desde el material con el
cual los microorganismos están en contacto, y no desde el aire caliente que los rodea. Existen tres
formas principales de esterilización por calor seco: flameado, incineración y mediante la utilización
del horno Pasteur. Para ello se necesita alcanzar mayor tiempo y temperatura que en el autoclave; los
parámetros críticos del proceso son temperatura y tiempo, siendo las relaciones sugeridas: a 160ºC
durante 2 horas, a 170 °C durante una hora, o 180°C durante 30 minutos. El motivo de estos
incrementos estarían dados porque la ausencia de agua disminuiría el número de grupos polares de las
cadenas peptídicas, lo que daría mayor estabilidad a las moléculas bacterianas, por lo que se requeriría
mayor energía para abrirlas.
​VENTAJAS: Permite esterilizar vaselinas, grasas y polvos resistentes al calor, que no pueden ser
procesados por calor húmedo.
DESVENTAJAS: Requiere largos periodos de exposición, es un proceso dificultoso de certificar o
validar, acelera el proceso de destrucción del instrumental.
 Referencia: José Mauricio, Zavala Pope. Cambios organolépticos y nutricionales producidos por los
tratamientos térmicos durante el procesamiento de leche. Peruláctea. Ministerio de Agricultura del
Perú. 2009 http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/tecnofarma/wp-content/uploads/2013/08/
Esterilizaci%C3%B3n-por-calor.pdf

3. ¿Cómo funciona la esterilización por filtración, que elementos se requieren para su uso, que
se puede esterilizar con estos equipos y cuánto cuesta esterilizar una solución?

Fundamento de la esterilización por filtración: ​La esterilización por filtración se logra por el paso
de un líquido o un gas a través de un material capaz de retener los microorganismos presentes.

​ lementos para su uso :Para la filtración esterilizante se pueden usar combinaciones de un filtro de
E
profundidad con un filtro de superficie que tenga un tamaño de poro de 0.22 µm. La mayor parte de
los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y luego se manipulan asépticamente al
ensamblar el equipo.

Existen diferentes equipos de filtración, la selección del mismo está determinado principalmente por
el volumen de líquido a filtrar. Así tenemos equipos de filtración para pequeños volúmenes, los cuales
generalmente se esterilizan por separado y se ensamblan asépticamente en el momento de la filtración.
Cuando se requiere filtrar volúmenes mayores, el filtro de membrana se dispone en un cartucho y se
coloca en un estuche de acero inoxidable. También existen pequeños cartuchos de plástico que se
pueden esterilizar después de la inserción de un filtro de membrana; con estos dispositivos la filtración
se hace utilizando una jeringa que permite forzar el líquido a filtrar a través del filtro hasta un
recipiente estéril.
¿Qué puede esterilizarse con este método?​:

Suele ser empleada para materiales sensibles al calor, tales como ciertos medios de cultivo, azúcares,
soluciones de antibióticos y otros medicamentos, etc.

4. En un cuadro presente lo siguiente:

 FACTORES EXTERNOS O DETERMINANTES AMBIENTALES
Microorganismo
T° pH óptimo Aw Oxígeno Medio de cultivo
optima

Gram negativas
Klebsiella 30-37 7 0.97 Aerobio Agar MacConkey
pneumoniae
Salmonella typi 35-37 7-7.5 0.98 Anaerobio facu. Agar Hectoen
Yersinia aero y ana Agar XLD
enterocolitica 25-32 7.6 0.99 Anaerobio Fac. Agar Sangre
Vibrio cholerae 37 7-8.0 0.98 Anaerobio F. Agar Hectoen
Salmonella
paratyphi 37 -- 0.95 Aerobio o ana.f Agar Nutritivo
Escherichia coli 20-40 6-7.0 0.91 Aerobio Agar MacConkey
Pseudomona 36 6.6-7 0.91
aeruginosa
Helicobacter pylori 37 5.5-8 0.98 Microaerofilo Agar biomerieux
Salmonella
enteritidis 35-37 7-7.5 0.98 Anaerobio.f Agar Hektoen
Campylobacter 37-3 0.9 Microaerofilo Agar Sangre
jejuni

Gram positivas Agar Schaedler

Clostridium tetani 37 7-7.4 0.96 Anaerobio
Streptococcus 37 9.6 0.995 Anaerobio. F Agar sangre
pyogenes
Listeria 0.97 Anaerobio F Agar bilis esculina
monocytogenes 30-37 6-8.0
Bacillus cereus 30-40 6-7 0.93 Aerobio. F Agar nutritivo
Mycobacterium 37 6.5-6.8 0.98 Aerobica estric. Agar sangre
tuberculosis 25-35 Anaerobio
Clostridium -- 0.97 Agar sangre
botullinum 35-37 0.85
Staphylococcus 7-7.5 Anaerobio f. Agar nutritivo
aureus 37
Streptococcus 35-37 7.8 0.99 Anaerobio f. Agar sangre
pneumoniae
Bacillus anthracis -- 0.9 Aerobio Agar sangre
28-35 0.9
Bacillus subtilis -- Aerobio Agar nutritivo

5. Explique a que se denominan medios de cultivos comunes, selectivos, diferenciales, medios de

almacenamiento, medios de propagación, medios de producción, medio mínimo de sales, medio
basal, medio basal de glucosa y agente de disolución. Con un ejemplo explique para Bacillus
subtilis cuales serían esos medios. Finalmente explique cómo se prepara un medio de cultivo
sólido.
​MEDIOS COMUNES: Son aquellos medios apropiados para el cultivo y mantención de la mayoría
de las bacterias. Sirven de base para la preparación de los medios especiales. Ejemplo: Caldo común,
Agua peptonada, Agar nutritivo, etc.

MEDIOS SELECTIVOS: Generalmente el microorganismo patógeno causante del cuadro infeccioso

que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que convive con otras especies sin
interés diagnóstico. Así por ejemplo es frecuente que las fecas, orina, exudados, alimentos, agua, etc.
estén altamente contaminadas con bacterias saprófitas que por su desarrollo exuberante en los medios
de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran la presencia del agente patógeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies bacterianas y a la
vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es aislamiento y diagnóstico de las bacterias
con facilidad y rapidez. Estas características se obtienen por la adición de sustancias tales como
colorantes de anilinas, sales biliares, antibióticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina,
etc.
MEDIOS DIFERENCIALES: ​Son medios comunes o mejorados, con adicción de ciertas sustancias
que ponen de manifiesto determinadas propiedades bioquímicas, inherentes a algunas especies
bacterianas, como por ejemplo: producción de gas, H2S, de ácidos, de sustancias alcalinas, acción
proteolítica, acción lipolítica, etc. Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rápidamente una
especie microbiana de otra semejante; por este motivo se denominan medios indicadores o
diferenciales. Ejemplo: Agar Baird Parker, Agar Rambach, etc.

MEDIOS DE ALMACENAMIENTO: El medio de almacenamiento puede referirse a un medio de

cultivo usado en el muestreo de microorganismos, cuya función es: Almacenar temporalmente las
muestras que son transportadas al laboratorio para su cultivo, mantener la viabilidad de los
microorganismos sin alterar su concentración y composición, y mantienen regulada la falta de
carbono, nitrógeno y factores de crecimiento con el fin de evitar la multiplicación microbiana.

MEDIOS DE PROPAGACIÓN: Se puede entender un medio de propagación microbiológica, en un

contexto de crecimiento microbiano no controlado, como todo medio que reúne las condiciones de
actividad de agua, humedad, nivel de oxígeno, pH y temperatura que permiten el crecimiento. Ya sea
el aire, agua, partículas de suelo, alimentos, cavidades, fluidos corporales, etc.

MEDIOS DE PRODUCCIÓN​: Este tipo de medio de cultivo es empleado en un bioproceso para la

generación de biomasa o algún compuesto de interés mediante el cultivo de microorganismos en
bioreactores. Ya que es un cultivo a escala industrial, es fundamental que el medio provea los
requerimientos nutricionales de macro, micronutrientes y factores de crecimiento pero también se
deben tomar en cuenta el costo, la disponibilidad y estabilidad de los componentes. Pudiendo ser
incluso efluentes líquidos o sólidos que son subproductos de otros procesos industriales.

MEDIO MÍNIMO DE SALES​: Es un medio químicamente definido de uso general para el cultivo
de bacterias poco exigentes. Ingredientes: peptona de caseína 5g/L, NaCl 8g/L, extracto de carne
3g/L, agar 15g/L y pH 6.5-7
 MEDIO BASAL DE GLUCOSA: El medio basal suplementado con un carbohidrato adecuado, se
utiliza para determinar las actividades metabólicas oxidativas y fermentativas de los bacilos gram
negativos. Fórmula por litro de agua purificada: Digerido pancreático de caseína 2g, Cloruro sódico
5g, fosfato dipotásico 0.3g, agar 2.5g, azul de bromotimol 0.03g y 10g de glucosa.
AGENTE DE DISOLUCIÓN: Solución usada para diluir medio concentrados (agua, suero
fisiológico, buffer citrato, fosfato, agua peptonada al 0.5%). En el procedimiento estándar donde se
diluye a razón de 1 por 10, es decir 10ml(g) del producto en 90ml del líquido diluyente o 1ml (g) del
producto en 9ml de la solución diluyente. En el procedimiento simplificado se diluye a razón de 1 por
100, o sea 1 ml (g) del producto en 99 ml de la solución diluyente.

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO: tienen generalmente agar–agar como

agente solidificante, espesante o gelificante. El agar-agar es una sustancia hidrofílica de carácter
coloidal procedente de diversas especies de algas marinas, especialmente del género Gelidium, que
tiene la propiedad de formar un gel. Químicamente el agar-agar es un polisacárido de cadena larga,
dependiendo de su tamaño el poder gelificante. El agar-agar se expende en forma granulada o en
polvo, es insoluble en agua fría, se disuelve solamente a temperatura de ebullición, se mantiene en
forma viscosa a 60–80 °C y solidifica en forma de un gel estable a 40–45 °C. Resiste perfectamente la
esterilización a 121 °C y por su capacidad de retener agua no se deshidrata fácilmente, lo que permite
almacenar los medios por un largo período de tiempo a 5 °C.
Referencia:https://books.google.com.pe/books?id=CZKV2I9DDWcC&pg=PA84&dq=agua+peptonad
a&hl=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwi4i4v6t73fAhUGDpAKHc6EADcQ6AEIKzAB#v=onepage&q=
agua%20peptonada&f=false

6​ . Desarrolle el protocolo de aislamiento de Bacillus sp., Pseudomonas sp., E. coli y S. cerevisiae

y cómo puede confirmar que esta frente a estos Géneros de microorganismos.
​Se realizó primero cuantificación en medio SPC o Agar placa de conteo estándar, mediante el método
de cuantificación de células viables en series de diluciones decimales y siembra en superficie, por
duplicado. Las placas se incubaron a 37°C por 24 a 72 horas Posteriormente se seleccionaron los
diferentes tipos de colonias y se sembraron por estriado y agotamiento en agar nutritivo para la
obtención de cultivos puros.
6.1.2 Descripción macroscópica Se describió la morfología de la colonia, tamaño, color, borde
acompañada de registros fotográficos. 6.1.3 Descripción microscópica Se aplicó la coloración de
Gram y coloración para endosporas bacterianas (Shaeffer-Foultun), para determinar tipo de pared y la
morfología de las células bacterianas, así como el tipo de agregación, mediante observación
microscópica a 100x y 1000x. 6.2 Caracterización Bioquímica A cada cepa se le realizo). Se
seleccionaron las siguientes pruebas: Oxidasa, Catalasa, fermentación de Glucosa Lactosa, Maltosa,
Manitol, Arabinosa. Xilosa, Hidrólisis de Caseína, Hidrólisis del almidón, crecimiento en NaCl al 7%,
asimilación de Citrato, SIM (H2S, Indol, Movilidad), Voges-Proskauer, (producción de acetoina o 2,3
butanodiól), reducción de Nitratos, Ureasa, licuefacción de la gelatina, para determinar el género de
los microorganismos aislados.

7. Cómo se puede hacer crecer bacterias anaerobias estrictas. Explique detalladamente que
elementos se requieren y cuánto cuesta hacer crecer microorganismos en estos sistemas.
​Para el transporte de las muestras desde el punto de extracción hasta el laboratorio se pueden usar
tubos que contienen dióxido de carbono o nitrógeno atmosférico en lugar de oxígeno. Estos son
denominados tubos gaseados y contienen un indicador de aerobiosis. Estos gases se inyectan por un
tapón de goma luego de eliminar todo el aire de la jeringa y aguja. Las muestras no pueden estar bajo
refrigeración porque podría oxigenar la muestra. Los medios de cultivo ideales para cultivar bacterias
anaerobias son Agar Sangre y Tioglicolato. La muestra debe mantenerse protegida del oxígeno, pues
es tóxico para este tipo de bacterias. Se puede optar por algunos de estos sistemas: jarras anaeróbicas,
bolsas de anaerobiosis y la cámara de anaerobiosis. El método más viable desde el punto de vista
económico son los dos primeros y tienen un rendimiento similar al de la cámara de anaerobiosis. El
método más utilizado para la generación de un ambiente anaerobio es el de las jarras de anaerobiosis.
Consiste en una jarra de plástico con una tapa que se cierra herméticamente. Para asegurar el
mantenimiento de un ambiente anaerobio hay dos métodos. Primero, y es la forma más sencilla es el
uso de un sobre que genera hidrógeno y dióxido de carbono que es producido por la presencia de agua
o por la humedad del medio de cultivo. El segundo método es la generación de vacío y sustituyéndolo
por otro gas como el nitrógeno. Además se utiliza un indicador de color como el papel impregnado
como el azul de metileno, el cual se mantiene incoloro en ausencia de oxígeno. El otro método es el de
las bolsas de anaerobiosis. Consiste en una bolsa transparente, un gas impermeable y un indicador de
color. Este sistema es muy práctico y económico. Además se puede observar el crecimiento
microbiano de manera directa sin exponer las muestras al ambiente. Y se pueden utilizar para el
transporte de muestras al laboratorio.
Referencia: Rivas C., Mota M. 2002. Bacterias anaerobias. Microbiología médica 4ta edición. pp
355-380.

8. Explique detalladamente cómo se desarrolla la tinción diferencial de Gram y tinción de

endosporas.
TINCIÓN GRAM
Para la realización de una tinción de gram se utilizan dos colorantes. Uno de carácter primario, como
es el cristal violeta, y otro de contraste, como la safranina. También se utiliza un mordiente para la
safranina, como es el lugol, y un decolorante como el alcohol/acetona. Esta tinción pone de manifiesto
la afinidad tintorial de la pared, la cual depende de su composición para que el microorganismo sea
considerado gram+ o gram-. Los microorganismos grampositivos se diferencian de los gramnegativos
en que tienen más mureína, una pared celular monoestratificada y presencia de ácidos teicoicos. Los
gram tienen menos mureína, una pared celular biestratificada y no tienen ácidos teicoicos.
1. Prepare una lámina fija de cada uno de los cultivos microbianos proporcionados y tres láminas fijas
con la mezcla de estos.
2. Agregue cristal violeta y deje que actúe por 30 segundos.
3. Enjuague con agua.
4. Cubra la película teñida con lugol y deje que actúe por 2 minutos.
5. Enjuague con agua.
6. Agregar decolorante: alcohol cetona (6 a 7 gotas).
7. Retira todo el exceso de alcohol enjuagando inmediatamente.
8. Agregar el colorante de contraste: Safranina por 1 minuto.
9. Lavar la muestra.
10. Secar la muestra
11. Agregar aceite de inmersión y observar a 1000X
TINCIÓN DE ENDOSPORAS La tinción ácido-alcohol resistente, sirve principalmente para
clasificar micobacterias y actinobacterias, que tienen un alto contenido en lípidos y ácidos micólicos y
que no pueden ser calificadas por la tinción de Gram, esta tinción también se utiliza para identificar
cepas patógenas del género Nocardia. La tinción de esporas se utiliza para teñir las estructuras de
resistencia llamadas endosporas bacterianas. Una endospora es una estructura especial, resistente y
latente que se forma dentro de una célula y que protege a una bacteria de las condiciones ambientales
adversas. Cuando una bacteria percibe condiciones ambientales desfavorables, comienza el proceso de
esporulación, el cual llega a durar cerca de 10 horas, luego la endospora es lanzada cuando se degrada
la célula vegetativa. (Gerard J. Tortora, 2007) La pared celular de los bacilos ácido alcohol resistentes
(BAAR) está compuesta por una gran cantidad de lípidos tanto libres como covalentemente unidos:
los ácidos micólicos y los micósidos. La alta proporción lipídica otorga a estas bacterias una gran
hidrofobicidad, con la consiguiente tendencia a formar agregados y la dificultad para captar colorantes
que hace necesaria la utilización de métodos drásticos. (Stanier, 1991)

​TÉCNICA DE DÖRNER: ​Para la coloración de esporas según Dörner, se colorea la espora con
carbofucsina, se sensibiliza en baño María y luego se extiende la nigrosina o tinta china, ésta extraerá
el colorante de todas las estructuras celulares excepto de las esporas y por consiguiente, se verán las
esporas rojas, el resto de bacteria incolora y el fondo oscuro.
1. Haga una suspensión concentrada de organismo de 2 o 3 gotas de agua destilada contenida en un
tubo pequeño de prueba.
2. Añada igual volumen de carbolfucsina y coloque el tubo en u recipiente con agua hirviendo por 10
minutos.
3. Transfiera una gota de suspensión de células hervidas a una lámina portaobjetos. 4. Agregue una
gota de nigrosina y extienda la mezcla con ayuda de la otra lámina hasta obtener una delgada película
(frotis). 5. Seque la lámina al aire. 6. Agregar aceite de inmersión y observar a 1000X.

TÉCNICA DE SCHAEFFFER Y FULTON:

1. Prepare una muestra fija de microorganismo proporcionado.
2. Agregue a la preparación carbolfucsina hasta cubrirla totalmente.
3. Con ayuda de una pinza, caliente la lámina con el colorante haciéndola pasar ligeramente por la
llama del mechero hasta que observe el desprendimiento de vapores.
4. Mantenga esta condición durante tres minutos, evitando que el colorante se seque o entre en
ebullición.
5. Lave con alcohol acido (decolorante) hasta que este resulte incoloro el líquido lavado.
6. Enjuague con agua.
7. Cubra la preparación con unas gotas de verde malaquita dejando que actúe por dos minutos. 8.
Enjuague con agua. 9. Seque la lámina al aire. 10. Agregar aceite de inmersión y observar a 1000X.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
● INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA, Gerard J. Tortora etal, edición medica
panamericana, 2007, pp68-71
● STANIER, R. Y.; INGRAHAM, J. L.; WHEELIS, M. L Y PAINTER, P. R. 1991. Microbiología.
Editorial Reverté.

9. Explique cómo se usan los antibióticos en los medios de cultivo. La concentración de uso y el
fundamento del uso para bacterias Gram positivas y negativas.
Los medios de cultivo son medios ricos en ciertos nutrientes o son buenos sustratos para el
crecimiento de una gran diversidad de microorganismos. Sin embargo, en ciertos cultivos, se desea
aislar microorganismos específicos, por lo que se emplea el uso de antibióticos para evitar la
contaminación del medio con microorganismos no deseados. Dependiendo de la diana de los
microorganismos, se utilizan ciertos antibióticos. Existen muchos requerimientos básicos para el
empleo de dichos compuestos:
● Los antibióticos deben eliminar los microorganismos contaminantes. Se prefiere el uso de
bactericidas, los cuales ejercen una acción letal sobre el microorganismo, a los bacteriostáticos, los
cuales inhiben de manera transitoria, el crecimiento bacteriano.
● Los antibióticos no deben inhibir el metabolismo ni el crecimiento de los microorganismos que
deseamos cultivar en el medio.
● Los antibióticos nos deben brindar protección por todo el proceso experimental.
● Los antibióticos no deben generar interacción con otros compuestos en el medio de cultivo y deben
ser estables en el medio ante las condiciones a las que puedan ser impuestas los medios de cultivo.
● Los antibióticos deben ser económicos y no deben presentar excipientes, como buffers o ácidos
orgánicos, que puedan generar efectos adversos al metabolismo y al crecimiento. Para esto, se
emplean antibióticos con la mayor pureza posible. Los antibióticos varían dependiendo de su acción
en los microorganismos, en este caso, en las bacterias. Dentro de las dianas de los antibióticos, están
la síntesis, el transporte de precursores y la organización estructural de la pared celula; la síntesis de
proteínas; el metabolismo de los ácidos nucleicos; ciertas rutas metabólicas; e incluso, la inhibición de
ciertas rutas de resistencia a algunos antibióticos, como los que presentan acción 𝛃-lactamasa. Una
condición determinante en el uso de antibióticos es si se trata de grampositivas o gramnegativas, ya
que ambas presentan diferencias a nivel estructural muy remarcadas, lo cual lo vuelve una principal
diferencia para el uso de diferentes antibióticos. La pared celular protege la integridad
anatomofisiológica de la bacteria y soporta su gran presión osmótica interna, el cual se evidencia
mayormente en las bacterias grampositivas. La ausencia de esta estructura condicionan la destrucción
del microorganismo, inducida por el elevado gradiente de osmolaridad que suele existir entre el medio
y el citoplasma bacteriano. Los antibióticos, que inhiben la síntesis de la pared, necesitan para ejercer
su acción que la bacteria se halle en crecimiento activo, y para su acción bactericida requieren que el
medio en que se encuentre la bacteria sea isotónico o hipotónico, lo que favorece el estallido celular
cuando la pared celular se pierde o se desestructura. Esos antibióticos suelen ser más activos sobre las
bacterias grampositivas, por su mayor riqueza en peptidoglucano. (Calvo & Martínez, 2009; Perlman,
1979).
10. Detalle experimentalmente como se construye una curva de crecimiento en bacterias o
levaduras. Explique para que puede servir una curva de calibración.

Para la construcción de la curva de crecimiento de bacterias o levaduras, se empieza normalmente,

por entender y definir el crecimiento de un aislado microbiano en particular, esto quiere decir conocer
su funcionamiento y tiempo de vida, por ejemplo, su tiempo de adaptación, crecimiento exponencial,
muerte. Todo empieza con la colocación de las células en un medio líquido en el que se controlan los
nutrientes y las condiciones ambientales. Si el medio suministra todos los nutrientes necesarios para el
crecimiento y los parámetros ambientales son óptimos, el aumento en el número o la masa bacteriana
se puede medir en función del tiempo para obtener una curva de crecimiento. Se pueden observar
varias fases de crecimiento distintas dentro de una curva de crecimiento. Estos incluyen la fase de
retraso, la fase exponencial o de registro, la fase estacionaria y la fase de muerte. Partimos de un
inóculo inicial, por ejemplo 104 Ufc/ml que será colocado en nuestro medio de cultivo (tubo/matraz
con los nutrientes necesarios). Sabemos que este microorganismo tiene un tiempo para adaptarse y
sintetizar proteínas para la obtención de alimentos, taza de crecimiento cero. Para la fase exponencial,
se toman varias muestras, por ejemplo, 1ml cada cierto, para poder hacer las mediciones del número
de individuos. Sucesivamente se llegará a la fase estacionaria y fase de muerte. Para hacer el recuento
podemos usar, por ejemplo, una cámara de Neubauer o conteo en placas. Para graficar la curva de
crecimiento necesitamos los datos de número de individuos y el tiempo transcurrido en cada
medición. Como el crecimiento bacteriano es exponencial, vamos a obtener una curva exponencial; y,
si transformamos los datos de número de células usando la escala logarítmica obtenemos una recta
cuya pendiente es la tasa de crecimiento

Una curva de calibración ​se realiza de manera que relacione medidas directas como recuento en
placa o microscopía- Neubauer, con las indirectas como la turbidez. Con esta información y las
absorbancias de las diluciones, se hace una curva de calibración. Teniendo esta curva, nos serviría
para poder relacionarla con otras muestras, determinando las UFC/ml de muestra a partir de leer la
absorbancia de las mismas

11. Explique detalladamente los métodos directos e indirectos que existen para estudiar las
curvas de crecimiento bacteriano.
MEDIDA DEL CRECIMIENTO DE POBLACIONES BACTERIANAS ​El crecimiento de una
población o cultivo bacterianos se puede expresar en función de: · Aumento de masa del cultivo ·
Aumento del número de células Ambos tipos de expresiones son equivalentes entre sí en cultivos que
estén en crecimiento balanceado o equilibrado (en el que todos los componentes aumentan una misma
proporción por unidad de tiempo).
1. MEDIDA DE MASA CELULAR A. MÉTODOS DIRECTOS En estos métodos se requieren
preparaciones limpias, sin partículas extrañas.
1) Determinación del peso húmedo: ​Se tara un tubo de centrífuga -Se centrifuga el cultivo y se
elimina el sobrenadante -Se determina el peso del sedimento *Inconvenientes: grandes errores, debido
al líquido intercelular retenido, cuya cuantía depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la
cepa, intensidad del empaquetamiento, etc.
 2) Determinación del peso seco: Como el método anterior, pero el sedimento se seca antes de ser
pesado (105ºC, toda la noche), hasta obtener un peso constante. Las medidas de peso seco suelen
representar el 10-15% de los valores de peso húmedo. *Inconvenientes: método tedioso (requiere
mucho tiempo) y con bastantes errores: es difícil pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas
habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas 5x109 bacterias.
​3) Determinación de un componente característico: Peptidoglucano, ADN, ARN, proteínas, ATP,
clorofilas en organismos fotosintéticos, etc.
*Comentarios: se suele usar en bacterias para las que otros métodos más fáciles dan errores debido a
que forman grumos no dispersables, crecen en filamentos, etc. Se emplean en determinaciones de
crecimientos en ambientes naturales.

B. ​MÉTODOS INDIRECTOS
1) ​Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito por unidad de tiempo.​
Ejemplos: consumo de oxígeno (QO2 ) y consumo de carbónico (QCO2 ), determinados por el
respirómetro de Warburg. Producción de ácidos.
2) Métodos turbidimétricos (ópticos). Son muy usados en la práctica cotidiana del laboratorio. La
base común de estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a
través de un cultivo bacteriano. Las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier
partícula pequeña suspendida en agua (efecto Tyndall). La dispersión de la luz es, dentro de ciertos
límites, proporcional a la masa del cultivo.
​a) Espectrofotómetro: Mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia (una medida de la luz
transmitida a través de la suspensión). Hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores
de A con la masa bacteriana en una muestra problema.
*Comentarios: La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño de la
partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnica aumenta pues a longitudes de
onda cortas. La proporcionalidad entre A y masa bacteriana sólo es válida para >107céls/ml.
b) Nefelómetro: ​Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor está situado en ángulo
recto respecto de la dirección de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la luz dispersada
directamente por la preparación. Posee mayor sensibilidad que el espectrofotómetro.

2. MEDIDA DEL NÚMERO DE INDIVIDUOS A. MÉTODOS DIRECTOS

1) Cámara de recuento de Petroff-Hauser o Neubauer: Consiste en un portaobjetos especial con

una graduación en superficie y unas medidas muy concretas:
- excavación con 0.02 mm de profundidad; - área de 1 mm2 , dividida en un retículo de 25 cuadrados
grandes; - cada cuadrado grande está subdividido a su vez en 4x4 = 16 cuadrados pequeños.
- O sea, la muestra se distribuye en 16 x 25 = 400 celdillas (cuadros pequeños). La muestra, una vez
dispensada entre el porta y el cubre, se deja reposar sobre la plataforma del microscopio durante unos
minutos, y se cuenta el número de células en varias celdillas (normalmente en 16, equivalentes a uno
de los cuadros grandes). Se anota el número n de células observadas en esas 16 celdillas. Entonces, la
concentración celular es fácil de establecer: n x 25 x 50 x 1000 = concentración en células/ml.
*Ventajas: es un método muy rápido.
*Inconvenientes: sólo sirve para suspensiones relativamente concentradas (>10x106 céls./ml). Por
debajo de este valor el número de células vistas en el campo del microscopio es muy pequeño y poco
significativo estadísticamente. En bacterias móviles, hay que inmovilizarlas previamente, con una
mezcla de alcohol y agua.
2) Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter): S ​ e hace pasar una suspensión microbiana
por un tubo capilar, entre los dos polos de una corriente eléctrica. Cada vez que por un orificio (30 m
diámetro) pasa una partícula (p. ej., bacteria) se interrumpe la corriente, lo cual es recogido por un
dispositivo de registro electrónico, que detecta el número y el tamaño de las partículas que van
pasando. (El tamaño detectado es función de la intensidad del pulso de voltaje al paso de la partícula).
Comentarios: hay que usar suspensiones absolutamente libres de partículas extrañas (las pequeñas
serían contabilizadas erróneamente como bacterias, y las mayores pueden obturar el orificio del
aparato).
B. MÉTODOS INDIRECTOS
1) Recuento de viables en placa: Los métodos de recuento de número de células vistos hasta ahora
(los directos) no distinguen entre células vivas y muertas. En muchos casos conviene contar las
células vivas, y esto en laboratorio se suele hacer mediante el recuento de viables. (Una célula se
define como viable cuando, colocada en un medio adecuado, es capaz de dividirse y dar
descendencia). El método habitual de lograr esto es sembrar pequeñas alícuotas de diluciones
adecuadas de un cultivo original sobre placas de Petri con medio sólido (con agar). Cada célula viable
dará origen a una colonia visible después del tiempo adecuado de incubación. Contando las colonias
visibles, teniendo en cuenta la dilución de la que proceden y el volumen de alícuota utilizado, es fácil
deducir el número de células viables en la suspensión original.
*Precauciones:
-Para minimizar los errores estadísticos de muestreo, se recomienda sembrar 5 placas de cada
dilución; -Se deben usar pipetas nuevas en cada dilución;
-Contar las placas donde existan entre 50 y 300 colonias.
-Como no se puede garantizar que cada colonia no proceda de más de un individuo (y esto es
especialmente cierto para bacterias que forman agrupaciones de 2 o más células), el recuento se
refiere no a “células viables reales” sino a “unidades formadoras de colonia” (UFC). Por lo tanto, una
UFC corresponde, como mínimo, a una bacteria, pero sobre todo en bacterias con agrupaciones, la
medida por siembra en placa infravalora el número real de individuos, porque cada UFC puede
corresponder a dos o más individuos que estaban juntos al ser sembrados en la placa.

2) Recuento sobre filtros Se usa para suspensiones diluidas de bacterias. Se hace pasar un gran
volumen de suspensión a través de una membrana de nitrocelulosa o de nylon estériles (con un
diámetro de poro que retiene las bacterias pero permite el tránsito de sustancias). Posteriormente, el
filtro se deposita sobre la superficie de un medio de cultivo sólido. Las colonias se forman sobre el
filtro a partir de las células retenidas. Dichas colonias se cuentan, deduciéndose la concentración
original de viables en función del volumen de suspensión que se hizo pasar por el filtro.

Referencia: Iáñez, E. (2005).Ciclo celular y crecimiento. Recuperado desde:

https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm

12. Explique experimentalmente como haría para estudiar el CRECIMIENTO DIAÚXICO en

E. coli​.

El crecimiento diaúxico ,describe el crecimiento de un microorganismo en dos fases. Este fenómeno

es observado cuando un microorganismo tiene a su alcance más de un azúcar o nutriente y, en lugar de
metabolizarlos simultáneamente, los consume en forma secuencial, obteniéndose dos fases de
crecimiento. En la primera fase, el microorganismo consume aquel nutriente para el cual su
metabolismo le permite crecer a una mayor velocidad, dejando una segunda fase de crecimiento más
lento. En la Figura 1, se observa el cultivo de E. coli en distintas parejas de fuente de carbono, se
observa que en algunas de ellas los microorganismos crecen de forma diaúxica

Crecimiento de E. coli en distintos pares de fuentes de carbono

Fuente : B. Görke and J. Stülke, “Carbon catabolite repression in bacteria: many ways to make the
most out of nutrients.,” Nat. Rev. Microbiol., vol. 6, no. 8, pp. 613–24, Aug. 2008

En presencia de glucosa y lactosa, el represor lac es liberado del operador, ya que el inductor
(alolactosa) está presente.Los niveles de AMPc son bajos porque la glucosa está en el medio ; por esto
, la mayor parte de CAP permanece inactiva y no puede unirse al ADN para la transcripción de los
genes necesarios en el metabolismo de lactosa como fuente de carbono.Por ello , la transcripción del
operón lac se da en niveles bajos.

Imagen modificada de “regulación génica procariota”.OpenStax College, Biologia (CCBY 4.0)

En ausencia de glucosa y presencia de lactosa , represor lac es liberado del operador ya que inductor
(alolactosa) está presente. Los niveles de AMPc son altos porque no hay glucosa en el medio, así que
CAP activada, ayuda a que la ARN polimerasa se una al promotor y aumentan los niveles de
transcripción del operón lac.
imagen modificada de “regulación génica procariota”.OpenStax College, Biologia (CCBY 4.0)
Para estudiar el crecimiento diaúxico experimentalmente, se inicia con el crecimiento de E. coli en un
medio de cultivo con dos fuentes de carbono (glucosa y lactosa). Se empieza a medir desde el minuto
cero la absorbancia de este medio a 600 nm , asimismo , se analiza la cantidad de glucosa presente en
el medio, con una prueba de glucosa oxidasa midiendo la absorbancia 500 nm .La concentración de
glucosa del medio se calculará con una ecuación : C(glucosa)= Absorbancia (500 nm)*3.8.
Periódicamente se evalúa estos parámetros en intervalos cortos de minutos.Posteriormente se realiza
una curva de crecimiento con estos datos (densidad óptima del medio de cultivo, concentración de
glucosa) a lo largo del tiempo. Se espera tener una curva de crecimiento primaria, en donde se refleje
la disminución de concentración de glucosa hasta un determinado tiempo y la curva tenga un
crecimiento exponencial hasta llegar a una pequeña fase estacionaria que separa la primera fase de la
segunda , la cual es el tiempo que tarda E.coli en expresar los genes para el catabolismo de la lactosa,
momentos antes del agotamiento de la glucosa , Luego se observaría la segunda fase exponencial,
donde E.coli emplea el disacárido lactosa como fuente de carbono. Durante la curva de crecimiento ,la
concentración de glucosa del medio disminuye , teniendo en cuenta que no es necesario que la glucosa
se agote totalmente en el medio para iniciar la expresión génica del operón lac.
Referencia: Benno Müller-Hill . 2011. The lac Operon : Una breve historia de un paradigma genético

13. Explique ud. Experimentalmente cómo haría para estudiar el efecto de la salinidad, presión
y fuerza magnética en el crecimiento de Bacillus subtilis​.
El crecimiento bacteriano puede ser afectado grandemente por las cantidades de agua que entran o que
salen a la célula. Cuando el medio que rodea a un organismo es hipotónico (contiene pocos solutos)
resulta una presión osmótica mayor dentro de la célula, excepto para algunas especies marinas que no
son afectadas. La pared celular de la mayoría de las bacterias es tan fuerte y rígida, que un
hinchamiento celular ligero generalmente es inaparente. Sin embargo, cuando las bacterias son
colocadas en una solución hipertónica (contiene más cantidad de solutos) su crecimiento puede ser
inhibido considerablemente. El grado de inhibición dependerá del tipo de soluto y de la naturaleza del
organismo; el citoplasma se deshidrata y el agua sale de la célula causando una plasmolisis. En estos
casos la célula es inhibida en ausencia de agua celular suficiente. En casos extremos hay una
inactivación enzimática permanente y las células no se recuperan en soluciones isotónicas.
1. Prepare series de tubos de caldo nutritivo adicionado de NaCl en diferentes concentraciones, al
0.85%, 3.5%, 7 %, 10% y 15% y un tubo control con el medio sin NaCl y márquelos.
2. Prepare otra series de 6 tubos de caldo nutritivo adicionado de sacarosa al 3.0%, 7.5%, 15%,30% y
un tubo control con el medio sin sacarosa y márquelos.
3. Inocule una serie de tubos de las diferentes concentraciones de NaCl con 0.1 ml (por tubo) de
Bacillus subtilis. Homogenice cada tubo. Deje una serie como controles sin sembrar. Conserve
también el control sin NaCl y sin sembrar.
4. Inocule una serie de tubos de las concentraciones de sacarosa con 0.1 ml (por tubo) . Homogenice
cada tubo. Deje una serie como testigos sin sembrar. Conserve el testigo sin sacarosa y sin sembrar.
5. Incube los medios sembrados a 37°C por 28 horas. Conserve en el refrigerador los medios testigos.
6. Haga lecturas de los cultivos en espectrofotómetro , ajustando el aparato con el testigo del medio
sin sales y sin sembrar. En las últimas décadas, se ha presentado mucho interés en estudiar los
posibles efectos de los campos electromagnéticos en sistemas biológicos complejos y sus aplicaciones
en tratamientos, diagnósticos, monitoreo y control. Los campos magnéticos de bajas intensidades
muestran diferencias significativas entre las muestras tratadas y el testigo, cuando la energía inducida
por los magnetos es mayor que la energía térmica producida en el sistema durante el tratamiento
(Recalde, 2013). El campo magnético puede aplicarse en la estimulación de microorganismos de
interés. A diferencia de otros métodos es posible utilizarlo sin grandes variaciones en las líneas
tecnológicas, disminuyendo así notoriamente los costos en la producción de la industria alimentaria.
En diferentes lugares del mundo se ha venido estudiando la estimulación magnética de
microorganismos para aumentar la fuente de biomasa, al igual que la producción de metabolitos de
interés químico, farmacéutico e industrial, identificando factores que estimulen su producción a gran
escala.

14. En un cuadro resuma cómo afecta cada uno de los determinantes ambientales en el
crecimiento de los microorganismos

TEMPERATURA OXÍGENO ACTIVIDAD DE pH

AGUA

Cada microorganismo No todas las bacterias La disponibilidad de El pH es otro de los

es capaz de crecer en un necesitan oxígeno para vivir, agua que se encuentra factores
rango muy determinado muchas pueden hacerlo en libre en el determinantes para el
de temperatura. Este ausencia total o parcial de microorganismo y es crecimiento y la
rango establece las este elemento. Hay necesaria para que las supervivencia de los
temperaturas mínimas ( microorganismos que viven bacterias se microorganismos. La
a la que el en ambientes anóxicos, multipliquen, esta agua tolerancia de las
microorganismo ya no sedimentos, tracto digestivo “no comprometida” con bacterias a los
se detecta crecimiento, de los animales o grandes ningún nutriente recibe cambios de pH es
actividad metabólica profundidades, entre otros. el nombre de actividad limitada, cambios
mínima, membranas Clases de microorganismos de agua (Aw) y se bruscos producen la
más rígidas y en relación al oxígeno: - indica con un número muerte. Clases de
 Aerobias obligadas. -
Microaerófilas. - Anaerobias
estrictas. - Anaerobias
aerotolerantes. - Anaerobias
facultativas.
que va desde 0 hasta 1. microorganismos en
relación al pH: -
Acidófilos. -
Neutrófilos. -
Alcalófilos

15. Qué significa la Ley de mínimo de Liebig y la Ley de tolerancia de Shelford en el crecimiento
de S. cerevisiae en un cultivo líquido estático y a temperatura ambiente​.
Se descubrió, como saben los agricultores en la actualidad, que el rendimiento de las plantas suele ser
limitado no sólo por los nutrientes necesarios en grandes cantidades, como el dióxido de carbono y el
agua, que suelen abundar en el medio, sino por algunas materias primas como el cinc, por ejemplo,
que se necesitan en cantidades diminutas pero escasean en el suelo. La afirmación de Liebig de que
"el crecimiento de una planta depende de los nutrientes disponibles sólo en cantidades mínimas" ha
llegado a conocerse como “ley" del mínimo de Liebig.
LEY DE TOLERANCIA DE SHELFORD: “La existencia y prosperidad de un organismo depende
del carácter completo de un conjunto de condiciones. La ausencia o el mal estado de un organismo
podrán ser debidos a la deficiencia o al exceso, cualitativo o cuantitativo, con respecto a uno
cualquiera de diversos factores que se acercarán tal vez a los límites de tolerancia del organismo en
cuestión. No sólo la escasez de algo puede constituir un factor limitativo, sino también el exceso de
algo (luz, agua,…). De manera que los organismos tienen un máximo y un mínimo ecológico, con un
margen entre uno y otro que representan los límites de tolerancia
1. Un mismo organismo puede tener un margen amplio de Tolerancia para un factor y un margen
pequeño para otro.
2. Los organismos con márgenes amplios de tolerancia para todos los factores son los que tienen más
posibilidades de estar extensamente distribuidos
3. Cuando las condiciones no son optimas para una especie con respecto a un determinado factor
ecológico, los límites de tolerancia podrán reducirse con relación a otros factores ecológicos.
4. El periodo de reproducción suele ser un período crítico en que los factores ambientales tienen más
posibilidades de ser limitativos. Entre los requerimientos nutricionales del S. cerevisiae está:
- Carbono: necesita D-glucosas como hexosas, glucosa, fructosa, manosa, etc.
- Nitrógeno: utiliza el nitrógeno en forma de ion amonio que pueden ser aportados al medio como
cloruro de amonio, nitrato de amonio, sulfato de amonio o fosfato de amonio. Otra fuente son los
aminoácidos, dipéptidos, tripéptidos y úrea. - Fósforo: regula la síntesis de los lípidos y carbohidratos
y mantiene la integridad de la pared celular - Azufre: constituye el 0.4% del peso seco de las
levaduras. Se tiene como fuentes el sulfato de amonio, el sulfito y el tiosulfato, además de la
metionina.
- Elementos traza: macronutrientes K, Mg, Zn, Fe, Mn, Cl. Se requieren en concentraciones de
0.1-1mM. - Potasio: actua como efector de diversas enzimas einterviene en la estructura de los ARN. -
Magnesio: estimula la síntesis de ácidos grasos, regula los ATPasas de las membranas y participa con
el potasio en la penetración del fosfato.
- Microelementos: C ​ o, I, Cd, Cu, Mo, Ni, Va. Se requieren concentraciones de 0.1-100uM
Fuentes: Obtencion de un sustrato fermentable de origen vegetal y su evaluación con células libres de
saccharomyces cerevicsiae. Buitrago Estrada. J. Microbiologia Industrial. Bogota 2007. Disponible en
: http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis285.pdf
16. De manera detallada explique qué significa Aw en los microorganismos y físicamente como
se entiende que la miel tenga una actividad de agua de 0.4.
Se denomina actividad acuosa (o actividad de agua) a la relación que existe entre la presión de vapor
de un alimento dado en relación con la presión de vapor del agua pura a la misma temperatura. Se
denota con la abreviatura aw (del inglés, water activity). La actividad acuosa es un parámetro
estrechamente ligado a la humedad del alimento lo que permite determinar su capacidad de
conservación, de proliferación microbiana, etc. La actividad acuosa de un alimento se puede reducir
aumentando la concentración de solutos en la fase acuosa de los alimentos mediante la eliminación del
agua (liofilización) o la adición de nuevos solutos. La actividad acuosa, la temperatura, el pH y el
oxígeno son los factores que más influyen en la estabilidad de los productos alimenticios. La miel es
una solución hipertónica, con exceso soluto en este caso azúcar, compuestas por glucosa y fructosa.
Es un medio perfecto para deshidratar a una bacteria u hongo; ya que al ser un medio hipertónico y
con aproximadamente 14% de agua es hace que el agua del microorganismo salga hacia el medio y de
esta manera deshidratando a la bacteria por lisis osmótica, además al no contener agua la miel inhibe
colonias de bacterias y debilita la capacidad de actuar del microorganismo.(Commons, 2016)​.​La miel
al igual que la mermelada son el perfecto medio para inhibir el crecimiento microbiano.

fuente: Commons, C. (28 de Mayo de 2016). 20 MINUTOS. Obtenido de La miel, la máquina

perfecta de matar bacterias en nuestro
organismo:https://www.20minutos.es/noticia/2751101/0/miel-maquina-perfecta-matar-bacteria
s-organismo/
​17. En los mecanismos de control genético de genes individuales explique cómo funciona la
atenuación de triptófano y de histidina​.
La atenuación es una forma de control transcripcional que funciona por terminación prematura de la
síntesis de mRNA. Es decir, en la atenuación, el control es ejercido después de la iniciación de la
transcripción, pero antes de su finalización. En consecuencia, el número de transcritos terminados
procedentes de un operón se reduce, aunque el número de transcritos iniciados no varíe. El principio
básico de la atenuación es que la primera parte del mRNA que se va a sintetizar llamada región líder,
puede plegarse en dos estructuras secundarias alternativas. En la atenuación, una estructura secundaria
del mRNA permite la síntesis continuada del mRNA, mientras que la otra estructura secundaria
provoca la terminación prematura. El plegamiento del mRNA depende de acontecimientos en el
ribosoma o bien de la actividad de proteínas reguladoras, en función del organismo. (Madigan,
Martinko, Dunlap, & Clark, 2009)

La atenuación se da sobre todo en operones de biosíntesis de aminoácidos, por ejemplo, el operón del
triptófano, que está formado por una serie de genes estructurales que codifican por enzimas
implicados en la ruta de biosíntesis del triptófano. En el operón lac, la expresión de β-galactosidasa en
el nivel inducido con respecto al basal era de 10​3 veces. En el operón del triptófano, cuando hay
triptófano en el medio la expresión del operón se reprime 700 veces. ¿Cómo se explica esto si se tiene
en cuenta que el represor solo reprime 70 veces? Ha de haber algún mecanismo adicional que
multiplica por 10 los niveles de represión. La explicación está en que la transcripción de estos genes
está sujeta a dos controles: represión y atenuación. La atenuación es un mecanismo que controla la
habilidad de la RNA polimersa para leer, a través de un atenuador. El atenuador es un terminador
intrínseco , localizado al comienzo de la unidad de transcripción. La característica que tiene es que
algunos eventos externos (presencia de un metabolito, como Trp para operon trp; o un evento como la
traducción) controlan la formación de la horquilla necesaria para la terminación intrínseca En la
atenuación al aumentar los niveles de triptófano, la transcripción se para antes: mRNA atenuado; al
disminuir los niveles de triptófano, la transcripción no se para sino que continúa.
La región leader (trpL), región anterior a los genes estructurales juega un papel fundamental en la atenuación:

La RNA polimerasa comienza la transcripción, el represor reprime poco y la RNA polimerasa transcribe
un RNA correspondiente a la secuencia leader. Dependiendo de la estructura secundaria adoptada por
este RNA se forma o no una señal de terminación. La secuencia leader tiene un AUG iniciador de
traducción con una fase de lectura abierta hasta un UGA, señal de terminación de traducción, que da
lugar a un péptido de 14 aminoácidos que no sirve para nada. A mediada que se va sintetizando el RNA
leader, va adoptando una determinada estructura secundaria.
La región del RNA inmediatamente antes del sitio de terminación de la traducción (región 1), es
complementaria a la región contigua (región 2) y al aparear se forma la horquilla 1-2; continúa la
transcripción y se transcriben las regiones 3 y 4, que también son complementarias y forman la horquilla
3-4. Como la región 4 va seguida de una serie de Us, esto constituye una señal de terminación por lo que
la transcripción cesa. Además, la región 2 puede también hibridar con la región 3. Curiosamente, en el
péptido leader, de los 14 aminoácidos dos son triptófano, siendo el triptófano el aminoácido menos
frecuente en las proteínas. Otra cosa a tener en cuenta es que en bacterias, a diferencia de eucarióticos,
la transcripción está acoplada a traducción. Los ribosomas están traduciendo el RNA que se está
transcribiendo.
Teniendo esto en cuenta:
» En ausencia de triptófano en el medio: la RNA polimerasa va transcribiendo. Los ribosomas
reconocen el AUG y comienzan a sintetizar el péptido hasta que llegan a los tripletes del triptófano en
los que se detienen, debido a que no hay triptofanil tRNA en el medio.Como los ribosomas quedan
detenidos en el codon del triptófano, la región 1 del RNA leader queda "bloqueada"y no puede hibridar
con la región 2 y se impide la formación del híbrido 1-2. Al sintetizarse la región 3, la 2 hibrida con la 3,
con lo que no puede formarse el híbrido 3-4 y no se da la señal de terminación. La RNA polimerasa
continúa la transcripción del operón.
ATENUACIÓN DE HISTIDINA
La expresión de los genes estructurales se modula coordinadamente en respuesta a la disponibilidad de
histidil-ARNt cargado por un mecanismo de transcripción de atenuación a nivel de la región líder que
precede al primer gen estructural. Dos características prominentes caracterizan la región líder del operón
que puede explicar su control de traducción específico de la terminación de la transcripción, que es la
esencia del control de atenuación: 1. Una región de codificación corta que incluye numerosos codones
en tándem que especifican histidina 2. Regiones superpuestas de simetría de diadas que pueden plegarse
en estructuras secundarias alternativas, una de las cuales incluye un terminador independiente de rho.
Los niveles bajos del ARNt cargado específico provocarán que los ribosomas se detengan en la región
líder en los codones de histidina y rompan el emparejamiento A: B enmascarando la región A. En estas
circunstancias, se favorecerá la configuración de antiterminación. Por el contrario, en presencia de
niveles elevados de histidil-ARNt cargado, los ribosomas se alejarán rápidamente de los codones
reguladores de histidina, ocupando de ese modo las regiones A y B. El emparejamiento entre C y D y
entre E y F dará como resultado la finalización prematura de la transcripción. La alteración de la
traducción de la región líder como consecuencia de la limitación severa del conjunto intracelular de
todos los ARNt cargados dará como resultado una fuerte terminación de la transcripción. En estas
condiciones, las estructuras A-B, C: D y E: F del tallo se formarán secuencialmente sin interferencia
mediante la traducción activa de los ribosomas. (Alifano, y otros, 1996) Alifano, P., Fani, R., Liò, P.,
Lazcano, A., Bazzicalupo, M., Carlomagno, M., & Bruni, C. (1996). Histidine biosynthetic pathway and
genes: structure, regulation and evolution. Microbiological Reviews, 44-69. Madigan, M., Martinko, J.,
Dunlap, P., & Clark, D. (2009). Brock. Microbiología de los microorganismos. Madrid: Pearson
Educación.

1​ 8. Explique en el control de los siguientes operones: Operón Lac, operón Ara y Operón Gal si
estos son de regulación positiva o de regulación negativa
Tipos de Regulación
-​ Negativa: se da cuando hay represor, que hace que se dé o no la transcripción.
 - Positiva: depende de un ACTIVADOR, no hay ningún represor.
Ejemplo: Cuando baja el nivel de glucosa en sangre, se activa la proteína CAP, esta estimula la Adenil
ciclasa que forma AMPc, y éste forma un dímero con el CAP à estos dos (dimero) se van a unir al
operador y van a activar la transcripción (activan al Operon). Operones Estos solo están en los
procariotes (por ser polisistronicos: 1 sola molécula de RNAm sirve para transcribir muchos tipos de
proteínas). Están formados por: Inductor + Genes reguladores (represor, operador, etc.) + promotor + 3
genes estructurales (cada gen va codificar para una proteína diferente).
Tipos de Operones: · Represibles: son anabólicos (hay que apagarlos cuando se requiere) · Inducibles:
son catabólicos (hay que prenderlos)
OPERÓN LAC:
● El operón lac de E. coli contiene los genes involucrados en el metabolismo de la lactosa. Se expresa
solamente cuando la lactosa está presente y la glucosa está ausente.
● Dos reguladores "encienden" y "apagan" el operón en respuesta a los niveles de lactosa y de glucosa:
el represor lac y la proteína activadora por catabolito (CAP)
● El represor lac actúa como un sensor de la lactosa. Normalmente bloquea la transcripción del operón,
pero deja de actuar como represor cuando la lactosa está presente. El represor lac detecta la lactosa
indirectamente, a través de su isómero alolactosa.
● Proteína activadora de catabolitos (CAP) actúa como un sensor de la glucosa. Activa la transcripción
del operón, pero solamente cuando los niveles de glucosa son bajos. CAP detecta la glucosa
indirectamente, a través de la molécula de “señal de hambre” AMPc El represor lac: El represor lac es
una proteína que reprime (inhibe) la transcripción del operón lac. Lo hace al unirse al operador, que se
traslapa parcialmente con el promotor. Cuando está unido, el represor lac bloquea el camino de la ARN
polimerasa y evita que transcriba el operón. Cuando la lactosa no está disponible, el represor lac se une
firmemente al operador, y así evita la transcripción por la ARN polimerasa. Sin embargo, cuando la
lactosa está presente, el represor lac pierde su capacidad de unirse al ADN. Se separa del operador, y
despeja el camino para que la ARN polimerasa transcriba el operón. Proteína activadora de catabolitos
(CAP): Cuando la lactosa está presente, el represor lac pierde su capacidad de unirse al ADN. Esto deja
libre el camino para que la ARN polimerasa se una al promotor y se transcriba el operón lac. Resulta
que la ARN polimerasa sola no se une muy bien al promotor del operón lac. Puede que haga algunos
transcritos, pero no hará mucho más a menos que consiga ayuda adicional de la proteína activadora de
catabolitos (CAP). CAP se une a una región del ADN justo antes del promotor del operón lac y ayuda a
que la ARN polimerasa se una al promotor, lo que promueve altos niveles de transcripción. CAP no
siempre es activa (capaz de unirse al ADN). Su actividad la regula una molécula pequeña llamada AMP
cíclico (AMPc). AMPc es una “señal de hambre” que fabrica E. coli cuando los niveles de glucosa son
bajos. AMPc se une a CAP, cambia su forma y la hace capaz de unirse al ADN y promover la
transcripción. Sin AMPc, CAP no puede unirse al ADN y es inactiva. CAP solamente está activa
cuando los niveles de glucosa son bajos (los niveles de AMPc son altos). Así, el operón lac solo puede
transcribirse en altos niveles cuando no hay glucosa. Esta estrategia asegura que las bacterias solamente
enciendan el operón lac y empiecen a usar la lactosa después de que hayan utilizado toda la fuente de
energía preferida (glucosa).

OPERON Ara El operón arabinosa (ara) de Escherichi coli es un sistema más complejo que el operón
lac. La arabinosa, una pentosa, puede ser usada como sustrato metabólico a través de la vía de las
pentosas-fosfato; las enzimas necesarias para su metabolización son: arabinosa isomerasa, ribulosa
quinasa y ribulosa-5-fosfato epimerasa que están codificadas por los genes estructurales araA, araB y
araD. El operón ara incluye además de los tres genes estructurales: a) una región reguladora que a su
vez tiene dos operadores araO1 y araO2 b) un sitio de unión para la proteína reguladora (araC)
denominado araI (I=inductor) c) un promotor adyacente a araI y en la proximidad del promotor se
encuentra d) un sitio de unión para la CAP-AMPc. La proteína araC está codificada por un gen araC
próximo que se transcribe desde su propio promotor (próximo a araO1) en dirección opuesta a los genes
estructurales. El papel de la proteína es complejo, ya que es capaz de regular su propia síntesis
uniéndose a araO1 y cuando su concentración supera las cuarenta copias por célula reprime su síntesis.
Respecto a los genes estructurales, actúa también como un regulador positivo y negativo, uniéndose a
araO2 y a araI, lo cual permite una acción distinta dependiendo de las siguientes condiciones
metabólicas: a) Si la glucosa es abundante y la arabinosa es escasa: la proteína reguladora araC se une
en dos puntos, a araO2 y araI formándose un lazo de ADN que no permite la transcripción de los genes
estructurales. b) Si la glucosa es escasa y la arabinosa es abundante: el complejo CAP-AMPc es
abundante y se une a su sitio del ADN, adyacente a araI. La arabinosa funciona como un activador, al
unirse a la proteína araC altera su conformación, y al unirse ésta a araI se combina con CAP-AMPc y
aumenta la transcripción. c) Si ambos son escasos o ambos son abundantes, el sistema de regulación no
está claro aunque se sabe que hay represión. (Merino Pérez & Noriega Borges, 2008)

Operon Galactosa Es igual que el de la lactosa, solo que tiene: 2 operadores y 2 promotores. También
puede ser activa por el dimero de AMPc + CAP (reg. Positiva).
Operon Triptófano ​Es un Operon represible: siempre se encuentra activado, ya que el triptófano
creado acá se usa para poder hacer síntesis proteica. Solo se inhibe cuando hay mucho Tript. - El
triptófano se une a un represor para poder inhibir la transcripción, esta molécula actuaria como un
co-represor. La estructura es igual que la de la lactosa, solo que acá hay 5 genes estructurales (E, D, C,
B, A) que sintetizan triptófano, y hay un Atenuador: secuencia de nucleótidos (adelante del promotor)
que sirve para que la RNA polimerasa no empieze la transcripción, mientras llegan el triptófano +
represor.
19. Cuál es la diferencia entre control estricto y control global y grafique las condiciones que
deben darse para que se puedan desarrollar estos tipos de control.

Control Estricto: ​Es un grupo de respuestas celulares que sobrevienen principalmente por limitación de
aminoácidos. Esta respuesta incluye la disminución de la tasa de acumulación de RNA estable, de la
replicación del ADN y de la biosíntesis de
macromoléculas. Descrita inicialmente en bacterias Gram
negativas (E. coli) frente a la limitación de aminoácidos.
Ejemplo: cuando en el laboratorio, las bacterias son
transferidas de un medio rico a un medio mínimo. El
ARNt descargado se une al ribosoma en sitio A, la
proteína RelA (asociada a ribosoma) cataliza la
producción de una mezcla de nucleótidos regulatorios
referidos como (p)ppGpp, a partir de ATP+GTP.

*(p)ppGpp es un factor clave en la fisiología bacteriana,

se acumula rápidamente en respuesta a diversos estreses
apagando el crecimiento y propiciando procesos de
defensa y adaptación celular. La producción de esta no ha
sido descrita en las arqueas

Control Global: ​Es una respuesta coordinada ante el estrés ambiental producto de la habilidad de
integrar circuitos de regulación con aspectos particulares de la fisiología celular. Las bacterias inducen
mecanismos de supervivencia frente a condiciones que inducen la detención del crecimiento (ej.
limitación de nutrientes): Cambios morfológicos y metabólicos (Ej. E. coli), desarrollo de esporas (Ej.
Bacillus subtilis)
20. Cómo funciona el Operon gln ALG en E. coli en un medio con abundante amonio. Detalle todo
el mecanismo de regulación.
OPERON ALG ​El operón glnALG es un operón que regula el contenido de nitrógeno de una célula.
Codifica para el gen estructural glnA los dos genes reguladores glnL y glnG. glnA codifica glutamina
sintetasa, una enzima que cataliza la conversión de glutamato y amoníaco en glutamina, controlando así
el nivel de nitrógeno en la célula. glnG codifica NRI que regula la expresión del operón glnALG en tres
promotores, que son glnAp1, glnAp2 situado aguas arriba de glnA) y glnLp (región glnA-glnL
intercistrónica). glnL codifica NRII que regula la actividad de NRI. El glnALG tiene tres genes
estructurales: glnA: codifica la glutamina sintetasa, una enzima que cataliza la conversión de glutamato
y amoníaco en glutamina. glnL: codifica NRII, que regula la actividad de NRI. glnG: codifica NRI, que
regula la expresión del operón glnALG en tres promotores, que son glnAp1, glnAp2 y glnLp.

Bajo un exceso de Amonio, el operon gln ALG es transcrito a un bajo nivel desde los promotores gln
Ap1 y gln Lp mediante una RNA polimerasa σ70. Esto garantiza un mínimo de glutamina sintetasa.
Estas condiciones causan altos niveles de PII, debido a que la glutamina sintetasa estimula la remosion
del UMP de la forma PII-UMP, catalizada por la enzima bifuncional uridil transferasa/uridil removedora
(UT/UR). Estos altos niveles de PII, conducen a la actividad fosfatasa de NRII, lo que causa la
defosforilacion de NRI-P, esta defosforilacion causa la baja transcripción de glnALG. Por lo tanto PII
inhibe la transcripción del operon. *El sistema de dos componentes es una forma de regulación a través
de una interacción proteína-proteína e iniciada por una señal de transducción.

21. Explique detalladamente cómo funciona el sistema de dos componentes en el Regulón PHO y
condiciones de estrés de osmolaridad.
En el centro de esta cuestión está un sistema de transducción de señal de dos componentes que detecta
fosfato ambiental y controla la expresión de muchos genes para la adquisición de alta afinidad de fosfato
y la utilización de fuentes alternativas de fósforo. El modelo actual para la regulación de esta respuesta
es que el transportador PstSCAB (un transportador ABC de alta afinidad de fosfato) detecta los niveles
de fosfato y se comunica a través de la proteína PhoU con la histidina quinasa bifuncional PhoR, que
interactúa y controla el nivel de fosforilación en estado estacionario del regulador de respuesta, PhoB.
Phospho-PhoB se une a secuencias de ADN específicas aguas arriba de los genes del regulón Pho,
interactúa con la subunidad sigma70 de la ARN polimerasa y estimula la transcripción. La suficiencia
de fosfato genera una señal que cierra el regulón de Pho activando la actividad de la fosfatasa
fosfo-PhoB de PhoR. Sin embargo, cuando el fosfato es limitante o cuando las mutaciones eliminan
cualquier componente del transportador PstSCAB o PhoU, el regulón Pho se enciende. Esta señal de
bajo fosfato estimula la actividad quinasa de PhoR permitiéndole servir como un eficiente
fosforo-donante a PhoB. La inanición de fosfato también desencadena la respuesta general al estrés en la
que las células se vuelven cada vez más resistentes a muchas tensiones ambientales. El regulador
maestro de esta respuesta es sigmaS (RpoS), un factor sigma alternativo que compite con sigma70 para
dirigir la transcripción de genes bajo su control. La regulación de sigmaS es muy compleja y tiene
numerosas entradas. Sus niveles celulares están controlados a los niveles de transcripción, traducción,
rotación de proteínas y actividad.

CONDICIONES DE ESTRÉS POR OSMOLARIDAD

Componentes: Env Z (es una proteína kinasa que actúa como un sensor osmótico transmembrana), Omp
R (es la proteína reguladora), Omp C (porina presente cuando la osmolaridad interna es alta), Omp F
(porina presente en baja osmolaridad). El modelo propone que al incrementarse la osmolaridad externa,
se activa Env Z, de tal manera que fosforila Omp R. Los altos niveles de Omp R-P reprime la síntesis de
la porina Omp F y estimula la síntesis de Omp C mediante el enlace a regiones de baja afinidad cercana
a los promotores. Los niveles bajos de Omp R-P estimulan la transcripción de omp F mediante el enlace
a sitios de alta afinidad cercanos al promotor de Omp F.
22. Explique detalladamente porque E. coli es un microorganismo anaerobio facultativo ¿Que
regulación genética le permite estar en un medio anaeróbico, anóxico y aeróbico?

Es anaeróbico facultativo por que puede seguir viviendo en presencia o ausencia de oxígeno, en
presencia de oxigeno hace respiración aeróbica, y en ausencia de oxigeno hace fermentación y también
puede respirar el nitrato. Cuando se agota el oxígeno, se enciende el mecanismo de regulación de dos
componentes en la cual hay una proteína censora ArcB al percibir una baja presión parcial de oxígeno
cambia su actividad fosfatasa por una actividad quinasa y va a activar a ArcA, la cual a su vez va a una
serie de enzimas que van a permitir la respiración del Oxígeno (Moat., et al 2003).
23. Explique los eventos que suceden en un ciclo celular de Pseudomonas sp., Candida utilis y
Penicillium sp.
Cándida utilis ​El ciclo de división mitótica de Cándida utilis consta de una fase de replicación del
DNA (S) y de otra de segregación cromosómica o mitosis (M) separadas por dos fases G1 (entre M del
ciclo previo y S) y G2 (entre S y M), finalizando con la separación citoplásmica o citoquinesis (Futcher,
1990) . A diferencia de otras células eucariotas, y debido a que las células se dividen mediante
gemación, esta división no es exactamente simétrica, generándose una célula hija de menor tamaño que
la célula madre. Mientras que esta última puede iniciar inmediatamente un nuevo ciclo de división, la
célula hija debe crecer hasta alcanzar un tamaño crítico antes de iniciar su primer proceso de gemación.
En base a criterios morfológicos y genéticos, se ha definido un punto clave en la fase G1, denominado
Start (equivalente al "restriction point" de células superiores), a partir del cual las células inician la
emergencia de la yema al mismo tiempo que preparan la maquinaria para la replicación y posterior
segregación cromosómica. Start también es el punto del ciclo en el que confluyen señales externas
(feromonas sexuales, estado nutricional del medio, etc.) y las células "deciden" si continuar el ciclo de
división o entrar en un estado de reposo en forma de células no gemadas (a menudo denominado fase
G0). El desarrollo del ciclo se asegura por la aparición periódica de ciclinas, moléculas cuya abundancia
oscila en los sucesivos estadios del ciclo celular y que actúan como subunidades activadoras de proteína
quinasas (CDKs, por "cyclin-dependent kinases"), que al fosforilar diversos sustratos proteicos permiten
el avance a lo largo del ciclo (Lew y Reed, 1992). Cada asociación ciclina específica-CDK posee
capacidad de fosforilar sustratos concretos. Las ciclinas contienen señales moleculares (secuencias
específicas de aminoácidos) que aseguran su destrucción mediante proteolisis mediada por ubiquitina, y
en consecuencia la inactivación de la correspondiente CDK una vez cumplida su función. Se puede
entender el ciclo celular, pues, como una máquina de función continua gracias a las sucesivas
asociaciones ciclina-CDK. Cándida utilis contiene una única CDK, la proteína p34 producto del gen
CDC28. Su nivel permanece constante a lo largo del ciclo, siendo activada al unirse a diversas ciclinas
que se van sintetizando sucesivamente (Nasmyth, 1993). Según el estadio del ciclo en que se sintetizan,
se las describe como ciclinas de fase GJ (Cln1-3, necesarias para iniciar el ciclo a nivel de GI), ciclinas
de fase S (Clb5 y Clb6, necesarias para la replicación cromosómica) y ciclinas mitóticas (Clb 1-4,
necesarias para la mitosis). Cln3 es una excepción entre ellas en cuanto a que sus niveles permanecen
constantes a lo largo del ciclo. Las ciclinas Clb 1-6 forman parte de la familia de ciclinas de tipo B,
junto con un grupo de ciclinas de eucariotas superiores. En cambio, las ciclinas Cln1-3 constituyen una
familia diferente, con homología muy limitada con las otras ciclinas tanto de levaduras como de
eucariotas superiores.
Penicillium sp
La reproducción sexual en Penicillium ocurre cuando las hifas especializadas -o progametangios de dos
cepas de apareamiento diferentes se encuentran y se fusionan, atraídas entre sí por hormonas que
difunden en forma de gases. Durante la mayor parte del ciclo, el organismo es haploide. El micelio de
este hongo está formado por hifas ramificadas que fijan al organismo y absorben los nutrientes. a) La
reproducción asexual ocurre por la formación de esporangióforos cuyos esporangios producen esporas
del mismo tipo de compatibilidad sexual que le dio origen. Cuando los esporangios maduran, sus
delgadas paredes se desintegran, desprendiendo las esporas que son transportadas por el viento.(Ross,
M., 2005) En condiciones favorables de humedad y temperatura, las esporas germinarán y darán origen
a un nuevo grupo de hifas. b) La reproducción sexual ocurre cuando las hifas especializadas
(progametangios) de dos cepas compatibles (designadas como + y -) se encuentran y se fusionan. Se
forman entonces dos células apicales -los gametangios-. Una de las células contiene numerosos núcleos
+ y la otra, numerosos núcleos -. Los dos gametangios se fusionan y luego se fusionan muchos pares de
núcleos + y núcleos -, produciendo núcleos diploides. La célula multinucleada resultante forma una
pared dura, pigmentada y verrugosa, y se transforma en un zigosporangio latente que contiene una única
zigospora. Cuando las condiciones ambientales son favorables, justo antes de la germinación, los
núcleos diploides sufren meiosis. (Lutkenhaus, 1992) Luego ocurre la germinación, se rompe la pared
del zigosporangio y emerge el esporangióforo a partir de la zigospora. En su extremo, el esporangióforo
porta un esporangio que dará origen a esporas las que, al germinar, producirán micelio +

Preguntas adicionales

1.-Explique porque es posible que un microorganismo tenga un tiempo total de ciclo celular de 20
minutos y que la fase C sea de 30 minutos y de división de 25 minutos.
El tiempo de replicación depende del número de orígenes de replicación y la masa inicial .en este caso
el tiempo de generación es de 20 minutos que es menor al tiempo de la fase C+D =55 minutos esto se
debe a un acoplamiento de fases entre C y D, además cuando la célula pasa por la fase s no es necesario
que culmine el proceso, inmediatamente ocurre una nueva ronda.

2.-Explique qué eventos se deben coordinar para que se pueda dar la división celular en Bacillus
cereus.
Se pueden identificar tres eventos principales: (Madigan., et al, 2003).
1) El intervalo entre la división celular y la iniciación de síntesis de ADN.
2) El período de síntesis de ADN (replicación cromosómica).
3) El período entre la terminación de la replicación y el término de la división celular

3.-Explique qué condiciones pueden generar que los microorganismos cambien en su

conformación estructural y/o función. Detalle esto con un ejemplo.
Las condiciones principales para que exista cambios en la estructura y función de los microorganismos
es la presencia o ausencia de los nutrientes que su capacidad metabólica y genética puedan degradar. Un
ejemplo claro de ello es en los hongos filamentosos, los cuales al escasear los nutrientes entra en estrés
dejan de formar hifas vegetativas en dicha zona y comienzan a formar estructuras reproductivas. Otro
cambio en la estructura y función se da en cuando a ciertos microorganismos se les somete a altas
temperaturas, generando estructuras de resistencia a condiciones adversas. Ejemplo de ello es la
formación de endosporas en bacterias como las pertenecientes a los géneros Clostridium y Bacillus.
4.-Explique detalladamente el mecanismo de diferenciación individual que sucede en Clostridium
botulinum.
Dicha diferenciación es la que se da por la falta de los nutrientes esenciales. No es un método de
multiplicación bacteriana sino una forma de reposo latente por largos periodos de tiempo dentro del
ciclo vital. No se presenta en la etapa exponencial del crecimiento bacteriano. Sus etapas son las
siguientes: (Madigan., et al, 2003). I) Estado de filamento axial: Es transitorio, inicialmente hay una
marcada reducción de la tasa de crecimiento. El DNA cambia en apariencia y distribución formando el
filamento axial. II) Formación de septo y englobamiento de la pre – espora: El primer signo de la
formación de la espora es el desarrollo de la pre – espora. El septo desarrolla generalmente a un lado de
la célula y un material nuclear equivalente a la cromatina es encerrado por este segmento. III)
Formación de la corteza: La corteza se forma como una densa pared alrededor de la célula, entre las
membranas interna y externa de la pre – espora. IV) Formación del saco y exosporio: Constituye una
cubierta en multicapa que se sobrepone a la corteza. Maduración: Este proceso es asociado con la
síntesis de ácido dipicolínico y la toma de calcio en la espora que está madurando. En este punto la
corteza no puede ser bien diferenciada.

5.-Porque se dice que en las mixobacterias existe un proceso de “pluricelularidad” y que se podría
hablar de “tejidos procariotas”, explique detalladamente. Por otra parte, indique si es lo mismo
decir mixomicetos o mixobacterias.
La pluricelularidad, ha a nacido como un mecanismo para especializar determinadas partes de una
colonia, y encargarlas de misiones particulares, como protección, reproducción y alimentación, como es
el caso de las mixobacterias. La especialización de cada parte de la colonia desarrolla el concepto de
tejidos procariotas, debido a que asemeja a los tejidos de un animal desarrollado o una planta
evolucionada. Primero, durante el crecimiento vegetativo las mixobacterias se mantienen unidas y se
desplazan por deslizamiento (no son flageladas) en forma coordinada, formando agrupaciones
denominadas enjambres, compuesta por miles de células asociadas entre si por señalización molecular
intercelular. Estos enjambres se nutren cooperativamente al inducir lisis en otras bacterias, hongos o
levaduras por la liberación de exoenzimas al medio. Este ataque enzimático es muy eficiente, ya que es
realizado en colaboración del enjambre completo. Cuando empieza el agotamiento de nutrientes en el
medio, se inicia la fase quística. En este caso la inanición actúa como señal para que el conjunto de
células de un enjambre empiecen a movilizarse a ciertos puntos denominados centros de agregación, en
donde las células se apilan unas encima de otras para generar montículos que luego crecen para formar
el cuerpo fructificante, durante su formación muchas células se sacrifican dentro del grupo, para verter
sus contenidos que conformarán las paredes del cuerpo fructificante dando la oportunidad a la minoría
de células restantes a diferenciarse en formas de resistencia llamadas mixosporas que se reproducirán en
el nuevo ciclo vegetativo cuando las condiciones lo favorezcan. Las particularidades mencionadas nos
llevan a relacionar el comportamiento de los enjambres de mixobacterias con una forma de agregación
de tejido procariota, puesto que un tejido es una agrupación de células diferenciadas, con una estructura
determinada y que realiza funciones específicas, las cuales son llevadas a cabo por todas las células que
lo conforman. En contraste, los enjambres de mixobacterias actúan de forma autónoma, se desplazan,
presentan un comportamiento poblacional en el cual cada célula aprovecha los esfuerzos de otras y
viceversa, y finalmente son capaces de desarrollar esporas para preservar su material genético. Los
mixomicetos o mixomicetes son hongos talófitos con células ameboides en su ciclo biológico, su talo es
igual a un plasmodio, es decir, una masa de plasma sin paredes, plurinucleada y dotada de movimiento
ameboide. Existe controversia acerca de si son animales y hongos. Los consideran animales debido a
sus células ameboide (móviles) y a que su nutrición es por fagocitosis. Y los consideran hongos por sus
esporas con pared celular de celulosa o quitina, por los esporangios y por la falta de fotosíntesis.
6.-Cómo se produce la diferenciación celular en actinomicetos y porque son importantes estos
microorganismos.

Los actinomicetos producen filamentos ramificados, similares a los micelios de los hongos, para la
formación de estas estructuras existen rutas alternativas que pueden ser activadas de diferentes maneras.
En algunos casos como en el de Streptomyces sp. , señales extracelulares son transmitidas, y proteínas
extracelulares pueden actuar como morfogenos en la construcción de las hifas aéreas. Un codón raro
UUA que esta aparentemente confinado a los mRNAs de algunos genes importantes solo para las
primeras etapas de la diferenciación, esta aucente en los mRNAs presentes en estados de desarrollo
vegetativos y finales. La esporulación de hifas aéreas implica al menos cuatro proteínas reguladoras
específicas, y un factor sigma y una pequeña proteína inusual. Actualmente la propuesta de una
compleja interacción entre los genes reguladores de esporulación, en lugar de una simple cascada de
dependencia lineal, está prevaleciendo (Chater, 1993). Los actinomicetos juegan un importante rol en la
descomposición de materia orgánica, tales como la celulosa y quitina. Estas bacterias renuevan las
reservas de nutrientes en la tierra y son fundamentales en la formación de humus. Por lo que son
organismos claves en los ciclos de reciclaje de nutrientes y en la estabilidad del ecosistema en general
(Chater, 1993).

7.-Explique Ud. que significa dimorfismo celular en hongos. El dimorfismo es la capacidad que
tienen algunas células fúngicas para presentar dos formas de crecimiento.
Este cambio se da en respuesta a cambios ambientales, como consecuencia se producen cambios
morfológicos y fisiológicos para hacer frente al ambiente (Rocha et al. 2005). Las especies patógenas
generalmente presentan dimorfismo. Estos hongos tienen una forma de reproducción como el de un
hongo filamentoso, las cuales producen hifas vegetativas y áreas ( Tortora et al. 2007)

8.-¿Cómo viven los litobiontes a partir de las rocas? Los litobiontes son microorganismos que
viven en la superficie de la roca (epilíticos) o dentro de la roca (endolitícos)
 En general, el ambiente litobióntico puede ser dividido en cuatro hábitats:
1) cryptoendolitico, que consiste en espacios naturales porosos dentro de la roca y normalmente
conectados con la superficie de la misma de forma indirecta.
2) chasmoendolítico, formado por fisuras y grietas dentro de la roca conectadas con la superficie de la
misma.
3) euendolítico, consistente en canales y hendiduras formados dentro de la roca por la actividad
metabólica de los microorganismos.
4) hipoendolítico, que consiste en espacios porosos que no están en contacto directo con el suelo pero
que se sitúan dentro de la parte inferior de las rocas que sí lo están. Es bien conocido que los hábitats
endolíticos normalmente proveen a los microorganismos de condiciones más favorables de humedad
que el medio externo y los protegen de la alta radiación solar y de las fluctuaciones de temperatura y del
viento, permitiendo al mismo tiempo el paso de la radiación fotosintéticamente activa. También se ha
sugerido que los depósitos de minerales en asociación con los microorganismos endolíticos pueden
crear un ambiente relativamente aislado y cerrado que recicla eficientemente los nutrientes. Se considera
que la biorreceptividad de las rocas a la colonización endolitica depende principalmente de las
propiedades físicas y químicas del sustrato rocoso. Entre estas propiedades se encontrarían la
composición mineral, la presencia de compuestos químicos, la estructura y distribución de los poros, la
permeabilidad, así como también factores tales como la capacidad de retención de agua, el pH, la
exposición climática y la fuente de nutrientes. El sistema de poros y fisuras naturales de la roca, con sus
formas, tamaños y distribución, proporciona una eficiente protección a los microorganismos y crea un
lugar de condensación, absorción y retención de agua. Los estudios realizados en los desiertos fríos y
cálidos muestran que las comunidades microbianas están bien adaptadas a largos periodos de desecación
seguidos por breves episodios de rehidratación, y que pueden reanudar la actividad metabólica completa
en cuestión de minutos después de la rehidratación. Wierzchos, Jacek & De los Ríos, Asunción &
Ascaso, Carmen. (2012). Microorganismos en rocas: camellos de los desiertos hiperaridos.
9.-¿Cómo vive una levadura durante 2 años en modo de levadura seca activa (liofilizado)?
10.-¿Qué es el efecto pasteur?
El efecto Pasteur es un efecto de inhibición de la fermentación alcohólica debido a la participación de
oxígeno (O2 ). La fermentación es un proceso completamente anaeróbico la inclusión del oxígeno la
detiene o minimiza . Se observó por primera vez que las levaduras aumentaban su tasa de crecimiento
mientras disminuían o cesaban su producción de alcohol. El efecto Pasteur se produce en
microorganismos capaces de realizar metabolismo fermentador y respiración aerobia, conocidos como
anaerobios facultativos. En presencia de oxígeno utilizan la respiración aeróbica, pero también pueden
emplear la fermentación si no hay oxígeno libre en su medio ambiente. Pasteur fue el primero en
observar que el azúcar es convertido en alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que en
presencia de aire se forma muy poco o nada de alcohol, siendo el CO2 el principal producto final de esta
reacción aeróbica. Este efecto indica el mayor rendimiento energético de la respiración sobre la
fermentación. 11.-¿Por qué E. coli no vive a pH menor a 4? Los mecanismos de inactivación de E. coli
por acidificación consisten en la acidificación intracelular, la cual daña o interrumpe procesos
bioquímicos clave. Si el pH interior cae en torno a 6 o 5.5, E. coli induce una respuesta de tolerancia a
ácidos, consistente en ATPasas translocadoras de protones (expulsan protones al exterior) y chaperonas
(proteínas celadoras) para corregir las proteínas desnaturalizadas. A bajos valores de pH; es decir, pH
menor o igual a 3 (pH menor a 4 en el caso de E. coli), el ingreso de protones es más rápida que la
capacidad de las células para mantener la homeostasis. Los ácidos orgánicos penetran en la membrana
celular y se disocian dentro de la célula, lo que produce que el protón liberado reduzca el pH
intracelular. A menor pH en el exterior de la bacteria, mayor es el flujo de ácidos orgánicos a su interior.
Asimismo, el ácido se acumula en la membrana y el constante flujo de protones hace que se agote la
energía celular, causando la muerte.
12.-¿temperatura de muerte de los microorganismos? La temperatura es uno de los parámetros
ambientales más importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los
microorganismos.
La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al tiempo de generación, g). Cada
bacteria (y suponiendo que el resto de condiciones ambientales se mantienten constantes) muestra una
curva característica de tasa de crecimiento en función de la temperatura, donde podemos distinguir tres
puntos característicos llamados temperaturas cardinales:Temperatura mínima: por debajo de ella no hay
crecimiento; Temperatura máxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento,Temperatura óptima:
permite la máxima tasa de crecimiento (o sea, g mínimo). El margen entre la temperatura mínima y la
máxima se suele llamar margen de crecimiento, y en muchas bacterias suele comprender unos 40
grados. La temperatura mínima se puede explicar en función de un descenso de la fluidez de la
membrana, de modo que se detienen los procesos de transporte de nutrientes y el gradiente de protones.
Por encima de la temperatura mínima la tasa de crecimiento va aumentando proporcionalmente hasta
alcanzar la temperatura óptima, debido a que las reacciones metabólicas catalizadas por enzimas se van
aproximando a su óptimo. En dicha temperatura óptima las enzimas y reacciones se dan a su máxima
tasa posible. A partir de la temperatura óptima, si seguimos subiendo la temperatura se produce un
descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar la temperatura máxima. Dicha temperatura
refleja desnaturalización e inactivación de proteínas enzimáticas esenciales, colapsamiento de la
membrana citoplásmica y a veces lisis térmica de la bacteria. Las psicrófilas o criófilas: crecen a partir
de entre -5 a 5ºC.
​a) Las llamadas psicrófilas ​obligadas tienen temperatura óptima a 15-18ºC, como por ejemplo
Flavobacterium. La bacteria Polaromonas vacuolata, recientemente aislada en aguas heladas de la
Antártida es lo que pudiéramos llamar un psicrófilo extremo: tiene su óptimo de crecimiento en 4ºC, y
es incapaz de crecer a 14ºC .
b) Las psicrófilas facultativas o psicrotolerantes (también llamadas psicrotrofas) presentan
temperatura óptima en torno a los 20-30ºC y máximas a los 35ºC. Las bacterias y hongos psicrotrofos
son los responsables de que los alimentos guardados en nevera se estropeen al cabo del tiempo. Los
mesófilos presentan temperaturas óptimas a los 25-40ºC y máximas entre 35 y 47ºC. La mayor parte de
las eubacterias (incluyendo las patógenas) pertenecen a esta categoría. La mayor parte de los
microorganismos que viven en ambientes templados y tropicales, incluyendo los simbiontes y parásitos,
pertenecen a esta categoría. Las únicas formas de vida capaces de vivir por encima de 65ºC son todas
procariotas. ​Los termófilos presentan óptimos a 50-75ºC y máximos entre 80 y 113ºC. Dentro de esta
categoría se suele distinguir las termófilas extremas (=hipertermófilas), que pueden llegar a presentar
óptimos cercanos a los 100ºC, y que taxonómicamente pertenecen al dominio de las Archaea. Los
hábitats naturales con temperaturas permanentemente altas (por encima de 45-50ºC) están restringidos a
unas pocas zonas de la biosfera, normalmente relacionadas con fenómenos volcánicos. Los
hipertermófilos, con óptimos por encima de los 80ºC son de hecho incapaces de crecer a menos de
37oC, como las citadas arqueas (ej., Thermoproteus, Pyrococcus, Pyrodictium). La arquea Pyrolobus
fumarii, habitante de los humeros termales submarinos tiene su óptimo nada menos que a 105ºC y puede
llegar a aguantar 113ºC, y parece que detiene su metabolismo (por “frío”) a la “agradable” temperatura
de 90ºC. Las termófilas facultativas pueden crecer a menos de 37ºC, como p. ej. la eubacteria Thermus
aquaticus. .
13.-a.-¿Qué es la actividad del agua ?
 b..- Una E.coli que crece feliz en excretas de vaca .En un ambiente anóxico. Indicar
fisiológicamente que ocurre.
14.-Enterobacterias totales y fecales
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable
(NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción
de ácido y gas al incubarlos a 35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga
sales biliares. Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa. En la
fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la
recuperación de los microorganismos dañados que se encuentren presentes en la muestra y que sean
capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como
medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante. La
determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los
tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar
la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de 24
a 48 h. La búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales
se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul
de metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas

15.-a.-Tindalización
La tindalización es un método de ​esterilización mediante calentamiento discontinuo (por lo general de
alimentos), que debe su nombre a ​John Tyndall (1820-1893), que lo ideó en 1887. Consiste en
someter la sustancia a esterilizar a un proceso seriado de elevación y disminución de la temperatura,
de tal modo que en cada una de esas etapas se eliminen paulatinamente las ​esporas presentes a medida
que se transforman en gérmenes activos. Se requiere un mínimo de tres sesiones de elevación y
disminución de la temperatura. Todavía se usa ocasionalmente.Un método de esterilización simple y
eficaz usado hoy en día es calentar la sustancia que se quiere esterilizar a 121° C durante 15 minutos,
utilizando un sistema sometido a presión. Si la esterilización bajo presión no es posible debido a la
falta de equipo o a la necesidad de esterilizar algo que no resista esa temperatura tan alta, se puede
usar un calentamiento no presurizado a una temperatura de hasta 100° C, el punto de ebullición del
agua. El calor matará las ​bacterias​, aunque las ​endósporas capaces de germinar posteriormente en
forma de nuevas células bacterianas pueden sobrevivir. La tindalización se puede utilizar para
eliminar estas esporas una vez que han germinando.​1​​
La tindalización consiste esencialmente en calentar la sustancia hasta el punto de ebullición (o un
poco por debajo del punto de ebullición) y mantenerla en este punto durante 15 minutos, repitiendo el
proceso en tres días seguidos. Después de cada calentamiento, el período de reposo permitirá que las
esporas que hayan sobrevivido germinen en células bacterianas; estas células serán destruidas por el
calentamiento del día siguiente. Durante los períodos de reposo, la sustancia esterilizada se mantiene
en un ambiente húmedo a una temperatura ambiente cálida, que conduce a la germinación de las
esporas. Cuando el ambiente es favorable para las bacterias, es propicio para la germinación de las
células de las esporas, pero no se forman nuevas esporas a partir de las células bacterianas en este
entorno (véase ​endóspora​).
El proceso de tindalización suele ser efectivo en la práctica, pero no se considera totalmente fiable:
algunas esporas pueden sobrevivir y después germinar y multiplicarse.

b- ¿Qué son xerófilos?​ Ejm

XERÓFILOS. Microorganismos que viven en presencia de alta sequedad o ausencia de agua.
16.-Pasteurización. A un microorganismo sometido a una pasteurización ligera 80°c x 5 min. Qué
sucede
17.-¿Por qué E. coli no sobrevive a pH ácido? Los mecanismos de inactivación de E. coli por
acidificación consisten en la acidificación intracelular, la cual daña o interrumpe procesos bioquímicos
clave. A bajos valores de pH (pH≤3), el ingreso de protones se da de manera más rápida que la
capacidad de las células por mantener la homeostasis. Los ácidos orgánicos penetran en la membrana
celular y se disocian dentro de la célula, lo que produce que el protón liberado reduzca el pH
intracelular. A menor pH en el exterior de la bacteria, mayor es el flujo de ácidos orgánicos hacia el
interior. Asimismo, el ácido se acumula en la membrana y el constante flujo de protones hace que con el
tiempo se agote la energía celular, causando la muerte. Se sabe que E. coli comienza a inhibirse a
valores de pH menores a 4.(Romero, López-Malo, & Palou, 2011) Romero, E., López-Malo, A., &
Palou, E. (2011). Escherichia coli de tipo patógeno en alimentos y modelación de su inactivación al
aplicar diversos factores de conservación. Temas selectos de ingeniería de alimentos, 28-39.
​18.- a.- De la pregunta anterior. Considere que microorganismo es normalófilo y aerotolerante.
Indique que va suceder si se termina de consumir totalmente la glucosa.

Teniendo en cuenta la tolerancia al oxigeno las bacterias anaerobias se clasifican en: ​Anaerobias
estrictas: Crecen en atmósferas con una tensión de oxígeno inferior a 0.5%.El oxígeno molecular les
resulta tóxico. Los hay que realizan fermentación y los hay que realizan algún tipo de respiración
anaerobia. Por ejemplo, Acitomyces, Clostridium, Porphyromonas o Propionibacterium. Anaerobias
aerotolerantes: Toleran el oxígeno hasta un 8% pero son incapaces de utilizarlo para su metabolismo. La
tolerancia al oxígeno de éstas bacterias está dada por la presencia de enzimas superoxido dismutasa
(SOD), catalasa y peroxidasa que catalizan la conversión de radicales superoxido a peróxido de
hidrógeno menos tóxico y a oxígeno molecular. No necesitan el oxígeno pero que tampoco les es
perjudicial. Todos los aerotolerantes conocidos son organismos fermentadores. Por ejemplo,
Streptococcus mutans.
Anaerobios Facultativos: No necesitan oxígeno para su desarrollo normal, pero si está presente lo
pueden utilizar metabólicamente, es decir que crecen bajo condiciones tanto aeróbicas como
anaeróbicas utilizando el oxígeno como aceptor final de electrones. Utilizan preferentemente respiración
aerobia en presencia de oxígeno, pero tienen la capacidad o facultad, de ahí el nombre, de realizar
fermentación o algún tipo de respiración anaerobia si no disponen de oxígeno. Por ejemplo, Escherichia
coli, Salmonella, Listeria o Staphylococcus. Microaerofilicas: Crecen en presencia de tensiones de
oxigeno mínimas y lo metabolizan utilizándolo como aceptor final de electrones. Necesitan atmósfera
de CO2 . Qué ocurrirá cuando se acabe la glucosa. Glucosa ausente, lactosa presente: ocurre una fuerte
transcripción del operón lac. El represor lac es liberado del operador porque el inductor (alolactosa) está
presente. Los niveles de AMPc son altos porque no hay glucosa, así que CAP está activa y unida al
ADN. CAP ayuda a que la ARN polimerasa se una al promotor, lo que permite altos niveles de
transcripción.
b.- En un microorganismo psicrotrofico heterolactico explique usted como se desarrolla la
regulación génico del metabolismo de la lactosa si en el medio existe una doble concentración de
arabinosa y glucosa.
Los microorganismos psicrófilos son aquellos cuya temperatura de crecimiento óptima es baja,
aproximadamente 15°C o inferior, y poseen una temperatura máxima de crecimiento de
aproximadamente 20°C. Estos microorganismos crecen a temperaturas de refrigeración y se encuentran
en ambientes donde la temperatura está siempre por debajo de 15 a 20°C. Están presentes en suelos
árticos y alpinos, altas latitudes, formaciones de hielo y aguas oceánicas profundas. La mayoría de los
organismos psicófilos son bacterias o archeas, pero también hongos y algunas especies de levaduras. La
mayoría de los las bacterias psicrófilas halladas en alimentos son Gram negativas, y engloban especies
los géneros Aeromonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Pseudomonas, Serratia y Vibrio. Entre los
microorganismos Gram positivos se incluyen especies de Bacillus, Clostridium y Micrococcus. En
segundo lugar, los microorganismos psicrotrofos, también denominados psicrofilos facultativos o
psicrotolerantes, son microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento se encuentra en el rango
mesófilo, por encima de entre los 15 y 20°C, más cercana a la temperatura ambiente, pero pueden
también multiplicarse a temperaturas inferiores a 7°C. Estos microorganismos crecen en ambientes
donde la temperatura fluctúa, estando adaptadas a grandes oscilaciones. Son los principales
microorganismos implicados en el deterioro de los alimentos en refrigeración. Estos microorganismos
son traídos en los alimentos de sus hábitats mesófilos y continúan creciendo en el ambiente refrigerado,
aunque de forma más lenta. Dentro de los microorganismos psicrotrofos, las bacterias son las
principales responsables del deterioro de los alimentos refrigerados de origen animal, mientras los
mohos y verduras lo son en frutas y hortalizas. Fermentación heteroláctica En esta fermentación, su
producto final, no es exclusivamente el ácido láctico como lo es la fermentación homolactica. En este
tipo de fermentación se pueden producir otros productos finales como ácido acético y ácido fórmico
generados por bacterias del género Bifidobacterium. Las bifidobacterias son un grupo predominante de
la microflora del colon que puede representar hasta el 25% del número total de bacterias presentes.
Debido a su naturaleza heterofermentativa, las bifidobacterias pueden producir ácido láctico y etanol,
así como varios ácidos grasos de cadena corta tales como ácido acético y ácido fórmico. Algunos
investigadores también han mencionado la producción de pequeñas cantidades de dióxido de carbono y
ácido succínico por parte de estos microorganismos. La reacción se representa por la siguiente ecuación:
Fermentación homoláctica Todos los miembros del género Streptococcus, Pediococcus y muchas
especies de Lactobacillus fermentan la glucosa fundamentalmente a ácido láctico con poca acumulación
de otros productos finales. En esta reacción el piruvato se reduce a ácido láctico por acción de la enzima
láctico deshidrogenasa, actuando el NADH como dador de electrones. Esto ocurre en la tercer etapa de
la vía glucolítica.
REGULACIÓN POSITIVA Y NEGATIVA DE UN OPERÓN A TRAVÉS DE UNA ÚNICA
PROTEÍNA REGULADORA
El operón arabinosa (ara) de Escherichi coli es un sistema más complejo que el descrito de la lactosa.
La arabinosa, una pentosa, puede ser usada como sustrato metabólico a través de la vía de las
pentosas-fosfato; las enzimas necesarias para su metabolización son: arabinosa isomerasa, ribulosa
quinasa y ribulosa-5-fosfato epimerasa que están codificadas por los genes estructurales araA, araB y
araD. El operón ara incluye además de los tres genes estructurales: a) una región reguladora que a su
vez tiene dos operadores araO1 y araO2 b) un sitio de unión para la proteína reguladora (araC)
denominado araI (I=inductor) c) un promotor adyacente a araI y en la proximidad del promotor se
encuentra d) un sitio de unión para la CAP-AMPc. La proteína araC está codificada por un gen araC
próximo que se transcribe desde su propio promotor (próximo a araO1) en dirección opuesta a los genes
estructurales. El papel de la proteína es complejo, ya que es capaz de regular su propia síntesis
uniéndose a araO1 y cuando su concentración supera las cuarenta copias por célula reprime su síntesis.
Respecto a los genes estructurales, actúa también como un regulador positivo y negativo, uniéndose a
araO2 y a araI, lo cual permite una acción distinta dependiendo de las siguientes condiciones
metabólicas:
a) Si la glucosa es abundante y la arabinosa es escasa: la proteína reguladora araC se une en dos puntos,
a araO2 y araI formándose un lazo de ADN que no permite la transcripción de los genes estructurales.
b) Si la glucosa es escasa y la arabinosa es abundante: el complejo CAP-AMPc es abundante y se une a
su sitio del ADN, adyacente a araI. La arabinosa funciona como un activador, al unirse a la proteína
araC altera su conformación, y al unirse ésta a araI se combina con CAP-AMPc y aumenta la
transcripción.
c) Si ambos son escasos o ambos son abundantes, el sistema de regulación no está claro aunque se sabe
que hay represión.

19.- a.-¿Qué son osmófilos?

Los organismos osmófilos son microorganismos adaptados a ambientes con altas presiones osmóticas,
tales como altas concentraciones de azúcar. Los osmófilos son similares a los organismos ​halófilos
(amantes de la sal) debido a que un aspecto crítico de ambos tipos de ambiente es su baja actividad de
agua. Las altas concentraciones de azúcar representan un ​factor limitante del crecimiento para muchos
microorganismos​, sin embargo los osmófilos se protegen contra esta alta presión ​osmótica mediante la
síntesis de ​osmoprotectores tales como ​alcoholes y ​aminoácidos​. Muchos microorganismos osmófilos
son del linaje de ​levaduras​ de hongos, sin embargo, una variedad de bacterias también son osmófilos.
Las levaduras osmófilas son importantes porque causan deterioro en la industria azucarera y dulce,
con productos tales como zumos de frutas, concentrados de jugos de frutas, azúcares líquidos (como
jarabe dorado), miel y en algunos casos mazapán. Entre los más osmófilos se encuentran:

Organismo Mínimo a​W

Saccharomyces rouxii 0,62

Saccharomyces bailii 0,80

Debaryomyces 0,83

Wallemia sebi 0,87

Saccharomyces cerevisiae 0,90

20.-¿Qué son sacarófilos?

En medios hipertónicos (cuando la aw del exterior es menor que la del citoplasma). Las bacterias
poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima
de la del medio (para garantizar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo). Ello se
logra esencialmente aumentando la concentración de un soluto muy soluble en agua en el interior
celular, soluto llamado genéricamente soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles
mecanismos: bombeando iones al interior; sintetizando una molécula orgánica osmóticamente activa;
bombeando sustancias osmoprotectoras. Existen ciertos microorganismos especializados que viven en
medios hipertónicos, y en general se llaman osmófilos. Entre los osmófilos podemos distinguir los
sacarófilos y los halófilos. Uno de los mejores ejemplos de microorganismos sacarófilos no es una
bacteria, sino las levaduras, que viven en jugos vegetales, néctares, zumos, etc. Utilizan como solutos
compatibles polioles como el sorbitol, el ribitol, etc.
21.-

Nombre de bacterias Medio de cultivo T° pH óptimo Aw

Lactobacillus plantarum MRS 37 6 0.9

(Man Rogosa Sharpe)
Lactobacillus casei

Escherichia coli TSB 37 7 0.9

Salmonella typhimurium (Tryptone Soy Broth)

Saccharomyces cerevisiae Agar Sabouraud 28 5 0.9

Saccharomyces uvarum

Pyrococcus furiosus - 75 5.6 0.95

Methanobacterium
ruminantium

22.-Una bacteria litobionte y cosmundolítica es mixotrofa .. Evolutivamente tiene el operón Gal

indique ud. ¿Cómo está el operón si permanentemente vive en una roca del desagüe de una
empresa que procesa quesos frescos.
23.-Un jarabe que se procesa con el almidón es tindalizado (TT 80°c x 20’ X 3 veces).Indicar
fisiológicamente que pasó con los microorganismos presentes