Universidad Nacional Autónoma de Chota

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PRÁCTICA N° 05
TECNOLOGÍA DE PRODUCTOS NO ALIMENTARIOS

“Extracción y separación de pigmentos vegetales”

I. OBJETIVOS

 Extraer pigmentos vegetales de muestras de espinaca y remolacha.

 Separar las Xantofilas del extracto de espinaca.
 Diferenciar carotenoides, clorofilas y xantofilas por cromatografía de
papel del extracto de remolacha y espinaca

II. BASES TEÓRICAS

En las plantas y otros organismos fotosintéticos existen diferentes tipos de

clorofilas.). Los pigmentos accesorios absorben energía que la clorofila es
incapaz de absorber. Los pigmentos accesorios incluyen clorofila b (en algas
y protistas las clorofilas c,d y e), xantofila(amarilla) y caroteno, anaranjado (
como el beta caroteno, un precursor de la vitamina A ). La clorofila a absorbe
las longitudes de ondas violeta, azul, anaranjado- rojizo, rojo y pocas
radiaciones de las longitudes de onda intermedias ( verde-amarillo-anaranjado
).

Los pigmentos accesorios actúan como antena, conduciendo la energía que

absorben hacia el centro de reacción. Una molécula de clorofila en el centro
de reacción puede transferir su excitación como energía útil en reacciones de
biosíntesis.
Los carotenoides absorben la longitud de onda azul y un poco en el verde,
estos pigmentos tienden a ser rojos, amarillos o anaranjados. La clorofila b
absorbe en el azul, y en el rojo y anaranjado del espectro ( con longitudes de
 ondas largas y baja energía ). La parte media del espectro compuesta por
longitudes de onda amarilla y verde es reflejada y el ojo humano la percibe
como verde. La distribución de los organismos fotosintéticos en el mar se debe
a esto. La longitud de onda corta (más energética ) no penetra más allá de 5
métros de profundidad. La habilidad de absorber parte de la energía de
longitud de onda larga (menos penetrante ) debe haber sido una ventaja para
las algas fotosintéticas primitivas, que eran incapaces de encontrarse todo el
tiempo en la zona superior ( fótica) del mar. Las algas verdes y pardas se
instalan en la zona litoral superior, en tanto que en la zona profunda
predominan las algas rojas.

III. MATERIALES E INSUMOS

 Hojas de espinaca.
 Matraz
 Vasos de Precipitación Alcohol 96° Embudo.
 Papel de filtro.
 Mortero.
 Placa Petri.
 Pipeta y aspira-pipetas.
 Tubo de ensayo.
 2 ml de Benceno o Tolueno o Gasolina
 Tijeras y cinta
 Gradilla
IV. PROCEDIMIENTO

4.1. Extracción de Pigmentos de Espinaca

 Trozar las hojas de Espinaca limpias en el mortero.

 Agregar alcohol en pequeñas cantidades hasta lograr una pasta de
color verde intenso, hasta cerca del ras del mortero - Filtrar con un
embudo y papel filtro.

4.2.Extracción de Pigmentos de Remolacha

 Rayar la remolacha
 En un beaker poner la muestra y agregar 100 ml Agua destilada.
 Colocar en el Termo agitador a 70°C durante 20 a 30 minutos
 Filtrar con un embudo y papel filtro

4.3. Separación de Xantofilas (Espinaca)

 En un tubo de ensayo agregar 10 ml de muestra de extracto de espinaca

 Agregar 2 ml de Gasolina despacio y resbalando a la pared
 Voltear varias veces
 Dejar reposar unos minutos

4.4. Alteración de los pigmentos

 Medir el pH del extracto de Espinaca

 En el tubo de ensayo 01 agregar 5 ml de muestra de extracto de
espinaca + 1 ml de NaOH
 En el tubo de ensayo 02 agregar 5 ml de muestra de extracto de
espinaca + 1 ml ácido acético
 En el tubo de ensayo 03 agregar 5 ml de muestra de extracto de
espinaca + 1 ml H2O
 Ver los cambios
 Medir el pH de los 03 tubos.

 Medir el pH del extracto de Remolacha

 En el tubo de ensayo 04 agregar 5 ml de muestra de extracto de
remolacha
 Agregar gota a gota ácido acético
 Ver los cambios
 En el tubo de ensayo 04 agregar 5 ml de muestra de extracto de
remolacha
 Agregar NaOH
 Ver los cambios
  Medir el pH de ambos tubos.

4.5. Diferenciación Cromatográfica

 Cortar 02 tiras de papel filtro

 Pegar cada una a un lápiz
 Colocar un lápiz sobre cada muestra de extracto
 Dejar Reposar
 Retirar
 Dejar Secar
 Observar los resultados

V. RESULTADOS

Extracción de Pigmentos de Espinaca

Se obtuvo una dilución color verde oscuro

La extracción de los pigmentos se dio por la machacacion de la espinaca en el

mortero, el cual es el cloroplasto del vegetal el que aportara la fijación de la
coloración.
Separación de Xantofilas (Espinaca)

Las primeras clorofilas formadas fueron de xantofilas

La primera capa formada fue de color amarillo transparente, después la siguiente
capa fue de color amarillo verdoso, seguida de un verde militar y por último un
color verde olivo.
 Los extractantes son los solventes que extraen simultáneamente todos los pigmentos
de la hoja del vegetal en este caso utilizamos la gasolina se obtuvo la colocación que
se indica en la tabla.

Cuadro N° 1: Indicador de color

Color
Verde oscuro Xantofilas

Amarillo Clorofilas a, clorofilas b

Fuente: elaboración por el grupo

Alteración de los pigmentos

1 2 3

Los cambios que se presentaron fueron la declaración en las diferentes muestras.

Cuadro N°2: Fuente de datos de la espinaca

Muestra Reactivo PH Color
M1 Hidróxido de sodio 6 Verde claro
M2 Agua destilada 6 Verde caña
M3 Vinagre 4 Verde oscuro
Fuente: elaboración por el grupo
Alteración de los pigmentos de la remolacha

1 2 3

En la alteración de los pigmentos de la remolacha el pH del ácido acético fue el

que interactúa en el pH de la remolacha (4.5-5.5), obteniendo un pH general acido.

Cuadro N°3: Fuente de datos de la Remolacha

Muestra Reactivo PH Color

M1 Hidróxido de 5 Rojo
sodio muy
claro

M2 Agua destilada 6 Rojo

claro

M3 Vinagre 4 Rojo
oscuro

Fuente: elaboración por el grupo

Diferenciación Cromatográfica (Espinaca)

Caroteno
Xantofila
sClorofila A
Clorofila B

Extracción de Pigmentos de Remolacha

VI. DISCUCIONES

MANCILLA, CASTREJÓN, & ROSAS, (2015) Nos redacta que para la

práctica de extracción de pigmentos naturales se hierve las hojas de la espinaca
en agua para quitar el almidón de las hojas; la extracción de las clorofilas se
puede realizar con una mezcla de metanol y éter dietílico en baño maría hasta
quedar las hojas de la planta incoloras, para una extracción líquido-líquido en
un embudo de separación en solución saturada de NaCl (para evitar que se
formaran emulsiones) y éter dietílico el cuál extrae pigmentos, clorofilas y
betacarotenos, por lo cual en este disolvente fue en el que se obtuvieron los
pigmentos para la cromatografía posterior
- En la práctica se obtuvo mediante triturando de la muestra en un mortero
con alcohol hasta que desprenda el color de las hojas y para la extracción
liquido-liquido no se usó los compuestos que menciona el autor ni el
embudo, pero si se utilizó en la práctica gasolina, NaOH y acido acético
para obtención de pigmentos, con respecto a lo que menciona el autor es
más recomendable hervirlo los vegetales para más facilidad de
desprendimiento de los colorantes de los vegetales y lograr sacar mejor las
muestras y se divisan más los pigmentos.
Vega Viera , (2014) Nos menciona que Cuando una solución de clorofila es
iluminada con luz blanca o azul se produce un fenómeno de excitación
molecular, observable por la emisión de la luz de color rojo vinoso intenso. La
luz emitida por fluorescencia en siempre de mayor longitud de onda y de
menor energía que la luz incidente, pues siempre algo de esa energía se disipa
en forma de calor.
- En la practica se dejo a T° ambiente durante dos días y los colores que
salió en la muestra no son tan claros quizá porque mucho tiempo lo hemos
dejado la muestras para ser evaluados.

VII. CONCLUSIONES

 Gracias a esta práctica, se logró observar cómo cambian las

tonalidades de estos pigmentos fotosintéticos que componen a las
plantas y se3encuentran en los cloroplastos de la célula vegetal y les
dan color al reflejar o transmitir la luz visible, además de que son los
que constituyen el sustrato físico químico de la fotosíntesis.

 Se obtuvieron los pigmentos fotosintéticos de la clorofila, que son los

que les dan color a las hojas de las plantas ya que la fotosíntesis es un
proceso que permite a los vegetales obtener la materia y la energía que
necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se lleva a cabo gracias
a la presencia en las hojas y en los tallos jóvenes de pigmentos, capaces
de captar la energía lumínica
VIII. CUESTIONARIO

1. Señale Antocianinas comunes en frutas y vegetales

Según (Castañeda & Guerrero, 2016), mencionan que la gran diversidad de
antocianinas presentes en la naturaleza las convierte en un grupo complejo y
muy interesante. Se han reportado alrededor de 635 antocianinas diferentes
donde las más comunes son: Antocinidinas, Cianidina, Delfinidina,
Pelargonidina, Petunidina, Peonidina.
2.

Figura 1: estructura y localización de la clorofila

3. ¿Qué otros pigmentos presentan la espinaca además de las clorofilas?

Según (Vergara, 2010), menciona que la espinaca presenta otros pigmentos
los cuales están ocultos y en baja cantidad como lo son: el amarillo (xantofila
y xantinas), y el anaranjado (carotenos).

4. ¿Qué son las xantofilas?

Según (Baez , 2006), menciona que las xantofilas, son compuestos químicos
parecidos a los carotenos, y a diferencia de estos últimos además de contener
carbono e hidrógeno contienen uno o más átomos de oxígeno dentro de la
molécula, pero al igual que los carotenos, presentan colores llamativos (rojo,
naranja y amarillo). Vegetales como el pimiento amarillo y rojo representan
una fuente importante de xantofilas.

5. ¿Cómo son los carotenoides?

Según (Sanutricion, 2012), menciona que los carotenoides son compuestos
naturales presentes en diversas estructuras de plantas y en gran variedad de
animales, algas, hongos y bacterias. Estos pigmentos son responsables del
color de flores y frutos (para favorecer la polinización y dispersión de
semillas), o de estructuras animales como las plumas y picos de algunos
pájaros, el exoesqueleto de crustáceos y el músculo o la piel de algunos peces.
Son considerados compuestos indispensables para la vida, fundamentalmente
debido a las funciones que llevan a cabo en relación con la fotosíntesis
(captación de luz, foto protección).
Los carotenoides son tetra terpenos constituidos por múltiples unidades
isoprenoides con un anillo de ciclo hexano sustituido e insaturado en cada uno
de los extremos. Son moléculas lipofilicas, con nula solubilidad en agua. La
propiedad de absorber luz se deriva de la presencia de 7 o más enlaces dobles
conjugados con posibilidad de absorber luz visible, con colores que van del
amarillo al rojo.

6. ¿Cuál es la alteración de la clorofila en medio ácido?

Según (Calvo, s.f), resalta que la clorofila puede sufrir distintos tipos de
alteraciones. La más frecuente, y la más perjudicial para el color de los
alimentos vegetales que la contienen, es la pérdida del átomo de magnesio,
formando la llamada feofitina, de un color verde oliva con tonos marrones, en
lugar del verde brillante de la clorofila. Esta pérdida del magnesio se produce
por sustitución por dos iones H+, y consecuentemente se ve favorecida por el
medio ácido. La pérdida es irreversible en medio acuoso, por lo que el cambio
de color de los vegetales verdes es un fenómeno habitual en procesos de
cocinado, enlatado, etc. La clorofila b es algo más estable que la clorofila a.
Hay que tener en cuenta que los vegetales son siempre ácidos, y que en el
tratamiento térmico se liberan generalmente ácidos presentes en vacuolas en
las células, y que hacen descender el pH del medio.

7. ¿Cuál es la alteración de las betalaínas al variar su pH?

Según (Arevalo, 2013), resalta que las betalaínas, al ser ionizables en medio
ácido, sufren cambios de color tanto a un pH por debajo de 3.5 pero no se
hidrolizan por lo cual se pueden utilizar para alimentos ácidos. Su máxima
estabilidad está entre pH 5 y 6.

8. Describa colorantes sintéticos permitidos por la FDA

9. ¿Cuál es el principal componente del colorante obtenido de la
espinaca?
Según (Vergara, 2010), menciona que el mayor colorante en la espinaca son
las clorofilas tipo a y b.

10. ¿Cuál es la composición del carotenoide obtenido a partir de la

remolacha?
Según (Morales, 2012), resalta que la estructura está formada por enlaces
dobles carbono-carbono interactúan entre sí en un proceso llamado
conjugación. Mientras el número de enlaces dobles conjugados aumenta, la
longitud de onda de la luz absorbida también lo hace, dando al compuesto una
apariencia más rojiza. Existen también carotenoides de color verde (α-
Caroteno), amarillo (ßcaroteno), y anaranjado (neurosporaxantina).

11. ¿Qué entiende usted por color ASTA y como se puede cuantificar?
Según (Gil & García, 2001), menciona que el método ASTA se basa en una
extracción química de los pigmentos, y se calcula con la siguiente formula:

Figura 2: fuente (Palacios, 2015)

Donde Am es la absorbancia de la muestra a 460 nm.

12. ¿Qué pigmentos presentan las flores?

Según (Mamani, 2018) menciona que los principales pigmentos que
encontramos en las flores son: Las antocianinas son más visibles en los
pétalos de las flores, los carotenoides y clorofilas.

13. ¿Cuál es la nomenclatura de los pigmentos sintéticos?

Según (Parra, 2004), resalta para la FDA los nombres comunes de los
colorantes dejaron de ser usados en cambio se usa como prefijo el color y
luego el numero asignado al colorante, por ejemplo, el colorante Amaranto
pasó a denominarse como FD&C ROJO Nº2

14. ¿Qué colorantes tienen IDA establecida?

Según (Moral, 2017), resalta que, en los diversos países industrializados, están
autorizados alrededor de 125 colorantes diferentes. Sin embargo, en la CE., su
número ha sido reducido a una veintena y puede modificarse regularmente, de
acuerdo con los progresos de los estudios toxicológicos y clínicos.

15. ¿Qué colorantes que pueden ser utilizados de acuerdo con BPF?
Según (CODEX ALIMENTARIUS, 2018) indica que las BPF son:
 Todos los aditivos alimentarios regulados por las disposiciones de esta Norma
se emplearán conforme a las condiciones de buenas prácticas de fabricación,
que incluyen lo siguiente:
a) La cantidad de aditivo que se añada al alimento se limitará a la dosis mínima
necesaria para obtener el efecto deseado.
b) La cantidad de aditivo que pase a formar parte del alimento como
consecuencia de su uso en la fabricación, elaboración o envasado de un
alimento y que no tenga por objeto obtener ningún efecto físico o técnico en
el alimento mismo, se reducirá en la mayor medida que sea razonablemente
posible.
c) El aditivo será de una calidad alimentaria apropiada y se preparará y
manipulará de la misma forma que un ingrediente alimentario.

IX. BIBLIOGRAFÍA

- Arevalo, W. (2013). es.scribd.com. Obtenido de

https://es.scribd.com/doc/171969509/BETALAINAS
- Baez , J. (2006). www.dcne.ugto.mx. Obtenido de
http://www.dcne.ugto.mx/Contenido/revista/numeros/7/A6.pdf
- Calvo, M. (s.f). milksci.unizar.es. Obtenido de
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/pigmentos/clorofila.html
- Castañeda, A., & Guerrero, J. (2016). web.udlap.mx. Obtenido de
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- CODEX ALIMENTARIUS. (2018). www.fao.org. Obtenido de
http://www.fao.org/gsfaonline/docs/CXS_192s.pdf
- Gil, R., & Garcia, S. (2001). www.aida-itea.org. Obtenido de http://www.aida-
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- Mamani, J. (2018). repositorio.unap.edu.pe. Obtenido de
http://repositorio.unap.edu.pe/bitstream/handle/UNAP/7702/Mamani_Mamani_Jea
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- MANCILLA, C., CASTREJÓN, C., & ROSAS, T. (2015). EXTRACCIÓN Y
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES. Mexico .
- Moral, M. (2017). eprints.ucm.es. Obtenido de
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- Morales, A. (2012). dspace.ucacue.edu.ec. Obtenido de
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https://es.slideshare.net/Nanomeme/extracin-de-pigmentos-de-espinaca