UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA

TITULACIÓN DE INGENIERÍA QUÍMICA

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Y BIOTECNOLOGIA

OCTAVO CICLO

INTEGRANTE: TATIANA SARANGO

PRÁCTICA DE LABORATORIO

ABRIL-AGOSTO 2018
Tema: Obtención del ácido cítrico a partir de un extracto liquido de panela utilizando
aspergillus Níger.

Objetivos:

 Recuperar el ácido cítrico

 Determinar relación volumen/área del ácido cítrico
 Conocer el proceso de la elaboración de ácido cítrico a partir de la panela

Resumen:

En la presente practica se desarrolló la obtención del ácido cítrico a partir de la panela utilizando
Aspergillus Níger el cual para este proceso se usa como agente fermentador, para ello se trabajó
con 111 gr de panela blanca, a la cual se le agrego agua a un volumen de 600ml, para luego
disolverla en la plancha de calentamiento, posteriormente se tomó los parámetros de pH, acidez
y brix, luego de esto se procedió a llevar las muestras a la autoclave durante 2 horas. Para este
proceso es necesario llevar a cabo las siguientes fases como la preparación del sustrato, la
fermentación aeróbica de la sacarosa por el aspergillus, la separación del ácido cítrico del sustrato
por precipitación al añadir la cal, para formar el citrato de calcio, nuestro proceso de recuperación
de ácido cítrico se lo realizo con ácido Sulfúrico para así separar el sulfato de calcio y finalmente
rota evaporar y así obtener los cristales deseados (cítrico).

Palabras claves: Aspergillus Níger, brix, fermentación, agente fermentador, rota

evaporar.

Introducción:

La producción de ácidos orgánicos mediante el uso de microorganismos constituye una fuerza

motriz de gran importancia para el estudio de regulaciones metabólicas, lo cual permite el
desarrollo de la biotecnología.

El ácido cítrico (ácido 2-hidroxi-1,2,3- propano tricarboxílico), es uno ácido orgánico que puede
ser considerado natural, sin embargo, también puede ser sintetizado vía laboratorio, es un ácido
orgánico que se encuentra en casi todos los tejidos animales y vegetales, se presenta en forma de
ácido de frutas en el limón, mandarina, lima, toronja, naranja, piña, ciruela, guisantes, melocotón,
así como en los huesos, músculos y sangre de animales. Es considerado un ácido carboxílico
versátil y ampliamente utilizado en el campo de la alimentación, de los productos farmacéuticos
y cosméticos, entre otros. (Thangavelu y col. 2011). Físicamente es un polvo cristalino blanco
que puede presentarse de manera anhidra o como mono hidrato, considerado un tríacido
carboxílico.

Es producido mediante fermentación, que puede llevarse a cabo en tanques profundos

(fermentación sumergida, que es el método más común) o en tanques no profundos (fermentación
de superficie) usando carbohidratos naturales, tales como azúcar y dextrosa como sustratos, y
Aspergillus Níger como organismo de fermentación. El proceso de obtención tiene varias fases
como la preparación del sustrato, la fermentación aeróbica de la sacarosa por el Aspergillus, la
separación del ácido cítrico del sustrato por precipitación al añadir hidróxido de calcio o cal
apagada para formar citrato de calcio. Después se añade ácido sulfúrico para descomponer el
citrato de calcio. La eliminación de impurezas se realiza con carbón activado o resinas de
intercambio iónico, se continúa con la cristalización del ácido cítrico, el secado o deshidratación
y el empaquetado del producto. El ácido cítrico es un buen conservador y antioxidante natural
que se añade industrialmente como aditivo. Sus funciones son como agente secuestrante, agente
dispersante y acidificante.

En la producción de ácido cítrico con Aspergillus Níger los niveles de los nutrientes y las
condiciones ambientales, como pH, agitación, temperatura, iones metálicos, concentración de
fosfato, fuente de nitrógeno y carbono, alcoholes y aditivos, son factores importantes que regulan
la morfología del microorganismo y el proceso fermentativo.

Materiales:

 Matraz Erlenmeyer de 100 mL

 Matraz Erlenmeyer de 500 mL
 Frasco BOECO de 500 mL
 Asa de platino
 Pipeta de 2 mL
 Probeta de 500mL
 Mortero con pistilo
 Cuchillo
 Vaso de 50 mL
 Papel aluminio
 Algodón (suficiente para hacer los tapones de los Erlenmeyer)
 Gasa (suficiente para hacer los tapones de algodón)
 Termómetro
 Piceta
 Espátula
Sustancias:
 Panela Blanca
 Cal
 Ácido sulfúrico
 Agua
 Aspergillus Níger
 NH4NH3
 KH2PO4
Metodología:

 Obtención de la materia prima La panela blanca que se utilizó para la práctica de

obtención de ácido cítrico fue adquirida por cada estudiante la misma que se la compro a
un comerciante que vende dicho producto.
 Control de calidad de la materia prima: Para esta práctica no se realizó ningún control
de calidad, ya que la panela se encontraba en buen estado.
 Acondicionamiento del mosto: Primeramente, pesamos 111gr de panela blanca, luego
se preparó la solución a un volumen de 600ml, luego se procedió a diluir la solución en
una plancha de calentamiento, y se tomó los parámetros de Ph, acidez y brix. Luego de
haber tomado todos los parámetros correspondientes se procedió a colocar las muestras
en la autoclave esto durante 2 horas para la esterilización del medio, una vez realizado
este paso se procedió a repartir en volúmenes iguales en los matraces (frasco boeco 300ml
y matraz 300ml para finalmente colocar 1ml de inoculo a cada matraz (aspergillus Níger)
el cual comenzara a crecer hasta alcanzar la fase terminal donde tiene lugar en mayor
medida la producción de ácido cítrico, para ello se les coloco a los recipientes algodón y
gasas, esto con el fin de maximizar la producción, finalmente se controla a lo largo del
proceso los parámetros correspondientes de PH, acidez y brix, esto durante 7 días.
 Preparación del inóculo: La inoculación de A. Níger se realizó tras la esporulación en
un medio de cultivo adecuado para obtener la suspensión de esporas necesarias para ser
inoculadas en el medio de fermentación. La preparación se hizo con el hongo aspergillus
Níger para lo cual se agregó 1 ml a cada matraz a una temperatura de 30ºC para que de
esta manera pueda crecer el hongo dentro del medio líquido.
 Control del proceso fermentativo: Finalmente para terminar nuestro proceso de
obtención de ácido cítrico, se llevó a cabo un control de 7 días, esto se realizó tomando
en cuenta cada 2 días, para realizar el control de los parámetros iniciales y finales de pH,
acidez, Brix hasta que el pH llegue a 3 y la cantidad de NaOH gastada sea de 1ml por
mosto y que los brix vayan disminuyendo, una vez concluido con los parámetros
establecidos, se procede a separar el micelio, compuesto por células muertas de
Aspergillus Níger mediante un proceso de filtración al vacío , para luego poder pesarla,
luego de esto se realiza otra filtración al vacío, a la cual se agrega cal esto debido a que
el Ph está en 3 y debe alcanzar un Ph mayor a 7, lo cual ocasiona que se forme la sal de
calcio del ácido cítrico, el citrato cálcico, que precipita y se separa mediante otra
filtración al vacío , lo cual hace que el citrato cálcico se descomponga al mezclarlo con
ácido sulfúrico, quedando ya el ácido cítrico libre y un residuo sólido de sulfato cálcico
que se separa mediante otra filtración al vacío . lo cual finalmente se lo rota evaporara
para de esta manera recuperar los cristales del ácido cítrico.
 Resultados y discusiones:

Control durante 7 días ac. Cítrico sin agitación. Solución frasco boeco

Dia pH Gasto de Normalidad Acid G Crecimiento Color Esporulado Brix acidez

NaOH del hongo micelio

1 5,83 0,2 0,02 0.42 Ninguno Ninguno no 16 2

2 5,4 0,2 0,02 0,42 Ninguno Ninguno no 15,02 2,4

3 5,2 0,3 0,03 0,63 Muy poco Blanco no 14 2,8

4 4,5 0,4 0,04 1,05 Muy poco Blanco no 13 3

5 4,1 0,7 0,07 1,47 Muy poco Blanco no 12,5 3,3

6 3,4 0,8 0,08 1,68 Muy poco Blanco no 11,5 3,7

7 3.0 0,9 0,09 1,89 Muy poco Blanco No 11 4,1

Control durante 7 días ac. Cítrico sin agitación. Solución matraz (500ml)

Dia pH Gasto de Normalidad Acid Crecimiento Color Esporulado Brix acidez

NaOH G del hongo micelio

1 5,64 0,2 0,02 0,42 Ninguno Ninguno no 16 2

2 5,3 0,3 0,03 0,63 Ninguno Ninguno no 15,3 2,2

3 5,0 0,4 0,04 1,05 Muy poco Blanco no 14, 2,7

4 4,6 0,4 0,04 1,05 Muy poco Blanco no 13,4 3,1

5 4,1 0,6 0,06 1,26 Muy poco Blanco no 12,8 3,6

6 3,7 0,8 0,08 1,68 Muy poco Blanco no 11,7 3,8

7 3.1 0,9 0,09 1,89 Muy poco Blanco No 11,5 4,4

 BIOMASA:

ac. Cítrico sin agitación. Solución frasco Boeco

Peso del hongo: 9,307gr

ac. Cítrico sin agitación. Solución matraz 500ml

peso del hongo: 5,979gr

la biomasa que se obtuvo al realizar la filtración al vacío, presento un color café claro, ambas
con un peso diferente esto por el periodo de los 7 días que se llevó a cabo la fermentación, con
una contextura gruesa y no esporulada, esto debido a su dureza y fragilidad ya que no se la
pudo extraer por completo.

Ácido cítrico recuperado

Peso final:0,583gr

Discusiones:

En la presente practica se trabajó con 111 gr de panela negra, en el matraz (300ml) se obtuvo
una cantidad de 0,583gr de ácido cítrico recuperado , y en el frasco Boeco de 300ml no se logró
apreciar nada ya que todo quedo adherido a las paredes y se intentó recuperar todo lo mayor
posible luego de la rota evaporación pero no se obtuvo nada , estos perjuicios se deben a las
malas filtraciones realizadas durante el proceso o algún inconveniente surgido durante la
iniciación de la práctica , lo cual no fue beneficioso ya que de esta manera no se obtuvo un
resultado satisfactorio para el segundo volumen.

Además, el peso de las biomasas que se obtuvo durante estos 7 días de proceso de fermentación
tuvo un peso diferente, frasco Boeco (300ml sol) con un peso de 9,307gr y el matraz (300ml de
sol) con un peso de 5,979, ambas biomasas presentaron un color café claro, una contextura gruesa,
no esporulada las cuales al momento de retirarlas de cada recipiente resulto un poco difícil ya que
no se las pudo sacar de manera completa si no por trocitos.

Conclusiones:

 Se realizaron las diferentes mediciones de los parámetros correspondientes al mosto

desde su acondicionamiento del mosto hasta el crecimiento de la biomasa que fue el
proceso que utilizamos para poder obtener nuestro ácido cítrico.

 La preparación del ácido cítrico consiste, en una fermentación aeróbica del azúcar,
utilizando un cultivo de Aspergillus Níger que es un hongo que produce como metabolito
primario ácido cítrico, por eso en este proceso se usa como agente fermentador. Luego la
posterior purificación, mediante el proceso cal -sulfúrico la recuperación final del
producto.

 La producción de ácido cítrico requiere niveles muy altos de oxígeno disuelto en el medio
de cultivo, para la formación de biomasa.

 Mientras más filtraciones al vacío se realicen en los distintos volúmenes de solución

más eficiente va hacer la recuperación de ácido cítrico
Recomendaciones:

 Las condiciones deben estar restrictamente cumplidas, en un ambiente estéril y con las
variables adecuadas.
 Tener cuidado al momento de filtrar al vacío ya que si no realiza bien este paso esto podrá
perjudicar nuestro proceso de obtención de acido cítrico, para ello se debe realizar las
filtraciones que sean necesarias.

Anexos:
Bibliografía
RÍOS, C. A. (14 de 05 de 2005). PRODUCCIÓN DE ÁCIDO CÍTRICO CON Aspergillus niger.
Scielo, 19. Recuperado el 23 de 07 de 2018, de
http://www.scielo.org.co/pdf/dyna/v73n150/a04v73n150.pdf

Rivada, J. F. (03 de 11 de 2008). PLANTA INDUSTRIAL DE PRODUCCIÓN DE ACIDO

CITRICO A PARTIR DE MELAZAS. Recuperado el 23 de 07 de 2018, de PLANTA
INDUSTRIAL DE PRODUCCIÓN DE ACIDO CITRICO A PARTIR DE MELAZAS:
http://rodin.uca.es/xmlui/bitstream/handle/10498/6411/34254675.pdf

Abín, L., Coto , O., Marreno, B., & Marreno, J. (2004). Estudio fisiológico de la producción de
ácido cítrico por Aspergillus niger O-5. CENIC Ciencias Biológicas, 15 - 18.