OBJETIVOS

Definir que es la tecnica histológica?

La técnica histológica es la serie de pasos ordenados que permiten preparar al

tejido para su observación a través del microscopio. El tejido se prepara para su
observación de acuerdo con el tipo de microscopio que será utilizado.

En el caso de la microscopía de campo claro, la técnica más común para preparar

las muestras es la técnica histológica ordinaria o de inclusión en parafina. En este
proceso, las muestras se infiltran en parafina, con el fin de que tengan la
consistencia adecuada para obtener los bloques con las muestras o especímenes.
Una vez que se tienen los bloques (inclusión), éstos se cortan en un equipo que se
llama micrótomo y con el que se obtienen cortes muy delgados (micrómetros de
espesor) lo que permite observar las estructuras celulares y tisulares. Un paso
más allá que ofrece la información más detallada corresponde al momento de
aplicar la tinción, que da colores a la muestra y gracias a ello es posible identificar
diversas estructuras mediante la observación de estas preparaciones con el
microscopio de campo claro

Se denomina técnica histológica al conjunto de operaciones a que se somete una materia

organizada (tejido biológico), a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio,
posibilitando la observación de estructuras no visibles al ojo humano.1

 Obtención del material histológico para estudiar

 Proceso de fijación
 Lavados
 Deshidratación
 Aclaramiento
 Infiltración
 Inclusión
 Microtomía
 Tinción
 Observación (Este último no es considerado como un paso de la técnica histológica por
varios autores)

Describir y explicar que efectos tiene sobre los tejidos cada una de las etapas o pasos de la técnica
histológica?

Obtención del material histológico[editar]

Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:

 Biopsia
- Biopsía excisional - Biopsia incisional - Biopsía endoscópica - Biopsia colposcópica - Punción
aspiración con aguja fina (PAAF) - Biopsia por punción con aguja gruesa (Tru-cut)
 Necropsia/autopsia
Fijación[editar]
En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora, generalmente líquida, para
evitar los cambios post-mortem y para lograr conservar la forma original del tejido. Unos de los
fijadores más usado es el formol al 10% (formaldehído).En el caso de que realicemos estudios
mediante el microscopio electrónico, deberemos usar otros fijadores más específicos como
paraformaldehido, glutaraldehido y tetróxido de osmio.

Lavados[editar]
Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador (químico). El exceso de fijador durante
el posterior proceso de infiltración, incluso en la microtomía, podría afectar los cortes
histológicos, y por ello se debe lavar con agua destilada.

Deshidratación[editar]
La deshidratación se realiza empleando diferentes soluciones de alcohol a concentraciones
crecientes hasta llegar a alcohol puro.

Aclaramiento[editar]
En este paso se sustituye el alcohol por una sustancia que haga de intermediario entre el agua
y la parafina que se usará posteriormente para la infiltración. La sustancia comúnmente
utilizada es el xilol (xileno) aunque también pueden usarse otros disolventes orgánicos como
benceno. Tras varios baños, se consigue eliminar el alcohol puro y todo el tejido queda
impregnado del xilol, el cual habrá entrado hasta lo más profundo del tejido. Durante este
proceso el tejido pierde color dando lugar al termino de aclaramiento.

Infiltración[editar]
La muestra se coloca en parafina histológica en estado líquido, lo cual se consigue calentando
la parafina por encima de su punto de fusión. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido
está completamente impregnado de xilol que es un disolvente de la parafina, por lo que tras
varios baños con concentración creciente de parafina se consigue embeber todo el tejido en
parafina pura.
La deshidratación, aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero hoy en
día se realizan de modo automático en máquinas específicas.

Inclusión[editar]
Tiene como finalidad proporcionarle al tejido un soporte sólido que posibilite realizar un corte
muy fino, por lo que es de suma importancia que el medio utilizado para la inclusión penetre al
interior del tejido. Aquí se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras
a estudiar. También hay máquinas especializadas para la inclusión en parafina de tejidos.
Después de su inclusión y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador
para su posterior corte. Puede llevarse a cabo en Parafina

Microtomía[editar]
Se realizan cortes histológicos muy delgados según lo requerido o la costumbre del laboratorio
donde se realice la técnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes
se echan al baño de flotación y se ´pescan´ con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el
tipo de tejido y la tinción con que se van a procesar. El ángulo de corte entre el cuchillo del
microtomo y el bloque ha de estar entre 10º y 15º. Una vez realizado el corte se da un baño de
agua destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histológico debe tener un grosor
aproximado de 3-5 micras para que sea fácilmente atravesado por la luz del sol y atraviese los
poros celulares.

Tinción[editar]
Las células, por sí mismas, no poseen coloración. Por tanto, para poder observar la morfología
tisular deben "teñirse". Existen muchos tipos de tinciones para diferenciar las distintas
estructuras o sustancias en los tejidos.
La tinción más usada o también llamada "de rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se
usa un colorante llamado hematoxilina que tiñe las sustancias ácidas o que las contengan,
como el núcleo que contiene ácido desoxirribonucleico (ADN) La eosina amarillenta tiñe las
estructuras básicas como el citoplasma y demás orgánulos eosinofílicos de la célula.
Como se mencionó anteriormente hay muchas tinciones . Otros ejemplos son:

 Masson
 PAS
 Perls
 Plata metenamina
 Warthin-Starry
 Ziehl-Neelsen
 Van Gieson
 Azul alcian
 Sudán III
 Rojo Congo
Observación[editar]
Como se mencionó al principio algunos autores no consideran la observación como un paso
de la técnica histológica sino el objetivo final de la misma. Como se puede deducir, se observa
la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para llegar a un diagnóstico.
La técnica histológica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite hacer
diagnósticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es maligno o benigno,
etc.

Explicar cuales son las soluciones mas comunes en la técnica histológica

Explicar la función del histoquinete, el micrótomo y el criostato

Definir los términos tinción, metacromasia, basofilia e impregancion

PROCEDIMIENTO

Que entiendes por técnica histológica?

Que es una biopsia y cuantos tipos existen?

Como se realiza el proceso de fijación ¿

En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora, generalmente líquida, para
evitar los cambios post-mortem y para lograr conservar la forma original del tejido. Unos de los
fijadores más usado es el formol al 10% (formaldehído).En el caso de que realicemos estudios
mediante el microscopio electrónico, deberemos usar otros fijadores más específicos como
paraformaldehido, glutaraldehido y tetróxido de osmio.

Cual es el propósito de la deshidrataion? ¿ como y cuales soluciones se utilizan?

¿Qué es la aclaración o diafanizacion?

Que es la pre-inclusion