2.
SIMBIOSIS MICORRÍZICA
2.1. Definición
La simbiosis se define como la relación de
dos o más organismos que viven juntos, con
base en esto se pueden encontrar dos
principales tipos de simbiosis: 1) parasítica,
en la que un organismo toma de otro los
compuestos necesarios para vivir, pudiendo
producir daños severos y muerte del otro
organismo y, 2) mutualista, en la que los
organismos involucrados obtienen beneficios
mutuos. Por otra parte, el término micorriza
(Mykes= Hongo y Rhiza= Raíz) se define
como una estructura especializada que se
forma por la asociación de un grupo
específico de hongos con las raíces de las
plantas y cuya función repercute en
beneficios nutrimentales y fisiológicos para
ambos organismos. De esta forma se
constituye una simbiosis mutualista entre
ambos componentes.
2.2. Tipos de micorriza
En la naturaleza existen seis tipos bien
diferenciados de micorriza y su distribución
esta influenciada por aspectos ecológicos
relacionados con el clima, disponibilidad
nutrimental y especificidad hacia algunas
familias de plantas. En si, los dos tipos de
micorriza más importantes desde el punto
vista forestal, agrícola, frutícola y hortícola
son: 1) la ectomicorriza y 2) la endomicorriza
arbuscular( Ferrera-Cerrato y Alarcón 2001).
2.3. Características morfológicas de la
ectomicorriza
La ectomicorriza que se forma en las raíces,
es posible observarla a simple vista y se
pueden encontrar diferentes formas que van
desde una estructura simple, bifurcada,
coraloide hasta pinnada (Figura 16), mismas
que se pueden caracterizar por el color que
presentan. En la ectomicorriza, el micelio de
los hongos formadores de esta estructura,
33
recubren las raíces laterales (manto fúngico)
y que al penetrar la epidermis, entre las
células corticales, el micelio crece de tal
forma que forma una extensa red de hifas
denominada red de Hartig (Figura 17). Así, el
micelio que esta fuera de la raíz contribuye
en la absorción de agua y nutrimentos a partir
del suelo, los cuales son dirigidos hacia el
interior de la raíz, de forma que la planta los
aprovecha en forma más eficiente(Ferrera-
Cerrato, 1993). A su vez, los hongos
ectomicorrízicos, a través de su micelio
externo, pueden llegar a generar cuerpos
fructíferos (Figura 18), tanto en la superficie
del suelo como subterráneos (Figura 19 y
20), que contienen esporas microscópicas
responsables de la propagación de los
hongos. Estos cuerpos fructíferos llamados
también carpóforos pueden ser utilizados
para la identificación de las diversas especies
de hongos ectomicorrízicos que se pueden
encontrar en un sistema forestal, además de
servir como fuente de inóculo para aplicar a
plantas o para aislar los hongos mediante
técnicas de cultivo in vitro en laboratorio.
La ectomicorriza es una simbiosis obligada,
es decir, la planta de pino o cualquier
conífera, no es capaz de crecer si no es
colonizada por los hongos formadores de
esta estructura. A pesar de encontrarse en la
naturaleza más de 1500 especies de hongos
formadores de ectomicorriza que están
incluidos en diferentes grupos. En el cuadro 5
se aprecian las principales Clases
taxonómicas, Familias y Géneros en los que
se encuentran los hongos ectomicorrízicos.
Éstos hongos presentan cierta especificidad
hacia árboles tanto de clima templado como
tropicales. En los cuadros 6 y 7 se muestran
los géneros típicos de micobiontes y
fitobiontes tanto de clima templado como
tropical que establecen simbiosis
ectomicorrízica.
 a) b)

c) d)

e) f)

Figura 16. Estructuras ectomicorrízicas macroscópicas: a) Digitiforme (Cenoccocum geophylum); b)

Bifurcada (Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); c) Policotómica (Pseudotsuga sp.); d)
Bifurcada con presencia de rizomorfas (Flecha, Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); e)
Morfología típica microscópica de las hifas de P. tinctorius mostrando fíbulas; f) Formación
incipiente de cuerpos fructíferos de P. tinctorius en el cepellón de P. radiata.

34
 a)

Manto Fúngico

Red de Hartig

Células corticales
b)

Figura 17. Características macromorfológicas de las estructuras internas y externas de la simbiosis

ectomicorrízica en el sistema radical de pinaceas y coníferas. a) Diagrama esquemático de
la colonización y b) estructuras fúngicas internas de la raíz

35
 a) c)

b)

Figura 18. Características morfológicas externas de la simbiosis ectomicorrízica establecida en el

sistema radical de pináceas. a) Colonización del sistema radical con estructuras
ectomicorrízicas (Flechas) dicotómicas (bifurcadas); b) Cuerpo fructífero (Flechas) de
Telephora terrestris en Pinus hartwegii; c) Cuerpo fructífero (Flechas) de Laccaria sp. en
Pinus hartwegii.

a) b)

c) d)

Figura 19. Morfología de algunos cuerpos fructíferos (carpóforos) epigeos de hongos formadores de
ectomicorriza del bosque del Cofre de Perote, México. a) Laccaria laccata, b) Amanita
cesarea, c) Russula sp. y d) Boletus sp.

36
Cuadro 5. Taxas de hongos ectomicorrízicos y ectendomicorrizicos. H= Hongos Hipogeos, E= Hongos
epigeos, G =Globosos (Puffballs), Géneros con un asterisco indican que tienen muchas
especies no micorrízicas (Brundrett et al., 1996).
CLASE/FAMILIA GÈNERO TIPO
HYPHOMYCETES
ZYGOMYCETES Cenococcum,etc Conidial
Endogonaceae Endogone, Sclerogone H
ASCOMYCETES
Ascobolaceae Sphaerosoma H
Balsamiaceae Balsamia, Picoa H
Elaphomycetaceae Elaphomyces H
Geneaceae Genea,Geneaba H
Geoglossaceae Geoglossum*, Leotia*,Trichoglossum E
Helvellaceae Gyromitra, Helvella E
Barssia, Fischerula, Gymnohydnotrya, Mycoclelandia H
Pezizaceae Aleuria*, Peziza*, Phillipsa*, Pulvinia, Sarcosphaera E
Amylascus, Hydnotryopsis, Muciturbo, Pachyphloeus, Peziza, Ruhlandiella H
Pyronemataceae Geopora, Humaria, jafneadelphus*, Lamprospora* Sphaerosporella,
Trichophaea, Wilcoxina E

Choiromyces, Dingleya, Elderia, Geopora, Hydnobolites, Hydnocystis,

Labyrinthomyces, Paurocotys Reddellomyces, Sphaerosporella, Stephensia H
Sarcoscyphaceae Plectania*,Pseudoplectania*, Sarcocypha* E
Terfeziaceae Choiromyces, Terfezia H
Tuberaceae Mukagomyces, Paradoxa, Tuber H
BASIDOMYCETES
Amanitaceae Amanita, Limacella E
Torrendia H
Astraeaceae Astraeus E
Pyrenogaster, Radiigera H
Boletaceae Astroboletus, Boletellus*, Boletochaete, Boletus, Buchwaldoboletus*, E
Chalciporus, Fistulinella, Gyrodon, Gyroporus, heimiella, Leccinum, Phlebopus,
Pulveroboletus, Rubinoboletus, Suillus, Tylopilus, Xanthoconium
Alpova Boughera, Chamonixia, gastroboletus, Rhizopogon, Royoungia H
Truncocolumella H

Cantharellaceae Cantharellus, Craterellus E

Chondrogastraceae Chondrogaster H
Clavariaceae Apelaría, Clavaria, Clavariadelphus, Clavicorona, Clavulina, Clavulinopsis,
Ramaria, Ramariopsis E
Corticiaceae Amphinema, Byssocorticium, Byssosporia, Piloderma, etc. E
Cortinariaceae Astroporina, Cortinarius, Cuphocybe, dermocybe*, Descolea, Hebeloma,
Inocybe, Leucocortinarius, Rozites, Stephanopus, etc. E
Cortinarius, Cortinomyces, Descomyces, Destuntzia, Hymenogaster
Quadrispora, Setchelliogaster, Thaxterogaster, Timgrovea H
Cribbiaceae Cribbea, Mycolevis H
Entolomataceae Clitopilus, Entoloma, Leptonia, Rhodocybe* E
Rhodogaster, Richoniella H
Elasmomycetaceae Elasmomyces, Gymnomyces, Martellia, Zelleromyces H
Gelopellidaceae Gelopellis H
Gomphaceae Gomphus E
Gomphidiaceae Chroogomphus, Cystogomphus, Gomphidius E
Hydnaceae Bankera, Dentinum, Hydnellum, Hydnum, Phellodon E
Hygrophoraceae Bertrandia* Camarophyllus, Gliphorus, Humidicutis*, Hygrocybe,
Hygrophorus*, etc. E
Hysterangiaceae Hysterangium, Pseudohysterangium, Trappea H
Leucogastraceae Leucogaster, Leucophleps H
Lycoperdaceae Lycoperdon* G
Melanogastraceae Melanogaster H
Mesophelliaceae Castoreum, Diploderma, Gummiglobus, Malajczukia, Mesophellia,
Nothocastoreum
Octavianinaceae Octavianina, Sclerogaster H
Paxillaceae Paxillus E
Pisolithaceae Pisolithus G
Polyporaceae Albatrellus E
Russulaceae Lactarius, Russula E
Archangeliella, Cystangium, Macowanites H
Sclerodermataceae Scleroderma G
Horakiella, Scleroderma H

Sedeculaceae Sedecula H
Stephanosporaceae Stephanospora H
Strobilomycetaceae Strobilomyces E
Austrogautieria, Chamonixia, Gautieria, Wakefieldia H
Thelephoraceae Boletopsis, Thelephora E
Tricholomataceae Clitocybe*, Cystoderma*, Cantharellula, Catathelasma, laccaria, Lepista E
Leucopaxillus, tricholoma, Tricholomopsis*
Gigasperma, Hydnangium, Podohydnangium H

37
Cuadro 6. Géneros típicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas templadas que
establecen simbiosis del tipo ectomicorrízica (Tomado de Pérez-Moreno, 1998).

División taxonómica y Micobiontes Fitobiontes

Basiodiomycotina

• Alpova, Amanita, Astraeus, Boletus, Abies, Alnus, Betula, Corylus, Eucalyptus,

Cantharellus, Cortinarius, Entoloma, Fagus, Larix, Picea, Pinus, Populus,
Gastroboletus, Gautieria, Gomphidius, Pseudotsuga, Quercus, Salix y Tsuga
Hebeloma, Hygrophorus,
Hymenogaster, Hysterangium,
Inocybe, Laccaria, Lactarius,
Leccinum, Lycoperdon, Martellia,
Paxillus, Pisolithus, Rhizopogon,
Rozites, Russula, Scleroderma,
Suillus, Tylopilus, Tricholoma,
Xerocomus

Ascomycotina

• Balsamia, Elaphomyces, Genea, Abies, Alnus, Betula, Corylus, Eucalyptus,

Geopora, Helvella, Hydnotria, Fagus, Larix, Picea, Pinus, Populus,
Sphaerosporela, Tuber Pseudotsuga, Quercus, Salix y Tsuga

Zygomycotina

• Endogone Eucalyptus, Pinus, Pseudotsuga

Deuteromycotina

• Cenococcum Abies, Larix, Pinus, Polygonum, Pseudotsuga

38
Cuadro 7. Géneros típicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas tropicales que
establecen simbiosis del tipo ectomicorrízica (Tomado de Pérez-Moreno, 1998).
Micobiontes Familias y géneros de fitobiontes
Amanita, Cantharellus, Gyrodon, Gyroporus, Leguminoseae (Fabaceae)
Inocybe, Lactarius, Porphyrellus, Russulla, • Acacia, Afzelia, Aldinia, Anthonota,
Scleroderma, Sclerogaster, Strobilomyces, Aphanocalyx, Berlinia, Brachystegia,
Xerocomus Didolotia, Inga, Instia, Isoberlinia,
Julbernarlia, Macrolobium, Microberlinia,
Monopetalanthus, Pericopsis,
Tetraberlinia
Amanita, Elaphomyces, Hysterangium, Casuarinaceae
Laccaria, Paxilus, Pisolithus, Scleroderma, • Casuarina, Allocasuarina
Telephora

Agaricus, Telephora, Amanita, Boletus, Dipterocarpaceae

Cantharelus, Geastrum, Lactarius, Russula, • Anisoptera, Dipeterocarpus,
Scleroderma Dryobalanoptus, Hopea, Marquesia,
Monotes, Sghorea, Vateria

Amanita, Austrogauteria, Cantharelus, Coltricia, Euphorbiaceae

Elasmomyces, Lactarius, Pulveroboletus, • Uapaca
Russula, Scleroderma, Tubosaeta, Xerocomus

Nr Fabaceae
• Castaneopsis, Quercus, Lithocarpus,
Pasania

Nr Gnetaceae
• Gnetum

Cenoccocum, Pisolithus, Scleroderma Myrtaceae

• Campomanesia, Eucalyptus, Eugenia,
Melaleuca, Tristania

Nr Nyctaginaceae
• Neea, Pisonia, Torrubia

Cantharellus Polygonaceae
• Coccoloba

Amanita, Boletus, Coltricia, Gyroporus, Pinaceae

Hebeloma, Lycoperdon, Pisolithus, • Pinus
Rhizopogon, Scleroderma, Suillus, Telephora,
Tylopirus

Nr Proteaceae
• Faurea

Nr Sapotaceae
• Glycoxylon

Nr Sapindaceae
• Allophylhis, Nephelium

Nr= Hongos no reportados para estos géneros de plantas

39
 Pileo(sombrero)
Margen

Láminas conteniendo esporas

Estípite

Volva

Micelio

Figura 20. Partes típicas que integran al cuerpo fructífero (carpóforo) de Amanita muscaria que forma
ectomicorriza con: Abies alba. A. procera, Larix decidua, L. occidentalis, Picea abies, P.
sitchensis, P. banksiana, P. cembra, P. ponderosa, P. radiata, Pseudotsuga menziesii,
Tsuga heterophylla, Arbutus menziesii, Betula alba, Eucalyptus camaldulensis, Fagus
sylvatica, Populus tremula x tremuliodes, Quercus sp., Tilia europaea, entre otros (Yang et
al., 1999).

2.4. Características morfológicas de la propagación de los hongos, éstas son las

micorriza arbuscular
A diferencia de la ectomicorriza, los hongos
micorrízicos arbusculares no producen
cambios visibles en la morfología de la raíz
de sus hospedantes. Su presencia puede ser
detectada mediante observaciones al
microscopio óptico. En el suelo, los hongos
formadores de esta simbiosis presentan una
extensa red de hifas que favorecen la
absorción de nutrimentos y agua (Bago et al.,
1998, 2000a), permitiendo que la raíz posea
un mecanismo alterno que explore mayor
volumen de suelo. Este micelio puede formar
estructuras microscópicas que favorecen la
esporas que pueden estar libres o agrupadas
(Declerck et al., 2000). Una vez que alguna
hifa del hongo penetra la raíz, ésta crece a lo
largo del tejido radical y llega a formar
estructuras típicas de esta simbiosis (Figura
21b y c): 1) Hifas inter e intrarcelulares, 2)
Arbúsculos que facilitan en intercambio
bidireccional de nutrimentos entre hongo-
planta (Bago et al., 2000b), 3) Vesículas, que
almacenan reservas para el hongo, 4)
Enrrollamientos hifales y, 5) Esporas simples
o esporocárpicas en el suelo, pero algunas
especies pueden esporular dentro de la raíz
(Figura 21d).

40
 a) b)

c) d)

Figura 21. Morfología de la colonización de hongos micorrízicos arbusculares en el sistema radical de

las plantas: a) raíz no colonizada, b) raíz colonizada con hifas intrarradicales y arbúsculos
(flechas), c) vesículas y micelio intrarradical y d) formación de esporas dentro de la raíz (en
algunos géneros).

En contraste con los hongos ectomicorrízicos,
los hongos formadores de micorriza
arbuscular conocidos hasta la fecha no
sobrepasan las 150 especies (Walker y
Trappe, 1993) y están agrupados dentro del
orden de los Glomales, el cual esta
conformado por siete géneros (Morton y
Redecker, 2001). Sin embargo, estos hongos
pueden establecerse en el sistema radical de
aproximadamente 85% de las especies
vegetales que han sido identificadas y se
cree que éstos fueron determinantes en la
capacidad de adaptación de las plantas en el
ecosistema terrestre ( Malloch et al., 1980.,
Taylor et al., 1995).
obligados) (Bago et al., 2000b), por lo que
para propagarlos con éxito, se requiere del
uso de plantas trampa (Morton 1990;
González-Chávez, 1993. El reto del uso de
estos hongos en la agricultura o en la
dasonomía como inoculante, implica la
creación de sistemas de producción de
inóculo eficientes que satisfagan los
requerimientos de los viveros (Alarcón y
Ferrera-Cerrato 1999; Ferrera-Cerrato y
Alarcón 2001).

Los hongos micorrízicos arbusculares se

consideran como simbiontes obligados y
requieren nutrirse de una raíz viva (biotrofos
41
2.5. Definición de inoculante
Como inoculante debe entenderse a aquel
producto biológico que facilita la introducción
de microorganismos con diversa actividad
fisiológica que favorece el crecimiento y
desarrollo de las plantas. Este inoculante
puede presentar diferentes aspectos físicos,
ya sea líquidos o sólidos en los que se
utilizan acarreadores como la turba, el carbón
activado, aceites, alginatos y otros soportes
orgánicos e inorgánicos. De este modo, el
inoculante puede ser manejado con el fin de
establecer los microorganismos en las hojas,
tallo o raíces para establecerlos en los
diversos sistemas de producción agrícola,
hortícola, frutícola y forestal. En el caso de
los hongos micorrízicos el inoculantes puede
consistir de esporas, hifas, fragmentos de
cuerpos fructíferos, raíces colonizadas y en
su caso suelo rizosférico donde se detecte
una abundancia de hifas de hongos
micorrízicos provenientes de un sistema de
raíz sano (Alarcón y Ferrera-Cerrato,1999).
2.6. Fuentes de inoculante
En el caso de los hongos micorrízicos
arbusculares, la fuente inoculante proviene
del conjunto de hongos que están asociados
a las raíces o que se encuentran en el suelo
rizosférico de las plantas, ya sea en
ecosistemas y agroecosistemas. Los
propágulos conocidos como esporas, son
separados y propagados en plantas trampa
mantenidas en invernadero, utilizando
sustratos estériles. Estos propágulos son
separados del suelo empleando la técnica de
Gerdermann y Nicolson (1963), con el fin de
seleccionar aquellas cepas que tengan mayor
capacidad de micorrización a la vez de
favorecer el crecimiento de las plantas. Estas
esporas también sirven para realizar los
estudios taxonómicos correspondientes a los
hongos involucrados en las cepas(
Morton,1990).
Para los hongos ectomicorrízicos, una de las
fuentes de inoculo pueden ser los cuerpos
fructíferos colectados en ecosistemas
forestales, de los cuales se procede al
aislamiento del hongo en el laboratorio
(Ferrera-Cerrato,1993; Brundrett et al.,1996).
42
Este procedimiento permite obtener cepas
puras que serán ensayadas en los diferentes
hospedantes, para conocer su grado de
micorrización y efecto en el desarrollo de las
plantas. Otra fuente de inóculo importante,
son las esporas contenidas en los cuerpos
fructíferos, mismas que pueden ser
inoculadas directamente en el sustrato como
se ha hecho con las esporas de hongos como
Pisolithus, Scleroderma, Rhizopogon y Tuber.
Una forma tradicional de fuente de inoculo
muy utilizada, aunque no muy adecuada, se
basa en la colecta de suelo de monte, el cual
debe ser colectado de la rizósfera de plantas
sanas. Otra fuente de inoculo poco frecuente,
se refiere al uso de los cuerpos fructíferos o
mezclas de ellos finamente fragmentados e
introducirlos como inoculo en el sustrato de
crecimiento de las plantas con fines de
inducir la micorrización.
A partir de las diferentes fuentes de
inoculantes, independientemente del tipo de
simbionte micorrízico, se procede al
seguimiento de la ruta biotecnológica que se
presenta en la figura 22 y que a continuación
se describe de manera general:
• Con base en un muestreo en campo y
extracción de los diferentes propágulos
micorrízicos, se procede a su propagación
y purificación en plantas trampa o en
laboratorio a través de medio de cultivo
• Una vez purificadas las cepas
micorrízicas, se procede a su
identificación taxonómica.
• Paralelamente a la identificación, se
realizan ensayos de selección basándose
en su capacidad de colonización y
promoción del crecimiento en los
hospedantes.
• Una vez cumplidos los puntos anteriores,
se procede a una propagación inicial para
estudios a nivel de invernadero y en
pequeñas parcelas.
• Con los resultados de vivero y pequeñas
parcelas, se procede a realizar una
propagación a nivel piloto, que consiste
en incrementar el volumen del inoculante
seleccionado en forma escalada.
• El inoculante producido en esta fase,
antes de ser empleado, tiene que cumplir
con controles de calidad, que consisten
en
• la ausencia de patógenos, mantener la
capacidad de colonización y promoción
de crecimiento, supervivencia y vida de
anaquel. Un inoculante con estas
características puede ser empleado en
diferentes sistemas de propagación de
plantas horto-frutícolas, forestales y
ornamentales, para evaluar su tolerancia
a ambientes adversos, así como
utilizarlos en diferentes sistemas de
producción, en suelos marginales con
diferentes grados de perturbación y
contaminación.

Muestreo de Estudios
Campo ecológicos

Ensayos en
suelos
marginales
Evaluación de
colonización y
aislamiento de
esporas Ensayos en Uso en
plantas horto- viveros
frutícolas

Control de
calidad de Sistemas de
Cultivo in vitro
Propagación inoculante propagación
Cultivos
piloto producido: de plantas
Purificación de trampa
(4 toneladas) Micorrización
esporas
Patología

Identificación
taxonómica
Vivero de
plantas
forestales
Ensayos especiales:
Componentes de
rendimiento,
Tolerancia a agentes
contaminantes, etc.
Pruebas de selección: Propagación
Infectividad versus inicial
efectividad

Figura 22. Proceso biotecnológico de la producción de inoculantes a base de hongos micorrízicos

para uso en viveros hortícolas, frutícolas y forestales (Modificado de Alarcón, 2001).

43
2.7. Tipos de inoculante
Independientemente del sustrato en el que
se produzcan los inoculantes, éstos pueden
ser producidos a partir de diversas
estructuras que son típicas de los
microorganismos; en el caso de hongos
micorrízicos se pueden utilizar el micelio
que se encuentra en el suelo, raíces
colonizadas por hifas y esporas.
Para el caso específico de hongos
micorrízicos arbusculares, las estructuras
mencionadas no son susceptibles de ser
propagadas en medios de cultivo
convencionales (caldos nutritivos,
fermentadores, etc.). Para este fin se
requieren de condiciones específicas que
permitan su proliferación tales como
sustratos orgánicos y/o inertes y presencia
de plantas vivas, así como la adición de
soluciones nutritivas de modo que la
fisiología tanto de la planta como del
microorganismo sean beneficiadas (Sylvia,
1999; Manjarrez et al., 2000) y poder así
obtener un inoculante de excelente calidad
en función de los propágulos que contiene.
Los inoculantes pueden ser elaborados
mediante el uso de diversos acarreadores
los cuales se clasifican en tres principales
categorías: 1) sustratos orgánicos: turba,
a)
Figura 23. Propágulos infectivos de hongos micorrízicos arbusculares consistentes en: a) hifas externas
que se encuentran en el suelo y, b) hifas internas colonizando el sistema radical.
44
carbón activado, arcillas y suelo; 2) compostas
y vermicompostas obtenidas a partir de
estiércoles de animales, aceites de soya y
cacahuate, fibra de trigo y otros desechos
vegetales; 3) materiales inertes: vermiculita,
zeolita, agrolita, roca fosfórica, sulfato de calcio
y alginatos.
2.7.1. Propágulos infectivos
Se considera como propágulo infectivo a aquél
que permita el crecimiento y proliferación de los
microorganismos aún y cuando se presenten
condiciones adversas tanto al momento de la
aplicación como en los procesos de
elaboración de los inoculantes y
almacenamiento de los mismos. En el caso
particular de los hongos micorrízicos, los
propágulos que deben ser considerados en la
evaluación del control de calidad de los
inoculantes son la cuantificación del micelio
externo (Figura 23a) que se presenta en el
suelo así como aquel que se encuentra
colonizando la región cortical de la raíz (Figura
23b). Otros propágulos de gran importancia por
ser estructuras de dispersión y supervivencia
de los hongos, son las esporas. En la figura 24,
se puede apreciar la diversidad morfológica de
las esporas algunos géneros de hongos
micorrízicos arbusculares.
b)
 a) b)

d)
c)

e) f)

Figura 24. Esporas típicas de hongos micorrízicos arbusculares: a y b) Glomus sp.; c) Sclerocystis
sp.; d) Entrophospora infrequens, e) Gigaspora margarita y f) Acaulospora delicata.

45
2.8. Métodos de aplicación de
inoculantes
Dependiendo del tipo de inoculante, los
hongos micorrízicos, se pueden ser
inoculados en las diversas fases que
involucra la propagación de plantas
(semillas, estacas, acodos e incluso
micropropagación) tanto en almácigos
hortícolas, como en viveros de especies
frutales y forestales (González-Chávez et
al., 1998; Alarcón y Ferrera-Cerrato, 1999).
A continuación se mencionan las
principales formas de aplicación de
inoculantes elaborados a partir de hongos
micorrízicos:
2.8.1. Inoculación en semilleros
Con base a que la preparación de
almácigos y semilleros requiere de la
manipulación de poco sustrato, solo para el
llenado de los semilleros, la aplicación de
inoculante micorrízico es factible de
utilizarse en estos sistemas. Es posible
mezclar inoculantes peletizados en turba o
en cualquier material utilizado como
sustrato antes de efectuar la siembra de las
semillas. Sin embargo, el uso de
inoculantes en semilleros debe considerar
el tipo de semilla a sembrar ya que semillas
de corto período de germinación (especies
consideradas como hortalizas) con pocas
reservas en los cotiledones, permite que la
simbiosis se establezca en corto tiempo y
con ello su efecto benéfico. Cuando se
utilizan semillas de largo tiempo de
germinación, la viabilidad de los propágulos
de los hongos micorrízicos puede ser
alterada por el exceso de humedad que se
requiere para la germinación. Por otra
parte, la mayoría de las plántulas obtenidas
por semillas (de plantas de corte arbustivo o
leñoso), mantienen por tiempo prolongado
sus cotiledones cuyas reservas propician en
mayor grado, el crecimiento de las plantas.
Esta característica hace que los beneficios
46
de los hongos micorrízicos no se expresen o se
retarden ya que éstos requieren de fuentes
carbonadas procedentes de hojas
fotosintéticamente activas.
2.8.2. Inoculación al sustrato de
crecimiento
Este método representa facilidad de manejo
para el viverista. Sin embargo, se debe de
cuidar la proporción inoculo sustrato y que al
menos debe de ser de un 50%, esto es fácil
lograrlo cuando empleamos esporas de los
hongos del grupo de los gasteromicetos (como
P. tinctorius). Las proporciones de inoculo
deben de mantenerse y vigilarse ya que este
tipo de aplicación al romperse las proporciones
se expresaría como baja micorrización o
ausencia. Es importante mencionar que en el
caso de los hongos endomicorrízicos es difícil
lograr grandes volúmenes de inoculo
conteniendo un numero adecuado de esporas y
que un inoculo compuesto por pedazos de
raíces, hifas y esporas es el mas recomendable
debido a que en la mezcla del inoculo, el
sistema radical de la planta encontrara alguno
de estos elementos infectivos.
2.8.3. Inoculación al transplante
Sin duda, este es el método más recomendado
para aplicar los hongos micorrízicos
(arbusculares y ectomicorrízicos). En el caso
de hongos micorrízicos arbusculares, la
aplicación directa del inoculante en el sustrato,
en el agujero donde se transplantaran las
plántulas (Figura 25b y c) y sobre su sistema
radical, permite a los hongos mayor
probabilidad de establecerse y expresar sus
beneficios (Figura 25d y e) en corto tiempo (de
uno a cuatro meses, dependiendo de la
especie forestal o frutal de que se trate). En
función de la calidad del inoculante (cantidad
de propágulos contenidos) se puede aplicar
desde 1 a 15 g de inóculo por planta.
 a) b)

c) d)

Plantas inoculadas Testigo

Figura 25. Forma de inoculación de hongos micorrízicos arbusculares al momento del transplante. a)
semillero conteniendo las plántulas a inocular, b) inoculación previa al transplante, c)
transplante de la plántula al agujero inoculado, d) expresión benéfica en las plantas
inoculadas con HMA en portainjertos de cítricos injertados a los 310 días. Obsérvese el
escaso crecimiento de las plantas testigo (Flecha), a la misma edad.

Para el caso de hongos ectomicorrízicos, la obtenidas en el paso 1, con el fin de que

inoculación al momento del transplante es
factible mediante una suspensión de esporas
y en ella remojar las raíces de las plántulas
(Figura 26). A continuación se describen los
pasos de este proceso:
• Se toma un recipiente limpio, previamente
desinfectado con alcohol, donde se vierte
una suspensión densa de esporas, la cual
se agita vigorosamente para tener una
mejor distribución de las esporas (Figura
26a y b).
• De un semillero, se toman plántulas de
aproximadamente 12-15 cm de altura,
según la especie, y se procede a podar la
raíz con el fin de evitar la deformación
llamada “cola de cochino” (Figura 26c y
d).
• Las plántulas una vez podadas, se
sumergen en la suspensión de esporas,
47
las raíces queden impregnadas con las
esporas del hongo ectomicorrízico a
inocular (Figura 26e y f). Después de este
paso, las plántulas son transplantadas en
recipientes nuevos conteniendo el
sustrato previamente fumigado con
productos químicos o vaporizado con
vapor de agua (Figura 26g y h).
También es posible generar inoculante a
partir de esporas, obtenidas directamente del
carpóforo de algunos hongos altamente
productores de esporas como Scleroderma,
Rhizopogon o Pisolithus. Este proceso
consiste en liberar las esporas de los
carpóforos y colectarlas en bolsas de plástico
desinfectadas y hacer observaciones al
microscopio para conocer el tipo de esporas
que se están inoculando (Figura 27 a, b y c).
Una alternativa para inocular estas esporas
consiste en mezclarlas homogéneamente, en
diferente proporción, con el sustrato
previamente fumigado (Figura 26 d). Una vez
inoculado el sustrato, se coloca en los
diferentes recipientes utilizados en el vivero y
se procede al transplante.

Otra alternativa práctica de inoculación,

consiste en tener las esporas de los hongos
micorrízicos en bolsas pequeñas. Con una
estaca, clavo o lápiz, con el extremo
humedecido con agua, se introduce en el
interior de la bolsa para que se adhieran las
esporas (Figura 27e, f y g). El extremo
cargado con esporas (Figura 26g), se
introduce en el sustrato quedando un agujero
impregnado de éstas, el cual recibirá
posteriormente, las plántulas que quedarán
de esta forma inoculadas (Figura 27h).

Las tres metodologías de inoculación

mencionadas, aseguran que las plántulas
crecerán con el simbionte previamente
inoculado, propiciando con ello, los beneficios
de la simbiosis.

48
 a) b)

c) d)

e) f)

g) h)

Figura 26. Método de inoculación de plántulas de pino producidas en vivero con esporas de hongos
ectomicorrízicos (P. tinctorius) en suspensión. a y b) preparación de la suspensión del
inoculante en agua; c, d, e y f) extracción de la plántula, poda e impregnación con el
inoculante; g y h) cama de transplante y transplante de plantas micorrizadas).

49
 a) b)

c) d)

e) f)

g) h)

Figura 27. Inoculación de plántulas de pináceas con esporas de hongos ectomicorrízicos. a)

Esporocarpos de Pisolithus tinctorius (Pt); b y c) esporas del hongo vistas al microscopio de
campo claro; d) mezcla de esporas con el sustrato; e) esporas de Pt ; f) impregnación de
esporas de Pt mediante estacas (lápiz) antes del transplante; g) inoculación de las esporas
en el sustrato; h) transplante en el sustrato inoculado. En cada caso obsérvese el color café
de las esporas.

50
2.8.4. Otras técnicas de inoculación
2.8.4.1. Inoculación por riego
Es posible inocular hongos ectomicorrízicos
por sistemas de riego por aspersión o con
bomba de mochila. Una de las
consideraciones más importantes es que los
soportes del inoculo sean completamente
solubles en el agua, ya que de no ser así, el
sistema de riego por aspersión podría
obstruirse, por lo se debe tener cuidado en la
selección del inoculante a aplicar. Para
aplicar el inoculante en sistemas de
aspersión, se requiere que el producto se
homogenice con agua hasta obtener una
suspensión, lo más uniformemente posible
(Figura 28a y b). La suspensión y el proceso
de su dilución en agua se calcula en 3,8 kg
en 10,000 litros de agua, la cual se hace
pasar por un inyector calibrado (Figura 28c)
que permita que se suspenda la solución
inoculante hasta obtener una proporción
1:200 y proceder a asperjar las plantas
(Figura 28d). Con esta solución inoculante es
posible inocular 1,600,000 plantas. Con el fin
de garantizar que el inoculo salga
correctamente por el sistema de riego, se
colocan vasos de poliestireno en los que se
captura la solución inoculante, la cual debe
tener la coloración típica de las esporas que
conforman al inoculante (Figura 28e).

a) b) c)

d) e)

Figura 28. Inoculación con hongos ectomicorrízicos a plántulas de Abies mediante sistemas de riego
por aspersión: a y b) suspensión del inóculo esporal de Pisolitus tinctorius en agua, c)
dilución del inóculo en bomba de agua calibrada, d) aspersión de la solución inoculante en
las plantas y e) suspensión del inóculo esporal recibida por el sistema de riego por
aspersión.

51
2.8.4.2. Inyección al suelo
La inyección al suelo de inoculantes de
hongos MA es factible mediante bombas de
aspersión especial (Tipo Confidor) y que se
pueda graduar. Esta bomba tiene un
estilete perforado en la punta, la cual se
introduce en el suelo (10-15 cm de
profundidad). En cada inyección es posible
aplicar de 800 a 2000 esporas y se debe
realizar varias inyecciones alrededor del
árbol. Este mismo procedimiento puede ser
utilizado para inocular hongos
ectomicorrízicos en campo.
No obstante, la inyección de inoculante
micorrízico en campo puede tener como
desventaja la escasa competitividad de los
hongos micorrízicos al enfrentarse con
otros microorganismos presentes en ese
suelo. Además, se debe de asegurar que
las esporas estén viables, aunque esto no
garantiza que la germinación de ellas se
lleve a cabo, ni que la simbiosis se
establezca en las raíces. Bajo estas
condiciones de inoculación, las esporas
pueden ser parasitadas muy rápidamente y
con esto evitar que la simbiosis se
establezca y sea funcional.
2.9. Factores que afectan la
efectividad de los inoculantes
La efectividad de un inoculante se refiere a
la capacidad de estimular el beneficio en la
planta inoculada, el cual se puede medir
con base a la promoción en altura, diámetro
de tallo y crecimiento, así como por la
calidad de planta producida(Lovato et al.,
1996; Davies et al., 2000a y b). Sin
embargo, existen diversos factores que
están directamente involucrados en la
mayor expresión de la efectividad de los
inoculante en el vivero (Alarcón y Ferrera-
Cerrato 1999), los cuales se mencionarán a
continuación.
2.9.1. Planta
El conocimiento de la especie vegetal que
se pretenda propagar es un aspecto
importante a considerar. Si bien la simbiosis
micorrízica se puede establecer en más del
80% de las plantas conocidas, también es
cierto que algunas de ellas responden de
manera diferencial a la inoculación de hongos
micorrízicos. Con base a lo anterior, es
importante realizar la caracterización de plantas
considerando la susceptibilidad a ser
colonizadas por estos hongos (plantas
micorrízicas) y el grado de respuesta a la
inoculación (micotrofismo).
Estos aspectos, permiten predecir la posible
respuesta de las plantas a la inoculación de
hongos micorrízicos. Gran parte de su
respuesta positiva se debe a la presencia de
sistemas radicales con limitación para absorber
y aprovechar los nutrimentos contenidos en un
suelo o sustrato. Plantas con raíces con
escasos pelos radicales y del tipo magnoloide
(la mayoría de los frutales, algunas
leguminosas, especies forestales,
principalmente) son altamente dependientes a
la actividad de los hongos. Por otra parte las
plantas con denso sistema radical y
abundantes raíces laterales y pelos radicales
(tipo graminoide) como maíz, sorgo, trigo, etc.,
por lo que dependen menos de la simbiosis
micorrízica.
2.9.1.1. Micotrofía
Por micotrofía se debe entender el grado de
dependencia de las plantas en su crecimiento y
nutrición por la presencia de los hongos
micorrízicos establecidos en el sistema radical.
La micotrofía puede clasificarse en tres tipos:
(a) plantas no micotróficas, cuya su nutrición no
depende del establecimiento de los hongos
(crucíferas, amarantáceas, quenopodiaceas,
ciperáceas, Lupinus albus) aunque si pueden
establecer una simbiosis efímera; (b) plantas
micotróficas facultativas, aquellas que tienen
mayor dependencia hacia los hongos de
acuerdo con la presencia (disponibilidad) o
limitación de nutrimentos en el sustrato. Es
decir, existen plantas que si se encuentran
establecidas en sustratos con alta
disponibilidad de nutrimentos, éstas son
capaces de aprovechar los nutrimentos aún
cuando se hayan establecido los hongos
micorrízicos en la raíz, pero si estas mismas
plantas se establecen en sustratos con
limitación de nutrimentos, entonces la
respuesta y la dependencia hacia los hongos
52
son significativamente mayores. Las plantas
micotróficas obligadas (c) son aquellas que
requieren forzosamente del establecimiento
de la simbiosis micorrízica para poder así
satisfacer sus requerimientos nutrimentales
y presentar mayor capacidad de
crecimiento y mayor vigor, caso de
pináceas, Abies, Tsuga y Pseudotsuga,
principalmente para los hongos
ectomicorrízicos y la mayoría de las
especies frutales arbóreas y algunas
forestales latifoliadas, para los hongos
micorrízicos arbusculares.
Con base en lo anterior, es necesario saber
qué tipo de micotrofismo presenta la planta
en propagación en el vivero, de tal forma
que se plantee la inoculación de hongos
micorrízicos arbusculares y se asegure el
éxito de su aplicación, la cual es afectada
por las practicas realizadas en el vivero.
2.9.1.2. Relación infectividad versus
efectividad
Otros conceptos que deben ser bien
comprendidos por el viverista que incluya la
inoculación con hongos micorrízicos, son la
capacidad infectiva y efectiva de los
inoculantes. Como infectividad se entiende
la capacidad de los hongos de un
inoculante para establecerse en el sistema
radical de las plantas. La efectividad, por su
parte, se relaciona con la capacidad de los
hongos de un inoculante en promover el
crecimiento, sanidad y vigor de las plantas (
Ferrera-Cerrato y González-Chávez 1998,
Sylvia, 1999; Alarcón y Ferrera-Cerrato,
1999) Cabe aclarar que estos dos
conceptos no están correlacionados, es
decir, no necesariamente los hongos que se
establezcan abundantemente (80-90% de
colonización), en el sistema radical de las
plantas, pueden inducir mayores efectos, ya
que se pueden encontrar hongos que
colonicen la raíz en menor proporción (15-
40%) y muestren excelentes efectos en la
nutrición y crecimiento de las plantas. Con
esto se denota la importancia de utilizar
hongos cuya característica principal sea
propiciar el mayor beneficio a la planta, en
cualquiera de las variables que se tengan
como objetivo, independientemente del
grado de colonización que estos hongos
presenten en el sistema radical. Con ello, es
posible determinar la dependencia micorrízica
de las plantas de un vivero, entendiéndose ésta
como el grado de respuesta en crecimiento o
nutrición de las plantas por efecto de la
inoculación de hongos micorrízicos (expresado
en porcentaje), en función de las características
de fertilidad de los sustratos en los que se
establezcan las plantas.
2.9.2. Sustrato
Como se mencionó en el capítulo de viverismo,
el sustrato de crecimiento para las plantas tiene
relevante importancia en función del contenido
nutrimental y características físicas y
biológicas. De esta misma forma, el sustrato es
fundamental en el establecimiento y
funcionalidad de la simbiosis micorrízica y para
que el efecto benéfico de la simbiosis se
exprese, se requiere de la esterilización y/o
desinfección (solarización, fumigación,
vaporización) del sustrato con el fin de evitar
posibles daños por la presencia de
microorganismos fitopatógenos que además de
ser una fuente de diseminación de
enfermedades también pueden influir en la
capacidad de los hongos micorrízicos de
colonizar el sistema radical. Mediante esta
sencilla práctica no solo se asegura que la
simbiosis se establezca y sea funcional sino
también se evita la proliferación de
enfermedades de hábito radical que afectan la
sanidad, crecimiento y vigor de las plantas.
2.9.2.1. Características químicas
Sin lugar a dudas, las características químicas
de los sustratos utilizados en viveros son
fundamentales para abastecer de nutrimentos a
las plantas. Sin embargo, es necesario tener en
cuenta que sustratos altamente ricos en
materia orgánica y particularmente fósforo,
pueden inhibir la simbiosis micorrízica. Con
esto se trata de puntualizar que no
precisamente se requiere utilizar sustratos ricos
en nutrimentos (tanto orgánicos como
inorgánicos) como el “suelo de monte” (el uso
de este tipo de sustrato contribuye al proceso
de degradación de sustratos de bosques por lo
que es necesario utilizar otras fuentes de
sustratos alternos), sino que es posible utilizar
53
sustratos con limitación nutrimental de
modo que la simbiosis establecida funcione
adecuadamente en el aprovechamiento de
los nutrimentos existentes y que deben de
reflejarse en el buen desarrollo de las
plantas. No obstante, es importante conocer
algunos aspectos considerados como
adecuados en la literatura como el pH que
debe de ser 5.8–7.5, contenido de fósforo
disponible menor de 20 µg g-1 de sustrato,
materia orgánica menor al 2.0% y tener una
conductividad eléctrica o contenido de sales
menor a 1.0 dS m-1, que no sólo afectan la
simbiosis, sino también a las plantas del
vivero.
2.9.2.2. Composición de mezclas
El sustrato debe tener características
adecuadas para el crecimiento de las
plantas (aireación, retención de humedad y
disponibilidad de nutrimentos). Con base a
esto, el uso de diversos materiales tanto
orgánicos como inorgánicos debe de
considerar la elaboración de mezclas en
proporciones tales, que permitan a las
plantas crecer sin problemas. Como
materiales orgánicos que pueden ser
utilizados se tienen los productos derivados
del composteo y vermicomposteo, cachaza,
bonote de coco, etc. Sin embargo, estos
materiales son muy ricos en materia
orgánica y para tener un efecto benéfico por
la simbiosis, se recomienda utilizar estos
productos en dosis menores al 12%.
Además, es posible utilizar otros tipos de
sustratos, como los mencionados en el
capítulo de viverismo, y con ello favorecer
la efectividad de la simbiosis micorrízica.
2.9.3. Manejo de vivero
Uno de los aspectos importantes que
repercuten en la efectividad de los
inoculantes con base en hongos
micorrízicos en el incremento de la calidad
de las plantas, es la aplicación de productos
químicos como los fertilizantes y
plaguicidas, en el vivero.
2.9.3.1. Fertilización
La aplicación de fertilizantes, particularmente
fosfatados, puede ser reducida cuando se
utilizan los inoculantes de hongos micorrízicos,
ya que los hongos favorecen el
aprovechamiento más eficiente de los
nutrimentos inorgánicos contenidos en el
sustrato. Además, este beneficio de los hongos
permite utilizar en forma más racionada los
fertilizantes y con ello reducir los costos de
producción de plantas. Es posible utilizar
fertilizantes de liberación lenta, de modo que
las plantas en simbiosis puedan aprovechar los
nutrimentos durante sus diferentes etapas
fenológicas.
2.9.3.2. Aplicación de biocidas
En la actualidad es posible encontrar diversos
productos de biocidas (plaguicidas) que se
venden comercialmente; de acuerdo a su
acción sobre organismos específicos se
pueden clasifican en insecticidas, nematicidas,
fungicidas y herbicidas. Todos ellos pueden
afectar diferencialmente a la simbiosis
micorrízica, de acuerdo con la susceptibilidad
de los hongos al ingrediente activo así como
por su modo de acción (sistémico o de
contacto). Aun cuando el uso de estos
productos es un aspecto importante de manejo
en el vivero, es mejor utilizarlos en menor
proporción y en dosis adecuadas de modo que
con ello, se eviten problemas relacionados con
la disminución de la efectividad de los hongos
micorrízicos así como evitar problemas de
contaminación ambiental que se generan por
su aplicación.
2.9.3.2.1. Insecticidas
En el caso de los insecticidas, al parecer su
efecto no es perjudicial para el establecimiento
y efectividad de los hongos micorrízicos en el
sistema radical de las plantas, aún cuando se
apliquen productos sistémicos. Como ejemplo
de ellos, se tiene el insecticida sistémico
Marathon 1% granular (ingrediente activo:
imidacloropird, 1-[(6-cloro 3-pirinidil) metil]–n-
Nitro-2-imidalidimina) y otros insecticidas
organofosforados cuya formulación y forma de
54
aplicación no produce daño para la
simbiosis (Dr. Frederick T. Davies Jr.,
comunicación personal). Incluso se ha
evaluado la aplicación de insecticidas de
origen orgánico, como el caso de extractos
vegetales (Azadirachta indica L., nim;
Calotropis gigantea L., Catharanthus roseus
(L.) G. Don. y Eucalyptus sp., Parthenium
hysterophorus L y Pongamia pinnata (L.).
Pierre)(Bhatnagar y McCormick, 1988;
Shetty, et al., 1989; Sarvamangala et al.,
1993) y algunos de ellos no tienen efectos
perjudiciales en la efectividad de los
hongos ( Manjarez-Martinez y Ferrera-
Cerrato, 2000)
2.9.3.2.2. Nematicidas
En el caso de los nematicidas, éstos
aparentemente no afectan la actividad de
los hongos micorrízicos y se pueden aplicar
sin contrarrestar la actividad benéfica de la
simbiosis. Como ejemplo de estos
productos se tienen al Temik, Carbaryl y
Diazinon. Por otra parte, no se tienen
reportes sobre el efecto que tienen las
aplicaciones de productos orgánicos
(extractos vegetales, etc.) en la
colonización y efectividad de los hongos
micorrízicos.
2.9.3.2.3. Fungicidas
Uno de los principales productos utilizados
en el control de enfermedades,
particularmente de hábito radical, son los
fungicidas. En muchos de los casos, es
preferible utilizar aquellos funguicidas cuyo
modo de acción sea de contacto, mientras
que se tenga la necesidad de usar
fungicidas sistémicos, estos deben ser
Selectivos (específicos) a ciertos grupos de
hongos fitopatógenos como el Previcur en
dosis de 0.15% para el control de
Oomycetos como Pythium y que no afecta a
la micorriza. Se debe tener cuidado de
utilizar productos como Captan, Captafol,
Thiabendazol, Maneb, Clorotalonil,
Benomyl, Bayleton y Cercobin,
principalmente, cuyos efectos han sido
reportados como negativos para la
simbiosis. En muchos de los casos es
posible aplicar fungicidas en dosis más
bajas (50%) a las recomendadas para cada
producto, e incluso combinarse con productos
de origen natural.
2.10. Evaluación de la efectividad de
los inoculantes
La efectividad de los inoculantes puede ser
evaluada con base en los efectos benéficos
que tienen en las plantas a las cuales se realizó
la aplicación. Para este caso, se toman en
consideración aspectos morfológicos de
crecimiento y fisiológicos, e incluso calidad de
planta y sanidad, así como su capacidad de
adaptación a condiciones extremas.
2.10.1. Efecto en la morfología y
crecimiento
Como aspectos morfológicos y de crecimiento
se tienen aquellos relacionados con la
inducción de mayor altura, diámetro de tallo,
expansión foliar, área foliar específica,
asignación de crecimiento a determinada parte
de la planta (relación raíz:parte aérea) y
acumulación de materia seca. Todas estas
variables son modificadas por la aplicación de
hongos micorrízicos, de modo que el beneficio
de esta simbiosis sea evaluado con base en
estas variables (Lovato et al., 1996; Sylvia,
1989; Martins et al., 1997; Kahiluoto y
Vestverg, 2000; Kahiluoto et al., 2000). No
obstante, estos efectos son diferenciales de
acuerdo al tipo de planta propagada y la
combinación del hongo micorrízico (arbuscular
o ectomicorrízico) que se inocule.
La inoculación con hongos micorrízicos
arbusculares ha propiciado efectos
significativos en la promoción del crecimiento
de plantas como Casuarina equisetifolia
(Alarcón y Ferrera-Cerrato 1995,1996) y Acacia
cyanophylla (Gardezi et al., 1988) (Figura 29).
De este modo, la expresión benéfica de los
hongos puede ser diferencialmente modificada
de acuerdo con la composición del sustrato,
particularmente por la proporción de materia
orgánica utilizada. En la figura 28a se observa
que la adición de 12.5% de vermicomposta en
combinación con los hongos micorrízicos, el
desarrollo de la planta se ve potenciado en
comparación con el testigo no inoculado.
Cuando se varía la concentración de
55
vermicomposta al 25%, se sigue
observando el efecto de la micorriza
arbuscular comparado con el testigo, pero
también se observa respuesta del
tratamiento no inoculado a la aplicación de
vermicomposta (Figura 29b).
En el caso de leguminosas arbóreas, la
inoculación con hongos arbusculares
incrementa la altura y la biomasa de Acacia
cyanophylla. En la figura 29c se observa el
efecto de la inoculación de los endófitos
micorrízicos comparado con la respuesta
del testigo y con el tratamiento en el que se
inoculó la bacteria fijadora de nitrógeno del
grupo Rhizobium. La respuesta a reforestación.
inoculación con hongos arbusculares es
superior a los 50 y 100 mg de P kg-1 e igual
a lo observado con 150 mg de P kg-1
(Figura 29d).
Efectos benéficos de la inoculación con
hongos micorrízicos arbusculares, se han
encontrado en otras plantas de importancia
forestal como Leucaena leucocephala,
Eysendhartia polystachia, Cedrella odorata,
Tabebuia donell-smithii, Fraxinus
pensylvanica, Lyquidambar styraciflua,
Eucalyptus camaldulensis, E. globulus, etc.
(Brown et al., 1981; Sidhu y Behl, 1991;
Rios, 1995; Zulueta et al., 2000, Plascencia
et al., 1995; García, 2001)
En el caso de hongos ectomicorrízicos, su
efectividad no sólo se expresa en la
inducción de mayor altura, sino que también
en el vigor y estado nutricional de pináceas
como Pinus michoacana (Figura 30a). Por
otra parte, las respuestas a la inoculación
con estos hongos, pueden ser diferentes de
acuerdo con el hospedante al que se
inoculan. Así, la inoculación con Pisolithus
tinctorius puede ser efectivo en Pinus
michoacana y presentar poca efectividad en
el crecimiento y desarrollo de Pinus
pseudostrobus (Figura 30a y b). Para
corregir el bajo desarrollo de algunas
pináceas inoculadas con hongos
ectomicorrízicos, se recomienda el uso de
picomódulos (fertilizante de liberación lenta)
considerados compatibles con los hongos
simbiontes utilizados en plantas de interés
forestal (Figura 29b).
2.10.2. Inducción de velocidad de
crecimiento
Las plantas inoculadas con los endófitos
micorrízicos presentan mayor tasa de
crecimiento (Figura 28b), ya sea con base a la
evaluación de altura, materia seca acumulada o
diámetro de tallo. Mediante este beneficio
aportado por la simbiosis micorrízica, el
viverista tiene ventajas ya que por un lado, se
acorta el tiempo de estancia de las plantas en
el vivero y por ello, es posible injertar
variedades comerciales (en algunos casos) e
incluso, liberarla para uso en los programas de
Por otra parte, la producción de planta
micorrizada puede tener menor costo de
producción, al disminuir el uso y frecuencia de
aplicación de fertilizantes. Para definir bien este
ultimo beneficio, se requiere el análisis del
costo-beneficio económico de las plantas
producidas tanto con simbiosis micorrízica
como por aquella obtenida con fertilizantes.
2.10.3. Calidad de planta producida
El concepto de calidad de planta ha tenido en
la actualidad gran interés, ya que se trata de
predecir el éxito de una plantación con base al
establecimiento de índices de calidad de planta
producida en vivero. La calidad de planta
involucra aspectos genéticos, morfológicos y
fisiológicos; sin embargo, este concepto es
relativo ya que se pueden presentar
variaciones de acuerdo con la especie
propagada, sitio donde se va a plantar
definitivamente y objetivos de la producción de
las plantas (Mohedano, 1999; Cruz, 2001).
Existen criterios para definir la calidad de
planta, los cuales se pueden basar en aspectos
morfológicos: altura, diámetro del cuello del
tallo, cociente altura/diámetro, arquitectura de
la parte aérea y arquitectura de la raíz, así con
aspectos fisiológicos como relación agua-
planta, nutrición, potencial de regeneración
radical, fotosíntesis, transpiración y cantidad de
carbohidratos en cuello del tallo y raíz.
56
a) b)

Glomus Glomus
Testigo
intrarradices Zac-19
Glomus Glomus
intrarradices Zac-19 Testigo

12.5:12.5:75 50:25:25
Suelo:vermicomposta:arena Suelo: vermicomposta:arena

c) d)

Glomus Zac-8 Glomus

Testigo Rhizobium
+ Rhizobium Zac-8 Testigo
50 ppm 100 ppm 150 ppm
P2O5 P2O5 P2O5

Figura 29. Efectividad de hongos micorrízicos arbusculares en la altura de plantas de Casuarina

equisetifolia L. establecidas en dos condiciones de aplicación de vermicomposta (a y b) y
en plantas de Acacia cyanophylla con y sin la doble inoculación HMA-Rhizobium (c) y su
comparación con el efecto de la aplicación de tres niveles de fertilización fosfatada
(P2O5) (d).

57
 a)

Testigo Inoculado con esporas de Testigo

Pisolithus tinctorius

b)

Inoculado con esporas Testigo Inoculado con Pisolithus tinctorius +

de Pisolithus Picomódulo
tinctorius

Figura 30. Promoción del crecimiento y vigor de plántulas de (a) Pinus michoacana y (b) Pinus
pseudostrobus inoculados con esporas de Pisolithus tinctorius. Picomóudulos-fertilizante
de liberación lenta, en forma de pastilla (García y Ferrera-Cerrato, 1982).

Uno de los índices de calidad que es plantas (podas aéreas, fertilizaciones,

fácilmente calculado y utilizado en
pináceas, es el de Dickson et al. (1960) que
expresa la combinación entre la relación
raíz:parte aérea-raíz (peso seco) y el índice
de robustez que relaciona la altura (cm) y el
diámetro del tallo (mm) de la planta:
Índice de Peso seco total de la planta (g)
calidad =
Altura (cm) Peso seco parte aérea (g)
+
Diámetro de Peso seco de raíz (g)
tallo (mm)
Entre más cercano sea el valor obtenido de
la ecuación a la unidad, denotará mayor
calidad de las plántulas producidas en el
vivero. De este modo, se pueden establecer
diversos índices con base en las diferentes
prácticas utilizadas en la producción de
58
inoculación de hongos micorrízicos, etc.), de tal
forma que también se puede proceder el
tiempo de liberación de la planta a condiciones
de campo e incluso, por ejemplo, se puede
utilizar para establecer el índice adecuado para
efectuar la injertación de variedades
comerciales en portainjertos.
2.10.4. Adaptación a condiciones limitantes
Una de las ventajas que presentan las plantas
que fueron previamente inoculadas con hongos
micorrízicos (arbusculares o ectomicorrízicos)
cuando son liberadas a condiciones de campo,
es el aumento de su capacidad de adaptación y
tolerancia al estrés que implica su
establecimiento en el campo. En el cuadro 8,
se hace mención de algunos efectos benéficos
que la simbiosis micorrízica aporta a las
plantas establecidas en diversas
condiciones de estrés comunes en el
campo.
2.10.4.1. Salinidad
La condición salina de un suelo produce
efectos negativos en el crecimiento de la
mayoría de las plantas que comúnmente se
producen en el vivero. Sin embargo, el uso
de especies forestales con mayor grado de
adaptación a esta condición adversa
favorece el éxito de la plantación. De este
modo, se deben utilizar preferentemente,
especies que ecológicamente están
adaptadas a este problema edáfico como
pinos piñoneros (Pinus cembroides) Salix
bonplandiana, Salix sp., Casuarina sp.,
entre otras. Por otra parte, la inoculación
con hongos micorrízicos arbusculares,
confiere a estas plantas mayor capacidad
de adaptación y tolerancia a sales mediante
la modificación de su fisiología en función
de la síntesis de compuestos orgánicos
internos de la planta que propician mayor
capacidad de aprovechamiento del agua
(prolina, otros solutos y trehalosa producida
por los hongos), así como favorecer la
relación nutrimental que posibilita a las
plantas adaptarse a estos ambientes. Un
aspecto importante a considerar es la
producción de planta con menor porte en
altura y mayor volumen radical. Estas
características contribuyen en la reducción
del daño por la condición salina del suelo y
que se propicie la adaptación de la planta.
2.10.4.2. Sequía
En buena parte, la sequía representa
problemas semejantes a los que se
presentan en plantas expuestas a
condiciones salinas, solo que en este caso,
la prolongada exposición de estrés hídrico
representa una limitante para el
establecimiento de plantaciones forestales
con fines de rehabilitación de zonas con
este tipo de problema. En este caso, el uso
de especies con tolerancia a estrés hídrico
como algunas leguminosas arbóreas
(Prosopis, Mimosa, Leucaena,
Eysendhartia, etc., especies micotróficas
obligadas), puede representar un excelente
potencial para este tipo de zonas, no solo en la
reforestación sino que también en su
aprovechamiento por el hombre. Dada la
condición micorrízica y micotrófica de estas
plantas (Carrillo-García et al., 1999), su
producción en el vivero debe incluir la
inoculación con hongos micorrízicos
arbusculares para favorecer su crecimiento,
sanidad, nutrición y vigor, así como su
capacidad de adaptación y desarrollo en el
sitio. No obstante, también se pueden producir
en el vivero, plantas nativas del sitio y a la vez,
inocular con hongos micorrízicos arbusculares
ecológicamente adaptados a las zonas áridas,
de modo a que se favorezca el crecimiento y
desarrollo de las plantas propagadas en el
vivero.
2.10.4.3. Tolerancia a condiciones de
acidez y alcalinidad
En diversos suelos de México, se presentan
condiciones de acidez o alcalinidad que
redundan en el pobre y limitado crecimiento de
las plantas que en ellos se establecen. Con
base en lo anterior, es posible realizar
diferentes prácticas de manejo (aplicación de
mejoradores de suelo tanto orgánicos como
inorgánicos) con el fin de propiciar cambios en
el grado de acidez o alcalinidad y con ello
favorecer el crecimiento de plantas con la
capacidad de tolerar dichas condiciones, por
ejemplo, Casuarina obesa (Sidhu y Behl, 1992).
Al propagar estas plantas en el vivero, es
posible proceder a la inoculación con hongos
micorrízicos arbusculares o ectomicorrízicos,
según el hospedante, con el fin de obtener
plantas más vigorosas y con mayor capacidad
de adaptación a las condiciones edáficas
mencionadas.
59
Cuadro 8. Especies arbóreas con uso potencial en la recuperación de suelos con posibilidad de
inocularlas exitosamente con hongos micorrízicos arbusculares (HMA) o ectomicorrízicos
(HECM) en el vivero.
Nombre científico Tipo de planta Simbiontes Condición de adaptación
micorrízicos

Acacia spp Leguminosa tropical HMA Sequía

Acer pseudoplatanus Deciduo HMA Sequía
Betula papyrifera Deciduo HECM Acidez, fertilidad pobre
Betula pubescens Deciduo HECM Fertilidad pobre
Casuarina equisitefolia Tropical HMA Acidez
Crotalaria anagyroides Leguminosa Tropical HMA Acidez
Fraxinus americana Deciduo HMA Sequía, alta humedad
Leaucaena leucocephala Leguminosa Tropical HMA Sequía
Pinus caribbea Conifera HECM Acidez, sequía, fertilidad pobre
Pinus cembroides Conifera HECM Sequía, salinidad
Platanus occidentalis Deciduo HMA Alta humedad, metales pesados
Populus spp Deciduo HECM Acidez
Prosopis spp Leguminosa HMA Sequía

2.10.4.4. Grado de perturbación tiempo de exposición del suelo a la intensidad

El grado de perturbación de los suelos
(alteración del estado del suelo debido al
impacto de fenómenos atmosféricos y
manejo de los sistemas por el hombre;
Álvarez y Ferrera-Cerrato, 1995) es un
aspecto que debe ser considerado al
momento de la producción de plantas en
vivero, ya que éstas deben tener
características adecuadas que permitan
que su tasa de supervivencia sea mayor y
se garantice, en cierta forma, el éxito de las
plantaciones con fines de restauración o
rehabilitación de zonas perturbadas.
2.10.4.4.1. Erosión
Sin lugar a dudas, la erosión tanto eólica
como hídrica contribuye en forma
significativa en la pérdida de la capa fértil
de los suelos. Algunas estimulaciones
señalan que la pérdida de suelos por acción
del viento es de 10 mm año-1 , mientras que
por acción del agua es de 1 mm año-1. Sin
embargo, estas cifras son variables en
función de la variabilidad ambiental y del
60
de los agentes de erosión, por lo que la pérdida
de suelo puede ser mayor en ciertas zonas. De
forma natural, la sucesión vegetal se lleva
acabo en forma lenta y se caracteriza por la
presencia de especies pioneras y posterior
aparición y colonización de especies
permanentes (Allen M, 1992, 1999; Allen E,
1999). El conocimiento de estos procesos de
sucesión, permite aplicarlos utilizando
principalmente plantas consideradas como
permanentes y que además sean susceptibles
de formar micorriza. Con lo anterior, es posible
crear condiciones que favorezcan los procesos
de restauración de zonas, al propiciar la
creación de manchones o islas de fertilidad
(Carrillo-García et al., 1999a y b) que a largo
plazo, contribuirán a la expansión de mayor
cobertura vegetal y con ello a la restauración
de la zona.
2.10.4.4.2. Desertificación
La desertificación es un proceso originado por
la actividad de los agentes de erosión e
inadecuados manejos agrícolas y minería. Este
proceso se caracteriza por la sucesiva pérdida
de las propiedades físicas, químicas,
biológicas del suelo, que definen la fertilidad
del mismo. Al igual que en las zonas
erosionadas, en zonas desérticas es
posible implementar procesos de
restauración con base al manejo de
especies con tolerancia a dichas
condiciones y de acuerdo al conocimiento
de los procesos de sucesión vegetal. En
ambos casos es posible utilizar especies
arbustivas y arbóreas como leguminosas
(Mimosa luisana, Prosopis laevigata, etc.)
(Reyes-Quintanar et al., 2000) y algunas
gramíneas como Bouteluoa gracillis,
mismas que son susceptibles de ser
colonizadas por los hongos micorrízicos
arbusculares los cuales confieren ventajas
fisiológicas a condiciones de estrés hídrico
y temperaturas extremas.
2.10.4.4.3. Contaminación
La contaminación del suelo puede ser
originada por la deposición de diferentes
compuestos tóxicos. Actualmente este
problema ha tenido especial preocupación
tanto en nuestro país como en muchas
otras regiones del mundo, ya que
representa un constante riesgo para el
ambiente y para la salud humana. Como
alternativas para la recuperación de áreas
contaminadas con hidrocarburos o metales
pesados, están la fitodescontaminación y la
fitoestabilización en las que se tiene la
participación directa de la planta y su
microflora rizosférica (Cunningham et al.,
1996). Estas alternativas biológicas de
remediación tienen como ventaja su bajo
costo (comparado con la remediación de
suelos mediante técnicas químicas y de
ingeniería), así como su aceptación pública
para su aplicación, además de tener bajo o
nulo impacto ecológico. El uso de hongos
micorrízicos en la fitorremediación de
suelos contaminados, representan una
posibilidad de disminuir los riesgos de los
contaminantes en el suelo, así como
reestablecer la vegetación en estas áreas
(Jasper, 1994). La presencia de los hongos
ectomicorrízicos y hongos micorrízicos
arbusculares es de vital importancia para el
establecimiento de especies arbustivas y
arbóreas en suelos contaminados.
61
Ejemplos de éstas son: pinos, abedules,
sauces (especies formadoras de
ectomicorriza), Acer y Salix (que establecen
simbiosis con hongos ectomicorrízicos y
micorrízicos arbusculares). Por otra parte, las
especies creciendo cerca de suelos mineros
como Festuca rubra, F. ovina, F. arundinaceae,
Andropogon gerardii, Holcus lanatus, Agrostis
capilaris, A. stolonifera y Deschampsia
flexuosa, tienen la capacidad de formar
micorriza arbuscular
La magnitud del problema de contaminación en
México permite predecir el enorme potencial de
los hongos micorrízicos con el fin de expandir
su uso práctico en la fitorremediación de suelos
contaminados al inocularlos, ya sea por
hidrocarburos o metales pesados.
2.11. Evaluación de la colonización
micorrízica
En todos los sistemas donde se aplican los
hongos formadores de micorriza es necesario
evaluar la colonización. Esta evaluación varía
desde una simple observación de las raíces e
identificación de la formación de la micorriza,
hasta la cuantificación microscópica basada en
métodos específicos ya probados. En
cualquiera de los casos, el propósito es
identificar si las raíces fueron colonizadas por
el hongo y en que cantidad. Para esto, se
recurre a la evaluación de muestras frescas de
raíces con crecimiento secundario. Un proceso
de clareo y tinción de la raíz resulta
indispensable cuando se han inoculado hongos
formadores de micorriza arbuscular, no así
para el caso de la ectomicorriza donde la
cuantificación se realiza directamente. Así, el
método más utilizado para evaluar la
colonización por hongos micorrízicos
arbusculares, es aquél donde se emplea KOH
al 10% para eliminar todo el contenido celular,
así como pigmentos con el fin de observar, sin
interferencias, las estructuras fúngicas que son
teñidas con azul tripano y con otros colorantes
como negro E de clorazol, fucsina ácida
(Brundrett et al., 1996; Dickson y Smith, 1998)
e incluso con anilina o tinta china (Dr. Chris
Walker comunicación personal).
La medición de la colonización puede
realizarse mediante métodos no sistemáticos y
métodos sistemáticos, que de acuerdo con
cierto proceso es posible realizarlo en los
viveros o preferentemente enviar las
muestras a laboratorios especializados para
dar un diagnostico más completo en la
colonización tanto por hongos micorrízicos
arbusculares como ectomicorrízicos
(Alarcón, 2001).
2.11.1. Métodos no sistemáticos
Para la micorriza arbuscular, los métodos
no sistemáticos involucran la revisión
subjetiva de la muestra que permite inferir
la presencia de hongos micorrízicos
arbusculares colonizando las raíces, como
es el caso de pigmentación amarilla en
raíces de cebolla, pero no proporciona
información del tipo de estructuras fúngicas
presentes. Esta observación no representa
para el evaluador ninguna seguridad de la
frecuencia ni proporción del sistema radical
colonizado por los hongos, por lo que se
requiere utilizar otros métodos.
Para el caso de la ectomicorriza, su
evaluación consiste en determinar si los
hongos ectomicorrízicos se establecieron
en la planta. El tipo de estructura
micorrízica formada (digitiforme, bifurcada,
coraloide, pinnada, etc. ver figura 17), se
compara con la arquitectura original del
sistema radical de plantas no colonizadas
por los hongos (Ferrera-Cerrato, 1993). Con
base lo anterior, se pueden crear clases
subjetivas que consisten en comparar el
grado de formación de estructuras
ectomicorrízicas en la raíz (Figura 31a-d).
Esta comparación permite obtener valores
numéricos subjetivos en forma de escala, la
cual es utilizada por el USDA Forest
Service de Georgia, tomando
consideración varias repeticiones para
establecer los diferentes grados de
colonización. Mediante esta observación es
posible estimar el porcentaje
colonización por ectomicorrízicos con base
en el tipo y color de la estructura micorrízica
que éstos forman. Por ejemplo, Pisolithus
tinctorius forma estructuras micorrízicas de
color café y Cenococcum geophylum de
color negro.
El establecimiento de la escala de colonización
puede ser ajustada mediante la observación del
sistema radical al microscopio estereoscopio en
la que se realiza una revisión minuciosa de
toda la raíz de la planta (separada
cuidadosamente del sustrato de crecimiento)
para detectar las ramificaciones y
deformaciones de las raíces alimentadoras
(feeder roots) inducidas por el hongo
ectomicorrízico (Figura 16a-d).
2. 11. 2. Métodos sistemáticos
Los métodos sistemáticos conllevan el
seguimiento de procesos bien definidos que
permiten evaluar cuantitativamente la
colonización fúngica en la raíz con mayor
precisión. En el caso de la micorriza arbuscular,
con este tipo de métodos se cuantifica la
intensidad de la colonización y el tipo de
estructuras presentes (hifas, arbúsculos,
vesículas) por cada segmento de raíz
evaluado. El procedimiento utilizado se basa en
aquel que fue propuesto por Phillips y
Haymann (1970). Este proceso inicia con la
exposición de las raíces en una solución de
KOH al 10%, expuesta a calor (a ebullición o en
olla de presión a 10 lb) durante 10 minutos,
repitiendo este paso hasta obtener la raíz libre
de pigmentos (taninos, polifenoles, etc.).
Posteriormente, las raíces son enjuagadas con
agua corriente para después exponerlas a agua
oxigenada comercial durante 10-15 minutos.
Las raíces se enjuagan nuevamente y se
adiciona una solución de HCl al 10% durante
10-15 minutos. Pasado este tiempo el ácido se
elimina, y sin enjuagar, las raíces son
sumergidas en una solución colorante de azul
tripano al 0.05% en lactoglicerol (100 mL de
ácido láctico comercial, 100 mL de glicerina
comercial y 100 mL de agua destilada). Las
en raíces se exponen a calor (a ebullición o en olla
de presión a 10 lb), durante 10 minutos, para
facilitar su tinción (Figura 32).
de
62
 0% 1-25% 26-50% 51-75% 76-100%
Figura 31. Evaluación de la colonización ectomicorrízica en raíces de pináceas, mediante el
establecimiento subjetivo de una escala (0-100 %) que representa la presencia, en
porcentaje, de las diferentes estructuras ectomicorrízicas en el sistema radical de las
plantas hospedantes.

Una vez teñidas las raíces, éstas se cortan
en segmentos de 1.5 centímetros de largo
(procurando que sean las raíces más finas)
y se colocan en forma paralela, sobre
portaobjetos con unas gotas de
lactoglicerol. En cada portaobjetos se
montan de 25 segmentos de raíz por
cuatriplicado y finalmente, se les coloca un
cubreobjetos, quedando la preparación lista
para su observación al microscopio óptico a
objetivo de inmersión 100x (Figura 33). Este
procedimiento, a pesar de su laboriosidad,
permite realizar una mejor estimación de la
colonización de las diferentes estructuras
características de los hongos micorrízicos
arbusculares en las células corticales. Una
vez realizada la observación microscópica
de las raíces, y haber procedido a contar
los segmentos radicales colonizados o no
colonizados por los HMA, se procede a
calcular el porcentaje de la frecuencia de
colonización (Biermann y Linderman, 1981).
La determinación del porcentaje de
colonización, se basa en la observación
microscópica de segmentos de raíz
teñidos y en ellos, contabilizar aquellos que
63
presentan estructuras fúngicas (hifas,
arbúsculos y vesículas), a la vez de contar los
segmentos no colonizados. El porcentaje de
colonización total se determina dividiendo el
número de segmentos de raíz colonizados, por
cualquier estructura fúngica, entre el número de
segmentos totales observados (suma de los
segmentos colonizados y los segmentos no
colonizados), multiplicado por 100:
Número de segmentos
colonizados (Hifas, arbúsculos
o vesículas)
% Colonización = ------------------------------------- x 100
Número de segmentos totales
observados
Por otra parte y considerando su rapidez de
evaluación, se tiene otro método con base al
uso de cajas de Petri con cuadrícula de 1cm2
(intersección de cuadrantes, generado por
Giovanetti y Mosse, 1980) y la observación de
las raíces al microscopio estereoscópico. El
método consiste en colocar aproximadamente
un gramo de raíces, previamente teñidas, en
las cajas de Petri cuadriculadas. Las raíces se
distribuyen en el interior de la caja y se les
agrega un poco de agua para que no se
deshidraten. La caja se coloca bajo el
microscopio estereoscópico y se comienza
la observación, siguiendo las líneas de la
cuadrícula, empezando por las líneas de la
cuadrícula horizontal y al finalizar, continuar
con las líneas de la cuadrícula vertical
(Figura 34).

c)

b) d)
a)

KOH 10% H2O2 10%

KOH 10% 10 libras, 10 minutos 10 minutos

h)
e) f) g) i)

Enjuague con HCl 10% Azul tripano Tinción con calor Raíces teñidas
agua corriente 10 minutos 0.05% 10 libras, 10 minutos

Figura 32. Pasos metodológicos de clarificación y tinción de raíces colonizadas por hongos
micorrízicos arbusculares. a) corte de raíces y colocación de raíces en cápsulas
esterilizadas, b) cápsulas de raíces en solución de KOH al 10% , c) cápsulas expuestas a
calor por ebullición o sometidas a presión (10 lb) durante 10 minutos, d) cápsulas
expuestas a solución de agua oxigenada por 10 minutos, e) enjuague de las cápsulas con
agua corriente, f) cápsulas expuestas a HCl al 10% durante 10 minutos, g) cápsulas
expuestas a solución colorante con azul tripano 0.05% en lactoglicerol, h) exposición de
las cápsulas a calor por ebullición o a presión durante 10 minutos, i) cápsulas con raíces
teñidas, listas para su montaje.

Conforme se hace el recorrido de las líneas
horizontales y verticales, se toman lecturas
de las intersecciones de las raíces sobre las
líneas de la cuadrícula y de aquellas raíces
en las que se detecte colonización por los
hongos micorrízicos arbusculares. Una vez
cuantificadas todas las intersecciones, se
contabiliza el total de raíces colonizadas y
el total de raíces no colonizadas y con base en
el total de segmentos cuantificados, se estima
el porcentaje de longitud de raíz colonizada e
incluso el porcentaje de longitud total de la raíz
(Figura 34c).

64
 b)

a)

c)
)

Figura 33. Evaluación de la colonización por hongos micorrízicos arbusculares en el sistema radical de
las plantas, con base al montaje de raíces teñidas sobre portaobjetos: a) colocación de
raíces teñidas en cajas de Petri; b) montaje de raíces en portaobjetos con lactoglicerol; b)
observación de las preparaciones al microscopio de campo claro a objetivo de inmersión
100x e identificación de las estructuras fúngicas intrarradicales.

Este método es recomendable para raicillas

de fácil observación (cebolla, poro, lechuga,
etc.) cuya existencia y grado de colonización,
permite observar la colonización por los
hongos micorrízicos arbusculares; mientras
que no muy es recomendable para raíces de
consistencia semileñosa o leñosa (árboles
forestales o frutales), por su dificultad para
teñirlas. La determinación del porcentaje de
raíz colonizada mediante el método de
intersección de cuadrantes se calcula
mediante la siguiente ecuación:

Longitud de raíz Total de intersecciones colonizadas (cm)

colonizada (%) = ------------------------------------------------------------------------------ X 100
Total de intersecciones no Total de intersecciones
colonizadas (cm) + colonizadas (cm)

65
 a)

Líneas horizontales
RM NRT
c)
1 / 2

b) 2 / 3

3 / 3

3 / 6

2 / 6

4 / 6

1 / 3

Líneas RM 0 3 5 2 4 1 4 0
Verticales / / / / / / / /
NRT 0 7 11 11 10 6 6 0

Total de raíces micorrizadas (RM) = 35

Total de raíces observadas (NRT) = 80
(35 / 80) x100 =
Longitud de raíz colonizada = 43.7%

Figura 34. Método de evaluación de la colonización micorrízica por intersección de cuadrantes: a)

Colocación de raíces teñidas en caja de Petri con cuadrícula de 1cm2; b) Observación al
microscopio estereoscópico; c) Secuencia del seguimiento de la observación de las cajas de
Petri (flechas en dirección vertical y horizontal) para la cuantificación de segmentos
colonizados por hongos micorrízicos arbusculares ubicados sobre las líneas de la cuadrícula
( ◊ ).

Ambos métodos descritos, pueden

aplicarse a cualquier especie vegetal donde
se inoculen los hongos que forman
micorriza arbuscular, considerando un
tiempo mínimo de tres meses para
realizarlo, ya que en ese tiempo ya es
posible encontrar colonización en raíces de
plantas forestales leñosas. Para cualquier
simbiosis, la frecuencia en realización de
estas determinaciones dependerá
fundamentalmente de los objetivos del
viverista, de modo que con ello se asegure
liberar planta, a los sitios definitivos de
transplante, con una simbiosis micorrízica
bien establecida que confiera a las plantas
mayor capacidad de adaptación a las
condiciones tanto edáfica como climática
del sitio.
66
Para el caso de los hongos ectomicorrízicos, el
procedimiento sistemático para la evaluación
de la colonización consiste en contabilizar las
puntas con estructuras ectomicorrízicas en las
raíces de coníferas (Figura 35). Este método es
muy similar al de intersección de cuadrantes
descrito para la evaluación de hongos
micorrízicos arbusculares (ver Figura 34). El
procedimiento del método se lleva a cabo con
base a los siguientes pasos:
• Las raíces se cortan en segmentos y se
colocan en cajas de Petri cuadriculadas (1
cm2)
• Las cajas con las raíces se colocan en el
microscopio estereoscópico y se realizan
evaluaciones de las intersecciones de las
 raíces en el sentido vertical y horizontal
de la cuadrícula
• Se procede a cuantificar cada
intersección de la cuadricula con las
raíces y se contabilizan las raíces
colonizadas (con presencia de las
estructuras ectomicorrízicas) y las no
colonizadas
• Los valores se expresan en centímetros
cuadrados para cada condición de raíz
evaluada
• Además, es posible determinar la longitud
radical de la muestra con base a la suma
del conteo de raíces no colonizadas y
raíces colonizadas
A continuación se ilustran las estructuras
ectomicorrízicas típicas a observar y cuantificar
con el método de intersección de cuadrantes
(Tomado de Brundrett et al., 1996):

c)

a)

b)

75 44

Raíces sin Raíces

colonizar colonizada
s
Longitud radical total = 119 cm
Longitud de raíz colonizada = 44 cm
(44/119) x 100 =
Longitud radical colonizada = 36.97%

Figura 35. Método de evaluación de la colonización por hongos ectomicorrízicos mediante el método
de intersección de cuadrantes: a) colocación de raíces de coníferas en caja de Petri con
cuadrícula de 1cm2; b) observación al microscopio estereoscópico; c) observación de la
caja de Petri (en dirección vertical y horizontal) para la cuantificación de la longitud radical
y las puntas radicales con estructuras ectomicorrízicas que se sobrepongan a las líneas de
la cuadrícula.

67
2.12. Calidad biológica de los
inoculantes
A pesar de la importancia que actualmente
tienen los inoculantes microbianos en México,
desafortunadamente, no se cuenta con un
organismo que regule y evalúe la calidad de
los mismos. Dado que se carece de
estándares que establezcan la cantidad
mínima de propágulos infectivos de los
hongos micorrízicos, así como de garantizar
que los inoculantes estén libres de
organismos fitopatógenos, ningún inoculante
comercial pueden ser calificado como de alta
calidad. Un inoculante debe contener una
cantidad de propágulos de hongos
micorrízicos que permita colonizar la planta y
producir con el tiempo, efectos positivos en el
crecimiento y desarrollo. Con base en lo
anterior, cada compañía anuncia lo más
apropiado para sus productos y como
consumidores solo queda el recurso de
aplicarlos y esperar resultados; o bien,
proceder a la evaluación del inoculante y
corroborar si cumple o no con lo que se
presenta en la etiqueta del producto.
2.12.1. Evaluación microbiológica de los
inoculantes
La determinación del número de bacterias,
hongos y actinomicetos que vienen en
conjunto con un inoculante micorrízico, debe
realizarse mediante técnicas de laboratorio
específicas para Microbiología de Suelos. En
tal caso, se debe acudir a personal
especializado que además de cuantificar el
número de microorganismos ajenos al
inoculante (considerando la especificación del
producto), también pueda dar un diagnostico
de la presencia de patógenos. Las técnicas
microbiológicas se basan en el uso de
medios de cultivo específicos para cada
grupo microbiano y evaluar con ello, su
posible actividad fisiológica (fijadores de
nitrógeno, solubilizadores de fósforo,
patógenos, etc.).
Para estudios microbiológicos se requiere del
uso de productos sellados de origen, y evitar
con ello la introducción de otros
microorganismos por el manejo de los
68
inoculantes. De acuerdo con la evaluación de
los microorganismos, la cantidad (población)
de contaminantes en inoculantes comerciales
suele en algunos casos sobrepasar a la
cantidad de hongos micorrízicos pudiendo
causar efectos negativos sobre la planta
inoculada, lo cual puede, equivocaramente,
atribuirse al efecto del hongo micorrízico que
incluye el inoculante.
2.12.2. Evaluación de propágulos
micorrízicos
2.12.2.1. Cuantificación de esporas
El número de esporas en el inoculante
micorrízico (hongos micorrízicos arbusculares
y ectomicorrízicos) debe ser cuantificado
antes de que éste sea utilizado, de tal
manera que se asegure que la colonización
micorrízica se lleve a cabo. La separación y el
conteo de esporas se realizan un método
muy sencillo pero laborioso, ya que involucra
la observación y evaluación al microscopio
estereoscópico y en algunos casos en el
microscopio óptico.
Para el caso de hongos micorrízicos
arbusculares, la separación del soporte en
que van incluidas las esporas se realiza,
básicamente, mediante el método de
tamizado y decantado en húmedo (Figura
36). En este método, 100 g del inóculo se
disuelve con 1L de agua, la suspensión se
deja reposar durante unos segundos y el
sobrenadante se pasa a través de tamices o
mallas calibradas a 500, 250 y 44 micras para
capturar las esporas de acuerdo a su tamaño.
Este procedimiento de decantación se repite
al menos tres veces. El material que queda
atrapado en los tamices se recoge en su
totalidad y se observa al microscopio
estereoscopio y se procede a cuantificar el
número de esporas por gramo de inoculante.
Es importante recalcar que el conteo de
esporas debe ser realizado por personal con
experiencia para evitar confusiones y errores
en el conteo.
 a) b) c)

d) e)

f)

Figura 36. Método de tamizado y decantación en húmedo (Gerdemann y Nicolson, 1963) utilizado para
la extracción de esporas de hongos micorrízicos arbusculares tanto para aislamiento como
para cuantificación en muestras de suelo o en inoculantes. a) Muestra de suelo (100 g)
depositada en 1 litro de agua; b) agitación de la suspensión; c) Decantado del sobrenadante
y captura de esporas en tamices de malla 520 y 45 micras; d) Colecta de esporas retenidas
en los tamices; e y f) Observación y cuantificación de las esporas al microscopio
estereoscopio.

Un método muy sencillo para efectuar el
conteo de esporas de hongos
ectomicorrízicos se basa en diluciones
seriales, y en cada suspensión se agregan
unas gotas de Tween 20 al 1% para propiciar
la separación de las esporas y su suspensión
total en el aproximadamente. Con base a la
dilución más alta (10-7, 10-8 o 10-9) se colecta
una alícuota de 100 µL y se vierte ya sea en
una caja de Petri cuadriculada y se observa
al microscopio estereoscópico. Otra
alternativa consiste en colocar la alícuota
entre el cubreobjeto y la cámara de
Newbauer. La alícuota pasara por capilaridad
y con un papel filtro o absorbente se elimina
el exceso. Posteriormente, se coloca la
preparación en el microscopio óptico. La
cámara esta conformada por retículas (cuatro
retículas periféricas con 16 cuadros y una
retícula central con 400 cuadros). Tanto en la
retícula central como en las periféricas, se
procede a contar las esporas que estén
tocando las líneas de la retícula.
Una vez contabilizadas las esporas, se suma
el total de ellas y se divide entre cinco
(retículas) para obtener un promedio. Con
base en que cada retícula tiene 1 mm2 de
superficie y 0.1 mm de profundidad, el
promedio obtenido es el que se encuentra en
0.1 mm3, lo que equivale en 0.0001 ml. Dado
que el número de esporas se puede reportar
por mililitro, se procede a calcularlo de la
siguiente forma: X=[(número de esporas x 1.0
mL) / 0.0001 mL]. Este tipo de
determinaciones se pueden utilizar para
generar recomendaciones de la cantidad de
producto para aplicar a una determinada
cantidad de plantas, tal cantidad debe ser
superior a inocular 1.1 x 106 esporas por
plantas.

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2.13. Interacción con otros
microorganismos benéficos
2.13.1. Bacterias promotoras de
crecimiento
El término bacterias promotoras de
crecimiento es aplicado a aquellas bacterias
del suelo capaces de colonizar las raíces de
las plantas y estimular el desarrollo de las
mismas, a través de la síntesis de
reguladores del crecimiento como el ácido
indolacetico (AIA) (Azcon, 2000). Muchas de
éstas bacterias, además de promover el
crecimiento vegetal, presentas otras
importantes actividades fisiológicas como fijar
nitrógeno atmosférico, movilización de
fuentes insolubles de nutrimentos,
modificando el desarrollo y función de las
raíces para mejorar la absorción de agua y
nutrimentos y contribuir en el control de
microorganismos patógenos, mediante la
secreción de sustancias antibióticas. En los
últimos años, se ha incrementado la
información de los beneficios de estas
bacterias, pudiendo actualmente formularse
recomendaciones para su uso en los viveros,
sobre todo en especies de lento crecimiento.
El éxito de la introducción de estas bacterias
y de los hongos micorrízicos en la
propagación de plantas en el vivero es
seguro, puesto que se realizan algunas
prácticas que favorecen su establecimiento
en el sistema radical como la esterilización o
desinfección de recipientes, envases y
sustratos, el uso de fórmulas fertilizantes de
lenta liberación o en bajas dosis, aplicación
racional de plaguicidas, así como hacer el
seguimiento del contenido de humedad,
mismos que repercuten en los beneficios
tanto planta como a los simbiontes.
2.13.1.1. Bacterias fijadoras de Nitrógeno
De acuerdo con diversas investigaciones
reportadas en la literatura, se ha podido
establecer el efecto benéfico que tiene la
doble inoculación hongo micorrízico
arbuscular-bacterias fijadoras de nitrógeno
atmosférico. Un tipo de planta que resulta
beneficiada de este tipo de asociaciones son
las leguminosas, pues establecen simbiosis
con Rhizobium y hongos micorrízicos, por lo
70
que tienen mayor capacidad de aprovechar N
y P contenido. Es posible disminuir
considerablemente los requerimientos
nutrimentrales suministrado mediante
fertilización química (Azcon, 2000). Las
leguminosas herbáceas y semileñosas suelen
presentar micorriza arbuscular, mientras que
algunas leguminosas arbóreas pueden
presentan ectomicorriza (Cuadro 7). El
establecimiento de ambos microorganismos
en las leguminosas se establece a los pocos
días de la inoculación y al parecer no existe
competencia entre el hongo y la bacteria por
los puntos de colonización dando como
resultado mayor crecimiento en el
hospedante.
La doble simbiosis en leguminosas forestales
con propósitos de regeneración o
conservación de suelos, es una alternativa
que permitiría a algunas especies como
Acacia schaffneri, Dalea bicolor, Prosopis
laevigata, Robinia sp. y Leucaena
leucocephala mayor adaptación y
supervivencia en condiciones edafológicas y
climáticas adversas. Además la extensa red
de hifas, que explora el suelo y transloca
nutrimentos, no solo beneficia a la planta
originalmente inoculada sino también a otras
plantas que cohabitan en el mismo sitio, lo
cual contribuye en la estabilidad de las
comunidades de vegetales que conforman el
ecosistema.
Otra interacción importante de la micorriza
con fijadores de N, se da en plantas no
leguminosas que forman nódulos en la raíz y
a la asociación con actinomicetos del género
Frankia (actinorriza). Esta simbiosis se
establece en 20 géneros de especies
vegetales que en su mayoría son árboles y
arbustos de vida perenne. Algunos como
Casuarina, Eleagnus, Hyppophae,
Ceanothus, Colletia, Discaria, Purshia, Robus
y Dastica además de asociarse con Frankia
establecen simbiosis con hongos micorrízicos
arbusculares; mientras que Alnus, Myrica,
Comptonia, Dryas y Coriaria pueden
establecer simbiosis con los tres simbiontes
al mismo tiempo: actinorriza, micorriza
arbuscular y ectomicorriza. Los efectos de
estas interacciones sobre la planta se
manifiestan en la nutrición y crecimiento del
hospedante. Por último, la fijación biológica Existen bacterias que han mostrado actividad
de N también la realizan bacterias de vida antibiótica a hongos patógenos son
libre (diazotrofos); sin embargo, este tipo de Pseudomonas fluorescens y P. putida,
bacterias no han sido inoculadas ni además de Agrobacterium y otras cuyo efecto
evaluadaspoco se les ha asociado con antibiótico no afecta a la micorriza sino que
especies forestales y mucho menos en en ciertas ocasiones favorecen la
combinación con hongos micorrízicos germinación de las esporas o estimulan el
arbusculares. desarrollo del micelio hacia la raíz, por lo que
pueden usarse conjuntamente.
2.13.1.2. Bacterias solubilizadoras de
fósforo y productoras de
reguladores del crecimiento
vegetal

Las bacterias solubilizadoras de fosfatos

(fosfobacterias) de algunos géneros como
Pseudomonas y Agrobacterium facilitan el
aporte de fósforo a la planta mediante
algunos mecanismos como la secreción de
enzimas fosfatasas que permite que el
fósforo se haga disponible a la planta.
Cuando estas bacterias son inoculadas en
combinación con hongos micorrízicos la
captación de este elemento aumenta y se
promueve considerablemente el crecimiento
de la planta, con mínima fertilización química.
Estas bacterias, pueden ser también
promotoras de crecimiento, ya que producen
hormonas del crecimiento como citocininas,
giberelinas y ácido indol-acético además de
algunas vitaminas y otras sustancias que
inducen el crecimiento vegetal. Existen
muchos ejemplos del efecto conjunto en el
crecimiento de las plantas por el empleo de
los hongos micorrízicos y estas bacterias
promotoras en limonero, aguacate, capulín,
aile y muchas otras de interés hortícola.

2.13.1.3. Bacterias antibióticas

El control de ciertos patógenos del suelo

puede también lograrse con el empleo de
bacterias (Lara, 1998; Lara et al., 1998a y b).
Algunas de éstas producen compuestos que
inmovilizan nutrimentos (Fe) que los hongos
patógenos utilizan para su nutrición,
disminuyendo así la población de los mismos
por efecto de competencia (Crowley, 2001).
Otra forma incluye la competencia por
nutrimentos en la raíz, donde las bacterias no
patogénicas, por lo general, son más
competitivas, impidiendo que la población de
patógenos se convierta en un problema.
71
72
 3. SERVICIOS REQUERIDOS
3.1. Instituciones nacionales que • Pruebas de viabilidad de esporas de
pueden dar servicio hongos micorrízicos
• Evaluación de la colonización de hongos
El Área de Microbiología de Suelos del micorrízicos en el sistema radical de las
Instituto de Recursos Naturales del Colegio plantas inoculadas
de Postgraduados en Ciencias Agrícolas
(Montecillo, Estado de México) tiene la Para solicitar este tipo de servicios, acudir a:
infraestructura necesaria para desarrollar
programas de servicio y asesoría para las Dr. Ronald Ferrera-Cerrato
diferentes instancias productoras de plantas
en vivero, así como instituciones Área de Microbiología. Instituto de Recursos
gubernamentales, etc. Naturales. Colegio de Postgraduados en
Ciencias Agrícolas. Carretera México-Texcoco
3.2. Abastecimiento de inoculante km 35.5. Montecillo 56230, estado de México.
previa programación Tel-Fax: + 5 9520287 correo electrónico:
ronaldfc@colpos.colpos.mx
La producción de inoculante puede ser
generada por sistemas de producción con
base a la programación en la que se
contemplen los futuros requerimientos de
los viveros. Este proceso se realiza, por lo
menos con seis meses con de anticipación,
y su calidad se verifica en función de la
evaluación de su efectividad en plantas
indicadoras, así como de no llevar consigo
microorganismos fitopatógenos.

3.3. Servicio de evaluación

microbiológica en plantas e
inoculantes

La evaluación de la calidad de los

inoculantes comprende de manera general,
las siguientes pruebas realizadas con base
al seguimiento de los protocolos
establecidos en el Área de Microbiología:

• Microbiológicas: pruebas de
patogenicidad (bacterias y hongos),
presencia de bacterias con diferente
capacidad fisiológica (fijación de
nitrógeno en vida libre, solubilización de
fosfatos inorgánicos insolubles,
capacidad antibiótica a hongos
fitopatógenos, etc).
• Evaluación de la efectividad de los
inoculantes micorrízicos, básicamente
en la promoción del crecimiento

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