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Métodos y técnicas de cultivo.

CRECIMIENTO MICROBIANO

Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del número de


microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al
crecimiento de un único microorganismo que denominaremos ciclo
celular, sino al demográfico de una población. En este tema nos
centraremos en el crecimiento de bacterias, el estudio que se hace
puede servir también para entender el crecimiento de levaduras y de
otros hongos. El crecimiento de los virus se produce de otra forma
diferente y será tratada al final de este capítulo. Denominamos ciclo
celular al proceso de desarrollo de una bacteria aislada. A lo largo del
ciclo celular tiene lugar la replicación del material genético, la síntesis de
componentes celulares, la elongación de la bacteria para alcanzar un
tamaño doble de la inicial y su división por bipartición para dar lugar a
dos células hijas. La duración del ciclo celular coincide con el tiempo de
generación y depende, en general, de los mismos factores de los que
depende este. El crecimiento de una población resulta de la suma de los
ciclos celulares de todos los individuos de dicha población. Los cultivos
de microorganismos de los que hemos hablado son asincrónicos puesto
que en ellos cada microorganismo se encuentra en un punto diferente
del ciclo celular. Por consiguiente, en un momento determinado en un
cultivo se encuentran células que acaban de dividirse, otras que están
replicando su ADN, otras que están creciendo, otras que están iniciando
la división celular, etc. En un cultivo sincrónico todas las células se
encuentran simultáneamente en la misma fase del crecimiento celular.
Los cultivos sincrónicos son muy difíciles de mantener por lo que su
importancia está principalmente ligada a los estudios básicos de biología
microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del suelo se
encuentran en condiciones de crecimiento próximas a la fase
estacionaria (en la que se produce una cierta sincronización del cultivo)
y, por consiguiente, durante cierto tiempo las poblaciones naturales
probablemente se comporten como relativamente sincrónicas.
Microbiología General Tema 2.- Cultivo de microorganismos. 2 Las
poblaciones de bacterias crecen de forma explosiva acumulando grandes
números en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto de
los microorganismos es en la mayoría de los casos depende de su
número, entender cómo se produce el crecimiento microbiano es
importante para poder evitar o reducir sus efectos nocivos y potenciar
los beneficiosos o aplicados.
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las


condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan
multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir
cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio y
cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.

MEDIOS DE CULTIVO

Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten


energía y elementos químicos para la síntesis de sus constituyentes
celulares. Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los
microorganismos se pueden clasificar en autótrofos si es el CO2
atmosférico (microorganismos que fotosintetizan) y heterótrofos si
utilizan carbono orgánico. La fórmula elemental de un microorganismo
es, aproximadamente, C4H7O2N lo que supone que los componentes de
las células son: carbono que representa alrededor del 50% del peso
seco, oxígeno (32%), nitrógeno (14%), fósforo (3%), azufre (en torno
al 1%) y otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg,
Mn, Co, Mb, Cu y Zn. La elaboración de medios de cultivo requiere
proporcionar los elementos antes citados en una forma asimilable. Así,
por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono orgánico para los
heterótrofos y como CO2 para los autótrofos, el N en forma de NH4, de
NO3 - o de NO2 - o en forma de aminoácidos a los que se pueda tomar
su grupo amino; el P debe estar en forma de PO4 3-, el S procede de
aminoácidos sulfurados o de SO4 2-, etc. Además, en ciertos casos, es
necesario añadir a los medios de cultivo algunos aminoácidos o
vitaminas que determinados tipos de microorganismos no pueden
sintetizar. En el caso de la levadura del pan (Saccharomyces cerevisiae)
la fórmula elemental más concreta es:
C3.72H6.11O1.95N0.61S0.017P0.035K0.056 esta composición puede
variar ligeramente en función de las condiciones de cultivo o de fase de
crecimiento. El conocimiento de la fórmula elemental del
microorganismo que se cultiva facilita la formulación del medio de
cultivo más adecuado para el mismo. Microbiología General Tema 2.-
Cultivo de microorganismos. 3 Los medios de cultivo se pueden clasificar
en definidos cuando su composición química se conoce totalmente y
complejos cuando no es el caso porque están compuestos por mezclas
de extractos de materiales complejos (extracto de levadura, extracto de
carne, etc.). Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser líquidos o
sólidos si se añade algún agente solidificante que no sea consumible por
los microorganismos (normalmente agar). En función de los
microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser
generales, selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos
microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio
SPS para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes
permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por
ejemplo medios con hematíes para identificar colonias de
microorganismos hemolíticos), selectivo-diferenciales cuando combinan
las dos características anteriores (por ejemplo, el agar de MacConkey
para identificar Escherichia coli), y medios de enriquecimiento que
permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a partir de una
mezcla una población mixta de gran tamaño.

MÉTODOS DE AISLAMIENTO
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en
la mayoría de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en
cultivos sólidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite
producir un gran número de ellas a partir de una única célula inicial de
forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales
adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada
por individuos iguales (un clon bacteriano). Sin embargo, no todos los
microorganismos presentes en las muestras ambientales son cultivables
(microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades
intrínsecas en el cultivo (microorganismos parásitos de otros), al
desconocimiento de los requerimientos específicos de cultivo, y a la
existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en
equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofía por ejemplo). Se
estima que en sólo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 -
0,01 % de las bacterias marinas son cultivables. Existen procedimientos
de enriquecimiento del número de bacterias de ambientes naturales
para facilitar su aislamiento. Uno de ellos es la Columna de Winogradski
que crea un microcosmos para enriquecer el número de ciertos tipos de
microorganismos presentes en ambientes naturales con objeto de
facilitar su aislamiento.
CONCEPTO DE CULTIVO PURO
Se denomina cultivo puro (axénico) al que contiene sólo un tipo de
microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias
aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la
misma composición genética. Los cultivos puros son Microbiología
General Tema 2.- Cultivo de microorganismos. 4 esenciales para poder
estudiar las características de los microorganismos y para poder
identificarlos con seguridad. Sin embargo, cada vez se va conoce más
sobre el funcionamiento de las comunidades bacterianas lo que debe
hacernos reflexionar sobre el hecho de que un cultivo puro supone unas
condiciones no naturales y que, por consiguiente, la fisiología de los
microorganismos en ambientes naturales puede ser diferente de la que
presentan en condiciones de cultivos puros.
Se realizó un análisis de varianza para evaluar el efecto de las técnicas de siembra con respecto al
rendimiento utilizando el programa infoStat y una prueba de comparación de medias para evaluar
el efecto de los tratamientos en las variables botánicas medidas. Todos los análisis se realizaron
con un nivel de significancia de P<0,05.
Resultado y Discusión: Altura de Planta: El análisis de varianza para altura de planta a la madurez
fisiológica (Gráfico 1 y cuadro 1) indica que existe diferencia significativa entre trasplante, golpe
cada 10cm, chorrillo y golpe cada 10 cm; pero solo hay diferencia mínima entre las dos últimas
técnicas mencionadas. Si bien la técnica de trasplante resulto ser las alta, se debe mencionar que
luego del trasplante, estas plantas durante la primera semana mostraron poco crecimiento,
debido al cambio de condiciones ambientales y de suelo, una vez iniciado el desarrollo de sus
raíces crecieron paulatinamente hasta alcanzar su altura total.
Longitud de Panoja: El análisis de varianza para el tamaño de panoja a la madurez fisiológica
(Gráfico 2; cuadro 2) indica que existe diferencia significativa entre las técnicas de siembra y con
una diferencia mínima entre chorrillo y golpe cada 10 cm.

Gráfico 2: Longitud de panoja en función de las técnicas de siembra.


Panoja por Planta: El análisis de varianza para el tamaño de panoja a la madurez fisiológica
(Gráfico 3; cuadro 3) indica que existe diferencia significativas entre las técnicas de siembra; sin
embargo en relación a la técnica golpe solo hay diferencia minima de acuerdo a la distancia entre
plantas. Gráfico 3: Numero de panoja por planta en función del las técnicas de siembra.

En el cuadro 4 podemos relacionar con lo anteriormente expuesto de acuerdo al ciclo del cultivo,
donde la técnica de trasplante tiene mayor cantidad de días a cosecha siguiéndole la técnica de
chorrillo y por último la técnica a Golpe. Haciendo referencia al rendimiento se observa aquí que
Chorrillo supera a la técnica del trasplante por menos de 300 gramos debido al tener una mayor
cantidad de plantas y al ser más pareja su producción. Podemos decir que estas dos técnicas
mencionadas superan ampliamente a la técnica de golpe donde se obtuvo 2700 a 2800 kg/ha.
Concluyendo señalamos que los caracteres agronómicos: altura de planta, longitud de panoja de la
quinua están influenciadas por el carácter genotipo-ambiente (Velazco, 1995 y Wall, 1994).
Asimismo los resultados obtenidos van corroborados por Burgasi 1990 en la que indica que para
que la siembra de quinua tenga éxito en el crecimiento deben tomar en cuenta el poder
germinativo, pureza varietal y la semilla debe estar libre de impurezas.