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Titulación de un aminoácido y la aplicación de la ecuación de henderson-hasselbalch

UNIVERSIDAD NACIONAL
“SANTIAGO ANTÚNEZ DE
MAYOLO”
FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

BIOQUÍMICA AMBIENTAL
TEMA: TITULACIÓN DE UN AMINOÁCIDO Y LA

APLICACIÓN DE LA ECUACIÓN DE
HENDERSON-HASSELBALCH

DOCENTE: CABELLO CHÁVEZ PABLO

INTEGRANTES:
 CASTRO CORSO Richard
 MORALES SUNI Mary Luz
 PADUA COPITAN Carlos
 PEREZ PALACIOS Jelen

HUARAZ- ANCASH-PERÚ
2017

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Titulación de un aminoácido y la aplicación de la ecuación de henderson-hasselbalch

PRESENTACIÓN

El siguiente trabajo dará a conocer, uno de los temas más importantes en el estudio
de la bioquímica, El cual está la relacionado con la Titulación de un Aminoácido y
su Aplicación en la Ecuación de Henderson-Hasselbalch.

El aminoácido que escogimos fue el ácido glutámico, que logró reaccionar con el
NaOH. Probamos con diversos volúmenes y medimos cada pH. Luego registramos
los valores en una tabla y elaboramos una curva de valoración o titulación. Esto nos
permitió determinar el pK1 y pK2 del aminoácido.

No obstante, deseamos que el siguiente contenido sea de su completísimo agrado,


y sirva de apoyo para el presente y el futuro.

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Titulación de un aminoácido y la aplicación de la ecuación de henderson-hasselbalch

ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN........................................................................................................................ 4
II. OBJETIVOS ............................................................................................................................... 5
III. FUNDAMENTO TEÓRICO .................................................................................................... 6
3.1. CONSTANTE DE DISOCIACIÓN (pk) ........................................................................ 6
3.2. ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBALCH ...................................................... 6
3.3. VALORACIÓN ÁCIDO-BASE....................................................................................... 9
3.3.1. Clases de valoración ácido-base ...................................................................... 9
3.3.2. Curva de valoración ............................................................................................ 10
3.4. ÁCIDO GLUTÁMICO .................................................................................................... 11
3.4.1. Funciones que desempeña: ............................................................................. 13
3.4.2. Exceso de Ácido Glutamínico en el organismo: ......................................... 15
3.4.3. Toxicidad: .............................................................................................................. 15
VI. RESULTADOS ...................................................................................................................... 19
VIII. CUESTIONARIO .................................................................................................................. 20
IX. CONCLUSIONES.................................................................................................................. 23
X. RECOMENDACIONES ............................................................................................................. 24
XI. BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................................... 25
XII. ANEXOS ............................................................................................................................... 26

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Titulación de un aminoácido y la aplicación de la ecuación de henderson-hasselbalch

I. INTRODUCCIÓN

Somos conscientes que “LA TITULACIÓN DE UN AMINOÁCIDO Y LA


APLICACIÓN DE LA ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBALCH”, es una
práctica de laboratorio muy importante, ya que nos permitió conocer la medida del
pK de los grupos ionizables del ácido glutámico, su capacidad amortiguadora y la
aplicación de éste en la ecuación de Henderson- Hasselbalch.

En este sentido, nuestra principal finalidad es lograr la comprensión integral de este


tema, y para ello, hemos considerado conveniente organizar nuestro trabajo de la
siguiente manera:

En primer lugar, identificaremos los principales objetivos de la práctica de


laboratorio.

En segundo lugar, conoceremos qué materiales, equipos o reactivos vamos a


utilizar; y cuáles son los procedimientos que vamos a llevar a cabo para realizar
dicha práctica.

En tercer lugar, haremos un hincapié sobre las bases teóricas, tanto del pH, la
constante de equilibrio y disociación (pK), y la ecuación de HENDERSON-
HASSELBALCH. Luego, como motivo de aplicación, mediremos y comparemos los
diversos pH de las soluciones de ácido glutámico e hidróxido de sodio (NaOH),
finalmente registraremos nuestros resultados en una tabla, y en un gráfico
identificaremos: Pk1 y Pk2.

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II. OBJETIVOS

 Experimentar y entender cómo se comporta un sistema


amortiguador de pH.
 Aprender el uso de la ecuación de Henderson – Hasselbalch.

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III. FUNDAMENTO TEÓRICO

3.1. CONSTANTE DE DISOCIACIÓN (pk)

pKa es la fuerza que tienen las moléculas de disociarse (es el logaritmo negativo
de la constante de disociación ácida de un ácido débil).

Una forma conveniente de expresar la relativa fortaleza de un ácido es mediante el


valor de su pKa, que permite ver de una manera sencilla en cambios pequeños de
pKa los cambios asociados a variaciones grandes de K a. Valores pequeños de
pKa equivalen a valores grandes de Ka (constante de disociación) y, a medida que
el pKa decrece, la fortaleza del ácido aumenta.

Un ácido será más fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al revés,
que es más fuerte cuanto mayor es su pKa.

Esas constantes de disociación no son fijas, dependen de otras variables. Por


ejemplo, la constante de disociación cambia a temperaturas diferentes. Sin
embargo, mantiene su valor a la misma temperatura, ante cambios de la
concentración de alguna de las especies o incluso ante la acción de un catalizador.

3.2. ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBALCH

La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una fórmula química que se utiliza para


calcular el pH, de una solución buffer, o tampón, a partir del pK a (la constante de
disociación del ácido) y de las concentraciones de equilibrio del ácido con su base
conjugada.
Los ácidos fuertes presentan valores altos de Ka, mientras que los ácidos débiles
presentan valores bajos de Ka. Estas constantes de disociación son características
de cada par conjugado ácido-básico para una temperatura determinada.

En la disociación de un ácido:

La constante de equilibrio es:

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………………(𝛼)
Si tomamos logaritmos:

Y cambiando de signos:

O lo que es lo mismo:

Y reordenando, tenemos:

………………(𝛽)

De las ecuaciones (𝛼) y (𝛽) resulta claro que la capacidad amortiguadora de un


sistema es máxima cuando la cantidad de anión libre, es igual a la cantidad de
[AcH] no disociado, esto es, cuando:
[𝐴𝑐 − ]
=1
[𝐴𝑐𝐻]

De manera que:

[𝐴𝑐 − ]
log =0
[𝐴𝑐𝐻]

Entonces:

pH = pKa

También podemos expresar la ecuación de Henderson-Hasselbalch de una forma


válida para todos los amortiguadores:

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A partir de esta fórmula se pueden deducir fácilmente las propiedades de los


amortiguadores:

a) El pH de una disolución amortiguadora depende de la naturaleza del ácido


débil que lo integra (de su pK), de modo que para cantidades
equimoleculares de sal y de ácido, el pH es justamente el pK de este ácido.
Dicho de otra forma, se puede definir el pK de un ácido débil como el pH del
sistema amortiguador que se obtiene cuando [sal] = [ácido].

Figura 1: Curva de valoración ácido-base

b) El pH del sistema amortiguador depende de la proporción relativa entre la


sal y el ácido, pero no de las concentraciones absolutas de estos
componentes. De aquí se deduce que añadiendo agua al sistema, las
concentraciones de sal y ácido disminuyen paralelamente, pero su cociente
permanece constante, y el pH no cambia. Sin embargo, si la dilución llega a
ser muy grande, el equilibrio de disociación del ácido se desplazaría hacia la
derecha, aumentando la [sal] y disminuyendo [ácido], con lo cual el cociente
aumenta y el pH también, de forma que se iría acercando gradualmente a la
neutralidad (pH 7).

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c) Cuando se añaden ácidos o bases fuertes a la disolución amortiguadora, el


equilibrio se desplaza en el sentido de eliminar el ácido añadido (hacia la
izquierda) o de neutralizar la base añadida (hacia la derecha). Este
desplazamiento afecta a las proporciones relativas de sal y ácido en el
equilibrio. Como el pH varía con el logaritmo de este cociente, la modificación
del pH resulta exigua hasta que uno de los componentes está próximo a
agotarse.

3.3. VALORACIÓN ÁCIDO-BASE

Las valoraciones o volumetrías ácido-base permiten conocer la concentración de


un ácido o de una base presente en una disolución.

En estas valoraciones se mide el volumen de ácido (o de base) de una


concentración conocida necesaria para neutralizar un volumen determinado de
base (o de ácido) de concentración desconocida. Cuando se valoran ácidos se
llaman acidimetrías y cuando se valoran bases, alcalimetrías.

El nombre volumetría hace referencia a la medida del volumen de las disoluciones


empleadas, que nos permite calcular la concentración buscada.

Aparte del cálculo de concentraciones, una valoración ácido-base permite conocer


el grado de pureza de ciertas sustancias.

3.3.1. Clases de valoración ácido-base

Se pueden clasificar en dos grandes grupos:

- Alcalimetrías: Determinación de la concentración de una base empleando un


ácido fuerte de concentración conocida como sustancia valorante. Se emplea
casi siempre ácido clorhídrico, HCl; a veces ácido sulfúrico, H2SO4; y casi
nunca los ácidos nítrico (HNO3) y perclórico, (HClO4).

- Acidimetrías. Determinación de la concentración de un ácido empleando una


base fuerte de concentración conocida como sustancia valorante, como el
NaOH.

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3.3.2. Curva de valoración

Es el gráfico de pH en función del volumen. Es decir, una disolución de un reactivo


(ácido), que se añade gradualmente a una disolución (base), las valoraciones de
ácido- base pueden denotar su reacción a través del pH en función del volumen del
reactivo añadido.

Punto de equivalencia: valor del pH

Se llama punto de equivalencia al momento en que son iguales los equivalentes de


la sustancia valorada y los de la sustancia valorante. Este punto de equivalencia se
detecta muy fácilmente ya que se observa en sus inmediaciones un brusco salto de
pH que se puede detectar en un potenciómetro, pH-metro o con un indicador.

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3.4. ÁCIDO GLUTÁMICO

El ácido glutámico, o en su forma ionizada, el glutamato (abreviado Glu o E), es uno


de los 20 aminoácidos que forman parte de las proteínas. A condiciones estándar
(25°C y 1 atm) posee las siguientes propiedades:

Ácido glutámico

Nombre (IUPAC) sistemático

Ácido 2-aminopentanodioico

General

Símbolo químico Glu, E

Fórmula molecular C5H9NO4

Identificadores

Número CAS 56-86-9

PubChem 611

Propiedades físicas

Densidad 1460 kg/m3; 1,46 g/cm3

Masa molar 147,13 g/mol

Punto de fusión 472,15 K (199 °C)

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Propiedades químicas

Solubilidad en agua Soluble

Valores en el SI y en condiciones estándar


(25 °C y 1 atm), salvo que se indique lo contrario.

El ácido glutámico (glutamato) es un aminoácido no esencial que se utiliza en el


organismo para la síntesis de proteínas. Sus símbolos son Glu o E. El glutamato es
el neurotransmisor excitador (estimulante) más común en el sistema nervioso
central. Es de gran importancia en el funcionamiento del Sistema Nervioso Central,
también actúa como estimulante del sistema inmunológico. Su papel como
neurotransmisor está mediado por la estimulación de receptores específicos,
denominados receptores de glutamato. Todas las neuronas contienen glutamato,
pero solo unas pocas lo usan como neurotransmisor. Desempeña un papel esencial
en la relación con los procesos de transaminación, es decir la reacción entre un
aminoácido y un alfa-cetoácido, en la que el grupo amino es transferido de aquel a
éste, con la consiguiente conversión del aminoácido en su correspondiente alfa-
cetoácido.

Después de la formación de glutamato, éste transfiere su grupo amino directamente


a una variedad de alfa-cetoácidos por varias reacciones reversibles de
transaminación: donación libremente reversible de un grupo amino alfa de un
aminoácido al grupo ceto-alfa de un alfa-cetoácido, acompañado de la formación
de un nuevo aminoácido y un nuevo alfa-cetoácido.
También desempeña un papel importante en la síntesis de distintos aminoácidos
que necesitan la formación previa de éste ácido, como es el caso de ornitina,
arginina, prolina e hidroxiprolina.
Es uno de los aminoácidos más abundantes del organismo y un comodín para el
intercambio de energía entre los tejidos. Se considera un aminoácido no esencial
porque se puede sintetizar en muchos tejidos, teniendo un papel fundamental en el
mantenimiento y el crecimiento celular.
Se aisló por primera vez en 1866, y en 1908 se descubrió que era el componente
responsable del efecto potenciador del sabor de los extractos del alga Laminaria

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japónica, usados tradicionalmente en la cocina japonesa. Desde 1909 se produce


comercialmente para su uso como aditivo alimentario. El método más usado es por
fermentación de azúcares residuales de la industria agroalimentaria, siendo Japón
y Estados Unidos los principales productores. El ácido D-glutámico, muy parecido
químicamente, no tiene actividad ni como elemento de construcción de las
proteínas ni como potenciador del sabor.
El ácido glutámico no es un aminoácido esencial, es decir; el organismo humano
es capaz por sí mismo de fabricar todo el que necesita a partir de otros
componentes. Cuando la ingesta es mayor que la necesaria para la fabricación de
proteína, se utiliza el exceso como una fuente de energía.
El cerebro tiene una concentración de ácido glutámico libre, unas 100 veces
superior a la de la sangre. No obstante, la ingestión de esta substancia no le afecta
positiva ni negativamente. Las advertencias sobre su toxicidad para el cerebro que
se encuentran a veces se basan en el efecto sobre animales a dosis enormes, que
extrapoladas al hombre representarían del orden de 1/4 de Kg de una sola vez, y
además inyectado. No obstante, la mayor sensibilidad del cerebro en animales
jóvenes hace que haya dejado de utilizarse en alimentos infantiles en muchos
países (en bastantes, de forma voluntaria por los fabricantes).
Varios estudios han demostrado que el bazo, intestino, estómago y páncreas,
consumen el 95% del ácido glutamínico ingerido en la dieta. Esto nos indica la
necesidad de consumir una dieta rica en proteínas para no alterar el equilibrio de
aminoácidos con acceso al resto del organismo después de este paso inicial de
nutrientes por el aparato digestivo.

3.4.1. Funciones que desempeña:

Estas son algunas de las funciones más importantes que el ácido glutamínico,
realiza en el organismo:

 Nos ayuda en la producción del ácido clorhídrico.


 Controla los niveles de amoniaco en el cerebro.
 Junto a la vitamina B6, es precursor del neurotransmisor GABA (ácido gamma
aminobutírico), cuya acción sedante sobre el sistema nervioso es importante.
 Lo requieren como fuente de energía las células del sistema inmunitario.

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 Ayuda en producción de energía para el cerebro.


 Ayuda a controlar el alcoholismo.
 Ayuda a la cicatrización de úlceras.
 Alivia la fatiga, la depresión y la impotencia.
 Se usa en la demencia senil y la falta de concentración.
 Excelente en el tratamiento de las funciones normales de la próstata.
 Interviene específicamente en la utilización de la glucosa por las células del
cerebro.
 Funciona como sistema de transporte de aminoácidos y de nitrógeno desde
tejidos periféricos hacia el hígado.
 Precursor en la biosíntesis de las bases púricas y pirimidínicas.
 Como donador de nitrógeno del grupo amida en el riñón. En este sentido,
se ha visto que la glutamina cumple un papel muy importante en la
regulación del equilibrio ácido-base. Las personas deficientes en proteínas
también tienen deficiencias de ácido glutámico.
 Tiene un papel fundamental en el mantenimiento y crecimiento celular.
 Precursor para la síntesis de ácidos nucleicos (ADN).
 Previene la atrofia intestinal e infecciones.
 Reduce la permeabilidad intestinal.
 Regula la producción de urea en el hígado.
 Es precursor para la síntesis de un metabolito con alto potencial
antioxidante, como es la producción de glutatión.
 Parece ser que interviene en la liberación de las GnRH (hormona liberadora
de la gonadotropina, fundamental para el dismorfismo cerebral y corporal.

Su déficit puede provocar:


Estos son algunos de los trastornos que la deficiencia del ácido glutamínico, puede
ocasionar en el organismo:
 Alteraciones graves en el aprendizaje, la memorización y la plasticidad
neuronal.
 Alteraciones importantes del sistema nervioso.
 Falta de concentración y de reflejos.

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3.4.2. Exceso de Ácido Glutamínico en el organismo:

Se cree que el exceso del ácido glutamínico en el espacio extracelular, es la causa


de la enfermedad ELA (Esclerosis Lateral Amiotrófica).

3.4.3. Toxicidad:

Su toxicidad es mínima. A partir de experimentos con animales se puede deducir


que la dosis letal para un hombre adulto sería de bastante más de 1 Kg ingerido de
una sola vez.
A partir de 1968 empezó a hablarse del “síndrome del restaurante chino”,
designando por este término una serie de síntomas (hormigueo, somnolencia,
sensación de calor y opresión en la cara,) de los que se acusaba a la ingestión de
cantidades relativamente elevadas de glutamato, muy utilizado en la cocina oriental.
En un estudio de hace 10 años, se estimaba que este fenómeno podía afectar al 1-
2% de los adultos, pero sólo a concentraciones en los alimentos del orden de 30
g/Kg. Además, muchas de las personas que alegan ser sensibles al glutamato no
lo son en realidad, no presentando los síntomas descritos en pruebas ciegas.
Cuando estos síntomas subjetivos se presentan, desaparecen rápidamente, y no
van acompañados de cambios fisiológicos (temperatura local, presión arterial, etc.).

Alimentos ricos en Ácido glutámico:

Estos son algunos de los alimentos:

 Origen animal: La carne, pescado, huevo, productos lácteos y vegetales.

 Origen vegetal: Algunas plantas, ricas en proteínas también contienen


ácido glutámico.

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IV. MATERIALES, EQUIPOS, SOLUCIONES Y REACTIVOS

1. Probeta de 100 ml 2.Pizeta

3. Bureta 4.Pipeta de 1.0 ml

5. Vaso de precipitado de 100 ml

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7. Gradilla 8.Potenciómetro

9. Tiras reactivas de pH 10. NAOH 1.0 mol/L

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V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

 Poner 20 ml de la solución de ácido glutámico en un vaso de


precipitado de 100ml

 Proceder a la medición del pH


 Añadir 0.1ml de NaOH 1.0 mol/l agitar el vaso y volver a medir el pH,
anotar los resultados.
 Repetir el paso 3 hasta llegar a un pH aproximado de 12.
 Hacer lo mismo (paso 1 a 4) para otros aminoácidos.

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VI. RESULTADOS

NaOH ml pH del ácido


glutámico

inicial 0 3
1 0.1 4,5
2 0.2 6
3 0.3 9
4 0.4 10
5 0.5 11
6 0.6 12

14

12

10

8
pH

pH de la muestra
6

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
volumen de NaOH

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VII. ANÁLISIS DE RESULTADOS

 Según la teoría de los sistemas amortiguadores evitan el cambio drástico de


pH, y se puedo comprobar de acuerdo al experimento.
 También se puede observar que en un momento incrementa el bufferin,
donde trata de controlar el cambio de pH

VIII. CUESTIONARIO

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1. ¿Qué es un sistema amortiguador acido-base y para qué sirve?

Los amortiguadores son sistemas acuosos que tienden a resistir los cambios
en el pH cuando se les agregan pequeños cantidades de ácido H+ o base
OH-.

2. ¿Qué es el pk de un par acido-base?

Es la fuerza que tienen los moléculas al disociarse (logaritmo negativo de la


constante de disociación acido de un ácido débil.)

3. Dibujar la fórmula del ácido glutámico y de la lisina e identificar a los:


amino, carboxílico y su radical.

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4. ¿Qué puede utilizar los aminoácidos como amortiguadores de pH?

Si se puede porque las proteínas de los aminoácidos son buenos


amortiguadores y este aminoácido se compartía como acido débil.

Los aminoácidos tienen esas propiedades de ahí la costumbre de cuando se


tiene acidez estomacal tomar leche, pero no son muy prácticos ya que el
rango de pH de amortiguación o bien la zona amortiguadora de una
disolución de este tipo es muy reducida.

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IX. CONCLUSIONES

 Un sistema amortiguador de pH se comporta como una resistencia a un


cambio brusco en la variación del pH al aplicarle ácido o alguna base.
 La ecuación de Henderson-Hasselbalch utiliza las concentraciones de
equilibrio de un ácido y base conjugada, y la constante de disociación del
ácido para calcular el pH de una solución tampón.
 Un dador protónico y su correspondiente aceptor forman un par ácido-base
conjugados.
 Los ácidos y bases débiles se disocian parcialmente y por lo tanto, la
concentración de los iones H+ u OH- es menor que la totalidad de sus grupos
ionizables.
 Los ácidos y bases fuertes se disocian por completo, es decir, la totalidad de
los iones H+ u OH- están en forma libre, y su concentración dependerá de la
concentración del ácido o de la base de donde provienen.
 Casi todos los ácidos orgánicos se disocian parcialmente.
 Un aminoácido puede comportarse como un amortiguador porque tiene la
propiedad de comportarse como un ácido débil.
 La valoración o titulación es un método que consiste en la cuantificación de
una solución de una sustancia por medio de la reacción al equilibrio, con otro
compuesto cuya concentración y volumen se conocen.
 El cuerpo humano posee sistemas amortiguadores tales como el sistema
amortiguador del bicarbonato, el del fosfato y el de las proteínas.

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X. RECOMENDACIONES

 Medir adecuadamente la cantidad de cada sustancia a utilizar.


 Marcar correcta y adecuadamente los vasos que contienen cada sustancia.
 Calibrar adecuadamente el potenciómetro.
 El electrodo debe mantenerse en agua destilada cuando no estén en uso,
esto evitará que se malogre.
 Limpiar el electrodo para cada sustancia.
 Darle el adecuado uso y manejo al potenciómetro.
 El agua destilada debe tener un pH neutro, para que así no varié los pH de
las diversas sustancias.
 El ácido glutámico debe tener una concentración óptima de 0.0025M para
obtener resultados verídicos.

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XI. BIBLIOGRAFÍA

 MURRAY ROBERT K. (2010) BIOQUÍMICA HARPER. BIOQUÍMICA


ILUSTRADA 28ª. ED. EDITORIAL: MCGRAW-HILL
 HICKS GÓMEZ JUAN JOSÉ (2007) BIOQUÍMICA 2ª. ED. EDITORIAL:
MCGRAW-HILL

Páginas webs:

 http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/ph/HH.html
 http://recursostic.educacion.es/newton/web/materiales_didacticos/acidosbas
es/valoracion_1.html
 http://ocw.usal.es/ciencias-biosanitarias/bioquimica-ph-equilibrios-acido-
2013-
base/contenidos/4.%20Curvas%20de%20titulacion%20de%20aminoacidos.p
df
 http://palmera.pntic.mec.es/~atola/Laboratorio/Practicas%202_%20Bachiller
ato/CURVA%20DE%20VALORACION%20ACIDO%20BASE.pdf
 http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qa/Capitulo%206%20-
%20Volumetria%20Acido%20Base.pdf

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XII. ANEXOS

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