UNIVERSIDAD NACIONAL

“SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

Escuela académico profesional de Ingeniería Ambiental

Asignatura: Bioquímica Ambiental

Tema: TITULACIÓN DE UN AMINOÁCIDO Y LA APLICACIÓN DE
LA ECUACIÓN HENDERSON HASELBALCH. Determinación del pk1 y el pk2

Docente: CABELLO CHAVEZ Pablo

Semestre: 2018 – I

Huaraz – Ancash – Perú

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ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN .................................................................................... 3
II. MARCO TEÓRICO .................................................................................. 4
1. ECUACION DE HENDERSON HASSELBALCH .......................................................... 4
2. VALORACIÓN ÁCIDO-BASE.................................................................................. 7
3. ÁCIDO GLUTÁMICO ............................................................................................ 9

III. MATERIALES, EQUIPOS, SOLUCIONES Y ............................................... 11

REACTIVOS ................................................................................................ 11
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL .................................................... 13
V. RESULTADOS....................................................................................... 14
VI. DISCUSIÓN....................................................................................... 15
VII. CONCLUSIONES ............................................................................... 16
VIII. RECOMENDACIONES........................................................................ 17
IX. CUESTIONARIO ................................................................................ 17
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I. INTRODUCCIÓN

Somos conscientes que “LA TITULACIÓN DE UN AMINOÁCIDO Y LA

APLICACIÓN DE LA ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBALCH”,
es una práctica de laboratorio muy importante, ya que nos permitió
conocer la medida del pK de los grupos ionizables del ácido glutámico,
su capacidad amortiguadora y la aplicació n de éste en la ecuación de
Henderson- Hasselbalch. La principal finalidad es lograr la
comprensión integral de este tema, y para ello, hemos considerado
conveniente organizar nuestro trabajo de la siguiente manera:
conoceremos qué materiales, equipos o reactivos vamos a utilizar; y
cuáles son los procedimientos que vamos a llevar a cabo para realizar
dicha práctica.

Tendremos muy en cuenta las bases teóricas, tanto del pH, la

constante de equilibrio y disociación (pK), y la ecuación de
HENDERSON-HASSELBALCH. Luego, como motivo de aplicación,
mediremos y comparemos los diversos pH de las soluciones de ácido
glutámico e hidróxido de sodio (NaOH), finalmente registraremos
nuestros resultados en una tabla, y en un gráfico identificaremos: Pk1 y
Pk2.
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II. MARCO TEÓRICO

1. ECUACION DE HENDERSON HASSELBALCH

La ecuación de Henderson-Hasselbalch es una fórmula química
que se utiliza para calcular el pH, de una solución buffer, o
tampón, a partir del pK a (la constante de disociación del ácido)
y de las concentraciones de equilibrio del ácido con su base
conjugada.
Los ácidos fuertes presentan valores altos de Ka, mientras que
los ácidos débiles presentan valores bajos de Ka. Estas
constantes de disociación son características de cada par
conjugado ácido-básico para una temperatura determinada.
En la disociación de un ácido:
𝐴𝑐𝐻 ↔ 𝐴𝑐 − + 𝐻+
La constante de equilibrio es:
[𝐴𝑐 − ][𝐻+ ]
𝐾𝑎 = … (1)
[𝐴𝑐𝐻]
Si tomamos logaritmos:
[𝐴𝑐 − ][𝐻+ ] [𝐴𝑐 − ]
log 𝐾𝑎 = log ( ) = log ( ) + log[𝐻+ ]
[𝐴𝑐𝐻] [𝐴𝑐𝐻]
Y cambiando de signos:
[𝐴𝑐 − ][𝐻+ ] [𝐴𝑐 − ]
−log 𝐾𝑎 = −log ( ) = −log ( ) − log[𝐻 + ]
[𝐴𝑐𝐻] [𝐴𝑐𝐻]
O lo que es lo mismo:
[𝐴𝑐 − ]
𝑝𝐾𝑎 = −log ( ) + 𝑝𝐻
[𝐴𝑐𝐻]
Y reordenando, tenemos:
[𝐴𝑐 − ]
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + log ( ) … (2)
[𝐴𝑐𝐻]
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De las ecuaciones (1) y (2) resulta claro que la capacidad

amortiguadora de un sistema es máxima cuando la cantidad de
anión libre, es igual a la cantidad de [𝐴𝑐𝐻] no disociado, esto es,
cuando:
[𝐴𝑐 − ]
=1
[𝐴𝑐𝐻]
De manera que:
[𝐴𝑐 − ]
log ( )=0
[𝐴𝑐𝐻]
Entonces:
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎
También podemos expresar la ecuación de Henderson-
Hasselbalch de una forma válida para todos los amortiguadores:
[𝑠𝑎𝑙]
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + log ( )
[á𝑐𝑖𝑑𝑜]
A partir de esta fórmula se pueden deducir fácilmente las
propiedades de los amortiguadores:
A) El pH de una disolución amortiguadora depende de la
naturaleza del ácido débil que lo integra (de su pK), de modo
que para cantidades equimoleculares de sal y de ácido, el pH
es justamente el pK de este ácido. Dicho de otra forma, se
puede definir el pK de un ácido débil como el pH del sistema
amortiguador que se obtiene cuando [sal] = [ácido].
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Figura 1: Curva de valoración ácido-base

B) El pH del sistema amortiguador depende de la proporción
relativa entre la sal y el ácido, pero no de las concentraciones
absolutas de estos componentes. De aquí se deduce que
añadiendo agua al sistema, las concentraciones de sal y
ácido disminuyen paralelamente, pero su cociente
permanece constante, y el pH no cambia. Sin embargo, si la
Dilución llega a ser muy grande, el equilibrio de disociación
del ácido se desplazaría hacia la derecha, aumentando la
[sal] y disminuyendo [ácido] con lo cual el cociente aumenta y
el pH también, de forma que se iría acercando gradualmente
a la neutralidad (pH 7).

C) Cuando se añaden ácidos o bases fuertes a la disolución

amortiguadora, el equilibrio se desplaza en el sentido de
eliminar el ácido añadido (hacia la izquierda) o de neutralizar
la base añadida (hacia la derecha). Este desplazamiento
afecta a las proporciones relativas de sal y ácido en el
equilibrio, como el pH con el logaritmo de este cociente la
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modificación del pH resulta exigua hasta que uno de los

componentes está próximo a agotarse. (MEISLICH, QUÍMICA
ORGÁNICA, 2001)

2. VALORACIÓN ÁCIDO-BASE
Las valoraciones o volumetrías ácido-base permiten
concentración de un ácido o de una base presente en una
disolución.
En estas valoraciones se mide el volumen de ácido (o de base)
de una concentración conocida necesaria para neutralizar un
volumen determinado de base (o de ácido) de concentración
desconocida. Cuando se valoran ácidos se llaman acidimetrías y
cuando se valoran bases, alcalimetrías.
El nombre volumetría hace referencia a la medida del volumen
de las disoluciones empleadas, que nos permite calcular la
concentración buscada.
Aparte del cálculo de concentraciones, una valoración ácido-
base permite conocer el grado de pureza de ciertas sustancias.
(MORRISON Y BOYD, 1998)
Clases de valoración ácido-base
Se pueden clasificar en dos grandes grupos:
 Alcalimetrías: Determinación de la concentración de una base
empleando un ácido fuerte de concentración conocida como
sustancia valorante. Se Emplea casi siempre ácido
clorhídrico, HCl; a veces ácido sulfúrico, H2SO4; y casi nunca
los ácidos nítrico (HNO3) y perclórico, (HClO4).
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 Acidimetrías: determinación de la concentración de un ácido

empleando una base fuerte de concentración conocida como
sustancia valorante, como el NaOH.
Curva de valoración
Es el gráfico de pH en función del volumen.

Punto de equivalencia: valor del pH

Se llama punto de equivalencia al momento en que son
iguales los equivalentes de la sustancia valorada y los de la
sustancia valorante. Este punto de equivalencia se detecta
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muy fácilmente ya que se observa en sus inmediaciones un

brusco salto de pH que se puede detectar en un
potenciómetro, pH-metro o con un indicador.

3. ÁCIDO GLUTÁMICO
El ácido glutámico (glutamato) es un aminoácido no esencial
que se utiliza en el organismo para la síntesis de proteínas. Sus
símbolos son Glu o E. El glutamato es el neurotransmisor
excitador (estimulante) más común en el sistema nervioso
central. Es de gran importancia en el funcionamiento del
Sistema Nervioso Central, también actúa como estimulante del
sistema inmunológico. Su papel como neurotransmisor está
mediado por la estimulación de receptores específicos,
denominados receptores de glutamato. Todas las neuronas
contienen glutamato, pero solo unas pocas lo usan como
neurotransmisor. Desempeña un papel esencial en la relación
con los procesos de transaminación, es decir la reacción entre
un aminoácido y un alfa-cetoácido, en la que el grupo amino es
transferida de aquel a éste, con la consiguiente conversión del
aminoácido en su correspondiente alfa-cetoácido.
Después de la formación de glutamato, éste transfiere su grupo
amino directamente a una variedad de alfa-cetoácido por varias
reacciones reversibles de transaminación: donación libremente
reversible de un grupo amino alfa de un aminoácido al grupo
ceto-alfa de un alfa-cetoácido, acompañado de la formación de
un nuevo aminoácido y un nuevo alfa-cetoácido.
También desempeña un papel importante en la síntesis de
distintos aminoácidos que necesitan la formación previa de éste
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ácido, como es el caso de ornitina, arginina, prolina e

hidroxiprolina.
Es uno de los aminoácidos más abundantes del organismo y un
comodín para el intercambio de energía entre los tejidos. Se
considera un aminoácido no esencial porque se puede sintetizar
en muchos tejidos, teniendo un papel fundamental en el
mantenimiento y el crecimiento celular. El ácido glutámico no es
un aminoácido esencial, es decir; el organismo humano es
capaz por sí mismo fabricar todo lo necesario. (CABRERA
HERNÁNDEZ, 2005)

II. OBJETIVOS

 Experimentar y entender cómo se comporta un sistema

amortiguador de pH.
 Aprender el uso de la ecuación de Henderson – Hasselbalch.
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III. MATERIALES, EQUIPOS, SOLUCIONES Y

REACTIVOS

1.Probeta de 100 ml 2.Pizeta

3. Bureta
4.Pipeta de 1.0 ml

5. Vaso de precipitado
de 100 ml
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7.Gradilla
8.Potenciómetro

9.Tiras reactivas de pH 10. NAOH 1.0 mol/L

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IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. pusimos 20ml de ácido glutámico en un vaso de
precipitado de 100ml.

2. Procedimos la medición del PH.

3. Añadimos 0.1ml NaOH 1.0 mol/L y agitamos el vaso y

volver a medir el PH, anotaremos en los resultados.

4. Repetimos el paso 3 hasta llegar PH aproximado 12.

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5. Hicimos el mismo (paso 1 a 4) para otros aminoácidos.

V. RESULTADOS

pH del ac. pH del ac.

NaO Glutámico Glutámico
H con las tiras de con el
pH potenciómetro
1 0.1 3.5 3.49
2 0.2 4 3.58
3 0.3 4.5 4.30
4 0.4 7 8.30
5 0.5 9 9.96
6 0.6 10 10.30
7 0.7 11 11.45
8 0.8 12 12.15
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VI. DISCUSIÓN
 En las mediciones de pH, analizamos de dos distintas
maneras, primero haciendo dos pruebas:

1. Dando un cambio brusco desde la primera prueba –

hasta la última y la siguiente dando un cambio
agregando 0.1mL en cada prueba llegando al mismo
objetivo. Resaltando que al momento de las distintas
pruebas se tuvo un cambio de color azul violeta más
intensa en la primera prueba que en la segunda a pesar
de contener las mismas cantidades de soluciones en
cada vaso.

2. Se acudió a realizar las medidas de pH con el equipo

electrónico (potenciómetro) para tener y corroborar los
datos más aproximados; teniendo en cuenta el calibre
del equipo con agua el patrón con pH 7.0; pero dentro
del experimento se tuvo grado de error observando en
las pruebas después la medida de pH del agua
variando en 4.2
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VII. CONCLUSIONES

 Al añadir 0.1 ml de NaOH 1.0 mol/l varias veces a los

distintos aminoácidos se pudo observar que la variación
de pH es mínimo y para llegar a un pH de
aproximadamente 12 se tuvieron que realizar múltiples
añadidos a las sustancias.
 Aprendimos el uso de la ecuación de Henderson-
Hasselbalch.
 Sacamos los márgenes de error que existe entre las tiras
reactivas de Ph y el Potenciometro.
 Los distintos aminoácidos usados en el experimento eran
de naturaleza muy ácida lo que dificultó el proceso de
convertir su pH a básico, mediante la solución de NaOH
1.0 mol/l.
 El sistema amortiguador era el encargado de que el pH no
cambiara tan bruscamente por lo que se tardó en llegar al
resultado deseado.
VIII. LINKOGRAFÍA

 http://amortiguadoresbiologicos.blogspot.com/
 https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/06%20pH%20AMORTIGUADORES.pdf
 http://www.ehu.eus/biomoleculas/aa/aa2.htm
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IX. RECOMENDACIONES
 Antes del uso de soluciones (reactivos) como el ácido
glutámico y NaOH tener en cuenta la medida de su pH en
el laboratorio y corroborar con la teoría para verificar su
estado y las condiciones en la que se encuentra.
 Verificar el estado de los materiales de vidrio: la limpieza
de cada uno de ellos para no tener alteraciones de pH al
momento de realizar de las pruebas.
 Con el uso del equipo electrónico (potenciómetro) tener
en cuenta su estado de calibración para obtener una
medida de pH mucho más aproximado a la medida
teórica.

X. CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un sistema amortiguador acido- base y para qué

sirve?

Los amortiguadores son sistemas acuosos que tienden a

resistir los cambios en el pH cuando se les agregan
pequeñas cantidades de ácido (H+) o base (OH-
).Un sistema amortiguador consiste de un ácido débil
(dador de protones) y su base conjugada
(aceptor de protones).
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2. ¿Qué es el pk de un ácido base?

EL pK mide la fuerza de disociación del ácido para formar

su base conjugada si es pKa o de la base, para formar su
ácido conjugado si es pKb.

3. Dibujar la fórmula del ácido glutámico y de la lisina e

identificar a los: amino, carboxílico y su radical

LISINA
Grupo
amino
ÁCIDO GLUTÁMICO
Grupo
carboxilo

Grupo
radical

4. ¿Se puede utilizar los aminoácidos como amortiguadores

de pH? fundamente su respuesta.

Pues si tienen esas propiedades de ahí la costumbre de cuando

tiene acidez estomacal tomar leche, pero no son muy prácticos ya
que el rango de pH de amortiguación o bien la zona
amortiguadora de una disolución de este tipo es muy
reducida.