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PRACTICA N° 02
INFORME DE LABORATORIO:
GRUPO : II.
HUACHO - PERÚ
2014
1. RESUMEN
2. OBJETIVOS
3. MARCO TEÓRICO
ENZIMAS
3.1. DEFINICIÓN GENERAL:
Las enzimas son proteínas que efectúan
una acción catalítica, es decir,
favorecen el que se produzca una
reacción determinada.
a. LA AMILASA
i. FUNCIÓN:
ii. PRODUCCIÓN
4. MATERIALES
4.1. INSTRUMENTOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO
4.1.1. Instrumentos:
1 Gradilla
4 Pipetas de 5 y 1 ml (2
de cada uno).
1 Pizeta.
4 Tubos de ensayo.
4.1.2. Reactivos:
10 gts. (1 ml) de H2SO4 10 gts. (1 ml) de NaOH
(diluido al10%). (diluido al 5 %).
H2SO4
1 cojín de agua
destilada. Gasa médica.
4.2.2. Materiales:
1 lápiz marcador. Toallas de papel.
1 cinta masketein. Cámara fotográfica.
5. PROCEDIMIENTO
2° PASO
Añadir 40 ml de agua .
4° PASO
1° PASO 3° PASO una vezz homeginazada
En una vaso de precipitado Homogenizar la esta lista para utilizar.
de 10 ml añadiir 25 gr de muestra.
maizena.
PASO 1:
Colocar la pieza de gasa
sobre el vaso de precipitado.
PASO 2:
Adicionar la muestra de
saliva. La cual pasara a
tráves de la gasa y será
recepcionada en el vaso
de precipitdo.
PASO 3:
Complete los 10 ml de
saliva. Siemprre teniendo
en cuenta que no se forne
espuma.
ROTULE 4 TUBOS
DE ENSAYO
PROCEDA SEGÚN
EL ESQUEMA
TUBO
1 2 3 4
SOLUCIÓN
Sol. Almidón 2 ml. 2 ml. 2 ml. 2 ml.
Lugol 3 gts. 7 gts. 3 gts. 3 gts.
Sol. H2SO4 1 ml. ---- ---- ----
Sol. NaOH ---- 3 gts. ---- ----
Saliva 1ml 1ml 1ml 1ml
5.4.1. Tubo 1
PASO 1
Añadir 2 ml de sol. de almidón.
PASO 2
Adicionar 4 gts. de lugol.
PASO 3
Adicionar 1 ml de H2SO4.
PASO 4
Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.
PASO 5
Llevar a baño María a 40 ° C.
OBSERVAR Y ANOTAR
OBSERVACIONES:
Se tornó color azul con mayor intensidad, esto se debe a que el lugol en
presencia del almidón cambia de color. Por lo tanto la amilasa fue
desnaturalizada.
5.4.2. Tubo 2
PASO 1
Añadir 3 ml de sol. de almidón.
PASO 2
Adicionar 8 gts. de lugol.
PASO 3
Adicionar 1 ml de NaOH.
PASO 4
Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.
PASO 5
Llevar a baño María a 40 ° C.
OBSERVAR Y ANOTAR
OBSERVACIONES:
A este tubo se adiciono: 4 gts. de lugol y 2 ml. de sol. NaOH (más de
lo indicado). Si se decoloro a causa de que la sol. NaOH no estaba
concentrada. Por lo tanto si hubo reacción enzimática.
5.4.3. Tubo 3
PASO 1
Añadir 2 ml de sol. de
almidón.
PASO 2
Adicionar 4 gts. de lugol.
PASO 3
Por ultimo adicionar 1
ml. de saliva.
PASO 4
Llevar a baño María a 40 °C.
OBSERVAR Y ANOTAR
OBSERVACIONES:
Se decoloro rápido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto se
realizó la actividad enzimática óptima y rápida.
5.4.4. Tubo 4
PASO 4
Colocar en una vaso
PASO 2 con precipitado de
Adicionar 3 gts. hielo picado.
de lugol.
PASO 1
PASO 3
Añadir 2 ml de
sol. de almidón. Por ultimo OBSERVAR Y
adicionar 1 ml. de ANOTAR
saliva.
OBSERVACIONES:
Si decoloro pero la intensidad fue ínfima, pero al añadir la saliva. Por
lo tanto se realizó la actividad enzimática, pero lentamente por la
baja temperatura.
6. RESULTADOS
INTENSIDAD DEL ACTIVIDAD
TUBO HIDRÓLISIS
COLOR AZUL ENZIMÁTICA
1 Mayor No Inicial.
2 Ínfima Si Lenta
3 Pequeña Si Rápida
4 Ínfima Si Lenta
7. CUESTIONARIO GENEROSO
¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?
RPTA:
La enzima amilasa degrada el almidón
¿Cómo está formado el almidón químicamente?
RPTA:
El producto formado por la polimerización de miles de monómeros de
glucosa es el almidón.
¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?
RPTA:
Una enzima encargada de degradar el almidón.
¿Cuál es el papel que desempeña el almidón en los animales?
RPTA:
Los polisacáridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidón
amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos, y glucógeno del tejido
animal. Los polisacáridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la
boca mediante una reacción catalizada por la enzima amilasa salival. La
velocidad de la hidrólisis catalizada por esta enzima, disminuye en el
estómago por los iones H+1. La glucosa es el principal producto de la
hidrólisis del almidón y glucógeno. Alrededor de un tercio de la glucosa de
la dieta a va los músculos esquelético y cardiaco para la producción y
almacenamiento de energía; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio
restante va al hígado para almacenarse en forma de glucógeno. La glucosa
de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosíntesis de
otros carbohidratos.
¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?
RPTA:
Porque si la amilasa no actuara sobre el almidón, el almidón no podría ser
degradado en moléculas simples, la glucosa, y no podría ser absorbida por
las células.
8. RECOMENDACIÓN
Sustituir el HCl por el H2SO4.
Ser muy cuidadosos al momento de utilizar el H2SO4.
Por no haber obtenido
Al realizar el experimento con el TUBO 4, colocarlo en un vaso de precipitado con
hielo picado, retirar del vaso a la hora de observar y dar las conclusiones.
Sería conveniente realizar otra prueba con el procedimiento del TUBO 2, para
saber con certeza la coloración que toma la muestra, la actividad y velocidad
enzimática.
Se debería realizar una prueba tomando en cuenta la velocidad de la reacción de
las enzimas con el sustrato.
9. CONCLUSIÓN
La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la actividad
enzimática. A continuación detallamos su acción en diferentes medios y factores que
intervienen en la amilasa salival:
TUBO N° 1
El color de la muestra se torna de color azul intenso,
se debe a que el almidón en presencia del lugol se
torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es:
¿Por qué la amilasa salival no degrado al almidón?
RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el
H2SO4, por lo tanto no se produjo la degradación del
almidón.
Concluimos que el pH óptimo para que la amilasa
realice su actividad enzimática, está dentro del rango
5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y
pancreática. La explicación es concreta: La amilasa
fue desnaturalizada por el medio ácido donde se
encontraba.
TUBO N° 2
El color de la muestra se decoloro en segundo como
en el Tubo 3.
La pregunta es: ¿Porque no permaneció el color azul en
la muestra, si el medio es básico (por la adición de la
solución de NaOH)? RPTA: Porque, la solución del NaOH
no se encontraba concentrada como del H2SO4, ya que
el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la
amilasa sobrevivió al medio y degrado al almidón.
Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un
100% en la actividad enzimática. La explicación es
concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH
concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa
presente en las muestras.
TUBO N° 3
En pocos segundos la muestra se decoloro. La
pregunta es:
¿Por qué se decoloro rápido la muestra?
RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las
condiciones adecuadas para degradar el
almidón.
Concluimos que la amilasa en un medio con
temperatura cálida (37°C) y con pH casi neutro
(5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su
actividad enzimática. La explicación es concreta:
Las enzimas dependen de dos factores
importantes para su actividad enzimática,
siendo estas la temperatura y el pH del medio
en que reaccionan.
TUBO N° 4
Cambio de color la muestra por la existencia del
almidón y al adicionar la saliva el color azul de la
muestra se tornó claro.
Las preguntas son:
¿Por qué hubo tal cambio de coloración? RPTA:
Porque la amilasa que se está presente en la saliva,
degrado al almidón existente en la muestra. Sin
embargo la actividad enzimática que realizo la
amilasa fue lenta.
¿Por qué la actividad enzimática de la amilasa fue
lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja
temperatura del medio donde se desarrolló la
actividad enzimática.
Concluimos que la temperatura baja disminuye o
influye en la actividad de la amilasa. La explicación es
concreta: La amilasa requiere de una temperatura
cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad
enzimática.