MEDIOS DE CULTIVO PARA HONGOS Y BACTERIAS

Ya sabes que debes lavarte las manos antes de comer, porque tienen bacterias
y te puedes enfermar. Pero, ¿alguna vez has visto una bacteria? Haz el
siguiente experimento, con ayuda de un adulto, y las podrás ver.

Los medios naturales son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como extractos de tejidos o infusiones, y cuya composición
química no se conoce exactamente. El medio de cultivo agar papa-dextrosa
conocido como PDA es un medio de cultivo natural útil para el crecimiento de la
mayoría de los hongos. Este medio natural permite el crecimiento micelial;
también proporcionan la formación de estructuras reproductivas mucho más
rápido que los sintéticos, por esta razón el objetivo de este trabajo es preparar
agar papa – dextrosa a partir de papas naturales para la siembra de mohos de
frutas o pan.
Se hirvió papa pelada y cortada en trozos, se filtró con la ayuda de una gasa y se mezcló
con dextrosa y agar, obteniendo un medio que sirve para aislar todo tipo de hongos,
Beauveria, Paecilomyces, Lenanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los más
importantes hongos parásitos de insectos, al igual que los parásitos de plantas y los
hongos saprofitos que crecen muy bien y esporulan en este medio.
Se concluye que el medio de cultivo natural PDA aporta los nutrientes necesarios para
el crecimiento de hongos ya que mediante las enzimas amilasas los hongos
descomponen el almidón de papa en glucosa, útil para el metabolismo del hongo.

Introducción

Medio de cultivo es una mezcla de determinadas sustancias, con o sin gelidificación,

sobre el cual o dentro de él crecen los organismos (Berrios, 1987).Cultivo es el producto
del crecimiento de un organismo o grupo de organismos, establecido con fines
experimentales o industriales. Cultivo puro es el cultivo de un solo organismo y su
progenie (French, 1980).

La primera información sobre el uso de cultivos fue “Nova Plantarum Genera”, publicado
en 1929 por Pier Antonio Micheli, en Florencia, quién logró establecer cultivos de
hongos de los géneros Mucor,Botrytis y Aspergillus en el interior de melones, peras y
membrillos, demostrando que se reproducen por medio de sus “semillas” (French,
1980). El uso de medios sólidos comenzó en Alemania con Schroeter quien en 1872
usó papa, pan, pasta de almidón, y clara de huevo para cultivar bacterias. El micólogo
Brefeld (1881) utilizó gelatina para sus hongos (French, 1980)

El medio de cultivo puede ser químicamente definido o no definido, dependiendo de si

se conoce o no la composición completa y la estructura química de cada componente.
Los medios naturales son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como extractos de tejidos o infusiones, y cuya composición química no
se conoce exactamente (French, 1980).El medio de cultivo papa-dextrosa conocido
como PDA es un medio de cultivo natural útil para el crecimiento de la mayoría de los
hongos cultivables, y para el aislamiento de éstos cuando no hay problema de
contaminación bacteriana (French, 1980). Este medio natural permite el crecimiento
micelial; también proporcionan la formación de estructuras reproductivas mucho más
rápido que los sintéticos (Erwin y Ribeiro, 1996).
Por esta razón el objetivo de este trabajo es preparar agar papa – dextrosa a partir de
papas naturales para la siembra de mohos de frutas o pan

Metodología

Preparación de medio de cultivo PDA para Hongos

Se hirvió 20 g de papa (pelada y cortada en cuadrados pequeños) en 125 ml de agua

destilada durante 20 minutos.
Se filtró a través de una gasa luego se completó a volumen de 250 ml con agua
destilada.
Se añadió 5 g de agar y 5 g de dextrosa, disolviendo por calentamiento.
Se esterilizó a 121ºC durante 15 minutos y se enfrió el medio en un baño termostático a
45°C
Se suplementó el medio de cultivo con sulfato de estreptomicina (0,5 μl/ml).

Siembra de hongos

Con un asa estéril tomó material de una fresa enmohecida.

Se sembró por punción en el medio de cultivo PDA.
Se incubó las placas a 37°C por 72 horas.
CÓMO CREAR UN CULTIVO DE BACTERIAS EN CASA

Materiales
 1 sobre de gelatina sin sabor
 1 cubo de caldo
 1 envase de tapa transparente
 1 litro de agua

Procedimiento (parte 1)
1. Disuelve el cubo de caldo y el sobre de gelatina en 3 tazas de agua.
2. Con ayuda de un adulto, coloca a hervir la mezcla por 10 minutos.
3. El agua restante colócala a hervir en otra olla.
4. Apagua la estufa e inserte el envase durante 5 minutos en el agua hervida.
5. Coloca la mezcla en el envase y tápala hasta que se enfríe.

Procedimiento (parte 2)
1. ¡Ensúciate las manos! Para eso solo debes tocar alguna superficie, como
por ejemplo: la baranda de la escalera, la perilla de la puerta, el teléfono o
el teclado del computador.
2. Abre el frasco y toca la superficie de la gelatina, que ya debe estar dura,
con la yema de los dedos.
3. El resultado lo comenzarás a ver 24 horas después. Entre más tiempo
esperes es mejor.

CUESTIONARIO
 ¿Por qué crees que el envase se debe dejar 5 minutos dentro del agua hervida?
 ¿Qué genera el calor en las bacterias?
 ¿Qué es cada punto blanco?
 ¿Por qué se generan las bacterias?
 ¿Por qué no se pueden ver a simple vista?
 ¿Qué puedes hacer para prevenir que se te peguen?

Discusión
El medio de cultivo Agar Papa Dextrosa (PDA) es un medio muy usado que sirve para
aislar todo tipo de hongos, Beauveria, Paecilomyces, Lenanicillium (Verticillium) y
Metarhizium, los más importantes hongos parásitos de insectos, al igual que los
parásitos de plantas y los hongos saprofitos crecen muy bien y esporulan en este medio
. Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se obtiene el medio líquido de Papa
dextrosa (PD), muy utilizado para la preparación del inóculo en forma masiva (Cañedo,
2004).

Una variante de este tipo de medio es el Agar Papa Azúcar (APA) útil para el crecimiento
de la mayoría de los hongos cultivables, y para el aislamiento de estos cuando no hay
problema de contaminación bacteriana. La dextrosa tiene el inconveniente que se
acaramela al esterilizar (French, 1980).

Otra variante es el Agar Papa Sacarosa Acidificado (APSA) este medio inhibe la
multiplicación de las bacterias, es de uso generalizado para el aislamiento de hongos a
partir de tejidos enfermos. Si se reduce a la mitad de cantidad de azúcar, generalmente
se produce crecimiento más fácil de observar, y una esporulación más rápida, factores
que facilitan la identificación de hongos (French, 1980).

Cuestionario
• Describir dos medios de cultivo que se pueden preparar con sustancias
naturales.
AGAR V-8: este medio es útil para la esporulación de muchos hongos.
El V-8 es un jugo enlatado por la Campbell Soup Co. que contiene extractos de tomate,
zanahoria, apio, beterraga, perejil, lechuga, espinaca y berro. (French, 1980)

AGAR HARINA DE MAIZ: útil para el aislamiento y esporulación de algunas especies

de Phytophthora (French, 1980)

• ¿Cuál es el pH óptimo al que se desarrollan los hongos?

Los hongos, en general, tienen un rango muy amplio de tolerancia al pH. Pueden crecer
en concentraciones relativamente altas de ácido, así como en medios bastantes
alcalinos. EL rango de pH para una gran mayoría es de 2,0 a 9,0, pero casi todos crecen
mejor en un pH ácido. El pH óptimo se encuentra alrededor de 5,6 (García, 2004).

• ¿Qué función tiene el sulfato de estreptomicina en el medio de cultivo?

El sulfato de estreptomicina sirve para inhibir el crecimiento de bacterias en el medio de
cultivo y así se desarrollen solo hongos en el medio.
• ¿Qué ácidos orgánicos pueden adicionarse al medio para inhibir el crecimiento
bacteriano?
Es importante señalar que los ácidos ejercen sobre los microorganismos dos tipos de
efectos distintos, aunque estrechamente relacionados. En primer lugar, existe un efecto
antimicrobiano debido a la acidez en sí, esto es, por un declive del pH extracelular. El
segundo tipo, más importante es la práctica, es el efecto antimicrobiano específico
debido a la forma no disociada, que atraviesa la membrana celular, y causa una
disminución del pH intracelular. (Anangono, 2014)
Los principales ácidos utilizados son: ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico,
ácido sulfúrico y butírico, solos o combinados. (SGPM, 1988)
Cuando se aíslan hongos a partir de insectos colectados del suelo, es recomendable
acidificar el medio con ácido láctico al 25%, se agregan 3 ó 4 gotas sobre el agar
solidificado de la placa con el objeto de evitar el desarrollo de bacterias. (Cañedo, 2004)
• ¿Qué se obtiene después del proceso de hervir papas? ¿De qué otra manera se
lo puede extraer?
Al hervir las papas se obtuvo almidón de papá.
Se lo puede obtener rallando finamente la papa pelada y luego mezclándola con agua
para luego filtrar con ayuda de una gasa.
• ¿Cuál es el proceso de asimilación del almidón por microorganismos
amilolíticos?

El almidón está formado por dos componentes principales: amilasa y amilopectina. El

almidón "desaparece" rápidamente cuando es atacado por los microorganismos
amilolíticos del suelo.

Las enzimas encargas de la hidrólisis del almidón son las amilasas que hidrolizan
moléculas de almidón dando diversos productos incluyendo dextrinas y
progresivamente pequeños polímeros compuestos por unidades de glucosa. Las
amilasas pueden ser sintetizadas de diversas fuentes incluyendo plantas,
animales y microorganismos. Las amilasas se pueden dividir en tres grupos: α-
amilasas, β-amilasas y glucoamilasas (Sánchez et. al, 2004).

El proceso de obtención de jarabes glucosados (soluciones de glucosa en alta

concentración) para la nutrición de los microorganismos se obtienen por hidrólisis
enzimática del almidón. Este proceso requiere dos etapas, la primera etapa,
denominada de licuefacción, es una hidrólisis de las largas cadenas de almidón para
obtener maltodextrinas (cadenas más cortas de almidón), esta es llevada a cabo por la
enzima -amilasa que corta los enlaces glicosídicos -1,4 internos en forma aleatoria del
almidón. En la segunda etapa, denominada sacarificación se hidrolizan los enlaces -1,4
y/o -1-6 del terminal no reductor de la cadena de dextrina, por la enzima
amiloglucosidasa, liberando glucosa (Sánchez et. al, 2004).

http://www.academia.edu/9677563/Revisi%C3%B3n_sobre_microorganismos_amilol%
C3%ADticos
• Escriba las reacciones de descomposición que realizan los microorganismos
para asimilar el almidón del medio.

Las enzimas encargas de la hidrólisis del almidón son las amilasas que hidrolizan moléculas
de almidón dando diversos productos incluyendo dextrinas y progresivamente pequeños
polímeros compuestos por unidades de glucosa.

α-amilasa α-glucosidasa
1. Almidón Maltosa Glucosa
β-amilasa
2. Almidón Maltosa + Dextrina

Conclusión
Se concluye que el medio de cultivo natural PDA aporta los nutrientes necesarios para
el crecimiento de hongos ya que mediante las enzimas amilasas los hongos
descomponen el almidón de papa en glucosa, útil para el metabolismo del hongo.
Existen variaciones del medio de cultivo que pueden ser utilizados según se
necesite obteniendo la misma eficacia.

Bibliografía

Anangono, C. (2014). Ácidos orgánicos en control bacteriano. Tesis. UNAM.

Recuperado el 26 de mayo del 2015, de
https://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/25104/2/DESARROLLO%20D
E%20TESIS%20CARLOS%20ANANGONO%201.pdf
Berrios, A. (1987). Tecnología del cultivo de tejidos de café. Instituto interamericano de
cooperación para la agricultura. Recuperado el 24 d emayo del 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=bd8OAQAAIAAJ&pg=PA2&dq=medio+de+cultiv
o&hl=es-
419&sa=X&ei=EgBiVfzDAYScgwTFwoDQAQ&ved=0CCIQ6AEwAQ#v=onepage&q=m
edio%20de%20cultivo&f=false

Cañedo, V. (2004). Manual de laboratorio para el manejo de hongos entomopatógenos.

Lima. Recuperado el 24 de mayo del 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=lFfNuqTeit8C&pg=PA20&dq=agar+pda&hl=es-
419&sa=X&ei=kotmVd71DKTfsAT3t4LwDw&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=aga
r%20pda&f=true

Erwin, D & Ribeiro, O. (1996). Phytophthora diseases worldwide. The American

Phytopathological Society. St. Paul, Minesota 55121-2097.

French, E. Hebert, T (1980). Métodos de investigación fitopatológica. Costa Rica.

Instituto interamericano de ciencias agrícolas. Recuperado el 24 de mayo del 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=nR8PAQAAIAAJ&pg=PA33&dq=medio+de+cult
ivo+historia&hl=es-
419&sa=X&ei=KABiVaOtOs3fgwTIsoDgBA&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=med
io%20de%20cultivo%20historia&f=true

García. (2004). Introducción a la Microbiología (2 ed.) México. Recuperado el 26 de

mayo del 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=K_ETVnqnMZIC&pg=PA96&dq=ph+optimo+de
+los+hongos&hl=es-
419&sa=X&ei=Q1ZiVfCKK8SnNpGqgSA&ved=0CB8Q6AEwAQ#v=onepage&q=ph%2
0optimo%20de%20los%20hongos&f=false

Sánchez, H. Mejía, G. Figueroa, M. (2005). Estudio de cepas nativas amilolíticas.

Colombia. Revista de la facultad de química farmacéutica ISSN 0121-4004 Volumen 12
número 2. Universidad de Antioquia.
SGPM . (1988). Jornadas pesqueras Hispano- Americana. San José. Recuperado el 25
de mayo del 2015, de
https://books.google.com.ec/books?id=jT0qAAAAYAAJ&pg=PA138&dq=%C3%A1cido
s+org%C3%A1nicos+para+detener+crecimiento+bacteriano&hl=es-
419&sa=X&ei=1cplVYaqKMuyggSC8YGoBw&ved=0CBsQ6AEwAA#v=onepage&q=%
C3%A1cidos%20org%C3%A1nicos%20para%20detener%20crecimiento%20bacterian
o&f=true