METHOD #: 352.

1 Approved for NPDES and SDWA (Issued 1971)

TÍTULO: Nitrógeno, Nitrato (colorimétrico, Brucina )

ANALITO: CAS # 7727-37-9 N Nitrógeno

N03 Nitrato

INSTRUMENTACIÓN: Espectrofotómetro

STORET No. Total 00620

1.0 Alcance y aplicación

1.1 Este método es aplicable al análisis de aguas potables, de superficie y salinas, los desechos
domésticos e industriales. La modificación puede hacerse para eliminar o corregir para la
turbidez, color, salinidad, o compuestos orgánicos disueltos en la muestra.

1.2 El rango de aplicación de concentraciones es de 0,1 a 2 mg N03-N/liter .

2.0 Resumen del método

2.1 Este método se basa en la reacción del ion nitrato con sulfato de brucina en una solución
13 N H2S04 a una temperatura de 100 ° C. El color del complejo resultante se mide a 410 nm .
El control de temperatura de la reacción de color es extremadamente crítica.

3.0 Tratamiento de muestras y conservación

3.1 El análisis debe hacerse tan pronto como sea posible. Si el análisis se puede hacer dentro
de 24 horas, la muestra debe ser preservada por refrigeración a 4 ° C. Cuando las muestras se
deben almacenar más de 24 horas, deberán ser conservados con ácido sulfúrico ( 2 ml conc .
H2S04 por litro) y la refrigeración.

4.0 Interferencias

4,1 materia orgánica disuelta producirá un color apagado en 13 N H2S04 y debe ser
compensado por adiciones de todos los reactivos excepto el reactivo de ácido sulfanílico -
brucina. Esto también se aplica al color natural presente no se debe a compuestos orgánicos
disueltos.

4.2 El efecto de la salinidad se elimina por adición de cloruro de sodio a los espacios en blanco,
los estándares y muestras.

4.3 Todos los agentes oxidantes fuertes o reductores interfieren. La presencia de agentes
oxidantes puede ser determinada con un kit de prueba de cloro residual total.

4,4 interferencias de cloro residual se eliminan mediante la adición de arsenito de sodio.

4,5 ferroso y manganeso de hierro y tetravalentes férricos dan interferencias ligeramente

positiva, pero en concentraciones de menos de 1 mg / L de éstos son insignificantes.
4,6 El calentamiento desigual de las muestras y los estándares durante el tiempo de reacción
resultará en valores erráticos. La necesidad de un control absoluto de la temperatura durante
el período de desarrollo de color crítico no es exagerada.

5.0 Aparato

5.1 Espectrofotómetro o fotómetro de filtro adecuado para la medición de la absorbancia a

410 nm .

5.2 Número suficiente de 40 a 50 ml tubos de muestra de vidrio para los blancos de reactivo,
estándares y muestras.

5.3 neopreno recubierto bastidores de alambre para sujetar los tubos de muestra.

5.4 Baño de agua adecuado para su uso a 100 ° C. Este baño debe contener un mecanismo de
agitación de manera que todos los tubos están a la misma temperatura y deben tener la
capacidad suficiente para aceptar el número necesario de tubos sin caída significativa en la
temperatura cuando se sumergen los tubos.

5.5 Baño de agua adecuada para el uso a 10-15 º C.

6.0 Reactivos

6,1 Agua destilada libre de nitrito y nitrato se va a utilizar en la preparación de todos los
reactivos y estándares.

6,2 Solución de cloruro de sodio 6,2 ( 30 % ) : Disolver 300 g de NaCl en agua destilada y se
diluye hasta 1 litro.

6.3 Solución de ácido sulfúrico: Añadir con cuidado 500 ml conc . H2S04 a 125 ml de agua
destilada. Enfriar y mantener bien cerrado para evitar la absorción de humedad atmosférica.

6.4 reactivo de ácido sulfanílico Brucina - : disolver 1 g de sulfato de brucina [( C23H26N204 ) 2

« H2S04 « 7H20 ] y 0,1 g de ácido sulfanílico ( NH2C6H4S03H * H20 ) en 70 ml de agua
destilada caliente . Añadir 3 ml conc. HCl, fresco, mezclar y diluir hasta 100 ml con agua
destilada. Almacenar en una botella oscura a 5 ° C. Esta solución es estable durante varios
meses; el color rosa que se desarrolla lentamente no afecta a su utilidad. Rotular la botella con
la advertencia: ADVERTENCIA: Brucina Sulfato es tóxico: tener cuidado para evitar la ingestión.

6,5 Solución de nitrato de potasio 6,5 existencia: 1,0 ml = 0,1 mg N03 -N. Disolver 0,7218 g de
nitrato de potasio anhidro ( KN03 ) en agua destilada y se diluye hasta 1 litro en un matraz
aforado . Preservar con 2 ml de cloroformo por litro. Esta solución es estable durante al menos
6 meses.

6,6 Potasio nitrato solución estándar: 1,0 ml = 0,001 mg N03 -N. Diluir 10,0 ml de la solución
madre ( 6.5 ) a 1 litro en un matraz aforado. Esta solución patrón deberá prepararse
semanalmente fresco.

6,7 ácido acético ( 1 + 3 ) : Diluir 1 volumen de ácido acético glacial ( CH3COOH ) con 3
volúmenes de agua destilada .
6,8 Hidróxido de sodio (1N) : Disolver 40 g de NaOH en agua destilada. Enfriar y diluir hasta 1
litro.

7.0 Procedimiento

7.1 ajustar el pH de las muestras a aproximadamente a 7 con ácido acético (6.7) o hidróxido de
sodio (6.8). Si es necesario, se filtra para eliminar la turbidez.

7.2 Establecer el número requerido de tubos de muestra en el rack para manejar los reactivos,
el blanco, los estándares y las muestras. Los Espacios entre los tubos debe ser uniforme a lo
largo del bastidor para permitir el flujo de agua de baño entre los tubos. Esto debería ayudar a
lograr un calentamiento uniforme de todos los tubos.

7.3 Si es necesario corregir el color o la materia orgánica disuelta que hará que el color de la
calefacción, se debe ejecutar un conjunto de duplicados de las muestras a las que se han
añadido todos los reactivos, excepto el ácido sulfanílico brucina.

7.4 Pipetear 10,0 ml de estándares y muestras o una parte alícuota de las muestras diluidas a
10,0 mL - en los tubos de muestra.

7.5 Si las muestras son salinos, añadir 2 ml de la solución de cloruro de sodio al 30 % (6,2) al
blanco, estándares y muestras. Para las muestras de agua dulce, la solución de cloruro de
sodio se puede suprimir. Mezcle los contenidos de los tubos por turbulencia y colocan el
estante en el baño de agua fría (0 - 10 ° C).

7.6 pipetear 10,0 ml de solución de ácido sulfúrico (6.3) en cada tubo y mezclar por agitación.
Permitir que los tubos lleguen al equilibrio térmico en el baño frío. Asegúrese de que las
temperaturas están equilibrada en todos los tubos antes de continuar.

7.7 Añadir 0,5 ml de reactivo de ácido sulfanílico brucina (6,4) a cada tubo (excepto los tubos
de control de interferencia , 7.3) y mezclar cuidadosamente por turbulencia, a continuación,
coloque el bastidor de tubos en el baño de agua a 100 ° C durante exactamente 25 minutos.

PRECAUCIÓN : Inmersión de la gradilla de tubos en el baño no debe disminuir la temperatura

del baño de más de 1 a 2 ° C. Con el fin de mantener esta disminución de la temperatura a un
mínimo absoluto , el flujo de agua del baño entre los tubos no debe ser restringido por el
hacinamiento demasiados tubos en el rack. Si el desarrollo del color en las normas revela
discrepancias en el procedimiento , el operador debe repetir el procedimiento después de
revisar los pasos de control de temperatura .

7.8 Eliminar bastidor de tubos del baño de agua caliente y sumergirse en el baño de agua fría y
permita que alcance el equilibrio térmico ( 20-25 º C).

7.9 Leer la absorbancia frente al blanco de reactivo a 410 nm usando un 1 cm o célula ya .

8.0 Cálculo

8.1 obtener una curva de calibración graficando la absorbancia de los estándares de gestión
mediante el procedimiento anterior contra mg N03 -N / L. ( La reacción de color no siempre
sigue la ley de Beer ' ) .
8.2 Restar la absorbancia de la muestra sin el reactivo-brucina sulfanílico partir de la
absorbancia de la muestra que contiene ácido sulfanílico brucina y determinar mg N03-N / L.
Multiplicar por un factor de dilución apropiado si se toma menos de 10 ml de muestra.

9.0 Precisión y exactitud

9.1 Veintisiete analistas en quince laboratorios analizaron muestras de agua naturales que
contiene incrementos exactos de nitrato inorgánico , con los siguientes resultados :

Incremento de precisión como lo Precisión como

El nitrógeno, nitrato Desviación Estándar Bias, Bias,

mg N / litro mg N / litro % mg N / litro

OD 02 TOT-

0 . 19 0,083 8,30 0,02

1,8 0,245 4,12 0,04

1,24 0,214 2,82 0,04

( FWPCA Estudio Método 2 , Análisis de Nutrientes ) .

bibliografía

1 . Métodos estándar para el Análisis de Aguas y Aguas Residuales , 14 ª Edición , página 427 ,
Método 419D ( 1975 ) .

2 . Annual Book of ASTM Standards , Parte 31 , "Agua" , la Norma D 992-71 , p 363 ( 1976 ) .

3 . Jenkins , D., y Medsken , L., " Un Método Brucina para la Determinación de nitrato en el
océano , de estuario , y las Aguas Dulces " , Anal Chem . , 36 , p 610, (1964).