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Principio Basico de Laboratorio (Quimica Clinica) PDF
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Fundamento
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Cuadro 2. Unidades SI derivadas de uso común en medicina
Muchas veces las unidades básicas o derivadas pueden ser muy grandes o muy
pequeñas para representar una cantidad en particular. Para esos casos, el SI
admite el uso de una serie de prefijos que permiten formar múltiplos o submúltiplos
decimales de las unidades del SI. Estos prefijos se muestran en el Cuadro 3.
Si bien es cierto, el uso del SI es la regla hoy en día, existen excepciones que la
Oficina Internacional de Pesas y Medidas debió adoptar debido a su uso
generalizado. Algunas de estas excepciones de uso en ciencias médicas se
muestran en el Cuadro 4.
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Cuadro 4. Algunas unidades de uso común que no pertenecen al SI.
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-Números muy grandes pueden ser separados en grupos de tres para facilitar su
lectura, sin puntos o comas. Los puntos o comas se utilizan para las notaciones
decimales. Ejemplo: 1 000 257, 35 y no 1.000.257,35.
-Siempre se coloca un cero a la izquierda de la coma o el punto decimal para los
números menores de uno. Ejemplo: 0.38 o 0,38 y no .38 o ,38.
-Los símbolos de las unidades o sus nombres no deben ser modificados mediante
adición de subíndices. Ejemplo: Vmax= 1000 V y no V= 1000 Vmax.
-La redacción de la información no debe ser mezclada con los símbolos de las
unidades o sus nombres. Ejemplo: “el contenido de agua es de 20 ml/kg” y no “20
ml H2O/kg” o “20 ml de agua/kg”.
-Debe quedar explícito cuál símbolo pertenece a cuál valor numérico y qué
operación matemática debe ser aplicada a cada valor numérico. Ejemplos:
45 cm X 46 cm y no 45 X 46 cm
20 oC a 30 oC o (20 a 30) oC y no 20 oC-30 oC o 20 a 30 oC
-Los símbolos de las unidades o sus nombres no pueden ser mezclados y las
operaciones matemáticas no son aplicadas a los nombres de las unidades sino a
los valores numéricos. Ejemplos: pueden ser usadas formas como: kg/l, kg • l o
kilogramo por litro y no formas como: kilogramo/l, kg/litro, kilogramo/litro o kg por l.
-Los valores de cantidades son expresados en forma numérica y con los símbolos
de las unidades. Ejemplos: m= 5 kg y no m= cinco kilogramos o m= cinco kg, o “la
corriente fue de 15 A” y no “la corriente fue de 15 amperios”.
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Figura 1. Tipos de pipetas de verter: de soplar (A) y no de soplar (B). Note las
diferentes escalas y dónde terminan las graduaciones de la escala en cada tipo de
pipeta.
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volumen a dispensar debe ser regulado manualmente de forma tal que el líquido a
dispensar se encuentre entre una marca y otra. Algunos nombres comunes que
reciben este tipo de pipetas son: pipeta volumétrica, tipo Mohr o bacteriológica
(Figura 1).
Usted tiene tres pipetas cuyas capacidades máximas son de 0.1 ml, 1 ml y 2 ml.
¿Cuál pipeta usaría para pipetear las siguientes cantidades: a) 100 μl, b) 200 μl y
c) 1.1 ml?
En este caso, es necesario tener claro que 100 μl equivalen a 0.1 ml y 200 μl
equivalen a 0.2 ml (ver Cuadro 3). Por lo tanto, para dispensar 100 μl se utiliza la
pipeta de 0.1 ml, para dispensar 200 μl se utiliza la pipeta de 1ml y para dispensar
los 1.1 ml se utiliza la pipeta de 2 ml.
Una vez seleccionada la pipeta, es necesario cerciorarse qué tipo de pipeta es,
si es de soplar o no. Durante las prácticas de laboratorio se utilizarán pipetas con
capacidades máximas que oscilan entre los 0.1 ml a los 25 ml que pueden ser de
soplar o no. Es imperativo que se familiarice con estos tipos de pipetas y sus
escalas.
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Figura 2. Dispositivo tipo pera para crear vacío y succión en la pipeta. Esta pera de
hule cuenta con tres puntos rotulados con flechas o A, B y C o 1, 2 y 3. Al ejercer
presión manual en uno de esos puntos, un balín interno permitirá la entrada o
salida de aire para que la pipeta pueda succionar (A) o dispensar (B) el líquido que
contiene. El punto C o 3 es útil para dispensar la última gota en aquellas pipetas
que son de soplar (C). El uso correcto de este dispositivo requiere de práctica para
ajustar la fuerza manual que debe usarse para ejercer presión. Si en algún
momento su pera se humedece con el líquido a dispensar, dejará de funcionar
pues no se podrá ejercer vacío. Para proceder, es necesario secar antes bien la
pera.
La pipeta se debe llenar hasta un poco más arriba del inicio de la graduación
de la escala y luego poco a poco se ajusta, frente a los ojos y en posición vertical,
al punto exacto de graduación de la escala (generalmente 0). Recuerde que para
líquidos transparentes, el fondo del menisco del líquido se ajusta a la graduación,
mientras que para líquidos no transparentes, los extremos del menisco se ajustan
a la graduación de la escala. Una vez ajustado el volumen, la pipeta conteniendo
el líquido a dispensar es transferida al recipiente donde se depositará el líquido. En
este momento se presiona la pera suavemente en el punto que permitirá la salida
del líquido, manteniendo la pipeta en posición vertical y con la punta de la misma
descansando en el recipiente. Una vez dispensado el volumen, se retira la pera y
la pipeta se descarta cuidadosamente, con la punta hacia abajo en el recipiente
para descartar pipetas. Si por algún motivo debe volver a utilizar una pipeta en la
misma solución en la que fue utilizada, es recomendable dejar la pipeta en
posición horizontal sobre la mesa de trabajo, con la punta de la misma unos
centímetros fuera del borde de la mesa.
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2.3. Uso correcto de las micropipetas.
Las micropipetas son dispositivos que permiten medir volúmenes pequeños que
van desde 1 μl hasta 1 ml o más. Al igual que las pipetas éstas pueden ser para
contener o para verter volúmenes. Durante el curso utilizaremos micropipetas para
verter, ya sea un volumen fijo o un volumen variable. En las de volumen variable,
se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. La
micropipeta más comúnmente usada en los laboratorios de análisis fue introducida
por la compañía Eppendorf y este nombre se adoptó de forma genérica para estos
dispositivos, aunque hoy en día existen una gran cantidad de compañías y
modelos similares que funcionan bajo un mismo principio de pistones para operar.
Por lo tanto, es aconsejable consultar las instrucciones del fabricante sobre el
empleo correcto de cada modelo. Sin embargo, todas ellas utilizan puntas o “tips”
descartables plásticos que se ajustan al extremo de la micropipeta. En estas
puntas de plástico es donde se deposita el líquido a medir.
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volumen correspondiente. El tip de plástico generalmente no se seca por fuera ya
que se considera que su superficie no absorbe líquido. A continuación se
describen las instrucciones específicas para los modelos de micropipetas que se
utilizarán durante el curso (Figura 3).
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Cuadro 6. Disposición de los dígitos en el indicador según la micropipeta a usar.
* todos los dígitos deben aparecer en negro, excepto cuando se indique lo contrario en
paréntesis
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Figura 4. Posiciones de la micropipeta a la hora de medir un volumen específico.
A: Botón pulsador en el primer tope, B: la punta de la micropipeta es sumergida
entre 1 mm y 3 mm en la muestra para luego liberar el botón pulsador suavemente
hasta su posición original, C: Forma correcta de dispensar el líquido medido en el
recipiente correspondiente, D: Posición de la micropipeta al apretar el botón
pulsador hasta el segundo tope, E: Vuelta a la posición inicial, F: Expulsión de la
punta, la cual debe ser descartada en un recipiente apropiado. Tomado del manual
de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05
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Figura 5. Micropipeta multicanal (8 canales), modelo Biohit de rango de volumen
de 50 μl a 300 μl. Este tipo de micropipeta es muy útil para microensayos semi
automatizados o automatizados en platos descartables de 96 pozos.
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Como se mencionó anteriormente, la concentración de una solución debe ser
expresada en unidades del SI, es decir en mol/l cuando el peso molecular del
soluto se conoce, o en términos de peso (masa) por litro si el peso molecular del
soluto se desconoce. Sin embargo, existen todavía algunas expresiones que no
pertenecen al SI pero que su uso se ha mantenido, por razones históricas o
prácticas. Aunque el uso de dichas expresiones en este manual no es estimulado,
sí es necesario introducirlos ya que muchos de los protocolos a utilizar todavía son
descritos con esta nomenclatura. Existen básicamente dos tipos de expresiones
que prevalecen: aquellas que expresan la concentración de forma porcentual y
aquellas que la expresan como molaridad. Las concentraciones expresadas de
forma porcentual se refieren a partes de soluto por 100 partes de la solución, de
ahí el término porcentaje o por cien. Estas pueden enunciarse como:
-Peso por unidad de peso (o peso en peso o p/p): los dos, el soluto y el solvente
son pesados en gramos y la proporción de soluto se expresa por 100 g de
solución. Ejemplo: una solución de NaCl al 24% (p/p) contiene 24 g de NaCl por
cada 100 g de solución, o 240 g de NaCl y 760 g de disolvente.
-Volumen por unidad de volumen (o v/v): número de ml de soluto en 100 ml de
solución. Ejemplo: una solución de HCl al 1% (v/v) contiene 1 ml de HCl puro por
100 ml de solución.
-Peso por unidad de volumen (o p/v): número de g de soluto en 100 ml de solución.
Si el porcentaje no especifica la forma de expresión, es decir, p/p, v/v o p/v, se
asume que el porcentaje está expresado en peso por unidad de volumen. Ejemplo:
una solución de MgCl2 al 7% contiene 7 g de MgCl2 por cada 100 ml de solución.
Cabe destacar que al ser estas relaciones porcentuales, el volumen o peso final
puede ser cualquier cantidad pero lo importante es mantener la relación entre las
partes. A continuación algunos ejemplos:
Calcule cuántos gramos de NaOH se pesaron para obtener 300 ml de una solución
al 10 %
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particular, se requiere no 1 l sino 2.5 l de solución, por lo tanto hay que pesar 0.1 X
2.5= 0.25 mol. Esta cantidad corresponde a 0.25 mol X 40 g/mol= 10 g. Entonces
para preparar 2.5 l de una solución de NaOH 0.1 M se deben pesar 10 g de NaOH
y llevar a 2.5 l con agua.
V1 X C1 = V2 X C2
Al utilizar esta ecuación debe tomarse en cuenta que tanto las unidades de V1 y
V2 así como las de C1 y C2 deben ser las mismas, preferiblemente ml y mol/l
respectivamente. Ejemplo: prepare 500 ml de una solución de glucosa 5 mol/l a
partir de una solución de glucosa a 45 mol/l. Aplicando la ecuación antes
presentada tenemos:
45 X 1/x= 5
x= 9
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El factor de dilución representa el número de veces que fue diluida la solución
concentrada. Si se hace no una sino una serie de diluciones, la concentración de
la solución final se obtiene al multiplicar la concentración original por el producto
de los factores de dilución. Ejemplo: si la solución de glucosa a 45 mol/l del
ejemplo anterior es primero diluida 1/9 y luego 1/100, la concentración final de la
solución será 45 X 1/9 X 1/100= 0.05 mol/l, con un factor de dilución de 900.
Las diluciones seriadas son también muy útiles. Estas diluciones son aquellas
en las cuales todas las diluciones hechas a partir de la primera o luego de la
primera poseen el mismo factor de dilución. Ejemplo: para determinar la
concentración de proteínas en un suero animal, la muestra es diluida 1/5 mediante
la adición de 0.02 ml de suero a 0.08 ml de solución salina en el tubo número 1.
Los tubos 2 al 8 contienen 0.5 ml de solución salina como diluyente. La dilución
seriada se realiza al transferir 0.5 ml del tubo 1 al tubo 2, mezclar y transferir 0.5 ml
del tubo 2 al tubo 3 y así sucesivamente hasta el tubo 8. La concentración de suero
en los tubos 2 al 8 decrece por un factor de 2, siendo cada dilución: tubo 1:1/5,
tubo 2: 1/10, tubo 3: 1/20, tubo 4: 1/40, tubo 5: 1/80, tubo 6: 1/160, tubo 7: 1/360 y
tubo 8: 1/640.
Materiales y reactivos
-Una pera de hule con número: esta pera será la que se le asignará y utilizará
durante todo el curso. Asegúrese de que funcione correctamente. La pera debe ser
devuelta al finalizar cada práctica en perfecto estado.
-Envases para descartar las puntas usadas (habrá uno por lado de mesa)
-Envases para descartar las pipetas usadas (habrá uno por mesa)
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Procedimiento
Conozca el resto del equipo con el que trabajará durante el curso y que se
encuentra dentro del laboratorio como la centrífuga, los agitadores tipo vortex,
el termociclador, el espectrofotómetro, etc.
Realice los cálculos para diluir una solución de NaCl al 0.145 mol/l para obtener:
Resultados
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2) Haga la descripción de los cálculos solicitados en la sección de procedimiento
aquí:
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Bibliografía
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EJERCICIOS (para ser realizados por el estudiante en horas de estudio
independiente)
2. Cuántos gramos de MgCl2 hay en 1 g de MgCl2⋅ 3 H2O? PM del MgCl2⋅ 3 H2O: 149
g/mol, PM del MgCl2: 95 g/mol
5. Cuánto CuSO4⋅ 5 H2O debe ser pesado para preparar 1 L de una solución que
contenga 80 mg de CuSO4?
6. El peso molecular de CaCO3 es 100 g/mol , cuántos gramos son necesarios para
preparar:
• 1 L de 0.1 M CaCO3?
• 50 mg/L de CaCO3?
7. Una solución estándar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuántos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:
• 200 g/L
• 150 g/L
• 100 g/L
• 50 g/L
10. Cuál es la dilución final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 µl de
suero, 500 µl de solución salina y 300 µl de reactivo?
11. Cuál es la concentración en mol/l de una solución que tiene 100 g de NaOH
disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol
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RESPUESTAS A LOS EJERCICIOS
2. Cuántos gramos de MgCl2 hay en 1 g de MgCl2⋅ 3 H2O? PM del MgCl2⋅ 3 H2O: 149
g/mol, PM del MgCl2: 95 g/mol R/ 0.64 g
5. Cuánto CuSO4⋅ 5 H2O debe ser pesado para preparar 1 L de una solución que
contenga 80 mg de CuSO4? R/ 125 mg
6. El peso molecular de CaCO3 es 100 g/mol , cuántos gramos son necesarios para
preparar:
• 1 L de 0.1 M CaCO3? R/ 10 g/l
• 50 mg/L de CaCO3? R/ 0.05 g
7. Una solución estándar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuántos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:
• 200 g/L R/ 6 ml
• 150 g/L R/ 4.5 ml + 1.5 ml de diluyente
• 100 g/L R/ 3 ml + 3 ml de diluyente
• 50 g/L R/ 1.5 ml + 4.5 ml de diluyente
10. Cuál es la dilución final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 µl de
suero, 500 µl de solución salina y 300 µl de reactivo? R/ 1:5
11. Cuál es la concentración en mol/l de una solución que tiene 100 g de NaOH
disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol R/ 25 mol/l
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