PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIÓN DE AMONIO

COD. GL-PL-19

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2 29-02-2016
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1 09-11-2015
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Documento Carlos Doria

Martha García Leanis Pitre
0 Coordinador lab. de 17-06-2013
inicial Ing. Química
calidad ambiental
Dir.SILAB

REV. No. DESCRIPCION ELABORÓ REVISÓ APROBÓ FECHA

APROBADO: _______________________

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CONTENIDO

1. OBJETO .............................................................................................................. 3
2. APLICACIÓN ....................................................................................................... 3
3. DEFINICIONES ................................................................................................... 3
4. FUNDAMENTO DEL MÉTODO ........................................................................... 3
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES ................................................................ 3
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIÓN...................... 3
7. MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................. 4
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES ............................................................................ 4
9. PROCEDIMIENTO .............................................................................................. 5
10. CÁLCULOS ....................................................................................................... 6
11. AUTORIDAD ..................................................................................................... 6
12. FORMATOS ...................................................................................................... 6
13. REFERENCIAS ................................................................................................. 7

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1. OBJETO

Describir la metodología a seguir para determinar Amonio en aguas.

2. APLICACIÓN

El método del Fenato (SM 4500 – NH3 F), conocido también como la técnica colorimétrica
de cuantificación del Azul de Indofenol, es aplicable tanto para agua dulce como para
agua de mar y es lineal para 0.6 mg NH3-N/L.

3. DEFINICIONES

Amonio: Es un catión poliatómico cargado positivamente de fórmula química NH4+. Se

produce por la reacción del amoníaco, que es una base débil con ácidos de Bronsted
(donantes de protones).

4. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

El ión amonio resulta de la reducción de nitratos u oxidación de materia orgánica, sin

embargo, dependiendo del pH del medio, sus concentraciones pueden variar
transformándose en amoníaco, lo cual quiere decir, que a pH superiores a 9.2, el
amoniaco (NH3) tiende a incrementar pero el amonio (NH4) disminuye, mientras que a pH
menores, el amonio (NH4+) se aumenta y el amoníaco disminuye.

El método de Fenato conocido también como la técnica colorimétrica de amonio (azul de

indofenol), se basa en que un compuesto de color azul intenso, indofenol, se forma por la
reacción del amonio, con el fenol favorecido por el ión hipoclorito en condiciones alcalinas,
catalizada por el nitroprusiato de sodio el cual favorece la intensidad del color en la
reacción, y puede ser leída a 640 nm.

5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES

Complejos de Mg++ y Ca++ con citrato de sodio eliminan interferencias producidas por la
precipitación de estos iones a un pH alto, ya que el citrato sirve como quelante. El
nitrógeno trivalente no produce interferencias.

Las interferencias producidas por turbidez se remueven con destilación o filtración.

Si el sulfuro de hidrógeno está presente, eliminar por acidificación de la muestra a pH 3

con HCl diluído y airear vigorosamente hasta que el olor de sulfuro ya no se pueda
detectar.

Otras interferencias las causan durezas mayores a 400 mg CaCO3 – MgCO3/L; al igual
que alcalinidad mayor a 500 mg CaCO3/L.

6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIÓN

Las muestras se recolectan en botellas Niskin, Nansen u otras adecuadas, y de éstas, se

transfieren a una botella plástica de 500 ml, previamente lavada y purgada.

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Generalmente, la cantidad colectada en la última botella, sirve para efectuar todos los
análisis de nutrientes.

Previo al análisis es necesario filtrar la muestra para evitar las interferencias por el
material suspendido. Si las muestras van a ser analizadas dentro de las 24 horas de
colectadas se debe refrigerar a 4ºC sin acidificar. Si esto no es posible se deben
almacenar por un tiempo máximo de 28 días en un sitio oscuro y congeladas a – 20ºC sin
acidificación, o acidifique a pH menor a 2 y refrigere a 4ºC. Si preserva acidificando,
neutralice la muestra con NaOH o KOH inmediatamente antes de realizar la
determinación. Es preferible el uso de congelación instantánea con CO2.

Nota: Aunque la acidificación es adecuada para ciertos tipos de muestras, produce

interferencias cuando amonio intercambiable está presente en sólidos sin filtrar.

7. MATERIALES Y EQUIPOS

- Espectrofotómetro VIS con un rango de 400 – 900 nm

- Celdas de vidrio con 10 ó 1 cm de paso óptico
- Dosificadores o pipetas de 1 mL
- Dosificadores o pipetas de 2 mL
- Pipetas aforadas de 25, 10, 5, 2 y 1 mL
- Probetas de 100 y 50 mL
- Matraces aforados de diferentes capacidades
- Vasos de precipitado (beaker o erlenmeyer) de 100 o 250 mL
- Bomba de vacío
- Filtro de nitrocelulosa con diámetro de poro de 0.45 µm
- Papel aluminio o película plástica transparente (envoplast)

8. REACTIVOS Y SOLUCIONES

- Agua desionizada: Debe utilizarse agua recientemente desionizada para la preparación

de reactivos, estándares y blancos, la cual se debe almacenar en recipiente de vidrio
bien tapado. El incumplimiento de esta precaución conduce invariablemente a una
cuantificación deficiente del amonio.

- Solución de fenol: Disolver 25 g de fenol (C6H5OH) R.A. en 250 ml de etanol (C2H5OH)

al 95%. Almacenar la solución refrigerada a 4ºC en frasco ámbar

- Solución de nitropruciato de sodio [Na2Fe (CN)5 NO.2H2O](0.5% p/v): Disolver 0.5 g de

Nitropruciato de sodio en 100 ml de agua desionizada. Almacenar refrigerada en botella
de color ámbar por un tiempo máximo de Un (1) mes.

- Reactivo alcalino: Disolver 100 g de citrato de sodio (C6H5Na3O7.2H2O) R.A. y 5 g de

hidróxido de sodio (NaOH) en agua desionizada. Diluya hasta 500 ml. Almacenar en
recipiente de vidrio (La solución es estable durante varios meses).

- Hipoclorito de sodio (NaClO): Solución comercial cercana al 5%. Esta solución de

descompone lentamente una vez destapado la botella. Reemplazar cada 2 meses.

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- Solución oxidante: Mezclar 60 ml del reactivo alcalino y 15 ml de hipoclorito de sodio al

5%.. Es preciso mantener la solución tapada mientras no está en uso. Debe prepararse
esta mezcla únicamente el día que se va a utilizar, los sobrantes deben descartarse.

- Solución estándar de amonio: Disolver 0.0535 g de cloruro de amonio (NH4Cl) grado

analítico (previamente seco a 104 ºC durante dos horas), en 100 mL de agua
desionizada. Adicionar 50 μL de cloroformo como preservante y almacenar refrigerada;
la solución bien sellada es estable por varios meses. La concentración de esta solución
es de 10000 µg-at N./L.

9. PROCEDIMIENTO

9.1 CALIBRACIÓN

- Stock secundario: Medir 1 mL de la solución patrón y diluir hasta 100 mL con agua
desionizada; la concentración de esta solución es de 100 µmol/L

- Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 mL del stock secundario y completar a 25 mL con
agua desionizada. Las concentraciones de estas soluciones son: 1.0; 2.0; 3.0; 4.0 y 5.0
µg-at N/L respectivamente; o seleccionar concentraciones que estén en el rango de
trabajo de las muestras.

- Aplicar el proceso descrito para la muestra y el blanco.

- Aplicar regresión lineal a los resultados y calcular la concentración de la siguiente forma.

Determine la pendiente (m) y el intercepto (b) de la curva de calibración (Y= mX + b)

Abs = C * m + b

Y= Abs = valor de la absorbancia del estándar

X = C = Concentraciòn estándar ( µg-at N/L)
b = intercepto

Nota: La curva de calibración se realiza una vez, y cuando se presente un cambio

significativo en el ensayo. Se recomienda renovar cada 2 meses

9.2 ANALISIS

- Homogenizar la muestra y filtrarla antes de proceder al análisis, si hay presencia de

material en suspensión

- Tomar 25 mL de muestra y verterla en un beaker o erlenmeyer

- Adicionar 1 mL de solución de fenol, agitar y mezclar completamente.

- Agregar 1 mL de nitroprusiato de sodio, agitar y mezclar completamente.

- Adicionar 2.5 mL de solución oxidante, agitar y mezclar completamente.

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- Mantener el recipiente que contiene la muestra tapado con papel aluminio o película
plástica y en la oscuridad, en una habitación entre 20 y 27ºC durante 1 hora.

- La muestra tornará azul y la intensidad del color es proporcional a la concentración de

amonio en la muestra. El color es estable por 24 horas.

- Leer la absorbancia a 640 nm para todas las muestras. En caso que la lectura de
absorbancia en la muestra exceda el rango espectrofotométrico, diluirla con agua
destilada y procesar nuevamente.

- Siga el método descrito para la muestra usando 25 mL de agua desionizada.

Nota: Se deben usar guantes y gafas protectoras cuando manipule fenol; ya que es un
veneno protoplasmático (provoca la destrucción generalizada de células, seguida de falla
de los órganos) y es extremadamente corrosivo en su forma líquida o polvillo. Ingresa al
organismo por la piel o por ingestión. El contacto con los ojos puede provocar incluso la
ceguera y la ingestión de 1g puede ser fatal. Es irritante al tracto respiratorio, sin
embargo, su baja volatilidad hace que la inhalación sea un riesgo menor. Aplique
ventilación adecuada para minimizar la exposición del personal a estas sustancias tóxicas
volátiles.

10. CÁLCULOS

De la curva de calibración se obtiene directamente la concentración de la muestra, así:

Abs  b
C
m
C = Concentración de la muestra en μg-at.N/L (microgramo-átomo de N/L)
Abs = Absorbancia de la muestra corregida (menos la absorbancia del blanco)
b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de regresión

Nota: Si realizó dilución debe tener en cuenta el factor de corrección, por el cual se
multiplicará el resultado obtenido al sustituir valores en la ecuación.

11. AUTORIDAD

Director técnico: Posee autoridad para decidir acerca del uso de equipos y la realización,
suspensión, reanudación o reprogramación de una prueba.

Responsable de calidad: Decide sobre la repetición de una prueba.

Técnico Analista titular o suplente y/o Auxiliares: Autoridad para decidir el encendido
de equipos, si se requiere, tomar las muestras, realizar las lecturas pertinentes y repetir
las pruebas cuando sea necesario.

12. FORMATOS

Datos de Análisis Espectrofotométricos GL –F 23

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13. REFERENCIAS

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Phenate Method
4500 –NH3 F. American Public Health Association, American Water Works Association,
Water Pollution Control Federation. 21st ed., New York, 2005.pp 4-114.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS-INVEMAR. Manual de

técnicas analíticas para la determinación de parámetros fisicoquímicos y contaminantes
marinos (Aguas, Sedimentos y Organismos). Santa Marta, 2003. p.40. Disponible en:
<http://www.invemar.org.co/redcostera1/invemar/docs/7010manualTecnicasanaliticas.pdf
>

ORDUZ, Sergio y ERAZO Edna. Análisis de las características Físicoquìmicas de aguas

y suelos de cultivos acuícolas intensivos y superintensivos. CENIAGUA -COLCIENCIAS.
Bogotá, 2009. p.29 Disponible
en:<http://www.ceniacua.org/archivos/CARTILLA_FORTALECIMIENTO_2009.pdf>

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