INTRODUCCIÓN:

La genómica es el conjunto de estrategias y tecnologías para la caracterización molecular

del genoma y, en general, el estudio del genoma de un microorganismo. Una parte de la
genómica corresponde a la cartografía (obtención del mapa de un genoma) que constituye
la base de la biología molecular e ingeniería genética.

Dentro de la genómica se puede distinguir dos áreas consecutivas que, aunque no lo

parecen guardan una relación estrecha entre sí. Estas áreas son la genómica estructural y
la genómica funcional; la primera se encarga del estudio de técnicas y estrategias
necesarias para obtener tanto mapas físicos del genoma a distintos niveles de resolución;
como la secuencia completa de ADN genómico. En este trabajo se detallará
exclusivamente a mapas de restricción que se encuentra clasificados dentro de los mapas
físicos con alta resolución.

Si embargo la construcción del mapa o cartografía de un genoma tanto de ser humado

como de cualquier otro organismo se elabora en varias etapas consecutivas, en niveles
crecientes de resolución que son complementarios entre sí: cartografía genética,
cartografía física (mapeo por endonucleasas de restricción) y secuenciación, además del
desarrollo de técnicas informáticas para recoger, almacenar, distribuir y analizar el
enorme contenido de datos que se obtienen en los anteriores procesos.
MARCO TEÓRICO:
2.1 ¿Que es un mapa de restricción?

Un mapa de restricción representa una secuencia lineal de los sitios en los que diferentes
enzimas de restricción poseen dianas (sitios de corte o palíndromos) en una molécula de
ADN particular. Es un patrón generado mediante electroforesis que se produce después
de cortar con una enzima de restricción.

Dicho de otro modo, un mapa de restricción es la recopilación del número, del orden y de
la distancia que se mide en pares de bases entre los sitios de corte de endonucleasas de
restricción en un segmento clonado de ADN ya sea circular o lineal.

2.2 Características de los mapas de restricción:

A) Los mapas de restricción son mapas físicos:

Un mapa físico es la representación real de los genes en un cromosoma, la misma; donde

la distancia de del orden de los genes se da en Kb o Mb a diferencias que los mapas
genéticos o de ligamiento que miden la distancia de los genes en centrimorgans (cM) que
es la frecuencia de recombinación. Por este motivo es que a los mapas de restricción se
les clasifican dentro de los mapas físicos porque miden las distancias en pares de bases
de ADN ya que determinan posiciones relativas de los sitios de corte reconocidos por
endonucleasas específicas. Donde cada una de las endonucleasas de restricción formará
fragmentos de un ADN clonado, de los cuales se medirá su tamaño por medio de
electroforesis, se realizará un análisis de los fragmentos y se ubicará los cortes
ocasionados por la digestión de las diferentes enzimas de digestión.
B) Los mapas de restricción se consideran mapas físicos de alta resolución:

Los mapas físicos se clasifican en niveles de resolución.

 Mapas físicos de baja resolución: tiene una precisión de varios millones de pares
de bases (Mb).
 Mapas físicos de alta resolución: con una precisión de por debajo de 105 pb hasta
unos pocos nucleótidos.
 Mapas físicos de máxima secuenciación: Se da la secuencia de nucleótido a
nucleótido (1pb).

Los mapas de restricción son considerados de alta resolución, porque la distancia en la

que se encuentran separados los sitios de restricción es de Kb, se debe tener en cuenta que
tipo de endonucleasa se está trabajando (cortadora infrecuente o cortadora frecuente).

2.3. Consideraciones a tener en cuenta en la construcción de un mapa de restricción:

A) Tamaño de los fragmentos de restricción:

Las moléculas de ADN que componen los genomas de los organismos vivos son
demasiado largas como para ser analizadas directamente. Sin embargo, pueden ser
cortadas en fragmentos relativamente pequeños de un modo reproducible. Con este
propósito en la actualidad se han aislado 400 endonucleasas de restricción diferentes,
provenientes de varias bacterias que las utilizan como mecanismo de defensa contra el
ADN extraño.

Las endonucleasas reconocen secuencias específicas de 4-8 (generalmente 6) nucleótidos,

estas secuencias son los sitios diana o de restricción en los que se produce el corte del
ADN.

Si los sitios de restricción fueran distribuidos al azar en la longitud de una molécula de

ADN, una enzima que reconocería una secuencia de 4 nucleótidos, cortaría 1/256
nucleótidos, mientras que una enzima que reconocería 6 nucleótidos cortaría en promedio
1/4096 nucleótidos. Por ejemplo, la digestión de por EcoRI (secuencia de reconocimiento
de 6 nucleótidos) de una molécula de bacteriano de 4 millones de pares de bases producirá
aproximadamente 103 fragmentos diferentes, mientras que la digestión total de un ADN
de un mamífero va a producir alrededor de 106 fragmentos diferentes.

Es por esto que la frecuencia de aparición de un sitio depende de su secuencia de

nucleótidos; es por esta característica que las enzimas de restricción se clasifican como
cortadoras infrecuentes (raros) y cortadoras frecuentes.

Generalmente para cartografiar por restricción de un genoma grande se utilizan primero

enzimas cortadoras infrecuentes; que reconocen secuencias específicas de 8 nucleótidos;
para general segmentos grandes de ADN

Estas posiciones obtienen al ser una digestión de un segmento de ADN con una
endonucleasa especifica; formando segmentos de los cuales se medirá su tamaño por
medio de electroforesis; luego este mismo segmento de ADN clonado se somete a una
digestión con otra enzima diferente; en la cual se formarán otros segmentos; en un tercer
paso se someterá el mismo fragmento