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SERIE AUTODIDÁCTICA DE MEDICIÓN DE LA

CALIDAD DEL AGUA, SEGUNDA PARTE.


ANÁLISIS DE TOXICIDAD
EN EL AGUA

Autora: Yolanda Pica Granados.


Revisora IMTA: Alicia Lerdo de Tejada Brito
Revisores CNA: Irma Laura Medina Salazar
Luis Miguel Rivera Chávez
Editor: César G. Calderón Mólgora
Presentación: Silvia Mendoza Vergara

SUBDIRECCIÓN GENERAL DE ADMINISTRACIÓN DEL AGUA (CNA)


COORDINACIÓN DE TRATAMIENTO Y CALIDAD DEL AGUA (IMTA)

SIGUIENTE
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¿Para quién?

Esta publicación tiene por objeto proporcionar a los


especialistas técnicos que constituyen las brigadas de
muestreo, inspección y verificación de descargas, la
información básica sobre el uso de pruebas toxicidad para el
control de agentes tóxicos en efluentes líquidos.

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¿Para qué?

A través de este manual el usuario será orientado en los


aspectos técnicos y científicos vinculados al desarrollo de
pruebas de toxicidad e iniciado en el conocimiento de los
métodos disponibles adoptados por la normatividad nacional, y
sus formas de aplicación. También será introducido en las
formas de manejo de la información que surge del empleo de
las pruebas de toxicidad, en las estrategias de seguimiento
para la inspección de calidad de resultados y criterios de
clasificación y elementos interpretativos.

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CONTENIDO
1 Importancia del control de los agentes tóxicos

2 Tentativas de control de agentes tóxicos


3 Pruebas de toxicidad
3.1 Efecto Agudo
3.2 Efecto crónico
4 Métodos

5 Colecta de Muestras

6 Resultados

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La contaminación ambiental por agentes
químicos ha adquirido proporciones muy
relevantes en los últimos 50 años.

Se estima que más de nueve millones de


sustancias son liberadas al ambiente en forma
cotidiana; por diversas rutas, las sustancias se
incorporan a los ecosistemas acuáticos.

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La presencia de contaminantes es siempre un

riesgo potencial para la salud de los seres vivos.

Dicho riesgo se evalúa a través de la probabilidad

de daños que pueda causar en el ambiente.

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Un ambiente seguro es aquel en el que la
presencia de un agente químico en una
concentración determinada representa un nivel
de riesgo aceptable.

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Ejemplo
(símil con un medicamento)

Las medicinas son consideradas seguras si al

administrar las dosis necesarias para controlar una

enfermedad, los efectos colaterales son aceptables.

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Para evaluar el riesgo que una sustancia
contaminante impone al medio ambiente, no
basta con conocer su concentración, sino que se
debe considerar los efectos que la sustancia es
capaz de producir. La estimación de dichos
efectos es la evaluación de su toxicidad.

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Toxicidad

Propiedad inherente a un agente químico de producir

efectos adversos en los organismos expuestos, por

lo que el empleo de organismos y la medición de los

efectos producidos en ellos (respuesta biológica) es

la única forma de evaluarla.

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Respuesta biológica
No sólo es el resultado de la concentración de una
sustancia específica en la muestra, también involucra
los siguientes factores:

• Interacción de un contaminante con otras


sustancias presentes.
• La acción de procesos físicos, químicos y
biológicos que persisten en el ambiente.
• La disponibilidad del contaminante, que a su vez
depende de muchas otras variables.

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El término toxicidad se utiliza con frecuencia para
definir a la evaluación o determinación analítica de
contaminantes tóxicos, como es el caso de las pruebas
CRETIB (Corrosivo, Reactivo, Explosivo, Tóxico,
Inflamable, Biológico infeccioso). Sin embargo, estas
pruebas no evalúan los efectos de las sustancias sobre
los organismo. Por ello la analogía es inapropiada.

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2. Tentativas de control de agentes
tóxicos

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Las pruebas de toxicidad son la única herramienta
analítica que permite evidenciar los efectos y
complementar la información que surge de los
procedimientos químicos
tradicionalmente
utilizados para el control
de la calidad y de la
contaminación del agua.

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La reglamentación en materia de control de la
calidad del agua en México se encuentra en uso
desde la década de 1970 y está basada en la
evaluación y control de sustancias químicas
específicas.

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En algunos países industrializados, se ha
promovido el uso pruebas de toxicidad como
herramientas de utilidad (complementarias a las
determinaciones analíticas) para el control de la
calidad del agua.
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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
El uso de estas
herramientas biológicas
contribuye a lograr un mejor
entendimiento del riesgo en
que se encuentra un cuerpo
receptor al verse sometido a
numerosas descargas
puntuales.

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A través de la evaluación de los efectos producidos
por cada descarga y de los efectos generados por la
mezcla de todas las descargas en el cuerpo receptor,
puede estimarse si la adición de las distintas
descargas se traduce en efectos:

a) Antagónicos.

b) Aditivos.

c) Sinérgicos.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Efecto antagónico

Cuando una composición actúa sobre la otra


reduciendo la incidencia de efectos o
potencial tóxico de una mezcla.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
A B

Efecto antagónico. A + B = 0

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Efecto aditivo

Cuando las cargas contaminantes se suman y en


consecuencia los efectos también.

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A B

Efecto aditivo. A + B = 1 + 1 = 2
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Efecto sinérgico

Cuando los componentes reaccionan entre si


incrementando su potencial tóxico y promoviendo en
las mezclas efectos muy superiores.

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A B

Efecto sinérgico. A + B = a
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Tanto el control mediante análisis químicos de

sustancias específicas, como el control a

través de pruebas de toxicidad presentan

limitaciones.

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Limitaciones del control por análisis
químicos

• Se tendrían que evaluar la totalidad de sustancias


químicas que constituyen las descargas:
– No es factible técnica ni económicamente.
– No es posible determinar la biodisponibilidad de
los agentes tóxicos.
– No es posible determinar la interacción entre los
diversos contaminantes.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Limitaciones del control por
pruebas de toxicidad
• La toxicidad de una muestra es evaluada en su
conjunto.

• No es posible identificar los compuestos


específicos que causan los efectos deletéreos.

• No es posible determinar las propiedades


específicas de los agentes químicos.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ventajas del control por pruebas de
toxicidad

• Permite evaluar la biodisponibilidad de los agentes

tóxicos.

• Permiten evidenciar los fenómenos de aditividad,

antagonismo o sinergia entre los agentes tóxicos.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
La riqueza de conjuntar las herramientas
químicas y biológicas:
• Se logra una identificación plena de la toxicidad

(aguda o crónica) de los efluentes y del cuerpo

receptor y de los agentes causales.

• Permite plantear estrategias integrales de control de

la calidad del agua en cada cuerpo receptor.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
3. Pruebas de toxicidad

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Pruebas de toxicidad
o
Ensayos biológicos

Son empleados para evaluar efectos que un


contaminante o mezcla de ellos es capaz de causar
en organismos de prueba expuestos a una serie de
diluciones de la muestra de prueba.

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Efectos normalmente utilizados

Son aquellos que inciden de manera relevante en el


desempeño de las comunidades acuáticas:

• La muerte.

• La reproducción.

• El crecimiento.

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Evaluación de la muestra

Se recomienda el uso de por lo menos tres


organismos de prueba diferentes y de distintos
niveles tróficos.
• Productores primarios
• Consumidores primarios
• Consumidores secundarios
• Detritivoros

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Productor primario
Ejemplo
Consumidor primario

Consumidor secundario

Selenastrum
capricornutum Daphnia magna
Descomponedor

Poecilia reticulata
Organismos
seleccionados

Vibrio fischeri
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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
La importancia del empleo de por lo menos tres

distintas especies de prueba para una misma

evaluación, radica en la diferencia de sensibilidad que

puede presentarse entre los distintos organismos.

Dependiendo de la composición química de un

efluente este puede ser no tóxico para alguna de las

especies, mientras que para las otras los efectos

pueden ser considerables.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Las algas, por ejemplo, son muy sensibles a una

amplia gama de tóxicos, sin embargo, son

resistentes al DDT.

Por ello es importante contar con más de un

organismo de prueba.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
De los resultados obtenidos debe elegirse el del

organismo que haya resultado más sensible, y

con esa información estimar, con mayor

certidumbre, el efecto deletéreo o el impacto de

un efluente en el cuerpo receptor.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
En México, los protocolos de prueba con Daphnia

magna y Vibrio fischeri han sido publicados por la

entonces SECOFI y forman parte de los métodos

normalizados para la evaluación de la toxicidad en el

agua.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Agudo

Efectos

Crónico

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Efecto agudo

Respuesta severa o rápida de organismos acuáticos a


un estímulo.

Periodo: generalmente es menor a las 96 h.

Manifestaciones del efecto: mortalidad, inmovilidad o


desintegración.

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Para evaluar el efecto agudo se utiliza el término .

Concentración Letal Media (CL50)

o Concentración Efectiva Media (CE50).

Indican la concentración de la muestra en que se


produce la mortandad del 50 % de la población de
organismos expuestos.

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Efecto crónico
Es la respuesta a un estímulo que persiste por

largo tiempo. Es observado a través de pruebas

cuya duración abarca el ciclo de vida de los

organismos de prueba.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Efecto crónico
Es el resultado de alteraciones subletales.

Se presenta cuando las concentraciones de un

agente tóxico o mezcla de estos permite la

supervivencia de organismos, pero afectan una o

varias de sus funciones biológicas.

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Efecto crónico
Algunas funciones biológicas en las que se
manifiesta:
• Reproducción.
• Desarrollo de huevos.
• Crecimiento.
• Maduración.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Evaluación del efecto crónico se hace a través de:

Pruebas de toxicidad crónica para determinar la CE50.

Otros parámetros

• Concentración del Efecto No Observado (CENO)

• Concentración de Efectos Mínimos Observables


(CEMO )

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Un efluente, con bajas concentraciones de tóxicos,

vertido en forma continua en un cuerpo receptor

expondrá en forma permanente a los organismos a

los tóxicos y puede provocar efectos crónicos.

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4. Métodos

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Los métodos empleados para evaluar la

toxicidad de efluentes se encuentran

estandarizados y bien establecidos

metodológicamente. Tales como los

protocolos aprobados por la entonces

SECOFI.
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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
4.1 Principios básicos

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Componentes de una prueba de toxicidad típica

Serie de
diluciones y
Agente tóxico Periodo de
organismos de
exposición
prueba

Efectos
Obtención de la Tabular y graficar
medidos y/o
ecuación
cuantificados

Calcular el valor de la dosis que promoverá la mortalidad o expresión del


efecto esperado

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
La respuesta de los organismos, se evalúa mediante

la cuantificación de determinado efecto (muerte,

inhibición en el crecimiento, etcétera), la magnitud

depende de la dosis aplicada del tóxico.

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Controles

Normalmente, el diseño de las pruebas de toxicidad


involucra el análisis de una solución estándar
conocida como:
• Control positivo o tóxico de referencia
y un
• Control negativo

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Control positivo o tóxico de referencia

Permite el control de la sensibilidad de la especie

debido a que la respuesta del organismo se

encuentra previamente establecida.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Control negativo

Medio líquido óptimo para el desarrollo de las

especies de prueba.

Permite mostrar que los organismos con los

que se desarrolla la determinación son sanos y

metabólicamente estables.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Para cada grupo taxonómico probado, se ha
determinado el tiempo mínimo de exposición
necesario para generar una respuesta biológica:
• 96 horas de exposición en peces, y 72 horas
para algas, son suficientes para que el efecto
agudo se manifieste.
• Para las Daphnias, el tiempo de exposición
normalizado es de 48 h.
• Para las pruebas con bacterias el tiempo es de
5 a 15 minutos.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
5. Colecta de muestras

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La toma de muestras instantáneas se sugieren
para el análisis de:

 Descarga con régimen de intermitencia.


 Descargas provenientes de tratamiento con
periodos de residencia superiores a catorce
días.
 Descargas cuya variación de toxicidad es
conocida.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
La toma de muestras compuestas se sugiere
cuando se tienen limitaciones de tipo económico o
de disponibilidad de tiempo.
Si se utilizan muestras compuestas hay que tener
en cuenta que:

 Se trata de un valor medio.


 Subestima la toxicidad del efluente en los
picos máximos y mínimos.

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5.1 Preservación de muestras

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Las muestras deben ser colectadas en frascos
nuevos de vidrio ámbar, polipropileno o polietileno,
de boca angosta y tapa de rosca de baquelita y
contratapa de teflón. En caso de no contar con estas
tapas puede usarse papel aluminio.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
El material tendrá que ser preparado con enjuagues
previos:

• Ácido nítrico 1N

• Agua destilada o desionizada.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
La muestra debe llenar en su totalidad el recipiente.
Debe evitarse la formación de burbujas en el interior
de los frascos, y el burbujero durante la toma de
muestra.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
El análisis debe ser efectuado, preferentemente, de
inmediato después de la colecta. De no ser posible,
el inicio de la prueba tiene que ser antes de las 48
horas posteriores al muestreo. La muestra debe
mantenerse en refrigeración (4 ± 2ºC) a partir de la
colecta y no se le añaden preservadores.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
6. Resultados

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Los valores numéricos de la toxicidad
aguda o crónica (CE50, CL50, CEMO y
CENO) expresan una relación inversa,
es decir, cuanto más pequeño es el
valor, mayor es la toxicidad del
efluente o de la sustancia.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Para el manejo de la información como
puede ser la determinación de la carga
tóxica, es conveniente transformar los
valores obtenidos en Unidades de
Toxicidad, ya sea aguda o crónica.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Transformación en unidades de toxicidad aguda

UTa=100/ CE50 o CL50

Transformación en unidades de toxicidad crónica

UTc=100/CENO

Estas expresiones son directas, es decir, cuanto


mayor sea el valor numérico, mayor es la toxicidad.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
6.1. Estimación del potencial de
impacto ambiental

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Las pruebas de toxicidad pueden ser empleadas para

la evaluación del impacto de una sustancia o efluente

en un cuerpo receptor. Se compara la concentración

de efecto tóxico (CE50 o CL50), obtenido a partir de las

pruebas de toxicidad, con la concentración del

efluente una vez que se ha diluido en el cuerpo

receptor.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Criterio de
Toxicidad
Concentración
aguda.
Máxima (CCM).

Protección
del ambiente
acuático
Criterio de
Toxicidad
Concentración
crónica.
Continua (CCC).

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
CCM
• CCM = 0.3 UTa.
• El factor 0.3 se usa para ajustar el valor
típico de CE50 o CL50 a CL1.
• CL1 (Concentración que provoca la
mortandad de sólo el 1% de la población
expuesta).
• El factor se determinó a partir del análisis
de cerca de 500 efluentes (EPA).
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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
CCC
• CCC UTc.
Esto aplica cuando las pruebas de toxicidad
se llevaron a cabo con tres organismos de
prueba (tanto para CCC como para CCM).

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ajuste por incertidumbre

Cuando la toxicidad se evalúa en menos


de tres especies, el resultado obtenido con
la especie más sensible tendrá que ser
dividido entre 10. En este caso:
CCM = 0.03 UTa
CCC  0.1 UTc

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Relación Aguda Crónica (RAC)
• Se utiliza para extrapolar la concentración de
toxicidad crónica a partir de datos de
toxicidad aguda.
• Expresa la relación entre la concentración de
un efluente o sustancia que causa toxicidad
aguda en una especie y la concentración que
provoca toxicidad crónica en la misma
especie.
RAC = CL50/CENO

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Relación Aguda Crónica (RAC)
• Cuando no se cuenta con mediciones de
toxicidad crónica (no se mide CENO), el
resultado de toxicidad aguda de la especie
más sensible se divide entre un factor de 10
RAC = CE50/10 o CL50/10.
• El uso de este factor permite llevar a cabo el
monitoreo de forma económica, pero debe
ser validado.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo 1. Para efluentes en operación.

Una descarga es la única fuente de contaminación


en un cuerpo receptor. Se ha evaluado la toxicidad
con tres especies de prueba distintas, una de ellas
presentó mayor sensibilidad. La carga tóxica del
efluente, una vez vaciada y mezclada en el cuerpo
receptor ¿representa un riesgo para el cuerpo
receptor?

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo 1. Para efluentes en operación.

Gasto medio del efluente (Qe) = 2 L/s.


Gasto crítico del cuerpo receptor (7,Q10) = 30 L/s.
Toxicidad aguda en el efluente CE50 = 3.6 %.

Determinamos la concentración del efluente en el


cuerpo receptor (CER).
CER = Qe /(Qe + 7,Q10).
CER = 2/(2 + 30) X 100 = 6.25 %.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo 1. Para efluentes en operación.
En este caso la concentración del efluente, una vez
mezclado, en el cuerpo receptor es de 6.25% y es
mayor que la CL50 (3.6%), por lo tanto se espera
toxicidad aguda en el cuerpo receptor.

Se determina el valor de la CE50 que el efluente


deberá alcanzar para evitar riesgos de toxicidad
crónica al sistema.
Se estima el valor de CER a partir de los valores de
toxicidad:

CER  CE50/10, o CER  CENO.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo aplicable para efluentes en
operación.
Como no se determinó CENO, entonces
CER  CE50/10
6.25  CE50/10
CE50  6.25X10
CE50  62.5 %

El resultado indica que un valor de toxicidad aguda


en el efluente de 62.5 % de CE50 o su equivalente
UTa= 1.6 garantiza la ausencia de efectos tóxicos
crónicos en el cuerpo receptor.
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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo 2. Aplicable para industrias
aun no instaladas en el cuerpo receptor .
¿Cuál es la carga tóxica máxima (CL50 o CE50) del
efluente que puede permitirse sin que se llegue a
exceder los valores de CCM y CCC?

Gasto medio del efluente (Qe) = 2 L/s.


Gasto crítico del cuerpo receptor (7,Q10) = 30 L/s.
CCM = 0.3 UTa.
CCC = 0.1 UTc.

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Ejemplo… (toxicidad aguda).

Concentración permisible en el efluente (CPE)


CPEaguda = Criterio de concentración seleccionado X Fd.
Fd = Factor de dilución (7,Q10 + Qe)/Qe.

Criterio de concentración seleccionado: CCM (0.3 UTa)

Sustituyendo

Fd = (30 + 2)/2 = 16
CPEa = 0.3 UTa X 16 = 4.8 UTa.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Ejemplo… (toxicidad aguda) .

La toxicidad aguda permisible deberá ser menor que


4.8 UTa (UTa = 100/CE50)

Despejando

CE50  20.83 %

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Ejemplo… (toxicidad crónica).
Concentración permisible en el efluente (CPE)
CPEcrónica = Criterio de concentración seleccionado X Fd.
Fd = Factor de dilución (7,Q10 + Qe)/Qe.
Criterio de concentración seleccionado: CCC (1 UTc)

Sustituyendo
CPEc = 1 UTc X 16 = 16 UTc.

La toxicidad crónica permisible deberá ser menor que


16 UTc (UTc = 100/CENO)

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Ejemplo… (toxicidad crónica).

Despejando

CENO  6.25 %

La toxicidad crónica no deberá exceder de 16 UTc, o


de su equivalente de 6.25 % de CENO.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Protocolos de prueba

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Daphnia magna

La exposición de neonatos de 24h de


edad de Daphnia magna a soluciones
con materiales tóxicos puede llevar a
la muerte de los mismos. Esta prueba
se usa para evaluar toxicidad de
sustancias químicas puras, aguas
residuales domésticas e industriales,
muestras de aguas tratadas o no
tratadas, aguas superficiales,
subterráneas y lixiviados.

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Protocolo de prueba con Daphnia magna

CULTIVO

PREPARACIÓN
DE LA PRUEBA

LECTURA DE RESULTADOS

Neonatos <24 h

50 mL

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1. PREPARACION DE DILUCIONES

Aforar a
100mL
AGUA DURA
MUESTRA
Concentración
100%

6,25 mL 12,5 mL 25 mL 50 mL 100 mL


100 mL

100 mL A
100 mL A 100 mL A 100 mL A 100 mL A 100 mL A

Vaciar 30 mL en cada vaso

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2. PREPARACIÓN DE PRUEBA

22 ± 2 °C, e iluminación
800 lux ± 10% por 48 h Daphnias de <24 h de
nacidos

Agregar 10 organismos
a cada vaso

8h / 16 h

50 mL 50 mL
50 mL 50 mL 50 mL 50 mL 50 mL

50 mL 50 mL
50 mL 50 mL 50 mL 50 mL 50 mL

RÉPLICAS

50 mL 50 mL
50 mL 50 mL 50 mL 50 mL 50 mL

6.25% 12.5% 25% 50 % 100%


CONTROL CONTROL
POSITIVO (Cr +6) NEGATIVO CONCENTRACIONES

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Selenastrum capricornutum
(Rapidocelis subcapitata)

Es un alga verde unicelular, usada


extensamente para trabajo de
bioensayos, es apropiada como
alimento para invertebrados tales
como Daphnia por lo que puede
tener un doble propósito en el
laboratorio.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Protocolo de prueba
Selenastrum capricornutum (Rapidocelis subcapitata)

PREPARACIÓN
CULTIVO
DE LA PRUEBA

LECTURA DE RESULTADOS

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Protocolo de prueba
Selenastrum capricornutum (Rapidocelis subcapitata)
1. PREPARACION DE INOCULO ALGAL

Conteo del número de células por


microscopía óptica con cámara Neubauerl

Adición de 18ml de medio nutritivo Dilución del cultivo para obtener 2mL
enriquecido (18x) con 2.6 x 10 6 células
Cultivo de R. subcapitata (S. capricornutum)
de 4 a 7 días en desarrollo de fase exponencial

C1 C2 C3 C4 C5
2. MÉTODO DE DILUCION DE MUESTRAS CONTROL 2.5mL solución amortiguadora para pruebas (0,15 mg
NaHCO3/L) Inóculo con
5mL Muestra 2.5 mL 2.6 x 10 5 células
solución. amortiguadora
Transferencia secuencial de 2.5mL

Mezclar Mezclar Mezclar Mezclar


Eliminar 2.5 mL

P1 Q1 R1 S1 T1
SERIE 1

P2 Q2 R2 S2 T2
RÉPLICAS SERIE 2

P3 Q3 R3 S3 T3 Agregar 100µL a cada celdilla


SERIE 3
100% 50 % 25% 12.5% 6.25%
3. PREPARACIÓN DE PRUEBA

((( ))) Agitación tres veces por día


o en continuo.
100% 50 % 25% 12.5% 6.25%
Iluminación
4000lux ± 10% por 72h

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Vibrio fischeri

Bacteria luminiscente. Los


compuestos tóxicos ejercen su
efecto sobre las estructuras
celulares y sus funciones
biológicas, básicas para cualquier
organismo vivo, incluidas las
bacterias. En el caso de la bacteria
Vibrio fischeri, su luminiscencia se
inhibe de forma directamente
proporcional a la presencia de
contaminantes tóxicos.

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Protocolo de prueba con Vibrio fischeri

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Agente tóxico

•Un pesticida

•Una vitamina

•Un metal pesado

•Una muestra de un efluente


con contaminantes químicos

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Diluciones

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Periodo de exposición

Es el lapso en el que los organismos de prueba se exponen al


tóxico; depende de la especie utilizada (especificado en el
protocolo de prueba) y del tipo de efecto evaluado (agudo o
crónico).

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Efectos medidos

• Muerte.

• Disminución en la
luminiscencia (Vibrio
fischeri).

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Efectos tabulados

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Efectos graficados
% EFECTO
y
100

80

60
Gráfico de la relación efecto

40

20
x
0
0 20 40 60 80 100

DOSIS%

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Efectos graficados

% EFECTO
y 100

80
Linealización con uso de escala
60 logarítmica para la dosis y
CE50 obtención del la pendiente y
40 ordenada al origen.

20

0 x
0 1 2
Log DOSIS%

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Obtención de la ecuación % EFECTO
y 100

80

60
CE50
40

20

y = a + bx 0 x
0 1 2
a = intersecto u ordenada al origen. Log DOSIS%

b = pendiente.

Sustituyendo:

y= - 42.8771 + 66.4385 (X)


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Obtención de la CE50
y= - 42.8771 + 66.4385 (X)

Si deseamos saber el valor de X cuando y = 50 (CE50%)


Entonces:
X= 50- (- 42.8771) = 1.3979409
66.4385

X= anti log 1.3979409


X= 25

Por lo tanto la CE 50 = 25%

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Tentáculos con bulbos (B) Tentáculos acortados (C) Estado de tulipán (T) Desintegración (D)

Hydra attenuata normal (N) (B-C) = Expresiones de subletalidad (T-D) = Expresiones de letalidad

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¿Dolor de cabeza? ¿Fiebre? ¿Dolor
inflamatorio? ¿Dolores musculares? Todos
estos síntomas pueden tratarse con ácido
acetíl salisílico.

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La falta de control en la ingesta de ácido acetil
salisílico puede llevar a efectos adversos como
son la agresión de la mucosa gástrica, y las
hemorragias, especialmente la hemorragia
digestiva alta, y en menor medida el accidente
cerebro vascular hemorrágico.

Otro efecto indeseable se relaciona con la


sensibilidad de un individuo al medicamento.
Por ejemplo una reacción alérgica frente a una
dosis considerada segura.
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Efecto del glifosato aplicado en diferentes dosis
a semillas de lechuga.

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MOSTRADA PRINCIPAL ANTERIOR SIGUIENTE
Efecto de diferentes sustancias sobre las
semillas de lechuga.

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Efecto del glifosato aplicado en diferentes dosis
a semillas de lechuga.

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Efecto de diferentes sustancias sobre las
semillas de lechuga.

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