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Extraccion de Antocianinas
Extraccion de Antocianinas
INTRODUCCIÓN
Esta especie pertenece al grupo de las plantas alimenticias que no han sido
estudiadas en forma sistemática ni detallada, a pesar de su importancia, ya que no
sólo es un alimento diario en la dieta de los habitantes de los andes, sino que
puede ser una alternativa de importancia industrial su estudio en lo referente a la
extracción de colorantes.
Clase : Dicotiledónea
Orden : Geraniales
Sub-orden : Geraniaea
Familia : Oxalidácea
Genero : Oxalis
Especie : Oxalis tuberosa molina
Variedad 2.- Conocida como “Blanca larga” por el color y tamaño de sus
rizomas, tienen una longitud de 12 a 14 cm y 2 cm de diámetro; su forma
es cilíndrica. La pulpa es más harinosa y algo más dulce que la variedad 1.
Fuente: Collazos(1996)
13
14
2.4.1.3 Temperatura
Así como la mayoría de reacciones químicas, la estabilidad de las
antocianinas y la velocidad de su degradación, en sistemas modelos y
naturales, esta marcadamente influenciada por la temperatura. La
estabilidad térmica de las antocianinas varía con su conformación
estructural, pH, la presencia o ausencia de oxígeno y su interacción con
otros componentes del sistema. En general, las características estructurales
que llevan al incremento de la estabilidad del pH también llevan a la
estabilidad térmica, por ejemplo la hidroxilación de la aglicona disminuye la
estabilidad, mientras que la metoxilación, glicosilación y acilación tienen
un efecto opuesto. En presencia de oxigeno, la máxima estabilidad térmica
de la antocianidina 3,5-glucósido ha sido observada en un pH que va de 1.8
a 2.0, mientras que la antocianidina 3,5-diglucósido ha sido observada en un
pH de 4.0 a 5.0. La degradación de la antocianina es virtualmente pH-
independiente a pH 2.0 a 4.5 en ausencia de oxigeno. (Hendry, 1992)
2.4.1.4 Oxigeno
La naturaleza insaturada de las estructuras de las antocianidinas las
convierte en susceptibles al oxigeno molecular. El oxigeno y la temperatura
han sido referidos como los agentes que aceleran la destrucción de las
antocianinas. El oxigeno puede causar la degradación por mecanismos
directos de oxidación y/o indirectos con lo cual oxida los constituyentes del
medio reaccionando con las antocianinas para producir productos incoloros
y pardos, como resultado de la oxidación directa de la base carbinol.
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2.4.1.5 Luz
Las antocianinas son generalmente inestables cuando se les expone a la
luz UV y a la luz visible así como a otras formas de energía radiante, como
la radiación ionizante. La copigmentacion (la condensación de antocianinas
consigo mismas u otros compuestos orgánicos) puede acelerar o retardar la
degradación, dependiendo de la circunstancias. Los sulfonatos de las
flavonas polihidroxiladas, las isoflavonas y las auronas ejercen un efecto
protector contra la fotodegradación. El efecto protector es atribuible a la
formación de interacciones de los anillos intermoleculares entre el sulfonato
cargado negativamente y el ion flavilio cargado positivamente.
Método Clásico
Este método, perfeccionado por Robinson et al. (1931, 1932) citado
por Fuleki (1978), consiste en una serie de pruebas de color y distribución
en el extracto del pigmento parcialmente purificado. Debido a que las
antocianinas individuales no están separadas, sólo se pueden identificar las
más abundantes. La precisión de este método es algo limitada.
Método Cromatográfico Simple
El avance de las técnicas cromatográficas permitió la preparación
de antocianinas individuales puras y la molesta prueba de distribución se
reemplazo por determinaciones del valor Rf. La identificación se basa en los
valores Rf, absorción máxima y reacciones de color obtenidas con la
antocianina y/o antocianidina. En este grupo se incluyen métodos con
variados grados de precisión todos ellos caracterizados por el hecho de que
las técnicas cromatográficas son usadas pero la evidencia que proveen es
insuficiente para una completa identificación. El método sólo es confiable
para la identificación de la clase a la cual pertenece el particular pigmento de
antocianina.
Método cromatográfico y Espectrofotométrico
Este método se basa principalmente en el trabajo original de Bate-
Smith y Harborne, descrito en el libro de Harborne (1976b) citado por
Francis (1978). La identificación se basa en el Rf y en los valores
espectrales obtenidos con las antocianinas individuales altamente purificadas
y sus productos de la degradación producidos por hidrólisis ácida o
enzimática. El método incluye una prueba de saponificación y la
identificación del componente ácido cuando se sospecha una acilación. Este
método es satisfactorio para la identificación confiable de la antocianina
Cromatografía Líquida de Alta Performance (HPLC)
Los pigmentos semipurificados son aislados usando un equipo de
HPLC, que posee una columna C18 (Octadecyl-siloxane) que es un
material hidrofóbico inerte usado para la cromatografía analítica. Es un
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Máximo Espectro
λmax.(mμ)
Pigmento Metanol-HCl Etanol- HCl ∆λ.(mμ)AlCl3
3'
2' 4'
8
+ 1'
B
7
9 O 2 5'
A C 6'
6 10 3
5 4
Fuente:
Remesy et al. (1996).
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Sustitución
Antocianidina 3 5 7 3’ 5’
Pelargonidina OH OH OH H H
Cianidina OH OH OH OH H
Peonidina OH OH OH OMe H
Delfinidina OH OH OH OH OH
Petunidina OH OH OH OMe OH
2.7.1 Extracción
La extracción es usualmente realizada por maceración de unos
cuantos gramos de muestra vegetal en metanol o etanol conteniendo 1% de
HCl. El metanol tiene una ventaja con respecto al etanol, se refiere a que el
metanol no forma mezclas azeotrópicas con agua y tiene bajo punto de
ebullición. De este modo, los compuestos son fácilmente concentrados. El
ácido clorhídrico mantiene pH bajos y forma sales con las antocianinas. La
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2.7.2 Purificación
Un paso importante en la examinación detallada de las
antocianinas es el aislamiento en su forma pura. Esto es necesario para
separarlas de otros compuestos los cuales son extraídos de la planta al
mismo tiempo por ejemplo otras antocianinas, flavonoides y sustancias
solubles en agua como los azucares, ácidos y otros minerales. La
separación de antocianinas pueden ser realizadas con solventes
convencionales – solventes de partición o cromatografía.
3. Lugar de Ejecución
La presente investigación se realizó en los laboratorios de Biotecnología de
la Facultad de Industrias Alimentarias de la Universidad Nacional Agraria.
3.2 Materiales
3.2.4 Reactivos
- Etanol 96% (Montana)
- Ácido clorhídrico 37% p.a. (J.T. Baker)
- Cloruro de Potasio (Merck)
40
-
Se grafica la absorbancia (eje Y) versus el tiempo (eje X) y se
calcula la pendiente de la parte lineal de la curva. Los resultados se
expresan en min-1
-
SELECCIÓN
Agua
LAVADO Y DESINFECTADO
Agua + impurezas
PELADO
Pulpa
Cáscara
CONGELADO
T = -18 °C 2
ALMACENAJE
T = -18°C 2
51
Tubérculo
Cantidad Cáscara Referencia*
entero
Agua 85.17 84.2 83.0
*
Almidón Azucares Reductores
Brito Muestra
% %
et al.
Cáscara 1.45 1.47
Col Morada
C 32 68.0
*BAW (n-butanol – ácido acético – agua).
Forestal (Ácido acético – HCl conc. – agua).
1,000
0,800 Cero Minutos
D.O. a 390 nm
0,600 1 minuto
0,400 2 minutos
0,200 3 minutos
0,000
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,5 2 2,5 3 3,5
Tiempo de actividad min.
F. totales F. totales
Vegetal (mg Ac. Clor. / Vegetal (mg Ac. Clor. /
100 g) 100 g)
Lechuga - hoja
Zanahoria 40.2 182.0
roja
AOA
Producto
(ug Equiv. Trolox / g bh)
Oca (completa) 2120.23
Oca (cascara) 3211.90
Blueberry 1784
Plum 3244
Camote morado 3167
Maíz morado 4770
Fuente: Elaboración Propia.
AOA
Producto
(ug Equiv. Trolox / g bh)
Blueberry 1784
Plum 3244
Camote morado 3167
Maíz morado 4770
Fuente: Cisneros (2001).
Wang et al. (1996), indican que 1 Lb. de fresas frescas (454g) tiene
una actividad ORAC (6973 umol de equivalente Trolox) alrededor de 1,7 g
de trolox, 3.0 g de -tocoferol (la actividad ORAC de 1 umol de vitamina
C = 0.52 umol de equivalente Trolox (Cao et al. , 1993 citado por Wang et
al., 1996))
82
% de Retensión a pH 2,5
120 40ºC
95.63
100 40 ºC (2h)
50ºC
80 50 ºC (2h)
% de retensión
60 51.39 60ºC
40 60 ºC (2h)
70ºC
20 80 ºC (2h)
0 80ºC
80 ºC (2h)
pH 2.5
88
% retensión a pH 3.0
40ºC
120 40 ºC (2h)
94.48 50ºC
100
% de retensión
50 ºC (2h)
80
55.45 60ºC
60 60 ºC (2h)
40 70ºC
20 70 ºC (2h)
0 80ºC
80 ºC (2h)
pH 3.0
ojooooooo
Para el caso de comparaciones de tratamientos habitualmente se emplea α =
0.05 (Gutiérrez y de la Vara, 2004).
91
V. CONCLUSIONES
- El tiempo óptimo de escaldado a 100 ºC necesario para inactivar más del 95%
de las enzimas degradativas de la cáscara de oca morada fue de 1 minuto. La
PPO y PRO son altamente sensibles al calor inactivándose totalmente al
primer minuto del tratamiento térmico.
VII. BIBLIOGRAFÍA
17. GUISTI, M., 2000. Assistant profesor. Department of nutrition and food
science, University of Maryland. Informacion personal.
25. KADER, F., IRMOULI, M., NICOLAS, J., and METCHE, M. 2002.
Involvement of blueberry peroxidase in the mechanisms of
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26. KILARA, A. 1982. Enzymes and their uses in the processed apple
industry. A review, process biochemistry. pp. 9-13
51. WANG, H., CAO, G., PRIOR, R. 1996. Total antioxidant capacity of
fruits. . J. Agric. Food Chem. Vol. 44 (3). pp 701-705.