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Modulo Proceso de Biorremediacion PDF
Modulo Proceso de Biorremediacion PDF
Autor:
Bio. PhD. RAL HERNANDO POSADA
BOGOT
2012
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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Procesos de Bioremediacin
NDICE DE CONTENIDO
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Procesos de Bioremediacin
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NDICE DE CUADROS
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NDICE DE FIGURAS
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Figura 26: Degradacin de Fenantreno y Pireno por Cyclothirium sp. (da Silva, Esposito,
Moody, Canhos, & Cerniglia, 2004) 85
Figura 27: Mecanismos de tolerancia al estrs pormetales pesados desarrollado por la
simbiosis MA. 86
Figura 28: Esquema de la fitoacumulacin (EPA, 2000). 103
Figura 29: Esquema del proceso de rhizofiltracin (EPA, 2000), 104
Figura 30: Esquema del proceso de fitoextraccin y fitoacumulacin (EPA, 2000). 104
Figura 31: Esquema del proceso de fitovolatilizacin (EPA, 2000). 105
Figura 32: Esquema del proceso de fitodegradacin (EPA, 2000). 106
Figura 33: Esquema del proceso de rhizodegradacin (EPA, 2000). 107
Figura 34: Diseo experimental en Carswell (Forth Texas), tomado de EPA (2000) 114
Figura 35: Procesos presentes en la atenuacin natural (Field, 2005) 123
Figura 36: Rutas comunes de biodegradacin (ITRCWG & RTDF, 1999). 126
Figura 37: Tcnica de Landfarming, modificado de (EPA, 1994a). 126
Figura 38: Diagrama de flujo para evaluar la implementacin de la atenuacin natural,
adaptado de ITRCWG & RTDF, (1999). 132
Figura 39. Proceso de bioremediacin in-situ de agua y suelo. 137
Figura 40. Localizacin geogrfica del vertimiento EXXON VALDEZ en Alaska y foto del
proceso de bioremediacin. 140
Figura 41: Representacin grfica de un sistema de biopilas alargadas (Velasco & Volke
Seplveda, 2003) 146
Figura 42: Unidades de tratamiento (Ercoli, 2008). 148
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Procesos de Bioremediacin
El contenido didctico del curso acadmico Procesos de Bioremediacin fue diseado por
Ral Hernando Posada A. quien es Bilogo, con un magister en microbiologa y doctorado
en Ecologa. Se ha desempeado como investigador y coordinador en la empresa pblica y
privada, tambin como docente universitario y consultor, al momento de la elaboracin
de este material, es docente de la Universidad Autnoma y la Corporacin Universitaria
Minuto de Dios. Para citar este material por favor hacerlo de la siguiente manera:
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Procesos de Bioremediacin
INTRODUCCIN GENERAL
El desarrollo humano en las ltimas dcadas ha estado muy relacionado con la extraccin
de los recursos naturales, en el proceso se han creado sustancias qumicas no existentes
y/o de difcil descomposicin. Entre estas sustancias se encuentran muchos productos
para la agricultura contra enfermedades y plagas, ampliamente utilizados por muchos
aos en grandes extensiones de terreno en pases desde tercermundistas hasta del primer
mundo, lamentablemente solo hasta hace pocos aos se ha encontrado sus efectos
perjudiciales contra los humanos y el ambiente; esto sumado a su acumulacin en suelo y
aguas ha llevado a grandes problemas ambientales. Tambin podemos citar al petrleo y
sus derivados, los cuales aunque han sido la principal fuente de energa en los ltimos
aos, tambin se encuentran entre los productos ms txicos y de los cuales es muy
frecuente escuchar derrames en ambientes naturales, con graves consecuencias
ambientales.
Bajo este panorama tan desolador hay alternativas de remediacin cultural y natural y es
precisamente de este segundo a que hace referencia el presente curso. Microorganismos
como bacterias, algas y hongos u organismos ms grandes como setas, helechos, plantas
acuticas y rboles, o sus enzimas (en caso de ser muy altas las concentraciones
contaminantes), nos ayudan a reducir o eliminar estos compuestos txicos y perjudiciales
para el ambiente y los humanos. Con su ayuda ha sido posible remediar los problemas de
contaminacin en el proceso denominado bioremediacin, sin embargo son muchos los
esfuerzos infructuosos producto de la inexperiencia o del desconocimiento de los
procesos. Los procesos de bioremediacin estn en auge y constituyen un excelente
negocio, sin embargo es necesario conocer los detalles de su funcionamiento para poder
determinar cul de todos es el ms adecuado dependiendo del problema especfico y las
condiciones ambientales.
En este documento se comenzar en la primera unidad con los conceptos bsicos del
ambiente, de los contaminantes, de bioremediacin. En la segunda unidad se vern en
detalle los organismos ms importantes involucrados en estos procesos, su metabolismo,
clases, procesos involucrados y sus aplicaciones. Finalmente en el tercer captulo se
retomarn las tcnicas ms importantes de bioremediacin existentes en la actualidad, el
proceso de seleccin del proceso ms adecuado, los parmetros a tomar en cuenta,
parmetros de diseo, funcionamiento y los posibles costos involucrados.
Existen abundante informacin en la web, sin embargo solo unas pocas pginas se pueden
consultar en forma acadmica, acerca de los procesos de bioremediacin en general o de
los procesos de contaminacin ambiental directamente relacionados, lamentablemente la
mayora se encuentran en ingls, entre ellas se encuentran:
La Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (EPA, por su sigla en ingls).
http://www.epa.gov/nscep/index.html
El grupo de discusin en bioremediacin.
http://www.bioremediationgroup.org/
Revista Internacional de contaminacin ambiental.
http://www.revistas.unam.mx/index.php/rica/index
Con este panorama de aplicacin y utilidad, dejamos las puertas abiertas al conocimiento
y la instruccin, con miras a la apropiacin del conocimiento y una correcta utilizacin
futura en Colombia o donde se requiera.
Bienvenidos!
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Procesos de Bioremediacin
UNIDAD 1
Nombre de la
CARACTERIZACIN DE CUERPOS Y CONTAMINANTES.
Unidad
CAPTULO 1 GENERALIDADES.
Leccin 1 Introduccin.
CAPTULO 2 CONTAMINANTES.
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos
Leccin 6
(alifticos, aromticos = BTEX, PAHs).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos
Leccin 7
clorados (PCBs, TCE, PCE, pesticidas, herbicidas).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Compuestos
Leccin 8
nitroaromticos (TNT y otros).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de metales
Leccin 9
pesados.
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de compuestos
Leccin 10
organofosforados, cianuros, fenoles.
CAPTULO 3 PROCESOS QUE INTERVIENEN EN LA BIOREMEDIACIN.
Leccin 14 Biodegradabilidad.
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CAPTULO 1. GENERALIDADES.
Leccin 1. Introduccin.
o para almacenar estos contaminantes en sus tejidos, retenerlos a nivel de suelo en forma
no perjudicial o volatilizarlos (fitoremediacin).
Gran parte de los elementos contaminantes son producidos de forma natural, pero
muchos de estos son de origen sinttico o artificial (hidrocarburos alifticos, aromticos,
como BTEX, PAHs; hidrocarburos clorados como PCBs, TCE, PCE, pesticidas y herbicidas;
compuestos nitroaromticos como TNT; metales pesados; compuestos organofosforados,
cianuros y fenoles), en cualquiera de los casos se convierten en contaminantes solo
cuando superan los lmites mximos permisibles, principalmente para la salud humana, de
acuerdo a la legislacin ambiental de cada pas, siendo diferente los niveles permisibles
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para un mismo contaminante en suelos y en aguas, as como entre diferentes pases, los
cuales se vern con cada contaminante en este mismo captulo.
Muchos materiales nunca lograran ser degradados, pero para aquellos que si, existen
diferentes mtodos para lograr este objetivo dependiendo de los contaminantes y las
herramientas disponibles. La bioremediacin ha venido ocupando un lugar cada vez ms
importante al respecto, debido principalmente a los costos implicados, la eficacia de los
procesos y los subproductos del tratamiento. No se pueden descartar las limitantes a los
procesos biolgicos y hace falta mucho conocimiento al respecto, pero es una alternativa
poco invasiva y ambientalmente amigable con el entorno.
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Sin embargo aunque no es tema de la bioremediacin, se hace necesario aclarar que son
los tratamientos primarios y secundarios, los cuales suelen citarse frecuentemente en los
tratamientos de residuos; y es que cuando se habla de tratamiento de residuos
generalmente se habla de tratamientos de primario a terciario, en donde el tratamiento
primario corresponde a procedimientos mecnicos de separacin de los desechos y el
secundario corresponde generalmente a la remocin de materia orgnica por procesos
qumicos y/o biolgicos. El objetivo principal de los tratamientos primarios es remover
aquellos contaminantes que se pueden sedimentar, como slidos, arenas, arcillas o
aquellos que pueden flotar como las grasas, mientras el objetivo principal de los
tratamientos secundarios es la reduccin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO).
La demanda bioqumica de oxgeno o DBO es un trmino que sirve para explicar cuanto
material es susceptible de ser consumido o destruido por microorganismos, debido a que
son estos los que consumen bioqumicamente los residuos; generalmente es evala en un
periodo de 5 das, por eso la convencin ms frecuentemente encontrada es DBO5. Existe
un trmino muy asociado, la Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), la cual es diferente al
DBO y corresponde a la cantidad de materia que es posible ser consumida por mtodos
qumicos, es decir que incluye a la DBO y por lo tanto es ms alta que sta; incluyendo lo
que pueden degradar los organismos vivos y algn otro material degradable por procesos
no biolgicos.
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Biosparging: es definida por Wilson (1999) como un mtodo in-situ que combina el efecto
de la ventilacin y la adicin de nutrientes con la utilizacin de microorganismos
autctonos para degradar compuestos orgnicos absorbidos por el suelo en la zona
saturada (Torres Rodrguez, 2003).
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El suelo es algo ms que la superficie donde sembramos las plantas y donde se construyen
los edificios, el suelo es un sistema dinmico, un sistema vivo con muchos componentes
de tipo fsico, qumico y biolgico, en cuyo interior todos los detalles de su composicin
afectan y son afectados por el entorno y en el cual todos los componentes interactan
para mantener un equilibrio dinmico. A continuacin se nombraran secuencialmente y
en negrilla las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas ms importantes.
La porosidad corresponde a los espacios del suelo llenos de aire y/o agua. Los macroporos
no retienen el agua contra la fuerza de la gravedad, y por lo tanto son los responsables del
drenaje y la aereacin del suelo; los microporos son los que retienen agua, parte de la cual
es disponible para las plantas. La porosidad total o espacio poroso del suelo, es la suma de
macroporos y microporos. Las caractersticas del espacio poroso, dependen de la textura y
la estructura del suelo (Rucks, Garca, Kapln, Ponce De Len, & Hill, 2004).
La textura es la proporcin de arena, limo y arcilla. Se dice que un suelo tiene una buena
textura cuando la proporcin de los elementos que lo constituyen le dan la posibilidad de
ser un soporte capaz de favorecer la fijacin del sistema radicular de las plantas y su
nutricin. Cuando en la textura domina la fraccin arcilla, en la porosidad total del suelo
hay muchos ms micro-poros que cuando domina la fraccin arena. Lo anterior se
comprende claramente, si se piensa que entre las microscpicas partculas de arcilla los
espacios son pequeos; en cambio entre las partculas de arena los poros son mayores
(Rucks et al., 2004).
La textura tiene un impacto directo sobre las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del
suelo, ya que la mayora de los procesos de bioremediacin la realizan los
microorganismos y la actividad de estos predomina en las arcillas, y por consiguiente
influye en las tecnologas de remediacin (Pellini, 2006).
La estructura del suelo es el arreglo de las partculas del suelo, siendo las partculas, no
solo la arena, limo y arcilla, sino tambin los agregados o elementos estructurales que se
forman por la agregacin de las fracciones granulomtricas (Rucks et al., 2004). En la
Figura 1 se muestran algunos tipos de estructura; la estructura granular o migajosa
presenta unidades esfricas o casi esfricas, con bordes y caras ms o menos
redondeados. Los contactos entre estas unidades se dan en pocos puntos y queda mucho
espacio entre ellos. Si las unidades mayores son desarmadas, se ve que estn
compuestas por unidades ms pequeas que poseen las mismas caractersticas. Se
desprende de lo anterior que las partculas secundarias tienen porosidad interna cosa
que no ocurre en los granos de arena (Rucks et al., 2004).
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El carbono es la fuente principal de alimento y se relaciona con casi todas las propiedades
edficas, generalmente se le conoce como materia orgnica y generalmente es el
contaminante; un artculo muy completo que relaciona el carbono orgnico con las
propiedades del suelo fue publicado por Martnez H, Fuentes E, & Acevedo H. (2008).
Entre los macro-elementos o elementos que deben estar en grandes cantidades para el
desarrollo normal de las plantas y microorganismos estn el fsforo y el nitrgeno, el
primero de los cuales se suele fijar a los suelos, mientras el segundo generalmente es
bastante abundante en el suelo. Ambos elementos son importantes por formar parte de
todos los tejidos de microorganismos y plantas. La dosificacin de nitrgeno y fsforo se
realiza en funcin de la concentracin del contaminante C:N:P (100:10:1)(Torres Delgado
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Otros nutrientes esenciales como el Ca2+, Na+, Fe2+ y SO42- estn presentes en cantidades
suficientes en el suelo; mientras que el calcio, magnesio, potasio, titanio, manganeso,
sodio, nquel y azufre se presentan en pequeas cantidades. Adems es importante
destacar que la accin de los nutrientes inorgnicos puede estar limitada debido a la
interaccin qumica con los minerales del suelo (el amonio se puede unir a las arcillas por
intercambio catinico y el fosfato puede unirse y precipitar con iones calcio, hierro y
aluminio) (Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
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El oxgeno en el suelo no es continuo y est localizado en los poros separados por los
slidos, este aire tiene generalmente una humedad ms alta que la de la atmsfera. El
contenido de anhdrido carbnico (CO) es por lo general ms alto y el del oxgeno ms
bajo que los hallados en la atmsfera. La mayor parte de los contaminantes son
degradados con mayor extensin y rapidez de forma aerbica (O2 como aceptor final de
electrones), ya que en ausencia de O2, y en presencia de aceptores de electrones
alternativos (NO3-, SO42-, CO2, Mn4+ y Fe3+) los contaminantes pueden ser degradados,
pero con unas tasas de biodegradacin muy inferiores a las aerbicas (Torres Delgado &
Zuluaga Montoya, 2009).
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Finalmente, es importante resaltar las propiedades emergentes del sistema suelo, las
cuales son producto de las interacciones entre todos sus componentes, entre estas
propiedades emergentes se encuentran la capacidad de bioremediacin, biosorcin o la
capacidad de resiliencia o resistencia ante impactos externos.
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En 1781 el cientfico ingls Henry Cavendish (1731 1810) descubri que el elemento
agua no es un elemento simple, sino complejo y susceptible de descomponerse en
oxgeno e hidrgeno. Pocos aos ms tarde el qumico francs Gay-Lussac (1778 1850)
confirm la teora de Cavendish, al lograr obtener agua a partir de la mezcla de dos
volmenes de hidrgeno con uno de oxgeno. El hecho vendra a confirmar que el agua es
un compuesto qumico, un conjunto de dos molculas formadas a su vez por
encadenamiento de dos tomos de hidrgeno con uno de oxgeno, de ah la formula que
se emplea para designarla sea H2O.
Las propiedades del agua pesada (con deuterio) difieren ligeramente de las del agua
ligera, pero ambas poseen un momento elctrico que se manifiesta en sus propiedades
fsicas y elctricas, es por ellos que el agua es del tipo de lquidos polares. Se adopta para
su representacin, un modelo triangular que debido al carcter electronegativo del
oxgeno el ngulo que forman los enlaces H-O-H es de 105o aproximadamente.
La estructura del agua depende de su estado fsico, el estado gaseoso (vapor) corresponde
exactamente a la formula H2O y, en especial al modelo angular indicado (Figura 3a). Los
estados condensados (lquido y slido) son ms complicados y esta complicacin explica
sus propiedades anormales; en estado slido, la disposicin elemental consiste en una
molcula de agua central y cuatro perifricas, tomando el conjunto la forma de un
tetraedro (Figura 3b).
A. B.
Figura 3: Molcula de agua.
A. en estado lquido (tomado de http://www.kalipedia.com/ecologia/tema/graficos-
molecula-agua.html?x1=20070417klpcnatun_87.Ees&x=20070417klpcnatun_97.Kes), B.
En estado slido (tomado de http://www.diasporaweb.es/13.html).
En el agua en estado lquido hay una asociacin entre varias molculas por enlaces
especiales llamados enlaces de hidrgeno: cada tomo de hidrgeno de una molcula de
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Los lmites permisibles para muchos elementos txicos o no, disueltos en el agua
dependen del uso que se le piense dar al agua y del elemento en cuestin, como se puede
observar en el Cuadro 2.
Entre los elementos importantes para el crecimiento algal, en particular Chlorella vulgaris
(alga bioremediadora), se encuentra el contenido de P y N, as como su relacin
estequiomtrica, los cuales determinan su tasa de crecimiento, siendo ambos elementos
limitantes del crecimiento y no se pueden considerar por separado (Aguirre Ramrez,
Palacio Baena, Correa Ochoa, & Hernndez Atilano, 2007).
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CAPTULO 2. CONTAMINANTES.
Contaminante es un concepto muy amplio y se considera como tal cualquier agente que
tiende a modificar el equilibrio natural del medio ambiente y adems puede incidir sobre
la biosfera. Es importante conocer que se conoce como xenobitico a toda sustancia
extraa o ajena a las que proceden del metabolismo de los seres vivos, por lo tanto,
contaminantes de naturaleza qumica y que suelen producir efectos txicos, o al menos
alteraciones en el normal funcionamiento de las clulas vivas.
Un txico es cualquier sustancia que causa efectos adversos a los organismos vivos y
ejerce ese efecto con una relacin dosis-respuesta. De acuerdo a la dosis, la toxicidad
puede ser aguda cuando causa mortalidad en el 50% de la poblacin de estudio (DL50) o
crnica o de efecto lento (tumores, lceras, irritaciones, etc.); adems est sometida a una
fuerte influencia de factores externos (dieta, medio ambiente, forma de administracin,
etc) e internos (edad, sexo, condiciones fisiolgicas, genticas, etc).
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Los hidrocarburos pueden llegar a ser un gran contaminante, sin embargo existen lmites
permisibles, los cuales son establecidos de acuerdo a criterios en cada pas, como se
muestra en el Cuadro 6.
Pueden continuar en el aire, agua y suelo por meses o aos y entre los sntomas a corto
plazo se incluye la irritacin ocular, nauseas, vmito, diarrea y confusin y aunque no son
claros los efectos a largo plazo, estos pueden incluir, cataratas, enfermedades renales y
del hgado, rompimiento de los glbulos rojos e incluso en animales de laboratorio ha
inducido cncer (Quinn, 2012).
En el trabajo de (Botello, Villanueva, Diaz, & Pica, 1995) realizado en un puerto de Oaxaca-
Mxico, se encontr que las cantidades de PAHs se incrementaron en varios rdenes de
magnitud, lo que indico un importante proceso de bioacumulacin de estos compuestos, y
sobre todo de aquellos conformados por 4 o 5 anillos bencnicos, los cuales se consideran
como carcingenos ambientales, con sus consecuentes efectos e impactos en las
pesqueras (efectos deletreos de tipo sub-letal en camarones reduccin en la tasa de
crecimiento, en la viabilidad de los gametos e irregularidades en el desarrollo larvario).
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BTEX es una abreviacin usada para cuatro compuestos aromticos voltiles encontrados
en los productos del petrleo: Benceno, Tolueno, Xileno y Etilbenceno (Figura 5), los
cuales son encontrados juntos en suelos contaminados (Communities, 2012).
Los lmites permisibles para el BTEX son de 0.005, 1.0, 0.7 y 10 mg/L respectivamente. En
Mxico los lmites mximos permisibles para BTEX en agua potable son 0.05, 0.3, 0.7 y 0.5
mg/L respectivamente (Acua Askar et al., 2008). La exposicin a BTEX en poblacin
general se produce fundamentalmente por inhalacin o por contacto, ms que por otras
vas como la ingestin a travs de alimentos o bebidas contaminadas.
Adems de los efectos cancergenos del benceno tambin se han descrito otros daos en
la salud asociados con la exposicin a altas dosis de estos Compuestos Orgnicos Voltiles
(COVs), tales como efectos respiratorios (asma), hematologicos (anemia, trombocitopenia,
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Muchos compuestos organoclorados han sido aislados de fuentes naturales que van desde
las bacterias hasta los seres humanos. Los compuestos orgnicos clorados se encuentran
en casi todas las clases de biomolculas, incluyendo alcaloides, terpenos, aminocidos,
flavonoidess, esteroidess, y cidos grasos. Los organoclorados, incluyendo las dioxinas, se
producen en ambientes de alta temperatura como los incendios forestales. Las dioxinas se
han encontrado en cenizas conservadas de incendios provocados por rayos anteriores a la
produccin de dioxinas sintticas. Adems, muchos hidrocarburos clorados simples como
el diclorometano, cloroformo, y tetracloruro de carbono se han aislado a partir de algas
marinas. La mayor parte del clorometano presente en el medio ambiente es producido
naturalmente por descomposicin de restos biolgicos, incendios forestales y volcanes.
Los PCBs o Bifenilos policlorados son compuestos voltiles solubles en tejido graso, usados
habitualmente como disolventes, aislantes o refrigerantes. Son hasta 200 sustancias
diferentes, con distinto grado de cloracin y de sustitucin (Figura 6).
Figura 6: Estructura de los PCBs. Dos anillos fenilos rodeados por cloro.
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La familia incluye cerca de 200 compuestos con estructura de bifenilo y que estn clorados
en un grado variable. Generalmente en los PCBs comercializados se encuentran alrededor
de 50 o ms de estos congneres. La situacin de los Cl sustituyentes permiten o impiden
la rotacin de los anillos.
Se absorben por los pulmones y sobre todo por va cutnea, los compuestos menos
clorados desaparecen antes, son ms degradables, tambin son ms txicos. Los mas
clorados son ms persistentes y bioacumulables en el tejido adiposo y tienen tambin
menor poder txico. En los humanos atraviesan la barrera hematoenceflica y la placenta;
retrasan el crecimiento y aceleran el metabolismo de drogas. Los compuestos altamente
clorados producen modificaciones en hgado, alteran los ciclos reproductivos e inducen
malformaciones.
piel, mucosa o tracto digestivo y pasar de all al hgado, siendo metabolizados y pasando a
formar parte de las clulas grasas; en algunas especies de aves causa problemas
reproductivos (como adelgazamiento de la cscara de huevo). Los insecticidas clorados
desarrollados orgnicamente son de una estructura molecular similar a la de los
hidrocarburos clorados, aunque se diferencian de estos ltimos en que son estimulantes
del sistema nervioso central. No hay que olvidar que algunos de estos insecticidas
clorados se acumulan en la vida silvestre y de ah pueden pasar al ser humano.
Algunos de los sntomas por exposicin a clorometanos incluyen dificultad para mantener
el equilibrio, visin doble o borrosa, mareo, fatiga, cambios de personalidad, confusin,
temblores, movimientos incoordinados, nusea o vmitos. Estos sntomas pueden durar
meses o aos. En condiciones de laboratorio los ratones machos que respiraron aire que
contena clorometano (1000000 ppb) durante 2 aos desarrollaron tumores en los
riones, sin embargo los ratones hembras y ratas de ambos sexos no desarrollaron
tumores. No se sabe si el clorometano puede producir esterilidad, abortos, defectos de
nacimiento o cncer en seres humanos. La EPA considera al clorometano como
posiblemente carcinognico en seres humanos (Grupo C) en base a evidencia limitada de
carcinogenicidad en animales (A. ATSDR, 2008).
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Algunos compuestos nitroaromticos como los nitrofuranos son utilizados como agentes
antimicrobianos (nitrofurazona, furazolidona y nitrofurantona). Es intermediario para
producir aminas, son bsicos para la produccin de los frmacos como el acetaminofn.
Uno de los nitroaromticos naturales es el antibitico cloramfenicol (Cazar & Lombeida,
2011; Chamberlain, 1976; Gomez Cruz, 2009)(Figura 8).
Muchos compuestos con grupo(s) nitro son txicos y/o mutagnicos, segn revelan
estudios en varios organismos, incluyendo bacterias, algas, plantas, invertebrados y
mamferos (Rieger & Knackmuss, 1995; Robidoux, Hawari, Thiboutot, Ampleman, &
Sunahara, 1999; Schfer & Achazi, 1999) por consiguiente, varios compuestos
nitroaromticos estn incluidos como agentes contaminantes prioritarios, segn la
Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (Gomez Cruz, 2009)
que los efectos genotxicos estn asociados a los derivados de la hidroxilamina (Gomez
Cruz, 2009; Mastandrea et al., 2005). En mamferos, los compuestos nitroaromticos se
transforman en metabolitos que son transformados por la microflora intestinal. La
microflora intestinal a travs de enzimas llamadas nitrorreductasas tienen un papel clave
en el metabolismo de los productos nitroaromticos exgenos a los cuales se expone el
hospedador. Las nitrorreductasas pueden reducir la mutagenicidad generando
compuestos inocuos (Aiub, Mazzei, Pinto, & Felzenszwalb, 2006; Gomez Cruz, 2009;
Mittal, Brar, & Soni, 2008).
En el caso de los dinitropirenos, los efectos txicos se pueden producir como resultado de
la reaccin de arilaminas con otras molculas, como la oxihemoglobina (protena de la
sangre que ayuda al transporte de oxgeno). Ambas, tanto la arilamina como la
oxihemoglobina, se oxidan en presencia del oxgeno, formando un ciclo redox para
producir ferrihemoglobina e hidroxilamina, que puede reaccionar otra vez con la
oxihemoglobina (H. Singh, Purnell, & Smith, 2007; Umbreit, 2007), causando su
inactivacin debido a la formacin de puentes sulfonamidas (Gomez Cruz, 2009; L. Liu,
Wagner, & Hanna, 2008).
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Se definen como metales pesados aquellos elementos qumicos que presentan una
densidad igual o superior a 5 g/cm3 cuando estn en forma elemental, o cuyo nmero
atmico es superior a 20 (excluyendo a los metales alcalinos y alcalinotrreos) (Vardanyan
& Ingole, 2006). Su presencia en la corteza terrestre es inferior al 0.1% y casi siempre
menor del 0.01%. Se pretende indicar con este trmino aquellos metales que, siendo
elementos pesados, son txicos para la clula. Sin embargo en realidad cualquier
elemento que a priori es beneficioso para la clula, en concentraciones excesivas puede
llegar a ser txico (Navarro-Avio, Aguilar Alonso, & Lpez-Moya, 2007).
Junto a ellos hay otros elementos que, aunque son metales ligeros o no metales, se suelen
englobar con ellos por orgenes y comportamientos asociados; es este el caso de Arsnico
(As), Boro (B), Bario (Ba) y Selenio (Se). Los metales pesados se clasifican en dos grupos: 1)
Oligoelementos o micronutrientes: Necesarios en pequeas cantidades para los
organismos, pero txicos una vez pasado cierto umbral; incluyen As, B, Co, Cr, Cu, Mo,
Mn, Ni, Se y Zn. 2) Sin funcin biolgica conocida: Son altamente txicos, e incluyen Ba,
Cd, Hg, Pb, Sb y Bi (Navarro-Avio et al., 2007).
Los elementos pertenecientes a estos dos grupos tambin varan segn los diferentes
autores. Adems, cuando se habla de metales pesados tampoco se especifica el estado del
elemento, es decir, si se trata del elemento puro, o de algunos o la totalidad de sus
diversos estados de oxidacin (compuestos), que no presentan las mismas propiedades
fsicas, qumicas, txicas ni ecotxicas. Este aspecto complica todava ms su clasificacin.
Por ejemplo, algunos compuestos de cromo hexavalente (Cr+6) son citados como
carcingenos humanos, pero prcticamente no se encuentra informacin sobre cnceres
ocasionados por exposicin a ese metal puro (Navarro-Avio et al., 2007).
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La causa primaria del elevado nivel de toxicidad a nivel qumico es que los metales
pesados poseen una gran capacidad para unirse con molculas orgnicas. En efecto, estos
efectos txicos en sistemas biolgicos dependen de reacciones con ligandos que son
esenciales para su asimilacin, y estos ligandos estn, a su vez, presentes en gran
abundancia en la clula, ya sea formando parte de molculas de mayores dimensiones, ya
sea como molculas aisladas. En este sentido, cabe destacar la gran afinidad que
muestran los metales pesados, como principales ligandos, por grupos sulfidrilo, radicales
amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo. El resultado de estas uniones ligando-metal puede
ser muy perjudicial para la clula, destacndose por: (1) la accin genrica sobre protenas
por inhibicin de la actividad o por rompimiento en la estructura de las mismas, (2) el
desplazamiento de elementos esenciales de su metabolismo normal, produciendo
deficiencias, y (3) la catlisis de reacciones de generacin de molculas ROS (Reactive
Oxigen Species) o radicales libres que provocan fenmenos de estrs oxidativo (Navarro-
Avio et al., 2007) y que en la actualidad se suelen asociar a diferentes tipos de cncer.
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Mientras que para fuentes lquidas para consumo humano, los lmites son mas
restringidos: Bario (0.1 mg/litro), Cadmio (0.005 mg/litro), Cromo (0,05 mg/litro), Plomo
(0.05 mg/litro).
Finalmente las enfermedades y sntomas que genera los niveles txicos son muy variados
y debido al conjunto de reacciones qumicas descritas hasta ahora, la toxicidad de los
metales pesados se puede definir como elevada, tanto para microorganismos como para
animales y plantas. Los metales pesados pasan del suelo a las plantas, y de ah a los
mamferos. En humanos, en general, crean problemas en los tejidos reproductivos y en
desarrollo (Navarro-Avio et al., 2007). Entre los efectos conocidos tenemos (para los
metales pesados que suponen un mayor problema):
Hg: alteraciones neurolgicas y del sistema respiratorio. En realidad todas las formas de
mercurio son potencialmente txicas, pero el vapor de mercurio la forma ms peligrosa,
dado que puede difundir a travs de los pulmones hasta la sangre y luego hasta el
cerebro, donde puede causar daos importantes (Navarro-Avio et al., 2007).
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Los cianuros son relativamente mviles en el suelo. Una vez en el suelo, el cianuro puede
ser removido a travs de varios procesos. Algunos compuestos de cianuro en el suelo
pueden formar cianuro de hidrgeno y evaporarse, mientras que otros sern
transformados a otras sustancias qumicas por los microorganismos en el suelo.
Consecuentemente, los cianuros generalmente no se filtran hacia el agua subterrnea. Sin
embargo, se ha detectado cianuro en aguas subterrneas de unos pocos vertederos y en
sitios para disposicin de residuos industriales. Las concentraciones altas de cianuro que
se encuentran en algunos filtrados de vertederos y en la basura que se almacena en
algunos sitios son txicas para los microorganismos del suelo. Debido a que estos
microorganismos ya no pueden transformar el cianuro a otras formas qumicas, el cianuro
puede pasar a travs del suelo hacia el agua subterrnea.
Por su parte los fenoles (Figura 10) son un grupo de compuestos orgnicos que presentan
en su estructura un grupo funcional hidroxilo unido a un radical arilo. Por lo tanto, la
frmula general para un fenol se escribe como Ar OH. Los fenoles se nombran,
generalmente, como derivados del miembro ms sencillo de la familia que es el fenol o
hidroxibenceno. Para algunos fenoles, suelen emplearse nombres comunes como cresoles
(metilfenoles), catecol (o-dihidroxibenceno), resorcinol (mdihidroxibenceno) y e
hidroquinona (p-dihidroxibenceno).
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Los fenoles sencillos son lquidos o slidos, de olor caracterstico, poco hidrosolubles y
muy solubles en solventes orgnicos. Algunos se usan como desinfectantes, pero son
txicos e irritantes (Garric, 1979).
Debido a su mayor acidez, los fenoles reaccionan con bases fuertes como el hidrxido de
sodio formando fenxidos. Siendo un aromtico, el fenol se comporta como tal de
acuerdo al mecanismo de sustitucin electroflica. Las quinonas son los productos de
oxidacin de ciertos difenoles, preparadas utilizando agentes oxidantes suaves como
cloruro frrico, xido de plata o incluso aire. Algunos compuestos biolgicos que
intervienen en etapas importantes de los procesos biolgicos de oxidacin reduccin
contienen un sistema quinoide. Un ejemplo importante es la ubiquinona o Coenzima Q o
CoQ, que interviene en una de las etapas de la cadena de transporte electrnico, donde se
realiza la produccin celular de ATP. En la vitamina K2, uno de los factores de coagulacin
sangunea tambin aparece un rasgo estructural quinoide (Garric, 1979).
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Son variados los procesos que intervienen en la bioremediacin y los organismos de los
que ms se conoce son las bacterias ya que es la tecnologa de bioremediacin mas
difundida. Menos informacin es conocida acerca de los procesos relacionados con
hongos, algas y plantas, por lo tanto sern vistos en menor detalle dentro de cada
apartado.
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Todos los organismos vivientes son diferentes y son estas diferencias las que los hacen tan
valiosos. Algunas de esas grandes diferencias se encuentran entre grandes grupos, como
son organismos microscpicos (observables solo por microscopio y estereoscopio) y
macroscpicos (observables a simple vista), en donde los primeros tienen ciclos de vida
cortos y los segundos son relativamente largos. Poniendo un ejemplo las bacterias pueden
duplicarse al cabo de cerca de una hora, de tal manera que en un dia se tienen 24
generaciones, en una semana 168, en un ao 8760 generaciones y en cada generacin
existe la posibilidad de mutaciones genticas, logrando una tasa de mutacin muy alta con
respecto a otros organismos. Por otro lado, las plantas solo alcanzan a dejar una
generacin, aproximadamente a los tres meses si son de ciclo reproductivo corto,
logrando solo 4 posibles generaciones al ao.
Es importante aclarar que los microorganismos que no tengan la dotacin gentica para
degradar los agentes contaminantes no lo van a hacer al exponerse a stos, solo los que
tengan el potencial lo van a hacer; no van a adquirir esta capacidad por exponerse a los
contaminantes, pero tampoco indica que van a morir al no poderlo descomponer o
degradar. Es posible que sobrevivan al poder utilizar otras fuentes de alimento
directamente disponibles, o fuentes que se vuelvan disponibles al haber una degradacin
parcial del contaminante principal, en un mecanismo de cometabolismo como fue
explicado anteriormente.
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Procesos de Bioremediacin
Este es uno de los principios en los que se basa una de las tcnicas empleadas para
obtener aislamientos microbianos aptos para la bioremediacin. A partir de muestras de
material contaminado se hacen aislamientos de organismos, con la esperanza de que
algunos de estos tengan la capacidad de degradar el contaminante en estudio y
posteriormente poder potencial su capacidad con miras a utilizarse industrialmente
cuando existan vertimientos similares a donde fue aislado. Sin embargo el concepto de
adaptacin no debe confundirse con el de aclimatacin (FAO, 2004).
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Los hidrocarburos son molculas hidrofbicas que forman micelas entre ellas y son
altamente insolubles en agua. Esto hace que la superficie de contacto que tienen los
microorganismos diminuya en gran medida, por lo tanto reduce la biodisponibilidad del
sustrato. Para que ocurra la degradacin de hidrocarburos es necesario que estos entren
en contacto directo con la membrana celular de los microorganismos para que el
xenobitico sea interiorizado y puedan actuar las enzimas oxigenasas (las primeras que
actan en el proceso de bioremediacin).
Para que los hidrocarburos sean ms disponibles se requiere de surfactantes que hagan
ese papel. Algunos microorganismos pueden producir algunos de stos de forma natural y
estos biosurfactantes se pueden clasificar en dos grupos
De bajo peso molecular: suelen ser glicolpidos (azcar + lpido). El mas estudiado
es el rhamnolipido producido por diversas especies de Pseudomonas. La funcin
principal de estos biosurfactantes es reducir las tensiones entre las fases (agua-
roca por ejemplo). Las Pseudomonas son bacterias productoras de este tipo de
biosurfactantes. Algunos microorganismos productores de biosurfactantes
extracelulares solubilizan y facilitan la penetracin de los hidrocarburos a travs de
la pared celular hidroflica; contienen adems enzimas degradadoras de
hidrocarburos en la membrana citoplasmtica (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009).
De alto peso molecular: Son producidos por diferentes especies y suelen ser
polisacridos, protenas, lipoprotenas, lipopolisacridos o mezclas de estos
polmeros. Estos biosurfactantes no son tan eficaces reduciendo tensiones entre-
fases, pero si son buenos emulsionantes. Adems se ha demostrado que son
eficaces a bajas concentraciones y tienen una considerable afinidad por el sustrato;
entre estos se encuentra el Alasan, producido por Acinetobacter radioresistens.
Los mecanismos de tolerancia en plantas varan entre las especies y estn determinados
por el tipo de metal, eficiencia de absorcin, traslocacin y secuestro. Las fases del
proceso por el cual las plantas incorporan y acumulan metales pesados son las siguientes
(Delgadillo-Lpez et al., 2011):
Fase II. Una vez dentro de la planta, las especies metlicas son secuestradas o
acomplejadas mediante la unin a ligandos especficos (Figura 13). Entre los quelantes
producidos por las plantas se encuentran los cidos orgnicos (cidos ctrico, oxlico y
mlico), algunos aminocidos (histidina y cistena) y dos clases de pptidos: fitoquelatinas
y metalotionenas. Las fitoquelatinas son ligandos de alta afinidad que tienen como
sustrato al glutatin (Navarro-Avio et al., 2007).
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Las metalotioneinas son polipptidos de unos 70-75 aminocidos con un alto contenido en
cistena, aminocido capaz de formar complejos con cationes mediante el grupo sulfidrilo
y tienen una marcada afinidad por las formas inicas de Zn, Cd, Hg y Cu (Navarro-Avio et
al., 2007).
Figura 13: Interaccin de los metales pesados con las clulas de plantas (Navarro-Avio et
al., 2007).
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Sin embargo el que una sustancia pueda ser degradada o descompuesta no implica que es
biodegradable, ya que los procesos qumicos y fsicos del ambiente pueden producir
degradacin de ciertas sustancias, sin que intervengan organismos vivos. Muchos
productos artificiales son biodegradables, pero otros (insecticidas organoclorados y
detergentes "duros") son muy resistentes a la accin bacteriana, mientras el vidrio y las
latas no son biodegradables segn el lmite de tiempo que impone el concepto de
biodegradabilidad, generalmente de menos de 20 meses.
Cada material contaminante tiene sus propios tiempos de degradacin, entre ellos
encontramos los vasos plsticos de polipropileno, el vidrio y el icopor (100 aos), los
envases tetra-pack depende de sus componentes, el alunimio dura (30 aos), las bolsas de
plstico (150 aos), el papel (1 ao), los pitillos y tapones plsticos (mas de 100 aos), las
tapas de botellas (30 aos) y los jabones (161 das) (Biodegradabilidad y
contaminacin.pdf). Entre los derivados del petrleo las fracciones de alcanos (incluidos
los alcanos normales y ramificados) tienen una biodegradabilidad alta; los compuestos
aromticos e hidrocarburos policiclicos aromticos (de mayor importancia debido a su
toxicidad y tendencia a bioacumulacin) tienen una biodegradabilidad media; mientras la
fraccin polar, que son las resinas (piridinas, quinolinas, carbazoles, sulfxidos y amidas) y
asfaltenos (fenoles, cidos grasos, cetonas, esteres y porfirinas) son de muy baja
biodegradabilidad (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
De las distintas familias de hidrocarburos del petrleo, los n-alcanos y los alcanos
ramificados (isoprenoides) de cadena intermedia (10 a 20 carbonos) son los sustratos ms
fcilmente degradables por los microorganismos del suelo, y que por lo tanto tienden a
ser eficazmente biodegradados. Sin embargo, los alcanos de cadena larga (> 20 carbonos)
son ms difciles de degradar debido a su (elevado peso molecular) y su baja solubilidad
en agua. Los cicloalcanos, por norma general, se degradan ms lentamente que los n-
alcanos y alcanos ramificados. De igual forma, los HAPs que contienen de 2 a 3 anillos
aromticos pueden ser biodegradados eficazmente en el suelo en condiciones
ambientales ptimas, mientras que los HAP de 4 anillos, y especialmente, los de 5 o ms
anillos bencnicos presentan una mayor recalcitrancia inherente y una baja solubilidad.
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Las fracciones de resinas y asfaltenos son las que presentan una menor degradabilidad
debido a las complejas estructuras qumicas y al elevado peso molecular de sus molculas
(Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
El CO2 y CH4 son considerados como los indicadores de cantidad de sustrato utilizado por
los microorganismos, en procesos de biodegradacin y es la base para los estndares
ASTM, ISO, EN y OECD para medir la biodegradabilidad de las sustancias qumicas.
Tcnicas como la Respirometra se basa en la medicin del consumo de oxgeno por parte
de microorganismos que trabajan sobre un sustrato orgnico, el cual es degradado y
oxidado a CO2. Los anlisis respiromtricos permiten adquirir datos sobre el consumo de
oxgeno en respuesta al metabolismo de un sustrato por la respiracin de
microorganismos tanto en condiciones aerbias como anaerobias. La Respirometra
ahorra tiempo y trabajo requeridos con los experimentos de agotamiento de substratos y
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Pero la sorcin no elimina los contaminantes, solo son retenidos en el suelo y pueden
constituir un problema en los tratamientos biolgicos. Con la finalidad de aumentar la
biodisponibilidad de los contaminantes para realizar una bioremediacin existen ejemplos
en la bibliografa de la utilizacin de tensoactivos sintticos y biotensoactivos en la
biorremediacin de suelos contaminados por hidrocarburos (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009).
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y con ste, la eficiencia de los sistemas; debido a lo anterior los niveles de fsforo al
realizar la bioestimulacin deben ser elevados.
La biosorcin incluye mecanismos fsico-qumicos por los que los metales son sorbidos y/o
complejados en la biomasa o productos microbianos, en la cual pueden generarse ncleos
de precipitacin de minerales estables. Su eficacia depende de las caractersticas qumicas
del metal, la concentracin de ste, la temperatura, el pH del medio, la presencia de otros
cationes y aniones (Pauro Roque et al., 2009); es una tcnica que se suele efectuar en
biorreactores pero en la actualidad al emplearse con plantas superiores no
necesariamente se realiza en stos.
Cuando se utiliza la biomasa activa tiene la ventaja que se renueva por si sola, los
productos metablicos excretados pueden contribuir a una mayor eliminacin de metales
y el transporte intracelular da mayor capacidad acumuladora. Cuando se emplea la
biomasa inactiva se evita problemas de toxicidad, la biosorcin se realiza en las
membranas celulares (no conlleva transporte), con lo que es ms rpida, es ms barata y
la recuperacin de metales es ms sencilla (sin destruccin celular).
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UNIDAD 2
Nombre de la
ESPECIES EMPLEADAS PARA LA BIOREMEDIACIN.
Unidad
CAPTULO 4 BACTERIAS Y ALGAS.
Leccin 16 Introduccin.
Leccin 20 Aplicaciones.
Leccin 21 Introduccin.
Leccin 22 Metabolismo.
Leccin 25 Aplicaciones.
Leccin 26 Introduccin.
Leccin 27 Metabolismo.
Leccin 28 Clases.
Leccin 30 Aplicaciones.
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La bioremediacin como proceso solo pueden realizarla los organismos vivos o sus partes
(tejidos secos o enzimas), y teniendo esto claro es necesario aclarar que no todos los
organismos vivos pueden realizar procesos de bioremediacin. Como anteriormente se
mencion solo lo pueden realizar aquellos organismos que tengan el potencial gentico
(enzimas, tejidos, mecanismos, estructuras celulares, estructuras epidrmicas u otros) que
les permitan retener, metabolizar o transformar los contaminantes. Los contaminantes
referidos son de origen natural (petrleo y derivados, metales pesados) o artificial
(xenobiticos o productos de sntesis qumica).
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Tanto las bacterias como las algas involucran organismos microscpicos, las bacterias
carecen de nucleo y por eso se les conoce como procariotas, mientras las algas tienen un
nucleo verdadero y por eso se les conoce como eucariotas. De los dos grupos solo las algas
pueden tener tamaos visibles y formar tejidos de varios metros de longitud. Aunque los
dos grupos son casi cosmopolitas (habitan en todas las regiones del planeta), sus
metabolismos son diferentes, las bacterias son hetertrofas, mientras las algas son
auttrofas y esto repercute grandemente en los mecanismos de degradacin, que se
vern con mayor detalle en la leccin 17 o de metabolismo.
Existen bacterias tiles para degradar una gran cantidad de contaminantes, se incluyen
Achromobacter sp., Alcaligenes denitrificans, Arthrobacter, A. sulphureux, Acidovorax
delafieldi, Bacillus cereus, Brevibacterium sp., Burkholderia sp., Chryseobacterium sp.,
Jambacter sp., Mycobacterium sp., M. flavescens, Pseudomonas sp., Pseudomonas putida,
Pseudomonas aeruginosa, Ralstonia sp., Rhodonobacter sp., Rhodococcus sp.,
Staphylococcus sp., Stenotrophomonas sp., Sphingomonas sp., Terrabacter sp. y
Xanthomonas sp. para degradar derivados del petrleo, aromticos y similares.
Existen por ejemplo bacterias que pueden degradar con relativa facilidad el petrleo,
benceno, tolueno y otros derivados. Los metales pesados como uranio, cadmio, y
mercurio no son biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlo y aislarlos para
poder eliminarlos ms fcilmente (Montoya, 1990). Tambin son inhibidas por altas
concentraciones de los contaminantes, por ejemplo se ha encontrado que los mayores
valores de Concentracin Mmima Inhibitoria (CMI) oscilan entre: 200- 3700 mg.L-1 de
plomo (II), 200 - 3400 mg.L-1 de cromo (VI) , 200 -2400 mg.L-1 de cadmio (II), 200 3700
mg.L-1 de cobre (II), 200 - 3200 mg.L-1 de zinc (II), y nquel (II) 200-3200 mg.L-1 para
aislamientos bacterianos de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Acinetobacter,
Alcaligenes, Staphylococcus y Corynebacterium (Garza Gonzlez, 2005).
Tres de las grandes ventajas de las bacterias residen en su alta velocidad de replicacin y
crecimiento, en su amplia variabilidad gentica y en el hecho de que son los nicos
organismos que pueden trabajar en condiciones anaerobias para degradar gran cantidad
de xenobiticos y contaminantes, estas caractersticas hacen que las bacterias sean
altamente adaptables a muchas condiciones del entorno. El hecho de poder trabajar en
condiciones anaerobias las capacita para trabajar en condiciones de anoxia,
predominantes en regiones hmedas, en lechos acuticos, pantanos, lagos y similares,
incluso condiciones anaerobias producidas por los mismos derrames.
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Las algas por su parte, son importantes productores primarios en la cadena alimenticia.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la turbiedad. En
el proceso de purificacin natural, las algas oxigenan el agua y utilizan los subproductos
del proceso de depuracin. Las pequeas algas verdes unicelulares son las ms
importantes para mantener el nivel adecuado de oxgeno disuelto en los estanques de
estabilizacin (Rivas Cevallos & Vera Vera, 2011). La importancia de las algas para el
funcionamiento del planeta es enorme, aunque desde el punto de vista (terrestre) pasan
inadvertidas. Las algas son enormemente diversas (desde unicelulares de 1m de
dimetro hasta gigantescas algas marina de 50m de largo) y estn presentes en
prcticamente todos los ecosistemas de la biosfera (Rivas Cevallos & Vera Vera, 2011).
Con respecto a los metales pesados, algunas Geobacter sp. son capaces de respirar usando
metales, es decir de reducirlos, su aplicacin en el terreno de la bioremediacin es muy
amplia. Por ejemplo en el caso de la contaminacin por Uranio (VI) el cual es insoluble,
pero que al ser metabolizada por Geobacter sp. es reducido a Uranio (IV), el cual es
soluble y puede ser removido.
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Para los sustratos que pueden ser biodegradados existen dos mecanismos de
degradacin, aerbio y anaerobio, cuyas reacciones siempre producen CO2 y materia
orgnica (Figura 14).
Figura 14: Esquema de las reacciones de acuerdo a Torres Delgado & Zuluaga Montoya
(2009).
Cualquiera que sea el xenobitico, lo primero que se hace es quitar este carcter
mediante la accin de enzimas especficas catablicas (oxigenasas, hidrolasas,
deshidrogenasas, amidadas, transferasas, entre otras), para servir de intermediario
metablico y posteriormente continuar en el metabolismo normal de las bacterias.
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Figura 15: Ruta de degradacin (via catecol) de compuestos aromticos (Eweis et al.,
1998) utilizada por bacterias como Pseudomonas putida.
En general, los compuestos nitroaromticos pueden ser degradados a travs de dos tipos
diferentes de mecanismos dependiendo del nmero de sustituyentes nitro del anillo: uno
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El metabolismo oxidativo puede seguir la ruta de las mono o dioxigenasas, las mono-
oxigenasas se ha encontrado que actan sobre el 4-nitrofenol, 4nitrocatecol (Chauhan et
al., 2000; Jain, Dreisbach, & Spain, 1994), onitrofenol (Xiao, Zhang, Liu, & Zhou, 2007;
Zeyer et al., 1986) y dependiendo del aislamiento pueden eliminar el grupo nitro en forma
de nitrito, aunque tambin se puede hidroxilar el anillo sin salida del grupo nitro (Gomez
Cruz, 2009)(Figura 17a).
Figura 17: Rutas aerbicas oxidativas de degradacin del anillo aromtico de los
compuestos nitroaromticos.
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Los procesos posteriores dependen del organismo que realice la biodegradacin del
hidrocarburo especfico, requiere de mecanismos enzimticos especficos, muchos de los
cuales no se han dilucidado completamente. Para una visin mas completa de los
mecanismos durante la degradacin de hidrocarburos aromticos se puede revisar a
Widdel & Rabus (2001).
Dos procesos se pueden llevar a cabo, bien sea la reduccin del anillo mediante la adicin
de iones hidruros, o bien a la reduccin de grupo nitro para obtener los derivados: nitroso,
hidroxilamino o amino. El nitrito o el amonio liberado del anillo aromtico por vas
degradativas pueden ser utilizados como fuente de nitrgeno para el crecimiento
bacteriano (Gomez Cruz, 2009; M. D. D. Roldn et al., 2008)(Figura 20).
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Las nitroreductasas mas estudiadas son las tipo I (insensibles a oxgeno), que catalizan la
reduccin de una gran variedad de compuestos nitroaromticos mediante la adicin de
pares de electrones formando intermediarios nitroso (NO) e hidroxilamino (NHOH) y,
finalmente, el producto aminoderivado (NH2) (Gomez Cruz, 2009; Nishino et al., 2000;
M. D. D. Roldn et al., 2008)(Figura 21).
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Figura 21: Reduccin del nitrobenceno catalizada por la nitrobenceno reductasa (Tipo I) de
Pseudomoas pseudoalcaligenes.
El proceso se realiza mediante la adicin secuencial de pares de electrones del NADPH
(Gomez Cruz, 2009; Johnson & Spain, 2003; Nishino et al., 2000).
Por su parte, Rhododoccus sp. posee una gran variedad de vas metablicas para la
degradacin y modificacin anaerbica de compuestos aromticos, hidrocarburos
alifticos halogenados y numerosos compuestos aromticos, como los PAHs (Torres
Delgado & Zuluaga Montoya, 2009). Pseudomonas aeruginosa tambin degrada gran
cantidad de sustratos como el n-hexadecano, compuestos alifticos, hidrocarburos
aromticos y poliaromticos en condiciones anaerobias (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009). Finalmente tambin se ha encontrado Desulfomonile tiedjei como
degradador del Monoclorobenzoato (Compuesto orgnico voltil) en condiciones
anaerobias.
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Para los metales pesados las rutas metablicas son diferentes a las de otros
contaminantes, debido a que los metales no se degradan, solo sufren reacciones de
transformacin para ser detoxificados o acumulados, pero no son utilizados como sustrato
para generar biomasa.
Las vas por las cuales los microorganismos pueden influenciar los metales pueden ser
(Figura 22):
1- Acumulacin de metales de forma independiente del metabolismo (adsorcin
pasiva) o intracelular o dependiente del metabolismo (absorcin activa). Ambos
mecanismos pueden ocurrir en el mismo organismo. Si un metal es acumulado por
el microorganismo, el destino del metal, estar relacionado con el destino de la
clula. De otra parte si los microorganismos son transportados, el metal se mover
con ellos.
2- Algunos metales pueden ser transformados por procesos redox (p. ej. Fe y Mn) o
por alquilacin (p. ej. Hg). La movilidad y toxicidad del metal transformado
usualmente difiere en gran medida a su forma original.
3- Los microorganismos pueden producir o liberar sustancias, como compuestos
orgnicos o sulfuros que cambian la movilidad de los metales, reduciendo la
movilidad de stos.
4- Los microorganismos participan en el ciclaje de carbono y por lo tanto influencian
la cantidad y caractersticas de la materia orgnica. Esto es de gran importancia
para la movilidad de los metales porque la materia orgnica se suele unir a los
metales. La degradacin microbiana de los complejos rgano-metlicos puede
cambiar la especiacin del metal. Sin embargo los metales unidos a varias
sustancias orgnicas pueden disminuir la degradacin microbiana del compuesto
orgnico. El resultado puede ser materia orgnica con los metales acumulados, la
cual no es biodegradada.
5- En adicin a estos procesos directos, los microorganismos pueden influenciar
indirectamente la movilidad de los metales debido a que afectan el pH y las
propiedades del suelo.
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Por su parte, la acumulacin pasiva puede principalmente ser influenciada por: a) las
propiedades de la superficie tales como la carga y orientacin de los grupos funcionales
del metal sobre la superficie de la clula y b) la especiacin del metal y la qumica en la
fase acuosa (Ledin, 2000). En organismos que solo realizan acumulacin pasiva, se ha
encontrado que se puede seguir un proceso, comenzando con una reaccin electrosttica
de los metales con los grupos de la superficie y luego se convierten en centros de
agregacin de stos, logrando alcanzar hasta el mismo peso de la clula, lo que lleva a que
la clula se precipite.
Algunas bacterias tienen capacidad para unirse a iones metlicos del exterior de la
superficie celular en un mecanismo de adsorcin pasiva, y adems utilizan los metales
para funciones estructurales y/o catalticas, en este caso los transportan hacia el interior
mediante absorcin activa, esto lo hacen mediante:
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Entre los metales que pueden ser adsorbidos se encuentran Hg (II), U, Cd(II), Zn(II), (II),
Cu(II), Ag(I), La(III), Pb(II), Ni(II), Fe(III), Ca(II), Cr(VI), TcO4-, Sr(II), Mn(II) y Tl(I), por
microorganismos como Pseudomonas putida, Scherichia coli, Pseudomonas sp.,
Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas capecia, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus
mucilagenosus, Thiotrix sp., Rhodococcus erythropolis, Synechocistis sp., Synechococcus
sp. y Plectonema borianum (Ledin, 2000; Mo & Lian, 2010; Murthy, Bali, & Sarangi, 2012).
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Segn Golovleva, Aharonson, Greenhalg, Sethunathan, & Vonk (1990), las Pseudomonas
son las bacterias ms eficientes en la degradacin de compuestos txicos, la capacidad de
estas bacterias para degradar estos compuestos depende del tiempo de contacto con el
compuesto, las condiciones ambientales en las que se desarrollen y su versatilidad
fisiolgica. En Peru, Vsquez y Reyes (2002) evaluaron tres especies de Pseudomonas para
la biodegradacin del herbicida Aroclor 1242, los resultados obtenidos demuestran la
gran capacidad de las bacterias para degradarlo, encontrando un porcentaje de
degradacin entre 99,8 y 98,4% (Torres Rodrguez, 2003)
En el altiplano boliviano los drenajes cidos de las minas estn caracterizados por la
acidez extrema, altas concentraciones de metales pesados y sulfatos. Las bacterias sulfo-
reductoras reducen sulfatos oxidando la materia orgnica para la produccin de sulfuro de
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En la costa de Galicia suelos saturados con Diesel fueron tratados con sistemas anaerobios
debido a las limitantes de oxgeno ya que los hidrocarburos totales (HCT) se encontraban
a 4.6 mts de profundidad. Se recurri al uso de aceptores alternativos de electrones,
mediante la adicin de nutrientes y bioaumentacin. Como resultado se elimin ms del
90% de los contaminantes en las zonas ms crticas y una considerable reduccin de
hidrocarburos en casi todo el lugar. A 4.6 metros de profundidad las concentraciones de
HCT se redujeron de 1000 mg/kg a menos de 100 mg/kg; se complet la remediacin
aproximadamente de 27400 m3 de suelo y acufero contaminado con diesel, cubriendo un
rea de aproximadamente 12200 m2 a una profundidad de 6 metros, cumpliendo con
todas las regulaciones y leyes ambientales estatales y federales.
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Los hongos son un grupo muy grande de organismos, tanto hoy en da se consideran un
reino aparte, comprende desde organismos microscpicos hasta de hasta un metro de
longitud en sus estructuras reproductivas. Siendo un grupo tan diverso, heterogneo y
ampliamente distribuido por el planeta, con un papel principalmente descomponedor o
saprobio de prcticamente toda materia orgnica, es de suponer que algunos de ellos
tengan propiedades de bioremediacin.
La bioremediacin en una de sus ramas, usa los hongos para limpiar ambientes
contaminados, aprovechando la capacidad que tienen algunas especies para degradar,
transformar, acumular, tolerar y/o extraer diversos contaminantes (orgnicos
xenobiticos, metales pesados, elementos radioactivos, etc)(Alonso, 2007).
Hay una serie de ventajas en el uso de hongos en relacin al uso de las plantas.
1. La infiltracin del hongo al sustrato es muy superior al de las plantas (debido a que
su cuerpo constituido por hifas puede penetrar mas profundo por su dimetro mas
pequeo).
2. Las especies mas acumuladoras, especialmente el gnero Agaricus, seccin
arvensis, poseen una capacidad de acumulacin de metales como cadmio o
mercurio superior a la de las plantas. Su crecimiento y productividad no se ve
inhibido por la presencia de concentraciones elevadas de metales txicos como el
mercurio.
3. Los cultivos de Agaricus sobre sustratos ricos en materia orgnica esta
ampliamente estudiado y comprendido. Especies como Agaricus macrosporus o
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Aunque los macromycetos sean los preferidos para los procesos de fitoextraccin, son los
hongos microscpicos los que predominan entre los degradadores de hidrocarburos
poliaromticos, como se observa en el Cuadro 10.
Cuadro 10: Gneros fngicos que contienen especies que degradan hidrocarburos
poliaromaticos (PAHs)(Al-Turki, 2009).
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Los hongos pueden biodegradar solos, en cooperacin con plantas resaltando sus
funciones, o con bacterias en cometabolismo; cualquiera que sea el caso, algunos de sus
procesos metablicos son similares o complementarios, p. ej, el uso de enzimas mono y
dioxigenasas para la degradacin inicial, con la diferencia de que son diferentes enzimas,
como lignoperoxidasas y manganeso peroxidasas, las cuales usan H2O2 como aceptor de
electrones y catalizan la oxigenacin de diversos compuestos incluyendo los polmeros de
lignina.
Al igual que las bacterias es mucha la informacin que se desconoce para poder ser
utilizada, se puede argumentar que los estudios en este campo estn en desarrollo y
muchas de las rutas metablicas y los mecanismos de biodegradacin y biorecuperacin
son especficos para gneros o especies, por lo tanto es difcil generalizar en cuanto a los
resultados que se pueden obtener en cifras y hechos. Los hongos tienen sus ventajas y
desventajas, los cuales pondremos en tela de juicio a lo largo del presente captulo.
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Figura 26: Degradacin de Fenantreno y Pireno por Cyclothirium sp. (da Silva, Esposito,
Moody, Canhos, & Cerniglia, 2004).
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La ruta de degradacin del TNT ha sido caracterizada a travs de la actividad del hongo
causante de la pudricin blanca de la madera P. chrysosporium (Fernando, Bumpus, &
Aust, 1990; Spain, 1995). Algunos de los intermediarios formados durante la degradacin
de TNT por P. chrysosporium, tambin han sido reportados para T. viride (Argumedo-
Delira et al., 2009; Bayman & Radka, 1997).
Insecticidas como forato o carbofurano (con vida media en el ambiente de 9.1 a 10.4
meses) pueden estimular o inhibir el crecimiento de especies de Trichoderma (Das,
Chakravarty, Sukul, & Mukherjee, 2003). Ms an, T. viride contribuye en la degradacin
del herbicida triflurina (concentracin inicial: 1 mg/L) en ms del 90 % en
aproximadamente 10 das (Zayed et al., 1983). Anderson & Domsch (1976) mencionan que
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la degradacin del herbicida arvadex (concentracin inicial: 2.5 mg/L) por T. harzianum es
muy lenta en cultivo lquido, ya que fue menor al 20% despus de 10 das de incubacin.
En contraste, las especies T. harzianum y T. longipilus son sensibles al herbicida
fosfinotricina a una concentracin de 1 mM (Ahmad & Malloch, 1995; Argumedo-Delira et
al., 2009).
Una de las actividades industriales cuyas descargas causan efectos adversos sobre el
medio ambiente es la industria de la celulosa (Sponza, 2003), la cual utiliza cloro y dixido
de cloro durante el proceso de blanqueo de la pulpa (Stinchfield & Woods, 1995). En este
proceso se generan diversos compuestos organoclorados altamente txicos, entre ellos se
encuentran 4,5-dicloroguaiacol, 3,4,5-tricloroguaiacol, 4-etil-2-metoxifenol,
pentaclorofenol, 2,3,5,6-tetra- cloro-4-metoxifenol, eugenol, tetracloroguaiacol, 4,5,6-
tricloroguaiacol, hexaclorociclohexano, cido hexadecanoico, 2-metoxifenol, 2,6-
dimetoxifenol, 4,5-dicloro-2-metoxifenol, por mencionar algunos (Kovacs, Gibbons,
Tremblay, OConnor, & Voss, 1995)(Gaete, Larrain, BaySchmith, Baeza, & Rodrguez,
2000). Algunas especies del gnero Trichoderma pueden degradar
pentacloronitrobenceno y pentaclorofenol, pero no degradan al hexaclorociclohexano
(Montiel et al., 2004). En este sentido, se ha demostrado que T. harzianum tiene la
capacidad de degradar 2,4,6-triclorofenol, 4,5-dicloroguaiacol, 3,4,5-tricloroguaiacol,
tetracloroguaiacol y otros compuestos halogenados (Argumedo-Delira et al., 2009; van
Leeuwen, Nicholson, Levay, Hayes, & Mulcahy, 1997).
Gran cantidad de hongos puede degradar los benzo(a)pyrenos, creciendo sobre diferentes
sustratos con eficacias desde 18 a 99% en su remocin y con tiempos de incubacin de 2
horas a 15 semanas; en el proceso producen metabolitos caractersticos de cada
aislamiento fngico (Cuadro 11).
Cuadro 11: Degradacin de benzo(a)pyrenos por aislamientos fngicos (Juhasz & Naidu,
2000).
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a
Experimentos de degradacin preparados con ligninasa cruda y preparada de P. chrysosporium.
b
Experimentos de degradacin preparados con lacasa cruda y preparada de T. versicolor.
c
Experimentos de degradacin preparados con lacasa purificada de T. versicolor.
d
MYPD: Extracto de malta, extracto de levadura, peptona y dextrosa.
e
Experimentos de degradacin preparados con preparaciones de manganeso peroxidasa cruda de N.
frowardii.
f
Experimentos de degradacin preparados con preparaciones de manganeso peroxidasa cruda de N.
frowardii y una sustancia mediadora (5 mM de glutation).
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Se pueden considerar tres clases de aplicacin con hongos, biodegradacin por hongos
independientes, degradacin en simbiosis micorrcica y degradacin por cometabolismo;
cualquiera que sea el mecanismo, la biosorcin va microbiana es ms econmica tanto en
trminos de costo de instalacin como de operacin y mantenimiento, pues los mtodos
qumicos resultan costosos debido a que el agente activo no puede ser recuperado para su
posterior reutilizacin (Argumedo-Delira et al., 2009; Caizares-Villanueva, 2000).
Aunque las bacterias poseen las rutas catablicas para los PAHs, las cuales se presumen
degradan los Benzo(a)pirenos (Bap), su degradacin puede no ocurrir debido a que estos
compuestos no pueden pasar la pared celular bacteriana (Hammel, 1996). Sin embargo
esta limitacin no aplica a hongos debido a su habilidad de producir enzimas
extracelulares (enzimas degradadoras de lignina). La degradacin fungica de los BaP no
resulta en una significativa reduccin del compuesto, sin embargo las ligninasas
convierten el BaP en productos solubles al agua los cuales son mas biodisponibles
(Meulenberg, Rijnaarts, Doddema, & Field, 1997) y potencialmente mas txicas que los
productos de origen. Como la degradacin de los PAHs por las bacterias est limitado por
su incapacidad de hidroxilar los compuestos, la transformacin inicial de los BaP por los
hongos, seguido por la degradacin bacteriana de los metabolitos polares puede llevar a
una estrategia efectiva de bioremediacin, como se ha demostrado en algunos pocos
estudios. Este fenmeno tambin se ha observado con otros PAHs tales como pireno y
Antraceno (Juhasz & Naidu, 2000; Meulenberg et al., 1997).
Las colillas de cigarrillos son basuras comunes en todo el mundo, que contaminan el
ambiente y se fuman cerca de 5,6 millones de cigarrillos al ao. Las sustancias contenidas
en las colillas, como nicotina y alquitrn, son txicas para los peces tanto de agua dulce
como salada, segn el British Medical Journal, citado por la UNAM. Adems de la
contaminacin del agua, los organismos marinos y terrestres, las colillas de cigarrillos
permanecen hasta 10 aos sin descomponerse. Con este reto en manos, los estudiantes
de licenciatura en Biologa en la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, perteneciente a
la UNAM, colectaron las colillas de cigarrillos en la propia universidad hasta reunir 8
kilogramos. Despus estudiaron la degradacin por los hongos Pleurotus ostreatus y
Trametes versicolor. Los hongos degradaron cerca del 18% de las colillas e incluso
crecieron en el lquido resultante de la degradacin.
Torres Rodrguez (2003) report que Ouahiba et al. en el 2001 aislaron varias especies de
hongos en suelos contaminados con pesticidas de Argelia. Las especies ms frecuentes
fueron Aspergillus fumigatus, A. Nger, A. terreus, Absidia corymberifera y Rhizopus
microsporus var microsporis. 53 de las especies aisladas se destacaron por su habilidad
para la degradacin del herbicida metribuzin en medio lquido; simultneamente se
demostr que el herbicida promova el crecimiento de los gneros Absidia y Fusarium, los
cuales lograron eliminar el 50% del compuesto despus de 5 das. Por otra parte, 31
especies pudieron eliminar el metroburon, mientras Botrytis cinerea elimin el
metroburn y el linuron casi completamente, destacandose de las otras especies (Torres
Rodrguez, 2003).
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Los hongos de pudricin blanca poseen un sistema enzimtico oxidativo extracelular capaz
de degradar compuestos orgnicos persistentes. Esta capacidad les permite ser utilizados
en procesos de biorremediacin de aguas y suelos contaminados. Sin embargo, el uso de
estos hongos requiere la determinacin de condiciones adecuadas para aumentar su
crecimiento y expresin enzimtica, en condiciones diferentes a su ambiente natural
(Rubilar Araneda, 2007).
Tres cepas fngicas de pudricin blanca: Anthracophyllum discolor, Inonotus sp. y Stereum
hirsutum, fueron seleccionadas, cultivadas en medio lquido con concentraciones de
nitrgeno (0,2 y 1,2 g/L) y con dos fuentes de carbono (glucosa y carboximetilcelulosa),
para evaluar el efecto del medio de cultivo sobre la produccin de las enzimas
ligninoltica: manganeso peroxidasa, lignina peroxidasa, verstil peroxidasa y lacasa (MnP,
LiP, VP y lacasa) y posteriormente ser usadas en la remocin de PENTACLOROFENOL (PCF)
adicionado en concentraciones de 50 y 100 mg/L (Rubilar Araneda, 2007).
En el medio con glucosa y con 0,2 g/L de nitrgeno se encontraron las mejores
producciones enzimticas por A. discolor, as mismo una elevada remocin de PCF (90%
con 50 mg/L y 40% con 100 mg/L), despus de 37 das de incubacin. Llevando estos
resultados a condiciones de campo, se evalu el efecto de la aplicacin de diferentes
materiales lignocelulsicos (paja de trigo, granos de trigo y viruta de madera) en el
crecimiento de A. discolor. Se evalu la biorremediacin de suelo contaminado con PCF
(250 y 350 mg/kg) utilizando A. discolor y P. chrysosporium, colonizado en granos de trigo
(Rubilar Araneda, 2007).
Finalmente los hongos formadores de micorriza arbuscular y sus plantas asociadas han
sido empleadas para la remocin de residuos de plomo (Alvarado, Dagubta-Schubert,
Ambriz, Snchez-Yaez, & Villegas, 2011), para la recuperacin de suelos contaminados
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por actividad minera (Cornejo et al., 2008) y de suelos y aguas contaminados con
hidrocarburos de petrleo (Ferrera-Cerrato et al., 2006).
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Las estrategias empleadas por las plantas para resistir los efectos txicos causados por los
metales pesados, se relacionan con diferentes mecanismos como el establecimiento de
enlaces entre los metales y la pared celular; el nivel de tolerancia por la membrana celular
hacia los metales; reduccin del transporte por la membrana celular; flujo activo de
metales desde las clulas hacia el exterior; el nivel de tolerancia de las enzimas vegetales
hacia los metales; la acumulacin o compartimentacin del exceso de metales en rganos
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sub-celulares como las vacuolas; la quelacin del metal por ligandos orgnicos y/o
inorgnicos, y la precipitacin del metal al formar compuestos de baja solubilidad (Torres
Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
La incineracin controlada es el mtodo ms comn para disponer las plantas que han
absorbido cantidades grandes de contaminantes. Este proceso produce cenizas, que se
pueden desechar en los sitios destinados para tal fin (Agudelo Betancur et al., 2005).
Ventajas de la fitoremediacin:
Las plantas suelen ser utilizadas como bombas extractoras de bajo costo para
depurar suelos y aguas contaminadas.
Algunos procesos degradativos ocurren en forma ms rpida con plantas que con
microrganismos.
Es un mtodo apropiado para descontaminar superficies grandes o para finalizar la
descontaminacin de cualquier rea.
Limitaciones de la fitoremediacin:
El proceso se limita a la profundidad de penetracin de las races o aguas poco
profundas.
La fitotoxicidad es un limitante en reas fuertemente contaminadas.
Los tiempos del proceso pueden ser muy prolongados.
La biodisponibilidad de los compuestos o metales es un factor limitante de la
captacin.
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Para una gua completa de referencias que se pueden revisar en cuanto a fitoremediacin
se puede recurrir a la (EPA, 2000) y a libros un poco mas actualizados como (Walker,
2007).
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La capacidad de metabolismo de las plantas verdes, en especial las plantas arbreas, les
permiten sintetizar, modificar y degradar una gran y mayor cantidad de molculas. Es
especialmente relevante en las fitoalexinas, ya que inhibe la germinacin de esporas y el
desarrollo del micelio en hongos patgenos, rompiendo la pared celular.
De hecho, las reacciones que permiten crear nuevos enlaces intra e intermoleculares C-O,
han sido descritas en el metabolismo de benzofenonas y bencilisoquinolinas,
respectivamente, siendo catalizadas por citocromos P-450.
Algunos compuestos orgnicos son utilizados por los microrganismos como fuente de
carbono (Vias, 2005). Los compuestos alifticos se degradan fcilmente por oxidaciones
sucesivas, en cambio los compuestos aromticos se degradan luego de la ruptura del
anillo.
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Otro tema importante es la atraccin electrosttica que existe entre las cargas elctricas
que generan las races de las plantas con las cargas opuestas de las partculas coloidales
que les permiten adherirse a las superficies de las races, donde son absorbidas y
transportadas a las partes areas donde las metaboliza o volatiliza.
Los mecanismos de tolerancia a los compuestos orgnicos varan entre las distintas
especies de plantas y se determinan por el tipo de metal, eficiencia en la absorcin,
traslocacin y secuestro. La incorporacin y acumulacin de estos metales pesados se
resume en tres fases que son:
Fase I: Inicia con el transporte de los metales pesados al interior de la planta, y
luego, al interior de la clula. La raz tiene cargas negativas en sus clulas, por
contener grupos carboxilo que interaccionan con las cargas positivas de los
metales pesados, creando un equilibrio dinmico que facilita la entrada hacia el
interior celular (Delgadillo-Lpez et al., 2011).
Fase II: Los metales pesados ya ubicados en el interior de la planta, son
secuestrados o acomplejados mediante la unin a ligandos especficos.
Fase III: Involucra la compartimentalizacin y detoxificacin, proceso por el cual, el
complejo ligando-metal queda retenido en la vacuola.
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A. FITOESTABILIZACIN.
Con este mtodo se han tratado lagunas de deshecho de yacimientos mineros y aguas
residuales (Arias Martnez, Betancur Toro, Gmez Rojas, Salazar Giraldo, & Hernndez
ngel, 2010).
B. RIZOFILTRACIN.
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Utiliza las plantas para eliminar del medio hdrico contaminantes a travs de la raz
(Dushenkov, Kumar, Motto, & Raskin, 1995) Se cultivan de forma hidropnica. Cuando
el sistema radicular est bien desarrollado, las plantas se introducen en el agua
contaminada con metales, donde la raz los absorbe y acumula. Cuando las races se
saturan, las plantas se cosechan y se disponen para su disposicin final (Figura 29).
La rizofiltracin est indicada para aguas contaminadas con cadmio, cobalto, cromo,
nquel, mercurio, plomo, selenio, zinc, istopos radiactivos y compuestos fenlicos.
C. FITOEXTRACCIN O FITOACUMULACIN.
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D. FITOVOLATILIZACIN.
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E. FITODEGRADACIN.
Torres Delgado & Zuluaga Montoya (2010) lo presentan como el proceso mediante el
cual las plantas toman el contaminante y lo metabolizan transformndolo en un
material sin riesgos para el medio natural (Figura 32).
Esta tcnica se ha empleado para eliminar explosivos como el TNT, DNT, RDX y
pesticidas organoclorados y organofosforados, entre otros (Hannink et al., 2001),
aguas residuales agropecuarias, solventes clorados, DDT, fenoles, nitrilos, etc. (Arias
Martnez et al., 2010).
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F. RIZODEGRADACIN.
La rizodegradacin se lleva a cabo en el suelo que rodea a las races. Las sustancias
excretadas naturalmente por stas, suministran nutrientes para los microrganismos,
mejorando as su actividad biolgica.
G. FITOINMOVILIZACIN.
En resumen, son 6 los mecanismos que pueden utilizar las plantas para la fitoremediacin,
los cuales pueden usarse independientemente o pueden ser utilizados simultneamente
Cuadro 14.
La toma de una decisin de si usar o no una tcnica de fitoremediacin como una opcin
viable es indicado por un conjunto de pasos (EPA, 2000).
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6. Cuadro 16).
Disear y construir el sistema.
Mantener y operar el sistema.
Monitorear y evaluar el crecimiento de las plantas y el xito de la fitoremediacin.
Reevaluar la seleccin de especies basado en las observaciones.
Realizar una medicin cuantitativa.
Resembrar y replantar conforme sea necesario con la misma o diferentes plantas.
Conocer los criterios de xito.
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Se han utilizado plantas con hongos de micorriza arbuscular para la extraccin de plomo
de sitios de alta concentracin de este metal pesado, principalmente por el mecanismo de
fitoestabilizacin y fitoextraccin del suelo (Alvarado et al., 2011).
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Como algunos ejemplos puntuales se puede citar al rea de Edgewood en Maryland (EPA,
2000) en el cual un suelo contaminado con Tricloroetileno a concentracin de 170 ppm,
fue tratada con Populus tricocarpa X deltoides (conocido como Poplar hbrido), se sembr
un rea de 1 acre y se logr la descontaminacin en abril de 1996. En el procedimiento se
midi el crecimiento de las plantas por medio de observaciones visuales (dimetro, altura,
salud, reproduccin y remplazo), tambin la zona bajo tierra mediante anlisis en el cual
se determin contaminantes voltiles, metales y nutrientes. El suelo fue muestreado para
evaluar la actividad de biodegradacin y los derivados voltiles contaminantes; el
muestreo de tejidos fue analizado en cuanto a degradacin de los productos absorbidos y
el contenido de compuestos voltiles. Adicionalmente se valor el flujo de sabia para ser
correlacionado a los datos meteorolgicos y se realiz un muestreo y anlisis de los gases
transpirados mediante varios mtodos para medir la tasa de evapotranspiracin de
tricloroetileno en forma de vapor.
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En el sitio Carswell de Fort Worth, Texas (EPA, 2000) fue realizado un experimento para
evaluar la capacidad de biodegradacin de Populus deltoides (algodn de madera del
este) en comparacin a especies de Populus tradas y probadas. En un terreno de una
hectrea (Figura 34) contaminada a nivel subsuperficial con Tricloroetileno en 1996 se
sembraron los rboles, dejando como testigo algunos rboles de la misma especie en
zonas vecinas y hacia donde no se movilizaba el TCE. Al cabo de 16 meses se observ una
reduccin substancial de la contaminacin, con el inconveniente de que las tasas de
transpiracin dependan mucho de la poca del ao y por lo tanto los tratamientos eran
mas efectivos en los meses de verano cuando las hojas haban alcanzado su mximo
tamao.
Figura 34: Diseo experimental en Carswell (Forth Texas), tomado de EPA (2000).
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Los costos son un poco elevados (Cuadro 18) debido a la innovacin de la tecnologa de
monitoreo. Los costos finales del proyecto no estn dados en el documento consultado,
pero estn alrededor del 10 al 20% del tratamiento mecnico.
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UNIDAD 3
Nombre de la
TCNICAS DE BIOREMEDIACIN.
Unidad
CAPTULO 7 ATENUACIN NATURAL
Leccin 31 Introduccin.
Leccin 33 Funcionamiento.
CAPTULO 8 BIOESTIMULACIN.
Leccin 36 Introduccin.
Leccin 38 Funcionamiento.
CAPTULO 9 BIOAUMENTACIN
Leccin 41 Introduccin.
Leccin 43 Funcionamiento.
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Una vez se conocen los conceptos bsicos acerca de bioremediacin, del suelo, el agua y
se han logrado diferenciar los trminos que se usan en bioremediacin del significado que
puede tener en otras disciplinas del conocimiento, se cuenta con el esqueleto sobre el que
se pueden basar los procesos de bioremediacin. El conocimiento de los xenobiticos fue
explorado en detalle, para conocer su origen, clasificacin, toxicidad, permanencia y
consecuencias de su presencia, de esta manera se posee los criterios para poder
diferenciar diferentes contaminantes, los cuales son bses para saber como estos pueden
ser degradados por entes biolgicos o como pueden ser afectados por stos.
Luego se conocieron los organismos con capacidad de degradar xenobiticos, los procesos
metablicos que subyacen el proceso de degradacin de stos y se conoci la
especificidad y eficiencia de cada organismo con respecto a los contaminantes; todo esto
fue confirmado con ejemplos particulares, lo que indica que se comprendido la
importancia de los aspectos biticos, por lo tanto se poseen las herramientas para poder
comprender las diferentes tcnicas involucradas en la bioremediacin.
Finalmente la presente unidad muestra una integracin entre aspectos biticos, qumicos,
fsicos, ambientales e ingenieriles en bsqueda de dar solucin a los problemas de
contaminacin por xenobiticos. Solo se pretende mostrar tres de las tcnicas mas
usadas, como son la atenuacin natural, la bioaumentacin y la bioestimulacin, as
mismo se muestra elementos importantes a tomar en cuenta para la seleccin de uno u
otro y la forma como se puede planear su implementacin.
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abajo del foco y en la direccin del flujo debe ser adecuada para que exista una mayor
disponibilidad y proporcin entre los contaminantes y los aceptores de electrones
(Corona-Ramrez & Iturbe-Argelles, 2005).
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Hay muchos factores que pueden limitar o impedir la AN en un medio como: a) la ausencia
de elementos esenciales para los microorganismos, b) ausencia de aceptores adecuados,
generalmente oxigeno, c) ausencia de poblaciones microbianas con el potencial
enzimtico adecuado para degradar los contaminantes, d) presencia de componentes
txicos en la mezcla contaminante (Corona-Ramrez & Iturbe-Argelles, 2005).
4. Control y Seguimiento.
Para una correcta optimizacin se deben controlar los siguientes puntos:
a. Control de las condiciones de degradacin y biodegradacin.
b. Control de los parmetros que afectan directamente en el funcionamiento del
sistema.
De acuerdo a Field, (2005) los procesos que intervienen en la ANM (Figura 35) son:
a. Biodegradacin: es la parte ms importante de la atenuacin natural, ya que causa
la remocin total de los contaminantes txicos.
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Para que la ANM sea un mtodo de bioremediacin eficaz se deben tener en cuenta los
siguientes aspectos:
1. Informacin especfica requerida del sitio: datos histricos de la qumica del agua
subterrnea y/o suelo, datos hidrogeolgicos y geoqumicos, estudios de campo y
de microcosmos.
2. Tiempo estimado razonable: uso actual, potencial y futuro del agua subterrnea
afectada, relatividad del tiempo estimado de uso del acufero, aceptacin pblica
de la remediacin a largo plazo, confiabilidad de los controles de monitoreo e
institucionales.
3. Condiciones necesarias: humedad (50-80%), temperatura (> 5oC requerida para
biodegradacin significante), pH (6.5 a 8.5), disponibilidad de oxgeno, nutrientes,
aceptores de electrones alternativos, donadores de electrnes, potencial redox (>
50mV aerbico, < 50mV anaerbico).
4. Evidencia de atenuacin natural: evidencia geoqumica (disminucin del
contaminante en el campo, incremento de la poblacin microbiana, cambios en los
aceptores de electrones, evidencia de istopos) y estudios de microcosmos.
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Cuando el medio ambiente se halla contaminado con sustancias qumicas, la naturaleza las
elimina por cuatro vas:
1. Accin bacteriana: las bacterias que viven en el suelo y en las aguas subterrneas
utilizan algunas sustancias qumicas como alimento. Cuando las sustancias
qumicas estn completamente digeridas, las transforman en agua y en gases
inofensivos.
2. Sorcin: las sustancias qumicas se pegan o sorben al suelo, que las fija al lugar. De
ese modo no se eliminan las sustancias qumicas pero si se impide que contaminen
las aguas subterrneas y que escapen del lugar.
3. Mezcla y dilucin: la contaminacin se puede mezclar con el agua limpia, diluyendo
la contaminacin.
4. Evaporacin: algunas sustancias qumicas, como el petrleo y los solventes, se
evaporan, lo que significa que se convierten de lquidos a gases dentro del suelo.
Adems, si esos gases escapan al aire en la superficie del terreno, la luz del sol
puede destruirlos.
Un aspecto importante es proveer desde el inicio y a lo largo del proceso los nutrientes
adecuados en la cantidad necesaria, la ausencia de los contenidos de nitrgeno, fsforo
necesarios para el crecimiento microbiano, la relacin C: N: P debe ser 100:10:1, la adicin
de nutrientes es clave para garantizar que los microorganismos logren realizar los
procesos metablicos que sustentan la biorremediacin. La adicin de nutrientes debe
realizarse en base a un anlisis previo ya que una sobreexposicin puede inhibir el proceso
y provocar contaminacin del suelo; por otro lado puede haber una prdida de nutrientes
por la adsorcin del suelo o procesos paralelos.
De acuerdo a los resultados de A. J. Acua, Pucci, & Pucci (2008) en suelos deficientes de
nitrgeno en la Patagonia, es posible la degradacin de hidrocarburos siempre y cuando
los tiempos de tratamiento sean ms prolongados que en aquellos que se realiza una
fertilizacin con nitrgeno. El nitrgeno necesario para el proceso ser obtenido por los
microorganismos del suelo por fijacin biolgica.
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En el trabajo de Garcia, Roldn, & Garzn (2011) se encontr que el empleo de sales
inorgnicas simples (SIS) estimularon ms el metabolismo microbiano en comparacin a
los fertilizantes inorgnicos compuestos (FIC), lo cual posiblemente est relacionado con
el efecto inhibitorio generado por la acumulacin de amoniaco, limitando el crecimiento
de la poblacin degradadora.
La ANM funciona con mayor eficacia en los sitios donde se ha eliminado previamente la
fuente de contaminacin. Dado que se realiza bajo tierra, no es necesario excavar ni
construir. Por lo tanto, no es necesario eliminar desechos enterrndolos, por lo que se
afecta menos el medio ambiente al evitar el contacto con la contaminacin, siendo usada
en derrames de petrleo y gasolina de los tanques.
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La atenuacin natural se est usando para limpiar la contaminacin causada por fugas de
petrleo de depsitos subterrneos en todo Estados Unidos. Ha sido uno de los mtodos
de limpieza de 73 lugares con agua subterrnea contaminada, siendo algunos de estos
sitios vertederos municipales e industriales, refineras y centros de reciclaje.
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En Estados Unidos, al emplear la AN, en un sitio con presencia de aguas contaminadas con
Tricloroetileno (TCE), se pudo aevaluar su movimiento subterrneo desde su lugar de
origen hasta el punto de entrada al lago Michigan. En el predio se encontraron
concentraciones de TCE superiores a 200.000 microgramos por litro, pero cuando la estela
lleg a la orilla del lago Michigan, contena mil veces menos TCE. La estela tard alrededor
de 20 aos en llegar desde la fuente de contaminacin hasta el lago Michigan, dando
suficiente tiempo a los microorganismos naturales que estn en el agua subterrnea para
destruir el TCE sin intervencin externa. De hecho, los microorganismos estaban
destruyendo alrededor de 270Kg de TCE por ao (EPA, 1996).
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La atenuacin natural puede ser menos costosa que otras opciones dirigidas para el
tratamiento de bioremediacin, ya que no requieren una fuente de energa ni equipo
especial, como otros tratamientos que se usan para el agua subterrnea (Olguin,
Hernndez, & Snchez-Galvn, 2007).
De acuerdo con los diferentes estudios que se han realizado, la atenuacin natural es un
proceso largo, lento generada por organismos autctonos degradadores de petrleo y ha
demostrado su efectividad en manglares, pantanos y suelos limosos y arcillosos antes que
en los arenosos; ya que la permeabilidad permite poco desplazamiento de los
contaminantes.
Por otro lado, an no existen estudios que especifiquen claramente las ventajas de las
diversas opciones de biorremediacin en trminos de costos. Sin embargo, es posible
prever que la opcin de aireacin a gran escala puede ser muy costosa y que
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Limitando la visin slo a los grandes trazos, puede decirse que a las ventajas que la ANM
presenta (menor cantidad de residuos, ausencia de riesgos asociados al traslado de
equipos, materiales y residuos, menor intrusin de estructuras superficiales, menor costo
potencial asociado a actividades de remediacin, etc.), se contrapone la dificultad de
caracterizacin de cada situacin especfica, por el nmero y tipo de factores a tener en
cuenta, la incertidumbre asociada a los datos experimentales (algunos de difcil obtencin)
y las predicciones que de stos se implican. Hay que sumar, adems, el costo y tiempo de
la mayor cantidad de anlisis y monitoreos que involucra, en relacin con otras
alternativas de remediacin activas (Mateu, 2008).
En una comparacin realizada por (ITRCWG & RTDF, 1999) entre la atenuacin natural y
otras tecnologas de remediacin con respecto a una fuente con solventes clorinados se
encuentran detalles como:
Asumiendo el costo de 20 pozos.
La restauracin completa.
El largo tiempo de restauracin.
El 3% de inflacin.
El impuesto del 12%.
Incluyendo todos los costos asociados al sistema de atenuacin natural por un periodo de
30 aos y mostrados en la tabla 4 del mismo documento (ITRCWG & RTDF, 1999), el costo
estimado es de U$ 908.300, mientras que el sistema con bombas el costo es de U$
2134.000, dando una diferencia de U$ 1225.700, lo cual confirma los menores costos de la
atenuacin natural.
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La decisin de emplear la ANM como remedio debe ser adecuadamente soportada en una
exhaustiva caracterizacin del sitio especfico: ya que es necesario que esta sea ms
compleja y detallada que cuando se trata de aplicar un mtodo activo. Tambin se
requiere la obtencin de elementos adicionales, por ejemplo: evaluar las contribuciones
de la sorcin, la dilucin y la dispersin a las aguas subterrneas contaminadas (Mateu,
2008).
El monitoreo consiste en la caracterizacin inicial del sitio y/o material a remediarse, debe
de realizarse un monitoreo de por lo menos un muestreo con los respectivos anlisis cada
6 meses y una caracterizacin final una vez concluidos los trabajos (Orosco Verdezoto &
Soria Guano, 2008), el cual muchas veces no se sabe cuando ser. Los marcos temporales
requeridos para la ANM son a menudo ms largos que los requeridos para otros remedios
activos, lo que incrementa la incertidumbre asociada a las determinaciones de las tasas de
atenuacin, y a todo aquel factor sobre el cual deba ser efectuada una prediccin a futuro
(Mateu, 2008).
Diferentes factores deben ser puestos en consideracin como la clasificacin del recurso
afectado, el tiempo estimado en que el recurso tenga un determinado uso; condiciones
subsuperficiales que pueden llegar a afectar en el largo plazo otros recursos cercanos;
determinacin de las masas de contaminantes y los anlisis predictivos (Mateu, 2008).
Existen mltiples mtodos para evaluar los procesos de biorremediacin, entre los que se
encuentran:
Mtodos no moleculares:
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Para asegurar la correcta ejecucin y un progreso adecuado del tratamiento se debe llevar
a cabo un plan de control y seguimiento del sistema, los cuales se pueden observar en la
Figura 38.
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CAPTULO 8. BIOESTIMULACIN.
Otro caso muy comn es el landfarming o labranza del terreno, en la cual lo ms comn es
el arado del suelo con el fin de brindar oxgeno a la flora autctona del suelo, en algunas
ocasiones con retroexcavadoras para hacer una labor mas profunda, en este caso se
puede hablar de una bioestimulacin, sin embargo se encuentran reportes en literatura
donde para mejorar el proceso se adicionan nutrientes como N y P al suelo con el fin de
estimular la degradacin de los contaminantes por la flora nativa. Actualmente con miras
a mejorar el proceso se ha optado por dos alternativas para la adicin de
microorganismos, la primera es obtener los organismos nativos y cultivar aquellos que
presenten el potencial de degradacin, o la segunda es agregar microorganismos
alctonos con capacidad reconocida de degradacin de los contaminantes; cualquiera sea
el caso se procura hacer la bioaumentacin con el fin de acelerar o mejorar los procesos
biodegradativos.
La bioaumentacin tambin se ha usado con xito para remediar suelos contaminados con
gasolinas, Compuestos Orgnicos Voltiles, Compuestos Orgnicos Solubles y pesticidas
(Alexander, 1994); incluso estudios a escala piloto, han mostrado la biodegradacin de
suelos contaminados con desechos de municiones. Tambin se ha demostrado su
eficiencia en el tratamiento de aguas subterrneas contaminadas con hidrocarburos,
derivados de petrleo, pesticidas, disolventes, conservantes de la madera y otros
qumicos contaminantes.
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En los lugares de clima frio donde la temperatura del agua es baja, el uso de calefactores
sobre el terreno ayuda a aumentar la temperatura del suelo y la tasa de degradacin.
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Generalmente debe ser aplicado en zonas vadosas y es aplicado para aquellos qumicos
que son biodegradados aerbicamente, aunque en principio se ha utilizado para sitios
contaminados con petrleo. Es uno de los mtodos considerado de mayor costo-beneficio
para la remediacin de la zona vadosa.
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Procesos de Bioremediacin
Por lo general se usan nutrientes aplicados de liberacin lenta, solubles en agua aplicados
en forma de briquetas y granulares o con aspersores y con nutrientes oleofilicos liquidos.
Uno de los ejemplos exitosos mas conocidos de bioaumentacin sucedi en las playas de
Alaska con la empresa EXXON VALDEZ, los cuales tuvieron en en 1989 una catstrofe
ambiental por vertimiento de hidrocarburos en 470 millas de playa y la tecnologa mas
apropiada fue la aplicacin de nutrientes en 110 de stas (Figura 40). Como resultado se
obtuvo un incremento en la velocidad de biodegradacin entre 2 y 4 veces,
adicionalmente se evalu el potencial de la utilizacin de microoganismos a esas playas
para favorecer la biodegradacin (Chau, 2003).
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Figura 40. Localizacin geogrfica del vertimiento EXXON VALDEZ en Alaska y foto del
proceso de bioremediacin.
Finalmente un rea que est tomando fuerza es el uso de algas para procesos de
bioremediacin en casos especficos a cambio de hongos y bacterias; en un trabajo de
laboratorio desarrollado por Aguirre Ramrez et al. (2007), se evalu el efecto de
diferentes concentraciones de nitrgeno y fsforo sobre las poblaciones de Chlorella
vulgaris, un alga bioremediadora. Se encontr que para una proporcin de N:P de 46,67:1,
correspondiente al 200% del control de nitrgeno (8,4 mg/L N) se present inhibicin,
mientras para una proporcin de N:P de 11,67:1, correspondiente al 200% del control de
fsforo (0,36 mg/L P) se present estimulacin. Este contraste implica que el fsforo es el
nutriente limitante, sin embargo, el fsforo no debe ser analizado independientemente;
su estudio debe ser realizado en trminos de la relacin estequiomtrica con respecto a la
concentracin del nitrgeno; por lo tanto, al aumentar estequiomtricamente el
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nitrgeno la concentracin el fsforo se hace limitante; es por ello que existe una
inhibicin en el crecimiento de la poblacin cuando la relacin N:P estequiomtricamente
favorece al nitrgeno; a su vez, cuando la cantidad de fsforo es mayor su condicin no es
limitante puesto que proporcionalmente la relacin N:P favorece en este caso a dicho
nutriente y en consecuencia la tasa de crecimiento poblacional aumenta. A pesar de que
en la naturaleza el fsforo es considerado el nutriente ms limitante, las concentraciones
de nitrgeno deben conservar una proporcin mayor en relacin al fsforo.
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Los costos de la bioestimulacin son bajos comparados con otros mtodos de remediacin
usados para el tratamiento de vertimiento de hidrocarburos, pero son un tratamiento a
largo plazo, que puede llevar muchos aos para su completo funcionamiento.
Son muy escasos los reportes donde se de una informacin clara acerca de los costos de
diferentes casos exitosos de bioremediacin por medio de bioestimulacin (Olguin et al.,
2007), sin embargo todos ellos coinciden en mencionar que es una de las alternativas ms
econmicas que pueden existir dentro de todas las tcnicas de bioremediacin in-situ
(Arrieta Ramrez, 2011; Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
De acuerdo al estudio realizado en la costa da Morte en una playa de sobre la costa del
Golfo de Alaska, se aplicaron nutrientes a 110 millas de playa contaminada, el costo de la
bioestimulacin oscila entre 30 y 100 dlares/m3. En la bioremediacin usada el
tratamiento de bioestimulacin fue econmico, tras comparar el gasto de 12.000 euros
por 500m de costa limpiados, frente al milln de euros necesarios en la catstrofe del
Exxon Valdez para la limpieza fsica de cada kilmetro de litoral.
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El pH es uno de los parmetros que mas variaciones registra pues favorece el desarrollo
de los microorganismos degradadores (Arrieta Ramrez, 2011). Esto puede deberse a la
adicion de nutrientes que estimula el crecimiento de microorganismos aumentando la
biomasa y generando incrementos de pH; el descenso de pH observable
aproximadamente despus de la decima semana se deben a que la cantidad de oxgeno en
el medio disminuye, presentndose incluso condiciones anxicas, aumentando la cantidad
de CO2 en el medio.
La humedad debe mantenerse alrededor del 25%, cuando se observa exceso de agua en el
microcosmos, el suelo se torna pantanoso y puede interferir en el transporte de oxgeno
en el medio. La aireacin en el medio favorece la degradacin del hidrocarburo por
volatilizacin, facilitando la migracin de la fase voltil de los contaminantes, y por
biodegradacin, ya que al incrementar la oxigenacin del suelo se va a estimular la
actividad bacteriana.
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Normas ASTM D 5745 95 Standard Guide for Developing and Implementing Short Terms
Measures or Early Actions for Site Remediation.
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Anlisis microbiolgicos:
Toma de muestras, manejo y almacenamiento para ensayos con microorganismos
aerbicos, segn Norma IRAM 29481-6: 1998; ISO 10381-6: 1993.
Poblacin hetertrofa total. Recuento por NMP.
Poblacin hidrocarburoltica. Recuento por NMP, en medio mnimo con petrleo
estril como nica fuente de carbono. Bioensayos para establecer compatibilidad y
biodegradabilidad. Segn Norma ISO 11266:1994 (con modificaciones).
Las especies que respondan sin indicar alteraciones en sus distintos estados fenolgicos,
sern las elegidas para repoblar los suelos del predio. Durante los bioensayos con plantas,
se obtendrn muestras de material vegetal donde se analizar contenido de hidrocarburos
en los tejidos vegetales. Los controles sobre las plantas se realizarn siguiendo la Norma
ISO 11269-1: 1993. Calidad del Suelo. Determinacin de los efectos de contaminantes en
la flora del suelo (Norma IRAM en estudio) segn Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al.
(2010).
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CAPTULO 9. BIOAUMENTACIN.
Cualquiera que sea el caso, en tratamientos in-situ o ex-situ, se debe tener en cuenta las
propiedades del sustrato, para lo cual se requiere de una valoracin inicial de los
principales contaminantes y sus concentraciones, debido a que si se superan los lmites
tolerantes por los microorganismos ests sern ihhibidos o eliminados. A partir de estos
datos tambin es importante considerar el tipo de tratamiento que va a ser mas
adecuado, debido a que la degradacin de algunos contaminantes se realiza mejor bajo
condiciones aerbias y en otros casos en condiciones anaerobias, mientras en otros casos
se requerir de tratamientos mixtos (aerobio-anaerobio) o trabajo complementario entre
varios organismos, de acuerdo a esto se debe considerar el mejor tratamiento de
bioaumentacin y los microorganismos que han de ser empleados.
Una de las tcnicas ms empleadas para reducir la contaminacin por hidrocarburos ex-
situ en Ecuador es el uso de compostas, cuya efectividad fue comprobada por Espinosa
Andrade, (2009)(Figura 41).
Figura 41: Representacin grfica de un sistema de biopilas alargadas (Velasco & Volke
Seplveda, 2003).
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Rben (2002) describio un conjunto de elementos a estudiar antes de crear una planta de
compostaje, estos procesos pueden ser tambin aplicados en el caso de bioaumentacin
en el proceso de Landfarming, en donde la premisa fundamental radica en estudiar
minuciosamente la situacin actual y las posibilidades econmicas.
En el caso del compostaje, la pila de material vegetal ha de ser de por lo menos un metro
de altura por uno de ancho, y el largo solo est limitado de las dimensiones del terreno, lo
cual favorece la actividad de los diferentes microorganismos involucrados (mesfilos,
termfilos, aerobios y anaerobios). Aunque las dimensiones de ancho y alto pueden ser
mucho mayores ya que en al finalizar el proceso las pilas de compost pueden
corresponder a la tercera parte del volumen inicial. En el fondo de la pila el sistema cuenta
con un aislante que generalmente son geomembranas o canales plsticos para el control
de lixiviados. Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la
pila, o bien de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireacin, con distribucin
permanente de nutrientes, microorganismos y aire. En principio, las biopilas se pueden
aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms eficaz en los compuestos de
carcter ms ligero.
Entre los factores a tener en cuenta se encuentran la humedad, el pH, la temperatura del
suelo, el contenido de oxgeno, la concentracin de nutrientes, la textura del suelo; y
entre los parmetros de los contaminantes se encuentran la volatilidad, la estructura
qumica, concentracin y toxicidad (Cuadro 20). Entre los factores que influyen en la
aplicacin de las biopilas se destacan los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben
encontrarse en el suelo en concentraciones menores a 50.000 ppm.
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La fase bitica indgena de un suelo, posee naturalmente formas de resistencia que les
permiten sobrevivir por largos perodos sin realizar actividades metablicas, ante
condiciones ambientales desfavorables. Un adecuado manejo del sistema suelo, permite
amortiguar los efectos ambientales, generando una proliferacin cuali y cuantitativa de
los microorganismos autctonos, permitiendo que realicen sus funciones bioqumicas en
forma continua, aunque temporalmente menos activa. Los organismos alctonos que se
puedan incorporar a un suelo, generalmente, no participan significativamente en la
actividad comunitaria. Esta poblacin demanda un cierto perodo de adaptacin, llegando
a crecer y reproducirse, mantenindose por cortos perodos, debiendo competir con las
poblaciones autctonas, por espacio colonizante, por nutrientes y oxgeno, pero sin llegar
a contribuir en forma significativa a las numerosas transformaciones e interacciones de
importancia ecolgica que ocurren en el suelo (Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al., 2010).
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Cualquiera que sea la tcnica, bien sea compostaje o landfarming, unos altos costos se
relacionan con la extraccin de los microorganismos nativos con propiedades
biodegradadoras y la posterior produccin de los microorganismos en suficiente cantidad
para poderse aplicar al sitio de donde fueron extraidos; as como un estudio piloto previo
a la bioremediacin a escala completa (Rben, 2002).
Las plantas mecanizadas implican mayores costos, se deben tomar en consideracin los
costos de inversin par una o ms de las unidades siguientes:
Pre-condicionamiento:
Confeccin del tamiz tambor.
Confeccin de la banda transportadora.
Confeccin de la trituradora / molino.
Compostaje:
Cargador.
Contenedores o tnel de compostaje.
Mquina para mezcla/ revuelta.
Adems:
Tubera y motor de aireacin filtro biolgico (con tubera de aireacin y desage).
Condicionamiento del producto listo:
Tamiz tambor.
Equipo para separar materiales forneos (cicln, tamiz aireado, separador a
corriente del aire).
Los costos proyectados segn la Agencia de proteccin ambiental de Estados Unidos (EPA)
no difieren mucho de las anteriores observaciones, pero dan valores cuantitativos, e
indican que para el caso del landfarming los costos van de 150 dlares por metro cbico
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En el caso de las pilas de compost, estas se deben estar aireando permanentemente bien
sea por volteo o de forma mecnica, en cualquiera de los casos es necesario evaluar la
cantidad de oxgeno disponible. El pH puede ser un factor crtico para que se desarrollen
los procesos en cualquiera de las etapas que se est realizando ya que el sustrato debe
conservarse cerca a la neutralidad (EPA, 1994b), esta valoracin se tiene que realizar al
menos con una frecuencia semanal.
Debido a que si se desea realizar bioremediacin, los suelos contaminados han de ser
agregados a la pila de compost, as como los microorganismos controladores, es necesario
un monitoreo permanente de las poblaciones de microorganismos mesfilos, termfilos,
aerobios y anaerobios, ya que pueden fcilmente competir por los sustratos y hacer el
proceso de degradacin menos eficiente, en este sentido el tratamiento de composteo
demora aproximadamente 3 meses, durante los cuales se debe de realizar una valoracin
al menos quincenal de las poblaciones de microorganismos de inters.
Estas valoraciones tienen que realizarse simultneamente con una determinacin del
contenido de los contaminantes a degradar, los cuales se pueden realizar cada vez que se
realice un volteo (cuando se realiza aireacin mecnica) o quincenalmente cuando se
dispone de un sistema de aireacin (EPA, 1994b). Cuando el contaminante se agrega de
forma lquida, este lquido debe de remplazar al agua que se adiciona en el proceso
normal de compostaje y por lo tanto las valoraciones deben realizarse justo antes de la
adicin de nuevas dosis de contaminantes.
Cuando se realiza una valoracin siempre ha de realizarse en varios sitios de la pila (la
cantidad depende de las dimensiones de la pila), tomando muestras tanto de la parte
superficial, intermedia y profunda y en cada caso son diferentes los microorganismos a
evaluar. Parmetros como temperatura, humedad, oxgeno, pH y contenido nutricional
son homogneos en cualquier parte donde se est muestreando, pero los
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Muy diferente cuando se trata de tratamientos in-situ, en los cuales debido a las grandes
dimensiones de las pilas de tratamiento se hace ms difcil una evaluacin detallada de los
parmetros; en tal caso se asegura por una parte la aireacin por volteo, mientras que
parmetros como pH, humedad y poblaciones de microorganismos deben realizarse por
muestreo aleatorio.
Anlisis microbiolgicos:
Toma de muestras, manejo y almacenamiento para ensayos con microorganismos
aerbicos, segn Norma IRAM 29481-6: 1998; ISO 10381-6: 1993.
Poblacin hetertrofa total. Recuento por NMP.
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