MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO III. Casos de correlacin bioqumica y prctica mdica

Caso 1. Clera 85
I. Conceptos tericos iniciales Caso 2. Oclusin intestinal. Acidosis metablica. 86
El mtodo cientfico 04 Deshidratacin grave
El Sistema Internacional de Unidades (SI) 06 Caso 3. Hipoglucemia secundaria a intoxicacin
Matemticas para el laboratorio 10 Alcohlica 88
Notacin cientfica o exponencial 10 Caso 4. Cetosis por inanicin. Obesidad 89
El mtodo del factor unitario en los clculos 11 Caso 5. Hipercolesterolemia y aterosclerosis 91
Logaritmos 12 Caso 6. Gota 93
Grficas 14
Algunos mtodos utilizados en bioqumica 15 IV Casos clnicos (ABP)
Centrifugacin 15 Caso 1 Vi morado y rojo en poco tiempo 95
Potenciometra 17 Caso 2 Sin aire me ahogo 96
Electroforesis 19 Caso 3 Todo gira a mi alrededor 97
Soluciones 22 Caso 4 Slo con sombrero salgo al sol 98
Manejo de material biolgico 28
Medidas de seguridad 31 V Casos anexos
Caso 1 Obesidad infantil 100
II. Prcticas de laboratorio Caso 2 Anorexia nerviosa 101
Caso 3 Diabetes mellitus gestacional 102
Prctica 1. Soluciones 42 Caso 4 Sndrome de Cushing iatrognico 102
Prctica 2. Regulacin del equilibrio cido-base 47 Caso 5 Insuficiencia heptica secundaria a cirrosis
despus de ejercicio muscular intenso y de la Heptica 103
ingestin de bicarbonato de sodio
Prctica 3. Cintica enzimtica. Efecto de la
concentracin del sustrato en la velocidad
de la reaccin enzimtica 51
Prctica 4. Estudio del bombeo de protones
por levaduras; efecto de los inhibidores
de la cadena de transporte de electrones
de los desacoplantes 57
Prctica 5. Determinacin de glucosa en
sangre total 60
Prctica 6. Determinacin de lipoprotenas 63
Prctica 7. Integracin metablica 71
Prctica 8. Huella gnica 79
 I

CONCEPTOS TERICOS INICIALES

3
EL MTODO CIENTFICO
La cultura no puede comprenderse sin hacer referencia al mtodo
cientfico. La ciencia no es un sector de la civilizacin que pueda
separarse del resto de ella, sino un esfuerzo creativo con su
propio sistema de valores que, poco a poco, ha llegado a formar
parte de los valores generales en la sociedad moderna.
La ciencia est basada en el mtodo cientfico; su
capacidad y limitaciones estn definidas por l y dondequiera que
el mtodo cientfico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en el ms remoto
pasado. Mucho antes de que existieran los registros histricos de
la humanidad, la magia primitiva dio origen tambin a la religin y,
mucho antes, al arte. Ciencia, religin y arte difieren en mtodos,
pero coinciden en metas: comprender e interpretar al universo y
la interaccin de sus partes para promover el progreso material y
espiritual de la humanidad.
El objetivo de la ciencia es hacer teoras. Las teoras
cientficas explican los hechos y predicen con alto grado de
probabilidad la ocurrencia de hechos similares.
La secuencia del mtodo cientfico es: observar, plantear
problemas, hacer hiptesis, experimentar y formular teoras.
Cada uno de los procesos del mtodo
cientfico, tomado aisladamente, forma parte de la actuacin
cotidiana de todos los seres humanos, pero, en su conjunto,
utilizados sistemticamente, constituyen la ms poderosa
herramienta que ha diseado la humanidad para conocer y
controlar a la naturaleza.
Observacin
El mtodo cientfico se inicia con la observacin. Lo que no puede
observarse, directa o indirectamente por medio de instrumentos o
de modificaciones de la conducta, no puede ser investigado por la
ciencia.
La observacin debe ser repetida en forma independiente
por observadores diversos. Las observaciones nicas, que no se
repiten ni actual ni potencialmente, no pueden ser objeto de
estudio cientfico.
Problema
Despus de que una observacin se hace y se repite, el segundo
tiempo del mtodo cientfico es plantear un problema; en otras
palabras, se hacen preguntas sobre la observacin: Cmo es
que los hechos ocurren de esta manera? Qu es lo que
determina su desarrollo, evolucin y trmino? Es en este punto
donde el cientfico difiere del hombre comn; ambos hacen
observaciones pero slo el primero muestra curiosidad cientfica
sobre ellas.
Plantear un problema es hacer preguntas, pero, hacer
buenas preguntas al igual que hacer buenas observaciones es
un arte muy preciado. Para que tengan valor cientfico los
problemas deben ser significativos y tener respuestas
comprobables por tcnicas apropiadas.
Las preguntas que se inician por cmo? o qu? se
resuelven mejor, cientficamente, que las que comienzan con
por qu?, pero los investigadores pueden formular los
problemas para que adopten la forma adecuada.
4
Hiptesis
Una vez planteado un problema adecuado, el cientfico procede
al tercer tiempo del mtodo: formular una explicacin o hiptesis.
Por supuesto que un problema puede tener varias explicaciones
posibles, pero slo una de ellas es la verdadera. Las respuestas
casuales a un problema son generalmente errneas; pero el
cientfico con su intuicin, su experiencia y, a veces por
incidentes afortunados, acierta en la hiptesis. Esto se sabe al
emplear el cuarto tiempo del mtodo cientfico.
Experimentacin
El objetivo de la experimentacin es comprobar la validez de la
hiptesis. Si los experimentos demuestran que la hiptesis es
errnea, se hace una nueva y se la sujeta a comprobacin. El
procedimiento puede prolongarse por mucho tiempo al formular
nuevas hiptesis y tratar de comprobarlas experimentalmente.
La situacin ideal en la experimentacin consiste en
reducir el problema a dos alternativas posibles que puedan
contestarse con claridad, afirmativa o negativamente; pero en
muchas ocasiones los resultados del experimento slo conducen
a soluciones parciales.
La experimentacin es la parte ms ardua del mtodo
cientfico. Cada experimento es un caso en s mismo; el
conocimiento anterior y la experiencia ayudan tcnicamente para
decidir la forma en que una hiptesis puede ser comprobada
experimentalmente. La eleccin correcta del experimento y su
interpretacin es lo que separa al genio del aficionado a la
investigacin.
Teora
Las pruebas experimentales son la base del quinto peldao, final
del mtodo cientfico: la formulacin de una teora. Cuando una
hiptesis se ha sostenido por pruebas convincentes, obtenidas
por muchos laboratorios e investigadores independientes, se
propone una teora que consiste en una afirmacin con lmites
mucho ms amplios que los experimentos en que se basa y que
expresa la creencia o probabilidad de que sea valedera en
cualquier combinacin de sujeto, tiempo y lugar en donde se
renan condiciones similares.
Desde este punto de vista una buena teora permite
hacer predicciones. Las predicciones cientficas tienen siempre
un soporte experimental muy slido y aun cuando no afirman que
un hecho ocurrir con certidumbre, s plantean que tiene una gran
probabilidad de ocurrir.
Unas pocas teoras han probado su validez tan
universalmente, y expresan tan alto grado de probabilidad, que se
las conoce con el nombre de leyes naturales. Por ejemplo,
ninguna excepcin se conoce al hecho de que una manzana
desprendida de su rbol caer al suelo si no es sostenida de
alguna manera. La ley de gravitacin se basa en esta
observacin.
Las leyes naturales orientan la investigacin cientfica. Si
en el anlisis de un hecho se elimina lo imposible, aquello que es
contrario a las leyes naturales, lo que resta, aunque sea muy raro
y poco probable, debe ser la verdad. La verdad son los hechos
que nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a nuestro
alrededor, muy pocas personas y muy pocas veces se hace un
anlisis cientfico de ellas.
5
 Si se emplean las leyes naturales para marcar lo
imposible, con el resto posible se hacen nuevas hiptesis, se
comprueban por experimentos, se formulan nuevas teoras y se
acumula el conocimiento cientfico que ha permitido al hombre
situarse en un Universo observable que tiene un radio (r) de
millares de millones de aos luz y que incluye un microcosmos
tan pequeo que se expresa en rdenes de magnitud menores de
20
10 m y adquirir un dominio incuestionable sobre su ambiente.
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES (SI)
Los resultados de todos los experimentos en que se basan las
teoras cientficas y las leyes naturales derivan de las mediciones
de objetos o de sus propiedades.
Medir es comparar magnitudes; toda medicin
comprende un nmero y una unidad. La unidad identifica la clase
de dimensin y el nmero expresa las veces que la unidad est
contenida en el objeto o la propiedad medida. La medicin es un
arte muy refinado; en la actualidad emplea instrumentos muy
complejos y alcanza una precisin extraordinaria.
Un sistema de medidas preciso requiere unidades bien
definidas. La Oficina Internacional de Pesas y Medidas revisa
peridicamente el sistema para incorporar los adelantos
tecnolgicos y mejorar la exactitud y precisin de las medidas.
Se han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un
sistema de unidades universalmente aceptable. El producto de
estos esfuerzos es el Sistema Internacional de Unidades (cuya
abreviatura es SI en todos los idiomas). A partir del creciente
intercambio de informacin cientfica este sistema ha sido
aceptado por toda la comunidad y en especial en medicina. El SI
es esencialmente una versin ampliada del sistema mtrico
decimal.
El SI comprende tres tipos de unidades: las unidades de
base, las unidades derivadas, las unidades suplementarias y una
serie de prefijos que permiten tomar mltiplos y submltiplos
decimales de las unidades utilizadas.
Unidades de base
El SI consta de siete unidades bsicas que son
dimensionalmente independientes. Las unidades bsicas estn
anotadas en el cuadro I.1, junto con los smbolos que hay que
utilizar para indicar estas cantidades.
Unidades SI derivadas
Al multiplicar una unidad de base por s misma o al asociar dos o
ms unidades de base por una simple multiplicacin o divisin, se
puede formar un amplio grupo de unidades llamadas SI derivadas
(cuadro I.2). Ejemplo: la unidad derivada de volumen es el metro
elevado al cubo, o metro cbico.
La combinacin de unidades de base para formar las
unidades derivadas es una de las grandes ventajas del SI. En el
SI no es preciso memorizar factores de conversin; el factor a
que se recurre para formar las unidades derivadas es 1 (unidad),
cualidad que hace al SI coherente.
6
Cuadro I.1. Unidades bsicas del SI. Prefijos SI
Cuando las unidades SI derivadas resultan demasiado grandes o
Magnitud Nombre Smbolo
Longitud metro m demasiado pequeas para determinados fines (sera
Masa kilogramo kg desproporcionado, por ejemplo, utilizar el metro cbico para
Tiempo segundo s expresar el volumen de sangre del cuerpo humano), el SI
Cantidad de mol mol
sustancia contiene una serie de prefijos que permiten formar mltiplos y
Temperatura kelvin K submltiplos decimales de las unidades SI (cuadro I.4).
termodinmica Los prefijos SI se anteponen directamente al nombre de
Intensidad luminosa candela cd
la unidad, sin signo de puntuacin alguno (ejemplo: nanmetro y
Intensidad de ampere A no nano-metro).
corriente elctrica El smbolo del prefijo se antepone tambin directamente
al smbolo de la unidad, sin espacios intermedios ni signos de
puntuacin (ejemplo: mm, milmetros; nmol, nanomol que
9
equivale 10 moles).

Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas simples

Magnitud Nombre Smbolo

2
Superficie metro m
cuadrado
3
Volumen metro m
cbico
3
Concentracin mol/metro mol/m
de sustancia cbico
Velocidad metro por m/s
segundo

A cierto nmero de unidades SI derivadas se les ha dado

nombres especiales, en su mayor parte tomados de los hombres
de ciencia que han hecho contribuciones notables al
conocimiento del tema de estudio correspondiente (cuadro I.3).

7
Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con nombres especiales Cuadro I.4. Prefijos SI.
Definicin
Magnitud Nombre Smbolo
Factor Prefijo Smbolo
2 18
Fuerza Newton Nm. kgm/s 10 exa E
15
Presin Pascal Pa N/m2 10 Peta P
12
Trabajo; Joule J Nm 10 Tera T
9
energa; 10 Giga G
6
cantidad de 10 Mega M
3
calor 10 Kilo k
A.s 3
Carga Coulomb C 10 Mili m
6
elctrica; 10 Micro
9
cantidad de 10 Nano n
electricidad 12
10 Pico p
Potencia; Watt W J/s 15
10 Femo F
flujo 18
10 ato q
energtico
Tensin Volt V W/A
elctrica;
potencial
Unidades no pertenecientes al SI
elctrico
Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan frecuente que en
Temperatura Grado C cierto modo forman parte de nuestra vida cotidiana y se acord
K273,16
Celsius Celsius utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5).
Algunas de estas unidades, en especial el litro y las
unidades de tiempo, son de gran importancia en las profesiones
de la salud. Conviene sealar que el litro es un nombre especial
que se da al submltiplo, decmetro cbico, de la unidad SI de
volumen.

8
Cuadro I.5. Algunas unidades no pertenecientes al SI. divisin se puede indicar mediante una barra oblicua o por
exponentes negativos:
Magnitud Unidad Smbolo Valor en
1
SI 1/s = s
Tiempo minuto min 60 s
mol por metro cbico puede expresarse por:
hora H 3 600 s 3 3
Da D 86 400 s mol/m o mol.m
El SI tiene muchas ventajas y algunas desventajas, pero
Volumen Litro loL 10-3 m3
se reconoce la realidad del esfuerzo para implantarlo como una
Energa calora cal 4.185J
forma de expresar los datos cientficos, comprensible para todos.
Se recomienda desechar las unidades que no pertenecen al SI a
Reglas de escritura de smbolos y cifras.
la mayor brevedad posible, pero la realidad del uso de otras
Los smbolos de las unidades no toman la terminacin del plural
unidades en textos y comunicaciones cientficas no se puede
(ejemplo: dos mililitros se escribe 2 ml, y no 2 mls).
negar. En este Manual las unidades SI se anotarn entre
Los smbolos de las unidades jams van seguidos de un
parntesis cuando se juzgue conveniente.
punto, salvo si estn al final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5
ml.).
Cuando se escriben cifras, la coma slo se puede utilizar
Algunas recomendaciones para utilizar el SI en bioqumica
para indicar los decimales; las cifras deben agruparse en tros,
dispuestos a la derecha y a la izquierda de la coma, y separados
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES
entre s por un pequeo espacio. Ejemplo:
La concentracin de sustancias cuya masa molecular se conoce
se expresa en forma de cantidad de sustancia, es decir, en moles
forma correcta: 1 000 000
(o en submltiplos como el milimol o el nanomol) por litro.
0,003 278
Ejemplo:
0.003 278
forma incorrecta: 1,000,000 cido rico en el suero o plasma:
0.003,278 Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
La multiplicacin de las unidades se indica con un punto Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2 mmol/l.
a nivel o elevado (newton. metro=N.m) o un espacio (N m). La Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1 mmol/l.
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 mol/l.

9
 La concentracin en forma de cantidad de sustancia no
debe ser denominada concentracin molar o molaridad, ni
utilizar el smbolo M en vez de mol/l (como tampoco mM, nM,
etctera, en vez de mmol/l, nmol/l, etctera).
La concentracin de sustancias cuya masa molecular se
desconoce o es dudosa se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etctera.
Ejemplo:
Protena srica total: 60 a 80 g/l.
Albmina srica: 33 a 55 g/l.
Globulina srica: 20 a 36 g/l.
Fibringeno en el plasma: 2 a 6 g/l.
Hormona antidiurtica en plasma: 2 a 12 pg/ml
Concentracin de sustancias en tejidos. Se expresa en
unidades de masa (si no se conoce la masa molecular) o en
moles (si se conoce la masa molecular) por kilogramo de tejido
seco o hmedo. Ejemplo:
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etctera.
No se recomienda expresarla en unidades de volumen, es
decir en mg/ml, g/l, etctera.
Concentracin de iones hidrgeno. La concentracin de
hidrogeniones en los lquidos biolgicos se expresa en nmol/l, as
como en unidades de pH. El valor del pH se define como el
logaritmo negativo de la actividad de los iones hidrgeno (pH = -
log H+), esta actividad puede determinarse potenciomtricamente
con la ayuda de un pH-metro.
Actividad enzimtica. La unidad SI de actividad cataltica
es mol por segundo: mol/s (tambin llamado katal, smbolo: kat) y
corresponde a la cantidad de sustrato transformado por segundo
como resultado de la catlisis. La velocidad medida es
proporcional a la cantidad de enzima presente.
La actividad tambin puede ser expresada en trminos de
unidades (smbolo: U). Por definicin, una unidad es igual a la
concentracin de enzima necesaria para la formacin de un
micromol de producto por minuto (mol/min). La actividad
especfica de una enzima se define como la concentracin de
producto que se forma por 1 miligramo de enzima por minuto.
MATEMTICAS PARA EL LABORATORIO
Notacin cientfica o exponencial
Cuando se expresan cantidades muy grandes o muy pequeas,
como es el caso frecuente en bioqumica, la dificultad de escribir
y manipular muchos ceros se evita con el uso de la notacin
exponencial o cientfica.
En la notacin exponencial todo nmero puede
expresarse como una potencia entera de 10, o como un producto
de dos nmeros, uno de los cuales es una potencia entera de 10.
Ejemplo: el nmero de Avogadro seiscientos dos sextillones se
escribe:
602 000 000 000 000 000 000 000
y en la notacin exponencial como una cantidad decimal
23
multiplicada por 10 elevada a la potencia apropiada = 6.02 x 10 .
Como ejercicio, examine las cantidades siguientes:
2
200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10
2
205 = 2.05 x 10
5
205 000 = 2.05 x 10
1
0.205 = 2.05 x 10
4
0.000 205 = 2.05 x 10
10
 7 63 3
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10 ya que 6/3 = 2 y 10 = 10
El exponente de la base 10 para nmeros mayores de la
unidad es el nmero de lugares desde la coma o punto decimal
separada de la primera cifra significativa: Para la adicin y la sustraccin usando notacin cientfica,
primero se escribe cada cantidad con el mismo exponente n.
2
205 = 2.05 x 10 = 2 lugares Luego se realiza la operacin deseada entre los valores N1 y N2,
donde N1 y N2 son los nmeros obtenidos con el mismo
Para fracciones decimales menores de la unidad se exponente; estos ltimos permanecen iguales. Ejemplo:
separa la primera cifra distinta de cero despus de la coma 2 3 3 3 3
(5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = 3.91 x 10
decimal y se cuentan los lugares hacia la izquierda hasta la coma
decimal, incluso la cifra separada y el nmero es el exponente
El mtodo del factor unitario en los Clculos
negativo:
El procedimiento que se utilizar para resolver problemas que
0.000 205 = 0.000 205 incluyan conversin de unidades se denomina mtodo del factor
unitario. Esta tcnica se basa en las propiedades del nmero 1,
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo tanto, es 2.05 x 10 es decir:
4
. Cualquier nmero al ser multiplicado por uno, sigue siendo el
Las operaciones de multiplicar y dividir, elevar a mismo nmero (1 x 5 = 5).
potencias o extraer races se facilitan manipulando los El nmero 1 puede ser escrito como el cociente de cualquier
exponentes segn reglas muy sencillas. La porcin decimal no nmero dividido por si mismo (3/3 6/6).
exponencial se opera en forma ordinaria, lo que reduce el manejo Se puede tomar cualquier ecuacin y dividirla por uno de los
a tres cifras significativas como mximo; los exponentes se miembros para obtener una razn igual al nmero 1.
suman algebraicamente para multiplicar, se restan para dividir, se Por ejemplo, dada la ecuacin:
multiplican por una potencia deseada para tener el exponente de 0 minuto = 60 segundos, obtener la razn igual al nmero 1.
la misma y para encontrar races se divide el exponente entre el
ndice de la raz. Ejemplos: 1 minuto = 60 segundos
1 minuto 1 minuto
6 3 9 10
6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10
6+3 9 1= 60 segundos 1= 1 minuto
ya que 6 x 3 = 18 y 10 = 10
6 3 3
1 minuto 60 segundos
6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10

11
 Estas razones o factores que son equivalentes al nmero forma correcta, todas las unidades se cancelan excepto la
1 se conocen como factores unitarios, factores de conversin o deseada.
coeficientes de conversin.
El recproco de cualquier factor unitario es tambin un Logaritmos
factor unitario.
En ambos casos el numerador y el denominador El logaritmo de un nmero es el exponente o potencia de una
describen la misma cantidad, por lo que se puede efectuar base determinada que se requiere para obtener el nmero. Si el
n
conversiones entre diferentes unidades que miden la misma nmero a elevado a la potencia n (a ) es igual al nmero N,
cantidad. entonces n es el logaritmo de base a del nmero N. Es decir:
n
si a = N entonces n = loga de N
El mtodo del factor unitario consiste en:
1. Tomar una relacin entre unidades y expresarla en forma de La base a puede ser cualquier nmero; en la prctica
una ecuacin, mdica se usa como base el nmero 10 y los logaritmos
2. Luego expresar la relacin en forma de una fraccin (llamada resultantes se conocen como logaritmos comunes o de Briggs.
factor de conversin) y, por ltimo; Su smbolo es: log o log.10
3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor. En esta Los logaritmos son indispensables para manejar los datos
multiplicacin, las unidades idnticas se multiplican o bioqumicos; constan de dos partes que se separan por una coma
cancelan como si fueran nmeros. o punto decimal; a la izquierda, la caracterstica corresponde al
-5
Ejemplo: Cuntos l hay en 0.00005 L (5 x 10 L)? orden de magnitud y puede ser positiva o negativa segn sea la
cantidad mayor o menor de la unidad. El exponente de la base 10
-6 6
1) 1 l = 10 L 1 L = 10 l para nmeros mayores de la unidad es siempre positivo. Cuando
es negativo se indica con el signo menos arriba del nmero que
2) 106 l la representa:
1L
0.001 = 10 -3 caracterstica 3
-5 [-5+ 6] 1
3) 5 x 10 L x= 5 x 10 = 5 x 10 l = 50l. 1 000 = 10 -3 caracterstica 3

En este mtodo las unidades se acarrean en todo el A la derecha, la mantisa es la fraccin decimal de
proceso del clculo, por lo tanto si la ecuacin se establece en exponente que corresponde a los dgitos que ocupan el orden de

12
magnitud; se obtiene de tablas o de calculadoras electrnicas y
siempre tiene valor positivo:
0.3010
log 2 = 0,3010 esto es 10 =2
Cuando la caracterstica y la mantisa son de diferente
signo (+ o ) se opera con el cologaritmo que se obtiene por la
suma algebraica de la mantisa positiva con la caracterstica
negativa es un nmero todo negativo, ver el siguiente ejemplo:
Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990
3.000
+0.3010
-2.6990 cologaritmo
La caracterstica indica la posicin del punto decimal en la cifra
representada por la mantisa y se determina por inspeccin del
nmero.
Para un nmero mayor que 1, la caracterstica es uno
menos que el nmero de cifras antes del punto decimal; as: la
caracterstica de 100 es 2 porque el nmero cien tiene 3 dgitos a
la izquierda del punto decimal. Para un nmero menor que 1, la
caracterstica es numricamente uno ms que el nmero de
ceros que siguen al punto decimal; as: la caracterstica de 0.000
000 1 es 7 con signo negativo.
Para encontrar el logaritmo de un nmero, por ejemplo:
0.000 809, se busca en la tabla las dos primeras cifras distintas
de cero de izquierda a derecha (80) en la primera columna
vertical de las tablas se sigue la horizontal correspondiente hasta
la columna 9, que es el otro nmero, en donde se lee 9 079, que
es la mantisa requerida. La mantisa para 809, 8.09, 0.0809,
etctera; es la misma (9 079), pero difiere la caracterstica. As:
Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921
Si el nmero del cual se requiere el logaritmo tiene cuatro
cifras, la cuarta se busca en la misma columna horizontal en la
parte de la tabla que dice partes proporcionales y debe
agregarse a la mantisa como diez milsimos.
Por ejemplo, para el nmero 8 091:
Mantisa para 809 = 9 079
parte proporcional para 1 = 1
0.9079
+ 0.0001
0.9080; log 8091 = 3.9080
El antilogaritmo es el nmero que corresponde a un logaritmo
dado. Para encontrarlo se busca la mantisa en la tabla de
antilogaritmos, se determina el nmero a que corresponde y se
fija la posicin del punto decimal segn la caracterstica. Por
ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29: la caracterstica es 1
(hay dos dgitos a la izquierda del punto decimal) y la mantisa es
0.6747, que se buscara en la tabla de logaritmos donde se
hallara que corresponde a 4 729.
Los estudiantes deben familiarizarse con el uso de
logaritmos en las operaciones comunes.
13
 El logaritmo del producto de dos nmeros es igual a la
suma de sus logaritmos:
log a x b = log a + log b
El logaritmo del cociente de dos nmeros es igual al
logaritmo del dividendo menos el logaritmo del divisor:
log a/b = log a log b
El logaritmo de la potencia n de un nmero es igual a
"n" veces el logaritmo del nmero:
3
log a = 3 x log a
Grficas
"Una figura equivale a mil datos en una tabla numrica" y as
como se construye un modelo para visualizar un conjunto
complejo de hechos, se utiliza una grfica para presentar los
datos experimentales en tal forma que fcilmente se asimilen y
aprecien sus relaciones cuantitativas.
Se llama grfica a la representacin esquemtica de las
variaciones que sufren las distintas magnitudes que intervienen
en los fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos, sociales o de segmentos de recta, se tiene la grfica poligonal.
cualquier otra ndole. Tiene por objeto mostrar rpida e
intuitivamente la relacin que guardan las magnitudes
comparadas.
Entre las diferentes clases de grficas que existen las
ms importantes son:
Grfica poligonal. Consiste en expresar las variaciones
de un fenmeno continuo por medio de puntos y de representar la
marcha de dicho fenmeno por medio de una lnea que une esos
puntos.
Para elaborar una grfica poligonal se trazan en un papel,
de preferencia milimtrico, dos rectas perpendiculares entre s
que se corten en cero. En cada una de ellas se representar una
de las magnitudes que se van a relacionar. El punto cero (0) se
llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el eje X y 0Y es el eje
Y. Para referirse al eje X generalmente se dice: eje horizontal o
eje de las abscisas (variable independiente) y para el eje Y: eje
vertical o eje de las ordenadas (variable dependiente).
Los ejes dividen su propio plano en cuatro regiones
llamadas cuadrantes que se numeran I, II, III y IV. En el
laboratorio utilizamos habitualmente slo el primer cuadrante
(figura I.1).
Las distancias a la derecha de 0, a lo largo del eje X, se
consideran como positivas y las de la izquierda como negativas.
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del eje Y, se miden las
distancias positivas y hacia abajo de 0 las negativas.
Despus se trazan los puntos cuyas distancias a uno de
los ejes sean proporcionales a la magnitud que se va a
representar y, finalmente, al unir estos puntos por medio de
Nota: por lo general, es mejor que la curva llene una
parte considerable de la pgina. Muy bien puede usarse la misma
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a menudo los valores
tienen un campo de variabilidad muy amplio, lo cual hace
necesario usar diferente escala para cada uno de los ejes.
Diagrama en barras. Cuando se quieren expresar simples
comparaciones de medidas entre s o para representar un
fenmeno discontinuo se emplean las barras, que pueden ser
horizontales o verticales.
14
 Barras verticales. Las magnitudes se representan por
medio de rectngulos, barras de base igual que descansan en el
eje de las abscisas y cuya altura es proporcional a la intensidad
del fenmeno y se mide en el eje de las ordenadas.
Barras horizontales. Las barras descansan sus bases en
el eje de las ordenadas y el fenmeno se mide en el eje de las
abscisas.
Grfica de sectores circulares. Para hacer una grfica de
este tipo hay que tener en cuenta que el crculo debe tener el
total de las magnitudes que se van a representar.
Los sectores circulares son proporcionales a las
magnitudes que representan; magnitud que se mide en grados de
circunferencia. Para determinar el nmero de grados que deben
tener dichas partes se plantearn una serie de reglas de tres para
cada una de ellas en las cuales se consideran: como 100% a la
suma total de las magnitudes que se quieren graficar,
para obtener en cada caso el porcentaje correspondiente; una
vez obtenido ste, se pasar a grados, considerando 360o como
100% y procediendo entonces a hacer la grfica.
ALGUNOS MTODOS UTILIZADOS EN BIOQUMICA
Centrifugacin
Un mtodo muy til en el laboratorio para separar sustancias de
diferente densidad suspendidas en un lquido es la centrifugacin;
en ella, la accin de la fuerza centrfuga (fuerza necesaria para
desplazar hacia afuera un determinado peso en direccin radial)
da como resultado que las partculas ms pesadas se
sedimenten ms rpido que las partculas ligeras.
La fuerza centrfuga depende de la cantidad de materia
(m) que se desplaza hacia afuera cuando est rotando a una
velocidad por minuto de (n) veces a una distancia radial (r) y se
expresa por la frmula:
2
f (en dinas) = 0.01096 n m r
En el sistema mtrico decimal, la unidad de f es la dina, la de m
es el gramo y la de r es el centmetro. Ejemplo: si se coloca un
gramo de agua en un tubo de centrfuga y se rota a 2 000 rpm
(revoluciones por minuto) a una distancia radial de 16 cm, la
fuerza es:
2
f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas
Si transformamos las dinas a peso, entonces el gramo de agua
tiene peso porque es atrado al centro de la Tierra de acuerdo
15
con la ley de la gravitacin y es atrado en estado normal, con
980 dinas de fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez de
dinas como la unidad de nuestro problema tendremos:
f = 0.01096 x n2mr = 717 g
980
o sea, interpretando la frmula, la fuerza de contencin para
sostener la unidad masa (el gramo) e impedir que se vaya del
centro de rotacin es la fuerza que la gravedad ejerca sobre 716
g o, dicho de otra manera, el gramo a esa velocidad pesa en el
fondo del tubo de la centrfuga 716 gramos comparado con el
tubo en reposo o 716 veces la fuerza de la gravedad (g).
La centrifugacin y ultracentrifugacin son operaciones
que se basan en el principio anterior y que permiten separar los
componentes de una mezcla.
Las centrfugas ordinarias operan a rotaciones menores
de 10 000 revoluciones por minuto (rpm). Las condiciones que
limitan esta velocidad son la resistencia de la parte de la
centrfuga que sostiene el rotor (brazo), la friccin con el aire y el
calentamiento.
Las ultracentrfugas operan en cmaras refrigeradas,
evacuadas de aire, y el rotor no gira sostenido por un brazo sino
impulsado por chorros de aceite o aire comprimido que se aplica
a una porcin externa del rotor sostenido por una pared muy
gruesa de una cmara cilndrica de rotacin. Se alcanzan
velocidades de 20 000 a 70 000 rpm.
La sedimentacin en la ultracentrfuga se expresa en
unidades Svedberg (smbolo: S) y se aplica a la comparacin
prctica de tamaos moleculares que no slo dependen de la
masa de las molculas implicadas sino tambin de su forma. Es
importante considerar que los valores de Svedberg no son
aditivos, es decir, dos partculas 5S no crean una partcula 10S.
Sin embargo, hay una correspondencia tosca que para las
protenas esfricas es de:
2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal
8 S = 160 kdal
16 S = 400 kdal
13
La unidad Svedberg es igual a 10 segundos; no
pertenece al SI y puede suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100
femtosegundo (fs). En las molculas menos densas que el medio
de suspensin, como las lipoprotenas, el desplazamiento es
hacia la superficie y se expresa en Svedberg de flotacin (Sf) y
permite la clasificacin en: LDL, HDL y VHDL (low density, high
density y very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a 400 y las muy
densas que no flotan y tienen una densidad mayor de 1.
El peligro del mal uso de la centrfuga deriva de la enorme fuerza
que alcanza en el radio de rotacin y el peso de las sustancias
colocadas en el campo gravitacional del aparato.
Se debe tener cuidado con los siguientes puntos:
1. Los tubos en las centrfugas debern colocarse por pares
para que no haya diferencia de peso en un lado de la centrfuga.
Enfrente de un tubo de un peso determinado debe estar otro, en
la misma posicin, con el mismo peso. El descuido de esta regla
implica un desnivel que, a las velocidades y fuerzas sealadas,
puede romper los tubos y daar el aparato. Para balancear por
pares los tubos lo mejor es usar una balanza de dos brazos y
ajustar el peso hasta que sea idntico.
16
2. Para no forzar el motor arrnquese gradualmente la centrfuga
hasta alcanzar la velocidad requerida.
3. Nunca se frene una centrfuga; djese parar por su propia
inercia; el no hacer esto conduce a que se agite el contenido
de los tubos y se eche a perder el trabajo.
4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando est en
movimiento.
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte al profesor.
Potenciometra
Muchas de las reacciones que se realizan en las clulas son
reacciones de oxidacin y de reduccin, es decir, en las que se
transfieren electrones.
La electroqumica estudia las reacciones qumicas en las
que hay transferencia de uno o ms electrones.
La oxidacin es la prdida o liberacin de electrones y la
molcula que los cede se denomina agente reductor.
La reduccin es la ganancia de electrones y la molcula que los
acepta se denomina agente oxidante.
Cuando se oxida un agente reductor, se transforma en su
forma oxidada y como la reaccin es reversible las formas
oxidada y reducida del compuesto constituyen un par conjugado
llamado par redox o par de oxidorreduccin.
El proceso de oxidacin siempre va acompaado del
proceso de reduccin ya que los electrones que cede una
molcula reductora son aceptados por una molcula oxidante, lo
cual constituye las reacciones de oxidorreduccin o reacciones
redox.
La determinacin cuantitativa de la concentracin de las
molculas oxidantes y reductoras en una solucin es el objeto de
estudio de la potenciometra. En esta tcnica se determina el
potencial elctrico generado por la transferencia de electrones en
una reaccin redox en la cual estn involucradas las molculas a
estudiar. Este potencial se mide en una celda electroqumica. La
celda ms comn es la de Daniell (Fig. I.2), en la que en dos
compartimientos separados que contienen ZnSO4 y CuSO4 se
colocan cinc y cobre metlico, respectivamente; las dos
soluciones se conectan por un puente salino (un tubo que
contiene agar embebido en una solucin de un electrolito como el
KCl). Cuando los dos electrolitos se conectan por un alambre
metlico, ocurre un flujo de electrones del electrodo de cinc al
electrodo de cobre, el cual puede ser medido por medio de un
voltmetro. Cuando el cinc cede los electrones se convierte en ion
soluble, mientras que el cobre disuelto, al aceptar los electrones,
se convierte en cobre metlico que se deposita en el electrodo. El
puente salino cierra el circuito elctrico entre las dos soluciones.
El hecho de que fluya una corriente elctrica del polo
positivo (nodo, que en este caso es el electrodo de cinc) al polo
negativo (ctodo, que en este caso es el electrodo de cobre),
significa que hay una diferencia de potencial entre los electrodos
denominada fuerza electromotriz (fem) de la celda. Dado que el
potencial de un electrodo est relacionado con la magnitud de
cargas positivas existentes, la diferencia de potencial compara las
cargas relativas existentes en dos puntos. Se denomina potencial
de electrodo (E) a la diferencia de potencial respecto a un
electrodo de referencia arbitrario y depende de la concentracin
de las molculas en la solucin y de la temperatura.
En general, el potencial de los electrodos se mide con
referencia al electrodo de hidrgeno al que se le ha asignado.
17
En general, el potencial de los electrodos se mide con referencia
al electrodo de hidrgeno al que se le ha asignado
arbitrariamente un potencial de cero a 25o C a una concentracin
de 1 mmol/L y una presin del gas de una atmsfera. Sin
embargo, en la prctica es inconveniente porque se trata de un
electrodo gaseoso.
Fig. 1.2 Celda de Daniell
Es por ello, que se usan otros electrodos de referencia,
como el de calomel, en el cual el sistema de medicin es
mercurio y cloruro mercuroso. En el caso de este electrodo, como
sucede con todos los pares redox, debe calibrarse con respecto
al electrodo de hidrgeno.
Los pares redox de inters para el bioqumico incluyen a
menudo al ion hidrgeno como reactivo o como producto, por lo
que tales sistemas estn en funcin del pH del medio.
Hay diferentes tipos de electrodos: los metlicos (como
los de la celda de Daniell), los metlicos-sal insoluble (como el de
plata/cloruro de plata), los gaseosos (como el de hidrgeno, que
se adsorbe sobre platino), los electrodos selectivos de iones (que
pueden ser para aniones o para cationes) y los de vidrio (que son
+
electrodos selectivos de iones, especiales para determinar H ).
Estos ltimos son los ms utilizados ya que una de las
aplicaciones prcticas ms importantes de la potenciometra es la
determinacin del pH.
Dentro del electrodo de vidrio hay un alambre de plata
con un extremo sumergido en una solucin de HCl 0.1M. El bulbo
de la parte inferior es de un vidrio especial, permeable a los iones
+
H . La superficie interior de esta membrana de vidrio est en
contacto con la solucin de HCl y la exterior con la solucin cuyo
pH se quiere determinar. En las dos superficies la membrana de
vidrio absorbe agua y forma una capa de gel a travs de la cual
difunden los iones hidrgeno y desplazan a otros iones de la
estructura del vidrio (como sodio) y esto provoca el
establecimiento de un potencial. En una solucin amortiguadora
que contenga Cl se sumerge un electrodo de Ag/AgCl. Cuando
el electrodo se coloca en una solucin cuyo pH es diferente al de
la solucin amortiguadora, aparece una diferencia de potencial
entre los dos extremos, lo cual es una medida de la diferencia de
los dos valores de pH.
La determinacin ms precisa del pH se realiza en un pH-
metro que consiste, fundamentalmente, en un potencimetro
diseado para emplearse con un sistema de electrodo de vidrio.
Como una unidad de pH corresponde a 59 milivoltios a 25 C, el
mismo medidor se puede usar con dos escalas para hacer
lecturas en mv o en pH. El electrodo de vidrio consiste en una
membrana de vidrio situada al final de un tubo de vidrio o plstico
de paredes ms gruesas. En el tubo se encuentra cido
clorhdrico diluido saturado de cloruro de plata y un hilo de plata
18
que conecta a la terminal del voltmetro con un electrodo de
referencia. El pH se determina midiendo la diferencia de potencial
a travs de la membrana de vidrio que separa la solucin a la
cual se quiere determinar el pH, de la solucin de referencia cuya
concentracin de hidrogeniones se conoce.
El esquema del circuito de un potencimetro tpico se
encuentra en la figura I.3. La sensibilidad del medidor se puede
ajustar para cambios de acuerdo a la temperatura (botn de
control de temperatura). Con el botn de calibracin a cero se
introduce un voltaje lateral en el circuito que permite que la
lectura corresponda al pH de la solucin reguladora tipo. Los
medidores de pH se construyen de tal manera que el cero de la
escala del potencimetro corresponda a un pH de 7. El medidor
se calibra antes de usarlo, primero
con una solucin reguladora de pH 7, ajustando el cero para que
d la lectura exacta; se lava el electrodo con agua destilada o
desionizada y se calibra con una segunda solucin reguladora de
pH 4 10; se ajusta nuevamente el medidor, ahora con el control
de temperatura, para que d la lectura exacta; luego se determina
el pH de la solucin problema.
Electroforesis
Una partcula coloidal o un ion provistos de carga elctrica
emigran hacia el nodo o el ctodo bajo la influencia de un
campo elctrico externo. Si las partculas de una mezcla tienen
diferentes velocidades de desplazamiento, puede aprovecharse
esta propiedad para separarlas. El empleo de fuerzas elctricas
para lograr esta separacin se llama electroforesis y depende
fundamentalmente de la carga y no de la masa molar de las
partculas cargadas. Esta tcnica se ha empleado en la
separacin de protenas, pptidos, nucletidos, cidos orgnicos
y porfirinas, entre otros compuestos. Es importante considerar
que en el caso de una protena su carga depende del pH del
medio, por lo que es posible emplear la tcnica para determinar el
punto isoelctrico de la misma.
Si se aplica un campo elctrico a travs de una solucin,
la fuerza que acta sobre las molculas cargadas de soluto
depende de la carga elctrica (e); del nmero de cargas en la
molcula (z), y de la fuerza del campo elctrico (E).
Inmediatamente despus de poner a funcionar el campo, las
partculas cargadas se aceleran hasta que alcanzan un equilibrio,
o sea, cuando la carga electrosttica queda equilibrada por la
fuerza de friccin que ejerce el medio disolvente; entonces, se
mueven a una velocidad constante. La velocidad por unidad de
campo elctrico se denomina movilidad electrofortica. Dado que
la friccin depende del tamao de la partcula y de la viscosidad
19
del medio en que se mueve, la facilidad con la que se mueve una
partcula cargada depende directamente de su carga e
inversamente de su tamao y de la viscosidad del medio.
Existen dos tipos de electroforesis: la frontal y la zonal.
Electroforesis frontal o en medio lquido. Es el mtodo
clsico de Tiselius en el que la separacin de los componentes
de una mezcla se realiza en varios frentes o lmites que se
traslapan a lo largo del procedimiento. El movimiento de los
frentes se realiza en un canal vertical y la densidad de la solucin
por debajo del frente debe ser mayor que la de arriba, ya que en
caso contrario el sistema de frentes se destruira. En el mtodo,
la solucin a separar se coloca encima del medio amortiguador
conductor. La tcnica es difcil y costosa, aunque puede
presentar la ventaja de que se evitan las interacciones de los
solutos con cualquier superficie y se eliminan as los efectos
adsorbentes y desnaturalizantes. Adems, puede operarse en
medios acuosos, a baja temperatura y bajo condiciones
favorables de pH y fuerza inica.
Electroforesis zonal. Uno de los problemas que presenta
la tcnica anterior es la necesidad de estabilizar las zonas de
soluto contra la conveccin gravitacional y la difusin. Esto
origin el empleo de otra tcnica de electroforesis: la
electroforesis zonal. En ella, el empleo de gradientes de
densidad, slidos porosos o fibrosos y geles permite resolver el
problema de la difusin y de la conveccin gravitacional.
En este tipo de electroforesis la mezcla de solutos a
separar se aplica como una mancha o una banda delgada en un
punto del canal electrofortico. Los solutos migran con distintas
velocidades (de acuerdo a su movilidad) y se separan en zonas
discretas. La distancia de migracin es directamente proporcional
al voltaje aplicado y al tiempo. Los solutos migran a travs del
solvente que baa un soporte slido. Este soporte puede ser de
diversa naturaleza y cada uno presenta algunas ventajas y
desventajas en su uso. Los soportes ms comunes son papel,
acetato de celulosa, almidn, agar, agarosa y poliacrilamida.
Dado que en el caso de los geles es posible un manejo del
tamao del tamizado para lograr una mxima eficiencia en la
separacin, este mtodo es el ms usado en bioqumica.
En la tcnica hay que cuidar algunos aspectos que
pueden afectar la separacin como: la seleccin adecuada del
soporte, del amortiguador, vigilar la temperatura de la cmara, la
intensidad del campo elctrico, el tiempo, etctera.
Electroforesis en papel y en acetato de celulosa. La
electroforesis en papel fue el primer mtodo de separacin en
zonas en un campo elctrico. Es una tcnica sencilla y rpida,
que requiere pequeas cantidades de muestra y que es
especialmente til en las electroforesis de alto voltaje para
separar molculas de bajo peso molecular como aminocidos,
pptidos, oligonucletidos y otros compuestos orgnicos con
grupos cargados. Ha sido muy utilizada en el mapeo
bidimensional de protenas (huella gnica), para identificar
diferencias entre protenas similares, probar que una protena es
producto de otra de mayor tamao, etctera.
Dado que el papel tiene una alta actividad endosmtica*,
lo que causa algunos problemas en la electroforesis, ha sido
sustituido por el acetato de celulosa, que tiene una estructura
microporosa uniforme, actividad endosmtica baja y en el que la
adsorcin de las protenas ha sido eliminada.
En los aparatos en que se realizan estas tcnicas el
soporte se humedece al sumergirlo en el amortiguador y colocarlo
20
de tal manera que se establezca el contacto con las soluciones
en que estn los electrodos. Los aparatos se tapan para evitar la
evaporacin y para mantener una atmsfera hmeda dentro del
aparato.
Electroforesis en geles de agar y agarosa. El agar es una
mezcla de polisacridos que se obtiene de ciertas especies de
algas marinas. Est constituido de dos componentes principales:
uno lineal o agarosa y uno ramificado y muy cido llamado agar o
pectina. El agar y la agarosa son solubles en soluciones acuosas
a 100oC y solidifican a temperatura ambiente; forman geles de
buena firmeza cuando se usan a una concentracin de 0.5 a 2%.
Su estructura se mantiene por numerosos puentes de hidrgeno
entre cadenas adyacentes de polisacridos. El gel de agarosa
ofrece ciertas ventajas sobre otros soportes; posee una porosidad
elevada y uniforme, lo que favorece la migracin regular de las
sustancias cargadas, lo cual se traduce en una mayor resolucin.
Para realizar la electroforesis en estos medios se prepara
el gel sobre una superficie de vidrio. Una vez solidificado el gel,
se hacen pocillos en l para aplicar en ellos la muestra. Se lleva a
cabo, o se "corre", la electroforesis y, al final, se fija la
preparacin, se tie y se seca. La tcnica se ha usado en
combinacin con la inmunodifusin en el anlisis inmunolgico de electrodos y los sistemas electroforticos) y discontinuos, en los
protenas y en la cuantificacin de protenas inmunoprecipitables.
La electroforesis en agarosa ha permitido el estudio de
las molculas del DNA, cuyo tamao impide que puedan penetrar
en los geles de poliacrilamida, pero que penetran fcilmente en
6
geles de agarosa a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 , o
6
a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .
Es posible separar molculas de DNA que difieren slo
1% de peso molecular segn sea la concentracin de la agarosa.
Para detectar las bandas, se sumerge el gel en una solucin de
bromuro de etidio el cual se pega al DNA y fluoresce cuando se
excita con luz ultravioleta. El peso molecular se determina por la
distancia de migracin. Tambin se han usado estos geles de
agarosa para la obtencin de mapas de restriccin, los que
permiten ver diferencias entre dos molculas de DNA, localizar
mutaciones, detectar recombinaciones de fagos, aislar
fragmentos de DNA deseados, distinguir entre el DNA lineal,
circular o superenrollado.
Electroforesis en geles de poliacrilamida. Los geles de
poliacrilamida son geles totalmente sintticos que han sustituido a
los geles de almidn en el estudio rutinario de protenas por
mtodos electroforticos. Esto ha sido posible gracias a la gran
facilidad con que puede variarse segn el contenido total del
monmero y su grado de entrecruzamiento. Dada su capacidad
de filtrador molecular, se ha empleado para separar compuestos
con base en su peso molecular para lo que se usa lauril sulfato
de sodio (SDS) con el objeto de evitar las diferencias individuales
en las cargas de las protenas.
Los amortiguadores que se usan pueden ser continuos (en los
que se utiliza el mismo amortiguador en los tanques de los
que hay dos tipos de geles: el de separacin, o de poro cerrado,
en el cual se resuelven los componentes de una mezcla (aqu es
importante el uso del amortiguador adecuado) y el gel
concentrador, o de poro abierto, que sirve para concentrar la
muestra. A los geles se les puede incorporar sustancias
disociantes como la urea y el SDS sin que sean afectados.
Tambin pueden emplearse agentes reductores como el 2
21
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los puentes disulfuro de
las protenas.
Las dos aplicaciones principales de la electroforesis
discontinua son la determinacin de la pureza de protenas y el
anlisis de los componentes de una mezcla. La electroforesis en
gel de poliacrilamida en presencia de SDS tambin se ha
empleado en la determinacin de los pesos moleculares de
protenas.
Electroenfoque. Si se coloca una protena en un gradiente de pH
sujeto a un campo elctrico, se mover hasta alcanzar su punto
isoelctrico, donde permanecer sin moverse. Esta tcnica es lo
que se conoce como electroenfoque. Para formar un gradiente
estable y continuo de pH se usan anfolitos sintticos de una gran
variedad de pesos moleculares y rangos de pH. Cuando se
establece el campo elctrico, los anfolitos migran y generan el
gradiente de pH segn sus propios puntos isoelctricos. Esta
tcnica ha sido utilizada en combinacin con la separacin por
pesos moleculares en la electroforesis bidimensional como
mtodo de anlisis de protenas.
*Nota: Cuando se aplica un potencial elctrico a un lquido
contenido en un soporte no conductor el lquido se mover hacia
uno u otro electrodo, en favor o en contra del movimiento
electrofortico, alterando la movilidad electrofortica de las
partculas cargadas. Este fenmeno se conoce como
endosmosis. Si el soporte est cargado, induce la orientacin de
las cargas con signo opuesto en el lquido, lo que ocasionar al
aplicar la corriente elctrica que ocurra un flujo del lquido dentro
del canal electrofortico. Este fenmeno es lo que se conoce
como actividad endosmtica y puede causar problemas en las
separaciones electroforticas.
SOLUCIONES
Una solucin es una mezcla homognea de por lo menos dos
componentes: una fase dispersa, que es el soluto (sustancia que
se disuelve), y una dispersora que constituye el solvente o
disolvente (la sustancia que disuelve al soluto) y que,
generalmente, se encuentra en mayor proporcin. Las soluciones
ms utilizadas en bioqumica son las que tienen agua como
solvente.
La solubilidad de un soluto en un solvente depende de la
naturaleza de stos, de la temperatura y, en el caso de un gas,
de la presin. La solubilidad generalmente est dada en gramos
de soluto por 100 g de solvente.
Se llaman soluciones diluidas las que contienen una
proporcin relativamente pequea de soluto; se llaman
soluciones concentradas las que contienen una gran cantidad de
soluto. Slo son posibles soluciones concentradas cuando el
soluto es muy soluble.
Una solucin saturada contiene la cantidad de soluto
disuelto necesaria para la existencia de un equilibrio entre las
molculas disueltas y las molculas en exceso que no estn
disueltas. Esta solucin se forma por medio de una vigorosa
agitacin con exceso de soluto. Existe una solucin
sobresaturada cuando en la solucin hay presente ms soluto
que en una solucin saturada. Para prepararla se forma una
solucin saturada a temperatura elevada y se enfra
cuidadosamente para evitar la cristalizacin. Las soluciones
sobresaturadas son inestables y con facilidad se convierten en
soluciones saturadas.
Las mencionadas soluciones son poco precisas y no
indican, de manera cuantitativa, el soluto ni el solvente; los
22
mtodos cuantitativos ms comunes, que sirven para expresar la v/v: 30 ml de ste en 100 ml de solucin. Esto quiere decir que
concentracin (la medida numrica de la cantidad relativa de por cada 100 ml de solucin, 30 ml corresponden al soluto y el
soluto en la solucin) de las soluciones, son las porcentuales, las resto, hasta completar 100 ml, al agua destilada o al solvente
molares y las normales. empleado.
Soluciones porcentuales
En las soluciones porcentuales no se toma en cuenta el peso
%v/v = volumen de soluto x 100
frmula del soluto. En este tipo de soluciones se debe especificar
100 volmenes de solucin
si la relacin es peso a peso (p/p), peso a volumen (p/v) o
Es importante insistir que los trminos porcentuales
volumen a volumen (v/v). Ejemplos:
expresan siempre una relacin, es decir, podemos variar los
Solucin porcentual p/p. Solucin al 10% de NaCl volmenes siempre y cuando no perdamos dicha relacin. Por
contiene 10 g de la sal por 100 g de solucin. El peso/peso ejemplo, si nos pidieran preparar 50 ml de una solucin de
porcentual expresa el nmero de gramos del soluto en 100 alcohol etlico a 20%, seguiramos el siguiente planteamiento:
gramos de la solucin final.
100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro
%p/p = g de soluto x 100
100 g de solucin
X = 20 x 50 x 10
100
Solucin porcentual p/v. Solucin de NaCl a 10% p/v: 10 g de
NaCl en 100 ml de solucin. Esto expresa el nmero de gramos
Resultado: necesitamos 10 ml de alcohol puro y
de soluto en 100 ml de la solucin final. En bioqumica, si no se
completar un volumen de 50 ml.
especifica otra situacin, las soluciones porcentuales deben
El alcohol etlico comn es de 96% de pureza (v/v). Por lo
entenderse como p/v.
tanto, si no contamos con alcohol puro y quisiramos preparar
una solucin de alcohol a 20%, seguiramos el siguiente
%p/p = g de soluto x 100 planteamiento:
100 ml de solucin
100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro
X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
Solucin porcentual v/v. Se utiliza cuando el soluto y el
solvente son lquidos. El v/v indica el nmero de volmenes de
X= 20 x 100 = ml de solucin
soluto por 100 volmenes de solucin. Solucin de etanol a 30%
96

23
 Resultado: necesitamos 20.83 ml de solucin de alcohol molecular (Na: 23 + Cl: 35.5 = 58.5) y este valor en gramos
a 96% y completar un volumen de 100 ml. disolverlo en agua, hasta completar un litro.
Si tan slo queremos 50 ml de esta nueva solucin, Ahora bien, si nos piden preparar 400 ml de una solucin
entonces: 0.5 M de NaCl: cuntos gramos de NaCl deben pesarse?

100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen 20.83 ml de alcohol a 1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5 g.
96% 2. Haremos el siguiente planteamiento:
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml de alcohol a 96% Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.
X= 50 x 20.83 = 10.41ml
100 X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl
100
Resultado: necesitamos 10.41 ml de alcohol de 96% y
completar con agua destilada hasta un volumen final de 50 ml. 3. De acuerdo con la definicin de solucin molar, los 29.25 g de
NaCl los consideramos en un litro de solucin, pero como nos
piden preparar 400 ml haremos el siguiente planteamiento:
Soluciones molares
En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl
Una solucin molar se define como el nmero de moles de soluto
En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl
en un litro de solucin:
M= No. de moles
X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl
litro de solucin
1000

donde un mol es igual al peso atmico o molecular expresado en

Resultado: necesitamos 11.7 g de NaCl y disolverlo hasta
gramos (tomo gramo o molcula gramo). Un mol contiene el
23 completar un volumen de 400 ml.
nmero de Avogadro (6.023x10 ) de partculas, tomos o
En este ejemplo, cmo podemos ver, hemos multiplicado
molculas.
la molaridad del problema (0.5 mol/L) por el peso molecular de
Si un mol de una sustancia se disuelve en agua hasta un NaCl (58.5 g) y por el volumen del pro-
volumen de un litro, se obtiene una solucin 1 molar (1M). blema (400 ml). Posteriormente dividiremos entre 1 litro (1 000
Por ejemplo, si quisiramos preparar una solucin 1 ml). Para simplificar el procedimiento podemos aplicar la
molar de NaCl, tendramos que considerar, primero, su peso siguiente frmula:
V x PM x M = gramos de la sustancia

24

1000 OH por molcula; su peso molecular es de 78; por lo tanto, su
peso equivalente es 78/3 = 26.
El peso equivalente de una sal se calcula dividiendo el
En donde:
peso molecular entre la valencia total de los cationes (cargas
V= Volumen del problema en ml.
positivas) que contenga la frmula. La valencia del sodio es 1, y
PM = Peso molecular de la sustancia en g.
el sulfato de sodio Na2SO4 (peso molecular 144) tiene dos iones
M= Molaridad del problema.
de sodio en cada molcula; por lo tanto, el peso equivalente del
sulfato de sodio ser 144/2 = 72.
Soluciones normales
El peso equivalente de un oxidante (reductor) se calcula
Son las que contienen el peso equivalente de una sustancia en
dividiendo el peso molecular entre el nmero de electrones
gramos por litro de solucin:
ganados (o perdidos) que puedan aportar por molcula.
N = peso equivalente Recordemos la frmula utilizada para calcular la cantidad
litro de solucin de sustancia necesaria para preparar cualquier cantidad de una
solucin determinada:
Para calcular la cantidad de una sustancia que se necesita pesar
donde el peso equivalente de una sustancia es el nmero de
para preparar un volumen determinado de una solucin de
unidades de esta sustancia que puede combinarse con una
cualquier normalidad, se aplica una frmula semejante:
unidad de hidrgeno:
V x Eq x N = gramos de la sustancia
Peso equivalente = peso molecular
1000
n

n = nmero de hidrgenos sustituibles. Ejemplo: preparar una solucin 0.1 N de cloruro de calcio
(CaCl2) para obtener un volumen de 300 ml:
Ejemplo: el peso equivalente de un cido se calcula
dividiendo el peso molecular entre el nmero de tomos de V = 300 ml
hidrgeno sustituibles en la molcula. El cido sulfrico (H2SO4), N = 0.1
Eq = peso molecular del CaCl2 111/2 = 55.5
de peso molecular 98, tiene dos tomos de hidrgeno sustituibles
en cada molcula; por lo tanto, su peso equivalente es: 98/2 = 49. Sustituyendo=300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67
1000
El peso equivalente de un hidrxido se calcula dividiendo

el peso molecular entre el nmero de grupos hidroxilo (OH ) de la
molcula. El hidrxido de aluminio Al (OH)3 contiene tres grupos

25
 Resultado: necesitamos 1.67 g de CaCl2 para preparar
300 ml de una solucin 0.1 N.
Soluciones osmolares
El fenmeno de la smosis se presenta cuando una solucin est
separada de su solvente por una membrana semipermeable. La
smosis es la difusin de solvente a travs de la membrana
desde la parte de menor a la de mayor concentracin. La presin
osmtica es la presin que debe aplicarse sobre la solucin de
mayor concentracin a fin de impedir el paso del solvente
(smosis) a travs de la membrana.
Las membranas biolgicas tienen permeabilidades dis-
tintas y se dice que son semipermeables, es decir, que son
permeables de forma selectiva para las molculas del solvente o
pequeas molculas, pero no permiten el paso libre de todas las
molculas disueltas.
Las mediciones cuantitativas demuestran que la presin
osmtica es proporcional a la concentracin molar (para
sustancias no disociables) del soluto, por lo que una solucin
osmolar es aquella que contiene un mol de la sustancia en
gramos en un litro de solucin; el osmol es una medida del
nmero total de partculas en solucin. La concentracin
expresada en osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol por
kilogramo de disolvente se denomina osmolalidad; en las
soluciones muy diluidas, como son las del cuerpo humano, las
dos medidas son tan cercanas que con gran frecuencia se utilizan
indistintamente.
La presin osmtica depende del nmero de partculas y
no de su carga, ni de su masa; la misma fuerza osmtica es
ejercida por una molcula grande, como una protena, con peso
molecular de varios miles y muchas cargas, como por una
+
molcula de glucosa o un ion de Na o de Cl . As para
determinar el efecto osmtico de una solucin hay que sumar los
efectos de todas las partculas incapaces de atravesar la
membrana independientemente de su peso molecular.
Por ejemplo: el cloruro de sodio en solucin acuosa se
+
disocia casi completamente en iones sodio (Na ) y cloruro (Cl ).
Por lo tanto, cada molcula da origen a dos partculas
osmticamente activas, y una solucin osmolar contiene media
molcula gramo (peso molecular expresado en gramos) por litro,
o sea:
1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l tambin
1 mol de NaCl = 2 osm/l
En cambio, la glucosa en solucin no se disocia y para
esta sustancia la solucin osmolar contiene un mol en gramos por
litro:
1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
La mayora de los lquidos corporales tiene una presin
osmtica que concuerda con la de una solucin de cloruro de
sodio a 0.9 % y se dice que esta solucin es isosmtica con los
lquidos fisiolgicos.
Soluciones isotnicas
Las soluciones isotnicas con respecto unas a otras ejercen la
misma presin osmtica; es decir, contienen la misma
concentracin de partculas osmticamente activas. Cuando se
habla de soluciones isotnicas en
26
el laboratorio, suele tratarse de las que tienen la misma presin
osmtica que el plasma sanguneo, que es aproximadamente de
0.3 osmolar (300 miliosmoles). Las soluciones fisiolgicas de
concentracin menor a 300 mosm/l se llaman hipotnicas;
cuando su concentracin es mayor de 300 mosm/l se denominan
hipertnicas.
Una solucin es isotnica con respecto a una clula viva
cuando no ocurre ganancia ni prdida neta de agua en la clula,
ni se produce ningn otro cambio en sta cuando entra en
contacto con la solucin.
El trmino isotnico, que significa: igualdad de tono, se
emplea en medicina como sinnimo de isosmtico; pero los
trminos isotnico y tonicidad slo deben emplearse en relacin
con un lquido fisiolgico. Por ejemplo, una solucin de cido
brico que es isosmtica con la sangre y el lquido lagrimal, slo
es isotnica con el lquido lagrimal, ya que esta solucin ocasiona
hemlisis de los eritrocitos porque las molculas de cido brico
atraviesan libremente la membrana eritrocitaria a cualquier
concentracin. En consecuencia, isotonicidad connota
compatibilidad fisiolgica, mientras que isoosmoticidad, no
necesariamente. En otras palabras, la tonicidad es una fraccin
de la presin osmtica total de la solucin; por tanto, la tonicidad
de una solucin no se puede predecir nicamente por su
composicin ya que intervienen tambin las propiedades
distintivas de la membrana limitante.
Clculo y expresin de diluciones
La dilucin consiste en preparar una solucin menos concentrada
a partir de una solucin inicial ms concentrada. Las diluciones
se expresan usualmente como una razn matemtica, como 1:10.
Esto significa una unidad de solucin original diluida a un
volumen final de 10, esto es, 1 volumen de solucin original con 9
volmenes de solvente (volumen final = 10).
Para calcular la concentracin de la solucin diluida se
multiplica la concentracin de la solucin original por la dilucin
expresada como fraccin.
Ejemplo: una solucin de 300 mg/100 ml se diluye en la
razn 1:10. La concentracin de la solucin final es:
300 x 1/10 = 30 mg /100 ml.
Si se hace ms de una dilucin, a partir de una misma
solucin, la concentracin de la solucin final se obtiene al
multiplicar la concentracin original por el producto de las
diluciones. Ejemplo: la solucin anterior se diluye a su vez en la
razn 1:100. La concentracin de la solucin ser: 300 x 1/10 x
1/100 = 0.3 mg/100 ml.
La dilucin y redilucin sistemticas de una solucin se
llaman diluciones seriadas. Para encontrar la concentracin en un
tubo dado de la serie, se multiplica la dilucin en ese tubo por
cada una de las diluciones precedentes, incluida la del tubo
original.
Ejemplo: hacer una dilucin seriada 1:2, 1:4, 1:8,
etctera, a un volumen final de 1 ml.
Paso 1: a 0.5 ml de la solucin a diluir, aadirle 0.5 ml del
diluyente y etiquetarlo como tubo 1 (dilucin 1:2, volumen 1 ml).
Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml de la dilucin anterior
y agregarle 0.5 ml de diluyente (dilucin 1:2). La dilucin final
obtenida se calcula al multiplicar la dilucin del tubo 1 (o anterior)
con la nueva dilucin (1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
27
se hacen igual que para el paso 2. En el siguiente cuadro se experimentacin y la veracidad de los resultados obtenidos. A
muestra un resumen de lo anterior. continuacin se darn algunas generalidades sobre el manejo del
material biolgico utilizado en las prcticas de este Manual.

Animales
Tubo Dilucin El animal utilizado ms comnmente en el laboratorio de
bioqumica es la rata. Para su correcto manejo es importante la
1. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:2(4)
forma cmo se sujeta, lo cual se har con firmeza, pero a la vez,
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
en forma suave para no lesionarla; no debe demostrrsele miedo
2. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:4 (4)
o repugnancia para evitar que se ponga nerviosa e intranquila, lo
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
que puede ocasionar que muerda.
es decir: 1/2 x 1/2 = 1:4
La palma de la mano se coloca sobre el dorso del animal;
3. 1/4 x 1/2 = 1:8 la cabeza de ste entre el dedo pulgar y el dedo ndice; de esta
manera se logra su inmovilidad y es posible levantar el animal y
4. 1/8 x 1/2 = 1:16
moverlo de lugar.
5. 1/16 x 1/2 = 1:32
Muchas veces es necesaria la inyeccin intraperitoneal
(1) Volumen de la solucin original a diluir. de alguna sustancia, para lo cual se sostendr al animal con una
(2) Volumen del agua necesaria para la dilucin. mano, como se indic antes, mientras con la otra se introduce la
(3) Volumen final.
aguja de la jeringa formando un ngulo de 10 con la pared
(4) Dilucin obtenida.
(5) Volumen de la solucin diluida 1:2 (o anterior). abdominal en el cuadrante inferior izquierdo, ligeramente a la
izquierda de la lnea media; es importante mantener el ngulo de
MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO la aguja porque, si ste se abre, la aguja puede llegar a la vejiga
Se le llama material biolgico al conjunto de seres vivos o sus o al intestino. Para tener la seguridad de estar en la cavidad
productos utilizado en el desarrollo del trabajo en el laboratorio. peritoneal, hay que jalar el mbolo de la jeringa para que se haga
La utilidad e importancia de este material es muy grande ya que el vaco; si el vaco no se hace y, por el contrario, se extrae
muchos fenmenos de los seres vivos slo pueden estudiarse en lquido, es probable que se haya puncionado la vejiga.
ellos mismos, por ejemplo, la experimentacin de nuevos Para la extraccin de vsceras, como el hgado, es necesario
frmacos o los mecanismos que se presentan en entidades sacrificar al animal, lo cual se logra fcilmente y con menor
patolgicas y la produccin de las mismas en forma experimental. sufrimiento para la rata anestesindola o descerebrndola, o
Del correcto manejo depender en gran parte el xito de la sea, seccionando la mdula espinal a nivel del cuello mediante un

28
golpe certero en este lugar contra el borde de una mesa.
Despus se prosigue a la extraccin de la vscera y se abre la
pared abdominal con unas tijeras o bistur.
Extraccin de sangre para anlisis
El profesor a cargo del grupo deber estar presente en el
momento de la extraccin; de lo contrario, por ningn motivo, el
alumno podr hacerla por su cuenta.
Procedimiento para obtener una muestra de sangre venosa:
1. Para que un alumno sea considerado como voluntario
debern tomarse en cuenta algunos antecedentes como: no
padecer o haber padecido hepatitis o alguna otra enfermedad
infectocontagiosa; no tener problemas de coagulacin y no ser
muy aprensivo. El donador (de preferencia con las venas
visibles), estar sentado con el brazo sobre la mesa.
2. Con una ligadura elstica, aplicar un torniquete en el brazo
por encima del sitio de la puncin (esto causa congestin
venosa y evita el retorno de la sangre). El uso prolongado del
torniquete causa estasis de la sangre y hemoconcentracin. Si
las venas no se hacen prominentes, pedir al donador que
cierre y abra la mano varias veces. Escoger una vena fija y de
buen calibre, localizarla y palparla con el dedo para sentir su
consistencia y trayectoria; antes de puncionar, asegurarse de
que la jeringa no contenga aire y que el mbolo se deslice
suavemente. Las dimensiones de la aguja y la jeringa
dependen de la cantidad de sangre que se necesita as como
del tamao e integridad de la vena que se usa. Tambin se
puede usar el sistema Vacutainer que consiste en un tubo al
vaco, un mango y una aguja recolectora de muestras
mltiples.
3. Limpiar minuciosamente la zona con una torunda humedecida
con alcohol de 70 y dejar secar espontneamente. Sujetar la
piel con el pulgar izquierdo; puncionar primero la piel y luego
penetrar la vena con el bisel de la aguja hacia arriba siguiendo
el trayecto de la vena.
4. Despus que se ha entrado a la vena, la sangre llenar los
tubos vacos del sistema vacutainer. Si se usa jeringa, se
necesita una ligera succin con sta para obtener la muestra
(por lo general, aparece una gota de sangre en la base de la
aguja). Una succin excesiva puede causar colapso de la
vena. Tirar del mbolo de la jeringa hasta que se haya
extrado la cantidad de sangre deseada.
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja con un movimiento
rpido y uniforme mientras que se ejerce una presin sobre la
herida con una torunda.
6. Mantener la presin por un momento o hasta que se haya
detenido el sangrado. Cubrir la puncin con una cinta
adhesiva.
7. Retirar la aguja de la jeringa en el contenedor de
punzocortantes y vaciar lo ms pronto posible la muestra de
sangre en un tubo de centrfuga procurando deslizar la sangre
suavemente por la pared del tubo (si es que no se utiliz el
sistema Vacutainer).
Alerta clnica
Si es difcil detener el sangrado de la puncin, elevar la zona y
aplicar una cubierta que presione. Los hematomas se pueden
evitar:
Usando una buena tcnica.
29
 Aflojando el torniquete antes de retirar la aguja.
Aplicando la presin suficiente sobre el sitio de puncin
despus de completar el procedimiento.
La sangre obtenida puede tratarse de diferentes maneras
segn el empleo que se le vaya a dar.
Para obtener suero. La sangre se recibe en un tubo de
ensayo o de centrfuga seco y se deja coagular a temperatura
ambiente o en una estufa o bao de agua a 37 C. Si se va a
trabajar inmediatamente con el suero, separar con un aplicador
de madera el cogulo y centrifugar el resto del tubo. Si se desea
la separacin espontnea del suero, se deja a temperatura
ambiente por unas horas para que el cogulo se retraiga. Debe
evitarse que el suero se mezcle con porciones de cogulo; si esto
sucede, es necesario centrifugar y volver a separar el suero con
una pipeta Pasteur.
Para obtener plasma. Hay que evitar la coagulacin por
medio de un anticoagulante (heparina, citrato de sodio o EDTA)
en el tubo que recibe la sangre.
Mezclar suavemente por inversin. Centrifugar a 2 500
rpm durante 5 minutos y extraer enseguida el plasma
sobrenadante con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.
La sangre, el plasma o el suero y todos los recipientes
que los contengan deben considerarse como material
potencialmente infectante, por lo que (torundas, agujas, tubos,
etctera) debern depositarse, de acuerdo a su clasificacin, en
envases que tengan impreso el smbolo de riesgo biolgico y
entregarse a la coordinacin del laboratorio para su desinfeccin
y desecho.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante el desarrollo del curso de bioqumica, en el laboratorio se
pueden llegar a utilizar sustancias o muestras biolgicas que, en
ocasiones representan riesgos potenciales a la salud, debido a
que pueden ser: corrosivas, reactivas, explosivas, txicas,
inflamables o biolgico infecciosas.
Aunque los laboratorios se consideran en general lugares
de trabajo seguros, esto es as slo cuando conocemos y
seguimos las normas de seguridad existentes en la materia
acerca de la clasificacin, manejo y disposicin final de estas
sustancias, lo cual nos permite identificar los peligros y disminuir
los riesgos.
Manejo de materiales peligrosos y/o biolgico infecciosos
Precauciones generales: Se refieren a las medidas para
minimizar la difusin de enfermedades transmisibles,
especialmente hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
cortaduras o exposiciones simples, de corta duracin o
accidentales a sustancias qumicas peligrosas.
1. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero,
orina, tejido, cadver o cultivo como potencialmente
infeccioso. Todas las sustancias qumicas proporcionadas,
equipos y materiales del laboratorio debern ser utilizados con
el mximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de
peligrosidad y cuidados especficos, segn el caso.
2. Se debe conocer los smbolos y los cdigos de color sobre las
precauciones y los peligros en el laboratorio. Asegurarse de
conocer la localizacin de extinguidores, del botiqun y de las
salidas de emergencia.
30
3. Usar bata en el laboratorio, la cual deber estar cerrada
durante todo el tiempo que se permanezca en el laboratorio.
4. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben usarse
para efectuar punciones vasculares y para manipular sangre,
lquidos corporales, cultivos de microorganismos, sustancias o
superficies contaminadas. Despus del uso de cualquier
material biolgico, se procede al lavado de manos con los
guantes puestos. Despus de quitarse los guantes debemos
lavarnos nuevamente las manos.
5. Todos los materiales desechables y no desechables se deben
descontaminar en una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio de
4 a 7 % de concentracin, durante ms de 20 minutos antes
de ser desechados.
6. Los elementos punzocortantes deben desecharse en
recipientes especiales destinados para ello, los cuales deben
estar etiquetados con la leyenda que indique "Peligro,
residuos punzocortantes biolgico-infecciosos" y marcados
con el smbolo universal de riesgo biolgico. Nunca
reencapuchar las agujas
7. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas con
hipoclorito de sodio al 1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada.
8. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y
peligrosas, por lo que se deber:
a) Conocer las propiedades (venenosas, custicas o corrosivas)
y el uso correcto de las mismas.
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar, directamente las
sustancias. Para determinar el olor se acerca la tapa del
frasco cuidadosamente a la nariz, o bien, si se trata de
sustancias voltiles o vapores acercar stos con la mano a la
nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, especialmente la
cara; usar bata y guantes para proteger la ropa y el cuerpo;
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de un matraz con
lquidos en ebullicin o material de reaccin hacia el vecino, o
a s mismo, ya que puede proyectarse el contenido; para las
sustancias que no tienen un efecto pronunciado sobre la piel,
pero cuya ingestin es peligrosa, evitar la contaminacin de
alimentos, cigarros o manos que despus se llevarn a la
boca o con las que se tocarn alimentos (nunca ingerir
alimentos en el laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear con la
boca, especialmente los cidos fuertes, productos custicos,
oxidantes fuertes y compuestos venenosos.
9. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a cargo del
rea de prcticas. Es una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que sean, se comuniquen
inmediatamente al profesor. Nunca realizar actividades
experimentales sin la supervisin del responsable del grupo.
10. Manejar adecuadamente los residuos peligrosos derivados de
las prcticas, identifique su nivel de riesgo y el mecanismo
para su desecho. Queda prohibido desechar sustancias a la
tarja o por cualquier otro medio, sin autorizacin del
responsable del grupo. Las hojas de seguridad
correspondientes incluyen qu hacer en caso de accidentes y
la forma correcta de desechar los residuos.
31
11. Indicaciones generales para evitar incendios o explosiones al
utilizar solventes inflama-
bles. Los solventes inflamables (alcohol, ter, cloroformo,
acetona, tolueno, xilol, etctera) se utilizan en todos los
laboratorios, por lo que se recomiendan las siguientes
precauciones:
a) No fumar en el interior del laboratorio.
En caso de heridas pequeas dejar que sangre unos
segundos; tener cuidado de no dejar partculas de vidrio en la
herida y aplicar un desinfectante.
Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas
por un mdico. Mientras tanto, evitar el sangrado aplicando
presin en un punto ms arriba la herida o antes de ella (no
mantener la presin por ms de 5 minutos).

b) No utilizar la llama del mechero sin cerciorarse de que no hay
cerca lquidos inflamables. No mantener el mechero
encendido cuando est fuera de uso.
c) Si se vierten accidentalmente sobre las mesas, secar de
inmediato con un trapo hmedo y enjuagar ste en el chorro
de agua, exprimindolo.
d) Nunca calentar un lquido orgnico sobre una flama. Para
calentar, usar bao de agua o parrilla elctrica.
En caso de incendio debe hacerse lo siguiente: para un
incendio pequeo en un vaso, un matraz, etctera, ste se
cubrir con un recipiente mayor o se ahogar el fuego con un
trapo mojado o se combatir con un extinguidor.
Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la
mesa o el piso, se utilizar un extinguidor de bixido de carbono.
Si el fuego no puede vencerse de inmediato, se evacuar el
laboratorio y se avisar al departamento contra incendios de la
institucin.
10. Casi siempre, los choques elctricos en el laboratorio son de
poca importancia; las precauciones de seguridad se deducen
de la naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato elctrico
con las manos hmedas o cuando se est parado sobre un
piso hmedo. Siempre apagar y desconectar los aparatos
antes de cualquier manipulacin.
Pictogramas de seguridad
En las etiquetas de productos qumicos de uso en el laboratorio
adems de la identificacin del contenido, calidad y lmite de
pureza de lo que contiene, podemos encontrar pictogramas
(smbolos internacionalmente aceptados y reconocidos) que
indican los riesgos principales. Los pictogramas de seguridad
son:
RIESGO BIOLGICO

12. Los accidentes ms frecuentes que ocurren en el laboratorio

son las lesiones debidas a cortes, laceraciones, etctera, por
cristalera rota.

32
 Todo aquello que pueda contener bacterias, virus u otros
microorganismos con capacidad de infeccin o cuando contiene
toxinas producidas por microorganismos que causen efectos
nocivos a los seres vivos. Ejemplo: jeringas, sangre.
Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la
piel y las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
personal.
E = EXPLOSIVO
Es toda sustancia slida o lquida o mezcla de sustancias
que pueden desprender gases a una temperatura, presin y
velocidad tales que pueden detonar, producir violentas
deflagraciones, o explotar al exponerse al calor cuando estn
parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de plomo, fluoruro de
carbono.
Medidas de prevencin: almacenarlas alejadas de otros
productos, evitar todo choque, friccin y mantener alejadas de
fuentes de calor, chispas o fuego.
O = OXIDANTE
Sustancias capaces de aportar oxgeno cuando
reaccionan con otra sustancia, por lo que cuando entran en
contacto con combustibles o inflamables avivan la reaccin
pudiendo desarrollar reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de
sodio, hiposulfito de sodio.
Medidas de prevencin: mantener alejadas de las
sustancias combustibles o inflamables, ya que pueden favorecer
los incendios y dificultar su extincin.
Xn = NOCIVO
Sustancias de menor toxicidad pero pueden causar
daos a la salud. Tambin se incluyen aquellas mezclas o
preparados que tienen alguna sustancia que puede ser txica
pero que se encuentra a una baja concentracin en la mezcla.
Xi = IRRITANTE
Sustancias que pueden causar irritacin a la piel,
mucosas, o los ojos, por contacto inmediato, prolongado o
33
repetido, pudiendo tambin provocar inflamacin. Ejemplo:
cloroformo, SDS, hipoclorito de sodio, aminoantipirina.
Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la
piel y las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
personal.
F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin es menor de 0C y su punto de
ebullicin mximo de 35C.
F = INFLAMABLE
Sustancias lquidas cuyo punto de ignicin es menor a 40C.
Ejemplo: etanol, tolueno, ter dietlico.
Medidas de prevencin: mantener alejado de fuentes de
calor, de ignicin o eventuales chispas, de materiales
combustibles y oxidantes.
N = NOCIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE
Aquellas sustancias o preparados que cuando son liberados al
medio ambiente pueden presentar un efecto inmediato o diferido,
poniendo en peligro a alguna especie. Ejemplo: tiourea, o-
toluidina.
Medidas de prevencin: evitar que los derrames alcancen
los desages, tratar los residuos en condiciones ambientalmente
adecuadas.
T+ = ALTAMENTE TXICO, T TXICO
Sustancias que pueden causar dao en forma aguda o crnica a
la salud o causar la muerte si son inhaladas, ingeridas o se
absorben por la piel, an en pequeas cantidades. Ejemplo: azida
de sodio, dinitrofenol, bromuro de etidio.
Medidas de prevencin: evitar todo contacto directo.
Utilizar elementos de proteccin personal. Emplear estrictas
medidas de higiene personal y del ambiente del laboratorio.
C = CORROSIVO
Sustancias capaces de atacar y destruir los tejidos orgnicos si
entran en contacto con ellos o bien atacar ciertos metales o
materiales. Ejemplo: hidrxido de sodio, cido clorhdrico, cido
actico.
34
 Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la
piel y las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin
personal.
Identificacin sobre los riesgos especficos y los consejos
de prudencia
Frases "R" stas advierten acerca del riesgo ms comn
asignado a esa sustancia qumica, por medio de la enumeracin
de riesgos especficos en frases cortas que son adaptables a las
distintas sustancias.
Las frases "S" brindan los consejos de prudencia o las
medidas de prevencin ms importantes relacionadas con el
riesgo asignado a esa sustancia qumica y que permitirn su
manipulacin y almacenamiento en forma segura. En algunos
casos se mencionan combinaciones de frases R o de frases S,
cuando dos o ms riesgos tienen relacin entre s (cuadro I.6).
El smbolo de la N.F.P.A. (National Fire Protection
Association)
El smbolo de la N.F.P.A. es un sistema de identificacin de
riesgos de un producto qumico, en tres categoras principales:
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad" indicando el grado de
severidad por medio de una escala numrica desde (4) que indica
el riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo moderado, (1) riesgo
menor, hasta (0) que representa ausencia de riesgo.
Este smbolo es til para alertar acerca del riesgo de ese
producto y, a su vez, puede ayudar a determinar los cuidados a
tener en cuenta en el almacenamiento y en caso de emergencias,
de derrames o salpicaduras.
La informacin se presenta por medio de una estructura
espacial en forma de rombo principal, dividido a su vez en otros
cuatro.
El rombo azul a la izquierda identifica el riesgo para la
salud. El rombo rojo en la parte superior indica el riesgo por
inflamabilidad. El rombo amarillo a la derecha seala el riesgo por
reactividad o inestabilidad. El rombo blanco en la parte inferior
indica riesgos especiales tales como: W reactivo al agua, COR
corrosivo, AIR reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:
b C
o
n
cido clorhdrico
Hojas de seguridad
Cada prctica cuenta con las hojas de seguridad para cada
reactivo o sustancia que se utilice en el laboratorio.
Las hojas de seguridad proveen informacin sobre (cuadro I.7,
pg. 100):
Los componentes de un producto, su reactividad, las medidas
precautorias principales o las advertencias ms importantes.
Los elementos de proteccin personal que se recomienda
emplear en la manipulacin.
Las vas de ingreso y los rganos blanco.
35
 Las medidas por derrame accidental y de primeros auxilios.
La informacin toxicolgica.
Las recomendaciones para su almacenamiento.
Las condiciones para la disposicin de los residuos.
Clasificacin de los residuos
Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones de
enseanza o investigacin as como en hospitales y clnicas
contienen residuos no peligrosos o municipales, residuos
biolgicos infecciosos y residuos especiales.
Residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI): es todo
aquello que ha entrado en contacto con pacientes o animales,
sus muestras biolgicas y/o cepas de microorganismos, se
clasifican en: sangre, cultivos, patolgicos (tejidos, rganos,
partes y fluidos corporales, etctera), no anatmicos (gasas,
algodones, jeringas, etctera) y punzocortantes (lancetas, agujas,
pipetas Pasteur, etctera).
Residuos municipales: son aquellos que no representan
peligro para la salud y sus caractersticas son similares a los
residuos domsticos comunes.
Residuos especiales CRETI: son aquellos residuos que
constituyen un peligro para la salud por sus caractersticas
agresivas tales como: Corrosividad, Reactividad, Explosividad,
Toxicidad e Inflamabilidad Es importante no olvidar que, la
mezcla de residuos municipales con residuos biolgico
infecciosos hace que se consideren en su totalidad como
biolgico infecciosos, mientras que la mezcla de residuos
biolgico infecciosos con peligrosos CRETI se deben consideran
como peligrosos CRETI.
Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.
Los residuos RPBI deben ser envasados de acuerdo con sus
caractersticas fsicas y biolgico infecciosas conforme la norma
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
Es importante destacar que todos los envases tengan
impreso el smbolo universal de riesgo biolgico y leyendas que
indiquen
la peligrosidad de los residuos y el tipo de residuos que
contienen.
Los contenedores para punzocortantes deben de
ser: De color rojo.
De paredes rgidas.
De polipropileno.
Resistentes a fracturas y prdida del contenido al caerse.
Destruibles por mtodos fisicoqumicos.
Esterilizables y con tapa, la que puede tener o no separador de
agujas.
Precauciones: depositar los RPBI, de acuerdo a su
clasificacin, inmediatamente despus de su generacin.
No compactar los residuos durante el envasado y no mezclar
residuos de diferente clasificacin.
Una vez identificados, separados y envasados correctamente los
residuos peligrosos, el personal responsable del laboratorio se
encargar de su recoleccin, tratamiento y disposicin final as
como de las medidas necesarias para la desinfeccin,
esterilizacin y limpieza del material y equipo utilizado en el
laboratorio.
De manera general, los envases destinados a los residuos CRETI
deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno a
36
cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad mxima
de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico, siempre
y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la sustancia a
envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en forma
individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de
seguridad correspondiente.
Manejo de residuos CRETI

El manejo, consistente en la separacin, envasado y

almacenamiento de cada uno de los reactivos peligrosos CRETI
utilizados en las prcticas deber realizarse de acuerdo a cada
reactivo en cuestin segn lo indicado en las hojas de seguridad.
El manejo de accidentes, tales como derrames, ingestin
o salpicaduras, as como la aplicacin de primeros auxilios
debern de realizarse de acuerdo al reactivo en cuestin segn lo
indicado en la hoja de seguridad. Las hojas de seguridad sern
proporcionadas para cada prctica en el laboratorio.

De manera general, los envases destinados a los residuos CRETI

deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno a
cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad mxima
de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico, siempre
y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la sustancia a
envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en forma
individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de
seguridad correspondiente.

37
 FrasesR FrasesS Combinacindefrases

R7 Puedeprovocarincendios S3 Conservarensitiofresco R 20/21 Nocivoporinhalacinycontactoporlapiel

Nocomernibeber Txico:peligrodeefectosirreversiblesgravespor
R23 Txicoporinhalacin S20 R39/25
durantelamanipulacin ingestin

Notirarlosresiduospor Mantengaelcontenedorbiencerradoyenunlugar
R36 Irritalosojos S29 S3/7
losdesages fresco

Llevarguantesde Utiliceropaprotectoraadecuada,guantesy
R45 Puedesercancergeno S37 S36/37/39
proteccinadecuados proteccinfacialogafas

Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R

38
 TIPO DE RESIDUO ESTADO ENVASADO COLOR
FSICO

Sangre Slido Bolsa de Rojo

Lquido plstico
Recipiente
hermtico

Cultivos y cepas de Slidos Bolsa de Rojo

agentes infecciosos Lquidos plstico
Recipiente
hermtico

Residuos no anatmicos Slidos Bolsa de Rojo

Lquidos plstico
Recipiente
hermtico

Patolgicos Slidos Bolsa de Amarillo

Lquidos plstico
Recipiente
hermtico
Objetos punzocortantes
usados y sin usar Slidos Recipientes Rojo
rgidos

Cuadro I.8 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

39
 cido clorhdrico
Identificacin
Frmula qumica: HCl
Apariencia y olor: solucin de color ligeramente amarillo o incolora
con olor caracterstico muy penetrante.
Marcaje liqudo corrosivo
Sinnimos: cido muritico, cloruro de hidrgeno.
Generalidades
Est presente en el sistema digestivo de muchos mamiferos y una deficiencia
de ste provoca problemas en la digestin; un exceso provoca lceras
gastricas. La disolucin acuosa grado reactivo contiene aproximadamente
38% de HCl.
Propiedades fsica y qumicas
PM: 36.46
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N).
Reacciona con la mayora de los metales desprendiendo hidrgeno.
Con agentes oxidantes como perxido de hidrogeno genera cloro, el cual es
muy peligroso.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalacin en ratas): 3124 ppm/1 h.
CLMo (concentracin letal minima publicada): (inhalacin en humanos) 1300
ppm/30 min; 3000ppm/5 min.
Riesgos
Produce gas inflamable cuando se encuentra en contacto con metales. Se
generan v apores txicos e irritantes de cloruro de hidrgeno cuando se
calienta.
Inhalacin: elgas causa dificultad para respirar, tos, inflamacin y ulceracin
de nariz, trquea y laringe. Exposiciones severas causan espasmo de la
laringe y edema en los pulmones.
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de ojos y piel, puede causar
quemaduras serias, dermatitis, reducir la visin o, incluso, la prdida total de
sta.
Ingestin: produce corrosin de las membranas mucosas de la boca, esfago
y estmago, causa nusea, vmito, disfagia, sed intensa y diarrea
Cuadro I.7. Hoja de seguridad para el cido Clorhdrico.
Primeros auxilios
Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente durante 15 mi nutos.
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar inmediatamente la zona
daada con abundante agua.
Inhalacin: mover a la persona al aire fresco; si se dificulta la respiracin
proporcionar oxigeno y mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
nada.
Ingestin: no provocar vmito y dar a beber agua continuamente, por
ejemplo, una cucharada cada 10 minutos o dar a beber leche de
magnesia.
En todos los casos de exposicin, el afectado debe ser transportado al
hospital tan pronto como sea posible.
Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y venenoMantngase en envase de vidrio, en lugares
secos, bien ventilados, alejados de materiales oxidantes y fuentes de
ignicin o calor.
Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2, polvo qumico seco
o arena seca. Los extinguidotes de fuego se eligen dependiendo de los
alrededores, ya que el HCl no arde.
Fugas y derrames: ventilar el rea y protegerse con el equipo de
seguridad necesario. Cubrir el derrame con bicarbonato de sodio o una
mezcla de 50:50 de hidroxido de calcio y cal sodada, mezclar
cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes de agua y drenajes
hasta no ser neutralizado como se indic anteriormente.
Desechos
Neutralizar las soluciones concentradas de cido clorhdrico con
carbonato de calcio o cal y diluir con agua cuidadosamente. La disolucin
resultante puede verterse al drenaje, con abundante agua. En caso de
soluciones diluidas,
40
 II

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

41
 Prctica 1
Soluciones

Tiempo de la prctica: 3 horas
Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones en los sistemas
biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos para preparar
soluciones porcentuales, molares y normales, as como las
diferentes diluciones de stas.
3. Presente ejemplos de soluciones utilizadas en medicina
(solucin isotnica, Ringer, Darrow y Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1.Qu es una solucin?
2.Cuntas clases de soluciones existen?
3.Qu significan los siguientes trminos: mol, solucin
molar y solucin normal?
4.Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5.Cul es la composicin de las siguientes soluciones:
solucin isotnica de cloruro de sodio, suero glucosado al
5%, Ringer-lactato?
6.Cules son los tipos de soluciones que existen in vivo?
Mencionar ejemplos.
7.Qu es una solucin isotnica?
8.Qu es una solucin osmolar?
9.Cmo se calcula la osmolaridad de una solucin?
10.Qu les pasa a los eritrocitos cuando se ponen en
contacto con soluciones salinas de diferente osmolaridad?
11.Qu se entiende por dilucin y dilucin seriada de las
soluciones?
Material
Por equipo:
3 vasos de precipitado de 10 ml
1 pipeta de 1.0 ml
1 pipeta de 5.0 ml
1 pipeta de 10.0 ml
Gradilla con 9 tubos de ensayo
Eritrocitos humanos lavados en solucin salina isotnica
Solucin de azul de metileno al 1.0%
Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
Balanza granataria
Por grupo:
1 Microscopio marca Leica.
Procedimiento
1. Hacer los clculos correspondientes para comprobar que
la solucin a 0.9% de NaCl es isotnica con respecto al
plasma (ver pag. 26). Considerar que:
a) El cloruro de sodio se disocia en solucin acuosa en los
iones sodio y cloruro, por lo que la concentracin inica se
duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
b) La presin osmtica normal del plasma es de 290-310
mosm/l.

42
2. Preparar 20 ml de una solucin de NaCl a 4.5% 6. Hacer la dilucin y redilucin (dilucin seriada) de la
(etiquetar como solucin 1). solucin de azul de metileno como se muestra en el
siguiente cuadro:
3. A partir de la solucin anterior, preparar 25 ml a 0.9%
(solucin 2) y 50 ml a 0.045% (solucin 3). DILUCIN SERIADA DE AZUL DE METILENO
Tubo H2O (ml) Sol de Volumen de
4. Colocar en tres tubos de ensayo 1 ml de las diferentes azul de transferenci
soluciones de cloruro de sodio preparadas en los puntos 2 metileno a
y 3. Con la ayuda de un gotero (dejando caer lentamente
1 2 0.5 ml* -
por las paredes del tubo) 2 gotas de eritrocitos lavados.
Mezclar con cuidado y dejar reposar 5 minutos a 2 2 - 0.5 ml
temperatura ambiente. Valorar el grado de hemlisis que 3 2 - 0.5 ml
sufren los eritrocitos cuando se ponen en contacto con las 4 2 - 0.5 ml
diferentes soluciones. 5 2 - 0.5 ml
6 2 - 0.5 ml
5. De las 3 soluciones prepradas tomar una gota de cada
una y por separado colocarlas en un porta-objetos, colocar *Nota: para mezclar al hacer las diluciones se debe
un cubre-objetos y observarlas al microscopio, para valorar succionar y soplar con cuidado la pipeta en cada tubo
el efecto de los eritrocitos. varias veces antes de transferir la dilucin al siguiente tubo.
Leer las intrucciones para el uso del microscopio Resultados
1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados
para cada uno de los ejercicios.

2. Deducir el movimiento o no del solvente cuando se

ponen en contacto eritrocitos con soluciones hipo, hiper e
isoosmticas.

1. Calcular la dilucin y la concentracin de azul de

metileno en cada uno de los seis tubos de la dilucin
seriada (ver pg. 28). Asegrese que la coloracin obtenida
disminuya gradualmente conforme avanza la dilucin.

43
Problemas
1. Hacer los clculos para preparar una solucin de KCl al
3%.
2. Hacer los clculos para prepar una solucin de CaCl2
0.25 M se requieren 15 ml.
3. Calcular el volumen de H2SO4 que se requiere para
preparar una solucin 3N 40 ml volumen final. (densidad=
1.84g/ml).
4.- Prepare 500 ml de una solucin 0.125 M de NaHC03
12.-Calcular la osmolaridad a partir de Dextrosa a 5 % en
solucin salina a 0.2 %.
Buscar las composiciones de las siguientes soluciones.
Hartman, Ringer y Darrow.
Referencias
1. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO, Sierra UA.
Fluidos y electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.
2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA, Tapia IR, Gmez
EC. Bioqumica. Undcima reimpresin de la 2a. ed.
Mxico: Editorial Limusa; 2004.

5.-250 ml de H2SO4 0.1 M 3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico:

Editorial El Manual Moderno; 2002: p. 41-56.
6.-100 ml de glucosa 0.5 M
4. Holum JR. Fundamentos de qumica general, orgnica y
7.-Cuantos mililitros de HCl 0.1M contiene 0.025 mol de bioqumica para ciencias de la salud. Mxico: Editorial
HCl. Limusa Wiley; 2001.
8.-Cuantos gramos de soluto se requieren para preparar las
siguientes soluciones: 5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima edicin Mxico:
125 ml de NaCl al 10% Editorial El Manual Moderno; 1999.
50 ml de Ca(NO3)2 al 3.35 %
750 ml de CaCl2 al1.5% 6. Bloomfield MM.Qumica de los organismos vivos.
Mxico: Editorial Limusa; 1997.
9.-Cual presenta la osmolaridad ms alta NaCl 0.1M o
Na2SO4 0.08 M

10.-A un enfermo hay que inyectarle 15 g de KCl y 126 g de

glucosa (C6O6H12)
Cunta agua habr que aadirles para que resulte un
suero 0.4 osmolar?

11.- Calcular la osmolaridad a partir de la composicin de

algunas soluciones como Dextrosa a 10 % en solucin
salina a 0.45%.

44
 INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL 9. Gire el revlver hasta situar el objetivo 4X en la posicin
MICROSCOPIO MARCA LEICA de trabajo. (pag X)

10. Suba la platina girando el mando de enfoque

1. Nunca use un adaptador entre el cable y la fuente de
alimentacin.
2. Use siempre el microscopio sobre una superficie dura y
estable.
macromtrico hasta que observe la preparacin y,
finalmente, enfoque la muestra con precisin utilizando el
mando de enfoque micromtrico.
11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de los ojos.

3. Conecte el cable de alimentacin del microscopio a una 12. Al trmino del uso del microscopio retirar la muestra de
toma de corriente con conexin a tierra. Se suministra un la platina.
cable de tres terminales con toma a tierra.
13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla a su posicin
4. Encienda el microscopio girando el interruptor de control original si es necesario.
de la iluminacin situado en la parte inferior izquierda del
instrumento. 14. Colocar el revolver de los objetivos de manera que el
objetivo de 4X sea el que quede en direccin de la lmpara.
5. Coloque el interruptor de control de la iluminacin en el
nivel ms bajo. El control de iluminacin le permite ajustar 15. Desconectar el equipo y enrollar el cable.
la intensidad de luz.
16. Limpiar la platina y oculares con un pao humedecido
6. Abra completamente el diafragma de apertura del con metanol o con un limpia cristal comercial.
condensador girando el anillo hacia el extremo derecho.
17. Colocar al microscopio la funda contra el polvo para
7. Usando el botn de enfoque del condensador, suba el mantenerlo en buenas condiciones fsicas y mecnicas.
condensador hasta el extremo superior de su
desplazamiento. Iluminacin critica nicamente: si el
desplazamiento del condensador es excesivo, limtelo con
el tornillo situado debajo de la platina hasta que la lente
superior del condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.

8. Coloque la preparacin de la muestra con la muestra en

la platina.

45
 1
Partes del microscopio:
1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
6 3) Platina.
4) Diafragma.
9 3 5) Lmpara.
Tornillo de la platina para desplazar la muestra.
4
8 Interruptor de control de la iluminacin.
Tornillo macromtrico.
Tornillo micromtrico.
7 5

46
 Prctica 2
Regulacin del equilibrio cido-base
despus del ejercicio muscular intenso
y de la ingestin de bicarbonato de sodio

Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1. Al finalizar la prctica, el alumno constatar las
actividades reguladoras del pulmn y el rin para
mantener el equilibrio cido-base en condiciones que
tienden a romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH observar la variacin
de la concentracin de hidrogeniones en la orina de un
individuo que ha realizado ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos con los cambios
metablicos originados por el ejercicio muscular intenso.
Conteste las siguientes preguntas:
4. Cules son las reacciones de formacin del cido
carbnico (H2CO3) a partir de CO2 y H2O, y de su
disociacin para formar el ion bicarbonato? Escrbalas.
5. Qu sistemas amortiguadores participan directamente
en la regulacin del pH sanguneo?
6. Cules son los sistemas extrasanguneos que tienden a
mantener el pH extracelular?
Escriba la ecuacin de Henderson y Hasselbalch aplicada
al sistema HCO3 /H2CO3 y, con base en ella, conteste la
siguiente pregunta:
a).Cmo participan el aparato respiratorio y el rin en el
control del pH sanguneo?

1. Por qu es importante que se mantenga constante, INTRODUCCIN

dentro de ciertos lmites, el pH en el organismo?
+
2. Cules son las fuentes de iones H en el organismo?
3. Cules son los sistemas reguladores que facilitan la
+
eliminacin del H producido en el organismo con el fin de
mantener constante el pH sanguneo?
Dentro de los mecanismos de regulacin de que dispone el
organismo para mantener la integridad fisiolgica, aquellos
involucrados en la homeostasis del pH en los fluidos
extracelulares desempean un papel crucial para la
supervivencia del individuo. En este sentido cabe sealar

47
que, como resultado de la oxidacin de los alimentos, un
humano adulto promedio produce alrededor de 20 moles de
CO2 al da, Al difundir a la sangre, gran parte de dicho gas
se combina con al agua en el interior de los eritrocitos,
produciendo cido carbnico (H2CO3), reaccin que es
seguida por la disociacin del H2CO3 para producir el anin
bicarbonato HCO3- y un in hidrgeno (H+). Dado el carcter
de cido dbil del H2CO3, la fraccin disociada del mismo
es pequea; sin embargo, considerando la gran cantidad de
CO2 que produce el organismo, la acidificacin de los
fluidos extracelulares sera importante en ausencia de
mecanismos reguladores. En el hombre, la intervencin de
los pulmones y los riones evita que ocurra tal acidificacin
manteniendo en un nivel constante la concentracin de H+
y, por consiguiente, del pH.
Para entender el papel que juegan ambos rganos
en la homeostasis del equilibrio cido-base, debe tenerse
presente que el sistema del cido carbnico implica la
participacin de un componente gaseoso o voltil (el CO2) y
dos componentes no voltiles (el HCO3- y el H+). En la
sangre, el equilibrio entre dichos componentes determina el
valor del pH sanguneo, que puede evaluarse mediante la
bien conocida ecuacin de Henderson-Hasselbach. En el
individuo normal, dicho valor fluctua en un promedio 7.4,
siendo la sangre venosa enriquecida en CO2 ligeramente
ms cida en relacin con la sangre arterial. Ahora bien, ya
que a temperatura ambiente el CO2 existe en estado
gaseoso, la cantidad de CO2 disuelto en la sangre
depender de la presin parcial (PCO2) ejercida por el
mismo a nivel de los alvolos pulmonares. En el humano, la
magnitud de dicha PCO2 es de aproximadamente 40 mmHg
lo que se traduce en una concentracin de CO2 sanguneo
de aproximadamente 25 mM; este ltimo valor incluye no
solo el CO2 como tal, sino tambin el bicarbonato y el cido
carbnico. Considerando el pH sanguneo normal y el pKa
del sistema bicarbonato-cido carbnico, la relacin [HCO3-]
/ [H2CO3 + CO2] es de aproximadamente 20. Es
precisamente la PCO2 la que es controlada por los
pulmones, ya que durante el proceso de la exhalacin se
elimina CO2, manteniendo constante la PCO2 en los alvolos
y evitando as que que aumente el nivel de CO2, disuelto en
la sangre. Todo proceso o patologa que se manifieste en
una alteracin en la frecuencia y/o profundidad del proceso
de inhalacin-exhalacin, dar como resultado una
alteracin de la PCO2 alveolar aumentandola o
disminuyndola, -con la siguiente modificacin del nivel de
CO2 disuelto en sangre y, por consiguiente, del pH.
Por lo que respecta a los riones, su participacin
en el mantenimiento de un pH extracelular constante se da
a travs de dos mecanismos: la excrecin de equivalentes
cidos (H+) hacia la orina y la regulacin de la cantidad de
HCO3- reabsorbido hacia la sangre desde el filtrado
glomerular. A diferencia del intercambio gaseoso en los
pulmones, los mecanismos de regulacin renal son de largo
plazo, por lo que su efecto ser manifiesto en cuestin de
horas. Su importancia se enfatiza en situaciones
patolgicas donde se altera el intercambio de gases
pulmonar (es decir, en la acidosis y alcalosis respiratorias),
en cuyo caso es necesario aumentar o disminuir la tasa de
reabsorcin del HCO3- , o bien en estados fisiolgicos que
producen cantidades importantes de cidos orgnicos (por
ejemplo, en la diabetes no controlada o durante el ejercicio
48
intenso) donde se incrementa la excrecin de H+ Gran
parte de este ltimo aparece en la orina acomplejado con el
amoniaco en forma de in amonio (NH4+) o asociado con el
fosfato en forma de fosfato monobsico de sodio
(NaH2PO4), representando este ltimo la llamada acidez
titulable. En general, el pH de la orina ser un reflejo de la
produccin de cidos no voltiles por el organismo.
El resultado final de los mecanismos fisiolgicos que
participan en el mantenimiento del equilibrio cido-base es
el de mantener el pH extracelular en un rango compatible
con el funcionamiento adecuado del organismo.
Material
Diez probetas o vasos de precipitado.
Orina.
Solucin de bicarbonato de sodio a 3%.
Potencimetro.
Mtodo
Un alumno por equipo desayunar o comer normalmente
(evitar ingestin de jugos cidos); despus har lo que se bicarbonato de sodio.
indica a continuacin.
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase
prctica. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3.-Orinar en un vaso de precipitado de 100 ml.
4. Ingerir 250 ml de agua.
5. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar
varias veces las escaleras de tres o cuatro pisos u otro
ejercicio sugerido por el profesor.
6. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, como en el
inciso 3, hasta completar por lo menos cinco muestras.
7. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la prdida de dixido de
carbono y a que el crecimiento bacteriano produce
amoniaco a partir de la urea.
Anlisis de resultados
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5
muestras de orina, trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
Objetivos (Segunda parte)
1. El alumno constatar el papel del rin en el
mantenimiento del equilibrio cido-base en una situacin de
alcalosis metablica provocada por la ingestin de
2. Mediante la medicin del pH, observar la variacin de la
concentracin de hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha ingerido una carga de bicarbonato de sodio.
Hiptesis
Elabore la hiptesis apropiada.
Material
Orina
Solucin de bicarbonato de sodio al 3%
Potencimetro
Mtodo
49
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase
prctica. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Orinar en un vaso de precipitado de 100 ml.
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de
sodio.
5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta
completar por lo menos 5 muestras.
6. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida.
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las
cinco muestras de orina, trazar una grfica de pH contra
tiempo; interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica: casos y texto. 6a. ed.
Editorial Harcourt-Brace; 1998: cap.4.
3. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn.

Anlisis de resultados

50
 Prctica 3
Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica

Tiempo de prctica: 2 horas 5. Cules son las enzimas cuya determinacin tiene valor
diagnstico?
Objetivo
El alumno: Hiptesis

1. Explicar el efecto de la concentracin de sustrato sobre
la velocidad de una reaccin enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la velocidad mxima y la
constante de Michaelis de una reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de inhibidores que existen y
estudiar su efecto sobre la Km y V mx.
4. Conocer aspectos bsicos de fotocolorimetra (ver pg,
115).
Para lograr los objetivos de esta prctica contestar las
siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin enzimtica?
2. Cmo se define la constante de Michaelis (Km) de una
reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (V mx) de una
reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la determinacin de la
actividad de algunas enzimas?
Si la velocidad de una reaccin enzimtica es proporcional a
la concentracin del sustrato; cuando la concentracin del
sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima se satura y
alcanza su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta prctica es la
glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa.
INTRODUCCIN
Las enzimas son las protenas ms notables de la
naturaleza; sin ellas, la vida como la conocemos no sera
posible. Las enzimas son catalizadores, esto es, aceleran la
velocidad de las reacciones sobre las que actan sin
consumirse en el proceso. El poder cataltico de las enzimas
es mucho mayor que el de los catalizadores inorgnicos,
algunas de ellas estn limitadas solo por la velocidad con
que colisionan con sus sustratos; son catalizadores
perfectos.
Aunque las reacciones que ocurren en la clula son

51
termodinmicamente favorables, la velocidad a la cual
transcurren la mayora de ellas es extremadamente lenta; sin
la presencia de las enzimas, las reacciones necesarias para
sostener la vida ocurriran a una velocidad incompatible con
sta. Adems de su enorme poder cataltico, las enzimas son
altamente especficas por sus sustratos y tienen la capacidad
de regular su velocidad en respuesta a las concentraciones
de sustrato y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostricos, etc. As pues, las enzimas
desempean un papel central en los procesos biolgicos,
son las responsables de degradar y sintetizar las molculas
que nos forman y de extraer, transformar y utilizar toda la
energa relacionada con estos procesos. Por ltimo, las
enzimas son las responsables de regular y coordinar todas
las reacciones que ocurren en un organismo para lograr el
delicado balance que representa la vida.
El primer modelo matemtico que explic de manera
general la cintica de las enzimas no alostricas, donde la
velocidad de la reaccin se incrementa hiperblicamente
conforme aumenta la concentracin de sustrato, fue
propuesto en 1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a
partir de los trabajos previos de Victor Henri y Archibald Hill.
Este modelo postula la idea central de que la enzima y el
sustrato libres establecen un equilibrio rpido con el complejo
enzima-sustrato; en un segundo paso ms lento, este
complejo se rompe liberando el producto y regenerando la
enzima libre. La ecuacin de Michelis-Menten explica la
relacin entre la velocidad de la reaccin catalizada por una
enzima y la concentracin de sustrato a travs de los dos
parmetros de la ecuacin, Vmax y Km. La ecuacin de
Michaelis-Menten puede ser re-arreglada matemticamente
para obtener su forma lineal, permitiendo determinar de
manera sencilla los parmetros cinticos de una enzima a
travs del grafico de Lineweaver-Burk. Este mismo grfico
permite inspeccionar rpida y visualmente las diferentes
formas de inhibicin enzimtica.
El estudio de las enzimas es de suma importancia
dentro de las ciencias mdicas; las enzimas estn implicadas
en el origen, diagnostico y tratamiento de una gran cantidad
de patologas y es claro que en el futuro, su preponderancia
ser cada vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de algunas
enzimas, como las proteasas de la coagulacin en la
hemofilia, es causa de enfermedades hereditarias. La
presencia anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguneo ayuda a diagnosticar el dao especfico de
tejidos, este es el caso de la amilasa y lipasa en las
patologas pancreticas y las transaminasas en las
enfermedades hepticas. Las enzimas son tambin el blanco
de varios frmacos: la aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el
omeprazol a la ATPasa de protones y el captopril a la enzima
convertidora de angiotensina; estas inhibiciones redundan en
un efecto teraputico. La capacidad de producir enzimas
recombinantes abri la posibilidad de utilizarlas
rutinariamente con fines teraputicos, tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinoltica en el infarto agudo
al miocardio. Es claro que todas estas aplicaciones no serian
posibles sin la previa y profunda comprensin de la
estructura y funcin de estas fascinantes molculas.
52
Fundamento etilbencentiazolin-6-sulfnico) o la 4-amino-antipirina (y fenol)
El mtodo se basa en el hecho de que la glucosa, en que se colorean al oxidarse.
La reaccin se expresa:
presencia del oxgeno del aire y con la participacin de la
glucosa oxidasa, se oxida hasta cido glucnico. El perxido
E+S ES E+P
de hidrgeno que se forma en el curso del proceso se
descompone mediante la peroxidasa. El oxgeno atmico
Material y reactivos
que se desprende en esta ltima reaccin se combina con un
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada una.
cromgeno que se colorea al oxidarse. La intensidad de la
1 Pipeta de 5 ml.
coloracin del cromgeno oxidado es proporcional a la 2 Pipetas de 1 ml.
concentracin de glucosa. Fotocolormetro con filtro azul.
La glucosa oxidasa (-D-glucosa: oxgeno xidorreductasa, Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y una dilucin 1:10
EC1.1.2.4) tiene un peso molecular de 160 000. Existe en de sta para los tubos 2, 3 y 4.
forma dimrica y contiene dos moles de FAD como grupo 2 frascos con solucin de enzimas: 41.6 Uml1 de glucosa
prosttico por mol de enzima. La glucosa oxidasa es
oxidasa, 4.6 Uml1 de peroxidasa, ortodianisidina 0.21
altamente especfica, hecho que ha permitido su empleo mmol/l.
para el anlisis cuantitativo de glucosa. La reaccin consiste Solucin de azida de sodio 400 mmol/l como inhibidor.
de dos pasos: Gotero con HCl.
1. Glucosa + glucosa oxidasa-FAD -
gluconolactona + glucosa oxidasa-FADH2 Mtodo I (con azida de sodio)
2. Glucosa oxidasa-FADH2 + O2 glucosa oxidasa-FAD + 1. Preincubar 20 minutos la solucin de enzimas con 0.3 ml
H2O2 del inhibidor.

La 4-gluconolactona se hidrata espontneamente dando
cido glucnico. La reaccin global se expresa:
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 Acido glucnico + H2O2
La peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del
perxido a un aceptor que es cromgeno como la
ortotoluidina, la ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3-
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla 1).
3.- Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al
agregar la enzima.
4.- Agitar cada tubo e incubar 5 minutos a temperatura
ambiente y de inmediato detener la reaccin agregando 3
gotas de HCl concentrado. Considerar un intervalo de

53
30 segundos para cada tubo al agregar el HCl. 5. Calcular el valor de la velocidad mxima (Vmx) y de la
Mtodo II (sin inhibidor) constante de Michaelis (Km) con y sin inhibidor.
1.- Preparar nuevamente una serie de tubos como lo indica 6. Determinar el tipo de inhibidor de acuerdo con las grficas
la tabla 1. del punto anterior.
7. Analizar si los resultados obtenidos estn de acuerdo con
2.- Repetir los pasos 3 y 4 del Mtodo I la hiptesis planteada.
Leer ambas series de tubos en el fotocolormetro; utilizar
como blanco el tubo 1 Instrucciones para la operacin del fotocolormetro Klett-
Summerson
Tubo Solucin de H2O Soucin 1. Antes de encender el fotocolormetro cercirese que el
No. glucosa (ml) (ml) de filtro (F) est en su sitio. La luz sin el filtro puede daar la
enzimas fotocelda.
(ml) 2. Asegrese que la aguja indicadora (C) est en cero. En
1 0.0 1.0 3 caso contrario, ajstese a cero con la perilla (D) que slo
2 dil 1:10 0.1 0.9 3 debe usarse cuando la lmpara del colormetro est
3 dil 1:10 0.25 0.75 3 apagada.
4 dil 1:10 0.5 0.5 3 3. Encienda el foco con el interruptor de la derecha y deje
5 0.1 0.9 3 que el instrumento se caliente hasta que se equilibre su
operacin. Cinco minutos son suficientes.
6 0.25 0.75 3
4. Ajuste la escala del potencimetro (B) a cero usando la
7 0.5 0.5 3
perilla (A).
8 1.0 0.0 3
5. Ponga una cubeta limpia llena con el blanco de reactivos
en el hueco del instrumento en tal forma que la marca del
Resultados (cuadro 5.2)
tubo (ej. Pyrex) se site directamente al frente. Es una
1. Clculo de la concentracin inicial de sustrato en cada buena prctica limpiar la superficie externa de la cubeta
tubo; tomar en cuenta que la solucin de glucosa contiene 40 con un pauelo desechable antes de cada lectura. Slo
molas ml1. deben usarse tubos seleccionados como "cubetas" para
2. La velocidad ser igual a las unidades Klett por .5 min-1 las determinaciones.
de incubacin. 6. Por medio de la perilla (G) ajuste la lectura del
3. Con los datos obtenidos completar el cuadro 5.2 y hacer galvanmetro a cero; esto es, la aguja (C) debe coincidir
las dos grficas en papel milimtrico. con el trazo central y, al mismo tiempo, con la escala (B)
4. Hacer una segunda grfica con los valores de 1/v vs 1/[S]. en cero.

54
7. Para leer las soluciones problema retire el blanco y
ponga en el hueco del instrumento la cubeta con la
solucin problema. La aguja (C) se desviar de su
posicin en la lnea de cero; por medio de la perilla (A)
grese la escala (B) hasta que la aguja (C) sea llevada
exactamente a cero. La lectura de la escala (B) se anota y
corresponde a la lectura del problema; lase nicamente
hasta la marca ms prxima. Cualquier intento de
apreciar mayor exactitud es innecesario, pues la
construccin del instrumento no proporciona una precisin
mayor.
8. Contine con la lectura de otros problemas y, de vez en
cuando, compruebe el cero con el blanco.

Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
2. Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de bioqumica. 4a.
ed. Barcelona: Ediciones Omega; 2005.
3. Mathews CK, van Holde KE. Bioqumica. 3a. ed. Espaa:
McGraw-Hill Interamericana; 2003.
4. Voet D, Voet JG, Pratt C. Fundamentals of biochemistry.
USA: John Wiley and Sons; 1999.

55
Tubo Concentracin de Velocidad de la Velocidad de la Tubo Concentracin de Velocidad de la Velocidad de la
No. sustrato molas reaccin unidades reaccin con No. sustrato molas reaccin unidades reaccin con
de glucosa inicial Klett 5 min-1 1/V INHIBIDOR 1/V Klett 5 min-1 INHIBIDOR
de glucosa inicial
ml-1 ORDENADAS (Y) Unidades Klett ORDENADAS (1/Y) Unidades Klett
ml-1
ABCISAS (X) 5 min1 (Y) 5 min -1
ABCISAS (1/X)
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
6 6
7 7
8 8

Cuadro 5.2 Resultados Cuadro 5.3 Resultados (Inverso)

56

Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los
inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes.
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los
cambios de pH producidos por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa
genera los cambios de pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los
desacoplantes sobre la salida de protones.
Responda a las siguientes preguntas:
1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los
carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los
carbohidratos en las levaduras?
Prctica 4
5. Cules son los inhibidores de la cadena respiratoria de
los sitios I, II y III? Describa su efecto sobre el consumo de
O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del cual los
protonforos desacoplan la fosforilacin oxidativa? Describa
su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos
unicelulares que se dividen por gemacin. En comn con
otras clulas eucariontes, las levaduras tienen un ncleo
en donde reside la informacin gentica de la clula ,
mitocondrias en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP
y un retculo endoplsmico y aparato de Golgi que se
encargan de la sntesis de protenas cuya localizacin final
es la membrana plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las levaduras tienen una
ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del ATP con el
bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta protena
es semejante desde un punto de vista estructural y funcional
a la ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales y, al igual que
la bomba de sodio/potasio, se inhibe con concentraciones
micromolares de vanadato. Como resultado de la actividad
57
de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un gradiente
electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el
transporte de nutrientes al interior de la clula, proceso
catalizado por sistemas de transporte llamados
simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la economa celular y en la
energizacin de la membrana celular, basta decir que la
ATPasa de H+ consume hasta un 25 % del ATP que se
sintetiza en la clula.
+
Adems de esta ATPasa de H de la membrana plasmtica,
las levaduras tienen otra bomba de protones en la membrana
interna de las mitocondrias, la ATP sintasa, que se encarga
de la sntesis del ATP. En contraste con la enzima de
membrana plasmtica, el flujo de protones a travs de la
ATP sintasa induce la sntesis de ATP. Uno de los
inhibidores ms efectivos de esta enzima es la oligomicina.
As, se puede proponer uno de los muchos ciclos en los que
interviene el ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa, y a
+
nivel de la membrana plasmtica, la ATPasa de H lo
hidroliza para bombear protones al exterior de la clula. El
factor comn en ambos casos es un flujo de protones a
travs de la membrana.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se observar una
disminucin progresiva de su concentracin en el medio de
cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular.
Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de
1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
luego cada 10 minutos 2 veces ms.
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2 ml de la solucin
de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin final de 200 mol/l.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
58
EXPERIMENTO 3 (AZIDA) 3. Hacer una relacin de las vas que producen estos
cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen una
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5 ml de la solucin
encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de
de azida de sodio 400 mmol/l, concentracin final de 5
protones en la membrana plasmtica cuya funcin es similar
mmol/l. Agitar con cuidado. + +
3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos a la bomba de Na /K en las clulas de los mamferos (ver
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea fig. 7.1).
basal. Referencias
4. Esperar 5 minutos. 1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control. yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397-409.
+
6. Registrar sus datos en la siguiente tabla. 2. Pardo JP. La ATPasa de H de la membrana plasmtica
de los hongos. Mensaje Bioqumico.
pH Glucosa

Tiempo Glucosa Azida de

(min) Dinitrofenol sodio ADP + Pi
Glucosa
0 H
+ +
H
ATP ADP
5 ATP
Etanol
10
+ + +
15 H H H

20 H
+

30 NAD NADH ADP + Pi

40 ATP

Acetaldehdo

Mitocondria ADP
Anlisis de resultados ADP

1. Hacer una grfica de cada uno de los experimentos;

utilizar los valores de las lecturas de pH contra tiempo. 1990; 13: 119-172.

2. Analizar el significado de los cambios de pH en el

experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y
con azida de sodio.

59
 Prctica 5
Determinacin de glucosa en sangre total
Tiempo de la prctica: 3 horas
Objetivos
1. Que el estudiante comprenda el metabolismo de la glucosa
en sujetos sanos en diferentes condiciones.
2. Que el estudiante corrobore los cambios de glucosa e
insulina durante la ingesta de alimentos.
3. Que el alumno sea capaz de interpretar y relacionar las
mismas condiciones en ayuno.
4. Que el alumno sea capaz de ver las curvas de ndice
glicmico de diferentes monosacridos.
Introduccin
En el estado de postabsorcin (ayuno) de los individuos
normales, la relacin insulina/glucagn sangunea es baja,
haciendo que el glucgeno muscular y heptico sea
degradado como una fuente de glucosa. Un ayuno adicional
resulta en la degradacin de las protenas a aminocidos en el
msculo esqueltico, y en la liplisis de los triacilglicroles a
cidos grasos en el tejido adiposo. El aminocido alanina y el
glicerol son usados para sintetizar glucosa por medio de la
gluconeognesis estimulada por glucagn. Adems, los cidos
grasos libres pueden ser usados como combustible por el
corazn, los msculos esquelticos y el hgado.
Algunos minutos despus de la ingesta de una comida, los
niveles de insulina sangunea aumentan. La glucosa y los
aminocidos de la dieta tales como la leucina, isoleucina y
lisina, son estimulantes potentes de las clulas beta del
pncreas haciendo que stas segreguen insulina. La mayor
parte de las clulas perifricas responden al aumento de la
glucosa sangunea con un aumento rpido del transporte de la
glucosa dentro de las clulas. De esta manera, los niveles de
glucosa sangunea aumentan solamente de un 20% a un 40%
en los individuos no-diabticos. Sin embargo,
aproximadamente el 80% de la entrada de glucosa no es
insulino dependiente, ya que el cerebro, los glbulos rojos, el
hgado y los intestinos no requieren de insulina para la entrada
creciente de glucosa cuando est presente glucosa sangunea
elevada. El msculo es el tejido dependiente de insulina ms
importante. Los niveles crecientes de insulina y glucosa
sanguneas inhiben la liplisis as como a aproximadamente el
60% de la liberacin normal de glucosa heptica.
Las concentraciones de glucosa en los nios menores de 5
aos de edad son aproximadamente del 10 al 15% ms baja
que los niveles encontrados en los adultos. Los recin nacidos
muestran concentraciones de glucosa desde 200 a 800 mg/l
(1.11 a 4.44 mmol/l), aun cuando las concentraciones de
60
glucosa sangunea en los infantes prematuros son menores.
Las concentraciones de glucosa en los adultos saludables
varan entre 700 a 1050 mg/l (3.9 a 5.8 mmol/l). Las
concentraciones de glucosa del lquido cefalorraqudeo son
aproximadamente del 40% al 80% de aquellos valores
encontrados en el suero o en el plasma. Las concentraciones
de glucosa en el suero son aproximadamente 15% ms altas
que las concentraciones de glucosa en la sangre total. Debe
tomarse en cuenta que las concentraciones totales en la
sangre varan con el hematocrito. La glucosa sangunea total
se aproxima muy marcadamente a la glucosa plasmtica
cuando el hematocrito es bajo. La diferencia del 15% entre la
glucosa sangunea total y la glucosa plasmtica descrita arriba
es para un valor del hematocrito de aproximadamente el 45%.
Referencias
1.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,
anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan
Publicaciones, Captulos: 32.
2.-NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para
la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus en
la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud.
3.-MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015-
SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.
4.-Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.
Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. SSA. Mxico.
Determinacin de glucosa.
Requisito para la prctica: ayuno de 8 horas
Podr participar un integrante por equipo, de manera que
en todo el grupo se puedan trabajar las diferentes
condiciones.
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa Oxidasa (Aspergillus
nger)].
Lancetas estriles.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico infeccioso
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.
Sujetos con diferentes ingesta de carbohidratos:
a).-15 gramos de glucosa.1er Equipo
b).-15 gramos de sacarosa. 2 Equipo
c).-15 gramos de cereal. 3er Equipo
Mtodo.
Determinacin de glucosa.
1.-A cada uno de los sujetos se les determinar la
concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir la carga de los diferentes
monosacridos).
30 minutos, 60 minutos y 90 minutos, despus de de ingerir
los alimentos.
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos:
1.-Lave sus manos y limpie con una torunda de
algodn con alcohol la zona donde se realizar
la puncin.
2.-Aplique un suave masaje a la punta de su
61
dedo que le ayudar a obtener una gota de sangre adecuada.
No exprima en exceso el rea de puncin.
3.- Acerque y mantenga la gota de sangre
en el canal estrecho del borde superior de
la tira reactiva.
8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la lancetas.
Para el desecho de las lancetas siga los siguientes pasos:
9.-Deposite la lanceta en un recipiente para material punzo
cortante.

10.-Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material

biolgico-infeccioso junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica.
4.- a) Muestra adecuada
b).Muestra insuficiente 11.-Con los datos obtenidos completar el cuadro 9.1 y hacer
una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.

Cuadro 5.1 Resultados

a b Fecha:________________________
5.- Inserte la tira reactiva en el puerto de
anlisis, con el extremo de las barras de Nombre:
contacto de primero y mirando hacia Edad: Sexo:
arriba. Empjela hasta que no avance Tiempo en (min.) [Glucosa mg/dl]
ms. 0
30
60
6.- Hasta que la ventana de confirmacin 90
este completamente llena de sangre, antes
que el medidor comience la cuenta
regresiva.

7.-Lectura: el resultado de la prueba de glucosa de su sangre

aparecer despus de que el medidor cuente en forma
regresiva de 5 a 1.

Anotar el resultado en la tabla correspondiente

Tabla 5.1.

62
 Prctica 6
Determinacin de colesterol y lipoprotenas plasmticas
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1.Recordar la estructura de los diferentes lpidos circulantes y
sus funciones.
2.Describir las diferentes fuentes de colesterol, su funcin y la
dinmica del colesterol plasmtico.
3.Investigar el papel del colesterol y otros lpidos en el desarrollo
de la aterosclerosis.
4.Describir la composicin y la funcin de las lipoprotenas.
5.Describir los principios analticos para la determinacin del
colesterol total, colesterol de HDL y de LDL, apolipoprotenas y
triacilgliceroles plasmticos.
6.Calcular la concentracin de colesterol de VLDL y de LDL a
partir de las concentraciones de colesterol total, de colesterol de
HDL y triacilgliceroles.
INTRODUCCIN
Los dos lpidos de la sangre con un mximo inters en el
diagnstico clnico son el colesterol y los triacilgliceroles (TAG);
ambos se transportan en las lipoprotenas, que son partculas
globulares de alto peso molecular con un ncleo formado por
lpidos hidrofbicos TAG y steres de colesterol , los cuales
aportan la mayor parte de la masa de la partcula, y por una sola
capa superficial de molculas de fosfolpidos, colesterol y
protenas o polipptidos que rodean al ncleo y estabilizan la
partcula para que permanezca en solucin dentro del plasma.
Las lipoprotenas principales que circulan en el plasma humano
son los quilomicrones, las lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), las lipoprotenas de baja densidad (LDL) y las
lipoprotenas de alta densidad (HDL).
El colesterol es esencial para el crecimiento y la viabilidad
de las clulas de los organismos superiores; sin embargo, los
altos niveles de colesterol srico son considerados como un
importante factor de riesgo de enfermedad y muerte porque
contribuyen a la formacin de placas aterosclerticas. El
colesterol se transporta en la sangre por tres diferentes
lipoprotenas: LDL, HDL y VLDL. Los estudios epidemiolgicos
han establecido con claridad que mientras mayor sea el valor del
colesterol-LDL mayor ser el riesgo de enfermedad cardiaca
aterosclertica; por el contrario, mientras mayor sea la
concentracin del colesterol-HDL menor ser el riesgo de
enfermedad cardiaca coronaria. En otras palabras, las cifras
elevadas de LDL son atergenas, en tanto que las de HDL son
protectoras, por lo que el clculo del cociente colesterol-
HDL/colesterol-LDL que es normalmente de 0.34 0.11
constituye un ndice de aterogenicidad.
En general, se cree que las lipoprotenas que contienen
apoB 100 son potencialmente atergenas.
63
ALTERACIONES DE LAS LIPOPROTENAS consigo un incremento en la viscosidad y maleabilidad de las
PLASMTICAS Y ATEROGNESIS membranas se inducen cambios en el endotelio y en los
monocitos con un aumento en su migracin y adherencia
Desde el punto de vista clnico se ha atribuido a determinadas
probablemente la primera anomala celular de la aterognesis.
lipoprotenas el papel de factores esenciales directos en el
Segn la hiptesis de respuesta a la lesin, la ms
desarrollo o en la prevencin de ciertas enfermedades,
aceptada sobre la patognesis de la aterosclerosis, cualquier
principalmente de tipo vascular. Las anomalas en el transporte
lesin en el endotelio o msculo liso de la pared vascular que
de lpidos ocurren bsicamente en los
puede ser causada por la hipercolesterolemia,
sitios de produccin o en los de utilizacin de las lipoprotenas
hipertrigliceridemia, el estrs mecnico de la hipertensin arterial,
del plasma y provocan varios tipos de hipo e
agresiones qumicas como el tabaquismo, etctera altera la
hiperlipoproteinemias disminucin o elevacin de los niveles
relacin existente entre el endotelio vascular, las clulas del
plasmticos de lipoprotenas.
msculo liso, los monocitos, los macrfagos, las plaquetas y los
El anlisis de las lipoprotenas plasmticas tiene valor
componentes de la sangre circulante, en particular los lpidos, y
diagnstico, ya que permite el reconocimiento de defectos
genera una respuesta inflamatoria fibroproliferativa, con la
primarios hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia familiares,
participacin de un gran nmero de factores de crecimiento,
deficiencia familiar de lipoprotena lipasa o apoprotena CII,
citocinas y molculas vasorreguladoras, que dan origen a las
etctera y es de gran valor para describir la alteracin
placas aterosclerticas.
lipoproteica subyacente a otro trastorno clnico, como la diabetes,
Por otro lado, se ha observado que las partculas LDL
la obesidad, la hepatitis, el hipotiroidismo, el consumo de alcohol,
oxidadas por los macrfagos lo cual ocurre normalmente causan
el uso de anticonceptivos orales.
lesin al endotelio, lo que puede ser, de manera particular,
Cabe destacar que la mayor parte de las hiperlipo-
atergeno. La formacin de anticuerpos contra LDL oxidadas
proteinemias, aquellas que consisten en una elevacin de la
tambin puede ser importante en la formacin de la placa. Por
concentracin de colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a),
tanto, hay un inters clnico cada vez mayor en la funcin de los
conllevan un alto riesgo de producir accidentes cardio y
antioxidantes, como las vitaminas C, E y el -caroteno. Los
cerebrovasculares, necrosis o prdida de la funcin en las
estrgenos tambin pueden actuar como antioxidantes en la
extremidades, lo cual se debe a que el colesterol es el agente
prevencin de aterosclerosis. Inclusive, se ha visto que las
causal de la aterosclerosis subyacente en dichos padecimientos.
lipoprotenas HDL tienen efectos antioxidantes in vitro.
De ah el inters actual por el diagnstico temprano y el
Tradicionalmente, las anomalas de los lpidos sanguneos
tratamiento de estas hiperlipoproteinemias.
se han valorado con un examen global de colesterol y TAG. En la
Se desconoce el mecanismo exacto por el cual la
actualidad estos datos son insuficientes para valorar
hipercolesterolemia conduce a la aterosclerosis. Sin embargo, se
cree que al alterarse la relacin colesterol/fosfolpido que lleva

64
correctamente una hiperlipemia, por lo que se deben investigar Colesterol esterasa
tambin las diferentes fracciones lipoproteicas. steres de colesterol colesterol + cidos grasos
Colesterol oxidasa
FUNDAMENTO DE LAS DETERMINACIONES Colesterol + O2 4-colestoma + H2 O2
La evaluacin de pacientes en los que se sospecha alguna Peroxidasa
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol cromgeno + H2O
alteracin en los lpidos plasmticos puede incluir la medicin de
colesterol total y TAG y de una o ms lipoprotenas. Adems, la
cuantificacin de Lp(a), apoAI y apoB, o la actividad de la Determinacin de triacilgliceroles. El mtodo utilizado se
lipoprotena lipasa u otras enzimas, est siendo ampliamente basa en la hidrlisis de los TAG por una lipasa y la determinacin
valorada para incluirla como procedimiento clnico de rutina. del glicerol liberado en la reaccin. Para ello, el glicerol es
fosforilado por la glicerol cinasa formando glicerol-3-fosfato, el
Determinacin del colesterol total. El colesterol total es cual se oxida por la glicerolfosfato oxidasa a dihidroxiacetona
igual a la suma del colesterol contenido en las tres lipoprotenas fosfato generando en la reaccin perxido de hidrgeno. La
que lo transportan: peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del perxido a un
Colesterol total = colesterol VLDL + colesterol HDL + colesterol aceptor que es cromgeno, como la 4-aminoantipirina (4-AAP) y
LDL el 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfonato (DHBS), que se colorean
al oxidarse. La absorbencia del cromgeno oxidado a 520 nm es
Adems, el colesterol existe en el organismo en dos
proporcional a la concentracin de TAG.
fracciones: una en estado libre y otra esterificado 60 a 75%,
La reaccin completa se expresa:
por lo que, para la determinacin del colesterol total, se utiliza
una serie de reacciones enzimticas en donde, en una primera
Lipasa
reaccin, los steres se hidrolizan dejando libre el grupo 3-OH
TAG glicerol + cidos grasos
del colesterol. En la segunda reaccin este grupo se oxida y se
Glicerol cinasa
obtiene, como un producto, el perxido de hidrgeno, el cual, por
Glicerol + ATP glicerol-3-fosfato + ADP
efecto de la peroxidasa, transfiere uno de sus oxgenos a un
Glicerolfosfato oxidasa
aceptor cromgeno. La absorbencia del cromgeno 4- Glicerol-3-fosfato + O2 dihidroxiacetona fosfato + H2O2
benzoquinona-monoimino-fenazona) se determina a 520 nm y es
Peroxidasa
proporcional a la concentracin de colesterol. La reaccin global
H2O2 + 4-AAP + DHBS cromgeno oxidado + H2O
es la siguiente:

Determinacin de colesterol-HDL. Por regla general, el

anlisis de las lipoprotenas del plasma requiere, primero, la

65
separacin de las clases de lipoprotenas y, segundo, la medicin
de la lipoprotena o del componente lipoproteico de inters.
La determinacin es relativamente simple si se precipitan
todas las lipoprotenas que contienen apoB100 VLDL, IDL, LDL
y Lp(a) a excepcin de las HDL con un polianin, generalmente
glucosaminoglicanos con carga negativa heparina, dextran o
fosfotungsteno y un catin bivalentepor lo comn, Mn2+ o
Mg2+ y se determina el colesterol-HDL que queda en solucin
por el mtodo descrito para el colesterol total.
La relacin colesterol total/colesterol-HDL se considera
como un indicador de riesgo coronario. Normalmente esta
relacin es menor de cinco; mientras menor sea el valor, mejor
ser el pronstico para el paciente.
Determinacin de colesterol-VLDL. En general, la
concentracin de TAG en el plasma sanguneo proporciona un
parmetro excelente de la concentracin de las lipoprotenas
ricas en TAG como las VLDL. Esta apreciacin parte de que en
condiciones normales de ayuno no se encuentran quilomicrones
en el plasma y la proporcin TAG/colesterol de la VLDL es
invariable de 5:1 en mg/dl o de 2.2:1 en mmol/l, de tal modo
que la cuantificacin de la concentracin de TAG es suficiente
para calcular la concentracin de la VLDL con un porcentaje de
error pequeo en la estimacin. Si la concentracin de colesterol-
VLDL es la quinta parte de la concentracin de TAG cuando sta
se expresa en mg/dl, entonces:
TAG
Colesterol- VLDL = -----------
5 colesterol-LDL es el mtodo del polivinilsulfato (PVS). El PVS
o si las concentraciones se expresan en mmol/l:
TAG
Colesterol- VLDL = -----------
2.2
Esta frmula no es apropiada para muestras con una
concentracin de TAG mayor a 400 mg/dl (10.390 mmol/l) o en
muestras que tengan quilomicrones.
Determinacin del colesterol LDL. Aproximadamente las dos
terceras partes del colesterol plasmtico total son transportadas
en las LDL de tal manera que, la concentracin de este lpido
proporciona una medida bastante precisa del nivel de LDL en la
mayora de las personas. Por ello es posible estimar con
bastante exactitud, en casi todos los casos, la concentracin de
LDL sobre la base del conocimiento de la concentracin de VLDL
(estimada por los TAG) y la del colesterol total. No obstante, para
estimar con mayor exactitud la concentracin de LDL debe
cuantificarse la concentracin de colesterol de las HDL, lo cual es
relativamente simple. Las LDL se estiman como sigue:
Colesterol LDL = colesterol-total (colesterol-HDL
+ colesterol-VLDL)
Si se determina la concentracin de lpidos en moles en
lugar de en peso y se sustituye el valor estimado de VLDL a
partir de la concentracin de TAG, la frmula equivalente se
transforma en la expresin descrita por Fridewald (1972):
Colesterol LDL = colesterol total (colesterol HDL
+ TAG/2.2)
Otra forma sencilla de determinacin indirecta del
provoca la precipitacin de las LDL y deja en el sobrenadante las
VLDL y las HDL. El valor del colesterol-LDL se calcula restando
66
al valor del colesterol total (colesterol en VLDL, LDL y HDL) el
valor del colesterol en el sobrenadante de la precipitacin
(colesterol en VLDL y HDL).
Colesterol LDL = colesterol total colesterol en el sobrenadante
(colesterol-HDL y colesterol-VLDL)
La determinacin de LDL se puede hacer directamente
mediante procesos inmunoqumicos que requieren una especial
destreza y un equipamiento especfico, por lo que resulta de
difcil adaptacin a fines acadmicos. La tcnica consiste en
hacer reaccionar esferas de ltex revestidas con anticuerpos
contra apolipoprotenas de las LDL. Estas partculas se separan
del resto y se determina el colesterol.
Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones pueden ser
detectados si se deja el tubo de ensayo que contiene el plasma
sanguneo en el refrigerador durante una noche. Los
quilomicrones de mayor tamao, pero no las VLDL, se ubicarn
en la superficie del tubo formando una capa cremosa que puede
detectarse visualmente. La presencia de quilomicrones en el
plasma en ayunas se considera anormal.
Determinacin de Lp(a). La Lp(a) se determina
directamente por mtodos inmunoqumicos al igual que las LDL
y, como ya se dijo, su concentracin constituye un factor
independiente de riesgo coronario. Normalmente la Lp(a) se
precipita junto con las lipoprotenas que contienen apoB, por lo
que la medicin del colesterol de la LDL incluye la contribucin
de colesterol de la Lp(a).
Determinacin de apoAI y apoB. La determinacin de
apolipoprotenas, particularmente la apoA y la apoB, es un dato
complementario para la cuantificacin de otros componentes
lipoproteicos y ayuda a evaluar si un individuo tiene un riesgo
aumentado de cardiopata coronaria, sobre todo en los estados
hiperlipidmicos donde hay un aumento de TAG en los
quilomicrones o en las VLDL, y cuando las LDL y HDL contienen
menos cantidad de steres de colesterol y ms TAG en su
ncleo debido al intercambio de los componentes de stos entre
las lipoprotenas. En tales circunstancias, la cuantificacin de las
apoprotenas proporciona clculos ms seguros y tiles de la
concentracin de partculas lipoproteicas.
La mayora de los mtodos de cuantificacin, todos los
cuales requieren un equipamiento especial, se basan en la
identificacin inmunolgica de las apolipoprotenas. La tcnica
ms usada es el inmunoanlisis ligado a enzimas y de
fluorescencia (ELISA).
Material
Gradilla con 8 tubos de ensayo.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Pipetas automticas
Puntas para pipetas automticas
Solucin de enzimas para colesterol: amortiguador Tris 100
mmol/l, pH 7.7; MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1 mmol/l,
fenol 6 mmol/l; colesterol esterasa 160 U/l, colesterol oxidasa
100 U/l y peroxidasa 2 000 U/l.
Patrn de colesterol de 170 de 200 mg/dl (5.17 mmol/l) para
colesterol total.
Solucin de enzimas para TAG: amortiguador Tris 100 mmol/l,
pH 6.7, ATP 0.7 mmol/l, MgCl2 4 mmol/l, 4-aminoantipirina 0.4
mmol/l, 3,5-dicloro-2-hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/l, lipasa
1 000
67
U/l; glicerol cinasa 1000 U/l, glicerol fosfato oxidasa 4000 U/l y Preparacin de los tubos (volumen en ml)
peroxidasa 2000 U/l.
Patrn de TAG (triolena) de 250 mg/dl (2.8 mmol/l) o de 100 Tubo 1 2 3 4
mg/dl. Estndar de - 10 l - -
Reactivo precipitante para HDL: sulfato de dextrn 10g/l, MgCl2 colesterol
0.5 mol/l. Plasma - - 10 l -
Espectrofotmetro a 520 y 540 nm.
Jeringa, ligadura y torundas con alcohol. Sobrenadan - - - 20 l
Gotero con anticoagulante. te con HDL

Mtodo Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para

1.-Obtener plasma de un voluntario. El plasma posprandial colesterol. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10
contiene quilomicrones, lo que puede aumentar marcadamente la min.
concentracin plasmtica de TAG, por ello es importante
permanecer en ayunas durante 12 horas antes de la puncin 4.-Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm;
calibrar a cero con el blanco.
venosa. La estabilidad del plasma es de 3 das a 4o C.
Proceder a determinar colesterol total, TAG y colesterol-
Para determinar los TAG preparar la siguiente serie de tubos:
HDL como se describe a continuacin:
2.- A 50 l ml de plasma agregarle 20 l de la solucin
Preparacin de los tubos (volumen en ml).
precipitante de VLDL y LDL para determinacin de colesterol-
Tubo 1 2 3
HDL; mezclar perfectamente y dejar reposar 10 minutos.
Blanco - -
Centrifugar 10 minutos a
-
3 000 rpm. El sobrenadante libre de lipoprotenas, excepto HDL
que contina siendo soluble, ser utilizado para determinar el Estndar de TAG - 10 l -
colesterol. Plasma - - 10 l
3.-.Para la determinacin de colesterol total y colesterol-HDL
preparar la siguiente serie de tubos:
Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para
TAG.
Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 min.

68
5. Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm; As = Absorbancia del estndar.
calibrar a cero con el blanco. Ap = Absorbancia del problema.

Resultados 2. Calcular la concentracin de TAG de la siguiente

1. De acuerdo al estndar de colesterol, calcular la concentracin manera:
de colesterol correspondiente a los tubos 3 y 4 (tubos que Cs
contienen el plasma y el sobrenadante) de la siguiente manera: [Triacilgliceroles] = ------ X Ap
Cs As
[Colesterol] = ------ X Ap
As Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l.
As = Absorbencia del estndar.
Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l. Ap = Absorbencia del problema.
3.-Compare sus resultados con los valores normales del colesterol concentraciones de los lpidos durante los meses siguientes estn
total, del colesterol-HDL y de los triacilglicridos en el plasma. resumidos en la tabla siguiente:
4.-Calcular la concentracin de colesterol VLDL por la frmula:
colesterol-VLDL= TAG/5.
5.-Calcular la concentracin de colesterol LDL a partir de las Ene Oct 97 Feb
concentraciones de colesterol total, HDL y VLDL. 97 98
6.-Estimar el cociente colesterol-HDL/colesterol-LDL y de Peso (Kg) 93 90 95
colesterol total/colesterol-HDL (ndices aterognicos). Colesterol total 275 295 320
7.- Analizar el significado de los datos obtenidos y hacer un mg/dl
informe de los resultados y de las conclusiones que de stos se TAG mg/dl 490 470 550
deriven. HDL mg/dl 35 33 29
8. - A continuacin se resumen dos casos clnicos: LDL directa - - 259
mg/dl
En enero de 1997, un hombre de 38 aos asisti a una Colesterol total/ - - -
evaluacin mdica. Pes 93 kg, tena presin arterial alta colsterol-HDL
160/108, realizaba poco ejercicio, tomaba de 5 a 10 cervezas y (ndice
fumaba 2 a 3 cajetillas de cigarros a la semana. El peso y las atergeno)

69
B) Una mujer de 23 aos de edad solicita una determinacin de Detectar cmo dos personas con el mismo colesterol total tienen
lpidos debido al antecedente familiar importante de cardiopata. perfiles lipdicos distintos.
La paciente no fuma y pesa 55 kg. Los resultados de la TRABAJOS CONSULTADOS
determinacin de los lpidos iniciales despus de un ao y tres
meses de haber iniciado la administracin de anticonceptivos 1. Allain CA, Poon LS, Chan CSG, Richmond W, Fu PC.
orales desogestrel, son los siguientes: Enzymatic determination of total serum cholesterol. Clin Chem.
1974; 20: 470-475.
Ene Ene Abr 2. Montgomery R. Bioqumica. Casos y texto. 6a.ed.
97 98 98 Barcelona: Editorial Harcourt-Brace; 1998: 332-389.
Peso (kg) 55 56 58 3. Pennachio D. Lineamientos para la deteccin de
Colesterol total mg/dl 285 263 315 hipercolesterolemia. Atencin Mdica. 1997; 10/2: 30-43.
TAG mg/dl 85 90 124 4. Alba Zayas EL, Pereira RG, Aguilar BA. Lipoprotena
HDL mg/dl 40 37 44 (a):estructura, metabolismo, gentica y mecanismos
Colesterol-VLDL patognicos. Rev Cubana Invest Biomed. 2003; 22(1): 32-40.
LDL mg/dl 5. Masa-aki K, Rader JD. Gene therapy for lipid disorders. Curr
Colesterol Control Trials Cardiovasc Med. 2000; 1:120-127
total/colesterol-HDL 6. Russet G.W. Dextran sulfate-Mg2+ precipitation procedure
(indice atergeno) for quantitation of HDL cholesterol. Clin Chem. 1982; 28(6):
1379-88.
7. Samaniego V, Lpez D. Lpidos. Sinopsis del informe del
Completar los datos que hacen falta en los cuadros anteriores panel de expertos sobre niveles de colesterol sanguneo
(tomar en cuenta que no puede hacerse el clculo de la en nios y adolescentes. Aterosclerosis. 1999; 2(1): 22-24
concentracin de VLDL si los TAG son mayores de 400 mg/dl). 8. Vogel AA. Coronary risk factors, endothelial function, and
Constatar la evolucin temporal de los niveles de colesterol y atherosclerosis. Clin Cardiol. 1997; 20:426-432.
TAG. 9. Velzquez CA. Papel de las especies reactivas del oxgeno
Detectar la presencia de hbitos de alto riesgo y hacer notar la en la arterioesclerosis. IATREIA. 2000; 13 (3) septiembre
importancia de las modificaciones en esos hbitos. 10. Mohammed HM, Frohlich J. Effects of dietary phytosterols
Al ser iguales todos los factores de riesgo para ambas personas: on cholesterol metabolism and atherosclerosis: clinical and
cul tendra mayor riesgo de enfermedad coronaria? experimental evidence. Am J Med. 1999; 107: 588-592
3. .

70
 Prctica 7
Integracin Metablica
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1.-Que el alumno pueda integrar las vas metablicas de los
carbohidratos, de los lpidos y protenas en (condiciones
normales) en un paciente sano.
2.-Que el alumno reconozca los sitios denominados
encrucijadas metablicas y las enzimas de las vas
reguladoras.
3.-Que el alumno pueda correlacionar el papel que tienen las
hormonas en la regulacin de las vas.
4.-Que el alumno sea capaz de analizar los datos de las
pruebas clnicas en un sujeto normal.
5.-Que el alumno relacione que vas se encuentran alteradas
en un paciente diabtico.
Los alimentos que ingerimos deben estar constituidos por los
6 componentes bsicos que son protenas, carbohidratos,
lpidos, vitaminas, minerales y agua, la cantidad que se
requiere ingerir de cada uno de los componentes vara de
acuerdo a la constitucin y la actividad fsica que se realiza,
tanto la falta como en el exceso de consumo de alguno de los
componentes bsicos conlleva a diversos trastornos
metablicos.
Aproximadamente del 40 al 45% de nuestra ingesta calrica
proviene del consumo diario de carbohidratos complejos los
cuales al ser digeridos dan lugar a los diferentes
monosacridos entre los que se encuentra la glucosa, la cul
se distribuye por la sangre a las clulas para poder captar la
glucosa, siendo la principal fuente de energa. Algunos tipos
celulares son dependientes de la liberacin de insulina por el
pncreas como es el caso de las clulas musculares. Si la
insulina no funciona adecuadamente, la glucosa se queda en
el flujo sanguneo causando elevacin de los niveles de
glucosa en la sangre y a esto se le denomina hiperglucemia;
una de las enfermedades que se caracteriza por la
hiperglucemia en sus primeras etapas es la diabetes mellitus.
La diabetes mellitus esta caracterizada por una hiperglucemia
resultante de defectos en la secrecin de insulina, en la accin
de la insulina o en ambas. La hiperglucemia crnica de la
diabetes est asociada a lesiones, disfuncin y fallo de varios
rganos, especialmente de los ojos, los riones, el corazn y
los vasos sanguneos.
Varios procesos patognicos estn implicados en el desarrollo
de la diabetes. Estos van desde una destruccin
autoinmunolgica de las clulas del pncreas, con la
consiguiente deficiencia de insulina, hasta anormalidades, en
las que el pncreas no produce suficiente insulina o la que
produce no es eficiente. La accin deficiente de la insulina en
71
los tejidos diana es la responsable del metabolismo anmalo
de los carbohidratos de carbono, grasas y protenas en la
diabetes.
La accin deficiente de la insulina ocasiona una respuesta
inadecuada en uno o ms puntos de la compleja trama
metablica en la que esta hormona tiene papel regulatorio.
Frecuentemente coexisten en el mismo paciente una
inadecuada secrecin de insulina as como defectos de la
accin de sta, en la actualidad no se sabe si una de estas
anormalidades es la consecuencia o la causa de la otra. En
cualquier caso, el resultado es la hiperglucemia.
La gran mayora de los casos de diabetes pueden incluirse en
dos amplias categoras etiopatognicas. En el primer caso
(diabetes de tipo I) la causa es una deficiencia absoluta en la
secrecin de insulina. Los individuos con alto riesgo de
desarrollar este tipo de diabetes pueden ser a menudo
identificados mediante evidencias serolgicas de un proceso
autoinmune que se produce en los islotes pancreticos y
tambin mediante marcadores genticos. En la segunda
categora (diabetes de tipo II), mucho ms prevalente, la
causa es una combinacin de una resistencia a la accin de la
insulina y de una inadecuada respuesta secretora
compensadora. La diabetes tipo II se caracteriza por estar
presente muchos aos antes de ser detectada una
hiperglucemia sin sntomas clnicos (sed, perdida de peso),
pero suficiente para ocasionar cambios patolgicos y
funcionales sobre los rganos blanco. Durante este perodo
asintomtico, es posible demostrar trastornos en el
metabolismo de los carbohidratos midiendo la glucosa
plasmtica en ayunas o despus de una sobrecarga de
glucosa por va oral.
El exceso en la ingesta de carbohidratos no solamente
mantiene la reserva de energa en forma de glucgeno sino
que tambin el exceso de carbohidratos es convertido en
triacilgliceroles. En el hgado los triacilgliceroles se sintetizan a
partir de acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo empaquetados
con apoprotenas y en lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), secretados al torrente sanguneo siendo almacenados
en tejido adiposo. Para su consumo los triacilgliceroles son
hidrolizados a glicerol y cidos grasos. En la dieta es
importante la presencia de lpidos ya que son precursores de
diferentes componentes de la clula como los fosfolpidos, uno
de los lpidos que tiene una gran importancia en la clula es el
colesterol, ya que proporciona rigidez a las membranas
celulares y es precursor de las sales biliares as como de
hormonas esteroideas. El colesterol se puede obtener por la
alimentacin y por sntesis del propio organismo, siendo las
clulas hepticas y las suprarrenales las de mayor sntesis.
Para llevar a cabo la sntesis de colesterol se requiere la
presencia de acetil-CoA el cual proviene de la degradacin de
glucosa, cidos grasos y aminocidos por lo cual se denomina
a la acetil-CoA la encrucijada metablica.
El colesterol es insoluble en agua por lo que transportado en
la sangre por tres lipoprotenas que son de muy baja densidad
(VLDL), de baja densidad (LDL) y las de alta densidad (HDL).
Los niveles normales de colesterol total en sangre en un
adulto son de < 200 mg/dl y cuando estos valores se ven
aumentados se asocian a la formacin de placas
aterosclerticas que pueden ocluir los vasos sanguneos y
como consecuencia provocar infarto al miocardio y
alteraciones cardiovasculares.
72
La cuantificacin de las LDL representa un papel clave en la
esclerosis coronaria ya que concentraciones elevadas indican
desarrollo de la aterosclerosis.
En el caso de las HDL al disminuir su concentracin aumenta
el riesgo de desarrollar aterosclerosis.
Las protenas constituyen la fuente primaria del metabolismo
del nitrgeno en el organismo,
Los aminocidos producto de la digestin de las protenas que
se consumen en los alimentos, son utilizados para la sntesis
de protenas y de compuestos nitrogenados o se puede oxidar
para producir energa.
El hgado es el rgano principal en donde se realiza la
oxidacin de los aminocidos. El nitrgeno de los aminocidos
forma amoniaco el cual es toxico para el organismo. El
amoniaco y los grupos amino se convierten en urea en el
hgado, que no es toxica y se elimina fcilmente por la orina ya
que es hidrosoluble.
Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado son los
nucletidos. Las purinas y las pirimidinas, que son esenciales
para la sntesis de nucletidos y cidos nuclecos.
Los nucletidos son precursores del DNA y el RNA, as como
tambin forman parte de la estructura de muchas coenzimas
adems de ser componentes del metabolismo energtico.
La degradacin de las purinas no genera energa y el producto
de la degradacin del anillo purnico es el cido rico, que se
elimina por la orina, tiene una solubilidad limitada por lo que
su exceso da como resultado la formacin de cristales en
regiones del organismo como pueden ser los dedos gordos del
pie, trastorno que se conoce como gota.
Los valores elevados de cido rico se presentan en: ingestin
de alimentos ricos en nucleoprotenas, insuficiencia renal,
azoemias prerrenales.
Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado es la
creatinina que en el msculo en su forma fosorilada sirve
como almacn de alta energa y se transforma con facilidad en
ATP por la enzima creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es
inestable y se cicla espontneamente forma la creatinina que
se elimina en la orina. La produccin de creatinina es
proporcional a la masa muscular corporal. La cantidad de
creatinina que se elimina diariamente puede utilizarse como
indicador de la normalidad de la funcin renal
Determinacin de glucosa
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa oxidasa (Aspergillus
nger)].
Lancetas estriles
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico-infeccioso.
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.
Determinacin de colesterol y triacilgliceroles.
Dichas determinaciones solo se realizaran al tiempo 0 y a
los 120 minutos.
Accutrend Roche para determinacin de colesterol y
triacilgliceroles.
Tiras reactivas para determinacin de colesterol.
Tiras reactivas para determinacin de triacilgliceroles.
Lancetas estriles
73
Las determinaciones de urea, creatinina y cido rico, se Mtodo
realizaran en orina. Determinacin de glucosa
Las muestras de orina se realizaran solo al tiempo 0 y a Podr participar un integrante por equipo, de manera que
los 120 minutos. en todo el grupo se puedan trabajar las diferentes
condiciones.
La muestra de orina deber ser del alumno a quien se le haya
determinado glucosa, colesterol y triacilgliceroles para poder
1.-Dos sujetos, uno de los cuales consumir una dieta rica en
discutir todos los valores en conjunto y poder enlazar en un
carbohidratos y el otro una dieta rica en protenas.
mismo individuo el efecto que tiene la dieta sobre el
metabolismo.
2.-A cada uno de los sujetos se les determinar la
Determinacin de urea
concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
Pipetas automticas (10 a 200l)
glucmetro en los siguientes tiempos:
Puntas para micropipetas
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
Propipetas.
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, despus de ingerir los
Reactivo para determinacin de urea.
alimentos.
Estndar de urea (50 mg/dl).
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
Espectrofotmetro.
seguir los siguientes pasos:
Celdas.
Agua destilada.
1.- Lave sus manos y limpie con una
torunda de algodn con alcohol la zona
Determinacin de cido rico
donde se realizar la puncin.
Pipetas de 5 ml.
Gradilla con 2 tubos de ensaye
Reactivo para cido rico
2.- Aplique un suave masaje a la punta de
Estndar de cido rico (6 mg/dl)
su dedo que le ayudar a obtener una
gota de sangre adecuada No exprima en
Determinacin de creatinina
exceso el rea de puncin.
Reactivo para determinacin de creatinina
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Celdas.

74
3.-Acerque y mantenga la gota de sangre en el canal estrecho 9.-Deposite la lanceta en un recipiente
del borde superior de la tira reactiva. para material punzo cortante.

10- Deseche las tiras reactivas en una

4 a) Muestra adecuada bolsa para material biolgico-infeccioso
a b
b) Muestra insuficiente junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica.
5.- Inserte la tira reactiva en el puerto de
anlisis, con el extremo de las barras de 11.-Con los datos obtenidos completar el cuadro 10.1 y hacer
contacto de primero y mirando hacia una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.
arriba. Empjela hasta que no avance Cuadro 7.1 Resultados
ms.
Fecha:_________________
6.- Hasta que la ventana de confirmacin
este completamente llena de sangre, Nombre:
antes que el medidor comience la cuenta Edad: Sexo:
regresiva. Tiempo [Glucosa mg/dl]
(min.)
7.-Lectura el resultado de la prueba de 0
glucosa de su sangre aparecer despus de que el medidor 30
cuente en forma regresiva de 5 a 1. 60
120
Anotar el resultado en la tabla correspondiente
Tabla 7.1 Determinacin de colesterol y triacilgliceroles

8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la
lancetas.
Para el desecho de las lancetas siga los siguientes pasos:
1.-Lavarse las manos cuidadosamente
esto es con la finalidad de retirar residuos
de crema o grasa en las manos para
evitar determinaciones errneas
principalmente cuando se realiza la
determinacin de triacilgliceroles.

75
 8.-Bajar la tapa
2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer una tira reactiva del
envase y taparlo inmediatamente para evitar que las tiras se
sequen.

3.-Con la tapa cerrada inserte en la

ranura, en la direccin indicada por la 9.-Realice la lectura de la
flecha, la tira reactiva con el cuadrado concentracin de colesterol y
amarillo hacia arriba hasta que encaje y triacilgliceroles segn sea el caso.
deje verse la marca TG o CHOL impresa
en la tira reactiva.

4.-Frote y masajee la yema del dedo para

facilitar la extraccin y aplicacin de la NOTA: Tener cuidado al realizar la determinacin, ya que
sangre. solo cuentan con una tira reactiva para cada prueba.

8.-Anote la lectura.

5.-Con la lanceta introduzca para hacer la puncin y realice la
toma de muestra.
6.-Aplicar directamente la gota de sangre
a la tira reactiva
7.-Abrir la tapa y colocar la tira reactiva
con la muestra de sangre
Para las determinaciones de Urea, creatinina y cido rico
que se realizan en muestra de orina, estas
determinaciones son al tiempo cero y a los 120 minutos.
Determinacin de urea en orina
La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftaldehdo
en medio cido originando un complejo coloreado puede
identificarse espectrofotomtricamente.
H+
Urea + o-ftaldehdo Isoindolina

La urea es estable 5 das a 2-8 C.

76
1.-Para la determinacin de urea en orina, tomar la muestra La determinacin se realiza en tubos de ensaye
como se esquematiza en el cuadro. Estndar de urea (50 mg/dl).
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.

Celda 1 2 Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a

Muestra 10 l -- blanco de reactivos a 520 mn.
Estndar -- 10 l
Solucin reactiva 1 ml 1 ml El resultado se obtiene en mg/dl.
para urea
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
La determinacin se realiza en tubos de ensaye
Estndar de urea (50 mg/dl). La determinacin se realiza directamente en las celdas con la
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente. finalidad de tomar la lectura de las absorbancias exactamente
a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a
blanco de reactivos a 520 mn. Mezclar y poner en marcha el cronmetro, anotar las
absorbancias a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
El resultado se obtiene en mg/dl. Leer frente blanco de reactivos en el espectrofotmetro a 492
nm.
Determinacin de creatinina en orina Calcular el incremento de la absorbancia A = A2 A1.
Con las diferencias de absorbancias anotadas A, aplicar la
1.-Para la determinacin de creatinina en orina, tomar la siguiente ecuacin:
muestra como se esquematiza en el cuadro. A Muestra X [Estndar] = [Creatinina]
A Estndar
Celda 1 2
Orina 100 l -
El resultado se obtiene en mg/dl.
Estndar - 100 l
Solucin reactiva 1 ml 1 ml Determinacin de cido rico en orina
de creatinina 1.-Para la determinacin de cido rico en orina, tomar la
muestra como se esquematiza en el cuadro.

77
La determinacin se realiza en tubos de ensaye.
Estndar de cido rico (6 mg/dl) 5.-MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015-
SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
Secretara de Salud.
Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a
blanco de reactivos a 520 mn. 6.- Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.
Clculo de la concentracin de cido rico. Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. SSA. Mxico.
A Muestra X [Estndar] = [cido rico]
A Estndar 7.- NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-030-SSA2-1999, Para
la prevencin, tratamiento y control de la
hipertensin arterial. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
El resultado se obtiene en mg/dl.
de la Secretara de Salud.
Referencias
1.-Koolman J, Roehm KH (2004). Bioqumica Texto y Atlas: 3
Edicin, Ed. Mdica Panamericana, pp.: 158, 308-310
2.-Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). Marks
Basic Madical Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott
Williams & Wilkins. Pag. 24-26

3.-Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,

anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan Tubo 1 2
Publicaciones, Captulo: 32. Orina 100 l -
4.- NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Estndar - 100 l
Para la prevencin, tratamiento y control de la diabetes
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
mellitus en la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales
Mexicanas de la Secretara de Salud. de cido rico

78
 Prctica 8
Huella gnica
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1. Que el estudiante conozca la aplicacin de las tcnicas de
DNA recombinante.
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e interpretar los
datos generados a partir de una prueba de huella gnica.
3. El alumno adquirir la capacidad de manejar muestras para
anlisis de cidos nucleicos.
4. El alumno desarrollar destreza en la interpretacin de
resultados de metodologas bsicas de anlisis molecular.
FUNDAMENTO
El DNA es un polmero lineal formado por
desoxirribonucletidos que contienen a las bases nitrogenadas
adenina, guanina, citosina, timidina. La interaccin de las
bases nitrogenadas por puentes de hidrgeno permite la
formacin de la doble cadena de DNA. Cada grupo fosfato
est unido al carbono 5 de una subunidad de azcar y al
carbono 3 de la subunidad de azcar del nucletido contiguo.
Las cadenas se mantienen unidas por puentes de
hidrgeno entre las bases. Las cuales son completamente
lineales.
En la molcula de DNA que reside la informacin
gentica de un organismo, especficamente en la secuencia
de los nucletidos, de tal manera que cada tres bases forman
un codn que corresponde a su vez a uno de los 20
aminocidos, teniendo un total de 64 codones posibles, los
cuales conforman el cdigo gentico. En el DNA se
encuentran dos tipos de secuencia, la que es capaz de ser
leda para dar origen a una protena lo que permite que una
clula u organismo crezca desarrolle tambin la no codificante
una que codifica para las funciones celulares y otra no
codificante, que participa en la regulacin de su expresin.
Algunas de las secuencias de nucletidos no codificantes se
caracterizan por ser cortas, estn alineadas en tndem y se
repiten miles de veces de manera constante a lo largo del
DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede ser la siguiente.
ATTCGGTATTCGGTATTCGGT. A estas secuencias se les
denomina STR por sus siglas en ingls (Short Tandem
Repeat). El genoma eucaritico contiene muchas de estas
secuencias de DNA, y se ha visto que el nmero de unidades
repetidas presenta diferencias de individuo a individuo que con
las huellas digitales. En el caso de gemelos idnticos estas
secuencias son idnticas. Estas regiones pueden ser aisladas
del DNA con enzimas de restriccin apropiadas y separadas
de acuerdo a su longitud mediante electroforesis en gel.
Cuando se completa el proceso de separacin el resultado se
parece a un cdigo de barras de un envase de supermercado.
Este cdigo de barras de DNA ha permitido esclarecer
algunos hechos criminales y pruebas de paternidad, a la cual
se denomina tcnica de Huella gnica
Es muy frecuente que en la escena de un crimen se
encuentren, en pequeas cantidades muestras de naturaleza
biolgica a partir de las cuales se puede extraer el DNA como
son la sangre, la saliva, la piel, el msculo, el cabello, el
semen, los dientes y el hueso, entre otros.
79
 Un mtodo que permite tomar una pequea cantidad
de DNA y en pocas horas sintetizar millones de copias de una
porcin, es el mtodo de amplificacin conocido como PCR
(reaccin en cadena de la polimerasa), el cual se desarrollo
por K. Mullis (1990), En este mtodo se requiere conocer la
secuencia de nucletidos de los extremos del fragmento que
se desea amplificar. Estas secuencias se usan para disear
desoxioligonucletidos sintticos de DNA complementarios a
cada uno de estos extremos de la cadena de la doble hlice.
La muestra de DNA se coloca en una solucin que contiene
una DNA polimerasa, grandes cantidades
desoxinucletidos y los desoxioligonucletidos sintetizados
previamente. El mtodo se basa en la repeticin cclica de tres
reacciones sucesivas: en la primera reaccin, la solucin se
calienta para que el molde de DNA se separe en sus dos
cadenas. En la segunda reaccin, la temperatura se reduce
para permitir que los desoxioligonucletidos se apareen por
complementariedad de bases con el DNA molde y en la
tercera reaccin, la DNA polimerasa cataliza la sntesis
simultnea de las dos cadenas a partir de cada
desoxioligonucletido que acta como cebador. Al cabo del
primer ciclo de tres reacciones, el fragmento de DNA elegido
se ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de DNA molde
disponible para el segundo ciclo es doble, lo mismo ocurre
cada ciclo de duplicacin.
La obtencin de mltiples copias requiere 20 a 40 veces la
repeticin de los ciclos. El xito de esta tcnica radica en el
uso de una DNA polimerasa termoestable, que no se
desnaturaliza por los repetidos ciclos de calentamiento. Esta
enzima se aisl originalmente de la bacteria termfila Thermus
aquaticus.
La base de la tcnica conocida como huella gnica se
basa en las diferencias individuales de estas secuencias. Esto,
generalmente se trata de cambios en un solo par de bases
pertenecientes a diferentes individuos, que se presentan una
vez cada 500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
Referencias
Curtis, H; Barnes, N; Biologa. Sexta edicin. Editorial Mdica
Panamericana.
Lewin, B; Genes VI. Editorial Oxford.
Nelson, D; Cox, M; Lehninger. Principios de Bioqumica.
Tercera edicin. Ediciones Omega.
Yuri Sivolap, Ph.D., G. Krivda, Ph.D., N. Kozhuhova., S.
Chebotar., and Mark Benecke, PH.D. A Homicide in the
de Ukraine. DNA-based identification of a Boiled, Skeletozined,
and Varnished Human Skull, and of Bone Fragments Found in
a Fireplace. The American journal of Forensic Medicine and
Pathology. 22 (4): 412-414 ,2001.
Lennie Pineda Bernal. El anlisis de DNA para pruebas de
paternidad e identificacin forense. Acta Cientfica
Venezolana. 50: 24-28, 1999.
Andra Carla de Souza Ges, Dayse Aparecida da Silva,
Cristiane Santana Domingues, Joo Marreiro Sobrinho, Elizeu
Fagundes de Carvalho. Identification of a criminal by DNA
typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. So Paulo
Medical Journal. Revista Paulista de Medicina. 120 (3): 77-80,
2002.
Centre for Genetics Education. Genetic Testing and
Screening II Forensic and Other Applications. Directory of
Genetics Support Groups, Services and Information. Genetics.
235-239, 2004-2005.
Jeffreys Alec Genetic Fingerprinting Naure Medicine Vol
11(10).1035-1039. 2005.
Mullis K.B the Unusual Origen of the Polymerase Chain
Reaction Science Am. 262 (4) 56-65. 1990.
80
SESIN 1 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA DE
HUELLA GNICA
ESCENA DEL CRIMEN
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago Manitoba No. 520,
Col. Ampliacin Granada, Delegacin Miguel Hidalgo, en el
sof de la sala se encuentra el cuerpo de la duea de la casa,
una mujer de 42 aos de edad. El cadver presenta signos de
estrangulamiento pero sin marcas de sogas o cinturones;
tampoco se encuentran huellas digitales en su cuello. La
vctima presenta una lesin defensiva en el brazo derecho con
arma punzo cortante. En el sof se observan varias manchas
de sangre, algunas de ellas secas. Las ms abundantes
todava estn frescas. Se ignora si la sangre pertenece a la
vctima o a sus agresores.
El laboratorio forense se encarga de recopilar la informacin
de la escena dando a conocer los siguientes aspectos: el
cuerpo de la vctima se descubri 20 minutos despus del
asesinato. Presentaba con un golpe en la cabeza, presenta
seales de forcejeo en su brazo y debajo de las uas se
encuentran depositados restos de piel, sangre, y de cabellos.
Algunos de ellos presentan folculos. Todo seala que la
vctima forceje con su o sus agresores.
En el lugar tambin se hall un florero con restos de sangre, la
cual no se sabe si corresponde a la de la vctima o a los
agresores. En un extremo del sof se encuentra una pieza
dental y, debido a que la vctima conserva su dentadura
completa, es probable que el diente sea del victimario. En el
brazo izquierdo, la victima presenta varias mordidas, algunas
con sangre coagulada y otras con restos de saliva mezclados
con sangre.
En el interior de la casa faltan algunas piezas de valor, lo que
sugiere que el mvil fu el robo.
La polica cuenta con varios sospechosos, entre los que se
encuentra el esposo, con el cual la vctima tuvo una discusin
la noche anterior. Se desconoce el tema de la discusin y el
paradero el esposo. Otros sospechosos son los dos
repartidores del gas que una hora antes haban proporcionado
el servicio. Uno de ellos tiene problemas con la dentadura y
aclara que se encuentra en tratamiento dental, ya que ha
presentado sangrado y prdida de algunas piezas dentales.
Los otros sospechosos son los dos empleados de la casa, el
jardinero que tiene una antigedad de 4 aos y presenta una
lesin en el brazo que confiesa se hizo arreglando el jardn y
la cocinera quien tiene slo 3 meses laborando en la casa.
Con esta evidencia se compara el DNA de cada sospechoso
para encontrar al culpable o culpables del crimen, por lo que
debe determinar si las muestras de sangre, cabellos, pieza
dental y saliva sirven para estudiar el DNA y establecer las
caractersticas que permiten utilizar alguna o todas las
muestras para el estudio.
Cada equipo debe escoger alguna de las evidencias
previamente descritas y justificar su eleccin.
Para realizar la comparacin entre el DNA encontrado en la
escena con el DNA de los sospechosos deben contarse con
muestras proporcionadas por los mismos. Mencione de dnde
obtendra dicho material. En el caso del esposo debe tenerse
en cuenta que no se conoce su paradero, por lo cual la
muestra debe ser extrada de algn objeto de uso personal;
defina cul sera ste y justifique la eleccin del mismo.
81
SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA PROCEDIMIENTO
HUELLA GNICA 1.-Marcar los microtubos de la siguiente forma:
MATERIAL a) Tubo verde (muestra de la escena)
- DNA de la escena del crimen con amortiguador. b) Tubo azul (sospechoso 1)
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador. c) Tubo naranja (sospechoso 2)
- DNA del sospechoso 2 con amortiguador. d) Tubo violeta (sospechoso 3)
- DNA del sospechoso 3 con amortiguador. e) Tubo rojo (sospechoso 4)
- DNA del sospechoso 4 con Amortiguador. f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
- DNA del sospechoso 5 con amortiguador.
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl, 1800 U. 2.-Colocar los tubos marcados en la gradilla.
- Agua estril, 2.5 ml. 3.-A cada tubo adicionar 10 l de la muestra correspondiente;
- Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III utilizar una punta nueva para cada muestra.
0.2g /l, 100 l.
1.- 23,130 pb 4.-Adicionar 10 l de la mezcla de enzimas de restriccin a
2.- 9,416 pb cada uno de los tubos que contienen la muestra de DNA. Se
3.- 6,557 pb debe tener cuidado de no contaminar la mezcla de enzimas,
4.- 4,361 pb por lo cual se sugiere el empleo de una punta nueva por cada
5.- 2,322 pb tubo.
6.- 2,027 pb
- Colorante de DNA (Biorad biosafe). Muestras Enzimas de Volumen total
- Microtubos de colores. de DNA restriccin de la
EcoRI y reaccin
- Microtubos blancos.
PstI
- Geles de agarosa al 1.0%.
Muestra de la 10 l 10 l 20 l
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA). escena
Tris-base 39 mM, cido actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM. Sospechoso 1 10 l 10 l 20 l
- Gradillas para microtubos. azul
- Recipiente para teir geles. Sospechoso 2 10 l 10 l 20 l
- Pipeta automtica de 10-100 l. naranja
- Puntas para pipetas automticas. Sospechoso 3 10 l 10 l 20 l
- Marcador indeleble. violeta
- Fuente de poder. Sospechoso 4 10 l 10 l 20 l
- Cmara horizontal de electroforesis. rojo
- Parrilla para bao mara. Sospechoso 5 10 l 10 l 20 l
- Vaso de precipitado de 300 ml. amarillo
- Recipiente con hielo.
- Microfuga. 5.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra golpeando
suavemente los tubos con los dedos. Si se cuenta con una

82
microfuga aplique un pulso de 2 segundos para asegurarse
que toda la muestra se quede en el fondo del microtubo,
permitiendo que se mezcle adecuadamente y se lleve a cabo
la reaccin.
6.-Coloque los tubos en la gradilla e incbelos a 37C por 45
minutos.
7.-Transcurrido el tiempo de incubacin, adicione 10 l del
amortiguador de carga a cada tubo tpelos y agtelos
suavemente con los dedos.
8.-Coloque en la cmara de electroforesis el gel de agarosa,
teniendo cuidado que los pozos se encuentren orientados
hacia el ctodo [polo negativo (terminal negra)].
9.-Adicione 275 ml del amortiguador de corrida o lo que se
requiera para que se cubran los pozos.
10.-Coloque las muestras en el gel empleando una punta
nueva para cada muestra, las cuales se depositan de
izquierda a derecha amortiguador en el siguiente orden:
12.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el voltaje a 100 V y
realice la electroforesis por 40 60 minutos.
13.-Detenga la electroforesis cuando la muestra llegue a una
distancia aproximada de 2 cm del final del gel. Apague la
fuente de poder, remueva la tapa y retire cuidadosamente el
gel.
14.-Coloque en una charola 120 ml de la solucin teidora
100X y el gel, asegurndose que se encuentre sumergido en
la solucin. Tia los geles por 2 minutos.
15.- Despus se deben colocar los geles en una charola que
contenga 500700 ml de agua limpia y caliente (40-55C),
agite suavemente el gel por aproximadamente 10 segundos y
retire el agua, realizar los lavados que sean necesarios con
agua limpia hasta la aparicin de las bandas de DNA y hacer
la comparacin de las muestras.
Referencias
1.-Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting Kit
Instruction Manual BIORAD.

a) Carril 1: marcador de peso molecular, HindIII,10

l
b) Carril 2: escena del crimen verde, 10 l
c) Carril 3: sospechoso 1 azul , 10 l
d) Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10 l
e) Carril 5: sospechoso 3 violeta, 10 l
f) Carril 6: sospechoso 4 rojo, 10 l
g) Carril 7: sospechoso 5 amarillo, 10 l

11-Cierre la cmara de electroforesis y asegrese que

concuerden las terminales rojo con rojo y negro con negro.
Conecte la cmara a la fuente de poder, manteniendo la
orientacin de las terminales.

83
 Cortar en pequeas
piezas con enzimas -ve Ms
de restriccin grandes

DNA total Fragmentos

de una de DNA en el
persona gel Ms
pequeas

+ve

Fragmentos separados y
transferidos a membrana
de nylon

III

Casos de correlacin bioqumica y prctica mdica

84
85

Clera
Un hombre de 38 aos de edad con peso de 71 kg relata que su
padecimiento actual se inici con anorexia, dolor abdominal y
diarrea. Un da despus sigui con nusea intensa, vmito y
diarrea muy abundante y lquida. Ingres al hospital con
hipotensin postural y deshidratacin. Se pudo aislar Vibrio
cholerae toxgeno de sus heces. El paciente mejor rpidamente
al reponerle agua, electrlitos y administrarle tetraciclina por va
oral.
Preguntas de bioqumica
1. Qu procesos de la membrana resultan afectados por Vibrio
cholerae en un caso de clera?
2. Qu valores de laboratorio clnico podran estar alterados en
este paciente?
3. Cules seran los datos de laboratorio que permitiran
precisar el tratamiento hidroelectroltico?
4. Por qu en este caso hay que aadir glucosa al tratamiento
hidroelectroltico por va oral?
5. Cules son los signos de deshidratacin?
6. Cul fue la situacin cido-base del paciente al momento de
su ingreso al hospital?
Caso 1
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Describir la composicin, las propiedades y las funciones de
las membranas biolgicas.
2. Estudiar la base bioqumica de algunos trastornos que afectan
la funcin de las membranas.
3. Modelos de transporte transepitelial.
4. Describir los mecanismos por los cuales los organismos
enteropatgenos ocasionan prdida intestinal de agua y
electrolitos.
5. Control del agua y de la osmolaridad.
6. Equilibrio cido-base.
7. Deshidratacin y tratamiento de reposicin hidroelectroltica.
REFERENCIAS
1. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO, Sierra UA. Fluidos y
electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. 6a. ed. Barcelona:
Editorial Harcourt-Brace; 1998: cap. 4 y 12.
86
 Caso 2
Oclusin intestinal. Acidosis metablica. Deshidratacin grave

Qumica sangunea:
Se trata de un paciente masculino de 35 aos de edad quien
Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl)
acude al servicio de urgencias de un hospital por presentar dolor
BUN = 15 mmol/l
abdominal intenso acompaado de vmitos frecuentes y
abundantes de contenido intestinal. El paciente presenta un
El tratamiento consisti, primero, en el restablecimiento del
cuadro de deshidratacin importante.
balance de lquidos
A la exploracin fsica se obtuvieron los siguientes datos: +
con solucin salina a 0.9%, electrlitos (reposicin de K ) y
Tensin arterial (TA): 80/50 mmHg
ciruga.
Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min
Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min
Preguntas de bioqumica
Temperatura (T): 36o C
1. Evaluar el estado cido-base del paciente; tomar en cuenta
Los estudios de laboratorio mostraron lo siguiente: los valores de pH y presin parcial de bixido de carbono

(pCO2), el valor de bicarbonato plasmtico (HCO3 ), etctera.
Electrolitos sricos:
+
Na = 128 mEq/l 2. Es normal el estado cido-base del paciente? Qu tipo de
+
K = 2.8 mEq/l desequilibrio presenta? Cul podra ser la causa de ese

Cl = 100 mEq/l desequilibrio?
3. Qu relacin existe entre el metabolismo de los electrolitos y
Gasometra arterial: el agua y entre los trastornos cido-base y los electrolitos?
CO2t = 12
4. Qu tipos de alteraciones de lquidos y electrolitos
pH = 7.29 corporales existen?
pCO2 = 24 mmHg
5. Calcule la osmolaridad srica (tome en cuenta la
pO2 = 95 mmHg concentracin de las sustancias que mayormente contribuyen
HCO - = 11.2 mmol/l
3
a establecerla) como aparecen en las pags. 98 y 113.
EB (exceso de base) = 20 6. Cules son los signos de deshidratacin?

87
7. Qu teraputica recomendara a este paciente para
equilibrar sus lquidos y electrolitos?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Propiedades fisicoqumicas del agua.
2. Concepto de pH.
3. Explicar el significado de las variaciones de los valores
normales de pH y de la composicin electroltica de la sangre.
4. Sistemas amortiguadores del plasma, lquido intersticial y
clulas. La aplicacin de la ecuacin de Henderson y
Hasselbalch al clculo del pH y de la concentracin de bixido
de carbono y bicarbonato.
5. Equilibrio cido-base y su mantenimiento.
6. Equilibrio hidroelectroltico y su mantenimiento.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid:
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001; cap: Lquidos y
electrlitos y Obstruccin intestinal aguda. p. 184.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. 6a. ed. Barcelona:
Editorial Harcourt-Brace, 1998; cap. 4.
4. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 2002: 41-76.
5. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO, Sierra UA. Fluidos y
electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.
88
 Caso 3

Hipoglucemia secundaria a intoxicacin alcohlica

Se trata de un paciente de 58 aos, alcohlico crnico, cuyos
familiares relatan que ha ingerido una gran cantidad de alcohol en
los dos ltimos das con un consumo muy escaso de alimentos.
Inici su padecimiento con nusea, vmito, mareo, sudacin,
cefalea, visin borrosa y confusin; present, en una sola
ocasin, una convulsin, por lo que es llevado al servicio de
urgencias. A la exploracin se encuentra semiconsciente con
aliento alcohlico e hipotermia.
Se procede a un lavado gstrico para remover el alcohol an
no absorbido; se mantienen permeables las vas respiratorias; se
instala oxgenoterapia y se le administra solucin glucosada por
va endovenosa.
Los resultados de laboratorio muestran:
Alcohol 300 mg/dl
Glucosa 2.0 mmol/l
Lactato 9.0 mmol/l
pH 7.2
Preguntas de bioqumica
1. Cules son los sntomas de la hipoglucemia?
2. De qu forma el etanol produce acidosis lctica e hipoglucemia?
Cmo se encuentra la relacin intracelular de NADH/NAD+?
Qu procesos metablicos se favorecen con los niveles altos de
NADH?
3. El alcoholismo es la base de muchas deficiencias vitamnicas.
Qu implicaciones metablicas tienen estas deficiencias
(complejo B)?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Hipoglucemia. Regulacin de la glucemia.
2. Acidosis lctica.
3. Metabolismo de carbohidratos.
4. Trastornos del metabolismo de vitaminas.
5. Metabolismo del etanol.
REFERENCIAS
1. Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Bioqumica de
Harper. 16a. ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno; 2004. p.
980-981
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas.
4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid:
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001. Captulos: Acidosis
lctica, hipoglucemia, alcohol y alcoholismo, deficiencia y exceso
de vitaminas.
4. Academia Nacional de Medicina. Tratado de medicina interna. 2a.
ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno; 1994. Captulos:
Acidosis lctica e intoxicacin aguda por alcohol etlico.

89
 Caso 4
Cetosis por inanicin
Obesidad
Una mujer de 27 aos llega al servicio de urgencias mdicas
despus de haber sufrido un desmayo. Al interrogarla, relata que
lleva 15 das a dieta de agua, t y verduras cocidas para bajar de
peso, sin ningn control mdico. Se detect aliento con olor a
manzana, cetonuria, cetonemia, cidos grasos libres elevados,
triacilgliceroles elevados, hipoglucemia y presin arterial baja; su
peso al iniciar la dieta era de 78 kg y su estatura de 1.59 m. Se
diagnostica cetoacidosis por inanicin y obesidad exgena.
El estudio de su dieta mostr que gran parte de su ingesta
calrica era en forma de carbohidratos (galletas, chocolates,
pasteles, refrescos, dulces, etctera).
El tratamiento consisti en administrar parenteralmente
solucin glucosada y continuar con una dieta normocalrica.
Preguntas de bioqumica
1. En esta mujer de 27 aos: corresponde el peso a su talla?
Determinar su ndice de masa corporal, grado de obesidad y
el porcentaje de sobrepeso.
2. Cmo es posible que se formen grandes almacenes de
energa en forma de grasas, si la dieta contiene
predominantemente carbohidratos?
3. Cules son las interrelaciones metablicas de los principales
tejidos (hgado, tejido adiposo, cerebro, msculo, etctera) en
la obesidad?
4. Cules son las interrelaciones metablicas de los principales
tejidos en el estado de ayuno temprano y en la inanicin?
5. Cul es el papel de los cuerpos cetnicos en el
metabolismo?
6. Qu rgimen diettico recomendara a esta persona para
bajar de peso?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Describir las principales rutas de biosntesis, catabolismo y
almacenamiento de lpidos.
2. Conocer la estructura y funcin de los triacilgliceroles, cidos
grasos y cuerpos cetnicos.
3. Establecer las bases bioqumicas de la cetosis y obesidad
producidas por anomalas en el metabolismo de los lpidos.
4. Describir las alteraciones del equilibrio cido-base que se
producen en la cetosis.
5. Conocer las interrelaciones metablicas de los principales
tejidos corporales en los estados de buena nutricin, de ayuno
temprano, de inanicin, de renutricin, de homeostasis
calrica, etctera.
90
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid:
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. 6a. ed. Harcourt-
Brace; 1998.
4. Casanova E. Nutriologa mdica. Editorial Mdica
Panamericana; 1995.

91
 Caso 5

Hipercolesterolemia y aterosclerosis

Un hombre de 56 aos acudi al mdico por presentar dolor
precordial en reposo que se incrementaba con el esfuerzo. Se le
detect hipercolesterolemia que, al anlisis de los lpidos
plasmticos, mostr que la mayora del colesterol plasmtico
elevado se encontraba en la fraccin de lipoprotena de baja
densidad (LDL). Se le realiz una arteriografa coronaria la cual
mostr un estrechamiento de las arterias. La evaluacin de la
dieta indic que consuma gran cantidad de alimentos ricos en
colesterol, aunque en los ltimos meses haba seguido una dieta
baja en grasas.
Fue diagnosticado de aterosclerosis en las arterias coronarias.
El tratamiento consisti en una dieta sin colesterol y en
administrar preparados de lovastatina, un inhibidor de la
HMGCoA reductasa.
Fue tratado tambin con colestiramina, una resina que capta
las sales biliares. La resina no se absorbe y permanece en la luz
intestinal donde se une a las sales y aumenta la cantidad de las
mismas que se excreta con las heces.
Preguntas de bioqumica
1. Cules son algunos alimentos ricos en colesterol?
2. Cul es el destino del colesterol de la dieta?
3. Cul es la funcin de la bilis en la digestin?
4. Qu conexin metablica existe entre el colesterol y las sales
biliares?
5. Cmo disminuye la resina de colestiramina la concentracin
plasmtica de colesterol?
6. Por qu se le ha llamado al colesterol-LDL: colesterol malo y al
colesterol-HDL: colesterol bueno?
7. Cmo puede la hipercolesterolemia producir aterosclerosis,
infarto del miocardio, xantomatosis, etctera?
8. Por qu el hecho de disminuir la concentracin plasmtica de
colesterol puede ser til para la salud de este paciente?
9. Qu papel desempea la HMG-CoA reductasa en la biosntesis
del colesterol?
10. Cul es la razn del uso de la lovastatina para el tratamiento del
paciente?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Estructura del colesterol y otros esteroles importantes.
2. Biosntesis, metabolismo y excrecin del colesterol y de los
cidos biliares.
3. Describir la funcin de la bilis y su relacin con el colesterol.

92
4. Considerar el papel del colesterol en el desarrollo de la
aterosclerosis y de la relacin entre hipercolesterolemia e ingesta
diettica de lpidos en esta enfermedad.
5. Comentar los principios del transporte de lpidos en el sistema
circulatorio.
6. Describir la composicin, estructura, metabolismo y funcin de los
principales tipos de lipoprotenas plasmticas.
7. Describir los defectos del metabolismo lipdico que tienen
relevancia clnica en relacin con la hipercolesterolemia.
4. Pennachio D. Lineamientos para la deteccin de
hipercolesterolemia. Atencin Mdica 1997;10/2:30-43.
5. Vogel RA. Coronary risk factors, endothelial function, and
atherosclerosis. Clin Cardiol 1997; 20:426-432.
6. Goodman & Gilmans. The pharmacological basis of therapeutics.
10th ed. McGraw-Hill Interamericana Editores; 2002.
7. Mecanismo de accin de los hipercolesterolemiantes. Rev
Mdico General. 1997; 2(7): 71-74.

REFERENCIAS
1. PLM. Diccionario de especialidades farmacolgicas. 49 ed. 2004.
2. Montgomery R. Bioqumica. Casos y texto. 6a. ed. Barcelona:
Editorial Harcourt-Brace, 1998: cap. 10 y 11.
3. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid:
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001: Captulos:
Aterosclerosis y otras formas de arteriosclerosis e
hiperlipoproteinemias y otros trastornos del metabolismo lipdico.

93
 Caso 6
GOTA
Un hombre de 53 aos relata que su padecimiento actual se inici
con una inflamacin aguda del ortejo mayor del pie derecho e
intenso dolor, el cual se intensificaba con el fro y el movimiento.
Adems, asegura que poco antes de presentar este episodio
agudo el paciente haba incrementado el consumo de carne,
vsceras, leguminosas y vino de mesa en abundancia.
Fue tratado con fenilbutazona, pero present dao gstrico,
por lo que se cambi el medicamento por alopurinol y naproxn.
Preguntas de bioqumica
1. Qu alteraciones metablicas pueden traer como consecuencia
un aumento en los niveles sricos de cido rico?
2. Son necesarias las purinas y las pirimidinas en la dieta?
3. Qu alimentos son ricos en purinas y pirimidinas?
4. Qu valores de laboratorio podran estar alterados en este
paciente?
5. Son importantes los antecedentes familiares de este paciente?
6. Cul es la base bioqumica para sospechar que una dieta rica
en protenas puede provocar ataques de gota en pacientes
susceptibles?
7. Cmo se relaciona la ingestin de etanol con el incremento de la
concentracin plasmtica de cido rico?
8. Qu rgimen diettico le recomendara a esta persona para
mejorar sus niveles de cido rico?
9. Cul es la base bioqumica para la accin de los medicamentos
utilizados en la gota?
Conceptos y reas de aprendizaje
1. Caractersticas estructurales de los cidos nuclecos.
2. Biosntesis y catabolismo de purinas y pirimidinas.
3. Explicar cmo interfieren algunos medicamentos utilizados en el
tratamiento de la gota con el metabolismo de los nucletidos.
REFERENCIAS
1. Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid:
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001.
2. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas.
4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
3. Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. 6a. ed. Barcelona:
Editorial Harcourt-Brace; 1998: Cap. 13.
4. Rodrguez Carranza R y col. Vademcum acadmico de
medicamentos. 4a. ed. Mxico: Facultad de Medicina, UNAM y
McGraw-Hill Interamericana Editores; 2004.
94
IV Casos clnicos (ABP)

95
 CASO 1

Vi morado y rojo en poco tiempo

Carolina, secretaria de 32 aos con historia familiar de Gasometria arterial: pH: 7.45; pCO2 38 mmHg, pO2 40 mmHg,
fibrosis qustica, fumadora a razn de 5 cigarrillos al da, SO2% 87%, Hto 38

alcoholismo cada mes llegando a la embriaguez; cuenta con

1.-Pistas/ datos orientadores
historial personal de cefalea holocraneana, pulstil, de
intensidad 8/10, de predominio matutino, con disminucin a lo 2.-Problemas

largo del da, fatiga, falta de concentracin y problemas con la

3.-Hiptesis/ explicaciones/ diagnsticos presuntivos
memoria, ya que ha olvidado el camino de regreso a casa en
varias ocasiones. Hace dos horas comienza con dolor precordio 4.-Areas objetivos de aprendizaje
irradiado hacia brazo izquierdo, disnea, sensacin de muerte
5.-Fuentes de informacin
inminente y diaforesis. Es trada por familiar quien refiere que
otra persona presento la misma sintomatologa hace un ao y
falleci de la misma forma. A la exploracin fsica se encuentra
paciente femenina, con facies lgica, rubincudez de tegumentos,
desorientada en tiempo, lugar y espacio. Ligera cianosis
peribucal resto de exploracin fsica sin alteraciones.

96
 CASO 2
Sin aire, me ahogo
Lizeth, ama de casa de 43 aos es llevada a la unidad de siguiente resultado: pH 7.22, pCO2 67 mm Hg, pO2 85 mm Hg,
urgencias por su hermana quien la encontr en el bao de su SO2 % 94, lactato 0.6 mmol/L.
hogar con prdida del estado de alerta; comenta que el mismo
da por la maana la paciente haba discutido con su marido y 1. PISTAS/DATOS ORIENTADORES
que esta lo haba amenazado con quitarse la vida. Al
interrogatorio dirigido e indirecto, la paciente cuenta con
antecedentes de padecer trastorno por ansiedad generalizada, 2. PROBLEMAS
tabaquismo positivo desde hace tres aos a razn de dos
cajetillas al da, dolor poliarticular que controla con aspirina y
3. HIPTESIS/EXPLICACIONES/DIAGNSTICOS
cuenta con el antecedente de ciruga de cuello por presentar un
PRESUNTIVOS
padecimiento de la glndula tiroides no especificado. A la
exploracin fsica, paciente inconsciente, Glasgow 9, con
presencia de bradipnea, ruidos cardiacos disminuidos tono e 4. REAS/OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
intensidad, con presencia de hiperreflexia ++. Se indica lavado
gstrico en donde se encuentran numerosas pastillas de color 5. FUENTES DE INFORMACIN
blanco y restos de alimentos. Se solicita gasometra arterial con
el

97
 CASO 3
Todo gira a mi alrededor
Georgina es una estudiante de la carrera de derecho, desde hace
Pruebas de funcionamiento heptico: albmina 4 g/dL, aspartato
un mes ha presentado mareo que cede al acostarse por unos
aminotransferasa 34 U/L, alanina aminotransferasa 56 U/L,
minutos, tiene carga gentica para diabetes mellitus tipo 2, ya
fosfatasa alcalina U/L, bilirrubina total 1.2 mg/dL.
que su padre presenta este padecimiento desde hace 6 aos. No
El mdico, despus de hacer un anlisis exhaustivo ordena
cuenta con otros antecedentes de importancia. Hace una semana
realizar ms estudios, entre los que incluyen una tomografa axial
el mareo se agrav y present sudor fro, nerviosismo,
computarizada, y posteriormente comenta a Georgina que
taquicardia y ansiedad, que revirti con el consumo de un vaso
tendrn que intervenirla quirrgicamente.
de jugo; posteriormente en los das siguientes present la misma
sintomatologa despus de consumir alimentos ricos en grasas y 1. PISTAS/DATOS ORIENTADORES
carbohidratos. Acude con su mdico quin indica estudios de
2. PROBLEMAS
laboratorio y los cuales se presentan a continuacin:
Biometra hemtica: Leucocitos 8 mil, neutrfilos 6 mil, linfocitos 3. HIPTESIS/EXPLICACIONES/DIAGNSTICOS
mil, monocitos 500, eritrocitos 4 mil doscientos, hemoglobina 12.3 PRESUNTIVOS
g/dL, hematocrito 41%, volumen corpuscular medio 90.7 fL,
hemoglobina corpuscular media 31 pg, plaquetas 312 mil. 4. REAS/OBJETIVOS DE APRENDIZAJE

Bioqumica clnica: glucosa 98 mg/dL, urea 40.7, creatinina 0.7

mg/dL, cido rico 6.3 mg/dL, 5. FUENTES DE INFORMACIN

98
 CASO 3

SLO CON SOMBRERO SALGO AL SOL

Aldo es un nio de 14 aos, que acude a la consulta de medicina

general por presentar una mancha en su brazo izquierdo de color 1. PISTAS/DATOS ORIENTADORES

negro-azulado-caf, con bordes asimtricos y que ha notado que

se ha vuelto ms grande. No cuenta con antecedentes de 2. PROBLEMAS
importancia, su madre refiere que hace 10 aos fue llevado al
dermatlogo para evaluar una sensibilidad al sol y presencia de 3. HIPTESIS/EXPLICACIONES/DIAGNSTICOS
pecas en casi todas las zonas expuestas, se recomend que no PRESUNTIVOS

se expusiera a la radiacin solar por mucho tiempo y se aplicar

filtros y pantallas solares, adems se realiz una biopsia de piel, 4. REAS/OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
pero no regres por el resultado. A la exploracin fsica dirigida,
se observa una mancha de color negro-azulado, con bordes 5. FUENTES DE INFORMACIN
asimtricos, de tamao aproximado de 10 mm, adems se
muestra adenopata axilar izquierda, se detecta fotofobia,
conjuntivitis e hiperpigmentacin en las zonas expuestas al sol.

99
 V

CASOS Anexos

100
Siendo las 17:30hrs, usted llega a su consultorio para brindar La joven madre y su hijo son los primeros en entrar al consultorio.
asesora clnica. Ya en la sala de espera, usted observa a seis Ella dice estar interesada en iniciar un control de nio sano, ya
pacientes sentados aguardando su turno: que la maestra la haba mandado a llamar para platicar con ella

1) Uno de ellos es un escolar de 9 aos de edad acompaado acerca de la apata que mostraba el infante ante el desarrollo de

por su madre. De primera impresin, parece tener sobrepeso actividad fsica y por el alto consumo de carbohidratos simples y

y se encuentra comiendo gomitas de azcar. complejos que tena durante el recreo. En la exploracin fsica se

2) Otra es una adolescente de 19 aos quien luce delgada en observ que el muchachito presentaba un aspecto de tipologa

extremo. Aunque tambin viene en compaa de su madre, la claramente pcnica, con la presencia de reas hiperpigmentadas

chica parece permanecer en su lugar a regaadientes. de aspecto aterciopelado en los pliegues del cuello y ambas

3) La tercera es una mujer de 27 aos de edad en compaa de axilas. Asimismo, los panculos adiposos abdominal, mamarios y

su esposo, quien la trae el da de hoy a su tercera consulta suprailiacos resultaron ser voluminosos cuando se evaluaron

prenatal. mediante la palpacin. Al ubicar el peso del escolar en la tabla de

4) Una mujer de 23 aos ocupa el cuarto asiento. Con una percentiles de peso para la edad, el valor cay por encima del

complexin robusta y fascies circular, se trata, en realidad, de percentil 95.

una paciente ya conocida por usted. Diagnstico: Obesidad infantil.

5) Un varn de 45 aos, somnoliento, con mal alio y aliento La mam tom entonces la iniciativa de abordarlo con las

alcohlico, yace en el penltimo asiento. Un muchacho, siguientes preguntas:

probablemente su hijo adolescente, permaneca de pie a su Por qu razn un aumento de la glucemia provoca la

lado. secrecin de insulina por las clulas pancreticas?

6) Por ltimo, en la sexta banca hay un adulto mayor de 71 aos Cmo son reguladas la gluclisis y la gluconeognesis por la
acompaado por una mujer algunos aos ms joven que l. insulina?
En su ltima cita, usted lo envi a gestionar algunos estudios Cmo son reguladas la -oxidacin y la -reduccin por la
de laboratorio (qumica sangunea y perfil lipdico). insulina?
------------------------------------------------------------------------- Cmo son reguladas la liplisis y la lipognesis por la insulina?

101
 Cmo puede usted fundamentar, bioqumicamente, el hecho
de que el contenido de triacilglicridos en el tejido adiposo
aumente con el consumo de una dieta que consiste
bsicamente en carbohidratos?
Cul es la relacin existente entre las somatomedinas y la
insulina?
Qu explicacin puede dar usted para que hayan aparecido
las reas de hiperpigmentacin descritas en el infante?
Qu es la leptina y en dnde se produce?
Cul es el efecto de la leptina sobre las neuronas del ncleo
arqueado?
Qu es la ghrelina y en dnde se produce?
Cul es el efecto de la ghrelina sobre las neuronas del ncleo
arqueado?
-------------------------------------------------------------------------
La adolescente y su madre fueron las segundas en entrar a
consulta. Casi de inmediato la madre comenz a quejarse acerca
de la falta de ingesta de alimentos de su hija, al grado de que
solamente haba consumido t negro en los ltimos cinco das.
Qu son las metilxantinas?
Cul es su mecanismo de accin?
Qu vas metablicas son favorecidas con el consumo de
metilxantinas?
La hija, tratando de desmentir el argumento de su madre, afirm
que tambin haba estado consumiendo, por da, una lata de atn
en agua. Por otra parte, la mam coment que tambin le
preocupaba el hecho de que, desde hace tres meses, su hija
tuviese un retraso en la presentacin del sangrado menstrual. En
la toma de signos vitales, se cuantific una temperatura corporal
de 36.5C y una frecuencia cardiaca de 57 latidos/min. La
exploracin fsica evidenci a una adolescente con palidez
tegumentaria, cianosis acral y con una marcada disminucin del
tejido adiposo subcutneo. Adems, los ritmos cardiaco y
peristltico se escucharon disminuidos tanto en frecuencia como
en intensidad. Finalmente, la conducta principal que rega el
cuadro clnico era el marcado rechazo hacia la ingesta de
comestibles y el miedo irracional al aumento de peso.
Diagnstico: Anorexia nerviosa.
Qu vas metablicas proveen combustible para el organismo
antes de 12 horas de ayuno?
Qu vas metablicas proveen combustible para el organismo
despus de 36 horas de ayuno?
Qu aminocidos son gluconeognicos?
Qu aminocidos son cetognicos?
Cul es la razn de que pertenezcan a uno u otro grupo?
Qu son los estrgenos y en dnde se producen?
Qu funcin tiene la enzima denominada aromatasa en el
metabolismo de los estrgenos?
102
 En qu tejidos se localiza dicha enzima?
Cmo podra explicar usted, en este caso, la aparicin de
amenorrea secundaria?
-------------------------------------------------------------------------
Con pasos lnguidos y el apoyo de su esposo, la mujer del tercer
asiento entr al consultorio. Durante la tribuna libre no manifest
cursar con algn tipo de molestia, sin embargo, expres que
ltimamente senta un apetito voraz por los alimentos dulces y
que haba notado un aumento en el nmero de micciones durante
el da. Al encontrarse la paciente en ayunas, usted consider
oportuno efectuar una prueba de glucemia en sangre perifrica,
obtenindose un valor de 212mg/dL. Ella tambin traa consigo
un estudio de qumica sangunea realizado hace 5 das, mismo
que reportaba hiperglucemia cuantificada en 196mg/dL.
Por otra parte, el clculo de la edad gestacional, de acuerdo a la
fecha de ltima menstruacin (FUM), result de 28 semanas. El
resto de la exploracin fsica se aboc a identificar las diversas
caractersticas obsttricas tanto de la madre como del producto.
Diagnstico: Diabetes mellitus gestacional.
Qu hormonas se sintetizan en el tejido placentario?
Cul es el efecto de la somatotrofina corinica humana sobre
el metabolismo lipdico?
Cul es el efecto de la somatotrofina corinica humana sobre
el metabolismo de los carbohidratos?
Por qu razn es necesaria la aparicin de un estado de
resistencia a la accin de la insulina, por parte de la madre,
durante el embarazo?
------------------------------------------------------------------------
La mujer robusta pas a consulta. Su habitus exterior se
caracterizaba por una complexin endomrfica muy particular:
obesidad central, cifosis torcica (a modo de joroba de bfalo),
aumento de volumen de los panculos adiposos del rostro
(adoptando una apariencia de cara de luna llena), extremidades
delgadas y presencia de equimosis y estras en diversas partes
del cuerpo.
Usted tom el expediente y al leerlo record que la paciente se
encontraba en tratamiento con prednisona (un glucocorticoide)
debido a un diagnstico, hecho hace tres meses, de lupus
eritematoso sistmico (LES). Una de las principales
preocupaciones de la mujer era la prdida progresiva y paulatina
de su figura pues, anteriormente, haba trabajado como modelo y,
debido a los cambios experimentados, no haba recibido ninguna
oferta de trabajo recientemente. Salvo el cotejo de los rasgos
fsicos ya descritos, la exploracin fsica no aport mayores datos
al respecto.
Diagnstico: Sndrome de Cushing iatrognico.
Cul es el efecto de los glucocorticoides en el metabolismo de
protenas?
103
 Cul es el efecto de los glucocorticoides en el metabolismo
lipdico?
Por qu razones los glucocorticoides favorecen la va
gluconeognica?
Por qu razones los glucocorticoides favorecen la va
glucogenognica?
Qu efecto tienen los glucocorticoides sobre la accin de la
insulina?
Con base en las preguntas previas cmo podra usted
fundamentar la aparicin de estras y equimosis?
Con base en las preguntas previas podra usted explicar la
redistribucin de la grasa corporal que ocurre en este trastorno?
-------------------------------------------------------------------------
Al llamar al siguiente paciente, el muchacho entr cargando con
cierta dificultad a su padre. El interrogatorio indirecto revel que
el paciente era un alcohlico crnico quien haba iniciado el
consumo de etanol desde los 15 aos de edad. No obstante, el
consumo del mismo se haba acentuado en el ltimo mes debido
a problemas laborales y econmicos, de tal forma que en los
ltimos das haba comenzado a experimentar cambios
conductuales y en el estado de alerta.
La exploracin fsica dio cuenta de un individuo de edad
aparentemente mayor a la cronolgica, somnoliento, con mal
arreglo personal y con un aroma a etanol fcilmente perceptible a
distancia. A nivel del trax llam la atencin la presencia de
ginecomastia, en tanto que su abdomen fue globoso a expensas
de la presencia de lquido de ascitis. Asimismo, se pudo observar
la dilatacin de venas colaterales periumbilicales adoptando una
morfologa de caput medusae. Por otro lado, la hipotrofia
muscular de las cuatro extremidades era evidente.
Diagnstico: Insuficiencia heptica secundaria a cirrosis
heptica.
Qu enzimas intervienen en el metabolismo heptico del
etanol?
Cmo puede explicar la aparicin de cirrosis en una situacin
de consumo crnico de etanol?
Cul es la importancia del hgado en el metabolismo de los
aminocidos?
Cmo podra explicar la aparicin de una sintomatologa
neurolgica con base en una alteracin del ciclo de la urea?
Qu alteracin en el metabolismo de los esteroides sexuales
podra explicar la aparicin de ginecomastia en un individuo con
enfermedad heptica?
Si se efectuara un corte histolgico en donde se demuestre la
acumulacin de gotas de triacilglicridos dentro de los
hepatocitos (esteatosis).
Cmo podra explicar usted la aparicin este fenmeno?
-------------------------------------------------------------------------
El hombre mayor haba esperado pacientemente su turno. Entr
al consultorio apoyado del brazo de su hija menor y ambos
104
tomaron asiento de nueva cuenta. En su ltima cita, usted le Perfil lipdico:
haba solicitado el trmite de algunos estudios de control, los
cuales le mostr a usted con prontitud: Variable Valor cuantificado Intervalo de
normalidad
Qumica sangunea: Triacilglicridos 201 < 150
(mg/dL)
Variable Valor cuantificado Intervalo de Colesterol Total 290 < 200
normalidad (mg/dL)
Glucosa (mg/dL) 116 70 - 126 Colesterol HDL 29.1 >35
+
Na (mEq/L) 140 136 - 145 (mg/dL)
+
K (mEqg/L) 4.6 3.5 - 5 Colesterol LDL 202 <150
-
Cl (mEq/L) 103 98 - 106 (mg/dL)
cido rico (g/dL) 9 6-8
Como antecedente de importancia, el seor proviene de una
familia con predisposicin al desarrollo de diabetes mellitus tipo 2,
sin embargo, los valores de glucemia determinados en varias
pruebas previas casi siempre han cado en el intervalo entre los
110 y 126 mg/dL. Adems, cursaba tambin con dislipidemia a
expensas de la elevacin tanto de triacilgliceroles como de
colesterol, y los niveles de cido rico en el plasma siempre
haban estado por encima del lmite de referencia superior. La
tensin arterial tambin ha sido refractaria al tratamiento con
enalapril, siendo el valor promedio de 140/90mmHg.
Diagnstico: Sndrome metablico.
Cul es el mecanismo de accin de la insulina?

105
 Qu hormonas son secretadas por el tejido adiposo?
Cmo afectan estas hormonas la sensibilidad hacia la
insulina?
Qu son las lipoprotenas?
Cuntos tipos hay?
Qu diferencias existen entre LDL y HDL?
A partir de qu compuestos se obtiene el cido rico?
Cul es la razn de que un alto consumo de protenas
conduzca a la elevacin del nivel plasmtico de cido rico?
Bibliografa
Nelson DL, Cox MM. Hormonal regulation and integration of
mammalian metabolism. In: Nelson DL, Cox MM. Lehninger
Principles of Bichemistry. 5th Edition W.H. Freman and
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Marks AD, Lieberman M. Marks AD. The Fed or Absorptive
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Edition Lippincott Williams & Wilkins
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Marks AD, Lieberman M. Marks AD. Fasting. In: Lieberman M.
Marks Basical Medical Biochemistry. A Clinical Approach. 3
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Marks AD, Lieberman M. Marks AD. Actions of Hormones That
Regulate Fuel Metabolism. In: Lieberman M. Marks Basical
Medical Biochemistry. A Clinical Approach. 3rd
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reproductor. En: Ganong WF. Fisiologa Mdica. 20 Edicin
en Espaol El Manual Moderno 2006. Captulo 23; Pp 387-425.
Guin y preguntas elaborados por Salazar Morales Miguel Fdo.
MPSS Departamento de Bioqumica Facultad de Medicina
rd UNAM.
Revisin y coedicin por M. en C. Mara Alicia del Sagrado
Corazn Cea Bonilla.
Coordinadora de Enseanza. Departamento de Bioqumica
Edition Facultad de Medicina UNAM.
Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
106
Kahla es profesora de matemticas de 5to grado de Con el fin de complementar el estudio anterior, se incluy una
preparatoria. Tiene 23 aos de edad y es originaria de Chiapas. solicitud para realizar un frotis de sangre perifrica, el cual report
Hace tres das enferm de faringoamigdalitis, sin embargo, al no la observacin de esquistocitos y cuerpos de Heinz.
haber mejora, opt por consumir trimetroprim con sulfametoxazol
(TMP-SMZ). A la maana siguiente, tras iniciar la administracin
del frmaco, se mir al espejo y not la aparicin de un leve tinte
amarillento en su piel, por lo que pens que se trataba de una
reaccin alergica y acudi al hospital.

Uno de los estudios paraclnicos gestionados fue la citometra

hemtica, cuyos resultados se muestran a continuacin:

Variable Valor cuantificado Intervalo de

normalidad
6
GR (10 / L) 3.7 4.0 - 5.5
Hb (g/dL) 10.8 12 - 16
Hto (%) 33.3 35 - 50
VCM (fL) 90 83 - 97
HCM (pg) 29.1 27 - 33
CmHb (g/dL) 32.4 33 - 37
CV-VCM (%) 15 13 - 14
Serie blanca 9,100 4,000 - 12,000
(Leu/ L)

107
1) Qu son los cuerpos de Heinz? Protenas totales 7 6-8
2) Qu es la hemoglobina? (mg/dL)
3) Qu es la metahemoglobina? Albmina (mg/dL) 4 3.5 - 5
4) Qu es la sulfahemoglobina? Globulinas (mg/dL) 3 2.3 - 3.5
Cociente A/G 1.33 1 - 1.5
Otro estudio tramitado, y que se justific con base en la aparicin As, tras el anlisis de los resultados previos, se lleg a la
de ictericia, fue la batera de pruebas de funcin heptica, cuyos conclusin de la posible existencia de un defecto enzimtico a
resultados tambin se despliegan: nivel de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, razn por la cual se
cambi el medicamento por un -lactmico y se le dieron
Variable Valor cuantificado Intervalo de instrucciones de presentarse en la consulta externa del servicio
normalidad de hematologa para la apertura del expediente clnico.
Bilirrubina total 2.75 0.10 - 1.00 5) Cuntas y cules son las fases de la va de las pentosas?
(mg/dL) 6) Cules son los metabolitos de mayor importancia de esta
Bilirrubina indirecta 2.6 0.10 - 0.75 va?
(mg/dL) 7) Para qu se emplean dichos metabolitos?
Bilirrubina directa 0.15 0.10 - 0.25 8) En qu reacciones de la va se obtiene poder reductor como
(mg/dL) producto?
AST (UI/L) 21 15 - 40 9) Cul es el paso limitante de la velocidad de la va del
ALT (UI/L) 21 10 - 40 fosfogluconato?
Fosfatasa alcalina 96 44 - 155 10) Cmo se encuentra regulada la enzima que cataliza dicho
(UI/L) paso?
-glutamil transferasa 15 9 - 40 11) Qu vas metablicas, que utilizan glucosa como sustrato,
(UI/L) se llevan a cabo dentro del eritrocito?
Lactato 930 313 -618 12) Por qu razones son importantes estas rutas metablicas
deshidrogenasa (UI/L) para el hemate?

108
13) En alusin a las preguntas 1 a 4 Por qu se ve afectada la
estructura de la hemoglobina en esta patologa?
14) Qu otros factores pueden afectar negativamente a un
individuo con esta deficiencia enzimtica?
Sinopsis
La deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa es un
padecimiento con un patrn de herencia recesivo ligado a X que
representa la primera causa de anemia hemoltica
deficiencias enzimticas, seguida por la deficiencia de piruvato
cinasa y por la deficiencia de fosfohexosa isomerasa.
La va de las pentosas (tambin conocida como va del
fosfogluconato o derivacin de las hexosas monofosfato) es una
va paralela a la ruta glucoltica, sin embargo, a diferencia de
sta, no utiliza la molcula de glucosa como una fuente para la
obtencin de ATP sino como un sustrato para la generacin tanto
de poder reductor (NADPH+H+) como de ribosa-5-fosfato. El
+
NADPH+H , al encontrarse en mayor concentracin que su
contraparte no fosforilada, el NADH+H+, se emplea como
donador de electrones en distintas biosntesis reductivas, al igual
que en procesos implicados en la defensa en contra de especies
reactivas de oxgeno (EROs). Por otra parte, la ribosa-5-fosfato
es una molcula que se utiliza para la sntesis de nuclotidos y
que se puede obtener a partir de la isomerizacin de ribulosa-5-
fosfato, la cual es el producto de las reacciones oxidativas de la
ruta.
La va cuenta con dos fases: una que es oxidativa y dependiente
de NADP+, y otra no oxidativa que tambin recibe el nombre de
fase de interconversin de azcares. Durante la fase oxidativa se
obtienen dos molculas de NADPH+ H+ en las reacciones
catalizadas por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y por la
fosfogluconato deshidrogenasa, respectivamente, sin embargo
tambin se obtiene ribulosa 5-fosfato a partir de la
por descarboxilacin del fosfogluconato. La fase de interconversin
de azcares es una serie de reacciones fcilmente reversibles
que tiene por objetivo la obtencin de intermediarios que
contienen entre tres y siete tomos carbonos. El paso limitante de
la velocidad de la va se encuentra a nivel de la enzima glucosa-
6-fosfato deshidrogenasa, la cual se regula a travs de
modulacin alostrica positiva o negativa dependiendo de las
concentraciones relativas de NADP+ y NADPH+H+. De esta
manera, cuando las necesidades celulares de poder reductor son
altas, hay suficiente NADP+ para derivar a la glucosa-6-fosfato
hacia la va de las pentosas, por el contrario, si hay un exceso de
NADPH+H+, la hexosa se metaboliza por la va glucoltica.
Los hemates son una estirpe celular que, debido a su funcin
transportadora de oxgeno, perdieron sus organelos durante el
proceso de diferenciacin. Esta es la razn fundamental de que
dos rutas metablicas cobren una particular importancia para los
mismos: la gluclisis (para la obtencin de ATP, pues no pueden
realizar fosforilacin oxidativa) y la va de las pentosas (para la
109
produccin de NADPH+H+ que sirva para la reconversin de
glutatin a su forma reducida y proteger as su integridad propia
frente al dao oxidativo). La accin de las especies reactivas
derivadas del oxgeno ocasiona la oxidacin de los grupos
sulfhidrilo presentes en las cadenas de globina y la consecutiva
formacin de puentes disulfuro, lo cual deriva en
desnaturalizacin de la protena. Esto da por resultado la
agregacin y precipitacin de la hemoglobina, la cual se puede
visualizar mediante el empleo de tinciones supravitales como el
naranja de acridina o el cloruro de tilrosanilina (violeta de cristal).
Estos corpsculos reciben la denominacin de cuerpos de Heinz.
Adems, durante su paso por los cordones esplnicos, los
eritrocitos con hemoglobina precipitada en su interior tienen
mayor probabilidad de ser fagocitados por los macrfagos, razn
por la cual pueden perder fragmentos de su membrana y
observarse como esquistocitos en el frotis de sangre perifrica.
El glutatin es un tripptido (Glut-Cys-Gly) que protege
indirectamente a los eritrocitos de la accin del radical hidroxilo al
evitar su generacin en la reaccin de Fenton:
+2 +3 - .
H2O2+Fe Fe +OH +OH
A travs de la reduccin del perxido de hidrgeno hasta agua
por el glutatin, se evita que se lleve a cabo la reaccin anterior al
transformar al reactivo en un producto inerte.
2 GSH+H2O2 GSSG+ 2H2O
El glutatin en su forma reducida es un monmero (GSH), en
tanto que su forma oxidada es un homodmero unido por un
la enlace disulfuro (GSSG). La enzima glutatin peroxidasa es la
responsable de acoplar la oxidacin del glutatin con la reduccin
del perxido de hidrgeno en agua. Por otra parte, la enzima
glutatin reductasa permite la reconversin del glutatin oxidado
a glutatin reducido. As pues, dentro del eritrocito, este conjunto
de reacciones de xido-reduccin mantienen reducidos a los
grupos sulfhidrilo de las globinas (al impedir la produccin de
radical hidroxilo) y al hierro del grupo hem en estado ferroso (al
consumir perxido de hidrgeno).
El cuadro clnico es variable y depende del grado de deficiencia
de la enzima, yendo desde la simple ictericia hasta la
insuficiencia renal aguda por necrosis tubular. Lo ms comn es
que ocurra hemlisis tras la exposicin a algn agente oxidante,
como algunos medicamentos (por ejemplo sulfonamidas y
antipaldicos), ciertas leguminosas (como Vicia fava, cuyos -
glucsidos producen especies reactivas de oxgeno) o durante
procesos mrbidos (en los cuales los leucocitos producen
radicales libres durante el estallido respiratorio). Generalmente
los episodios hemolticos se autolimitan.
110
 Abreviaturas comnmente empleadas para expresar los
parmetros de la serie roja en la citometra hemtica:
GR.-Cuenta de glbulos rojos. Es la cantidad de hemates
expresada en millones por microlitro o en millones por milmetro
cbico.
Hb.-Hemoglobina. Es la cantidad de hemoglobina expresada en
gramos por decilitro.
Hto.-Hematocrito. Es la proporcin de eritrocitos en el total de
sangre.
VCM.-Volumen corpuscular medio. Tambin se suele acotar
como VGM (volumen globular medio). Se trata del promedio del
volumen eritrocitario
HCM.-Hemoglobina corpuscular media. Es la cantidad promedio
de hemoglobina dentro de cada eritrocito.
CmHb.-Concentracin media de hemoglobina corpuscular
(globular). Tambin se suele acotar como CCMH (concentracin
corpuscular media de hemoglobina).
CV-VCM.-Coeficiente de variacin del volumen corpuscular
(globular) medio. Es frecuente encontrar este mismo ndice con
su abreviatura en ingls RDW (red cell distribution width o
anchura de la distribucin eritrocitaria). Corresponde al producto
de la desviacin estndar por el volumen corpuscular medio.
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Guin elaborado por Salazar Morales Miguel Fdo.
MPSS Departamento de Bioqumica Facultad de Medicina
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Revisin y coedicin por M. en C. Mara Alicia del Sagrado
Corazn Cea Bonilla.
Coordinadora de Enseanza. Departamento de Bioqumica F
112