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Hto-Hb-VSG-Guía 2
Hto-Hb-VSG-Guía 2
BACTERIOLOGIA
BARRANQUILLA
GUIA N 02 (Laboratorio)
NOMBRE DE LA GUIA:
DETERMINACION DE HTO HB GLOBULOS ROJOS
V.S.G
2. Competencias:
3. Introduccin terica
Tras una centrifugacin de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el
depsito de los glbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La
relacin porcentual entre ambos es lo que describe el hematocrito y describe el
porcentaje de clulas transportadoras de oxgeno con respecto al volumen total de
sangre.
El potencial zeta es producido por una intensa carga negativa a nivel de la superficie
de los eritrocitos, lo que explica que estas clulas se mantengan separadas. La
intensidad de este potencial dependen en gran medida de la composicin proteica
del plasma y especialmente de la relacin entre las concentraciones de albmina,
globulina y fibringeno. As mientras la albmina tiende a aumentar el potencial
zeta, las globulinas y el fibringeno tiende a disminuirla. La disminucin del
potencial zeta tiene como consecuencia una mayor tendencia de los hemates a
agregarse y a formar las llamadas pilas de monedas.
De acuerdo con este mecanismo, el valor normal de la VSG resulta del equilibrio
entre las principales protenas plasmticas.
4. Metodologa o Procedimiento
HEMATOCRITO (HTO)
Objetivo
Llevar al estudiante de microbiologa a conocer y manejar adecuadamente los
fundamentos, procedimientos tcnicos, formulas e interpretacin clnica de esta
tcnica para un mejor manejo diagnostico, pronostico y tratamiento de patologas
hematolgicas asociadas.
MTODOS
FUNDAMENTO:
El valor de Hematocrito se determina aplicando a la sangre total una fuerza de
12.000 a 15.000 r.p.m. en un tubo capilar, con el fin de agrupar los glbulos rojos y
medir el espacio que estos ocupan.
MATERIALES.
Sangre total anticoagulada con EDTA bien mezclada y sin cogulos, o sangre capilar
recogida en capilares heparinizados.
Cera o plastilina para cerrar uno de los extremos del capilar una vez lleno de sangre.
Microcentrifuga
Tabla de lectura de hematocrito que indique directamente la relacin entre la longitud
total de la columna sangunea y la correspondiente a la columna de eritrocitos.
PROCEDIMIENTO:
Mezclar muy bien la muestra de sangre.
Llenar hasta un mximo de el tubo capilar con sangre total y sellar un extremo de
este con cera o plastilina.
Centrifugar el capilar de 3 a 5 minutos.
Finalizada la centrifugacin comprobar que no se ha producido salida sangre del
capilar y extraerlo de la centrfuga.
Lectura de la capa ocupada por los glbulos Rojos o Eritrocitos.
CALCULOS
Para leer el resultado se puede emplear un lector de microhematocrito, colocar la
base de la sangre en la columna 0 y el botn del menisco del plasma en 100, se
mide el valor que ocupan los glbulos rojos obviando la capa de blancos.
Esta tcnica atrapa menos plasma que el Macromtodo, por tal razn valora menos
errores.
MATERIALES
Sangre total anticoagulada con EDTA.
Tubo de wintrobe.
Centrifuga con fuerza de 2000 a 3500 r.p.m.
Cnulas o agujas de wintrobe con jeringas, o pipetas de pasteur para el llenado del
tubo de Wintrobe.
PROCEDIMIENTO:
Homogenizar la muestra de sangre anticoagulada mezclando por inversin un
nmero aproximado de 30 veces.
Insertar la cnula o aguja de wintrobe en la jeringa y llenarla con sangre
anticoagulada bien homogenizada o realizar este proceso con pipeta de pasteur.
Llenar con la cnula o pipeta de pasteur el tubo de Wintrobe con sangre total bien
homogenizada. Procurar evitar la formacin de burbujas de aire en la columna de
sangre.
CALCULOS:
La lectura del resultado se realiza extrayendo el tubo de wintrobe de la centrifuga y
se valora la altura en milmetros de la columna eritrocitaria leyendo en la columna
del tubo de abajo(cero) hacia arriba (diez), debe excluirse la lectura de la columna
de leucocitos y plaquetas.
HEMOGLOBINA
Objetivo
Llevar al estudiante de microbiologa a conocer y manejar adecuadamente los
fundamentos, procedimientos tcnicos, e interpretacin clnica de esta tcnica para
un mejor manejo diagnostico, pronostico y tratamiento de patologas
hematolgicas asociadas.
METODOS
Los mtodos empleados para su determinacin pueden agruparse en cuatro clases
principales:
METODO DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA
FUNDAMENTO
La muestra de sangre se diluye en una solucin que contenga ferricianuro de
potasio, se oxida a frrico convirtindola en metahemoglobina (pigmento inestable) y
este en presencia del cianuro de potasio se convierte en cianmetahemoglobina
(pigmento estable) de color rojo brillante que se lee a 540nm.
MATERIALES Y REACTIVOS
Fotocolorimetro
Tubos de 12X100 mm
Pipetas tipo shali o pipetas automticas
Reactivo de Drabkin (Ferrocianuro potsico, cianuro potsico, fosfato monopotsico,
agua destilada, sterox)
Estndar comercial o patrn de Hemoglobina.
Boquilla o auxiliares de pipetas para pipetas de shali.
PROCEDIMIENTO
Conectar El Fotocolorimetro y esperar que alcance la temperatura adecuada.
Homogenizar bien la sangre por inversin del frasco del fondo a la tapa por lo menos
30 veces.
Pipetear 5 ml de Reactivo de Drabkin en un tubo de 12X100 mm.
Aadir 0.02 ml de sangre, mediante la pipeta de shali al tubo que contiene el
reactivo. Si se utiliza pipeta de shali se agrega la muestra en el fondo del tubo y se
juaga la pipeta con la parte superior del reactivo, si se utiliza pipeta automtica la
muestra se puede adicionar en la parte superior del reactivo.
Mezclar el tubo mediante inversin de 4 a 5 veces o mezclar soplando con la
misma pipeta.
Dejar en reposo 10 minutos para que se de la hemlisis total y se complete la
transformacin de toda la hemoglobina a cianmetahemoglobina. Se debe leer con
un plazo mximo de una hora.
Leer la solucin coloreada a una absorbancia de 540 nm.
Calcular la concentracin de hemoglobina mediante la realizacin de una grfica o
curva de calibracin, mediante el calculo de un factor o utilizando la siguiente
formula:
Una vez preparadas las soluciones patrn, se inicia la lectura a 540 nm iniciando con
el tubo que contiene solo reactivo (tubo 5. se ajusta a 0 la Absorbancia del
instrumento (100% tramitancia) y se continua a partir de la solucin ms
concentrada (tubo 1) y las soluciones restantes, finalmente la relacin entre los
valores de absorbancia obtenido y la concentracin de hemoglobina se elabora una
grfica en la cual se busca la concentracin de la muestra a partir de la absorbancia
obtenida en la lectura.
Objetivo
Llevar al estudiante de microbiologa a conocer y manejar adecuadamente los
fundamentos, procedimientos tcnicos, formulas para clculos e interpretacin
clnica de esta tcnica para un mejor manejo diagnostico, pronostico y tratamiento
de patologas hematolgicas asociadas con el nmero de glbulos rojos en sangre
perifrica.
METODOS:
Para la realizacin del recuento del recuento de eritrocitos se utilizan metodos
pticos y mtodos electrnicos.
FUNDAMENTO:
Existen dos mtodos para realizar el conteo de eritrocitos: el recuento manual y el
conteo electrnico de clulas, ste ltimo es mucho ms utilizado, ya que el primero
presenta un margen de error alto.
Recuento Manual
MATERIAL Y REACTIVOS:
Cmara de Neubauer o cuenta glbulos .
Pipeta dilutora de glbulos rojos
Muestra: sangre anticoagulada con EDTA.
Lquido diluyente: Solucin de Hayem (Bicloruro de Mercurio, Cloruro sdico,
Sulfato Sdico Y Agua Destilada)
Microscopio.
Pipetas automtica.
Pipetas volumtricas de 2cc.
PROCEDIMIENTO:
El lquido de dilucin debe ser isotnico para evitar la lisis de las clulas, debe
contener un fijador para preservar la forma de las clulas y prevenir aglutinacin y
autolsis.
Para llenar la cmara se coloca el extremo de la pipeta sobre el borde del rea
cuadriculada de la cmara levantando cuidadosamente el dedo, se hace que el
lquido descienda en forma gradual hasta llenar el rea cuadriculada, esto se llena
por capilaridad.
Una vez llena la cmara se deja en reposo durante un minuto con el fin que los
leucocitos se sedimenten.
RECUENTO.
X = 1 x 101
0.5
X = 200 (factor de dilucin).
=10.000
Objetivo
Conocer y ejecutar adecuadamente el fundamento, procedimiento e interpretacin
clnica de la VSG, como prueba de seguimiento en enfermedades inflamatorias e
infecciosas agudas.
METODOS:
Para la determinacin de la V.S.G. se han venido empleando dos procedimientos:
A. El mtodo de westegreen
B. El mtodo de wintrobe.
METODO DE WESTERGREEN
MATERIALES.
PROCEDIMIENTO:
Una vez transcurrido este tiempo se lee la distancia entre la superficie del
menisco de la columna eritrocitaria y la parte superior de la columna de
sangre a nivel de la marca 0. Este valor corresponde V.S.G. en 1 hora.
METODO DE WINTROBE
FUNDAMENTO.
Los eritrocitos de una muestra de sangre venosa bien mezclada y colocada en un
tuvo vertical tendern a caer hacia el fondo. La velocidad de sedimentacin de
eritrocitos es equivalente a la longitud del recorrido descendente de la parte de la
columna en un intervalo de una hora y varios factores contribuyen a este valor.
MATERIALES.
PROCEDIMIENTO
OBSERVACIONES
La lectura de la velocidad de sedimentacin globular debe efectuarse a la hora ya
que despus de este tiempo dar valores altos y si disminuimos el tiempo dar
valores bajos.
5. Preguntas:
HEMATOCRITO
HEMOGLOBINA
V.S.G
6. Bibliografa