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Tecnica Histologica PDF
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INTRODUCCIN.
Parece factible que, si deseamos estudiar una clula o una
asociacin de ellas, para conocer su estructura morfolgica
microscpica y deducir, en lo posible sus funciones, bastara Fig Tec. de tincin: Micromanipulacin mecanica (microelectrodos
que a traviesasn la emembran celular)
examinarlas a travs de los instrumentos que amplan
imgenes de los objetos observados (microscopios fotnicos
COLORACIN VITAL Puede ser de dos tipos:
y electrnicos); este procedimiento no es factible de
1. Coloracin intravital, consiste en la administracin de
realizar; al intentar hacerlo se presentan serias dificultades
colorantes vitales a travs de las vas digestiva o
en la manipulacin de los especimenes y el inicio de los
intratraqueal; mediante inyecciones sanguneas,
procesos propios de desarreglo molecular (autlisis) y
linfticas, subcutnea, o intraperitoneal. Las soluciones
celular que suelen presentarse despus que las clulas y los
de uso ms frecuente son: tinta china, carmn de litio,
tejidos abandonan su hbitat natural. Por lo tanto, es
azul tripan (partculas colorantes que demuestran la
necesario utilizar una serie de procedimientos y artificios
capacidad fagoctica).
que nos permitan describir, comprender y analizar la
estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos.
2. Coloracin supravital, En este procedimiento se
emplean colorantes que se aplican a clulas o tejidos
Se denomina TCNICA HISTOLOGICA al conjunto de provenientes de organismos vivos. Se demuestran:
procedimientos aplicados a un material biolgico (animal o mitocondrias con el verde de Jano, los grnulos de las
vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferirle las clulas cebadas con el rojo neutro, la sustancia
condiciones ptimas para poder observar, examinar y granulofilamentosa de los reticulocitos con el azul
analizar sus componentes morfolgicos a travs de los brillante de cresyl, ramificaciones nerviosas con el
microscopios fotnicos y electrnicos. azul de metileno; o el ADN y el ARN de las clulas con
naranja de acridina (empleando el microscopio de
fluorescencia).
PROCEDIMIENTOS INMEDIATOS O VITALES
Permiten la observacin y el estudio de protozoarios, clulas
sanguneas, clulas descamadas o disociadas, clulas en
cultivo de tejidos; estructuras muy delgadas y translcidas
como la membrana peritoneal de animales pequeos o
epidermis de vegetales, granos de polen etc. suspendidas en
los lquidos de su hbitat natural o solucin salina
balanceada. Para una observacin ptima suele utilizarse
tipos especiales de microscopios fotnicos como el de
campo oscuro o el de contraste de fases: observacin al
estado fresco.
Fig Tec. de tincin 1: Tincin supervital de macrofagos de tejido
conectivo por agregado de Carmin de litio a una preparacin de Tejido
En ciertos casos, cuando se requiera destacar alguna Vivo.
estructura celular o tisular se pueden emplear colorantes
inocuos para la vida de las clulas, no modifican la PROCEDIMIENTOS MEDIATOS O POSTVITALES
estructura de ellas ni interfieren en sus funciones. A este Tienen por finalidad preparar clulas, tejidos y rganos
procedimiento se le conoce como coloracin vital. procedentes de seres en los que los procesos vitales se han
detenido y es necesario conservar la estructura que tenan en
Para el estudio de las manifestaciones vitales de las vida.
muestras suelen emplearse una serie de microinstrumentos De manera general, para alcanzar este objetivo es necesario
que facilitan la introduccin, al interior de las clulas, de realizar los siguientes pasos:
sustancias o la extraccin de ciertos componentes mediante
microinyectores, micropipetas, microelectrodos o
instrumentos que emiten haces sumamente delgado de - Toma de la muestra
radiaciones de alta energa (rayos laser). - Fijacin
- Inclusin
- Microtoma
- Coloracin o tincin
- Montaje
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A) TOMA DE LA MUESTRA b) mediante la necropsia, las muestras se obtienen de
La calidad y la fidelidad con que una clula o un tejido seres muertos: En este caso es recomendable que
muestren una imagen al microscopio, con las los tejidos y rganos se obtengan inmediatamente
caractersticas morfolgicas que posean cuando despus de producida la muerte.
estaban con vida, dependen esencialmente de la
prontitud y el cuidado que se aplic para obtener la Recomendaciones para la toma de las muestras.
muestra a ser procesada mediante los pasos Los tejidos y los rganos provenientes de biopsias y
mencionados anteriormente. necropsias se seccionar empleando bisturs o navajas de
afeitar nuevos, sin hacer presin sobre ellos. No es
Existen diversos procedimientos que permiten obtener recomendable el uso de tijeras para cortar los tejidos pues
muestras de tejidos y rganos para conseguir stas ocasionan compresiones y jalonamientos de los
preparaciones histolgicas de buena calidad. Estos son: tejidos y rganos que distorsionar su estructura
microscpica. El tamao de las muestras no debe exceder de
a) Mediante la biopsia: (del griego bios = vida y 10 mm por lado con un grosor de 5 mm.
opsis = visin), consiste en la toma de un
fragmento de tejido u rgano de un ser vivo. realiza B) FIJACION.
a travs de una operacin quirrgica hecha Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es
exprofesamente o durante la intervencin
quirrgica efectuada en pacientes y corroborar as
Detener la vida de las clulas e impedir las modificaciones
un diagnstico de una determinada lesin. La
post morten que pueda sufrir la clula (procesos autolticos),
biopsia puede ser:
manteniendo la estructura morfolgica de clulas y tejidos
incisional
sin que ocurran cambios notables en ellos.
excisional
por sacabocados
por puncin y absorcin Esto se consigue inmovilizando (por coagulacin o
por raspado precipitacin) las molculas protenicas e inhibiendo
por trepanacin principalmente las enzimticas hacindolas insolubles. Esta
accin garantiza la integridad de las clulas y tejidos; se
efecta por mediante agentes qumicos denominados
fijadores.
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Condiciones de un buen fijador. A continuacin se presentan algunos ejemplos de fijadores
Una sustancia fijadora para que ejerza de manera eficiente y compuestos o mezclas fijadoras que se emplean con mayor
adecuada sus funciones debe poseer las siguientes frecuencia:
condiciones:
Formol - fosfato (formol tamponado):
Matar inmediatamente a las clulas, impidiendo la
- solucin de formaldehdo (37% a 40%)--------------100 ml
aparicin de los procesos autolticos. Para tal fin el
- agua destilada ------------------------------------------- 900 ml
fijador debe poseer:
- fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4 - H2O)-----4.0 gr
Un buen poder de penetracin, que en contados
- fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4)------------------6.5 gr
instantes se introduzca con rapidez en el espesor de la
muestra
Un buen poder de difusin, que no fije slo la porcin Suele emplearse como un fijador de rutina, al igual que el
superficial de la muestra sino que alcance las porciones formol al 10%. Posee un pH de 6.8 a 7.0 aproximadamente.
ms profundas de la misma. Es ligeramente hipotnico.
No debe disolver componentes celulares. Es recomendable usarlo para fijar tejidos hematopoytico y
linfticoreticular. El material nuclear se fija de manera
Que sea fcil de conseguir y que sea barato. precisa y ntida. Facilita la tincin de fibras colgenas y
clulas conjuntivas mediante el empleo de colorantes que
Las soluciones fijadoras suelen ser fijadores simples, o tienen como base a las anilinas. Se utiliza para los tejidos en
fijadores compuestos (mezclas fijadoras) en las que utilizan los que se aplicar tcnicas inmunohistoqumicas. Los
ms de una sustancia fijadora. tejidos no deben mantenerse mucho tiempo en fijacin (no
ms de 48 horas) porque se endurecen demasiado. HgCl2 es
Ejemplo de fijador simple: una sustancia que corroe el instrumental metlico. Antes de
Formol o formalina. Est considerado como la sustancia aplicar una tincin es necesario eliminar los pigmentos
fijadora de mayor uso en los laboratorios que realizan precipitados del bicloruro de mercurio en los tejidos.
tcnica histolgica. El formol comercial consiste en una
solucin acuosa del gas formaldehido al 39 - 40%. Se Formol - cloruro de calcio.
presenta como un lquido claro, incoloro, que emite vapores - solucin de formaldehido (37% a 40%)---------------100 ml
sumamente irritantes para la conjuntivas y la mucosa - cloruro de calcio--------------------------------------------10 gr
respiratoria. Su accin fijadora se ejerce coagulando las - agua destilada----------------------------------------------900ml
protenas.
Es un fijador que posee un buen poder de penetracin y Se recomienda fijar las muestras en esta solucin cuando se
difusin. Mantiene de manera adecuada la estructura y desean preservar lpidos, especialmente fosfolpidos: Antes
facilita la coloracin posterior de los componentes celulares de obtener los cortes, las muestras se incluyen en gelatina o
y tisulares. Endurece bien las muestras. Conserva bastante se congelan directamente para seccionarlas con empleando
bien a las grasas. microtomos de congelacin o el criostato.
Se le emplea en una solucin al 10% (10 del formol Lquido fijador de Boin.
comercial y 90 partes de agua) - solucin acuosa saturada de cido pcrico-------------750 ml
- solucin de formaldehido (37% a 40%)---------------250 ml
- cido actico glacial--------------------------------------- 50 ml
El tiempo de fijacin de las muestras, dependiendo del
tamao de ellas, debe ser de 24 a 48 horas como mnimo y
si es posible, en refrigeracin. Es un buen fijador de uso rutinario. Tiene un buen poder de
penetracin y de difusin. Ofrece resultados satisfactorios
Fijadores compuestos. con ciertos tricrmicos como el de Masson. Pueden fijarse
Una sola sustancia fijadora difcilmente rene todas las piezas de un centmetro de grosor y dos o tres centmetros
condiciones para ejercer una buena fijacin, por lo tanto es de longitud. Se le emplea con resultados ptimos en la
aconsejable usar mezclas fijadoras a travs de las cuales se fijacin de embriones y fetos pequeos pues ejerce cierto
acrecientan las cualidades de un fijador y se atenan sus poder descalcificante. Dependiendo del volumen de la
defectos y desventajas. muestra, el tiempo de fijacin ser de 12, 24 a 48 horas.
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Antes de la inclusin, es conveniente eliminar el cido se emplear la solucin de formol al 10% 15% que
pcrico de las muestras (tie de color amarillo intenso a los permite obtener resultados satisfactorios. Lquido
tejidos)El lavado se hace con una solucin de alcohol etlico considerado como el fijador universal pues facilita
al 70% a la que se aaden algunas gotas de una solucin al el empleo posterior de cualquier otro fijador
5% de carbonato de litio. El lavado finaliza cuando el (postfijacin) capaz de complementar su accin.
alcohol litinado ya no muestra color amarillento.
b) Tamao de las muestras. El tamao y grosor de las
muestras deben ser pequeas y delgadas, de 1cm2 a 2
Lquido fijador de Zenker ( Solucin madre o stock)
cm2 y con un espesor de 2 mm a 5 mm, especialmente
- bicloruro de mercurio-------------------------------------50 gr
si se emplean fijadores con escaso poder de penetracin
- bicromato de potasio--------------------------------------25 gr
y de difusin.
- agua destilada ------------------------------------------1000 ml
c) Volumen del fijador. Una proporcin que es necesario
La solucin madre se puede guardar durante mucho emplear ser de 1 a 20 (muestra fijador). Ser la ms
tiempo. Cuando a ella se le aade cido actico forma el adecuada para garantizar una buena fijacin.
Las sustancias de inclusin tienen la propiedad de Los tiempos indicados son los que se aplicarn a las
incorporarse e infiltrarse al interior de las clulas y muestras de tamao mediano (1 cm2 x 0.5 cm. de grosor).
tejidos con la finalidad de servirles de soporte. As los Los tiempos pueden disminuirse o incrementarse si las
tejidos y la sustancia de inclusin forman un bloque piezas son ms pequeas o ms grandes.
homogneo en dureza y consistencia, a pesar que sus
componentes tuvieron originalmente distinta dureza.
La deshidratacin incompleta de los tejidos se comprueba
Existen una serie de sustancias de inclusin que se han cuando stos al sumergirse en el lquido diafanizador
empleado o se utilizan actualmente. Unas son solubles muestran un aspecto turbio blanquecino
en agua (gelatina, carbowax, glicol metacrilato) otras,
solubles en solventes orgnicos (parafina, celoidina,
resinas epxicas).
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b) Diafanizacin. Las muestras deshidratadas se grumos pequeos. Las parafinas, se disuelven usando
encuentran totalmente embebidas en alcohol etlico estufas que las mantienen en ese estado. Las estufas
absoluto; pero la parafina tampoco es soluble en permanecen a una temperatura constante, generalmente de
alcohol por lo que es necesario reemplazarlo por 2o C a 4o C por encima del punto de fusin de la parafina a
sustancias que sean capaces, simultneamente, de emplear.
mezclarse con el alcohol y disolver la parafina. Estas se La parafina diluida se coloca en tres recipientes dentro de la
denominan lquidos diafanizadores o intermediarios. estufa. El primero, con una capacidad de 1000 a 1500 cc,
Ejemplos: xilol, tolueno, benceno, y el cloroformo. recibir a las muestras embebidas en xilol; la parafina
reemplazar el xilol de las muestras y se infiltrar al interior
de las mismas. Los otros dos recipientes son ms pequeos
(500 cc. de capacidad) y, de manera consecutiva recibirn a
El lquido diafanizador de uso ms frecuente es el xilol
los tejidos. El ltimo de ellos servir para contener a las
muestras antes del proceso de formacin de los bloques
de parafina. En el interior de la estufa debe existir otro
La actividad aclaradora o diafanizadora del xilol se emplea recipiente conteniendo parafina lquida pura, que se
tambin en el procedimiento de coloracin. La diafanizacin emplear para la formacin de los bloques.
de los tejidos deshidratados se debe a que estas sustancias El tiempo que permanezcan las muestras dentro de los
poseen un alto ndice de refraccin y al interactuar con los recipientes de parafina depender de la naturaleza del tejido
tejidos los vuelven transparentes. y el tamao de las muestras. Se sugieren los siguientes
El procedimiento de diafanizacin se realiza de la siguiente lapsos:
manera:
10) Primer bao de parafina------------------1 a 1.5 horas
7) alcohol absoluto (50%) - xilol (50%)--------1 hora 11) Segundo bao de parafina----------------1 a 1.5 horas
8) xilol-----------------------------------------------1 hora 12) Tercer bao de parafina-----------------30 a 60 minutos
9) xilol-----------------------------------------------1 hora
Nota: agitar las muestras con cierta frecuencia
Nota: las muestras deben agitarse continuamente para
permitir la renovacin de los lquidos.
La inclusin o formacin del bloque de parafina se efecta
empleando moldes de diversos materiales y diferentes reas
c) Inclusin y formacin del bloque de parafina. Las y profundidades. Pueden ser de papel, metal o plstico. El
parafinas son hidrocarburos saturados provenientes de bloque de parafina debe contener la muestra correctamente
la destilacin del petrleo. Generalmente son sustancias orientada para facilitar la obtencin de las secciones o
slidas a temperatura ambiente. Existen diferentes tipos cortes.
de parafina que se caracterizan por sus puntos de
fusin. Estos oscilan entre 40o y 60o C. La parafina El molde elegido se llena con parafina caliente pura; con
hierve a 300o C. y emite vapores que son muy una pinza calentada en un mechero se toma una pieza de
inflamables. Las parafinas se clasifican en: tejido del tercer recipiente y se orienta una de sus
superficies (aquella que se pondr en contacto con el filo de
Blandas. tienen un punto de fusin de 45 o C - la navaja) se sumerge al interior del molde, en el que la
52o C. Son recomendables para incluir tejidos en parafina ha empezado a solidificarse y se le aplica una leve
los se detectarn antgenos mediante presin. Despus los moldes se enfran de inmediato (se
inmunohistoqumica. sumergen en agua fra o se introducen en el refrigerador)
para que la parafina se solidifique de manera homognea.
Semiduras. Sus puntos de fusin son de 54o C -
58o C. Es la parafina que se emplea con mayor Todos los procedimientos mencionados, desde la
frecuencia en los laboratorios donde se realiza deshidratacin hasta la infiltracin en los dos o tres
tcnica histolgica. De acuerdo a la temperatura recipientes de parafina lquida, se pueden efectuar de
del medio, se recomienda su uso pues se pueden manera automtica. Existen una serie de procesadores
obtener secciones de 5 a 7 de m. automticos que facilitan estas tareas.
Duras. Tienen un punto de fusin de 60o C - 65o Igualmente existen instrumentos que contienen parafina
C. Son parafinas que deben usarse en ambientes fundida que la dispensan a voluntad del usuario para luego
con climas de temperaturas altas. formar los bloques. Tienen anexos a ellos reas o superficies
que se mantienen calientes o fras, con la finalidad de
La penetracin de la parafina al interior de los tejidos se orientar correctamente las piezas de los tejidos y
efecta cuando sta se encuentre en estado lquido. En el posteriormente producir el enfriamiento rpido, la
comercio las parafinas se expenden en forma de bloques solidificacin de la parafina y la formacin del bloque.
discoidales, escamas, tabletas rectangulares o en forma de
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D) MICROTOMIA (OBTENCIN DE LOS CORTES) Los microtomos tipo Minot permiten obtener secciones
En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo delgadas, del orden de 4 a 7m de espesor. Producen cortes
bloque que, posee la dureza y la consistencia suficientes seriados, es decir, cuando se obtiene un corte, ste queda
para obtener secciones delgadas y transparentes. adherido por su borde anterior al borde posterior del que lo
precedi; formndose de esta manera una cinta de cortes que
va descendiendo por la superficie anterior de la navaja.
Las secciones delgadas o cortes se obtienen utilizando
instrumentos mecnicos diseados para que en forma mas o Los cortes seriados se emplean cuando se desea realizar
menos automtica, seccionen el bloque de parafina en cortes reconstrucciones tridimensionales del rgano procesado,
delgados y de grosor uniforme. Los instrumentos se cuando se requieren comparar secciones vecinas, del tejido
denominan microtomos u rgano, coloreadas por diversas tcnicas de tincin o
cuando se hace el estudio microscpico topogrfico en
embriones y fetos.
El sistema de funcionamiento de los microtomos consta de Existen dos condiciones indispensables que garantizan la
cuatro mecanismos principales: obtencin de secciones delgadas, uniformes y seriadas:
sujecin del bloque de parafina.
sujecin de la navaja.
El que permite que el filo de la navaja seccione al a) Que la deshidratacin, impregnacin e inclusin hayan
bloque en cortes delgados y de grosor uniforme. sido realizadas correctamente.
El de avance del bloque en un nmero determinado de
micrmetros despus que se ha obtenido un corte. b) El empleo de una navaja o cuchilla muy bien afilada y
asentada y que el filo de la misma ofrezca la
Los microtomos se clasifican de acuerdo a la manera como inclinacin adecuada hacia la superficie del bloque.
se desplaza el bloque que contiene el tejido incluido; as,
existen: Las navajas o cuchillas de microtoma requieren de un
a) Microtomo de rotacin tipo Minot. afilado y un asentado muy cuidadoso, pues el
Mediante una manivela circular denominada volante, el mantenimiento del filo de ellas depende que se obtengan,
mecanismo que sujeta al bloque de parafina se desplaza con xito, buenos cortes.
frente al filo de la navaja, de arriba hacia abajo y Las navajas se afilan utilizando afiladores automticos que
viceversa en un movimiento vertical. efectan la operacin en forma rpida y garantizan un
afilado uniforme.
b) Microtomo de deslizamiento. El movimiento que se Para el afilado de las cuchillas se requieren una placa de
realiza para obtener los cortes es horizontal, es decir de vidrio despulida finamente y sustancias abrasivas.
atrs hacia adelante y viceversa. Generalmente el Existen varios modelos de afiladores automticos, pero
mecanismo que sujeta al bloque de parafina es el que todos ellos funcionan bajo ciertos mecanismos:
se desplaza y a la navaja permanece esttica.
a) movimiento y deslizamiento de las cuchillas sobre la
superficie del vidrio despulido (movimiento rotatorio o
de atrs hacia adelante y viceversa)
Fig Tec. de tincin: Microtomo Las sustancias abrasivas suelen estar disueltas en agua o en
aceite. Generalmente se emplean dos tipos de abrasivos:
Los microtomos tipo Minot son los de uso ms frecuente Unos, de grano grueso, utilizados para desgastar algunas
en cualquier laboratorio donde de realiza tcnica melladuras visibles de las navajas y otros, de grano fino que
histolgica, especialmente cuando los tejidos estn incluidos sirven para afilar verdaderamente las navajas.
en parafina. Los microtomos de deslizamiento, en cambio,
se emplean cuando los tejidos estn incluidos en celoidina o La perfeccin del afilado se obtiene cuando el filo de las
cuando la inclusin en parafina contiene porciones navajas se asienta empleando, para tal fin, una superficie de
voluminosas de tejidos y rganos. cuero para asentar. Esta operacin se realiza momentos
previos a la obtencin de los cortes.
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Extensin y adhesin de los cortes al portaobjetos. los
Se recomienda, para una misma cuchilla:
cortes obtenidos, aislados o en forma de cintas,
a) utilizar un solo afilador y si es posible la misma placa
generalmente se presentan arrugados y muestran una rea
de vidrio despulido
menor que la que poseen en la inclusin, por lo que es
necesario extenderlos y luego adherirlos a las lminas
b) marcarlas de tal manera que siempre deben sujetarse al
portaobjetos ( esto facilita su manipulacin posterior).
mecanismo del afilador conservando una posicin y
orientacin determinadas
Los cortes se extienden al depositarlos sobre la superficie
del lquido extendedor contenido en un recipiente
Esto impide que se formen facetas desiguales en el filo de la denominado bao de flotacin (ste mantiene la
navaja producindose, con ello, un afilado deficiente. temperatura entre 40o a 45o C). Las secciones se depositan
Efectuado el afilado de las cuchillas, stas deben limpiarse en el lquido procurando que la superficie brillante (aquella
prolijamente, pues cualquier partcula de abrasivo que se correspondiente al filo de la navaja) se ponga en contacto
quede adherido al filo de la navaja lo daar y tambin al con el lquido caliente. En caso que ciertas arrugas persistan,
tejido, durante la microtoma. se emplean unas pinzas finas o un pincel de pelo de camello,
para ejercer una ligera traccin entre los extremos de los
En la actualidad se expenden en el mercado cuchillas cortes y as desarrugarlos totalmente.
descartables. Se venden en gran cantidad, generalmente por
cientos, son relativamente baratas. Se emplean para obtener
algunos cortes y luego se descartan. Ofrecen dos ventajas:
no se requiere afilarlas y siempre el usuario tendr un
instrumento bien afilado.
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Teora de la coloracin.
b) Al lquido de flotacin se le aaden sustancias
Existen dos teoras que explican el procedimiento de la
adherentes. Uno de los procedimientos ms sencillos es
coloracin
el que consiste en disolver, en el agua ya caliente del
bao de flotacin (dos litros) 0.5 g de gelatina. En otros
a) Teora fsica. Considera que la coloracin es un
casos se emplea una solucin que posee los ingredientes
proceso fsico de adsorcin. As, las partculas de las
siguientes:
sustancias colorantes disueltas penetran en los
- agua destilada --------------------------------- 1,000 ml
espacios intra e intercelulares en los que se mantienen
- bicromato de potasio--------------------------0.2 gramos
adheridas en razn de la cohesin molecular. Por
- gelatina -----------------------------------------0.2 gramos
ejemplo, la coloracin de las grasas o lpidos es una
tincin por adsorcin; los Sudanes III o IV tien las
El agua destilada se calienta a 60 o C para disolver en ella
grasas por la facilidad que tienen para disolverse en
la gelatina y el bicromato de potasio, sucesivamente. Se
ellas.
filtra y est lista para su uso.
Este lquido previamente filtrado se puede utilizar varias
veces. (se recomienda guardarlo en el refrigerador).
E) COLORACION O TINCION. Fig Tec. de Tincin: Tejido adiposo teido con Sudn
Los cortes de los tejidos adheridos a los portaobjetos
estn listos para ser coloreados. b) Teora qumica. El colorante se une a la sustancia
coloreable combinndose con ella ntimamente debido a
la presencia de agrupaciones moleculares cidas o
bsicas en los componentes celulares o tisulares que se
El procedimiento de coloracin o tincin consiste en que unen respectivamente a los cromgenos bsicos y
una estructura celular o tisular adquiere especficamente un cidos de los colorantes, formando sales insolubles.
color bajo la accin de una sustancia colorante. Una prueba de ello es el hecho de la casi imposibilidad
de separar completamente el colorante de los
Se considera que una estructura se ha coloreado o teido componentes en donde ejerci su accin de tincin an
cuando al ser lavada con el lquido que disuelve al empleando sus lquidos solventes.
colorante, no se decolora.
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Colorantes naturales, se extraen de:
Poseen una carga elctrica positiva, por lo tanto son
1) Animales. Como el carmn, que se extrae de la
colorantes catinicos. Se les denomina tambin colorantes
cochinilla, artrpodo parsito de los tallos del
nucleares, pues tienen afinidad por los cidos nucleicos
nopal (tuna). El carmn (de color rojo intenso) es
(ADN y ARN).
uno de los colorantes naturales ms empleado en Las sustancias teidas por los colorantes bsicos se
la industria alimentaria y cosmtica. denominan basfilas y estn constituidas por
En tcnica histolgica se utiliza el carmn de Best componentes cidos.
para demostrar glucgeno, el carmn de Mayer Ejemplos: la hematoxilina, el rojo nuclear, el azul de
para demostrar mucina; las clulas fagocticas se metileno, la tionina, el azul de toluidina, la fucsina bsica.
evidencian con el carmn de litio (colorante vital).
c) Neutros. Son sales en las que tanto la parte bsica
2) Vegetales. Como la hematoxilina, obtenida de la como la parte cida proporcionan color. Por ejemplo el
corteza de un rbol, el palo de campeche eosinato de azul de metileno o el eosinato de azur de
(Haematoxilum campechanum), la safranina que metileno.
se extrae de una liliacea ( pistilos de la flor de
azafran) o la orcena que se obtiene de un liquen. Estos colorantes tienen la propiedad de teir de manera
simultnea, a los componentes nucleares y a los
Colorantes artificiales o sintticos. Son productos citoplasmticos, inclusive pueden proporcionar colores
derivados de la destilacin de la hulla o carbn. distintos (metacromasia) a determinados componentes
Genricamente se les conoce como colorantes derivados de citoplasmticos como las granulaciones especficas de los
la anilina. granulocitos (cierto tipo de leucocitos).
Forman parte de las frmulas colorantes para frotis de
Los colorantes artificiales son sales. Son compuestos sangre como los colorantes de Wright, May Grnwald,
orgnicos formados por las modificaciones que experimenta Giemsa, Leischman, etc.
el anillo bencnico cuando se reemplazan dos tomos de
hidrgeno por un tomo de oxgeno o con otro tomo o por d) Indiferentes.- No forman sales. Son compuestos no
un grupo qumico que tenga enlaces de doble valencia en inicos incapaces de la disociacin electroltica.
vez de uno, dando como resultado un compuesto coloreado.
Son insolubles en agua pero solubles en solventes orgnicos
La anilina es incolora, pero las modificaciones qumicas como el alcohol y tambin en las grasas o lpidos y, aunque
producidas en el anillo bencnico le confieren, a los ellos poseen color, en realidad estrictamente hablando no
compuestos nuevos, un color determinado. son colorantes.
Los colorantes artificiales y sintticos se clasifican en: Basndose en que son solubles en las grasas, estas
sustancias se utilizan para demostrar la presencia de ellas en
clulas y tejidos, pues tien selectivamente a los lpidos.
a) Acidos: son sales cuya parte bsica es incolora y el
Los ejemplos son: El sudan negro, el sudn III y el sudn
componente cido posee color. As, en el colorante
IV, El rojo oleoso.
eosina o eosinato de sodio, la propiedad colorante se
debe al cido eosnico y no a la base, el sodio.
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Clasificacin de las coloraciones.
Existen procesos a travs de los cuales clulas y tejidos son
coloreados por las sustancias colorantes. De acuerdo a ellos,
las coloraciones se clasifican en:
b) Coloracin indirecta o adjetiva. Para que lleve a Sucesiva, Consiste en aplicar a los tejidos soluciones
efecto la coloracin es indispensable recurrir al empleo sucesivas de varios colorantes, con la finalidad que
de sustancias intermediarias que faciliten la adhesin ciertos componentes se tian con algunos de ellos. El
del colorante en las estructuras tisulares. La sustancia ejemplo ms demostrativo es la coloracin de
intermediaria que se utiliza se denomina mordiente. hematoxilina. eosina, en ella los ncleos se tien con
El mordiente se aplica antes de la utilizacin de la la hematoxilina y despus la eosina se encarga de
solucin colorante o puede formar parte de ella. La colorear al citoplasma.
combinacin que se efecta entre el mordiente y el
colorante se denomina laca. La mayora de las g) Coloracin ortocromtica. Es la accin de tincin que
soluciones colorantes de hematoxilina requieren de un ejerce un colorante al colorear una determinada
mordiente para que aquella proporcione color. estructura con su propio color. La gran mayora de los
colorantes producen coloracin ortocromtica.
c) Coloracin progresiva. Se refiere a la marcha misma
de la coloracin. Los tejidos se ponen en contacto con h) Coloracin metacromtica. Es la tincin en la cual, un
la solucin colorante para que, conforme transcurre el colorante adems de ceder su propio color a una
tiempo de coloracin, el tejido, de manera progresiva, estructura celular o tisular tambin tie de color distinto
alcance la intensidad de tincin deseada; en ese a otras estructuras. La tionina y el azul de toluidina
momento se detiene la coloracin mediante lavado y la colorean de azul a los ncleos y a otras estructuras
eliminacin del colorante sobrante. basfilas pero, al mismo tiempo, ciertos componentes
tisulares como la mucina, la matriz cartilaginosa o el
d) Coloracin regresiva. En este caso los tejidos se cido hialurnico se tien de violeta o rosado.
sobrecolorean con el colorante para someterlos despus
a la accin de una sustancia denominada diferenciador,
ste extrae parte del colorante y, mediante la
observacin al microscopio, se detiene el proceso de
diferenciacin cuando los componentes alcanzan la
tincin deseada.
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