UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS

ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
QUMICA ANALTICA II
Profesor Luisa Fernanda Gutierrez

LABORATORIO No. 2. CALIBRACIN DE MTODOS INSTRUMENTALES.

1. OBJETIVO

Adquirir destrezas en la elaboracin de las diferentes grficas de calibracin en el anlisis

instrumental.

2. CONCEPTOS GENERALES

Segn la ISO (International Standard Office), la calibracin se define como el conjunto de

operaciones que permiten establecer, en determinadas condiciones experimentales, la relacin
existente entre los valores indicados por un instrumento o un mtodo analtico, con los valores
obtenidos en la medida de un valor conocido. Los tres mtodos de comparacin con patrones
empleados ms frecuentemente son los que utilizan curvas de calibracin, el mtodo de adicin de
estndar y el mtodo del patrn interno.

2.1 CURVA DE CALIBRACIN

En este mtodo se preparan una serie de disoluciones patrn de forma que cubran un intervalo de
concentraciones adecuado y que tengan una composicin en matriz parecida a la de la muestra.
Tambin se prepara un blanco, el cual tiene igual composicin que los dems estndares, pero sin
el analito. Su seal debera ser cero, pero a veces por efecto del ruido del instrumento no es as.
Se representan las respuestas en una grfica frente a las concentraciones de los estndares que
las han proporcionado (ver figura 1). Generalmente, hay una relacin lineal entre la seal analtica
(y) y la concentracin (x) y por ello los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos
cuadrados, segn la ecuacin: y=ax+b, siendo y la seal instrumental, a la pendiente, b la
ordenada en el origen y x las concentraciones de los estndares. Una vez obtenida la grfica, se
interpola la seal de la muestra y se obtiene la concentracin de analito en la muestra.

Figura 1
En la prctica, es muy frecuente que la grfica de calibracin sea lineal a bajas concentraciones del
analito y se vuelve curva a altas concentraciones. En este caso, se suele prescindir de los puntos
que se apartan de la linealidad, para lo cual existen mtodos estadsticos adecuados [1].

2.2 ADICIN DE ESTNDARES

Se utiliza cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la matriz de la muestra.

Se toman alcuotas iguales de la muestra problema y se le aade a cada una por separado,
cantidades crecientes del patrn, excepto a una de ellas y se realiza la medida. De esta manera, la
escala de concentracin x se define como las concentraciones de analito adicionadas a las
alcuotas de la muestra problema. Por tanto, la concentracin de la muestra problema, est dada
por el punto en el cual la lnea extrapolada corta al eje de concentracin (ver figura 2). La recta de
regresin se establece de la misma forma que el mtodo de la curva de calibracin. En este
mtodo, tanto el analito como el patrn son los mismos.

En el intervalo de respuesta lineal, la seal S es proporcional a la concentracin de analito.

S a (c S + c X ) a c S + a c X (1)

Donde:

a: Es una constante de proporcionalidad

cX: Concentracin del analito en la muestra problema

cS: Concentracin del analito aadida (solucin patrn)

La ecuacin de la recta de calibrado a la cual se desea aproximar a (1), tiene la forma:

y a x + b (2)

Donde a representa la pendiente y b el intercepto de la recta de calibrado. Igualando las

ecuaciones (1) y (2), se llega a que: y = S, x = c S, b = acX. De donde cX se puede obtener de esta
ltima ecuacin como cX = b/a. Alternativamente, por extrapolacin de la recta de calibrado se
puede llegar al mismo resultado.

Figura 2
Este mtodo tambin se puede realizar con un solo punto, sabiendo que la intensidad es
proporcional a la concentracin. Por ejemplo, una muestra de concentracin inicial desconocida del
analito ([Xi]) proporciona una seal SX. Si a esta disolucin se le aade una disolucin del patrn de
concentracin conocida [Pi] y se le mide la seal S X+P, la concentracin original del analito y del
estndar cambian en la muestra problema. Llamaremos ([X F]) la concentracin final del analito y
[PF] la concentracin final del estndar despus de la disolucin. Tenga presente que las especies
qumicas X y P son las mismas. Por tanto,

SX

Xi
SX + P ( X F + PF )
(1)

Donde ([XF] = (ViX/Vf) [Xi] y [PF] = (ViP/Vf) [Pi]. ViX y ViP, representan los volmenes iniciales de la
muestra problema y de la disolucin patrn, respectivamente. V F representa el volumen final (V F =
ViX + ViP). De esta manera, se puede hallar [Xi] de la ecuacin (1).

2.4 ESTNDAR INTERNO

En este mtodo una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno) se aade tanto a las
disoluciones muestra problema como a las disoluciones de patrones. El estndar interno debe ser
una sustancia de naturaleza similar a la del analito, con una seal fcilmente medible y que no
interfiera con la respuesta del analito. Se determinan luego las respuestas del analito y del
estndar interno, y se calcula el cociente de las dos respuestas. De esta manera, s se vara algn
parmetro que afecte a las respuestas medidas, dichas respuestas (del analito y estndar interno)
se deben afectar por igual. Por tanto, el cociente de respuestas (del analito y del estndar interno)
depende solamente de la concentracin de analito. Una representacin de la relacin o cociente de
respuestas analito/estndar interno, como funcin de la concentracin del analito, proporciona una
grfica de calibracin (ver figura 3). Este mtodo se usa frecuentemente en cromatografa de gases
y absorcin atmica.
 Figura 3

3. Materiales y equipos

Nitrato de cobalto (II) hexahidratado (Co(NO 3)26H2O)

Agua destilada

1 Baln volumtrico de 50 ml

1 Bureta de 25 ml

5 Balones volumtricos de 25 ml

1 Gradilla con 6 tubos de ensayo

1 Espectrofotmetro UV/Vis

4. Procedimiento

4.1 Curva de calibracin

Preparar 50 ml de solucin de Co(NO3)26H2O 0,4 N.

Usando la bureta de 25 ml, transferir exactamente 2,5, 5,0, 7,5 y 10,0 ml de la solucin
anterior a cuatro matraces volumtricos de 25 ml y aforar con agua destilada. Calcular la
concentracin correspondiente a cada dilucin.

Determinar el espectro de absorcin (utilizando el espectrofotmetro UV-Vis) de una de las

anteriores disoluciones y agua destilada como blanco. Medir la absorbancia entre 300 y
 700 nm. Identificar la longitud de onda a la cual se presenta el mximo de absorcin de la
disolucin de cobalto.

Medir la absorbancia de todas las disoluciones y el agua destilada (blanco) a la mxima

longitud de onda determinada en el punto anterior. Registrar los datos obtenidos como
absorbancia vs concentracin.

Medir la absorbancia de la disolucin problema, a la mxima longitud de onda a la cual se

presenta el mximo de absorcin de de la solucin de cobalto.

4.2 Adiccin de estndares

Agregue a 4 tubos de ensayo, limpios y secos, 2 ml de la solucin problema.

Adicionar al segundo, tercero y cuarto tubo de ensayo, 1 ml, 2 ml y 3 ml de Co(NO 3)26H2O

0,4 N, respectivamente. Aforar todos los tubos hasta 5 ml con agua destilada. Agite el
contenido de cada uno de los tubos. Estimar la nueva concentracin del estndar en cada
uno de los tubos de ensayo.

Medir la absorbancia de todas las disoluciones anteriores y el agua destilada a la mxima

longitud de onda. Registrar los datos obtenidos como absorbancia vs concentracin
adicionada.

4.3 Adiccin de estndar (un solo punto)

Adicionar a 2 ml de la muestra problema, 2 ml de Co(NO 3)26H2O 0,4 N y aforar hasta 5 ml

con agua destilada. Estimar la concentracin del analito y del estndar en esta disolucin.

Medir la absorbancia de la disolucin anterior y de la muestra problema a la mxima

longitud de onda a la cual se presenta el mximo de absorcin de cobalto.

5. Cuestionario

1. Registre en la siguiente tabla, la concentracin (mg de Co/l) de la muestra problema

determinada por cada uno de los mtodos empleados.
 Tabla 1.

MTODO Curva de Adicin de Adicin de estndar (un

calibracin estndares solo punto)

CONCENTRACIN

(mg/l) de Co

2. Explique los resultados obtenidos en la tabla 2. Cul de estos mtodos, fue el mejor? Por
qu?.

3. Demuestre a partir de la ecuacin (1), que la concentracin de la muestra problema, est

dada por la siguiente expresin:

P V SX
X i ip

(VF SX + P - ViX SX )
i

Referencias

1. J. C. Miller y J. N. Miller. "Estadstica para Qumica Analtica". Ed. AddisonWesley

Iberoamericana (1993).

2. Daniel C. Harris, Anlisis Qumico Cuantitativo 2 ed., Ed. Reverte. Captulo 4.