Bioqumica inmunolgica

2. Las inmunoglobulinas. Estructura,

propiedades y funciones biolgicas.

- +
Protena (Densitometra)

Protenas
IgG
IgA Albmina
IgM
IgD

Movilidad electrofortica

Las inmunoglobulinas se encuentran en la regin de las gammaglobulinas

1
 Anticuerpos = inmunoglobulinas globulinas

Protenas de estructura globular sintetizadas por clulas del sistema inmune

(Linfocitos B y clulas plasmticas derivadas de ellos.
Presentes en la sangre (plasma) y otros fluidos biolgicos (saliva, lgrimas,
secrecin mucosa intestinal, lquido sinovial, lquido intersticial etc.)
En el plasma se detectan dentro de la fraccin de las globulinas.
Capaces de reconocer a otras molculas (antgenos) de manera muy especfica,
y formar complejos estables con ellos (inmunocomplejos).
Su aparicin en plasma forma parte de la respuesta inmunolgica adaptativa,
en lo que se conoce como respuesta humoral especfica.
Los anticuerpos tienen una vida media en el organismo relativamente larga
(varias semanas).
Constituyen una defensa muy eficaz contra agentes patgenos.

La estructura b
bsica de las inmunoglobulinas

Dos cadenas pesadas (50 KDa), idnticas entre s

N Dos cadenas ligeras (25 KDa), idnticas entre s
N

C Cadena pesada
C
Eje de
simetr
simetra
C
C
Las cadenas estn unidas por
uno o varios puentes disulfuro

N Glicoprotenas
Cadena ligera
N

2
 Tipos de inmunoglobulinas

Existen 5 tipos b
bsicos de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE.
Son sintetizadas por los linfocitos B (IgM, IgD) y por las clulas plasmticas
derivadas de ellos (IgG, IgA, IgE).
IgM e IgG se detectan principalmente en el plasma sanguneo y en el lquido
intersticial
Las IgA aparecen fundamentalmente en secreciones (saliva, lgrimas, secrecin
intestinal, etc.), recubriendo mucosas expuestas al ataque de agentes patgenos
externos.
La IgD es una inmunoglobulina asociada a la membrana de los linfocitos B. Su
funcin primaria de las es la de servir como detectores de antgenos para las
clulas B. Se detecta marginalmente en el plasma.
Las IgE son anticuerpos que, si bien inicialmente se liberan al plasma por las
clulas plasmticas, son integrados en la membrana de otras clulas (mastocitos),
participando en las reacciones de hipersensibilidad.

Caracter
Caractersticas estructurales Formas polimerizadas que aparecen en el hombre
Tipo Cadena
Cadena ligera (L) SC = Componente secretor (60.000 Da)
pesada
(MG 22.500) J = Protena de unin(J: join; 20.000 Da)
(H)
55.000 = =
SIgA

IgG =
SC

IgA SC SC
=
(SIgA)
SC

extended compact
IgM =

IgD =

IgE =

3
 Inmunoglobulinas monomricas

En soluci
solucin en el
plasma y otros
fluidos biol
biolgicos

Asociadas a
membrana de Asociada a membrana
linfocitos B de las c
clulas cebadas

Inmunoglobulinas multimricas

4
 Estructura tridimensional de la Inmunoglobulina G
Cadena ligera Cadena ligera

Cadena pesada
Cadena pesada

Polisacrido

Estructura en dominios de las inmunoglobulinas

Regi
Regin
variable

Regi
Regin
constante

Dos dominios variables (VH, VL) y cuatro

dominios constantes (CL, CH1, CH2, CH3)

5
 Reconocimiento antgeno-anticuerpo

Identificaci
Identificacin del dominio de 2 x Fab
uni
unin a los ant
antgenos

Digestin con
papana
Fc

F(ab)2
Digestin con
bromelana

Fab, F(ab)2: antigen binding fragment: zona de unin a antgenos

Fab, F(ab)
Fc: crystaline fragment: zona constante que interacciona con
Fc:
receptores celulares

6
 Experimento que permiti
permiti visualizar
visualizar las estructuras de los
complejos ant
antgeno anticuerpo

Molcula orgnica de pequeo tamao (antgeno), que es

administrado a un conejo con el fin de producir anticuerpos
especficos contra l

Anticuerpos que reconocen a la molcula orgnica

Sntesis qumica de una molcula que contiene dos veces

el mismo determinante antgenico

Estructuras que se observan al microscopio electr

electrnico al incubar
ant
antgenos y anticuerpos

Antgeno con dos determinantes

+ antignicos iguales

7
Los anticuerpos muestran una extraordinaria especificidad por los
los ant
antgenos...

Radical ( R ) sulfonato arsenato carboxilato

Tipo de
antgeno

Respuesta que se obtiene cuando se evala la respuesta de Igs producidas

al inmunizar con cido 3-aminobenzeno sulfnico, frente a anlogos

Los anticuerpos muestran una extraordinaria especificidad por los

los ant
antgenos...

8
 Por qu son tan especficos los anticuerpos...?

1) Porque el antgeno encaja en el locus de reconocimiento del anticuerpo

El reconocimiento del antgeno por el anticuerpo tiene lugar en un locus

especfico constituido por los extremos de la cadena ligera y pesada, en la que
encaja el antgeno y que permite se ponga de manifiesto toda una serie de
fuerzas que mantendrn unidos antgeno y anticuerpo. La zona de
reconocimiento por parte del Ac es de tamao limitado (10 aa)

9
2) El reconocimiento eficaz (y con ello la especificidad) se basan en que
exista entre antgeno y anticuerpo una interaccin tal que las fuerzas de
atraccin superen a las de repulsin, de manera que el complejo que se forme
sea estable

Inmunocomplejo Inmunocomplejo no
estable si estable si
atraccin > repulsin atraccin < repulsin

Qu
Qu fuerzas mantienen juntos al ant
antgeno y a los anticuerpos?

10
 Distancia relativa a la que act
actan estas fuerzas

Puentes hidr
hidrgeno

Electrost
Electrostticas

Van der Waals

Hidrof
Hidrofbicas

La interacci
interaccin entre ant
antgeno y anticuerpo es un equilibrio qu
qumico
al que puede aplicarse la Ley de Acci
Accin de Masas

Las constantes de afinidad son del orden de 1010

11
Cuando el anticuerpo es multivalente, la Ke global puede ser mayor que la del
fragmento Fab; de esta manera, incluso con una afinidad baja, una IgM puede ser
eficaz para unirse a antgenos.

Reacciones de precipitacin
antgeno-anticuerpo

12
Ant
Antgenos: mol
molculas capaces de provocar una respuesta del sistema inmune,
Si la respuesta es de tipo humoral
humoral resultar
resultar en la producci
produccin de anticuerpos
contra l

Cuando el ant
antgeno es grande, el anticuerpo solo
puede reconocer una parte de l (determinante
(determinante
antig
antignico o epitopo)
epitopo)

La naturaleza de los inmunocomplejos formados depende

de la proporcin relativa de antgeno y de anticuerpo

1. En exceso de anticuerpo se forman

inmunocomplejos de tama
tamao moderado

2. En exceso de ant
antgeno, los inmunocomplejos
son tambi
tambin de tama
tamao moderado

3. Cuando ant
antgeno y anticuerpo se encuentran en
una proporci
proporcin adecuada,los complejos
formados son de gran tama
tamao, y por tanto
insolubles

13
Inmunoprecipitaci
Inmunoprecipitacin: Las concentraciones relativas de anticuerpo y de ant
antgeno
influyen en el tama
tamao de los complejos ant
antgeno-
geno-anticuerpo que se forman.

exceso de anticuerpo (no se forma precipitado)

precipitado visible
cantidad de precipitado

exceso de ant
antgeno (no se forma precipitado)

punto de equivalencia

cantidad de antgeno aadida a una cantidad fija de anticuerpo

Mtodos analticos basados en la inmunoprecipitacin

Cualitativos:
Doble inmunodifusi
inmunodifusin
Inmunoelectroforesis en contracorriente

Cuantitativos
Inmunodifusi
Inmunodifusin radial
Inmunoelectroforesis rocket

14
Fundamento de la doble
inmunodifusin

Antgeno Anticuerpo

Inmunoprecipitado

15
 Inmunodifusin radial

Patr
Patrn 4
Patr
Patrn 3
Problema

Patr
Patrn 2

Patr
Patrn 1 Patr
Patrn 5

Inmunoelectroforesis

+ -
contracorriente

+
rocket

16
 Funciones biolgicas de los
anticuerpos

Principales funciones efectoras de los anticuerpos:

3. Fijacin y activacin
1. Neutralizacin 2. Opsonizacin
del complemento

17
1. Neutralizacin:

Toxinas Bacterias Virus

Aglutinndolas y
bloqueando su movilidad

Anticuerpos neutralizantes,
Anticuerpos neutralizantes que bloquean su infectividad

2. Opsonizacin: facilitan la fagocitosis

Las bacterias que poseen

cpsula o envoltorio se
resisten a ser fagocitadas
por los neutrfilos
La unin de anticuerpos a la
cpside bacteriana permite se
una al anticuerpo (regin Fc) la
protena del complemento C3b

18
Las bacterias as
sealizadas son La generacin de especies
fagocitadas por los reactivas de O2 en el
neutrfilos e interior del fagolisosoma
incorporadas a los lleva a la destruccin de la
fagolisosomas bacteria

Generacin de ROS por sistemas

enzimticos (NADPH oxidasa)
que reducen el O2

Fagocitosis de bacterias

19
3. Fijacin y activacin del complemento:

C3

C3b C5

C5a

C5b

Lisis de un paramecio mediada por anticuerpos y complemento

20
 Principales funciones efectoras de los anticuerpos
IgG

Distribucin de las inmunoglobulinas en el organismo

IgM

IgA

IgG, IgE

21
Abundancia relativa de las inmunoglobulinas en el plasma humano

IgA
210mg/100ml
IgM
IgG 150mg/100ml
1250mg/100ml

IgE IgD
0,03mg/100ml 3mg/100ml

IgG 1000-
1000-1500 mg/dl
mg/dl
IgA 250-
250-300 mg/dl
mg/dl
IgM 100-
100-150 mg/dl
mg/dl
IgD 0,3-
0,3-30 mg/dl
mg/dl
IgE 1,5-
1,5-200 g/dl

Extravasaci
Extravasacin de las inmunoglobulinas a otros fluidos biol
biolgicos

Transporte a
trav
travs de epitelios

Transporte a
trav
travs de placenta

Difusi
Difusin al espacio
extravasal

22
 Transporte de
las IgA a trav
travs
de epitelios
IgA
Receptor
poli-Ig

Componente
secretor

IgA secretada

Vescula
de transporte

Superficie Superficie
luminal luminal

23