UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

FARMACIA Y BIOQUMICA

Determinacin de Calcio en Berberis

flexuosa R, & P. Ayrampo por
espectroscopa de absorcin atmica

INTEGRANTES:
Gutirrez Serrano, David Gustavo
Haro Calvo, Jorge Andr
Salvador Villanueva, Magaly Ljubisa
Terrazos Ramos, Shelby Akira

DOCENTE: Mg. Norma Anglica Carlos Casas

AO: 2 (4 ciclo)

2015
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 NDICE

INTRODUCCIN3

MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS..5

Materiales

Equipos

Reactivos

METODOLOGA.6

Soluciones estndar

Preparacin de la muestra

Determinacin

Clculo

OTRA METODOLOGA.7

Preparacin de estndar y curva de Calibracin

Digestin de la muestra

Determinacin

PARTE EXPERIMENTAL..9

RESULTADOS..12

DISCUSIONES..14

CONCLUSIONES.....15

BIBLIOGRAFA..16

ANEXOS....17

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 INTRODUCCIN

La espectroscopia de absorcin atmica es una tcnica cuya introduccin al anlisis

quimico es relativamente reciente. Arranca de 1955, con los trabajos del cientfico
australiano A. Walsh y su comunicacin titulada Aplicacin de la espectroscopia de
absorcin atmica al anlisis qumico. Sin embargo, en otro aspecto, se podra decir
que la absorcin atmica ha sido conocida ya desde hace tiempo. Las lneas oscuras
del espectro solar fueron observadas en la fecha ya lejana del 1802, y estudiadas por
Joseph Fraunhofer en 1814, por lo que han sido denominadas rayas de Fraunhofer.
Se originan a casa de la absorcin de la luz de ciertas longitudes de onda por los
tomos presentes en la atmosfera solar, que es relativamente fra con respecto al
centro del Sol, de temperatura muchsimo ms elevada, de donde procede la mayor
parte de la luz solar. Desde luego, esta explicacin fue dada mucho despus de los
tiempos de Fraunhofer.

La proporcin de tomos excitados respecto a los que permanecen en estado

fundamental es muy baja incluso para aquellos elementos excitables a temperaturas
relativamente bajas, tales como el sodio o el potasio, en los que la proporcin de
tomos excitados es nicamente de un 1%.

La espectroscopia de absorcin atmica es un mtodo para la deteccin y la

determinacin de elementos qumicos, particularmente de elementos metlicos. Los
compuestos, para su examen, se tienen que romper en los tomos que los
constituyen. Ello se realiza por pulverizacin en una llama a alta temperatura. Un rayo
luminoso de una cierta longitud de onda, producido por un tipo especial de lmpara, se
dirige a lo largo del eje longitudinal de una llama plana y hacia un espectrofotmetro.
Simultneamente, la solucin de la muestra es aspirada hacia el interior de la llama.
Antes de entrar en esta, la solucin es dispersada formando una niebla de gotitas muy
finas, que se evaporan en la llamada dando inicialmente la sal seca y luego el vapor
de la sal, el cual se disocia, por lo menos en parte, en tomos del elemento que se
desea determinar.

Cuando un conjunto de tomos es expuesto a una fuente de energa, nicamente una

parte de estos sufre un proceso de absorcin de dicha energa y, por consiguiente, de
excitacin. La relacin existente entre el nmero de tomos que permanece en estado
fundamental es funcin de la temperatura.

La espectroscopia de absorcin atmica permite cuantificar indirectamente la fraccin

de tomos no excitada. Para ello, los tomos presentes en una muestra son sometidos
a una fuente de radiacin electromagntica de la longitud de onda deseada, y que es
caracterstica del elemento que se desea medir. Los tomos de la muestra que se
hallan en estado fundamental absorben una cantidad de esta energa directamente

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proporcional a su concentracin. Posteriormente, se recoge la potencia radiante de la
radiacin electromagntica que emerge de la muestra, es decir, que no ha sido
absorbida por ella, y se resta de la que fue suministrada inicialmente por la fuente, la
diferencia entre las potencias radiantes de la radiacin electromagntica que entra y
sale de la muestra, es decir, la potencia radiante absorbida por dicha muestra, es
directamente proporcional al nmero de tomos presentes en esta.

La espectroscopia de absorcin atmica est fundamentada en la cuantificacin de la

radiacin que es absorbida por la muestra, dependiente de una mayor proporcin de
tomos; aquellos que estaban presentes en estado fundamental.

Para un cambio de nivel energtico dado en un cierto elemento, la cantidad de energa

que es absorbida o emitida al efectuarse dicho cambio de nivel es la misma, y se
corresponder con una radiacin electromagntica de igual longitud de onda. Por
tanto, la radiacin electromagntica que se hace llegar a la muestra a medir debe ser
de una longitud de onda especfica. Esta lnea corresponder con la de la longitud de
onda de la radiacin electromagntica que emite un tomo excitado del elemento que
desea medirse cuando habiendo previamente adquirido una cierta cantidad de
energa retorna al estado fundamental. La radiacin electromagntica
correspondiente a la energa que se absorbe para pasar al mismo estado excitado
ser tambin de la misma longitud de onda.

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MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

Materiales

Crisoles de porcelana con tapa.

Matraz aforado 25,50,100 mL

Matraz aforado 1 L

Pipeta aforada 5 mL, 10 mL y 50 mL

Envase plstico transparente de 60 y 250 mL.

Envase de vidrio mbar de 1 L.

Equipos

Balanza analtica, 0.1 mg.

Espectrofotmetro de Absorcin Atmica

Lmparas de ctodo hueco de Calcio (Ca) compatible con equipo EAA.

Mufla con rango de temperatura 100-1000 C +/- 10C.

Placa calefactora.

Campana extractora de gases

Reactivos

Solucin estndar stock comercial de Calcio, 1000 mg/L, certificada.

Gases calidad AAS: Acetileno 99.99%, Oxido nitroso 99.99%.

Agua grado desionizada,.

cido ntrico (HNO3)

cido clorhdrico (HCl)

Cloruro de lantano (LaCl3).

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METODOLOGA
Segn AOAC , en el caso de determinar metales(Ca, Cu, Fe, Mg,Mn, K, Zn) en plantas
mediante la tcnica instrumental de espectroscopa de absorcin atmica, deben
realizarse los siguientes pasos:

Soluciones estndar.

Solucin madre.Se disuelve 1.249 gramos de CaCO3 en una cantidad mnima de HCl
3 N. Diluir a 1 L. Luego diluir 50 ml en 1 L. Se obtendr 25 ug Ca/ml.

Preparar soluciones que contengan 0,5,10,15 y 20 ug Ca/ml y que contengan 1 % La.

Agregar 0,5,10,15 y 20 ml de solucin madre. Agregar 5 ml de solucin madre de La y
diluir a 25 ml.

Preparacin de la muestra

Incineracin de las cenizas. Pesar con precisin 1 g de la muestra seca y moler en

crisol de porcelana. Colocar en una mufla a 500 C por 2 horas y dejar enfriar. Mojar
las cenizas con 10 gotas de H2O y aadir cuidadosamente 3- 4 ml HNO3(1+1).
Evaporar el exceso de HNO3 en un juego de placas a 100-120 C. Colocar las
cenizas en un crisol y de vuelta en el horno por una hora a 500 C. Enfriar el crisol,
disolver las cenizas en 10 ml de HCl(1+1) y transferir a un matraz de 50 ml.

DETERMINACIN

Para la solucin de 50 ml
adicionar 10 ml 5% solucin La y
diluir .Deja que se asiente slice,
sobrenadante decante, y proceder
Hacer diluciones necesarias con
HCl al 10% para obtener
soluciones dentro de los rangos
del instrumento.

CLCULO

ppm element = ug/ml x F/g muestra

% elemento = ppm x

F= (dilucin original ml x dilucin final ml)/ alcuota ml si es que los 50 ml originales se

diluyen)

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OTRA METODOLOGA
En primer lugar, se obtiene la solucin de cloruro de lantano de la siguiente manera:
(LaCl3, 1% p/v): Pesar 11,7 g (+/- 100mg) de La2O3 y llevar a un matraz aforado de 1
L, agregar un poco de agua grado desionizada para disolver el polvo, agregar bajo
campana lentamente 50 mL de HCl 37% (Precaucin:Reaccin exotrmica!). Agitar
suavemente, hasta disolver todo el reactivo y luego aforar con agua grado
desionizada. Estable 6 meses a temperatura ambiente

Preparacin de estndares y curva de Calibracin:

Preparar a lo menos 3 soluciones de trabajo entre el rango de 0,2 a 2,00 mg/L del
analito a determinar.

Tomar los volmenes de las soluciones detalladas en la tabla correspondiente segn

analito a cuantificar, agitar y llevar a matraces de 100 mL aforar con HNO3 1M.Agitar
para homogeneizar bien.

Digestin de la muestra:

Moler y homogeneizar la muestra.

Para tratamiento en Mufla: Pesar en un crisol entre + 1 a + 3 g de muestra

dependiendo de la concentracin esperada del o los analitos. Registrar el peso.

Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora, estufa o mufla a 100C
por 30 minutos.

Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 525 C por un periodo de 3 a 5

hrs.(< 8 hrs.), hasta obtener cenizas blancas y proceder de acuerdo al siguiente punto.
De obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 mL
aproximadamente de HNO3 65%, colocar el crisol destapado en placa calefactora a
unos 100C, hasta evaporar. (realizar procedimiento bajo campana extractora de
gases). Luego llevar nuevamente mufla a 525C por 1 a 2 hrs. hasta cenizas blancas.

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Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HNO3 1 M en placa
calefactor calentando de 3 a 5 minutos, cuantitativamente llevar el licor de cenizas a
un matraz aforado de 25 mL, a travs de lavados sucesivos con porciones de
alrededor de 3 mL de HNO3 1 M. Agregar al matraz: a) para determinacin de Calcio
2,5 mL de LaCl3. La solucin est lista para ser cuantificada. De ser necesario, diluir
con HNO3 1M para ajustar en el rango lineal.

Aspirar las soluciones estndares de la curva de calibracin en orden creciente por el

capilar del quemador y leer en E.A.A. Para realizar la calibracin se deben usar a lo
menos 3 estndares y un blanco. El coeficiente de correlacin de la curva de regresin
lineal o cuadrtica debe ser > 0,99.

Las lecturas son obtenidas por interpolacin desde la curva de calibracin y estn
expresados en mg/L del analito correspondiente.

DETERMINACIN

mg/Kg del analito = L x 25 x F.D./P

L: Lectura de la concentracin en mg/L obtenida por la interpolacin de la curva de

calibracin.

FD: Factor de dilucin. En caso de no realizar ninguna dilucin, es igual a 1.

P: Peso de la muestra en gramos

Los resultados obtenidos se expresan en muestras slidas mg/Kg o en muestras

lquidas mg/L. Tambin es posible informar en mg/100 g mg/L

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PARTE EXPERIMENTAL

Fig 1. Equipo de absorcin atmica Perking Elmer

Se realizaron 4 diluciones de Ca utilizadas como muestra estndar en fiolas de 100 ml

y una solucin en blanco .Las diluciones contenan respectivamente 0,5; 1; 2 y 4 ppm
de calcio.

Fig 2. Soluciones estndar de calcio y solucin

blanco.blanco
A la muestra problema se le agreg unos ml de LaCl3 0,1 % y HCl 1%.

Fig 3. Preparacin de la muestra

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Antes de proceder a la lectura correspondiente, se colocan los datos necesarios en el
software del equipo, para que el espectrmetro de absorcin atmica funcione de la
manera adecuada.

Fig 4. Caracterizacin del equipo

Se procede a la lectura del estndar 1, es decir de la muestra que contiene 0,5 ppm de
calcio, obtenindose una absorbancia de 0,010.

Fig 5. Lectura del estndar 1

Luego se realiza el mismo procedimiento con el estndar 2, es decir la muestra que

contiene 1 ppm de calcio, obtenindose una absorbancia de 0,019.

Fig 6.Lectura del estndar 2

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Posteriormente con el estndar 3, que contiene 2 ppm de calcio, la lectura dicta un
valor de absorbancia de 0,035.

Fig 7. Lectura del estndar 3

Finalmente en el caso del estndar 4 que contiene 4 ppm de calcio, el valor de la

absorbancia fue de 0,072.

Fig 8. Lectura del estndar 4

Con la ayuda de los datos obtenidos, es posible expresar estos en una curva de
calibracin, que permitir conocer la concentracin exacta de calcio en la muestra de
acuerdo a la absorbancia que lea el instrumento.

Fig 9. Curva de calibracin

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RESULTADOS
De los datos de absorbancia y concentracin se elabora la curva de calibracin

Concentracin [ ] ppm Absorbancia

0.5 0.01

1 0.019

2 0.035

4 0.072

A vs. C
0.08
y = 0.0177x + 0.0009
0.07
R = 0.9991
0.06
ABSORBANCIA

0.05

0.04
Series1
0.03
Lineal (Series1)
0.02

0.01

0
0 1 2 3 4 5
CONCENTRACION(ppm)

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X Y X2 Y2 XY

0,5 0,01 0,25 10-4 5x10-3

1 0,019 1 3,61x10-4 0,019

2 0,035 4 1,225x10-3 0,07

4 0,072 16 5,184x10-3 0,288

= 7,5 = 0,136 = 21,25 = 6,87x10-3 = 0,382

Para validar la grfica se emplea el mtodo de mnimos cuadrados

( ) ( )( ) ( )( ) ( )( )
m= ( ) (
b= ( ) (
) )

m= 0,0176 b=8,695x10-4

Por ajuste de mnimos cuadrados se obtuvo la siguiente ecuacin

y=0,0176x + (8,695)(10-4)

A partir de esta ecuacin calculamos la concentracin de calcio en la muestra

problema

La absorbancia de la muestra problema fue 0,012, reemplazando

0,012=0,0176x+ (8,695)(10-4)

x=0,632 mg/L

Pero como se diluyo la muestra a 50ml, entonces

Cmp=0,632x50=31,6mg/L o 3,16 mg/100ml

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DISCUSIONES

La espectroscopia por absorcin atmica requiere de soluciones estndares para

llevar a cabo el resultado1, en nuestro trabajo se determin la concentracin de calcio
en muestra etanolica de Ayrampo (Berberis flexuosa) el mtodo para llevar a cabo
procedimiento se describe en la AOAC2, as como para la determinacin de calcio
existe un mtodo , en la determinacin de plomo en el agua potable tiene otro mtodo
donde se utiliza un estndar de plomo (II) acetato 3- Hidrato Pb (CH3COO)2.3H2O con
una concentracin de 1000 mg/L 0,02. Se toman cinco mililitros de dicho estndar y
llevndolos a 500 ml, agregando posteriormente 2 ml de cido Ntrico concentrado, de
esta manera la solucin madre presenta una concentracin de 10 ppm3 , en el
procedimiento hecho por CENPROFARMA las muestras se tratan en ppm siendo que
para muestras de volumen 1 a 2ml se deberan trabajar con muestras en ppb 4. Se
encontr que la muestra analizada presentaba 3,25mg de calcio por cada 100ml,
trabajos anteriores detallan una concentracin ms elevada pero como se trabaj con
una alcuota del extracto la relacin existente de calcio es la correcta. Segn Harold
Walton, generalmente, los metales disueltos en disolventes orgnicos presentan
mucha mayor absorcin en la llama de la que dan en solucin acuosa. Una causa de
este efecto es la mayor temperatura de la llama, pues as como el agua, aspirada en
una llama, la enfra, un disolvente orgnico combustible hace que la llama sea ms
caliente. Otra causa es que muchos disolventes orgnicos tienen una tensin
superficial ms baja que el agua, por lo que la solucin aspirada se dispersa ms
fcilmente en gotitas finas. El disolvente puede tambin ser menos viscoso que el
agua y afluir ms rpidamente al quemador. Para correlacionar la absorcin con la
concentracin en disolventes no acuosos conviene preparar soluciones patrn de las
sales metlicas en dichos disolventes.5
La causa ms comn de interferencias es la presencia en la muestra de aniones que
forman con el analito compuestos poco voltiles, que disminuyen por tanto el grado de
atomizacin. Un ejemplo es la interferencia provocada por el PO43- en la determinacin
de Ca, pues forma fosfato clcico que es poco voltil a la temperatura de la llama. Un
modo de eliminar esta interferencia es aadiendo a la muestra un agente liberador de
manera que el fosfato reaccione preferentemente con l, en lugar de con el Ca. Como
agente liberador, en este caso, se puede aadir La (III). Finalmente habr que procurar
que las disoluciones de muestras y de los patrones tengan una composicin lo ms
parecida posible, pues de lo contrario poda haber variaciones en la velocidad de
aspiracin y en la temperatura de la llama, provocando errores en las medidas.6

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 CONCLUSIONES

Se determin la cantidad de Calcio presente en la especie Berberis flexuosa R,

& P. Ayrampo, resultando 3,25 mg Ca por 100 ml del extracto etanlico,
donde se escogi el fruto de la especie como muestra de estudio.

Se pudo conocer la instrumentacin y la metodologa aplicada en la

espectroscopa de absorcin atmica, la cual se aplic en nuestra muestra
etanlica lquida de Berberis flexuosa R, & P. Ayrampo .

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BIBLIOGRAFA

1. Harris, D. Anlisis qumico cuantitativo. 3ra ed. Espaa: REVERTE; 2007.pp-438

2. AOAC.Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists,

Washington D.C.2000

3. Ospina, Zapata. Validacin de la Metodologa de la deteccin de los metales niquel,

plomo, cadmio en agua tratada por absorcin atmica de llama en el laboratorio de
anlisis de agua y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira. (Tesis
Doctoral). Colombia: Universidad Tecnolgica de Pereira; 2012

4. Skoog D, Holler F, Crouch S. Principios de Anlisis Instrumental. 6 ed. Mxico:

Cengage Learning; 2008

5. Frederic W. Anlisis qumico e instrumental moderno. Editorial Reverte. Espaa.

1983 .Pg 253-254

6. Miones. Manual de tcnicas instrumentales espectrofotometras. 1era ed.

Barcelona. Editorial Crculo Universo: 1978

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ANEXOS

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18
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