LISTERIA MONOCYTOGENES

MICROORGANISMO: Bacilo Gram-positivo corto, no esporulado, anaerobio facultativo mvil. Se

conocen 4 tipos antignicos (1 a 4), siendo los serotipos 1 y 4 los ms frecuentes.
Es capaz de producir biofilm en alimentos, crece a temperaturas de refrigeracin, siendo su
temperatura ptima de 25 a 37C, resiste condiciones adversas de ph (6-8) y altas concentraciones
de NaCl (Morn, 2013)(Picazo de la Graza & Prieto, 2016).
Microorganismo implicado en ETAs (listeriosis).

Listeriosis

Enfermedad causada por el consumo de

alimentos contaminados con Listeria
monocytogenes

Sntomas: Contaminante comn de

Afecta alimentos frescos y
principalmente a Adultos sanos: Puede ser aislada procesados, de origen
mujeres gastroenteritis con de suelo, agua, animal y vegetal (hortalizas),
embarazadas fiebre, dolor de vegetales y leche y lcteos no
(abortos, parto cabeza, malestar contenido fecal de pasteurizados, carne de
prematuro), RNs y estomacal y vmitos. una amplia gama vaca, cerdo y aves,
hospederos Mujeres embarazadas de animales. embutidos ahumados o
inmunodeprimidos. causa aborto o parto fermentados y pescados
prematuro. ahumados.

(Callejo et al., 2012)(Picazo de la Graza & Prieto, 2016)

DETECCIN E IDENTIFICACIN
Generalmente se utilizan mtodos de cultivo, con aislamiento e identificacin, sin embargo, stos
son lentos, por lo que tratan de sustituirse por mtodos moleculares por PCR (Romeral, 2014).
Para su aislamiento se requiere de muestras de sangre, LCR, lquido amnitico, tejidos
materno/fetales, secrecin cervical o vaginal (Callejo et al., 2012) (Morn, 2013).
Para su identificacin, al frotis se observa como bacilos Gram-positivos cortos (Figura 1), que crece
con facilidad en medios enriquecidos con sangre de cordero, tras 18 a 24 horas de incubacin en
aerobiosis. Las colonias son pequeas, blanco grisceas y presentan hemolisis que excede
escasamente el borde de la colonia (Figura 2); puede ser confundida con Streptococcus agalactiae
(Morn, 2013).

Figura 1. Tincin de Gram (Morn, 2013) Figura 2. Colonias en agar sangre (Morn, 2013)
 Flujograma Listeria monocytogenes

Listeria
monocytogenes

Sangre
LCR
Lquido amnitico Tincin de Gram
Muestras Frotis
Tejidos (40x)
materno/fetales
Secrecin cervical o
Bacilos Gram-
vaginal.
Medios de cultivo positivos cortos

Agar sangre Agar tripticasa soya

Siembra en estra Siembra en estra

18-24h 35-37C 35-37C
Aerobiosis 18-24h
Colonias blanco grisceas
Hemlisis
Pruebas bioqumicas

Catalasa (+) Oxidasa (-) Motilidad (+) Hidrlisis de esculina (+) Hemlisis (+)

Fermentacin de glucosa, maltosa Reduccin de nitratos a Prueba de CAMP

y ramnosa (+); xilosa manitol (-) nitritos (-) (+)

Pruebas de sensibilidad

Sensible: penicilina, ampicilina, amino- Resistente: macrlidos y

glucsidos, eritromicina, rifampicina, tetraciclinas
tetraciclina, cotrimoxazol, vancomicina
e imipenemcilastatina
(Morn, 2013) (ISP, 2012)
MEDIOS DE CULTIVO

La sangre ovina, permite el crecimiento de

Uso: Medio de cultivo utilizado microorganismos nutricionalmente exigentes y
para el aislamiento. la clara visualizacin de reacciones de
hemlisis.

Fundamento :
Agar sangre

La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor

nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos,
an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico y el agar es el agente solidificante. El agregado de 5-10 % sangre
ovina desfibrinada estril (Britas-heep promueve el desarrollo de bacterias
exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observacin de las
reacciones de hemlisis.

El agregado de sangre, permite el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y

Tripteina Soya Agar (TSA)

anaerobios facultativos estrictos nutricionalmente exigentes y la observacin de

reacciones de hemlisis.
Este medio puede utilizarse como media base para preparar el medio agar chocolate.

Fundamento:
La triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos, aminocidos
libres, bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya aporta
tambin carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos microorganismos. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Adicionado con 5-10 % sangre , se logra un medio enriquecido y adecuado para
observar reacciones de hemlisis.

(Picazo de la Garza & Prieto, 2016)

PERFIL BIOQUMICO CONVENCIONAL

Las pruebas convencionales para su identificacin son: tincin de Gram, reaccin de catalasa (+),
oxidasa (-), hidrlisis de esculina (+) que puede demostrarse en el agar bilis esculina (Figura 3),
dado que es capaz de crecer en bilis al 40%, fermentacin de glucosa y maltosa (Morn, 2013)

Tincin Gram: frotis, se observa bacilos cortos Gram positivos, no esporulado (ISP, 2013).
Motilidad: Picar colonias tpicas, formar una suspensin usando solucin salina al 0,85%,
emulsionar bien y observar al microscopio con objetivo de inmersin de fase de contraste.
Observar: bastones delgados cortos, con suave rotacin (ISP, 2012).
Movilidad: Inocular agar SIM o MTM e incubar por 7 das a temperatura ambiente.
Observar diariamente un crecimiento en paraguas (Figura 4) (ISP, 2012).
 Catalasa: En un tubo estril agregar 0,3 mL de perxido de hidrgeno al 3% y suspender una
colonia con aplicador de madera o asa de platino (ISP, 2012).
Observar la formacin de burbujas indica prueba positiva.
Fermentacin de carbohidratos: Inocular caldo base de prpura de bromocresol con 0,5% de
carbohidrato (campanas Durham, opcional): dextrosa, esculina, maltosa, ramnosa, manitol y
xilosa. Incubar por 7 das a 35C (ISP, 2012)(Morn, 2013).
Observar la produccin de cido sin gas. Todas las especies son positivas a dextrosa, esculina
y matosa. Listeria Monocytogenes es manitol negativo, ramnosa positiva y xilosa negativa.
Hemlisis: Preparar placas de agar sangre de cordero al 5% secas, inocular e incubar por 24-
48 h. Observar las placas con luz brillante y evidenciar la presencia de hemlisis. Listeria
Monocytogenes presenta una suave hemlisis (- hemlisis). Al contrario Listeria ivanovii,
presenta una hemlisis fuerte e intensa y Listeria innocua no presenta hemlisis (ISP, 2012).
Prueba de reduccin nitratos a nitritos: (opcional) Inocular en caldo nitrato e incubar por 5
das a 35C. Agregar 0,2 mL del reactivo de naftilamaina y del cido sulfanlico. Observar la
formacin anillo rojo, reaccin positiva. Listeria monocytogenes no reduce nitratos a nitritos.
Prueba de CAMP: Esta prueba es til cuando las hemlisis son dudosas. Para realizar la
prueba inocular por estra una cepa de S. aureus - hemoltico y en paralelo y
diametralmente opuesto una cepa de Rhodococcus equi en un aplaca de agar sangre de
cordero. Siembre por estra varios cultivos de ensayo en paralelo. Incube a 35 C por 24-48h.
Observar las reacciones hemolticas de L. Monocytogenes que se incrementan en la zona
influenciada por la hemlisis de S. aureus (Figura 5 y 6) (ISP, 2012).

Figura 3. Hidrlisis de esculina. Figura 4. Prueba de movilidad a 25C

Figura 5. Prueba CAMP Figura 6. Prueba CAMP positiva

KIST COMERIALES
Sistema API listeria: La galera bioqumicas API es un sistema estandarizado para la identificacin
de Listeria que utiliza ensayos miniaturizados, as como una base de datos especfica (ISP, 2012).
Se basan en las propiedades enzimticas que contienen el microorganismo y su actuar en los
substratos deshidratados que permite que sean convertidos en productos metablicos finales los
cuales son detectados por el sistema al producir un cambio visible de color (ISP, 2012).
Estos kits son capaces de identificar el gnero pero presentan dificultad para diferenciarla de L.
innocua (Jadhav, Bhave & Palombo, 2012) (Morn, 2013).

Figura 7. Resultados sistema API listeria

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD
Listeria monocytogenes tiene un patrn de susceptibilidad estable, generalmente es sensible a
penicilina, ampicilina, amino-glucsidos, eritromicina, rifampicina, tetraciclina, cotrimoxazol,
vancomicina e imipenemcilastatina. Las cefalosporinas son inefectivas in vivo, y hay resistencia
mediada por plsmidos a macrlidos y tetraciclinas. Para testeo de sensibilidad, el CSLI
recomienda efectuar microdilucin en caldo. Estn estandarizados los puntos corte para
penicilina, ampicilina y cotrimoxazol (Morn, 2013).
Procedimiento:

Prueba de Lmpara de alcohol Poner tubo estril

Esterilizar la pinza
Sensibilidad siempre (enfriar)

Cartulina negra con

Hisopo o asa rayas blancas o
Coloco en solucin
calibrada toco la Homogenizar visceversa comparo
salina estril
muestra con el patrn 0,5
Macfarland

Pinza colocar los

Sembrar a 45 en
Homogenizar Esperar 3-5min antibiticos (22mm
tres cuadrantes
de distancia

(ISP, 2012)
BIBLIOGRAFA

Callejo, R; Prieto, M; Martnez, C; Aguerre, L. Rocca, F & Martnez, G. (2012). Aislamiento,

identificacin y caracterizacin de Listeria monocytgenes. Disponible:
http://bvs.panalimentos.org/local/File/Manual_Listeria_monocytogenes_2012.pdf
ISP. (2012). Procedimiento para identificacin bioqumica de cepas de Listeria
monocytogenes. Instituto de Salud Pblica: Gobierno de Chile. Disponible:
http://www.ispch.cl/lab_amb/met_analitico/2_6_12/microbiologia/PRT-086.pdf
Jadhav, S; Bhave, M & Palombo, E. (2012). Methods used for the detection and subtyping
of Listeria monocytogenes. Journal of Microbiological Methods; 88 (3): 327-341. Doi
10.1016/j.mimet.2012.01.002
Morn, Bernarda. (2013). Listeria monocytogenes. Rev Chil Infect; 25 (5): 350. ISSN 0716-
1018. Doi 10.4067/S0716-10182013000500005
Romeral, M. (2014). Listeria monocytogenes- Cultivo y diagnstico. Disponible:
http://www.ivami.com/es/microbiologia-clinica/listeria-monocytogenes-i-cultivo-diagnostico-
molecular-pcr
Picazo de la Garza, J.J; Prieto, J. (2016). Compendio de microbiologa: Bacterias aerobias
positivas, Listeria. Elsevier Espaa, segunda ed. 105p. ISBN 978