HISTORIA EVOLUTIVA DE CHAETOGNATHA INFIERE DE LOS DATOS MORFOLGICOS Y MOLECULARES: UN ESTUDIO DE CASO PARA LA

SIMPLIFICACIN PLAN CORPORAL

Samah Gasmi ,
Gabriel Nve ,
Nicolas Pech ,
Sada Tekaya ,
Andr Gilles y
Yvan Prez autor de correo electrnico
Fondo
Chaetognatha son un filo de animales carnvoros marinos que incluye ms de 130 especies existentes. La sistemtica interna
de este grupo se han debatido intensamente desde que fue descubierto en la 18 siglo. Mientras que se remontan a la
anterior Cmbrico, que son un filo extraordinariamente homognea a nivel morfolgico - una caracterstica fascinante que
desconcert a muchos cientficos que ha tratado de aclarar su taxonoma. Estudios recientes que han tratado de reconstruir
una filogenia molecular a partir de datos se han basado en un nico gen y analiza una muestra taxn ms bien limitado. A
continuacin, presentamos el primer estudio a gran escala filogentica de Chaetognatha basado en un anlisis combinado de
cerca de los genes completos ARN ribosomal (ARNr). Utilizamos este anlisis para inferir la evolucin de algunos caracteres
morfolgicos. Este trabajo incluye 36 especies existentes, obtenidos principalmente de Tara Oceans Expedicin 2009/2012,
que representan 16 gneros y 6 de los 9 familias existentes.
RESULTADOS
anlisis cladstico y fentica de caracteres morfolgicos, morfometra geomtrica y la subunidad molecular pequea (SSU
rRNA) y la subunidad grande (LSU rRNA genes ribosomales) filogenias proporcionado nuevas perspectivas de las relaciones
y la historia evolutiva de los quetognatos. Proponemos la siguiente estructura clado para el phylum: (((Sagittidae,
Krohnittidae), Spadellidae), (Eukrohniidae, Heterokrohniidae)), con el Pterosagittidae incluido en el Sagittidae. El clado
(Sagittidae, Krohnittidae) constituye el orden monofiltico de Aphragmophora. Los anlisis moleculares mostraron que el
Phragmophora son parafiltico. Las hiptesis Ctenodontina / Flabellodontina y Syngonata / Chorismogonata se invalidan
sobre la base de ambos datos morfolgicos y moleculares.Esta nueva filogenia tambin incluye gneros resucitados y
modificarse dentro Sagittidae.
conclusiones
La distribucin de algunos caracteres morfolgicos utilizados tradicionalmente en la sistemtica y para el diagnstico de
especies sugiere que la diversidad en Chaetognatha se produce a travs de un proceso de evolucin en mosaico. Por otra
parte, quetognatos han evolucionado en su mayora por la simplificacin de su estructura corporal y su historia muestra
numerosos eventos convergentes de las prdidas y reversiones. La principal novedad morfolgica observada es la
adquisicin de un segundo par de aletas laterales en Sagittidae, lo que representa una adaptacin al nicho holoplanctnica.
Palabras clave
Chaetognatha Filogenia Sistemtica Procusto surimposition homoplasia Cuerpo simplificacin del plan
Fondo
Quetognatos son pequeos depredadores de gran importancia en el ecosistema marino [1 ], [ 2 ]. Son abundantes en todos
los mares de todo el mundo y se remonta a la radiacin cmbrica [ 3 ]. La mayora de ellos son planctnicas, pero unos pocos
son bentnicos.Quetognatos son particularmente conocidos por sus caractersticas morfolgicas y de desarrollo
peculiares. Estos caracteres, as como las afinidades de grupo dentro de los metazoos, han sido ampliamente debatido por
zologos desde el descubrimiento de la phylum en el siglo 18 [ 4 ]. Hasta ahora los anlisis filogenticos ms recientes
tambin han demostrado ser problemtica para inferir sus relaciones hermana de grupos dentro de los metazoos, lo que hace
que su posicionamiento en una de las cuestiones ms difciles en la filogenia de los animales [ 5 ]. Numerosas hiptesis
filogenticas alternativas se han propuesto ms de una larga historia de debate (para su revisin [ 5 ], [ 6 ]). Sin embargo, una
hiptesis reciente ha surgido, con base en morfolgica [ 7 ], [ 8 ] y anlisis phylogenomic [ 9 ] - [ 13 ], donde quetognatos se
han considerado un miembro divergente temprana de Protostomia. El cerebro circumoral y las cuerdas ventrales intraepitelial
han sido reconocidos a ser dos de las apomorfas clave de Protostomia [ 14 ], [ 15 ]. El sistema nervioso en Chaetognatha se
caracteriza por una disposicin de este tipo tpico. Sin embargo, a pesar de que la Chaetognatha compartir en parte el patrn
de suelo Protostomia, Prez et al. [ 5 ] concluyeron que sus genoma derivados y morfologa no incluyen ningn sinapomorfa
convincente que sugiera una relacin hermana-grupo a otro taxn metazoos.

A medida que sus relaciones dentro de los metazoos, su sistemtica interna es todava muy debatido [ 16 ] - [ 18 ]. Aqu,
recordamos las principales hiptesis planteadas anteriormente sobre la base de los datos morfolgicos y, ms recientemente,
moleculares.Segn Ritter-Zahony [ 19 ] y Hyman [ 20 ], Chaetognatha se divide tradicionalmente en seis gneros que
representan cuatro y Krohnitta (Krohnittidae). Ms tarde, Tokioka [ 21 ] re-evaluado las relaciones entre las familias mediante
la creacin de dos nuevos pedidos (Figura 1 A): el plesiomorphic Phragmophora (presencia de una musculatura transversal,
es decir, los diafragmas, y diversos tipos de estructuras glandulares en la superficie del cuerpo) compuesto de Spadellidae y
Eukrohniidae; y la derivada Aphragmophora (ausencia de diafragmas y pocas estructuras glandulares). Tokioka [ 21 ] sugiri
la creacin de dos subrdenes Aphragmophora de acuerdo con la forma de los dientes y los ganchos y el nmero de filas de
dientes. El suborden Flabellodontina slo contiene la familia Krohnittidae, mientras que el Pterosagittidae y Sagittidae
pertenecan a la Ctenodontina.En un siguiente trabajo, Tokioka [ 22 ] sugiri que la parafilia de Aphragmophora (Figura 1B),
con el Ctenodontina se piensa que es ms cerca de la Phragmophora que a la Flabellodontina. Inspirado por una sugerencia
anterior de Alvario [ 23 ], Tokioka [ 21 ] consider que algunas de las diferencias estructurales entre Sagitta especies eran de
considerable importancia sistemtica. Este autor divide Sagitta en nueve nuevos gneros y los reuni en el Sagittidae. Tras el
descubrimiento de varios nuevos quetognatos benthoplanktonic profundas, Casanova [ 24 ] hiptesis Tokiokas ligeramente
modificada (Figura 1 C). En su versin, los miembros de la orden Phragmophora se dividieron en dos nuevos pedidos. En
primer lugar, la Biphragmophora (que comprende la nueva familia Heterokrohniidae, con los msculos transversales, tanto en
el tronco y cola) se incluy en la subclase Syngonata (con conductos entre las glndulas genitales). En segundo lugar, la
Monophragmophora (Spadellidae y Eukrohniidae, con los msculos transversales en el tronco solamente) se asoci con la
Aphragmophora en la subclase Chorismogonata (sin tales conductos). El uso de anlisis multivariado basa en la forma del
cuerpo, dallot e Ibanez [ 25 ] sugiere la existencia de tres grupos ( Sagitta , Eukrohnia , y Spadella /Bathyspadella ) y una
estrecha relacin entre las especies planctnicas Pterosagitta Dracoy el bentnica Spadellidae. Tambin cuestionaron la
inclusin de Sagitta Lyra dentro del gnero Sagitta . En otro estudio, Salvini-Plawen [ 26 ] propuso el litoral-nertica Draco
Pterosagitta como la especie ms plesiomrficos y contradijo la ancestralidad de los diafragmas (Figura 1 D). Tambin omite
los subrdenes Aphragmophora Ctenodontina y Flabellodontina de Tokioka [ 21 ] y la hiptesis Syngonata / Chorismogonata
de Casanova [24 ]. Por ltimo, Bieri [ 21 ], [ 22 ] propuso la ltima revisin de la clasificacin quetognatos.Tras Alvario [ 23 ] y
Tokioka [ 21 ], [ 22 ], sugiere nuevos gneros dentro Sagittidae. Se tomaron varios criterios morfolgicos en cuenta: la
posicin y forma de la corona ciliata;posicin y la forma de las aletas laterales y las vesculas seminales; presencia / ausencia
y la forma de los divertculos intestinales; relacin de la longitud del tronco / la cola; sin radios-zonas en las aletas
laterales; aspecto corporal. Este autor tambin tuvo en cuenta la hiptesis de Syngonata / Chorismogonata.
Por lo tanto, sobre la base de un consenso entre Tokioka, Casanova y Bieris hiptesis, la Chaetognatha existentes estn
representados por tres rdenes (Biphragmophora, Monophragmophora, Aphragmophora) y nueve familias (Heterokrohniidae,
Eukrohniidae, Pterokrohniidae, Spadellidae, Krohnittellidae, Krohnittidae, Pterosagittidae, Sagittidae, Bathybelosidae ).
El primer estudio molecular de quetognatos sistemtica se llev a cabo con una parte corta de la gran subunidad ribosomal
RNA 28S (LSU rRNA) de genes [ 27 ]. Estos autores concluyeron que el gen LSU rRNA se duplica en Chaetognatha, la
divisin en Aphragmophora y Phragmophora es compatible y varios gneros de la familia Sagittidae descrito por Tokioka
[ 21 ] y Bieri [ 16 ] se recuperan. Papillon et al. [ 18 ] llev a cabo un estudio molecular ms amplia basada en 26 secuencias
de la pequea subunidad de ARN ribosomal 18S (SSU rRNA) aisladas de miembros de seis familias existentes; llegaron a la
conclusin de que (1) de manera similar a LSU rRNA, una duplicacin de gen SSU rRNA se produjo, lo que sugiere que todo
el conjunto ribosomal se duplica, (2) Tokiokas subrdenes Ctenodontina y Flabellodontina no se validan, (3) Casanovas
hiptesis Syngonata / Chorismogonata y Monophragmophora / Biphragmophora son rechazados, (4) las familias Krohnittidae
y Pterosagittidae no son compatibles, se identifican (5) tres grupos monofilticos: Sagittidae / Krohnittidae, Spadellidae /
Pterosagittidae y Eukrohniidae / Heterokrohniidae, (6) el orden Aphragmophora sin Pterosagitta Draco es monofiltico. Desde
entonces, ningn estudio molecular se ha hecho para explorar ms a fondo la sistemtica de este filo. Por ltimo, un anlisis
de los cdigos de barras reciente fue un gran xito para discriminar entre las especies descritas [ 28 ]. Es especialmente
revel poca estructura geogrfica y demostr que Eukrohnia bathypelagica y hamata Eukrohnia son probablemente jvenes
especies hermanas.
Por lo tanto, incluso despus de un siglo de debates pesados, no ha sido posible establecer una hiptesis estable y fiable
sobre la historia evolutiva de los quetognatos. En el presente trabajo, hemos llevado a cabo un extenso anlisis molecular
basado en LSU y SSU rRNA genes duplicados. Hemos combinado, por primera vez, los resultados moleculares con una
clasificacin morfolgica y morfometra geomtrica. A la luz de nuestros resultados, presentamos una filogenia revisada y se
discuten los sistemas de caracteres basados en la morfologa que tradicionalmente se han utilizado para clasificar a este filo
enigmtica.
resultados
Alineaciones y secuencias errneas
En primer lugar, se identificaron secuencias errneas mediante la construccin de rboles de prueba a partir de genes LSU y
SSU rRNA y para entonces identificar qu secuencias de bases de datos pblicas salieron en posiciones sospechosas
cuando se compara con las nuevas secuencias de obtener en el presente estudio. Este enfoque revel tres secuencias de
quetognatos que son errneos debido al contaminante o mal diagnstico de las especies. Estas secuencias que deben ser
excluidos de todos los anlisis filogenticos futuros fueron:
La SSU rRNA de Krohnitta pacifica (clase I DQ351879 y DQ351891 clase II) a partir de [ 18 ], que lo ms probable es un
contaminante Sagittidae cerca Parasagitta setosa en comparacin con tres nuevas secuencias que pertenecen a subtilis
Krohnitta .
La SSU rRNA de Sagitta sp (clase I AY922316) a partir de [ 29 ], que pertenece a la familia Eukrohniidae, cerca de Eukrohnia
hamata y bathypelagica Eukrohnia .
Tambin caracterizamos nuevas secuencias para tres diferentes muestras de Pterosagitta Draco que se utilizaron en lugar de
las secuencias de rRNA SSU errneas (clase I y clase II DQ351885 DQ351898) a partir de [ 18 ].
Despus de excluir a estos contaminantes, establecimos cinco alineaciones disponibles a pedido (conjunto de datos 1, LSU
rRNA genes parlogos; conjuntos de datos 2, SSU rRNA genes parlogos; conjuntos de datos 3, SSU rRNA clase paralogy I;
conjunto de datos 4, SSU rRNA clase paralogy II; conjuntos de datos 5 , la alineacin concatenados de genes SSU y LSU
rRNA).
Los anlisis filogenticos moleculares
Cualquiera que sea el conjunto de datos de anlisis, los rboles y la razn de verosimilitud bayesiana aproximada (ALRT)
obtenidos eran casi idntica a la de mxima verosimilitud (ML) del rbol de bootstrap. Por lo tanto sus valores estadsticos se
informaron acerca de la topologa ML. Sin embargo, en el caso del anlisis concatenados, porque slo el ALRT y las
reconstrucciones bayesianos mostraron una topologa totalmente congruentes, se registraron valores estadsticos obtenidos a
partir de los tres mtodos de la topologa Bayesiano. La validez de las familias y Krohnittidae Heterokrohniidae no se tratar
solamente porque ambos estn representados aqu por una sola especie.

Large rRNA subunidad . La alineacin de las 58 secuencias de LSU rRNA (49 especmenes para la clase I y 9 para la clase
II) fue de 410 pares de bases (pb) de largo (conjunto de datos 1? =? LSU rRNA Clase I y II). El mejor modelo de la evolucin
estimada con MODELTEST fue el K2P? + ?? modelo (con un lnL de? 2457.20). Sin las nueve secuencias de clase II, se
seleccion el mismo modelo (con un lnL de? 1483.09). Utilizando el punto medio de enraizamiento, las dos clases de LSU
rRNA produjeron dos grupos monofilticos (Figura2 ). La tasa de sustitucin para el rbol sin restricciones era igual a 8.16 ??
10 ? 2 ([8.02 ?? 10? 2 8,30 ?? 10 ? 2 ] 95% intervalo de confianza). Slo se discute la topologa basada en secuencias de clase
I. Paramtricos (valores de coeficiente de riesgo aproximado, aLRTv y posterior probabilidades, pp) y pruebas no
paramtricas de rama (los valores de arranque, bv) mostraron una falta recurrente de la resolucin de las profundas nodos de
rboles basados en genes LSU rRNA. Para evaluar si una seal filogentica coherente podra ser revelado al reducir el
impacto del ruido, los mismos anlisis filogenticos se llevaron a cabo, pero esta vez despus del tratamiento del conjunto de
datos con el programa 1 Aliscore. La nueva alineacin de LSU rRNA (1 bis, del conjunto de datos) muestra 155 (37,8%)
`sitios ruidosos que fueron filtrados y no tuvo impacto en el modelo seleccionado de la evolucin (K2P? + ?? Con un lnL de?
1735,6). La mayora de estos sitios potenciales `ruidosos estaban ubicados en las regiones de bucle de la clase de genes
LSU rRNA II debido a Xenokrohnia sorbei alineacin de clase I LSU rRNA gen. Despus de la eliminacin de estas
posiciones, la exactitud de los rboles no aument (datos no mostrados). Por lo tanto, la falta de resolucin de los nodos de
ramificacin de profundidad est ms probablemente relacionado con la falta de informacin filogentica que a una seal de
`ruidoso debido a los desajustes en la alineacin de secuencias ( es decir , polytomy suave). Debido a esto, las relaciones
entre las rdenes y las familias eran muy difciles de evaluar. Secuencias de LSU rRNA contenan informacin slo es
relevante para la discusin de las relaciones entre las especies de un gnero dado y, en menor medida, entre gneros de la
misma familia. Sin embargo, los rboles construidos bajo ML y criterios bayesianos producen topologas muy similares si se
considera slo los nodos bien resueltas. En primer lugar, Aphragmophora (Krohnittidae? +? Sagittidae? +? Pterosagittidae) y
Phragmophora (Heterokrohniidae? +? Eukrohniidae? +? Spadellidae) no fueron monofiltico. Una estrecha relacin entre el
Eukrohniidae y X. sorbei , el nico representante de la Heterokrohniidae, fue bien apoyado en todos los mtodos (78 / 0.90 /
0.94, bv / aLRTv / pp en adelante). A nivel familiar, slo el Spadellidae recibi un gran apoyo sea cual sea el mtodo
considerado (99/1/1). La monofilia de Eukrohniidae fue apoyada slo en el anlisis bayesiano (39 / 0.60 / 0.98). La monofilia
de la Sagittidae, que fue la familia ms representada (25 especies / 11 gneros), no se puede confirmar debido a valor de
soporte muy bajo en el anlisis de ML (bv? =? 20) o la falta de nodo en ALRT y anlisis Bayesiano.Sin embargo, es posible
caracterizar dos linajes principales dentro de esta familia. Dentro Sagittidae, un conjunto bien sustentado consisti
en Ferosagitta , Aidanosagitta yFlaccisagitta (83 / 0,95 / 1). Un resultado sorprendente fue la inclusin de Pterosagitta Draco ,
el nico representante de la Pterosagittidae, dentro Sagittidae, cerca de Sagitta ,Parasagitta gneros y Mesosagitta mnimos ,
pero con escaso apoyo (33 / 0,77 / 0,75).
Varios gneros validados en el Bieris [ 16 nomenclatura] aparecieron monofiltico con el apoyo valores marginales o
altas. Estos son Ferosagitta (dos de las siete especies conocidas estn representados, 68 / 0,74 / 0,97), Solidosagitta (dos de
las tres especies conocidas estn representados, 87 / 0,83 / 0,96), Serratosagitta (tres de las cinco especies conocidas estn
representados, 97 /0.88/1), Pseudosagitta (tres de las cuatro especies conocidas estn representados, 99 / 0,98 / 1). Sin
embargo Flaccisagitta (dos de las tres especies conocidas estn representados) recibi el apoyo valores bajos de los anlisis
de ML y el apoyo valores marginales del anlisis bayesiano (38 / 0,84, respectivamente), mientras que este nodo no se
recuper en el rbol ALRT. Los restantes gneros son o monoespecficos ( Caecosagitta , Pterosagitta ) o que no aparecen
monofiltico, pero se agrupan en conjuntos ajustados. Es especialmente el caso de gneros grande y heterogneo tal
como Aidanosagitta y Parasagitta . El Mesosagitta gnero, representada aqu por M. mnimos y M. decipiens , fue invalidada.

Figura 2
rbol de mxima verosimilitud calculada a partir de LSU rRNA por el programa de Mega con el K2P? + ?? modelo. La
alineacin de 58 secuencias de LSU rRNA fue de 410 pares de bases de longitud. El valor lnL de este rbol es ptima?
2457,20. Las dos clases de LSU rRNA produjeron rboles que arraigaron entre s. Apoyo valores obtenidos utilizando
diferentes enfoques de reconstruccin se indican en los nodos en el orden siguiente: mxima verosimilitud probabilidades de
arranque (BV), la probabilidad aproximada prueba de razn (aLRTv), y Bayesiano posterior probabilidades (PP). Apoyo
valores se visualizan cuando bv / aLRTv? 75 o PP? 0.85. Ausencia de nodos en un mtodo dado se indica por -.
Pequeo rRNA subunidad . Se analizaron tres conjuntos de datos de secuencias de SSU rRNA. En primer lugar, la
reconstruccin filogentica se llevaron a cabo con el conjunto de datos 2, que comprende todas las secuencias de SSU rRNA
disponibles de ambas clases paralogy (conjunto de datos 2 = SSU rRNA clase I y II, 138 secuencias de 33 especies:?? 80 de
clase I y II 58 secuencias de clase). Uno de los problemas recurrentes en el anlisis de los datos moleculares en
Chaetognatha es la falta de grupos externos relevantes entre los bilaterales. Por lo tanto, este primer anlisis se ofreci a raz
de una clase paralogy por el otro, destacando el orden de ramificacin de las cinco familias representadas con buenos
valores estadsticos y revelando la siguiente secuencia desde el ltimo ancestro comn a la familia ms derivados (archivo
adicional 1 ): Eukrohniidae? +? Heterokrohniidae, Spadellidae, Krohnittidae y Sagittidae, incluyendo estos ltimos
Pterosagittidae. Al igual que en el anlisis de LSU rRNA, Phragmophora (Heterokrohniidae? +? Eukrohniidae? +?
Spadellidae) fueron Paraphyletic mientras Aphragmophora (Pterosagittidae? +? Sagittidae? +? Krohnittidae) recibi un gran
apoyo en la mayora de los mtodos aplicados (clase I-80/1 / 0.98, clase II 19/1 / 0,85).
Conjuntos de datos 3 (SSU rRNA Clase I de 1679 pb de longitud) y 4 (SSU rRNA Clase II, 1119 pb de longitud) consisti en
dos alineaciones independientes para cada paralogy.Aqu, slo presentamos los anlisis basados en estos dos conjuntos de
datos (Figuras 3 y 4, respectivamente) debido a las reconstrucciones filogenticas independientes en funcin de un gen
paralogous dieron resultados ms robustos y precisos que con el conjunto completo de datos que comprende ambas clases
paralogy SSU rRNA (conjunto de datos 2).El modelo elegido fue el K2P? + ?? con un lnL de? 7,733.81 para la clase I y la
T92? + ?? con un lnL de? 4,073.31 para la clase II. Las tasas de sustitucin son iguales a 1,14 ?? 10 ? 2([4.19 ?? 10 ? 4 2.30
?? 10 ? 2 ] 95% intervalo de confianza) para la clase I SSU rRNA y 1,03 ?? 10 ?2 ([4.83 ?? 10 ? 4 2.14 ?? 10 ? 2 ] 95% intervalo
de confianza) para la clase II SSU rRNA.
Al mirar las alineaciones globales sobre la base de las dos clases paralogy SSU rRNA, que incluyen 579 sitios variable
(34,48%). Este nmero se redujo a 446 en la clase SSU rRNA I (26,56%) y en 252 en la clase SSU rRNA II (22,52%). Sin
embargo, el nmero de nodos altamente compatibles dentro de las filogenias ML (bv> 75) aumenta del 44 al analizar ambas
clases SSU rRNA junto a 56 (32 en clase I y clase II en 24) en el anlisis de cada una de ellas por separado. De hecho, las
tasas de evolucin de los dos genes parlogos son muy cerca uno del otro. Sin embargo, mientras que las transiciones y
transversiones son cada uno responsable de un 50% de las sustituciones en la clase I, las transiciones estn involucrados el
68% en la clase II. Esto explica la seleccin de dos diferentes modelos evolutivos por MODELTEST. Por lo tanto, la diferencia
en la estimacin de la distancia entre las clases I y II es ms probable debido a la menor frecuencia de eventos de
transversin en la clase II que a la composicin base. De acuerdo con la topologa obtenida en los anlisis de ambas clases
de genes SSU rRNA (vase la disposicin 1 ), un anlisis separado de cada clase paralogy tienen sus races en el conjunto
monofiltico que consiste en Eukrohniidae? +? Heterokrohniidae. Este enraizamiento tambin se observ en la mayora de
los anlisis cuando se utiliza la funcin de punto medio de enraizamiento. Las topologas globales obtenidos con secuencias
de SSU rRNA pertenecientes a la clase I y II (Figuras 3 y 4 , respectivamente) fueron ms robusta que con las secuencias de
LSU rRNA.El grupo monofiltico que consiste en X. sorbei y todas las especies que pertenecen a Eukrohniidae con el apoyo
sin ambigedades en todos los mtodos aplicados (clase I 100/1/1, clase II en adelante 97/1/1). Al igual que con el anlisis de
LSU, Aphragmophora (Krohnittidae? +? Sagittidae? +? Pterosagittidae) recibi un buen apoyo (100/1 / 0,57, 57/1/1). Todas
las familias (Eukrohniidae 99/1/1, 86/1/1; Spadellidae 70/1/1, 100/1/1;?? Sagittidae + Pterosagittidae 73/1 / 0.99, clase I
solamente) fueron muy apoyado por SSU rboles. En todos los mtodos utilizados, el orden de ramificacin de estos clados
fue extremadamente bien conservada entre ambas clases paralogy, con una diferencia principal que es la posicin de
Krohnittidae. Esta familia monogenrica que comprende tres especies (pero slo representado aqu por subtilis Krohnitta ) se
encuentra ya sea como el grupo hermano de Sagittidae en la clase I rboles con alto apoyo (100/1 / 0.57) o dentro de
Sagittidae (57/1/1) en la clase II rboles en un conjunto que comprende mestizoCaecosagitta y Pseudosagitta gneros pero
con un bajo apoyo (31 / 0.76 / 0.57). Varios gneros tradicionales no se monofiltico, por ejemplo Mesosagitta ( M.
mnimos y M. decipiens ) que ha sido invalidada por nuestros resultados. Aidanosagitta era Paraphyletic en el anlisis de
clase I y monofiltico con alto apoyo en la Segunda anlisis (100/1/1) mientras que la clase se obtuvo el contrario
para Flaccisagitta , la monofilia de los cuales recibi bv marginal y altos valores aLRTv y pP en el anlisis de clase I
(43/1/1). Parasagittaera paraphyletic en el anlisis de clase I y monofiltico en el anlisis de clase II con alto apoyo
(87/1/1). Tres subgrupos principales fueron identificados dentro Sagittidae.Aidanosagitta , Flaccisagitta ,
dos Ferosagitta especies ( F. tokiokai y F. ferox ) y Mesosagitta decipiens forman un primer clado en la clase I rboles con
alto apoyo (96/1/1). En los rboles de la clase II, slo decipiens Flaccisagitta, Ferosagitta y M. se agruparon junto con un alto
apoyo (75 / 0.99 / 0.96). Parasagitta , P. Draco , Sagitta bipunctata y M. los mnimosconstitua un segundo subgrupo con alto
apoyo en todos los rboles (99/1/1, 100/1/1). Este segundo subgrupo muestra una estrecha relacin con la primera de ellas
en el anlisis de clase II (70/1/1). Un tercer y ltimo subgrupo Sagittidae que consiste
en Solidosagitta ySerratosagitta gneros tambin se encontr que era monofiltico, pero fue muy apoyado slo en la clase I
analiza (92/1/1, 64 / - / 1). Por ltimo, el anlisis de clase I confirm la monofilia de Pseudosagitta ( P. Lyra y P. gazellae ) con
los tres principales subgrupos Sagittidae slo en el ML rboles y ALRT (71 / 0,96 / -) y el gnero ms basales entre todos fue
el Sagittidae gnero monoespecfico Caecosagitta (73/1 / 0.99). La resolucin rboles disminuy drsticamente en el nivel
infragenrica y filogenias basadas en datos SSU rRNA no se recuper la monofilia de varias especies, por ejemplo,
en Serratosagitta pacifica y S.serratodentata (clase I y II), M. mnimos (clase II), Aidanosagitta regularis y A. neglecta(clase
I), elegans Parasagitta (clase I y II), Parasagitta setosa y friderici Parasagitta (Clase I),P. Lyra (clase I), F. ferox (clase
I), hamata Eukrohnia y E. Bathypelagica (clase I).
figura 3
rbol de mxima verosimilitud calculada a partir de SSU rRNA Clase I por el programa de Mega con el K2P? +
?? modelo. La alineacin de las 80 secuencias de LSU rRNA 1679 pares de bases de longitud. El valor lnL de este rbol era
ptima? 7733,81. Apoyo valores obtenidos utilizando diferentes enfoques de reconstruccin se indican en los nodos en el
orden siguiente: mxima verosimilitud probabilidades de arranque (BV), aproximados prueba de razn de verosimilitud
(aLRTv) y Bayesiano posterior probabilidades (PP). Apoyo valores se visualizan cuando bv / aLRTv? 75 o PP? 0.85. Ausencia
de nodos en un mtodo dado se indica por -. rbol tena sus races en el conjunto monofiltico que consiste en Eukrohniidae?
+? Heterokrohniidae. Este enraizamiento tambin se observ en la mayora de los anlisis cuando se utiliza la funcin de
punto medio de enraizamiento.
Figura 4
rbol de mxima verosimilitud calculada a partir de la SSU rRNA Clase II por el programa de Mega con el T92? +
?? modelo. La alineacin de 58 secuencias de LSU rRNA 1119 pares de bases de longitud. El valor lnL de este rbol era
ptima? 4073,31. Apoyo valores obtenidos utilizando diferentes enfoques de reconstruccin se indican en los nodos en el
orden siguiente: mxima verosimilitud probabilidades de arranque (BV), aproximados prueba de razn de verosimilitud
(aLRTv) y Bayesiano posterior probabilidades (PP). Apoyo valores se visualizan cuando bv / aLRTv? 75 o PP? 0.85. Ausencia
de nodos en un mtodo dado se indica por -. rbol tena sus races en el conjunto monofiltico que consiste en Eukrohniidae?
+? Heterokrohniidae. Este enraizamiento tambin se observ en la mayora de los anlisis cuando se utiliza la funcin de
punto medio de enraizamiento.
El anlisis concatenado. Como est hecho para grandes genes codificantes que contienen la seal filogentica considerable,
los genes rRNA se concatenan para aumentar la precisin de la reconstruccin filogentica (conjunto de datos 5? =? SSU
rRNA Clase I, SSU rRNA Clase II y LSU rRNA Clase I concatenados ). La longitud total de la concatenacin basada en los
dos paralogous SSU rRNA de clase I y clase II (1670 y 1087 pb, respectivamente) y la clase de LSU rRNA I (366 pb) fue
3123bp. Conservamos como muchos taxones como sea posible en el enfoque concatenados, por ejemplo , todas las
especies que muestra al menos dos genes y las dos muestras. Eukrohnia bathypelagica yParaspadella gotoi muestran
secuencias de SSU rRNA slo para la clase I y Eukrohnia fowleri slo para la clase II. El modelo de evolucin se estim en
los datos concatenados conjunto completo sin ningn tipo de particin de los datos. El modelo elegido fue el GTR? ??? + +? I
con un lnL de? 15,473.70 con el conjunto de datos que comprende 55 secuencias y lnL de? 13,443.12 con el conjunto de
datos que comprende 53 secuencias.
Los rboles resultantes de concatenacin (Figura 5 ) mostraron una topologa muy similar a la obtenida a partir de los genes
SSU rRNA y, en cierta medida, a partir de los genes LSU rRNA, con una mayor precisin no slo en el rango familia, sino
tambin en la sub familia y gnero filas. ML, ALRT y anlisis Bayesiano enraizadas en el punto medio fueron consistentes con
la topologa obtenida en el anlisis arraigada incluyendo ambas clases SSU rRNA de paralogy y dio la monofilia de la
Aphragmophora (82/1/1) y la parafilia de la Phragmophora. Eukrohniidae, familias y Spadellidae Sagittidae se monofiltico
con altos soportes en la mayora de los mtodos empleados (? /0.99/0.90, 83/1/1 y 69/1/1,
respectivamente). Heterokrohniidae era grupo hermano de Eukrohniidae (80/1/1) y fue Krohnittidae grupo hermano de
Sagittidae (82/1/1). Topologas en base a la matriz ms grande tambin fueron bien resueltos por las relaciones dentro de las
familias y fueron similares a los obtenidos a partir de un solo gen rRNA anlisis.
En concreto, dentro de Eukrohniidae, Eukrohnia fowleri apareci basal con aLRTv y posteriores bayesianas (? /0.99/0.90)
Y E. hamata y E. bathypelagica mostr una relacin estrecha (43 / 0,97 / 1).Adems, estas dos ltimas especies eran
paraphyletic entre s. Paraspadella era basal dentro Spadellidae (83/1/1). Dentro Spadella (100/1/1), S. valsalinae se encontr
que era hermana de S. ledoyeri (89 / 0,97 / 1). Por ltimo, dentro de la Sagittidae, el cladoCaecosagitta? +? Pseudosagitta fue
apoyado con altas posteriores bayesianas solamente (73/66/1) y apareci hermana de las dems especies Sagittidae. Al igual
que en el anlisis de un solo gen, tres linajes principales de Sagittidae se recuperaron con altos soportes.Estos
fueron: Solidosagitta ?? + Serratosagitta (93 / 0,99 / 1), Parasagitta (incluyendo M. mnimos ??) + Sagitta ??
+ P. Draco (99/1/1) y Flaccisagitta ? +? Aidanosagitta ? +? Ferosagitta? +? M. decipiens (86/1/1). Al igual que con el anlisis
por separado de los genes SSU rRNA, la resolucin de las relaciones dentro de Sagittidae disminuy a nivel infragenrica y la
monofilia de varias especies no fue apoyada. Este fue el caso de las siguientes especies: S.tasmanica y S.
pacifica , M. decipiens , A. neglecta, P. elegans, P. y P. setosa friderici , E.hamata y E. bathypelagica .

Figura 5
rbol de consenso por regla de mayora bayesiano obtiene de una supermatriz incluyendo ambas clases paralogy de
genes rRNA SSU y LSU rRNA clase I con arreglo al GTR? ??? + +? Me modelo. La alineacin de las secuencias de rRNA
55 concatenados era de 3123 pares de bases de longitud. Apoyo valores obtenidos utilizando diferentes enfoques de
reconstruccin se indican en los nodos en el orden siguiente: mxima verosimilitud probabilidades de arranque (BV),
aproximados prueba de razn de verosimilitud (aLRTv) y Bayesiano posterior probabilidades (PP). Apoyo valores se
visualizan cuando bv / aLRTv? 75 o PP? 0.85. Ausencia de nodos en un mtodo dado se indica por -. rbol fue arraigado el
uso de la funcin de enraizamiento punto medio.
anlisis cladstico y fentica por la morfologa
Debido a que es imposible elegir un grupo afuera apropiada para erradicar un anlisis cladstico de caractersticas
morfolgicas quetognatos, se realiz un primer anlisis utilizando la opcin minf que minimiza el valor de F [ 30 ]. Entre los 23
caracteres, 21 eran cladsticamente informativo. La bsqueda heurstica MP encontr 12.435 rboles de 65 pasos largos. El
ndice de consistencia (CI, con exclusin de uninformative caracteres) era igual a 0,5846 con un ndice de retencin (RI) de
0,8043, un ndice homoplasia (HI) de 0,4154 y un G1 de? 0,4702. El CI sin caracteres poco informativos era igual a
0,5714.Cuando hemos eliminado especies con codificacin morfolgica idnticos (9 taxones, 26,47% del conjunto de datos)
20 caracteres eran informativos. Encontramos 4.115 rboles que muestra un CI de 0,603, un RI de 0.779, un HI de 0.397, y
un G1 de? 0.706. Como secuencias morfolgicas idnticas no tuvieron impacto en la topologa del rbol, analizamos el
conjunto de datos completo. La topologa de consenso arraigado en punto medio dio Phragmophora y Aphragmophora
monofilticos (datos no mostrados). Sobre la base de esta topologa, se realizaron dos anlisis de restriccin enraizada en
Phragmophora para la optimizacin del estado de caracteres en la configuracin ACCTRAN y Deltran (Figura 6 A). En lo que
sigue, discutiremos solamente los sinapomorfias con un ndice de consistencia igual o superior a 0,6. Dentro Phragmophora,
las relaciones fueron bien resueltos con la monofilia de la Eukrohniidae (100, carcter # 20 de una fila de dientes posteriores)
y la monofilia de Xenokrohnia sorbei ? +? Spadellidae (100, carcter # 7 muscular secundaria heterosarcomeric). Dentro de
estos ltimos, Spadella era parafiltico con Paraspadella gotoi como el gnero ms derivada de Spadellidae. La optimizacin
del carcter # 8 cambi cuando se selecciona el ajuste ACCTRAN y apareci como una sinapomorfa de la
agrupacin X. sorbei ? +? Spadellidae mientras era sinapomorfa del Spadellidae slo cuando se ha seleccionado Deltran.
Esta ligera diferencia entre ACCTRAN y Deltran optimizacin es probablemente debido a la falta de datos para el carcter #
8 enX. sorbei (vase la disposicin 2 ). Cuatro sinapomorfias fueron encontrados con ajuste Deltran para la Spadellidae (100,
caracteres # 2 un par corto de las aletas laterales, el extremo anterior en el plano del tabique caudal, # 5 diafragmas con
supercontraction, # 6 msculo longitudinal con slo fibras B, # 8 organizacin de las neuronas-RFamide como tipo B). Se
identificaron una especie, Sagitta bipunctata , responsable de una disminucin de la resolucin de ramificacin dentro de
Aphragmophora (datos no mostrados). Cuando se realiz el anlisis con S. bipunctata , subtilis Krohnitta y Caecosagitta
macrocephala se separaron primero y constituyeron dos linajes distintos. El prximo evento cladognesis recibi apoyo
moderado (70) y proporcionan un grupo que consiste en Pterosagitta Dracoy la Sagittidae restante fueron dejados en una
amplia polytomy. Sin embargo, tres grupos recibieron apoyo buena o moderada, por
ejemplo Flaccisagitta con Pseudosagitta (100 caracteres # 1 cuerpo flcido), Aidanosagitta con Ferosagitta (95)
y Mesosagitta conSolidosagitta (76). Encontramos que los caracteres # 9 (divertculos intestinales) y # 13 (vesculas
seminales cerca de aleta de la cola y bien separados de los laterales) fueron los principales responsables del aumento HI. Al
retirar S. bipunctata del anlisis, el nmero de rboles resultantes se redujo a 340 (62 pasos) que muestra un CI de 0,6129,
un RI de 0.8222, una HI de 0.3871 y un g1 de? 0,5039. Se encontraron tres sinapomorfas para Aphragmophora (100) bajo la
optimizacin ACCTRAN (caracteres # 2 un par de aletas laterales con el extremo anterior y el extremo posterior a igual
distancia de la septo caudal, # 4 ausencia de diafragmas y # 21 estructuras glandulares en el superficie corporal poco
desarrollada). Sin embargo, este estado de carcter # 2 pareca ser un autapomorfa de K. subtilis con ajustes
Deltran. Sagittidae incluyendo P. Draco se monofiltico con alto apoyo (100). Este clado exhibi dos sinapomorfias bajo la
optimizacin ACCTRAN (# 2 caracteres dos pares de aletas laterales, # 19 en corona ciliata tipo C), mientras que uno de los
cuales (19) caracteres # fue synapomorphic a C. macrocephala , Flaccisagitta yPseudosagitta en la configuracin Deltran. La
hermana de relacin entre el grupoFlaccisagitta y Pseudosagitta se confirm (100, caracteres # 1 cuerpo flcido)
con C.macrocephala basal a esta agrupacin (100). El prximo evento cladognesis agrupan P.Draco con la Sagittidae
restante (100), con el carcter # 19 como sinapomorfa con los ajustes Deltran. Estas diferencias entre ACCTRAN y Deltran
optimizaciones eran una consecuencia de la falta de descripcin de la corona ciliata en C. macrocephala (vase la
disposicin 2 ). Una vez ms las relaciones generales entre gneros Sagittidae no se resolvieron completamente, a excepcin
de las relaciones hermana de grupo entreFerosagitta ? +? Aidanosagitta (100, no sinapomorfa encontrado) y Parasagitta ?
+?Solidosagitta ? +? Mesosagitta (100, carcter # 10 vacuolado clulas intestinales).Serratosagitta (100, carcter # 11
ganchos dentados), as como Aidanosagitta se monofiltico (100), pero este ltimo se defini por una convergencia
con Mesosagitta ySolidosagitta (carcter # 19 corona tipo ciliata B). Parasagitta y Solidosagitta no eran monofiltico. Por
ltimo, P. Draco se caracteriz por dos estados homoplasic con respecto a Spadellidae debido a la reversin de los
caracteres # 2 (un corto par de aletas laterales, el extremo anterior en el plano del tabique caudal) y # 19

(tipo
corona ciliata A).
Figura 6
Anlisis cladstico y fenticas de datos morfolgicos. A : anlisis de datos morfolgicos Cladistical basado en 23
caracteres cualitativos. rbol de consenso regla de la mayora de los 340 rboles igualmente parsimoniosos (ndice de
consistencia = 0,633; ndice de retencin = 0,837) obtenido con la exclusin de Sagitta bipunctata . Valores de consenso regla
de la mayora se muestran por encima de las ramas internas. Slo sinapomorfias presentando un ndice de consistencia = 0,6
se muestran en las ramas. Las barras negras representan sinapomorfias con el correspondiente nmero de carcter
morfolgico arriba y el cambio de estado de carcter ms abajo. Las barras rojas y verdes corresponden a las hiptesis
alternativas de acuerdo con Deltran u optimizacin ACCTRAN respectivamente. Caracteres de codificacin se presentan en
el archivo adicional 2 . B : Anlisis de los datos morfolgicos fentica basado en 23 cualitativos y cuantitativos 9
caracteres. Aproximadamente valores de las pruebas imparciales aparecen arriba ramas internas. Caracteres de codificacin
se presentan en el archivo adicional 2 .
Hemos llevado a cabo un enfoque alternativo para incluir fentica 9 caracteres cuantitativos y para estimar las similitudes
generales entre los taxones. El anlisis de las variaciones morfolgicas fentica se basaba en el punto medio
(Figura 6 B). Como en el anlisis cladstico, la agrupacin phenetic dio lugar a una buena estimacin de las relaciones
filogenticas en el rango orden con la monofilia de Phragmophora (valor de ensayo aproximadamente imparcial = 75) y
Aphragmophora (78) y para la asignacin de una especie a la familia correcta. El enfoque phenetic era ms congruente con
rboles moleculares que los cladstica. Se produjo las relaciones entre la hermana del grupo X.sorbei y Eukrohniidae (75), las
relaciones congruentes dentro de Spadellidae con basal P.gotoi , Spadella relaciones de grupo monofiltico y hermana
entre S. ledoyeri y S.valsalinae. P. Draco tambin se encontr anidado en un grupo que comprende S.bipunctata y
dos Parasagitta especies (87). Aparte del caso de Heterokrohniidae y Krohnittidae, cada uno con un solo representante en el
anlisis, las familias restantes, Spadellidae y Eukrohniidae, se encontr que eran grupos naturales con alto apoyo (98 y 82
respectivamente). Sagittidae no se recuperaron no slo debido a la inclusin de P. Draco , sino tambin la de subtilis
Krohnitta como hermana a Serratosagitta especies. Sin embargo, el bajo apoyo para esta agrupacin (63) plantea
interrogantes sobre este conjunto mestizo. Todos los gneros Sagittidae excepto Parasagitta se monofiltico y la mayora de
los nodos picturing sus relaciones recibieron un buen apoyo. Al igual que en los anlisis cladstico moleculares y
morfolgicos, la fenograma morfolgica produjo una estrecha relacin entre Ferosagitta y Aidanosagitta . Sin embargo, los
tres principales linajes Sagittidae resaltados en los rboles moleculares no fueron recuperados.
morfometra
Un fenograma se construy sobre la base de similitudes en la forma corporal, utilizando la distancia forma de Riemann?,
Calculada sobre todos los pares de especies (vase la disposicin 3 para la comparacin entre diferentes familias). El
propsito no era para dar ms ideas acerca de las relaciones quetognatos sino ms bien para probar si los dos pares de
aletas laterales observados en Sagittidae provienen de la divisin de una sola aleta o de la neoformacin de la pareja
anterior. El fenograma de similitudes forma del cuerpo era ms congruente con los datos moleculares cuando se construy
utilizando el extremo anterior del lateral posterior FIN como homloga al extremo anterior de la aleta lateral nica de especies
que tienen un solo par (PH1; coeficiente de aglomeracin = 0,84 ; p = 0,0098 ***, archivo adicional 4 a) que cuando se haba
construido con el extremo anterior de la aleta lateral anterior como homloga al extremo anterior de la aleta lateral nica de
especies que tienen solamente un par (PH2; coeficiente de aglomeracin = 0,89; p = 0,4537, archivo adicional 4 B).
Discusin
Una reevaluacin de las relaciones quetognatos
Las especies estudiadas en el presente informe pertenecen a la Aphragmophora (Sagittidae, Krohnittidae y Pterosagittidae) y
Phragmophora que han sido divididos en Biphragmophora (Heterokrohniidae) y Monophragmophora (Spadellidae y
Eukrohniidae) [24 ]. Por lo tanto, hemos sido capaces de analizar la historia evolutiva de seis de las nueve familias
tradicionales del filo (de acuerdo con las opiniones de Casanova [ 24 ] y Bieri [ 16]). La monofilia de la Krohnittidae no puede
ser objeto de debate debido a que slo una de las tres especies conocidas, subtilis Krohnitta , est incluido en el presente
anlisis. Lo mismo se aplica a Heterokrohniidae representada aqu solamente por Xenokrohnia sorbei. Las familias
Eukrohniidae y Spadellidae han sido confirmados, pero no el Sagittidae y Pterosagittidae (una familia que comprende una
sola especie, Pterosagitta draco ). De hecho, el Sagittidae sensu stricto es un conjunto parafiltico de la cual P. Draco deriva.
Hemos observado mal resuelto nudos basales en los rboles de LSU rRNA y en menor medida en los rboles SSU rRNA, as
como la falta de precisin de las relaciones Sagittidae.Sin embargo, cuando los anlisis moleculares se basan en la
concatenacin de los dos paralogous clase I SSU rRNA y clase II y clase LSU rRNA que se han mejorado la resolucin de los
nodos de ramificacin de profundidad y la exactitud de las relaciones dentro de Sagittidae (ver Figura 5 ). Esto indica que
cuando la cantidad de datos moleculares aumenta la seal filogentica tambin lo hace. Por lo tanto, la baja resolucin de los
individuales reconstrucciones de rboles gen rRNA no es debido a un reciente aceleracin de la diversificacin dentro
Chaetognatha, segn lo propuesto anteriormente [ 18 ], [ 27 ], sino ms bien a la corta longitud de los segmentos de ADN
alineados.
Morfologa y molculas producen algunos resultados mixtos filogenticos. Esta incongruencia puede ser resuelto
permitiendo que varias prdidas y / o reversiones de caracteres morfolgicos convergentes. La falta de un carcter
no puede ser codificado rigurosamente en cladstico debido a la falta de homologa hiptesis primaria especialmente
en un clado con pocos fsiles y grupo externo apropiado. Una consecuencia es que la cantidad de prdidas
convergentes puede ser subestimada. En tal situacin, un enfoque fentica debe dar una mejor estimacin de la
historia evolutiva. En Chaetognatha, las variaciones morfolgicas cuantitativas y cualitativas basadas en el grado de
similitudes generales han sido ms congruente con topologas moleculares que hizo cladstico, especialmente en
relacin con las relaciones dentro de Spadellidae y la posicin de X.sorbei como hermana a Eukrohniidae. La
posicin de K. subtilis , la nica Krohnittidae relativa, tambin es inestable de acuerdo con el mtodo utilizado: ya
sea en la base de toda Sagittidae (cladstica en datos morfolgicos y moleculares de datos) o grupo hermano
de Pseudosagitta dentro Sagittidae (fentica en datos morfolgicos). Tal una posicin inestable podra explicarse por
una evolucin independiente de Krohnittidae durante un largo perodo de una fase temprana de Aphragmophora
[ 21 ]. Por ltimo, la mayora de las inconsistencias observadas entre los enfoques moleculares y morfolgicos se
refieren a las relaciones Sagittidae, lo que demuestra que no existe una relacin lineal entre el grado de divergencia
morfolgica y el tiempo de divergencia dentro de esta familia. Phragmophora Aphragmophora dividi y la hiptesis
Ctenodontina / Flabellodontina
El clado Sagittidae? +? P. Draco como grupo hermano de Krohnittidae fuertemente apoyado en nuestros anlisis cladstico
moleculares y morfolgicas y revive la Aphragmophora, un clado invalidada por Papillon et al . [ 18 ]. Sin embargo, la
conclusin de estos autores hicieron se bas principalmente en la colocacin de P. Draco dentro Spadellidae, que estaba de
acuerdo con la morfometra y la apariencia del cuerpo [ 25 ].Sin embargo, los resultados moleculares presentes demuestran
que la anterior P. Dracosecuencia era probable que sea un contaminante. Por otra parte, los anlisis morfolgicos no son
compatibles con el [dallot e Ibanez 25 ] conclusin, destacando la convergencia de algunos rasgos morfolgicos entre
Spadellidae y P. Draco . Es interesante observar que, sobre la base de las aletas laterales posteriores restringidas a la cola
observada enDemisagitta demipenna (descrito en primer lugar como Aidanosagitta demipenna [ 31 ]), Bieri [ 17 ] seal
posibles relaciones entre P. Draco y algunas especies pertenecientes a Sagittidae. Seal que si D. demipenna fuera a
perder la aleta anterior y desarrollar un par de grandes cerdas flotantes, las especies seran incluidos en
el Pterosagitta gnero. Sin embargo, de acuerdo con la primera descripcin [ 31 ] y una posterior revisin [ 21 ], aunque la
posicin de las aletas laterales posteriores de D. demipenna es nico en Sagittidae y similar a la especie de una sola
aleta P. Draco , otros personajes se ajustan a los de Aidanosagitta . Por ltimo, y lo ms importante, la inclusin
de P. Draco dentro Sagittidae es corroborada por un reciente informe sobre la organizacin del sistema nervioso quetognatos
[ 32 ]. De hecho, este estudio demostr que el patrn de RFamidergic P. Draco es similar a la de varias especies Sagittidae
en comparacin con varias especies Spadellidae.
Tradicionalmente, los autores proponen que la sistemtica interna en Chaetognatha [ 16 ], [ 17 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 24 ] - [ 27 ]
identificaron dos grupos principales; principalmente sobre la base de la presencia o ausencia de los msculos transversales -
los diafragmas. A lo largo de este debate sobre las tendencias evolutivas de quetognatos, la mayora de los autores
acordaron considerar la presencia de diafragmas como un estado plesiomorphic [21 ], [ 24 ] pero con un poco diferentes
hiptesis. Spadellidae se cree que han dado lugar a la Eukrohniidae y Heterokrohniidae acuerdo con Tokioka [ 21 ] mientras
que Casanova [ 24] considera el Heterokrohniidae como los quetognatos que retienen el mayor nmero de estados de
caracteres plesiomrficos. Slo Salvini-Plawen [ 26 ] sugiere un escenario radicalmente diferente, lo que contradice el
primitivismo de diafragmas e identific Pterosagittidae como el grupo hermano de todas las familias restantes. Nuestros
resultados favorecen la ancestralidad de Phragmophora y no son compatibles con Salvini-Plawens hiptesis,
ya P. Draco parece ser un miembro altamente especializado y homoplasic de Sagittidae - como se muestra por diversas
caractersticas, tales como la prdida de las aletas laterales anterior, la posicin de las aletas laterales posteriores, el tipo de
ciliata corona y una relacin de longitud de alta tronco / cola. Hasta el momento, el significado funcional exacta de diafragmas
es desconocida, pero su presencia se correlaciona con un estilo de vida bentnica [ 21 ], [ 22 ], [ 26 ], [ 33 ]. De hecho, la
rastrera y la actividad depredadora sobre el lecho marino requiere el movimiento ms complicado que el nicho pelgicos
hace. Una excepcin se refiere al pelgicos Eukrohniidae que exhiben diafragmas en el maletero, sin embargo, estos son
estructuras vestigiales que se consideran sin funcin [ 22 ]. De acuerdo con la topologa arraigada obtenido sobre la base de
las dos clases de genes paralogy SSU rRNA (vase la disposicin 1 ), nuestros anlisis confirman el monofilia de la
Aphragmophora pero contradicen la del Phragmophora. El Phragmophora aparece Paraphyletic - una situacin tpica cuando
un clado se define sobre la base de un estado de carcter plesiomorphic. Sin embargo, el enfoque cladstico morfolgico
muestra que el Aphragmophora slo se definen por la falta de diafragma o el escaso desarrollo de estructuras glandulares en
la superficie del cuerpo, lo que nos deja en una situacin insatisfactoria. Con base en el conocimiento actual de la morfologa
general, histologa, citologa y neuroarchitecture de quetognatos, es simplemente imposible describir cualquier caracterstica
notable de apomorphic Aphragmophora. Por ltimo, el Aphragmophora se han dividido en dos subrdenes [ 21 ], [ 22 ]:
Flabellodontina (Krohnittidae) y Ctenodontina (Sagittidae + Pterosagittidae??). Nuestros resultados muestran que esta
subdivisin adicional es innecesaria y debilita la hiptesis basada en la estructura de la armadura ceflica que Ctenodontina
podra estar ms cerca de Phragmophora que a Krohnittidae [ 22 ].

Validez de Biphragmophora y Monophragmophora

El anlisis morfolgico soporta la divisin de Chaetognatha en tres grupos monofilticos, la Biphragmophora,
Monophragmophora y Aphragmophora [ 24 ]. Sin embargo, a pesar de la monofilia de la Biphragmophora (Heterokrohniidae)
no puede ser evaluada debido a una sola especie ha sido incluida en nuestros anlisis, ninguno de nuestros rboles
moleculares o morfolgicos muestran que Monophragmophora (Spadellidae y Eukrohniidae) podran ser un grupo
natural. Todas las topologas de rboles obtenidos sugieren que la falta de diafragmas en la cola es un estado homoplasic,
que se observa de forma independiente dos veces en Eukrohniidae y Spadellidae. Sin embargo, la agrupacin de
Eukrohniidae y Heterokrohniidae est bien apoyado por todos los conjuntos de datos moleculares y anlisis morfolgico
fentica. Estos resultados estn de acuerdo con un anlisis de los cdigos de barras recientes que muestran una estrecha
relacin entreHeterokrohnia y Eukrohnia especies con respecto a Sagittidae [ 28 ]. Sin embargo, hay sinapomorfa
morfolgica que podra definir el clado molecular constituido por X. sorbei ? +? Eukrohniidae fue identificado. De hecho, los
estados de caracteres morfolgicos compartidos por los representantes de estas dos familias son plesiomorphic o homoplasic
(una relacin longitud mxima del tronco / cola tambin se observa en Spadellidae y P. draco ). Por otra parte, la familia
Eukrohniidae es tradicionalmente slo se define por la falta de los dientes anteriores (Figura 7 ). Por lo tanto, para concluir
definitivamente una relacin tal hermana-grupo entre estas dos familias, se necesita una taxonoma de muestreo ms
amplio. Representantes benthoplanktonic profundas, como la supuesta Heterokrohniidae ancestral, meso-bathyplanktonic
Eukrohniidae y representante deHemispadella gnero, una relacin entre las familias y Heterokrohniidae Spadellidae [ 34 ],
deben ser estudiados para una mejor cobertura taxonmica de Phragmophora.

Figura 7Descripcin general de las relaciones filogenticas actuales de Chaetognatha como reconstruido de
la topologa resultante de genes ribosomales nucleares concatenados (vase la Figura 5 ). Los asteriscos indican
clados que han sido modificados a partir de los resultados obtenidos en el presente estudio. Las lneas de puntos caracterizan
una ramificacin sin resolver. Proponemos revivir el nombre Decipisagitta en lugar de Mesosagitta( es decir , decipiens
Decipisagitta, D. y D. sibogae neodecipiens) , un gnero propuesto por Bieri [ 17 ]. Las especies cuarta y ltima
de Mesosagitta, M. mnimos , se incluyen ahora enParasagitta , el gnero Mesosagitta ya no existe. A la derecha, los
personajes estados rodeados indican los eventos de prdida putativos. Ilustraciones despus: Alvario [ 37 ], [ 38 ];Casanova
[ 70 ] - [ 72 ]; Winkelmann et al. [ 74 ].

Bieris nomenclatura y las relaciones Sagittidae

A pesar de la complejidad de la distribucin de algunos caracteres morfolgicos, lo que plantea problemas a la hora de
evaluar las relaciones dentro de Sagittidae, la mayor parte de los nuevos gneros propuestos por Bieri [ 16 ] fueron apoyados
por los rboles moleculares. Nuestros resultados confirman de manera inequvoca la monofilia
deSerratosagitta , Pseudosagitta , Flaccisagitta y Ferosagitta, y en menor medida la validez de los conjuntos grandes y
heterogneas como Aidanosagitta y Parasagitta . Las relaciones entre las especies que pertenecen a Parasagitta no pueden
resolverse sobre la base de los anlisis morfolgicos y recibieron escaso apoyo en los rboles moleculares. La morfologa de
este gnero sigue siendo uno de los ms heterognea sobre la base de varios caracteres de diagnstico que son propensos
a homoplasy (Figura 7 ): la estructura y la posicin de las vesculas seminales, la presencia / ausencia de divertculos
intestinales, la presencia / ausencia de intestinal clulas vacuoladas, la presencia / ausencia de la zona de rayless en aletas
laterales y la estructura de la corona ciliata si se considera la inclusin deMesosagitta mnimos . El estado
de Solidosagitta todava est pendiente porque una sola especie ha sido estudiada utilizando SSU rRNA genes
parlogos. Sin embargo, nuestros anlisis basados en datos morfolgicos y secuencias de LSU rRNA incluyen dos especies y
favorecen la validez de este ltimo gnero.
Nuestros resultados moleculares dividen la familia Sagittidae en tres linajes principales (Figura 7 ): Serratosagitta ?
+? Solidosagitta , Sagitta +?? Pterosagitta +?? Parasagitta(incluyendo M. mnimos )
y Flaccisagitta +?? Aidanosagitta +?? Ferosagitta +?? Mesosagitta decipiens . Las especies con delgado vacuolado (carcter
# 10) se distribuyen en estos tres linajes.
Esto apoya la opinin de dallot [ 35 ] que se considera la especie vacuolizadas plesiomorphic sobre la base de su morfologa
general y la estructura de sus vesculas seminales. Esto tambin sugiere que la capacidad de desarrollar grandes clulas
intestinales vacuolado se ha perdido en numerosas especies Sagittidae existentes. La agrupacin
de M. decipiens , Aidanosagitta , Ferosagitta y Flaccisagitta recibe un gran apoyo en la filogenia molecular. Los anlisis
morfolgico slo admiten una estrecha relacin entre Ferosagitta y Aidanosagitta . Por otra parte, algunos caracteres
morfolgicos son congruentes con la asociacin entre Aidanosagitta y M. decipiens : la corona ciliata comienza debajo de los
ojos (tipo B [ 22 ]) y los divertculos intestinales estn presentes
enMesosagitta ( Decipisagitta ), Aidanosagitta y Ferosagitta . Sin embargo, estos caracteres aslan Flaccisagitta del resto del
grupo: el ciliata corona es corta y se limita a la cabeza, comenzando justo detrs del cerebro y se extiende hasta el cuello
(tipo D [ 22 ]) y los divertculos intestinales estn ausentes. Parentesco entre Sagitta bipunctata y Parasagittaespecies son
muy apoyado por los datos rRNA y se ha propuesto anteriormente por varios autores. Segn Tokioka, [ 22 ], estas
quetognatos muestran una ciliata corona extendida similar (tipo C). Por otra parte, Furnestin [ 36 ] y dallot [ 35 ] tambin
sugirieron tales afinidades sobre la base de la estructura y la posicin de las aletas laterales y nmero de dientes y
ganchos. Una incongruencia importante entre los anlisis moleculares y morfolgicas son las relaciones entre la hermana de
grupos Flaccisagitta y Pseudosagitta , resultado arrojado por la morfologa, pero invalidado por todos los rboles
moleculares.Este grupo ha propuesto previamente por Tokioka pero no todos los autores coinciden en llevar estas especies
en un mismo clado. Varios autores [ 16 ], [ 36 ] - [ 38 ] sugiere quelyra-gazellae-maxima era sin lugar a dudas un grupo
coherente se reunieron enPseudosagitta mientras Flaccisagitta hexaptera constituido las hermanas de F. enflata . Por ltimo,
las similitudes morfolgicas entre Flaccisagitta y Pseudosagitta podran estar vinculados ya sea a una forma especializada
altamente adaptado para el plancton ocenico (principales msculos delgados, cuerpo flcido, no se toman rayos totalmente
aletas laterales con masas gelatinosas) o deben ser considerados como estados plesiomrficos entre Sagittidae ( Corona tipo
D ciliata y las vesculas seminales tipo C).
Tomados en conjunto, estas observaciones hacen hincapi en la necesidad de definir mejor los lmites morfolgicas y
anatmicas entre los gneros tradicionales de Sagittidae por la re-evaluacin de los estados y las homologas de caracteres
diagnsticos tradicionales importantes en la his- ancestrales y niveles citolgicas (por ejemplo, el nervioso y muscular
sistemas, la corona ciliata, las vesculas seminales y las aletas).
Notas taxonmicas sobre los gneros Parasagitta / Occulosagitta y Mesosagitta / Decipisagitta
En su intento de mejorar la Sagittidae sistemtica, Bieri [ 17 ] tambin notado la heterogeneidad de varios gneros y
Sagittidae modificado la propia clasificacin mediante la creacin de seis nuevos gneros. Dos especies incluidas en nuestros
anlisis estn preocupados por estas modificaciones: Parasagitta megalophthalma y decipiens Mesosagitta que se cambi el
nombre, respectivamente, por Bieri como Occulosagitta megalophthalma y Decipisagitta decipiens . En primer
lugar, Mesosagitta como se contradice con un grupo natural. De hecho, en nuestros anlisis moleculares, Mesosagitta
mnimos siempre se traslada sin ninguna ambigedad dentro del Parasagitta gnero, mientras que M. decipiens exposiciones
relaciones estrechas con Flaccisagitta ,Aidanosagitta y Ferosagitta .
En segundo lugar P. megalophthalma siempre muestra una estrecha relacin con elegans Parasagitta cualquiera que sea el
rbol molecular considerado. Por lo tanto se propone ( i ) para invalidar la Occulosagitta gnero, ( ii ) para cambiar el
nombre Mesosagitta mnimos como Parasagitta mnimos y ( iii ) para reunir los restantes Mesosagitta especies ( M.
decipiens , M. neodecipiens , M. sibogae ) en el nuevo gnero Decipisagitta .
filogentico consenso a partir de molculas e implicacin de quetognatos tendencias evolutivas
Evidencias paleontolgicas han demostrado la existencia de quetognatos no slo en el medio biota Cmbrico Burgess Shale
[ 39 ], sino tambin en el anterior biota de Chengjiang Cmbrico [ 3 ] con caractersticas morfolgicas casi idnticas a las
especies existentes. El descubrimiento de nuevas especies de profundidad [ 24 ] conduce a la conclusin de que
Heterokrohniidae (Biphragmophora) es la familia que presenta el mayor nmero de caracteres plesiomrficos ( es decir, el
grupo ms primitivo sensu Casanova). Sin embargo, nuestro anlisis plantea la cuestin de si la falta de diafragmas en la cola
de Spadellidae y Eukrohniidae se deriva y debido a la convergencia o representa un personaje homloga y plesiomorphic. La
respuesta tiene profundas consecuencias para nuestra comprensin de las vas evolutivas en quetognatos. Por ejemplo,
desde diafragmas se consideran importantes para las formas que se arrastran, pero no son necesarios para las especies que
proceden por los movimientos de la columna de agua, esta pregunta est relacionada a si los quetognatos madre eran
especies hyperbenthic o holoplanctnica. Los resultados filogenticos moleculares y morfolgicos que obtuvimos en lugar
sugieren que el Eukrohniidae y Spadellidae (Monophragmophora en el caso Casanovas hiptesis) muestran el estado ms
primitivo, un escenario que slo necesita dos pasos evolutivos (una adquisicin de diafragmas en la cola del Heterokrohniidae
y una derrota en el tronco de Sagittidae) contra tres pasos cuando se consideran dos derrotas paralelas en la cola de
Eukrohniidae y Spadellidae respectivamente, seguidos por una prdida en el maletero de Sagittidae. Sin embargo, veremos
que son varios argumentos a favor de este ltimo escenario. En primer lugar, la morfologa y el cuerpo proporciones de
muestras que se encuentran en la biota de Chengjiang sugieren que los quetognatos de Cmbrico inferior eran planctnicas
con las preferencias ecolgicas para nichos hyperbenthic cercanas al fondo del mar [ 3 ]. Entre gneros existentes, los que
muestran las caractersticas ecolgicas ms cercanos son el hyperbenthic Heterokrohniidae. Curiosamente, su ecologa se
observa todava en una especie de Eukrohniidae, Eukrohnia calliops [ 16 ], [ 40 ]. En segundo lugar, diafragmas se han
identificado en el tronco y la cola de especmenes del Cmbrico Burgess Shale biota [ 39 ]. Por ltimo, el entorno estable de
las aguas ocenicas profundas probablemente ha retrasado el plan de evolucin cuerpo y podra explicar la conservacin de
algunos morfologa ancestral en la profundidad existente Heterokrohniidae benthoplanktonic. Todo resumir, es razonable
suponer que la disposicin de los msculos transversales en tronco y cola debe ser considerado como el estado ms primitivo
en quetognatos. En la hiptesis de un complejo ancestro tales Heterokrohniidae similar, hay que postular la prdida de
muchas estructuras y una simplificacin plan corporal durante la historia evolutiva de Chaetognatha (Figura 7 ).
En nuestro escenario, una importante escisin produjo dos clados con diferentes nichos ecolgicos, la estrictamente
bentnica Spadellidae y los linajes Aphragmophora holoplanctnica (Figura 7 ). Esta hiptesis contradice la ancestralidad de
Spadellidae [ 22 ].
De acuerdo con los estudios comparativos de los msculos de Chaetognatha, Spadellidae estn altamente deriva y fue
sometido a importantes modificaciones de su aparato muscular [ 33 ]. La estructura de sus principales msculos que carecen
de fibras B es caracterstico de las especies bentnicas y se deriva de AB fibras tipologa. En combinacin con nuestros
resultados, por lo tanto, existe evidencia slida de que el ancestro Spadellidae era planctnicas, vinculada en parte al fondo
del mar, y adaptado secundariamente a un estricto estilo de vida bentnica. El estado altamente especializado de esta familia
se muestra por su elevado nmero de sinapomorfas (caracteres # 2, # 5, # 6 y # 8; archivo adicional 2 ).
La diversificacin Aphragmophora no presenta ninguna novedad morfolgica y pone de relieve un nuevo caso de
simplificacin plan corporal con la prdida de diafragmas en el tronco (Figura 7 ). El ltimo ancestro Aphragmophora divide en
dos linajes, dando lugar a las actuales familias Krohnittidae y Sagittidae. La familia Krohnittidae retiene algunos rasgos
ancestrales tales como un par de aletas laterales en el tronco y cola, con el extremo anterior y el extremo posterior posterior a
la misma distancia del tabique caudal (carcter 2 #) pero tambin desarroll numerosas caractersticas
autapomorphic. Exhiben ganchos bruscamente curvas (carcter # 11) y los dientes anteriores dispuestas en forma de abanico
(carcter # 22) y carecen de dientes posteriores (carcter # 20). La peculiaridad que se encuentra en los dientes y ganchos
de Krohnitta especies revela un alto grado de especializacin [ 21 ] y apunta a una evolucin independiente de Krohnittidae
que comenz durante las primeras etapas de Aphragmophora cladognesis como se ha demostrado por nuestros resultados.
Curiosamente, la disposicin y la forma de los dientes anteriores de Sagitta nairi , un Sagittidae describen recientemente [ 41 ]
son similares a las del gnero Krohnitta que sugiere una posible convergencia entre estas especies no relacionadas. La
segunda familia Aphragmophora, el Sagittidae, est definida por dos pares de aletas
laterales. Caecosagitta y Pseudosagitta pueden ser reconocidos como dos brotes fuera de principios de Sagittidae. Dallot e
Ibanez [ 25 ] ya han propuesto el aislamiento de Pseudosagitta Lyra y sugiri la posibilidad de que su composicin a la
Sagittidae es dudosa. Nuestros resultados no apoyan dicha exclusin.
Una variacin plan corporal cuestin importante teniendo en Chaetognatha tiene que ver con la evolucin de la aleta. Ms
precisamente, tenan la cara anterior y posterior de las aletas laterales Sagittidae originan a partir de la divisin de la gran
aleta nica observada en Heterokrohniidae y Eukrohniidae? Casanova y Moreau [ 42 ] observaron algunas similitudes entre la
aleta lateral posterior de las especies pertenecientes a Pseudosagittagnero y la aleta lateral nica de las que pertenecen a
Eukrohniidae, las extremidades posteriores de los cuales son slo ligeramente aparte de la bodywall. Las aletas laterales
posteriores y anteriores de Pseudosagitta estn conectados por un puente tegumentaria que refuerza la idea de que las dos
aletas laterales se habran formado despus de la divisin incompleta de un uno grande nica. Sin embargo, nuestro anlisis
morfomtrico muestra que la aleta lateral anterior de especies de dos aletas no resulta de la divisin de una aleta lateral
nica, sino a partir de un neo-formacin despus de un movimiento hacia atrs del extremo anterior de la aleta nica. En
otras palabras, la aleta lateral posterior de Sagittidae es homloga a la aleta lateral nica de las otras familias.
Este paso evolutivo constituye un raro caso de aumento de la complejidad plan corporal en el nivel anatmico en
Chaetognatha. Mientras que la posesin de dos pares de aletas laterales se reconoci como una buena sinapomorfa para
Sagittidae despus de la clasificacin Tokiokas, la inclusin de P. Draco que exhibe slo un par posterior plantea dudas
acerca de su validez.Esto significa que la prdida de la aleta anterior no constituye un callejn sin salida evolutivo para
Sagittidae haciendo que la presencia de un par de aletas de un homoplasia.
Como se ha mencionado anteriormente [ 18 ], [ 33 ], la distribucin de algunos caracteres morfolgicos en Chaetognatha
puede no estar relacionado con la filogenia ni a la ecologa que sugiere una evolucin diferencial de los rganos de
quetognatos separadas (evolucin en mosaico). La prevalencia de la evolucin del mosaico se puede demostrar a travs del
examen de las asociaciones de carcter en quetognatos existentes (Figura 7 ). Diferentes rasgos y los resultados se ven
favorecidos por la seleccin natural en diferentes especies y estos caminos evolutivos podran ser responsables de la falta de
congruencia entre algunos de los cladstico y fentica anlisis porque cuando se produce la seleccin del mosaico de la
naturaleza primitiva o derivada de los estados de caracteres no puede deducirse sobre la base de su correlacin con otros
estados de caracteres, que se cree que son primitivas o derivadas [ 43 ]. Por otra parte, una tendencia comn en correlacin
con la evolucin de mosaico es la prominencia de homoplasy impulsado por presiones selectivas comunes como se muestra
en muchas plantas [ 44 ] y los animales [ 45 ] - [ 47 ].
Tal combinacin de la evolucin del mosaico y la falta de registros fsiles puede dar lugar a problemas persistentes en la
interpretacin de las relaciones a travs del anlisis cladstico morfolgico [ 48 ].
convergencia inducida ecolgicamente en quetognatos holoplanctnica
Es probable que todos los linajes Aphragmophora y Eukrohniidae son morfolgicamente muy similares debido a su estilo de
vida holoplanctnica en los pelagos [ 22 ], [ 26 ] (Figura7 ). Por ejemplo, a pesar de sus caractersticas de acciones historia
evolutiva, Sagittidae, Krohnittidae y Eukrohniidae separados, tales como la tendencia comn hacia un cuerpo con gran
relacin de superficie a volumen, el alargamiento tronco, la reduccin de las estructuras glandulares epidrmicas y la
reduccin / prdida de diafragmas . Debido a que estos clados no constituyen una agrupacin natural, es obviamente un caso
de evolucin convergente. Similitud funcional tambin est presente a nivel citolgico ya que todas estas especies
holoplanctnica presentan la mayor proporcin de fibras B en sus msculos primarios y una organizacin heterosarcomeric
de sus msculos secundarios [ 33 ]. Entre Sagittidae, la morfologa de P. Draco es ms desconcertante. Hay numerosas
reversiones homoplasic en esta especie ya que exhibe una relacin longitud mxima del tronco / cola y un pequeo par de
aletas laterales se limita a la cola, un conjunto tpico de Spadellidae caractersticas morfolgicas. Esta especie epipelgicos
compensa la disminucin de su relacin corporal superficie / volumen mediante el desarrollo de un collarete epidrmico
espumosa alrededor de la mayor parte del cuerpo combinado con cerdas flotantes.
La capacidad de flotabilidad representa un rea de investigacin interesante en quetognatos holoplanctnica [ 49 ] -
[ 52 ]. Para disminuir su gravedad especfica, Eukrohniidae muestran un desarrollo de la hiper nico par de aletas laterales y
diafragmas vestigiales, que son propensos a ser no funcional y se limitan a la parte ms anterior del tronco [ 22 ]. Una
tendencia similar se observa en Krohnittidae con el desarrollo de grandes aletas laterales y diafragmas que han desaparecido
totalmente. El Sagittidae adaptado de una manera diferente mediante la creacin de un nuevo par de aletas laterales. Esta
adquisicin constituye un evento importante y nica para adaptarse al estilo de vida holoplanctnica en Chaetognatha y
podra contribuir a explicar el xito actual de la biodiversidad Sagittidae. Recientemente se ha demostrado que la
diversificacin de la Euthecosomata, que son importantes moluscos holoplanctnica, se produjo en el contexto de un
importante volumen de negocio en la comunidad planctnica marino debido a los cambios ambientales graves que
comenzaron desde el Paleoceno tardo [ 53 ]. Por otra parte, estas innovaciones morfolgicas correlacionados con los
cambios climticos y las especies fueron en gran parte determinada por la adaptacin cscara de flotabilidad volumen de
negocio. Se podra postular que una diversificacin amplia y reciente de Sagittidae se produjo en el mismo fondo de la
evolucin. Sin embargo, la escasez de fsiles de estos invertebrados de cuerpo blando no permite una calibracin eficiente
de los tiempos de divergencia de los linajes Chaetognatha.

conclusiones
Los anlisis moleculares han puesto de manifiesto la homoplasy de varios caracteres tradicionales y la influencia de la forma
de vida en la morfologa, en particular para quetognatos que se adaptaron a un medio ambiente pelgico. Tambin
proponemos que Chaetognatha evolucion principalmente a travs de la simplificacin de un plan corporal pre-existente, en
lugar de a travs de un aumento de la complejidad. Esto constituye un cambio de paradigma en la comprensin tradicional de
la evolucin grupos y pide una re-evaluacin de las hiptesis anteriores relativas a la polaridad y la historia de los caracteres
morfolgicos. Por ejemplo, es razonable pensar que la prdida de diafragmas y los dientes podra haber ocurrido
independientemente en diferentes ramas durante la evolucin de quetognatos. Si las filas anterior y posterior de los dientes
son considerados como estructuras homlogas, la prdida de una de estas filas se puede describir como un evento de la
evolucin paralela. Otro de los personajes tradicionales de diagnstico importante, la relacin longitud del tronco / la cola, se
puede considerar tambin sujetos a homoplasia por reversin debido a los lmites BAUPLAN ( Pterosagitta draco frente
Spadellidae) y la convergencia causadas por una evolucin en ecosistemas similares (Sagittidae /
Krohnittidae frente Eukrohniidae). Incluso el principal sinapomorfa Sagittidae representado por dos pares de aletas laterales
es homoplasic por reversin. Debido a estas numerosas bajas y eventos homoplasic, rasgos tradicionales morfo-anatmicos
pueden resultar poco til con el desciframiento de las relaciones de quetognatos y evolucin morfolgica con certeza. Tal
conclusin subraya la necesidad de ms datos de marcadores moleculares, as como de his- y arquitectura celular del
aparato muscular [ 33] y el sistema neurosensorial [ 32 ], [ 54 ]. Debido a la escasez de novedades a nivel anatmico, se
vuelve necesario para explorar sus variaciones plan corporal desde el nivel de los tejidos a nivel celular. Teniendo en cuenta
la posicin filogentica de pivote Chaetognatha dentro de los bilaterales, es de primordial importancia para reconstruir su
patrn de suelo. Los estudios futuros deben centrarse en una serie de nuevos personajes basados en una amplia gama de
taxones incluidos ejemplares pertenecientes a meso-batipelgica y profundo gneros benthoplanktonic. El uso de un conjunto
de datos taxonmica ampliado combinado con una adecuada observacin ( es decir , con microscopa electrnica de
transmisin, inmunohistoqumica combinado con microscopa confocal de barrido lser y Next Generation Sequencing) ser
crucial en la mejora de la comprensin de los procesos de diversificacin Chaetognathas.
mtodos
Coleccin, el diagnstico de las especies y taxonoma de muestreo
Las muestras se recogieron a partir de una amplia gama geogrfica muestreada durante la circum-mundial Tara expedicin
del ocano y tambin de otras misiones regionales (Tabla1 ). Tabla 2 muestra las secuencias utilizadas en el presente estudio
ya disponible en bases de datos pblicas. Identificaciones morfolgicas de las muestras se realizaron con Wild M5 y Nikon
SMZ 645 microscopios estereoscpicos, y se combinan con los datos ecolgicos y moleculares de la literatura anterior. Para
los datos morfolgicos, se llevaron a cabo comparaciones con las descripciones originales. Cuando diferentes especies
mostraron una morfologa general muy cercano y similar nmero de dientes y ganchos, solamente los
adultos maduros se eligieron porque una de las caractersticas clave para el diagnstico de quetognatos en el etanol es la
forma y posicin de las vesculas seminales dispuestas a cada lado de la cola . Para los datos ecolgicos, se tuvieron en
cuenta los especmenes hbitats y profundidades. Para los datos moleculares, las secuencias de ADN adquiridos desde el
estudio se compararon con las secuencias obtenidas previamente en el GenBank.Por ltimo, si la morfologa de las muestras
no encajaba perfectamente con las especies descritas, hemos llamado a las especies utilizando cf. en consecuencia. En este
manuscrito, se utiliz la nomenclatura taxonmica dada por Bieri [ 16 ], [ 17 ] que se cambi el nombre de varias especies y
cre nueve gneros de Sagittidae.

tabla 1 Los detalles de las secuencias y los nmeros de acceso de GenBank obtuvieron a partir de este estudio

Tabla 2
Los detalles de las secuencias y los nmeros de acceso de GenBank obtuvieron a partir de los estudios anteriores y
se usan en el presente anlisis

extracciones de ADN, amplificacin por PCR y secuenciacin

Todas las muestras se colocaron en etanol al 80% para su conservacin. a continuacin, se extrajo el ADN genmico
utilizando el kit DNAeasy (Qiagen, Valencia, CA) a partir de piezas o individuos enteras seca en papel de filtro y carente de
bolo alimenticio para evitar la contaminacin.
Debido a que todo el conjunto ribosomal en Chaetognatha se duplica [ 18 ], [ 27 ] dos conjuntos de cebadores especficos
para cada gen SSU rRNA paralogous se utilizaron para amplificar las secuencias de aproximadamente 1800bp (clase I:?
18SCI5 TTGATGAAACTCTGGATAACTC y 18SCI3 GGACCTCTCTACATCGTTCG?) Y 1200bp ( clase II:? 18SCII5
TCGTCGGGGTCTCATCC y 18SCII3 AGATACCTCGCAAAATCG)?. A medida que nos concentramos nuestros esfuerzos en
la clase I del gen de LSU rRNA, que es la clase ms representada en bases de datos pblicas, slo un conjunto de cebadores
descritos anteriormente en [ 27 ] se utiliz para amplificar un fragmento de aproximadamente 500 pb:
28S5?AAAGGATCCGATAGYSRACAAGTACCG y 28S3? CCCAAGCTTGGTCCGTGTTTCAAGAC. La mayora de las
secuencias obtenidas con este par de cebadores pertenecan a la clase I, pero tambin amplifica la clase de LSU rRNA genes
II para varias especies.
Las PCR se realizaron de acuerdo con [ 27 ] en 50 volmenes L con los siguientes reactivos:?? 1 tampn de PCR (kit Taq
PCR ncleo, Qiagen), 0,2 mM de cada mezcla de dNTPs, 0,5 mM de cada cebador, 2-4 l (dependiendo en la concentracin
de ADN) de ADN genmico extrado, y 1U de Taq polimerasa. Los parmetros de los ciclos de PCR para la amplificacin de
LSU rRNA fueron: 95C, 3 min, luego 35cycles de 95C durante 1 minuto, 50C durante 1 minuto, 72C durante 2 min.
Para SSU rRNA, se utiliz el siguiente programa de PCR: 2 min a 92C; 5Ciclos de 92C durante 30 s, 48C durante 45
segundos, 48C a 72C durante 80 aos (tasa de rampa de 0,3C / s) y 72C durante 90s; 30cycles de 92C durante 45s, 45s
para 48C, 72C de los 90; y un tiempo de extensin final de 72C durante 7 minutos.
Despus de la amplificacin, los fragmentos de PCR fueron purificados con Wizard SV Gel y PCR System Clean-Up
(Promega, Madison, WI), clonado en pGemT fcil vector (Promega, Madison, WI) y se secuenciaron en ambas direcciones
usando los cebadores T7 y SP6 con un ABI secuenciador capilar de 96 3730XL en genmica Eurofins. 145 secuencias se
han depositado en el GenBank con los siguientes nmeros de acceso:
SSU rRNA clase I: KM519789 - KM519853
SSU rRNA clase II: KM519854 - KM519901
LSU rRNA clase I: KM519902 - KM519931
LSU rRNA clase II: KM519932 - KM519933.
El anlisis filogentico molecular
Cinco conjuntos de datos se utilizaron para los anlisis moleculares:???????? Conjunto de datos 1 = LSU rRNA de clase I y
II, el conjunto de datos 2 = SSU rRNA de clase I y II, el conjunto de datos 3 = SSU rRNA Clase I, el conjunto de datos 4 =
SSU rRNA clase II y el conjunto de datos 5? =? SSU rRNA clase I, II y SSU rRNA LSU rRNA clase I concatenados
secuencias. Los alineamientos de secuencias se establecieron utilizando CLUSTALX [ 55 ] y el msculo [ 56 ] aplicado en
Mega 5 y luego mejorado de forma manual. El MODELTEST v3.0b4 programa [ 57 fue utilizado] para identificar el mejor
modelo de evolucin del ADN para cada uno de nuestro conjunto de datos basado en mxima verosimilitud (ML) y utilizando
el criterio de informacin bayesiano (BIC). Utilizamos Aliscore [ 58 ], [ 59 ] para probar el impacto de los sitios altamente
heterogneas que podran afectar negativamente a la reconstruccin filogentica. Se utilizaron los siguientes parmetros y -N
-N r w4 para eliminar los sitios de heterogeneidad. Un rbol de mxima probabilidad se calcula utilizando la opcin ms
cercana-Vecino-intercambio (NNI) con Mega 5. Un rbol de partida al azar se gener utilizando el mtodo Vecino-Participar
con la opcin seleccionada delecin parcial (75% cobertura del sitio de corte). Robustez topolgico se investig el uso de
1000 repeticiones de arranque no paramtricas. Se consideraron las ramas con los valores de arranque superior al 70% bien
apoyado [ 60 ]. Tambin se realiz el anlisis filogentico Bayesiano utilizando MrBayes 3.0b4 [ 61 ]. Cada anlisis consisti
en 2.10 7 generaciones con un rbol de partida al azar, priores por defecto, el mismo conjunto de longitudes de rama para
cada particin, y cuatro cadenas de Markov (con valores de calefaccin por defecto) muestra cada 1000
generaciones. Adecuada de burn-in se determin mediante el examen de un grfico de las puntuaciones de probabilidad de
las cadenas con calor para conseguir la convergencia en la estacionalidad, as como el tamao efectivo de la muestra (ESS)
de los valores de trazador 1,5 [ 62 ].
Para probar el impacto de posibles sitios ruidosos que computa mxima verosimilitud filogentica anlisis utilizando PHYML
aBayes 3.0.1 programa beta [ 63 ], [ 64 ] en el conjunto de datos de LSU rRNA. Se calcularon dos soportes no paramtricas
de derivacin (Bootstrap y SH-ALRT) y dos soportes rama paramtricas (aBayes y la razn de verosimilitud aproximado de
ensayo, ALRT) como desarrollado en [ 64 ], [ 65 ]. Utilizamos arranque (BV) y ALRT (aLRTv) valores y posterior
probabilidades (PP) para establecer un criterio de calidad. Si bv fue baja pero los otros dos eran altos, entonces se consider
un apoyo potencial de falsos negativos; si bv era alto, pero los otros dos eran bajos, entonces se consider un posible apoyo
falso positivo.
A veces se incluyeron secuencias que eran muy divergentes, por ejemplo, de Aidanosagitta crassa , Eukrohnia
fowleri ,tasmanica Serratosagitta y, con menor frecuencia, de Mesosagitta decipiens porque nuestro objetivo principal era dar
cabida a la mayor cantidad de datos taxonmica y molecular posible. Esto proporcionar una buena base para futuros
estudios sobre la evolucin quetognatos, pero puede afectar negativamente nuestra reconstruccin filogentica. Hemos
eliminado algunas de estas secuencias en el conjunto de datos concatenados 5 para poner a prueba si podan producir
artefactos en la reconstruccin filogentica.
El anlisis morfolgico
El conjunto de datos se considera aqu est constituida por las 34 especies utilizadas en el anlisis molecular. Los siguientes
32 caracteres se eligieron sobre la base de su importancia tradicional como caracteres de clave y su uso en el diagnstico de
especies. Estas variables son una mezcla de diferentes tipos (ver la lista completa a continuacin): 23 cualitativa (binario y
politmica) y 9 cuantitativa ( por ejemplo , longitudes). Estos datos provienen de una recopilacin de las descripciones y
comentarios [originales 21 ], [ 22 ], [ 37 ], [ 38 ], [ 66 ] - [ 74 ]. Caracteres de codificacin se presentan en el archivo
adicional 2 .
caracteres cualitativos (n = 23)
C1 Tipo de carrocera: flcida = 1; = 2 rgidas
C2 Nmero y tipo de aletas laterales: un largo par de aletas laterales extendidos en la cola, as como en la mayor parte del
tronco = 1; uno corto par en el tronco y cola, el extremo anterior en el plano del tabique caudal = 2; uno corto par en el tronco
y cola, con el anterior y el posterior termina a la misma distancia del septo caudal = 3; Dos pares de aletas laterales = 4
C3 tegumentaria puente que conecta las aletas laterales anterior y posterior:?? Ausentes = 1; 2 = presente
Diafragmas C4- (msculos transversales): ausente = 1;?? presente en el tronco solamente = 2; presentes en el tronco y la
cola = 3
C5 Tipo de diafragmas: supercontraction = 1; contraccin normal = 2
C6 Tipo de msculos longitudinales: nica fibra B = 1; fibras A y B = 2
C7 Tipo de msculos secundarios: msculos secundarios heterosarcomeric (l es) = 1; msculos secundarios
homosarcomeric (Ho S) = 2
Organizacin de las neuronas C8-RFamide como: Tipo A (ausencia de D6 y X neuronas posteriores, la ausencia de lazo de
caudal) = 1; Tipo B (presencia de D6 y X neuronas posteriores con lazo de caudal) = 2
C9- intestinal divertculos:?? Ausentes = 1; 2 = presente
las clulas intestinales C10 vacuolado:?? ausentes = 1; 2 = presente
C11 Tipo de ganchos: suavemente curvada = 1; = Suavemente curvos y aserrados 2; = Bruscamente curvas 3
C12 Tipo de vesculas seminales: alargada con una abertura lateral = 1; alargado y una parte que sobresale anterior en
general redonda = 2; redondeada o ligeramente ovalada, con una abertura lateral = 3; alargada con una abertura anterior =
4; presencia de pequeas hendiduras = 5; valo con forma de bulbo = 6
Posicin C13- de las vesculas seminales (con respecto a las aletas laterales y de cola): tocar ni aletas laterales ni aleta de la
cola pero ms cerca de las aletas laterales = 1; tocar ni aletas laterales ni aleta de la cola pero ms cerca de la aleta caudal =
2; tocar, o cerca de, las aletas laterales y bien separada de la aleta caudal = 3; tocar, o cerca de, la aleta caudal y bien
separados de las aletas laterales = 4; tocar las dos aletas laterales y la aleta caudal = 5
C14 Tipo Ocular: invertida = 1; evertido = 2
C15-clulas pigmentadas en el ojo:?? ausentes = 1; 2 = presente
C16 secretora de la glndula ventral: ausente = 1;?? 2 = presente
masas gelatinosas C17- en las aletas laterales:?? ausente = 1; 2 = presente
C18 adhesivo papilas:?? Ausente = 1; presente en el lado ventral de los = cuerpo y las aletas 2; concentrado en apndices
adhesivas = 3
C19- Tipo de ciliata corona: Tipo A = 1; Tipo B = 2; Tipo C = 3; Tipo D = 4 (AD, tipo de ciliata en corona despus de Fowler
[ 67] y Tokioka [ 21 ], [ 22 ])
C20 Nmero de filas de dientes: uno anterior fila = 1; una lnea posterior = 2; dos filas = 3;
C21- epidrmicas estructuras glandulares: estructura glandular en la superficie del cuerpo apenas desarrollado =
1;numerosas estructuras glandulares en la superficie del cuerpo = 2
C22- Tipo de dientes: dientes gruesos dispuestos en forma de abanico = 1; dientes delgados dispuestos en forma de peine =
2
C23- Ray menos en la zona de las aletas laterales:?? Ausente = 1; 2 = presente
caracteres cuantitativos (n = 9)
C24- relacin troncal / longitud de la cola (valor mnimo)
C25- relacin troncal / longitud de la cola (valor mximo)
Posicin C26- del centro nervioso ventral (en relacin a la longitud del tronco)
C27- Nmero mnimo de dientes anteriores
C28- nmero mximo de dientes anteriores
C29- Nmero mnimo de dientes posteriores
C30- nmero mximo de dientes posteriores
C31- Nmero mnimo de ganchos
C32- nmero mximo de anzuelos
datos morfolgicos cualitativos fueron analizados utilizando PAUP * 4.0b10 bajo la mxima parsimonia (MP) con una
bsqueda heurstica con 10 repeticiones al azar Adems taxn seguido de biseccin rbol y reconexin (TBR) rama
intercambio. Todos los personajes fueron tratados como desordenada y sin ponderacin. ACCTRAN (transformacin
acelerada) y Deltran (transformacin retardada) optimizacin de carcter tanto se utilizan para mapear los cambios de
carcter y resolver los nodos ambiguas. Se obtuvo la estadstica G1 usando 1 000 000 rboles al azar. clado frecuencias se
obtuvieron en un 50% los rboles de consenso mayoritario en reglas.
Como muchos linajes de quetognatos han sido definidos por la falta de una estructura dada, tambin llevamos a cabo un
enfoque fentica para integrar datos cuantitativos y para estimar el grado de similitud informacin general disponible ( es
decir, la ausencia de un personaje tan valiosa informacin filogentica). Con el fin de incluir todas las variables en un anlisis
comn, elegimos para tratar el conjunto de datos como cuantitativa mediante la sustitucin de las variables cualitativas
mediante su tabla disyuntiva. Dicha tabla contiene tantas columnas como modalidades: cada columna que define una variable
binaria igual a 1 si se observa la modalidad y 0 en caso contrario. Despus de esta operacin que terminamos con una mesa
de 34 lneas (taxones) y 59 columnas (variables originales para caracteres cuantitativos o puntuacin binaria que corresponde
a una modalidad para las cualitativas). Se consider que la distancia euclidiana entre dos taxones despus de escalar cada
columna a una y realiz un agrupamiento jerrquico no supervisado usando el algoritmo de Ward. Como el nmero de
columnas es ligeramente mayor que el nmero de taxones es especialmente importante aqu para acceder a la incertidumbre
de las relaciones obtenidas tras el procedimiento de clasificacin. Hicimos que el uso del procedimiento de re-muestreo
implementado en el paquete pvclust [ 75 ] de R versin 3.0.1 [ 76 ]. En cada bifurcacin de la clasificacin, se identificaron las
variables significativamente diferentes entre las dos clases. Esto se hizo mediante la realizacin de la prueba t para variables
cuantitativas y la prueba de chi-cuadrado para variables cualitativas que nos han permitido caracterizar las clases de la
topologa. Aunque la prueba de probabilidad bootstrap es muy til para la seleccin de rbol, que est sesgada. El sesgo de
seleccin se basa en comparar muchos rboles, al mismo tiempo y, a menudo conduce a un exceso de confianza en los
rboles equivocadas. Por lo tanto, se opt por la prueba de aproximadamente imparcial (au) para evaluar la confianza de la
seleccin de rboles - un mtodo menos sesgada que otros mtodos como la probabilidad de prueba de arranque [ 77 ].
morfometra geomtrica
Hemos llevado a cabo un enfoque morfometra geomtrica [ 78 ] para explorar las variaciones de la forma del cuerpo entre las
especies utilizadas en el anlisis molecular. El objetivo de este mtodo era poner a prueba dos hiptesis de homologa
primaria diferentes sobre la evolucin de la estructura y el nmero de aletas laterales y correlacionar patrones de la forma del
cuerpo en relacin con diferentes locomotor y conductas ambientales ( es decir , frente bentnicos pelgicos) en
Chaetognatha. Durante las ltimas tres dcadas, los estudios sistemticos a menudo han sido complementadas por
morfometra geomtrica, lo que permite el clculo y la visualizacin de los cambios globales en la forma de los rganos u
organismos. Procrustes superposicin es el mtodo ms eficaz para crear representaciones grficas espaciales de
variaciones de forma [ 79 ].
La variacin de los patrones de la forma del cuerpo se estudi estadsticamente de morfotipos pertenecientes a los seis
clados tradicionales identificados en el anlisis molecular: Heterokrohniidae, Eukrohniidae, Spadellidae, Pterosagittidae,
Krohnittidae y Sagittidae. Ejemplos de especies representativas utilizadas en este estudio piloto en su mayora provienen de
las publicaciones de Alvario [ 37 ], [ 38 ] quien proporcion los dibujos ms precisos de quetognatos con respecto a sus
proporciones forma del cuerpo y la posicin de su centro nervioso ventral, aletas laterales y vesculas seminales. Otras
fuentes fueron Tokiokas ilustraciones de Aidanosagitta crassa [ 69 ], ilustraciones Casanovas de Paraspadella gotoi [ 71 ]
yXenokrohnia sorbei [ 72 ], la designacin por dallot y Ducret [ 73 ] de Parasagitta megalophthalma , as como imgenes de
los especmenes pertenecientes a la Spadella gnero ( ledoyeri Spadella , Spadella cephaloptera y Spadella valsalinae ) por
los autores del presente estudio.
Las imgenes digitales se obtuvieron con un escner de cama plana. A continuacin, 20 puntos de referencia se digitalizaron
usando TPSdig2 [ 80 ] (archivo adicional 5 ). Cuando los especmenes no estaban representados recta, se utiliz el siguiente
procedimiento para obtener coordenadas seal de especmenes enderezados: en primer lugar calculamos los puntos medios
entre puntos homlogos en el lado derecho e izquierdo de las muestras. Esta serie de puntos luego se aline en el eje x, y los
puntos de seal relevantes reposicionados con una coordenada Y de la mitad de la distancia entre los puntos izquierdo y
derecho (archivo adicional 5 ). A continuacin, se utiliz slo una cara de las muestras individuales para otros anlisis. La
variacin de la forma se analiz mediante el mtodo generalizado de Procrustes utilizando el paquete R forma [ 81 ]. Se
probaron dos hiptesis de homologa primaria (PH): el extremo anterior de la aleta lateral posterior en dos especies de aleta
es homlogo al extremo anterior de la aleta lateral nica en las especies de una sola aleta (PH1), o el extremo anterior del
lateral anterior aleta en dos especies de aleta es homlogo al extremo anterior de la aleta lateral nica en una especie de
aletas (PH2). Las distancias completos Procrustes entre las conformaciones de cada posible par de especies se calcularon en
las dos hiptesis de homologa. Dendrogramas de similitudes de conformacin seal se calcularon mediante UPGMA. Estas
hiptesis se ensayaron para establecer cul de las dos dendrogramas de los datos morfomtricos muestra el mayor
coeficiente de aglomeracin, y si eran congruentes con los datos moleculares.
http://frontiersinzoology.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12983-014-0084-7