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Análisis Instrumental PDF
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TEMA 1:
METODOLOGA ANALTICA
1.1. INTRODUCCIN
Qumica analtica: estudia el conjunto de principios, leyes y trminos cuya finalidad
es la determinacin de la composicin qumica de una muestra natural o artificial. Este
conjunto de leyes y trminos utilizados para dicho fin, constituyen el anlisis qumico.
La qumica analtica se divide en dos ramas principales:
- Cualitativa Qu hay ?
- Cuantitativa En qu cantidad ?
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Muestreo: proceso por el cual se obtiene una fraccin representativa siendo a menudo
esta etapa la ms difcil de todo el procedimiento analtico, y la que limita la exactitud de todo
el procedimiento.
Conceptos:
- Lote: material completo del que se toman las muestras. Ej.: todo el agua de
un lago.
A menudo, los lotes estn formados por unidades mustrales. Ej.: Cajas
individuales de un camin.
- Muestra Bruta: se obtiene del lote para anlisis o almacenamiento. Suele
seleccionarse de modo que sea representativa del lote y su eleccin es
crtica para realizar un anlisis vlido. De la muestra bruta se toma una
muestra de laboratorio.
- Muestra de laboratorio: ms reducida. Debe tener exactamente la misma
composicin de la muestra bruta. Para realizar los anlisis individuales se
emplea alicuotas o porciones de prueba de la muestra de laboratorio.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
2. Muestreo de Lquidos:
Homogneos: se toman aleatoriamente distintas muestras como en el caso de
los slidos.
Con materiales en suspensin: se pueden tomar muestras a distintas
profundidades manteniendo en constante agitacin el conjunto.
Frecuentemente se utiliza una sonda llamada ladrn toma muestras, la cual se
sumerge a la profundidad que se desee y se habr para recoger la muestra. De
esta forma se pueden obtener muestras a distintas profundidades, y por mezcla
de todas ellas obtener una muestra representativa, ya que a veces es difcil la
agitacin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
3 Muestreo de gases:
Gas libre en gran cantidad: llenar un tubo con el gas con desplazamiento del
aire que en principio contienen estos recipientes, que despus se cierran por
medio de llaves o sellando sus extremos.
Gas de forma inaccesible al operador: ej.: muestra de gases existente en un
horno o en una tubera: s prctica un orificio en las paredes del horno, y se
introduce en el un tubo provisto de una camisa de refrigeracin que conduce el
gas al aparato de anlisis (anlisis automtico), o que el gas valla a una ampolla
que va a contener la muestra.
4. Errores de muestreo
Los grandes errores son debidos con ms frecuencia a un muestreo incorrecto que a
una aplicacin del mtodo no adecuado.
Entre los qumicos analticos, existe un dicho popular: A menos que se conozca con
certeza la historia completa de una muestra cualquiera, el analista har bien en no perder su
tiempo analizndola .
La libreta del analista debe contener informacin de cmo se colecta y almacena la
muestra, antes de describir como se realiza el anlisis.
Las causas ms frecuentes de error son:
- Que el material se encuentre estratificado y la toma que se realiza no tenga
en cuenta la disposicin de los estratos, es decir, que no estn
proporcionalmente representados.
- Que la propiedad analtica que se mida, vare de forma no uniforme desde
la superficie hasta el centro.
- Que en emulsiones o suspensiones durante el transporte se produzca una
separacin de partculas, no siendo posible agitar todo el volumen para
obtener una muestra homognea.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
En la mayora de los casos la varianza del proceso analtico (Sa2) se conoce a partir de
medidas repetidas sobre una nica muestra de laboratorio, por lo que, Sm se puede calcular a
partir de medidas de So, de una serie de muestras procedentes de distintas muestras brutas.
Younden, demostr que cuando la incertidumbre de la medida Sa es menor que un
tercio de la incertidumbre del muestreo (Sm), no tiene sentido mejorar la incertidumbre de la
medida.
Ejemplo:
Sm = 10%
- S Sa = 5% :
- S Sa = 1% :
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Por otra parte, la materia orgnica a veces debe destruirse a fin de liberar los
elementos inorgnicos para su anlisis. Ej.: (determinacin de Mg en vegetales).
El proceso de mineralizacin de la muestra se lleva a cabo por dos vas:
1. Mineralizacin hmeda u oxidacin hmeda utilizando agentes oxidantes lquidos
(HSO4 , HNO3 , HClO4 concentrado y en calor, reacciona explosivamente con
la materia orgnica).
Es posible realizar la mineralizacin hmeda a elevadas presiones, trabajando en
un autoclave a presiones de 100 atmsferas y Tas entre 250 300 C.
Como reactivos oxidantes (HNO3 , HNO3 + HCl)
Un procedimiento corriente de mineralizacin hmeda a elevada presin y T, se
basa en la descomposicin por microondas con HNO3 y otros cidos minerales
dentro de recipientes hermticos de tefln. La calefaccin se lleva a cabo en
hornos de microondas (especialmente diseados), obtenindose deficiencias
espectaculares en la mineralizacin.
2. Mineralizacin seca: calcinar el componente orgnico expuesto al aire o en
corriente de O2
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
d) Precipitantes orgnicos
Existen algunos reactivos tiles para aislar varios iones inorgnicos, algunos como
la dimetilgliocsima, que se caracteriza por su gran selectividad formando
precipitados con unos pocos iones. Otros como la 8-hidroxiquinoleina forman
compuestos poco solubles con muchos cationes.
En este caso puede conseguirse la selectividad necesaria para la separacin,
mediante el control del pH y la variabilidad de los productos de solubilidad de sus
productos.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
g) Otros mtodos
- Separacin por extraccin
Se basan en el diferente grado en que los solutos (tanto inorgnicos como
orgnicos), se distribuyen entre dos disolventes inmiscibles.
- Separaciones por intercambio inico
Se basan en que las interferencias o el analito, son retenidos en un slido
intercambindose por otros iones fijados previamente en l.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
1.2.8. Acciones
Se incluye en esta etapa, ya que las conclusiones del proceso analtico completo deben
conducir a una meta. Estos resultados pueden llevar a una mejora en los niveles de
contaminacin ambiental o en la calidad de una manufactura, condena de un criminal, entre
otros ejemplos.
TEMA 2:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
2.0. INTRODUCCIN
La inferencia estadstica consiste en la obtencin de conclusiones a partir de un cierto
nmero de observaciones experimentales de acuerdo a unas hiptesis formalizadas y con unas
reglas de clculo objetivas, as mediante su uso se pueden investigar posibles tendencias en
los datos y aplicar criterios que permitan descubrir las causas de error no aleatorias, as
mismo, el tratamiento estadstico de una serie de experimentos planificados adecuadamente
que permitan ver la influencia de diversas variables con ms eficacia y menos trabajo que
mediante el mtodo tradicional de mantener constantes todas las variables excepto una de
ellas y de su influencia y as una pro una cada variable sucesiva.
Es importante sealar que las tcnicas de la estadstica clsica son solo aplicables a un
nmero infinito de observaciones, una situacin que difiere de ser la de una serie tpica de
resultados cualitativos (entre 2 5 repeticiones). Sin embargo, la propia estadstica ha
realizado modificaciones para adaptar los conceptos a series pequeas de datos. En este punto
se ha establecido lo que se llama Jerarqua metodolgica.
x1 (Resultado individual) Una alicuota
x (Media de n resultados) n alcuotas (n < 30)
(Media de resultados) alcuotas (n > 30)
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
valor de la magnitud. A lo que se aspira es a obtener una estimacin de la magnitud que sea
satisfactoria.
La exactitud es el grado de concordancia entre el valor medido y el valor real. Como
nunca se conoce el valor verdadero absoluto, una definicin ms realista es la concordancia
entre el valor medido y el valor real aceptado.
La precisin es el grado de concordancia entre replicas de mediciones de la misma
cantidad, es decir, es la repetibilidad de un resultado.
Es necesario distinguir entre repetibilidad y reproducibilidad, para hacer referencia a la
precisin de un experimento:
- Repetibilidad: estimacin del grado de dispersin en una serie de replicas
de la misma cantidad. Son experiencias llevadas a cabo por un mismo
analista en un tiempo relativamente corto sin cambiar de instrumento ni de
material de laboratorio, y usando las mismas disoluciones.
- Reproducibilidad: mide el grado de dispersin entre series de resultados, o
sea, experiencias realizadas en ocasiones distintas con disoluciones
distintas y con material de laboratorio distinto.
Segn diferentes facetas, podemos calcular la reproducibilidad de distintas
formas.
En esta fotocopia se observa como las medidas de una serie pueden ser muy precisas y
sin embargo poco exactas. La precisin no es garanta de exactitud, pero son necesarias
medidas precisas para conseguir exactitud. Con poca precisin difcilmente se tendr una
buena exactitud.
Existen varias maneras y unidades para expresar la exactitud de una medida. Siempre
se supone que existe un valor verdadero para establecer la comparacin:
A.) Error Absoluto: diferencia entre el valor medido y el valor verdadero con
respecto al signo. Se expresa en las mismas unidades que la medicin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Ea = X1 Xv Xv = verdadero valor
x i
Ea = X Xv siendo X =
N
B.) Error Relativo: error absoluto o medio expresado como % del valor verdadero:
Xi Xv
ER = 100
Xv
X Xv
ER = 100
Xv
252 262
ER = 100 = 38 %
262
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
(x
x)2i
05
S =
N1
(xi
x)2 05
=
N
B.) Desviacin estndar relativa (DER): mejor medida de la precisin para fines
comparativos:
S
CV (coef. de variacin) = DER = 100
x
Sus unidades son %, y es un ejemplo de error relativo, es decir, es una estimacin del
error dividida por una estimacin del valor absoluto de la cantidad medida.
Los errores relativos se utilizan con frecuencia en la comparacin de las precisiones de
los resultados obtenidos y son importantes en el clculo de la propagacin de errores.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
En estos grficos (figura 2.1.), las medidas quedan distribuidas en forma casi simtrica
en torno a la media, es decir, con las medidas agrupadas respecto al centro. Los resultados
obtenidos en las medidas, constituyen una muestra finita de una poblacin, por lo que,
presentan los valores discretos.
En teora, una concentracin puede tomar cualquier valor de manera que la
distribucin de la poblacin se ajusta a una curva continua. El modelo matemtico
habitualmente empleado es la distribucin normal o Gausiana descrita por la ecuacin:
Exp. (x )2 22
Y =
2
Un anlisis un poco ms detallado demuestra que cualquiera que sean los valores de
y , aproximadamente un 60 % de los valores de la poblacin caen dentro de de la media,
cerca de un 95 % se ubican dentro de 2 de la media, y cerca de un 997 % se encuentran
dentro de 3.
La distribucin normal no solo se obtiene cuando se realizan mediciones repetidas de
una misma muestra, tambin los resultados obtenidos a menudo se adaptan a la distribucin
normal cuando se mide la misma magnitud para diferentes muestras de la misma poblacin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
m = e.e.m. =
n
t
= x
n
x 196 < < x + 196
n n
x = 0500
n = 50
S = 00165
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
00165 00165
0500 196 < < 0500 + 196
50 50
= 0500 00046 gr / m
S
= x t
n
EJERCICIOS:
Se determin el contenido de ClNa de una muestra de orina, utilizando un electrodo
selectivo de iones, obtenindose los siguientes valores:
102 mM, 97 mM, 99 mM, 98 mM, 101 mM, 106 mM
x = 1005 mM;
S = 327 mM;
n 1 = S; Nivel de confianza = 95 %; t = 257
327
= 1005 257 = (1005 34) mM
6
Los limites de confianza se pueden utilizar como una prueba para detectar errores
sistemticos como se muestra en el siguiente ejemplo:
Se comprueba la escala de absorbancia de un espectrofotmetro a una concreta,
usando un patrn que da una absorbancia de 047. Los valores determinados fueron 10, de los
que se obtuvieron unos valores de: x = 0461 y S = 003. Calcular el intervalo de
confianza del 95 % de la absorbancia media y decir se existe un error sistemtico.
0003
= 0461 226
10
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
0463
= 0461 0002 Rango de trabajo obtenido
0459
Esta fuera del rango 047, por lo que podemos decir que existe un error sistemtico en
estas afirmaciones.
Anlisis 1 2 3 4
[NO-2] gr/L 0403 0410 0401 0320
0380 0401
2.) Q = = 070
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
0410 0320
0380 0400
Q = = 0606
0413 0380
xq x
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Tn =
S
Ejemplo:
El anlisis de una muestra de calcita dio unos porcentajes de CaO de:
[CaO] 5595 5600 5604 5623
015
Q = = 054 ; QTerica = 0710 para nivel de confianza del 95 %
028
x = 5606
S = 0107 para n = 6
5623 5606
Tn = = 159
0107
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Ejemplos:
1427 4 cifras significativas (1427 102)
14270102 5 cifras significativas
6302106 4 cifras significativas (0000006302)
92500 Este es un caso ambiguo, porque segn como se exprese tendr diferentes
cifras significativas:
925104 3 cifras significativas
92500 9250104 4 cifras significativas
92500104 5 cifras significativas
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Ejemplo:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Como puede observarse la S del resultado es mayor que la de las lecturas individuales
de la bureta. Incluso el volumen utilizado se calcula a partir de una diferencia, pero es menor
que la suma de las desviaciones estndar.
k ab
Y = donde a, b, c, d son cantidades medidas independientemente y k
cd
es una constante, existiendo una relacin entre los cuadrados de las desviaciones estndar
relativas:
05
Sy Sa 2 Sb 2
Sc 2 Sd 2
= + + +
Y a b c d
donde los parmetros se definen como una estimacin de las desviaciones estndar relativas.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Puede observarse que la d.e.r. del resultado final no es mucho mayor que la mayor de
todas las d.e.r., usadas para calcularla. Esto es fundamentalmente una consecuencia de elevar
al cuadrado las d.e.r., y explica una cuestin general, cualquier esfuerzo por mejorar la
precisin de un experimento, debe dirigirse a mejorar la precisin de los valores menos
precisos.
Cuando una cantidad se eleva a una potencia (b3), el error no se calcula como para
una multiplicacin (bbb), debido a que las cantidades implicadas no son independientes.
Entonces, si Y = bA :
Sy Sb
= n
Y b
dy
Sy = Sx
dx
Ejemplo:
La absorvancia de una muestra est dada por A = log (T), siendo T la
transmitancia. Si el valor medio de T = 0501 con S = 0001, calcular A y su desviacin
estndar.
A = log 0501 = 0300
log e 0434
A = T = 0001 = 00008
T 0501
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Es importante observar que para este mtodo experimental se pueden encontrar las
condiciones para que sea mnima la d.e.r.
100 A 100 T log e
d.e.r. de A = =
A T log T
Ejemplo:
La ecuacin de Nerst aplicada a un anlisis potenciomtrico es la siguiente:
c 40 n E (%)
La d.e.r. de c ser = 100 = 100
c c
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
y = ka a + kb b + kc c + ...
El error sistemtico total puede ser a veces cero (s se usa una balanza con un error de
001 gr para pesadas utilizadas en la preparacin de una disolucin estndar). Puesto que el
peso del soluto se calcula por diferencia entre dos pesadas, se eliminan los errores
sistemticos.
y a b c d
= + + +
y a b c d
y b
= n
y b
dy
y = x
dx
TEMA 3:
ANLISIS INSTRUMENTAL: CALIBRACIN
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
1. INTRODUCCIN
En definitiva, las tcnicas instrumentales implican por una parte el estudio terico
de los principios fsicos y fsicos-qumicos de los mtodos utilizados, as como el
conocimiento de tamao, forma, estabilidad y estructura de las molculas; y por otra parte
implican la descripcin y conocimiento de los componentes bsicos de los instrumentos
empleados.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
(xi x) (yi y)
r = 1 < r < +1
(xi x)2 (yi y)2
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
calibracin suele ser suficiente para asegurar al analista que ha obtenido una relacin
lineal til.
En ocasiones se obtienen valores de r ms bajos, siendo necesario utilizar una
prueba estadstica para establecer si r es realmente significativo. El mtodo ms simple es
calcular un valor de t usando la ecuacin:
r (n 2)05
t =
(1 r2)05
Este valor est tabulado y se compara usando una prueba t de dos colas y n 2
grados de libertad.
Si t (calculado) es mayor que t (terico), se puede asegurar que existe una
correlacin significativa. Tambin se pueden calcular los limites de confianza de la
pendiente y la ordenada en el origen, y comparar que estos parmetros estn incluidos
dentro de estos limites.
(xi x) (yi y)
b = a =y bx
(xi x)
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
21612
b = = 193
112
a = y bx a = 152
y = 193 x + 152
SY/X
Sb =
{ (xi x)2 }05
05
xi
Sa = SY/X
n (xi x)2
(yi y )2 05
SY/X =
n2
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
a = t Sa
Ejemplo:
Calcular los limites de confianza y la desviacin estndar para la pendiente y
ordenada en el origen. (Datos en la transparencia )
05
09368
Sy/x = = 04329
5
( xi x)2 = 112
Sy/x 07329
Sb = = = 00409
( xi x)2 05 112
n2 = 5
t = 257 b = 193 257 00409
95 %
b = 193 011
x2 = 364
x2 05
Sa = Sy/x = 02950
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
n ( xi x)2
Clculo de la Concentracin
Una vez determinadas la pendiente y la ordenada en el origen en la recta de
regresin, el fcil calcular el valor de x correspondiente al valor de y medido. Sin
embargo, cuando necesitamos estimar el error en una concentracin calculada utilizando
una recta de regresin, el problema se complica, ya que tanto la pendiente como la
ordenada en el origen estn sujetas a error.
La determinacin del error en la concentracin es bastante compleja, y en muchos
casos se utiliza la siguiente frmula aproximada:
05
SY/X 1 1 (yo y) 2
Sxo = + +
B m n b2 (xi x)2
S m = 1: 05
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Ejercicio:
Calcular los valores de xo y los limites de confianza a partir de los siguientes datos:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
SY/X 1 y2
SxE = +
b n b2 (xi x)2
Ejemplo:
La [ ] de Ag en una muestra de derechos fotogrficos se determin por absorcin
atmica por el mtodo de desviaciones estndar, obtenindose:
[Ag adicionada] mg / ml 0 5 10 15 20 25 30
Abs. 032 071 052 060 070 077 089
a
a =y bx = 03218 = 173 mg / ml
b
Limites de Confianza:
(yi y )2 05
SY/X =
n2
y = 06014
(xi x)2 = 700
001094 1 (06014)2
SxE = + =
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
SxE = 0749
Aunque este mtodo es una forma de evitar los efectos de interferencia causados por
la matriz, tiene dos desventajas:
1.) Es un mtodo de extrapolacin, y por tanto, menos preciso que las tcnicas de
interpolacin.
2.) Es difcil de automatizar, y requiere de mayores cantidades de muestra.
[analito]
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
[estndar interno]
3. PARMETROS CARACTERSTICOS
yLD = yB + 3 SB
yLQ = yB + 10 SB
yLD = yB + 3 SB a + 3 Sy/x = b x + a
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
b = 193 004
r = 09989
Sy/x = SB = 0433
Sx = 025
3.3. Sensibilidad
La sensibilidad de un instrumento o mtodo se define como, su capacidad para
discriminar entre pequeas diferencias en la [ ] de un analito. La sensibilidad viene
limitada por la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o precisin del
sistema de medida, de manera que para dos mtodos que tengan igual precisin, el que
presente mayor pendiente en la curva de calibracin ser el ms sensible, y viceversa.
La IUPAC, define la sensibilidad como la pendiente de la curva de
calibracin a la [ ] de inters. Como la mayora de las curvas de calibracin
son lineales, en ellas la sensibilidad de calibracin es independiente de la [
], e igual a la pendiente de la recta de calibrado.
Mandel y Stichler, definen la sensibilidad analtica a una determinada [ ], teniendo
en cuenta la precisin, como:
b m b = pendiente
= = donde
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
3.4. Selectividad
La selectividad de un mtodo analtico durante el grado de ausencia de
interferencias, debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra.
Desafortunadamente, ningn mtodo analtico est totalmente libre de
interferencias, y con frecuencia deben realizarse distintas operaciones para eliminarlas.
Consideremos una muestra que contiene un analito A, as como dos especies
potencialmente interferentes (B y C), encontrndose en [ ] CA, CB, CC, con sensibilidad de
calibracin: ma, mb, mc. La seal medida en el instrumento vendr dada por:
S = ma CA + mb CB + mc CC + Sbl
Blanco
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
obtenindose:
Calcular:
a) Sensibilidad de la calibracin.
b) Sensibilidad analtica a 1 y 10 ppm de Pb.
c) Limite de deteccin.
112
= = 45
0025
c) y = yB + 3 SB
ya 0054 00296
y = bx + a x = x =
b 112
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Media x 1
S / N = = =
Sd D.E.R Sd
desviacin estndar
Como norma general, la deteccin cierta de una seal mediante un sistema visual
resulta imposible cuando la relacin seal ruido es < 2 3. S / N < 2 3
Ej. Fig. 4. 2
S / N = 4,3 S / N = 43 Mejor.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
TEMA 4:
4.1. INTRODUCCIN
1.) Permiten realizar anlisis difciles o imposibles por los otros mtodos
con una elevada selectividad y sensibilidad. Adems, mientras en los
mtodos clsicos solo podemos determinar un analito por anlisis, en los
instrumentales podemos determinar simultneamente varios analitos en un
anlisis.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
- Espectroscpicas
- Electroqumicas
- Cromatogrficas
- Acopladas o conjuntadas
- Diversas
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Parmetros Ondulatores
- Amplitud de una onda sinusoide: longitud del vector elctrico en
el mximo de la onda.
- Periodo de la radiacin: tiempo en segundos necesario para el paso de dos
mximos o mnimos consecutivos por un punto fijo del espacio.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
trmicamente excitadas, est cuantizada, es decir, que nicamente estn permitidas ciertas
energas. Posteriormente supuso que cuando un sistema pasa de un nivel de energa a otro
de menor energa, se emite un cuanto de energa, y que esta energa est relacionada con
la frecuencia de la radiacin emitida, mediante:
hc E Energa del cuanto de radiacin.
E = = h Longitud de onda de la
radiacin.
Frecuencia de la radiacin.
h Cte. de Planck = 662410-27Hz / s
La ecuacin de Planck unifica las dos teoras ya que relaciona la energa de un cuanto
de radiacin (concepto corpuscular), con la frecuencia de la radiacin (concepto ondulatorio).
4.5.1. Refraccin
Base de la refractometra. Se define como el cambio de direccin de la radiacin al
pasar de un medio a otro, pudiendo atribuirse a la diferencia de velocidad en los dos
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
4.5.2. Reflexin
Se produce siempre que incide radiacin en la interfase entre dos materiales
de ndice de refraccin diferentes. Si la superficie es lisa, el ngulo de
incidencia es igual al ngulo de reflexin. Mientras que superficies
irregulares dan lugar a reflexiones difusas con poco inters desde el punto
de vista ptico.
Se define reflexin como la refractancia o poder de reflexin entre la
intensidad de la radiacin reflejada y la de la radiacin incidentes en la
interfase. As para un ngulo de incidencia como la refractancia (l) ser
mayor cuanto mayor sea el ndice de refraccin del medio dos, aunque
tambin interviene el medio uno:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Cuanto mayor sea la diferencia entre (n2 n1) mayor ser la reflectancia.
Si n1 = n2, no se producir reflexin y si una superficie de un objeto no
refleja luz esta es invisible, por tanto, los objetos invisibles lo son cuando
estn rodeados por un medio de ndice de refraccin idntico al suyo
propio.
4.5.3. Dispersin
La turbidemetra y nefelometra se basan en la dispersin.
Cuando la radiacin electromagntica interacciona con partculas de pequeo
tamao induce oscilaciones en las capas elctricas de la materia y los dipolos as inducidos
emiten ondas secundarias en todas las direcciones. En este proceso parte de la energa se
emite sin cambiar su longitud de onda.
Se produce dispersin cuando las partculas tienen dimensiones del mismo o menor
orden de magnitud que la longitud de onda incidente y adems se encuentran en un medio
con ndice de refraccin diferente al suyo propio si el tamao de las partculas es 2
inicialmente se produce reflexin y refraccin.
Dispersin de la luz por los gases se observa en el aire, y es la responsable del color
azul del cielo y del color rojo del sol en el ocaso.
TABLA: Partculas que producen dispersin en diversas regiones del espectro.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
4.5.4. Interferencias
Una onda puede describirse mediante una ecuacin sinusoidal de la forma:
y = campo elctrico
A = amplitud
y = A sen (t + ) = ngulo de fase
= frecuencia angular
- 54 -
Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
4.5.5. Difraccin
Es un proceso por el cual un haz paralelo de radiacin electromagntica se curva
cuando pasa por un obstculo puntiagudo o a travs de una abertura estrecha. Este fenmeno
es de gran importancia para la comprensin de las rendijas y redes de difraccin usadas en los
instrumentos pticos. La difraccin se demuestra con facilidad en el laboratorio cuando se
generan mecnicamente en un depsito de agua, ondas de frecuencia constante. Observando
las ondas antes y despus de pasar a travs de una abertura o rendija. Cuando la rendija es
ancha en comparacin con la longitud de onda del cuanto, la difraccin es insignificante y
difcil de detectar. Sin embargo, cuando la longitud de onda y la abertura de la rendija son del
mismo orden de magnitud, la difraccin llega a ser intensa. En este caso la rendija se
comporta como un nuevo origen a partir del cual las ondas se irradian en una serie de arcos de
cerca de 180 , de manera que la direccin del frente de onda parece como si se curvara al
pasar entre los bordes de la rendija.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Sen =
b
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
d d dn
=
d dn d
4.5.7. Polarizacin
La mayor parte de las fuentes de radiacin producen perturbaciones
electromagnticas en las cuales las vibraciones de los vectores elctrico y magntico tienen
lugar en todas las direcciones perpendiculares a la direccin de propagacin de la
radiacin, es decir, las direcciones de estos vectores se distribuyen igual en una serie de
planos centrados a lo largo de la trayectoria del haz, tal como se muestra en la figura: 1
25 (dispersin de la luz).
Esta radiacin no polarizada puede representarse convirtiendo hipotticamente y
mediante una suma de vectores, los infinitos planos direccionales en dos planos principales
perpendiculares. La eliminacin de uno de los dos planos de vibracin resultantes, da lugar
a la luz polarizada en un plano.
La polarizacin es la base de la polirametra y de la dispersin ptica rotatoria.
Se puede obtener radiacin polarizada en un plano mediante reflexin, dicroismo,
doble difraccin y dispersin.
x + h x*
x* x + Q
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Picos: corresponden
a la excitacin del e- desde el 3s a los estados 3p, que difieren muy poco en su energa.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Los niveles de energa principales n son los niveles de energa electrnicos, los
cuales solo se indica en la figura y se designan por el nmero electrnico n, siendo n = 1,
2, 3, ....
Asociados a cada uno de los niveles energticos electrnicos se encuentran
los diferentes subniveles vibracionales que se designa por el nmero
cuntico = 0, 1, 2, 3,.... y cada uno de los niveles vibracionales se
encuentra subdividido en diferentes niveles rotacionales que se designan
por el nmero cuntico rotacional = 0, 1, 2,...
Esta representacin de la figura esta simplificada ya que en realidad la difraccin
de energa entre los niveles energticos electrnicos es muy grande, los niveles
vibracionales tienden a converger a energas elevadas y por otro lado, los niveles
rotacionales tienden a divergir a energas elevadas.
Las reglas de seleccin permiten generalizar qu transiciones estn permitidas y
cuales no. Algunas de estas reglas para molculas simples lineales tienen lugar en:
1.) Las transiciones rotacionales puras solo pueden tener lugar entre niveles
rotacionales adyacentes: = 1
2.) Las transiciones vibracionales deben ir acompaadas de transiciones
rotacionales simultaneas: = 1 = 1
3.) Las transiciones elctricas van generalmente acompaadas de transiciones
vibracionales y rotacionales, aunque esto no es imprescindible:
n = 1 = 1 = 1
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
de manera que la sustancia pasa de un estado exaltado de elevada energa a uno de baja
energa y emite radiacin.
Pueden distinguirse tres clases distintas de procesos de emisin que definen como la
sustancia alcanza el estado excitado.
Emisin del ncleo radiactivo
Los ncleos de las sustancias radiactivas naturales o producidas por bombardeo de
neutrones, se pueden desintegrar de manera espontnea emitiendo rayos , y as el espectro de
rayos que se obtiene es caracterstico del ncleo emisor.
Emisin despus de la absorcin de radiacin electromagntica
La sustancia puede pasar de un estado excitado al estado fundamental perdiendo el
exceso de energa en forma de calor. Sin embargo, algunas sustancias pueden desactivarse por
otros mecanismos de emisin como son la resonancia, fluorescencia, fosforescencia:
Resonancia: fenmeno poco frecuente que tiene lugar cuando un tomo o
molcula que ha absorbido una determinada radiacin vuelve al estado fundamental emitiendo
radiacin de la misma frecuencia que la absorbida. Este tipo de emisin se da casi
exclusivamente en sistemas con tomos aislados en los cuales no existe posibilidad de
choques con otra sustancia antes de la emisin.
Fluorescencia y Fosforescencia: son reemisiones de radiacin de longitudes de
onda superior, es decir, de menor energa que la radiacin absorbida. Esto es debido a que
parte de la radiacin absorbida se pierde generalmente por desactivacin vibracional antes de
la emisin.
En la fluorescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y emisin de radiacin
oscila entre 10-4 y 10-8 segundos, de modo que la reemisin parece instantnea y cesa cuando
se elimina la fuente de radiacin.
En la fosforescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y la emisin es mucho
mayor, variando entre 10-4 y 10 segundos o ms.
Emisin a partir de una excitacin no electrnica
Tambin puede usarse energa no electromagntica para llevar a un tomo o molcula
al estado excitado capaz de producir emisin de radiacin. Esta energa puede ser elctrica o
trmica, pudiendo describirse el proceso:
x + (energa elctrica o trmica) x*
x* x + h
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
dI = k I db
variacin de intensidad constante de `proporcionalidad
el signo menos de la expresin indica que la intensidad disminuye al aumentar b.
Reordenando esta ecuacin tenemos:
dI
= k db
I
lo cual establece que la fraccin de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado.
Si Io es la intensidad incidente, si integramos obtenemos:
I b
dI
= k db teniendo en cuenta los lmites de
integracin
I I 0
I I k
Log = k b lg = b
I0 I0 2303
Esta ecuacin constituye la forma definitiva de la Ley de Lambert que es una ley
exacta y aplicable a cualquier medio homogneo y no dispensivo (gas, lquido, slido o en
disolucin), y por otro lado la constante de proporcionalidad k depende para una sustancia
absorbente dada de la longitud de onda y de la temperatura. Adems para una disolucin, la
concentracin a de permanecer constante.
Esta ley aunque es exacta no es de gran aplicacin en qumica.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Log = b
I 2303
Segn Beer:
K concentracin
= a c
2303 nueva constante de proporcionalidad
La Ley de Beer es fundamental en los mtodos pticos de anlisis, ya que nos permite
calcular la concentracin de una sustancia a partir de la medida de la radiacin absorbida por
una disolucin de la misma.
La relacin I / Io se conoce como trasmitancia, y no tiene unidades.
b es el espesor de la cubeta en centmetros, siendo constante en la mayora de los
casos.
a es una constante caracterstica de la sustancia absorbente y de la longitud de onda de
la
radiacin utilizada.
Si c se expresa en moles por litro, la constante a se transforma en , que se llama
absortividad molar o coeficiente de extincin molar.
Frecuentemente se usa en el trabajo experimental:
I
% T = 100 T = Transmitancia
Io
Io
A = log
I
Ejemplo:
La intensidad de un haz de luz disminuye en un 20 % al atravesar 1 cm de un
medio absorbente. Cul ser la disminucin despus de atravesar 5 cm del mismo medio?
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
% T = 100 % 20 % = 80 %
Io
log = log T = a b c (1)
I
b = 1 cm a c = log T = log 080 = 0096
b = 5 cm log T = a b c = 0096 5 =
048
(1) T = 0331 % T = 331
% de disminucin = 100 331 = 67 %
Ejemplo:
La absortividad molar de un soluto es igual a 110104. Hallar la absorbancia y
el tanto por ciento de transmitancia a travs de una disolucin de concentracin igual a 3 10-5
M, en una cubeta de 05 cm:
Curvas Espectrales
La Ley de Beer es la base de anlisis cuantitativo, ya que pone de manifiesto que la
absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de un soluto. Para aplicar la Ley
de Beer es necesario seleccionar la longitud de onda optima, y por esta razn se determina la
curva espectral. Esta se obtiene representando la absorbancia el % de T en funcin de la
longitud de onda, mantenindose la concentracin de la disolucin y la longitud b de la cubeta
constantes. (Figura 1 35).
Estas curvas reciben el nombre de espectro de transmitancia y espectro de transicin.
Las curvas espectrales son caractersticas de la sustancia absorbente, y por tanto
pueden utilizarse para el anlisis cuantitativo de soluto.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Para el anlisis cuantitativo se elige una longitud de onda a la cual el soluto absorba
fuertemente y no presente absorbancia otras sustancias presentes.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
- Fluorescencia o Fosforescencia:
x + h x*
x* x + h + Q
= frecuencia de la emisin fluorescente o fosforescente que menor que la de la
radiacin incidente.
La radiacin h tambin se emite en todas las direcciones dando lugar a una
absorbancia aparente menor que la absorbancia real.
- Dispersin:
x + h x*
x* x + h
= frecuencia igual a la radiacin incidente, pero emitida en todas las direcciones a
partir de la partcula que causa la dispersin.
La dispersin se produce para frecuencias de la radiacin de absorcin mayores que la
probabilidad de dispersin al aumentar la frecuencia de la radiacin incidente.
La dispersin es generalmente insignificante en presencia de
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo tiene lugar cuando se utiliza una
radiacin monocromtica. Sin embargo, en la prctica no es posible utilizar radiacin
monocromtica (radiacin de una sola longitud de onda), ya que los dispositivos
instrumentales aslan una banda ms o menos simtrica de longitudes de onda en torno al
valor deseado. El efecto de la radiacin policromtica sobre la Ley de Beer lo podemos ver en
la trasparencia siguiente:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Se conoce como radiacin parsita a toda radiacin extraa que llega al detector, pero
que no proviene de la muestra. Puede producirse por la presencia de polvo, defectos en el
sistema ptico (rayaduras, etc.). Aunque esta radiacin parsita existe siempre sus efectos son
ms importantes a valores elevados de absorvancia tal como se puede demostrar en la
ecuacin:
I0 I
Is Is
Intensidad de la radiacin parsita que
llega
al detector
I + Is
Iabsorbida =
I0 + Is
I0 + I s
A = log
I + Is
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
TEMA 5:
1. INTRODUCCIN
La espectroscopia de absorcin UV Visible fue uno de los primeros mtodos fsicos que se aplic al
anlisis cuantitativo y a la determinacin de estructuras. Si bien la espectroscopia del Infrarrojo y Radiacin
Monocromatica, son las tcnicas ms idneas para el anlisis cuantitativo y estructural.
La espectroscopia UV Visible es una tcnica auxiliar til para la elucidacin de estructuras.
La regin de longitud de onda que estudiaremos ser:
vaco vaco
lejano prximo
Visible
UV
2. TEORA DE LA ABSORCIN
La energa y la variacin de energa de una molcula es:
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Adems de los electrones y , muchos compuestos orgnicos poseen tambin electrones n que son
no enlazantes, es decir, que no participan en el enlace.
Ej.: Formaldehido.
H.
.
x x
C . .C O x
.
H . n
Los distintos tipos de transiciones se pueden distinguir en funcin de la zona del espectro donde
aparecen por sus intensidades relativas, y en algunos casos por los desplazamientos observados al vaciar el
disolvente.
Las intensidades de absorcin suelen expresarse en trminos de la absortividad molar:
A
A = bc =
bc
Dependiendo del valor de , del tamao de la especie absorbente y de la probabilidad de la transicin.
Para que haya una interaccin, la radiacin debe de chocar con la molcula dentro de un espacio de
dimensiones aproximadas al tamao de la molcula y la probabilidad de la transicin es proporcional al nmero
de impactos que producen absorcin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Para una transicin cuya probabilidad sea la unidad, tendremos una = 105. En general, valores de
entre 105 y 104, se consideran procesos de absorcin de intensidad muy fuerte y son debidas a transiciones con
probabilidad de transicin (P) muy elevada (01 1).
Los procesos con del orden de 104 103, son procesos de intensidad fuerte y P varia entre 001 y
01.
Los procesos con inferior a 103, son procesos de baja intensidad y una P < 001.
A veces, a estos procesos se les llama procesos de transiciones prohibidas.
OC=CC=O
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Estos sistemas presentan una mayor intensidad de absorcin y adems la conjugacin produce el
desplazamiento de los mximos de absorcin hacia longitudes de onda mayores. (Transparencia: Tablas 2-2, 2-
3).
- Auxocromo: Son grupos saturados que cuando se unen a los cromforos desplazan un mximo de
absorvancia a longitudes de onda mayores a la vez que aumenta la intensidad de absorcin.
Entre los grupos auxocromos, estn los grupos - OH, - SH, - NH2 y halgenos. Todos estos grupos
tienen electrones n (electrones no enlazantes) y su efecto se atribuye generalmente a transicin n *.
Ej.: El benceno tiene una = 254 nm con una = 204 nm, pero cuando le sustituimos un H del
benceno por un grupo OH:
= 270 nm = 1450 nm
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
mxima
_ (nm)
CH3 259
_
CH2 2 292
_
CH 3 349
_
La presencia de ms de un sustituyente (como el ) hace que se desplace el mximo de absorcin hacia
mayores.
Se ha producido la transferencia del electrn del metal al ligando, pero puede ocurrir al revs.
En estos procesos hay dos componentes, un aceptor y un dador de electrn, y la absorcin de la
radiacin implica la transferencia de un electrn desde el dador hasta el aceptor. En consecuencia, el estado
excitado es el producto de un proceso redox o un proceso redox interno.
En la mayora de los complejos de transferencia de carga que implica un ion metlico, ste acta como
aceptor del electrn. Una excepcin es el complejo que forma la o fenantrolina con Fe2+ y Cu2+
donde el ion metlico es el dador y el ligando es el aceptor. ( la o fenantrolina).
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
hV
Fe3+ - SCN Fe2+ - SCN
hV
Fe2+ (H2O)n Fe3+ (H2O)n
hV
Fe3+ - OH Fe2+OH
h
NR2 = NR2
h
C0 =CO
R R
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
El titanio posee un orbital d con un solo electrn: Ti 3d1 (Transparencia: Fig. 2 5).
Al unirse las seis molculas de agua al titanio se produce una repulsin de la parte negativa del agua (de
un H) con el electrn del orbital d del titanio. Se produce una degeneracin de estos niveles resultando que los
orbitales dz2 y dx2y2 tienen mayor probabilidad que los otros tres.
Este incremento representa la amplitud del desdoblamiento de estos orbitales y es una medida de la
fuerza del campo de ligando, es decir, una medida de la extensin con que un grupo complejante desdoblar los
niveles de energa, en este caso, los niveles de energa d.
El valor de este incremento es = 20400 cm 1. Esto corresponde a una longitud de onda de 490 nm.,
como observamos en el espectro de absorcin de la figura 2 1 (Transparencia).
La magnitud de este incremento depende de varios factores:
1. ) La carga del ion metlico; aumentando este valor a la vez que aumenta la carga del ion metlico.
2. ) La posicin del elemento en el sistema peridico, para un determinado elemento,
este incremento aumenta con el nmero cuntico principal del orbital del ion metlico.
3. ) La naturaleza del ligando. Este incremento es la funcin de la distribucin de su
densidad de carga y de su polarizabilidad.
Con pocas excepciones, los ligandos se suelen ordenar en valores crecientes de este incremento,
obtenindose la serie espectroqumica:
I < Br < Cl < F < OH < C2O42 < C2H2OH < H2O < SCN < NH3 < < etilendiamina
< NO2 < o fenantrolina
Un efecto visible de la serie espectroqumica es por ejemplo en el cobre:
Cu (H2O)42+ azul plido
Cu (NH3)42+ azul intenso
debido al efecto del aumento del campo de ligando cuando sustituimos el agua por el amoniaco.
Los lantnidos y los actnidos, poseen subniveles 4f y 5f incompletos, y por tanto, presentan bandas de
absorcin de campo de ligando.
3. INSTRUMENTACIN
Existen dos tipos de instrumentacin para medidas de absorcin UV:
Filtros
- Fotmetros
Fototubos
Monocromadores
- Espectrofotmetros
Fototubos o tubos multiplicadores
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
T (%) A (%)
80 20
35 65
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Este proceso se puede repetir tantas veces como queramos, pero en general los aparatos no llevan
ms de 10 12 dnodos. La seal de salida puede a su vez amplificarse. Por tanto, es el detector
ms sensible en el UV V.
5. Procesador de seales.
En general, es un dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica del detector;
as mismo, permite eliminar componentes indeseados. Puede tambin alterar la seal de la
corriente, cambiarla de fase, filtrarla. Tambin puede realizar operaciones matemticas con la
seal como diferenciales, derivadas, integral...
Lectura directa
- Doble haz
Compensacin
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Existen finalmente, los instrumentos multicanal; en stos, la radiacin de la fuente pasa a travs de la
muestra y, a continuacin, sta radiacin se enfoca en una rendija de entrada que pasa luego a una red de
reflexin. El detector consiste en una serie de 316 diodos, obtenindose una resolucin espectral de 2 nm en toda
la regin (200 820) nm.
La estabilidad de la fuente y del sistema electrnico es tal que, la seal del blanco necesita ser
almacenada cada diez minutos aproximadamente. Estos instrumentos tambin van acoplados a ordenadores.
Debido a los pocos instrumentos pticos que poseen, el rendimiento de la radiacin es ms elevado que
en los espectrofotmetros tradicionales. (Transparencia. Figura 7.20)
4. APLICACIONES
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Los componentes que contienen grupos cromforos, son susceptibles de esta determinacin (alquenos,
alquilos, cetonas).
As mismo, se pueden determinar tambin componentes inorgnicos como nitratos, nitrito, ozono, iones
de los metales de transicin, yodo, etc.
0 fenantrolina Fe3+
Dimetilglioxima Ni2+
Dimetilditiocarbonato Cu2+
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
- Conocer las variables que afectan a la absorvancia natural del disolvente, pH de la disolucin,
temperatura, [electrolitos] y la presencia de sustancias interferentes.
Los efectos de todas estas variables se deben de conocer, y las condiciones para el anlisis se eligen de
manera que la absorvancia no este afectada por variaciones incontroladas de estos parmetros.
- Medida de la muestra: hay que tener en cuenta la limpieza y manipulacin de las cubetas.
- Determina la relacin entre absorbancia y concentracin. Una vez seleccionadas las condiciones
ptimas pasamos a construir la curva de calibrado usando patrones de [ ] conocidas, y que abarquen el intervalo
de [ ] esperado en las muestras problema:
A
Y = mx + a
m=
[ ]
*
C
ATotal = A1 + A2 + ... + An
ATotal = 1 b c1 + 2 b c2 + ... + n b cn
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Esta relacin hace posible la determinacin cuantitativa de los compuestos de una mezcla incluso si sus
espectros se superponen. (Transparencia Figura 6 10).
Es posible resolver estos dos componentes simultneamente presentes en la misma disolucin. Para ello
la absorbancia a es:
Compuesto N
A = M b cM + N b cN
compuesto M
y a A = M b cM + N b cN
Es posible llevar a cabo la determinacin simultanea sin conocemos laos valores de la absortividad
molar a estas dos longitudes de onda. Esto se determina utilizando rectas de calibrado construidas a partir de
estndares individuales de cada una de ellas.
Conocidos los valores de la absortividad molar, medimos las absorvancias A y A, por lo que solo
tenemos que despejar la [ ] de cada uno de ellos.
Para la eleccin de estas longitudes de onda, lo ideal es usar aquellas longitudes de onda donde aquellos
de los compuestos presenten una seal mxima y la otra mnima o despreciable. Esto se puede aplicar siempre
que no haya interacciones entre los compuestos.
Tericamente, se puede aplicar a sistemas con ms de dos componentes, sin embargo, las
indeterminaciones en los datos se hacen mayores a medida que el nmero de medidas aumenta.
d Am d m b CM d m b CN
= +
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
d M b CM d m b CM d m b CM
d Am CN d N
=
d M b CM CM d M
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Interferencia
1
1 1
1 2
= []
Estas valoraciones presentan resultados ms satisfactorios que los obtenidos mediante anlisis
fotomtrico directo, ya que se utilizan los datos de varias medidas para determinar el punto final y adems, la
presencia de otras especies absorbentes pueden no interferir.
Algunos ejemplos concretos son valoraciones son EDTA y otros agentes complejantes, muchos de los
reactivos usados en reacciones redox que presentan espectros de absorcin caractersticos o valoraciones de
mezclas de cationes con un mismo reactivo mediante la formacin de complejos por diferente absortividad
molar.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
A (340nm)
Cu2+
P.F.
Bi3+
P.F.
V (EDTA)
TEMA 6:
1. INTRODUCCIN
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Este proceso de emisin se conoce con el nombre de luminiscencia, trmino que engloba la
fluorescencia y fosforescencia.
Las dos primeras alternativas son poco probables y solo ocurren en gases a presiones muy bajas.
Cuando la molcula se encuentra en el nivel vibracional ms bajo del estado electrnico excitado, puede perder
el exceso de energa para volver al estado fundamental de tres maneras:
1.) Sin omitir radiacin perdiendo la energa electrnica mediante choques o interacciones, es decir,
en forma de calor.
2.) Emitiendo un fotn de radiacin ultra violeta o visible Fluorescencia.
3.) Pasando a un nuevo estado excitado metaestable llamado triplete, y volviendo al estado
fundamental despus de un cierto tiempo emitiendo un fotn de radiacin ultravioleta - visible
Fosforescencia.
En la mayora de las molculas que estn en estado fundamental cada orbital molecular est ocupado
por un par de electrones que como consecuencia del Principio de Exclusin de Pauli, tendrn espines opuestos, y
por tanto, el espn neto ser cero, tal estado es conocido como Singlete.
Cuando un electrn de un estado singlete es promovido a un nivel de energa superior, su espn puede
mantenerse apareado ante el electrn, ante el orbital original, (Fotocopia), obtenindose un singlete excitado o
bien en el estado excitado puede alinearse con dicho espn, dando lugar a un Triplete. En este caso los espines
sern iguales.
Segn la regla de Hund, la energa asociada a espines paralelos es menor que la asociada a espines
opuestos, y por tanto, el estado triplete en estado excitado tiene menor energa que el singlete excitado, ya que
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
una transicin singlete triplete o viceversa es menos probable que una transicin singlete singlete, puesto que
supone un cambio ms profundo en el estado electrnico.
La vida media de un estado excitado triplete ser siempre ms larga que la de un singlete, pudiendo
oscilar desde 10 4 seg. a varios segundos.
Procesos en molculas en estado excitado: los principales procesos que implican estado excitados son:
1.) Absorcin
Cuando una molcula absorbe energa de una longitud de onda determinada, una de los electrones
acoplados pasa del nivel vibracional ms bajo del estado fundamental a cualquier nivel ms bajo del primer
singlete excitado o tal vez si la energa es la adecuada al segundo singlete excitado. Estas transiciones son
altamente especificas, de manera que la radiacin de una determinada energa es absorbida por solo una
estructura caracterstica y son las responsables del espectro de absorcin ultravioleta de la sustancia en cuestin.
Por otro lado, la excitacin directa a un estado triplete por absorcin
generalmente no ocurre por tratarse de una transicin prohibida. Sin
embargo, un triplete puede originarse a partir de un singlete excitado de
mayor energa. La molcula en estado excitado puede volver a estado
fundamental por varios caminos.
Estado favorecido: aquel que conduzca al mnimo la vida del estado excitado.
La interpretacin de la luminiscencia requiere adems considerar estos procesos.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
6.) Fosforescencia
Cuando la transicin desde un estado excitado triplete al estado fundamental es acompaada por la
emisin de un fotn, como es un proceso de espn prohibido, una transicin triplete singlete es mucho menos
probable que una transicin singlete singlete.
La vida media del estado triplete excitado respecto a la desactivacin por emisin, es siempre menor
que la de un singlete.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Sin embargo, la prdida del disolvente y la capacidad para la formacin de enlaces por puentes de
hidrgeno son crticos, ya que afecta a la naturaleza del estado excitado.
4. INSTRUMENTACIN Fig. (8 7)
Los fluormetros (anlogos a los fotmetros de absorcin en los que se usan filtros para seleccionar la
longitud de onda de los haces de excitacin y emisin) y los espectrofluormetros (que utilizan
monocromadores).
1.) Fuente:
Normalmente en los fluormetros se emplea una lampara de arco de Hg y en los espectrofluormetros se
usa una lampara de arco de Xe, siendo el espectro de esta lampara continuo desde 300 a 1300 nm.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
2.) Filtros:
Los monocromadores utilizan filtros de interferencia y absorcin en fluormetro y cromatografa en
espectrofluorimetros.
En cuanto a los monocromadores, actualmente se usan los de tipo red, ya que proporcionan rejas de
separacin de longitud de onda como en los prismas, y dispersan linealmente la radiacin.
4.) Detectores:
Para amplificar la seal se usan tubos fotomultiplicadores, en espectofluorimetros tambin se han usado
detectores con diodos (componente electrnico que permite el paso de la corriente en un solo sentido) alineados.
Ip = K p I0 (23 bc)
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
5. APLICACIONES
Los mtodos de fluorescencia y fosforescencia son ms sensibles,
selectivos y aplicables a intervalos de concentracin ms bajos que los
espectrofotomtricos. Por otro lado la exactitud y precisin de los mtodos
fotoluminiscentes es normalmente peor que la de los espectrofotomtricos.
Generalmente los mtodos fosforescentes son menos precisos que los fluorescentes.
Los campos de aplicacin pueden incluirse en dos grandes grupos:
- Anlisis cualitativo y estructural
- Anlisis cuantitativo
Si bien es usada tambin la fluorescencia como tcnica auxiliar de otras tcnicas.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Casos:
Uso de indicadores fluorescentes en volumetras cido-base, precipitacin y complejacin.
Tambin se puede usar para seguir reacciones catalizadas por enzimas y determinar la actividad
de la enzima. Ej. Tomamos una sustancia no fluorescente sobre la cual acta la enzima para
producir fluorescencia o concentracin de la misma.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
TEMA 7:
2. ATOMIZACIN DE LA MUESTRA
Los atomizadores son de dos tipos:
- Continuos.
- Discretos.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
atomizacin se producen en un breve periodo de tiempo. En estas circunstancias, la seal espectral adquiere la
forma de un pico bien definido. Los atomizadores electrotrmicos son de este tipo, as como la atomizacin con
chispa elctrica. Mientras que, en un arco elctrico se emplean tanto el modo continuo como el discreto,
dependiendo del tipo de muestra que se analiza.
3. ESPECTROS ATMICOS
Cuando una muestra se atomiza por cualquiera de los procedimientos anteriores, una importante fraccin de
los constituyentes metlicos se transforman en tomos gaseosos y adems, segn la temperatura del atomizador,
una cierta fraccin de estos tomos se ioniza originndose as una mezcla gaseosa de tomos e iones elementales.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
las ms intensas y las responsables del color amarillo que se observa cuando se introducen las sales del Na en
una llama. (Figura 10 5).
Adems, este pico ms ancho corresponde a las transiciones de 3p a 3s y el pico que aparece a 5700
corresponde a dos picos no resueltos a las dos transiciones 4d a 3p. El poder de resolucin del monocromador
es insuficiente para poder separar los picos.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
efecto del campo magntico o elctrico, y efectos de presin, debido a colisiones del tomo, dan lugar a que
estos efectos generen el ensanchamiento de las lneas espectrales.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
5. ATOMIZACIN ELECTROTRMICA
Los atomizadores electrotrmicos proporcionan mayor sensibilidad, debido a que toda la muestra se atomiza
en un periodo muy breve y el tiempo de residencia de los tomos en el camino ptico es de un segundo o ms.
Los atomizadores electrotrmicos se usan para las medidas de absorcin atmica y fluorescencia atmica, pero
no se han aplicado en los mtodos de emisin
Con estos atomizadores, se evaporan primero unos pocos microlitos de muestra a baja temperatura, y luego
se calcina a una temperatura alta, en un tubo o cubeta de grafito calentado elctricamente.
Despus de la calcinacin, la corriente se incrementa a varios cientos de amperios, lo que hace que la
temperatura suba aproximadamente a 2500C, producindose la atomizacin de la muestra en un tiempo que va
de unos pocos milisegundos a un segundo. Es estas condiciones, se mide la absorcin o la fluorescencia de las
partculas atomizadas en la zona situada inmediatamente encima de la superficie calentada. (Figura 10 16)
(Figura 10 17)
Los atomizadores electrotrmicos presentan la ventaja de su elevada sensibilidad. La precisin relativa de
estos mtodos est entre el 5 10% en comparacin del 1% o menos, que se puede obtener en la atomizacin
con llama o plasma. Adems estos mtodos son cortos.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Una desventaja es el intervalo analtico en el que se puede trabajar, pues es pequeo, siendo por lo general,
mayor de dos rdenes de magnitud. En consecuencia, la atomizacin electrotrmica se usa slo cuando la
atomizacin con llama o plasma no proporciona los lmites de deteccin adecuados.
- Modulacin de la fuente
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Es un instrumento de absorcin atmica para eliminar las interferencias producidas por la emisin de
radiacin de la llama. La mayor parte de la radiacin emitida por la llama se elimina mediante el monocromador,
pero la radiacin emitida correspondiente a la longitud de onda seleccionada por el monocromador, est siempre
presente en la llama, debido a la excitacin y emisin de los tomos del analito.
A fin de eliminar los efectos de la emisin de la llama, es necesario modular la salida de la fuente para que
su intensidad oscile a una frecuencia constante. Una forma, es ir interponer entre la fuente y la llama un
contador. De este modo, el detector recibe dos tipos de seales, una alterna de la fuente y otra continua de la
llama.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
causa de la interferencia. Se puede aadir un exceso de la sustancia interferente, tanto a la muestra como a los
patrones, de manera, que si el exceso es elevado con respecto a su concentracin en la matriz de la muestra, la
contribucin de sta ltima ser despreciable. La sustancia aadida se denomina Amortiguador de la radiacin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
e) Curvas de calibracin.
Peridicamente, debe prepararse una curva de calibracin en el intervalo de concentracin donde se
encuentra la muestra. Adems, debido a que en la atomizacin y en la medida de absorbancia existe un gran
nmero de variables incontroladas, cada vez que se realiza un anlisis, es necesario medir dos patrones,
cubriendo un rango de concentracin que englobe la concentracin del analito en la muestra.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
Para muchos elementos, las lneas de deteccin en espectroscopia de absorcin, en la atomizacin con llama,
se encuentran en el intervalo de 1 20 microlitos ppb 10-3 2 10-2 ppm, y con la atomizacin electrotrmica,
los valores correspondientes son 2 10-3 10-2 ppb o 2 10-6 10-5 ppm.
En cuanto a la exactitud, en condiciones normales, el error relativo asociado al anlisis de absorcin con
llama, es del orden de l 2 %, pudiendo disminuir estas cifras cuando se toman precauciones especiales, y los
errores que se muestran con la atomizacin electrotrmica son de 5 10 veces ms altas que los obtenidos con la
atomizacin con llama.
7.1. Instrumentacin
Los instrumentos para trabajar con la emisin de llama, son parecidos a los de absorcin, excepto por el
hecho de que en los primeros, la llama acta como fuente de radiacin, y en consecuencia, la lmpara de ctodo
hueco y el contador, son necesarios. Para los anlisis que no son de rutina, resulta ms conveniente usar un
espectrofotmetro ultravioleta visible. Con un registrador de una resolucin aproximada de 0,5 . El
registrador constituye un medio sencillo para realizar correcciones de fondo.
Para el anlisis de rutina para metales alcalinos y alcalinoterreos, es suficiente la utilizacin de fotmetros
simples de filtros; en estos casos se usa una llama a baja temperatura, para evitar la excitacin de los dems
metales, por lo que los espectros obtenidos son simples y pueden usarse filtros de interferencia para aislar la
lnea de emisin que se desee. Algunos fabricantes construyen fotmetros de llama diseados especficamente
para el anlisis de Na, Ka, Li en suero sanguneo y otras muestras biolgicas. En ellos, la radiacin que proviene
de la llama, se divide en tres haces de aproximadamente la misma intensidad, y cada uno de ellos pasa a travs
de la superficie fotomtrica independiente, constituido por un filtro de interferencias, un fototubo y un
amplificador.
7.2. Interferencias
- Interferencias de banda
En muchas ocasiones, se observa que las lneas de emisin aparecen superpuestas sobre bandas emitidas
por xidos y otras especies moleculares de la muestra, combustible u oxidante, y es posible corregir el fondo
tocando datos, es decir, unos pocos nm (nanmetros) a cada lado del pico del analito. En instrumentos que no
tienen registrador, se realiza una medida a cada lado del pico, aumentando el promedio de las dos medidas, y se
resta de la altura total del pico.
- Interferencias qumicas
Son esencialmente las mismas que se encuentran en los mtodos de absorcin de llama.
Se evitan mediante la eleccin de la temperatura y el uso de agentes protectores, liberadores y
supresores de ionizacin.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
- Autoabsorcin
El centro de una llama est ms caliente que su parte externa, y por ello los tomos que emiten en la
zona central, estn rodeados por una regin ms fra que contiene una elevada concentracin de tomos no
excitados, de manera que se produce la autoabsorcin de la longitud de onda de resonancia por los tomos de la
capa ms fra.
En una situacin extrema, el centro puede resultar menos intenso que los bordes, o incluso desaparecer,
y el resultado es el desdoblamiento por autoinversin del mximo de emisin en lo que aparentemente son dos
picos. La autoabsorcin resulta molesta cuando el analito est a elevada concentracin. En estas circunstancias,
es preferible emplear para el anlisis, una lnea no resonante, la cual, no puede experimentar autoabsorcin.
La autoabsorcin y la ionizacin, producen a veces, unas curvas de calibracin de emisin con forma de
S en tres segmentos distintos, y as en concentraciones intermedias.
Por ejemplo; de K se observa una relacin lineal entre intensidad y concentracin, pero la baja
concentracin aparece una curvatura que se debe al elevado grado de ionizacin en la llama y a concentracin
elevada, la autoabsorcin provoca desviaciones negativas de la linealidad.
Precisin y exactitud
La incertidumbre obtenida por los operadores expertos, es ms o menos la misma para ambos procedimientos.
Los mtodos de absorcin atmica presentan menos problemas. Los procedimientos de absorcin atmica, estn
menos sujetos a interferencias de lneas espectrales, aunque los mtodos de emisin de este tipo de interferencias
se reconocen y se pueden evitar fcilmente.
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Tema 1: Metodologa Analtica Anlisis Instrumental I
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