UNIVERSIDAD AUTNOMA

DE CAMPECHE

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICA BIOLGICAS

Qumico Farmacutico Bilogo

Alumno (a):
Flix Mndez Sonia.
Docente:
Baldemar Ak Canche.

Materia:

Anlisis Bioqumicos Clnicos 1

Practica: N7 Determinacin De Calcio

semestre: 6 Grupo: B

Da de realizacin de la prctica: 23 de Marzo del 2017

San Francisco de Campeche a 06 de abril del 2017
CONTENIDO

INTRODUCCIN.............................................................. Error! Bookmark not defined.

Procedimiento cloro ...................................................... Error! Bookmark not defined.

Tcnica.......................................................................... Error! Bookmark not defined.

RESULTADOS ................................................................. Error! Bookmark not defined.

Calculo para sacar la concentracin .......................... Error! Bookmark not defined.

DISCUSIN ..................................................................... Error! Bookmark not defined.

CONCLUSIN ................................................................. Error! Bookmark not defined.

CUESTIONARIO .............................................................. Error! Bookmark not defined.

BIBLIOGRAFA ................................................................ Error! Bookmark not defined.

PRCTICA 5. DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA

INTRODUCCIN
El tiempo de vida de los eritrocitos es un promedio de
unos 120 das, despus de los cuales son destruidos
en el sistema reticuloendotelial. Los componentes de la
molcula de hemoglobina son metabolizados en forma
diversa: el hierro es conservado en el organismo y
reutilizado para la sntesis de nuevas molculas de
hemoglobina y otros compuestos que contienen este
elemento. La globina es metabolizada posteriormente;
el grupo hem bajo la accin de la enzima hemoxigenasa, se convierte en biliverdina,
que es a su vez convertida en rpidamente en bilirrubina por otra enzima, la biliverdina
reductasa. La bilirrubina es liposoluble, se difunde fcilmente a travs de las
membranas celulares y entra a las clulas, donde puede interferir con los procesos
normales de la fosforilacin oxidativa en las mitocondrias. Sin embargo, el organismo
impide la difusin de este pigmento hacia las clulas, a travs de la unin de la
bilirrubina con la albmina de la sangre circulante. La excrecin del pigmento es
posible gracias a su conjugacin con el cido glucurnico, con lo que se vuelve ms
polar, hidrosoluble y capaz de ser excretada por las vas biliar e intestinal.
La bilirrubina tambin se forma a travs de otra va metablica: la lisis intravascular
de los eritrocitos, proceso en el que se libera hemoglobina que es fijada por la
hepatoglobina y posteriormente captada por los hepatocitos. La membrana de los
hepatocitos es sumamente permeable a la bilirrubina. La conjugacin con el cido
glucurnico, y probablemente en menor grado con otros radicales como los sulfatos,
convierte a la bilirrubina libre en bilirrubina conjugada, la suma de ambas ser la
bilirrubina total. La conjugacin se realiza en el retculo endoplsmico liso y es
mediada por la enzima glucuroniltransferasa.
Los procedimientos para la determinacin srica estn basados en la clsica reaccin
Diazo de Erlich. En sta, cuando una solucin de cido sulfanlico en cido clorhdrico
diluido es combinada con Nitrito de sodio, se forma cido nitroso. Este cido inestable,
el cual debe ser preparado en el momento del ensayo, reacciona para formar cido
sulfanlico diazotizado. Este ltimo se acopla con la bilirrubina para producir
azobilirrubina, la intensidad de color de este es proporcional a la concentracin de
bilirrubina.
Ya que los estndares de bilirrubina sufren una gran degradacin por su inestabilidad,
el mtodo presentado utiliza una solucin acuosa de N-1naftilendiamina
dihidroclorhdrico como calibrador, de acuerdo con Bilissis y Speer.
Esta amina aromtica estable pura se acopla con el cido sulfanlico diazotizado bajo
las condiciones de prueba para dar un colorante azo con cualidades espectrales
similares a la azobilirrubina. El calibrador proporcionado ha sido preparado para
obtener un color equivalente al nivel de bilirrubina a 540 nm. En el suero se determina
qumicamente la bilirrubina total y directa y se calcula la indirecta por diferencia.
Lo normal es una concentracin de bilirrubina total menor de 1.2 mg/dL y la mayor
parte es bilirrubina indirecta.

OBJETIVO
Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de determinar la concentracin de
Bilirrubinas del suero de un paciente mediante una tcnica colorimtrica, utilzando de
manera correcta los equipos de laboratorio (analizadores), con el propsito de evaluar
la funcin del hgado.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales Equipos Reactivos

5 Tubos de ensaye. Espectrofotmetr cido

o MBA 20002 sulfanlico,
1 Equipo para extraccin
Pizeta. Perkin cido
5 Pipetas Pasteur. Elmer clorhdric
6 Guantes de ltex. 1Centrfuga J-600, o diluido.
Marca SOLBAT
2 Gradillas
metl
icas.
Agua destilada.
10 Gasa no estril.

PROCEDIMIENTO
Procedimiento bilirrubina total (STANBIO) CLAVE 0807838074, LABORATORIOS LICON,
S.A.
. Longitud de onda: 540 nm ( 560-580 nm )
Blanco de Calibrador Blanco de Muestra
1,2,3
. Cubeta: 1 cm de paso de luz
. Temperatura: ambiente (no inferior a 20 o C o 37 o C)
. Lectura frente a un blanco de muestra .
Tiempo de lectura: 4 seg.
. Direccin de la reaccin: incremento
. Tipo de reaccin: Punto final

Preparacin del reactivo de trabajo

Aada una gota (50 L) de Bilirrubina Oxidante a cada mL de reactivo de

Bilirrubina Total. Invierta suavemente de 3 a 4 veces. El calibrador est listo para
su uso.

Estabilidad y almacenamiento del reactivo.

Cuadro 7. Tcnica de bilirrubina

Reactivo de 1.0 1.0 1.0 1.0

Bilirrubina
 Total 1 1 - 1
Oxidante
(gotas) 0.05 - - -
Agua destilada
Calibrador - 0.05 - -

Muestra - - 0.05 0.05

El reactivo de Bilirrubina Total, el reactivo oxidante y el estndar son estables cuando

se almacenan a temperatura ambiente, hasta la fecha de caducidad indicada en su
respectiva etiqueta. Descartar el oxidante si presenta una coloracin amarillo oscuro.
El reactivo de trabajo es estable por 7 das de 2-8 C o por 24 horas a 37C.

Tcnica

Pipetee en cubetas
o tubos de ensaye
marcados como
(blanco de reactivo)
RB, Calibrador C, Incube las
Ajuste a 0 el
blanco de muestra cubetas a Lea C y M BM vs
Espectrofotmetr
(MB) y Muestra temperatura BR a 540 nm en
(M) los volmenes o a 540 nm con el
ambiente por lo menos de 30 min
(mL) excepto el reactivo.
menos 3 minutos.
oxidante, el cual es
1 gota, mezclando
bien despus de
cada adicin.

Clculos
LInealidad
El Mtodo es lineal hasta 20 mg/dL
Sensibilidad 0.018 mg/dL por 0.001
unidades de Abs.
Factores que interfieren en los resultados:

La novobiocina incrementa los niveles de bilirrubina

La exposicin de la muestra a la luz solar directa o a los rayos

UV puede hacer que disminuyan los niveles de bilirrubina.

La hemlisis por el manejo demasiado vigoroso de la

muestra puede alterar la cuantificacin de la bilirrubina.

Notas: Utilcense muestras recientes protegidas de la luz roja

La Hemoglobina da lugar a resultados falsamente bajos en

este anlisis: no deben emplearse muestras hemolizadas

Mtodo lineal hasta (5 mg/dl de Bilirrubina Directa).

BILIRRUBINA DIRECTA (SERA PAK DE BAYER)

Longitud de onda: 570 nm (560 580 nm) Cubeta: 1 cm de paso de luz

Temperatura: ambiente (no inferior a 20 C) o 37 o C
Lectura: frente a un blanco de muestra
Tcnica
Pipetee en tubos de ensaye:

Blanco de Muestra Muestra

Muestra 0.20 0.20 mL

Reactivo ml -
3.00 ml
1 - 3.00 mL
Solucin 1

Cuadro 8. Bilirrubina directa

Mzclese y djese en reposo durante 5 minutos exactamente a temperatura ambiente
o durante 2 minutos exactamente a 37 C.
Lase la absorbencia de la muestra (A) frente al blanco de muestra a 570 nm.
 VALORES DE REFERENCIA:

Adultos e infantes (mayores de 1 mes) 0.5 mg/dL

CLCULOS
BILIRRUBINA DIRECTA

Abs muestra x 4.5 = mg de bilirrubina / Dl

Suero o plasma colectado con cualquier anticoagulante comn, libre de hemlisis y

tomado en ayunas para evitar muestras lipmicas.
Las muestras a utilizar deben ser recientes y estar protegidas de la luz del sol, as
como de la luz blanca artificial, ya que la bilirrubina es altamente fotosensible. Se ha
reportado que aproximadamente el 50% de la bilirrubina puede perderse cuando se
expone a la luz solar por 1 hora
La muestra es estable de 4 a 7 das a 2-8 o C
El mtodo es lineal hasta 15 mg/dL de bilirrubina directa.

OBSERVACIONES
La prctica se hizo automatizada
El equipo trabajo perfectamente.

RESULTADOS
Paciente: Cutz Dzib Ruth a Exponer
Test Estado Concentracin
BT final 1.13 N_N
BD final O.68 N_N
Valores de referencia
Total: 0,3 - 1,3 mg/dL (5,1 - 22 mol/L)
Indirecta: 0,2 - 0,9 mg/dL (3,4 - 15,2 mol/L)
Directa: 0,1 - 0,4 mg/dL (1,7 - 6,8 mol/L)
DISCUSIN
Nuevos glbulos rojos reemplazan todos los das una pequea cantidad de glbulos
rojos viejos. La bilirrubina queda despus de la eliminacin de estas clulas viejas. El
hgado ayuda a descomponer la bilirrubina para que pueda ser expulsada del cuerpo a
travs de las heces.

Un nivel alto de bilirrubina en la sangre puede provocar ictericia. Esta es una coloracin
amarilla en la piel, las membranas mucosas o los ojos.
La ictericia es la razn ms comn para examinar el nivel de bilirrubina. La ictericia se
presenta en los bebs ms grandes, los nios y los adultos.

Un examen de bilirrubina tambin se har si el proveedor de atencin mdica sospecha

que una persona tiene problemas en el hgado o la vescula biliar.

Nuestra paciente Cutz Dzib Ruth obtuvo valores normales en bilirrubinas totales, pero
en bilirrubinas directa obtuvo valores un poco elevada del valor normal, quizs una de
las causas es alguna enfermedad heptica.

CONCLUSIN
Pudimos determinar la concentracin de bilirrubinas del suero de la paciente cutz dzib
Ruth Esther con el equipo de laboratorios analizadores automatizados, con el propsito
de evaluar la funcin del hgado, ya que con este estudio se pueden diagnosticar
diversas enfermedades hepticas.

CUESTIONARIO
1. Explique la funcin de las bilirrubinas y la importancia clnica de su
determinacin.
La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina. Los
hemates al degradarse liberan la hemoglobina que es metabolizada a dos molculas
el grupo heme y el grupo globina, el grupo heme se transforma en biliverdina y esta en
bilirrubina a la cual se le llama "no conjugada" o indirecta. Al pasar por el hgado esta
bilirrubina se conjuga con cido glucurnido transformndose en bilirrubina
"conjugada" o directa.
El hgado segrega esta bilirrubina directa a travs de las vas biliares hacia el intestino,
al metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrn
a las heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en
forma de urobilingeno. Por lo cual se ve que una funcion especifica como tal a nivel
metabolico no tiene.
Cuando se eleva la bilirrubina, la piel y los tejidos toman un color amarillo que se llama
ictericia.
Segn cual sea el origen de la bilirrubina elevada podemos saber si es un problema de
hgado (elevacin de la bilirrubina no conjugada) o de las vas biliares (elevacin de la
bilirrubina conjugada).
Cuando se realiza un anlisis de rutina se mide la bilirrubina total (directa ms
indirecta), el 70 al 85 % corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.
Se realiza en el contexto de otras pruebas hepticas (GOT, GPT, GGT, fosfatasa
alcalina) y se utiliza para evaluar problemas o alteraciones del hgado y vas biliares.
Valores normales:
* Bilirrubina directa: 0 a 0.3 mg/dL
* Bilirrubina total: 0.3 a 1.9 mg/dL
En los pacientes con ictericia se mide la bilirrubina total la directa y la indirecta. Cuando
la fraccin conjugada o directa est elevada, ms de un 50% de la bilirrubina total, es
que hay un problema en la va biliar por clculos, inflamacin o tumores.
Cuando la bilirrubina directa o conjugada es menor del 20%, la hipebilirubinemia es del
tipo indirecto o no conjugada y puede ser debido a hepatitis a un aumento de
destruccin de hemates (hemlisis).

2. Explique por qu el mdico pediatra solicita en algunos casos en los recin

nacidos la determinacin de bilirrubinas.

Los recin nacidos sanos (en especial los prematuros) suelen ser susceptibles a la
ictericia porque los hgados no estn maduros y procesan la bilirrubina con lentitud. La
ictericia tambin es bastante comn entre los lactantes que no reciben suficiente leche
o cuyas madres producen naturalmente sustancias que elevan los niveles de
bilirrubina.

3. Diga en que consiste una ex-sanguneo transfusin y por qu en

algunos recin nacidos ictricos debe ser practicada.
Los bebs que tienen niveles elevados quizs deban someterse a fototerapia (un
tratamiento con una luz especial que facilita el procesamiento de la bilirrubina en el
hgado) o, en casos excepcionales, un procedimiento denominado "transfusin de
intercambio" en el cual se hace bajar el nivel de bilirrubina del recin nacido extrayendo
la sangre con altos niveles de bilirrubina y reemplazndola por sangre con niveles
normales de bilirrubina.
Los niveles elevados de bilirrubina en bebs tambin pueden aparecer como resultado
de la enfermedad hemoltica, una afeccin que se origina en casos de incompatibilidad
entre el tipo sanguneo de la madre y el del beb, lo que provoca una descomposicin
ms rpida de los glbulos rojos del beb.
Es probable que los mdicos realicen un anlisis de bilirrubina en otros bebs y nios
mayores que han desarrollado ictericia debido a otras enfermedades, como
enfermedad heptica, bloqueo de las vas biliares y enfermedades de la tiroides.

BIBLIOGRAFA
1.- Bishop Michael L. 2007. Qumica Clnica principios, procedimientos y correlaciones.
1 Edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana. Mxico .2.ELItech clinical Systems.
Determinacin de Bilirrubina Total y Directa
2.- ELItech clinical Systems. Determinacin de Bilirrubina Total y Directa
S.A, B. (6 de julio de 2007). Obtenido de
http://www.biosimex.com.mx/pdf/insertos/QUIMICA%20CLINICA/11515%2011511%20
11510.pdf