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Capítulo 3 Espectroscopía de Absorción Molecular - PDF
Capítulo 3 Espectroscopía de Absorción Molecular - PDF
CAPITULO III
INTRODUCCIN A LA
ESPECTROSCOPA Y
ESPECTROSCOPA
MOLECULAR: UV-Vis-IR
1|
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL
Carreras: Lic. en Bromatologa- Bromatologa
INTRODUCCIN A LA ESPECTROSCOPA
Los mtodos de anlisis que se basan en la medicin de la luz y otras formas de radiacin
electromagntica son los que ms se utilizan en la qumica analtica. La espectroscopa es una
ciencia que estudia las interacciones que suceden entre la radiacin y la materia. Los mtodos
espectroscpicos de anlisis miden la cantidad de radiacin producida o absorbida por las especies
atmicas o moleculares que se analizan. Estos mtodos tambin se clasifican de acuerdo con la
regin del espectro electromagntico que se utiliza para hacer la medicin. La espectroscopa ha
jugado un papel fundamental en el desarrollo de la teora atmica moderna. Por otra parte, tambin
han aportado las herramientas ms utilizadas para elucidar las estructuras moleculares, as como
para identificar y obtener la composicin cuantitativa y cualitativa de sustancias orgnicas e
inorgnicas.
Fig. 1. Representacin de un haz de radiacin monocromtica polarizada en el plano (a) Campos elctrico
y magntico perpendiculares entre s y respecto a la direccin de propagacin (b) Representacin
bidimensional del vector elctrico (Libro: Anlisis instrumental, Skoog)
En la Figura 1b, se muestra la amplitud (A) de una onda sinusoidal como la longitud del vector
elctrico en el mximo de la onda. El tiempo, en segundos, necesario para el paso de sucesivos
mximos o mnimos por un punto fijo del espacio se denomina el perodo (p) de la radiacin. La
frecuencia ( ) es el nmero de oscilaciones del campo por segundo y es igual a 1/p. La unidad
de frecuencia es el hertz (Hz) y equivale a un ciclo por segundo (1 Hz = s -1).
Otro parmetro de inters es la longitud de onda (), que es la distancia lineal entre dos puntos
equivalentes de ondas sucesivas (por ejemplo, sucesivos mximos o mnimos).
La multiplicacin de la frecuencia en ciclos por segundo por la longitud de onda en metros por
ciclo da la velocidad de propagacin (i ) en metros por segundo:
La potencia (P) de la radiacin es la energa en watts (W) del haz que llega a un rea dada por
segundo, mientras que la intensidad ( I ) es la potencia por unidad de ngulo slido. Aunque
rigurosamente no es correcto, potencia e intensidad se usan a menudo como sinnimos.
Aumento de
longitud de
onda
Fig. 2. Diagrama de las regiones del espectro electromagntico con longitudes de onda y frecuencias de la radiacin
electromagntica. (Libro: Anlisis intrumental. Rubinson)
Obsrvese que una mnima parte del espectro corresponde a la luz la cual es la radiacin
electromagntica en la regin espectral visible para el ojo humano normal. El intervalo de longitud de
onda de la luz es aproximadamente de 380 a 780 nm.
La radiacin ultravioleta abarca el intervalo espectral desde 180 hasta 380 nm. Para anlisis se
emplea generalmente entre 200 a 380 nm. La radiacin infrarroja abarca el intervalo espectral de
0.78 a 300 m aproximadamente, pero el que se emplea ms comnmente en anlisis es de 2.5 a 25
m.
La Tabla 1 recoge los intervalos de longitud de onda y de frecuencia de las regiones del espectro que
interesan con fines analticos, as como los nombres de los diversos mtodos espectroscpicos
asociados con cada uno. La ltima columna de la tabla indica los tipos de transiciones cunticas
nucleares, atmicas o moleculares debidas a las interacciones de la radiacin con una muestra y que
constituyen el fundamento de las distintas tcnicas espectroscpicas. Obsrvese que la radiacin de
baja energa utilizada en la resonancia magntica nuclear (RMN) ocasiona cambios mnimos, como
los cambios de orientacin en el espn; por su parte la radiacin de alta energa que utiliza la
espectroscopa de rayos gamma puede inducir efectos ms drsticos, como son los cambios en la
configuracin nuclear. En nuestro curso, estudiaremos las transiciones debidas a la radiacin en la
zona UV, visible e infrarrojo. Las primeras producen cambios en la distribucin electrnica y la ltima
genera rotaciones y vibraciones en las molculas.
Capa de valencia Capa interna
Orientaciones de espn Rotaciones Vibraciones Transiciones
INTERACCIN (transiciones (transiciones
moleculares moleculares nucleares
electrnicas) electrnicas)
Fig. 3. Tipo de espectroscopia y las interacciones atmicas y moleculares en las cuales estn basadas.
Absorcin, emisin,
0
fluorescencia y difraccin 0,1 - 100 A ------- Electrones internos
de rayos X
Absorcin ultravioleta de 6 4
10 -180 nm 1x10 a 5 x10 Electrones de enlace
vaco
Absorcin, emisin y
4 4
fluorescencia ultravioleta 180 -780 nm 5 x 10 a 1,3 x 10 Electrones de enlace
visible
Absorcin y dispersin 4 1 Rotacin /vibracin de
0,78 300 m 1,3 x 10 a 3,3x10
Raman infrarroja molculas
Los espectros de absorcin son de utilidad tanto para seleccionar la longitud de onda ms
adecuada para una medida cuantitativa (longitud de onda a la que la absorcin es mxima),
como para fines de identificacin cualitativa.
En la qumica analtica instrumental, el trmino espectro posee diversas variantes. Un
espectro de emisin se obtiene por separacin de las longitudes de onda individuales de la
energa emitida por una fuente de luz. Un espectro de absorcin es el conjunto de lneas o,
ms frecuentemente, bandas cuyas longitudes de onda son absorbidas por el medio al pasar
por ste la luz compuesta.
Los cambios en una molculas ocasionados por absorcin de luz pueden ser electrnicos
(cambio en la energa de los electrones distribuidos alrededor de los tomos de la molcula),
vibracionales (cambios en la separacin promedio de los ncleos de uno o ms tomos) y
rotacionales (rotacin de un dipolo qumico). Se necesita una radiacin de energa ms alta
para que se efecten transiciones electrnicas (cambios) que la necesaria para que se
efecten transiciones rotacionales o vibracionales.
b) Proceso de emisin: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser excitados, de retornar
a su estado fundamental, produciendo una emisin de energa electromagntica. La luz
emitida se puede medir, y ello constituye el principio de algunas tcnicas, como la Fotometra
de llama, o la Fluorescencia. Este fenmeno puede representarse de la siguiente manera:
La energa radiante emitida cuando el analito regresa a su estado basal, puede dar
informacin sobre la naturaleza del mismo y de su concentracin.
La radiacin electromagntica se origina cuando partculas excitadas (iones, tomos o
molculas) se relajan a niveles de energa basal cediendo su exceso de energa en forma de
Captulo III Introduccin a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR 6|
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fotones. La excitacin puede producirse por diversos medios, tales como el bombardeo con
electrones u otras partculas elementales, la exposicin a chispas de corriente alterna de
potencial elevado, el tratamiento trmico en un arco o una llama, o la absorcin de radiacin
electromagntica.
Las partculas elementales radiantes (tomos o iones atmicos) que estn muy separadas
entre s, como en el estado gaseoso, se comportan como cuerpos independientes y, a
menudo, producen radiacin que contiene slo unas pocas longitudes de onda especficas.
Por tanto el espectro resultante es discontinuo y se denomina un espectro de lneas. Por otro
lado, un espectro continuo es aqul en el que todas las longitudes de onda estn presentes
dentro de un intervalo apreciable, o uno en el que las longitudes de onda estn tan prximas
entre s que la resolucin no es factible por medios ordinarios.
Tanto los espectros continuos como los de lneas tienen importancia en qumica analtica
instrumental. Los primeros se emplean con frecuencia como fuentes en mtodos basados en
la interaccin de la radiacin con la materia, como la espectrofotometra. Por otra parte, los
espectros de lneas son importantes porque permiten la identificacin y determinacin de las
especies emisoras.
P0 P
Solucin absorbente de
concentracin c
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partculas
absorbentes, la absorcin de la radiacin atena, es decir disminuye la energa, del rayo incidente
desde P0 hasta P de acuerdo, con la ley de la absorcin. Cuanto mayor sea la trayectoria del rayo
en la solucin de analito de una concentracin dada, habr ms especies que absorban la radiacin y
la atenuacin ser mayor.
La transmitancia T de la solucin es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin, tal
como se muestra en la ecuacin 4. A menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P (4) P (5)
T %T .100
P0 P0
La absorbancia A de una solucin es una medida que relaciona en forma logartmica la radiacin
incidente y la que emite la muestra. Est relacionada con la transmitancia en forma logartmica
(ecuacin 5) y viene definida por la ecuacin:
P P (6)
A logT log log 0
P0 P
Obsrvese que el aumento en la absorbancia de una solucin se acompaa de una disminucin en la
transmitancia y que, a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin aumenta cuanto
mayor es la atenuacin del haz.
La ley de la absorcin, tambin conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer,
da informacin cuantitativa de cmo es que la atenuacin de la radiacin depende de la
concentracin de las molculas que la absorben y de la distancia que recorre el rayo en el medio
absorbente. Volviendo al anlisis de la figura 5, la ley de absorcin establece la relacin entre el
grado de absorbancia de una solucin y otras dos variables: la concentracin del absorbente y la
longitud del trayecto que el haz de luz recorre a travs de la solucin. Experimentalmente se muestra
que la absorbancia es directamente proporcional a:
La longitud de paso ptico (b) a travs del cual la luz viaja hacia la muestra. A menudo se
expresa en cm.
La concentracin de la sustancia que absorbe la luz. Puede expresarse en gramos/ litro (c) o
moles / litro (C).
(6)
A= abc A=bC
La ley de Beer se puede utilizar en distintas maneras. Pueden calcularse las absortividades molares
de las especies si se conocen sus concentraciones. Tambin se puede emplear el valor de la
absorbancia medida para conocer la concentracin si es que se conocen la absortividad y la longitud
de la trayectoria de la radiacin. Sin embargo, la absortividad es una funcin de diversas variables,
tales como el disolvente, la composicin de la solucin, la temperatura y la longitud de onda. Por esta
razn es aconsejable no depender nunca de los valores dados en la literatura para hacer un anlisis
cuantitativo. Para conocer la absortividad en las condiciones de anlisis, se construye una curva de
calibracin.
La ley de absorcin tambin se aplica a soluciones que contengan ms de una clase de especies
absorbentes. Suponiendo que no haya interaccin entre las distintas especies, la absorbancia total
para un sistema multicomponente se expresa como la suma de las absorbancias parciales en la que
los subndices 1, 2, ., n se refieren a los componentes absorbentes.
Atotal = A1 + A2 + . . . . + An
Atotal = 1bc1 + 2bc2 + . . . + nbcn
ESPECTROSCOPA UV V IR
Los primeros instrumentos espectroscpicos se desarrollaron para utilizarse en la regin
visible y por tanto se denominaron instrumentos pticos. Hoy en da, este trmino se ha ampliado con
el fin de incluir tambin a los instrumentos diseados para las regiones ultravioleta e infrarroja.
Aunque la terminologa no es estrictamente correcta, sirve para subrayar los numerosos aspectos
comunes a los instrumentos usados en esas tres importantes regiones espectrales.
El objetivo de este captulo es describir aquellos componentes de los instrumentos
pticos que son comunes a todas las diversas tcnicas pticas espectroscpicas que se
tratan.
Los instrumentos para estudios espectroscpicos de regiones ms energticas que la
ultravioleta y menos que la infrarroja poseen caractersticas que difieren sustancialmente de las de los
instrumentos pticos.
Fuente de lmpara
o de slido
incandescente
(1)
Fuentes de radiacin
Para utilizarse en espectroscopa una fuente debe generar un haz de radiacin con potencia
suficiente para que se detecte y mida con facilidad. Adems su potencia de salida debe ser
estable durante perodos de tiempo razonables.
Tpicamente, la potencia radiante de una fuente vara de manera exponencial con el potencial de la
fuente de alimentacin elctrica.
Para proporcionar la estabilidad necesaria, a menudo, se utiliza una fuente reguladora de potencia.
El problema de la estabilidad de la fuente se soluciona con diseos de doble haz en los que la
relacin de la seal de la muestra respecto a la de la fuente en ausencia de muestra sirve como
parmetro analtico. En dichos diseos, las intensidades de los dos haces se miden simultnea o
casi simultneamente de manera que el efecto de las fluctuaciones de la seal de salida de la
fuente se anula en gran parte.
Las fuentes espectroscpicas ms ampliamente utilizadas son de dos tipos: continuas y de lneas.
a - Fuentes continuas:
Las fuentes continuas se usan mucho en espectroscopia de absorcin y de fluorescencia . La
fuente ms comn para la regin ultravioleta es la lmpara de deuterio. Cuando se precisa
una fuente particularmente intensa, se utilizan lmparas de arco llenas de un gas, argn,
xenn o mercurio a alta presin. Para la regin visible del espectro, la lmpara de filamento
de tungsteno se usa casi universalmente. Las fuentes de infrarrojo ms comunes son slidos
inertes calentados a 1500-2000 K, una temperatura a la que la mxima salida radiante se
produce entre 1,5-1,9 m.
b - Fuentes de lneas:
Las fuentes que emiten unas pocas lneas discretas se usan ampliamente en espectroscopia
de absorcin atmica, en espectroscopia de fluorescencia atmica y molecular y en
espectroscopia Raman (la refractometra y la polarimetra tambin emplean fuentes de lneas)
Las familiares lmparas de vapor de mercurio y de sodio, utilizadas en distintos instrumentos
espectroscpicos, proporcionan unas pocas lneas agudas en las regiones ultravioleta y
visible.
Las lmparas de ctodo hueco y de descarga sin electrodos son las fuentes de lneas ms
importantes para los mtodos de absorcin atmica y de fluorescencia.
Con el fin de realizar mediciones de la absorcin molecular, se necesita una fuente continua
cuya potencia no vare bruscamente en un intervalo considerable de longitudes de onda.
- Filtros de absorcin: En general son mas baratos que los filtros de interferencia, se utilizan para la
seleccin de bandas en la regin visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del
espectro. El tipo mas usual es un vidrio coloreado o una suspensin de un colorante en gelatina que
se coloca entre dos placas de vidrio. El primero tiene la ventaja de una mayor estabilidad trmica.
Los filtros de absorcin tienen anchos de banda entre 30 y 250 nm. Los filtros de corte tienen
transmitancia de casi 100% en una zona del espectro visible, pero luego disminuyen, con rapidez,
hasta un valor de transmitancia igual a cero en el resto. Una banda espectral estrecha puede aislarse
si se acopla un filtro de corte con un segundo filtro.
Monocromadores:
En muchos mtodos espectroscpicos, es preciso o deseable poder variar, de forma continua
y en un amplio intervalo, la longitud de onda de la radiacin. Este proceso se denomina barrido de un
espectro. Los monocromadores se disean para realizar barridos espectrales. Los monocromadores
para las radiaciones ultravioleta, visible e infrarroja son similares en cuanto a construccin mecnica
ya que todos ellos utilizan rendijas, lentes, espejos, ventanas y redes o prismas. Para garantizar el
barrido, los materiales con los que se fabrican estos componentes, dependen de la regin de
longitudes de onda a la que se pretende trabajar.
- Componentes de los monocromadores:
La figura muestra los elementos pticos de todos los monocromadores:
(1) una rendija de entrada que proporciona una imagen ptica rectangular
(2) una lente o espejo colimador que produce un haz paralelo de radiacin
(3) un prisma o red que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales
(4) un elemento focalizador que forma de nuevo la imagen de la rendija y la enfoca en una
superficie plana denominada plano focal
(5) una rendija de salida en el plano focal, que aisla la banda espectral deseada.
Adems la mayora de los monocromadores tienen ventanas de entrada y salida, cuyo diseo
protege a los componentes de polvo y los humos corrosivos del laboratorio.
Como se muestra en la figura en los monocromadores hay dos clases de elementos dispersantes:
redes de reflexin y prismas. Como ilustracin se muestra un haz constituido por solo dos longitudes
de ondas 1 y 2(1 2)
La radiacin que entra en los monocromadores a travs de una estrecha abertura rectangular
o rendija, se colima y entonces incide en la superficie del elemento dispersante con un ngulo dado.
Para un monocromador de red, la dispersin angular de las longitudes de onda origina la difraccin
que se produce en la superficie de deflexin, para un prisma, la refraccin en las dos caras da lugar
a una dispersin angular de la radiacin tal como se muestra. En ambos casos, la radiacin
dispersada se enfoca en el plano focal AB en el que aparece en forma de dos imgenes
rectangulares de la rendija de entrada (una para 1 y la otra para 2). Por rotacin del elemento
dispersante, se puede enfocar una u otra banda en la rendija de salida.
Antiguamente, la mayora de los monocromadores eran instrumentos de prisma. Sin embargo
actualmente casi todos los monocromadores comerciales se basan en redes de reflexin porque son
ms baratas, proporcionan mejor separacin de longitudes de onda para un mismo tamao de
elemento dispersante y dispersan linealmente la radiacin.
Lquidos puros
Cuando la cantidad de muestra es pequea o
cuando no se dispone del disolvente
apropiado, es habitual obtener los espectros
del lquido puro. En este caso solo una
pelcula muy delgada tiene un camino ptico
suficientemente corto como para producir
espectros satisfactorios. Una gota del lquido
puro se comprime entre dos placas de sal de
roca para obtener una placa con un grosor de
0,01 mm o menos. Las dos placas se
mantienen unidas por capilaridad y se colocan
entonces en la trayectoria del haz.
Slidos
Los espectros de slidos que no pueden disolverse
en un disolvente transparente al infrarrojo, se
obtienen con frecuencia dispersando el analito en
una matriz liquida o slida y analizando la mezcla
resultante.
Estas tcnicas requieren que el tamao de
partcula del slido suspendido sea menor que la
longitud de onda del haz infrarrojo.
Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente
pulverizada (tamao de partcula 2m) en
presencia de unas gotas de un aceite pesado de un
hidrocarburo (Nujol).
Otra tcnica consiste en partir de un miligramo o
menos de muestra finamente triturada que se
mezcla ntimamente con unos 100mg de polvo de
Figura: Prensa de preparacin de pastillas de
bromuro de potasio desecado.
KBr
La mezcla se puede efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeo molino de bolas. La mezcla
se comprime luego en un troquel especial a una presin de 700 a 1000 Kg/cm 2 obteniendo un disco
transparente, mejores resultados si el disco se forma al vaco eliminando el aire ocluido. Luego el
disco se coloca en el haz del instrumento para su anlisis espectroscpico.
Detectores de radiacin
Estos dispositivos son transductores que convierten la energa radiante en una seal elctrica.
El detector ideal debera tener, un amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad,
una elevada relacin seal/ruido y una respuesta constante. Adems debera poseer un tiempo de
respuesta rpido y una mnima seal de salida en ausencia de iluminacin. Por ultimo, la seal
elctrica producida por el transductor debera ser directamente proporcional a la potencia radiante P.
Existen dos tipos de transductores de radiacin uno responde a los fotones y el otro al calor.
- Termopares: Un par de uniones que se forman soldando los extremos de dos piezas
de un metal como el bismuto y otro metal distinto como el antimonio. Entre las dos
uniones se genera un potencial que varia en funcin de su diferencia de temperatura.
La unin se ennegrece (para mejorar su capacidad de absorber calor) y se sella en
una cmara de vaco con una ventana transparente a la radiacin infrarroja.
a)
b)
En los instrumentos de un solo haz y de doble haz, la muestra se suele colocar entre el selector
de longitud de onda y el detector. Esta disposicin es necesaria en los instrumentos
ultravioleta/visible, para poder minimizar la fotodescomposicin de las especies que resultan de la
exposicin a toda la potencia de la fuente.
Fotmetros: son sencillos y bastante econmicos para realizar anlisis de absorcin. Los fotmetros
de filtro son ms convenientes, robustos y fciles de mantener y usar que los espectrofotmetros ms
sofisticados. Tienen elevado rendimiento energtico y buena seal/ruido con componentes y
detectores bastante sencillos y econmicos Los anlisis cuantitativos se realizan con mucha
exactitud.
- Instrumentos de un solo haz para la regin ultravioleta / visible: Existen distintos instrumentos
de un solo haz sin registrador, que se pueden usar para mediciones tanto en el ultravioleta como en
el visible. Para estos instrumentos la longitud de onda varia desde 190 - 210 nm a 800 -1000 nm.
Todos ellos provistos de lmparas intercambiables de tungsteno e hidrgeno. La mayora emplea
tubos fotomultiplicadores como detectores y redes para la dispersin. Algunos con dispositivos de
lectura digital.
Figura : Espectrofotmetro manual de doble haz para la regin Ultravioleta/ visible, modelo Hitachi 100-60
MUESTRA
FUENTE MONOCROMADOR DETECTOR
Figura 10: Tipos de vibraciones moleculares . Nota: + Indica un movimiento del plano de la pgina
hacia el lector. - Indica un movimiento del plano de la pgina alejndose del lector
- Cromforos orgnicos
En la tabla se da una lista de los cromforos orgnicos comunes y la localizacin aproximada
de sus mximos de absorcin. Estos datos pueden servir tan solo como gua aproximada para la
identificacin de los grupos funcionales, debido a que las posiciones de los mximos se ven
tambin afectadas por el disolvente y por los detalles estructurales de la molcula que contiene los
cromforos.
Aplicaciones en infrarrojo
Identificacin y determinacin de sustancias orgnicas:
Identifican grupos funcionales.
Impurezas de materias primas - en industria control de calidad laboratorio de investigacin
- determinacin de parafinas, compuestos aromticos, olefinas, acetileno, alcoholes, aldehdos,
cetonas, cidos carboxlicos, fenoles, steres, teres, aminas, compuestos de azufre o haluros .
- determinar compuestos responsables de olor y sabor en alimentos.
- distinguir un polmero de otro.
- distinguir disolvente usado en pinturas.
- ceras de suelos - muebles.
Valioso:
-Caracterizar sustancias puras.
-Caracterizar mezclas de compuestos.
Representacin grafica de los espectros:
La grfica muestra una reproduccin del registro de un espectrofotmetro de infrarrojo. La
ordenada corresponde a una escala lineal de transmitancia y la abscisa mide linealmente los
nmeros de onda en unidades en cm-1. La abscisa cambia de escala a partir de 2000 cm-1.
La regin de la huella digital entre 1200 y 700 cm-1 (8 a 14m). En esta regin del espectro
pequeas diferencias en la estructura y la constitucin de las molculas originan cambios importantes
en la distribucin de los picos de absorcin.
INTRODUCCIN A LA ESPECTROSCOPIA
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR: UV-Vis-IR
Radiacin electromagntica:
Longitud de onda:
Frecuencia:
Potencia de la radiacin:
6) Explique cmo se tratan las muestras slidas lquidas gaseosas en espectroscopia Infrarrojo. Mencione
los solventes que pueden utilizarse en cada zona.
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
UV Vis IR
FUENTES DE
EMISIN
REGIN DE
EMISIN
SELECTOR DE
LONGITUD DE
ONDA
CUBETAS
DETECTORES
APLICACIONES
ESPECTROS
TRABAJO PRCTICO N 2
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR
P0 P
Solucin absorbente de
concentracin c
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partculas
absorbentes, la absorcin de la radiacin atena, es decir disminuye la energa, del rayo incidente
desde P0 hasta P.
Transmitancia, T: es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin. A
menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P P
T %T .100
P0 P0
P P
A logT log log 0
P0 P
La relacin logartmica entre A y %T se traduce en dos escalas:
%T va de 0 a 100
A va de 2 a 0
En la prctica se emplea, en lugar del valor de Transmitancia, el de Absorbancia (A), ya que la
relacin entre la concentracin de una solucin y su Transmitancia es inversa y logartmica, mientras
que la relacin entre la Absorbancia y concentracin es directamente proporcional.
En los aparatos que se usan hoy en da, las lecturas de %T son transformadas en Absorbancias y
presentadas as al operador, pero conviene no olvidar que la absorbancia no es en s misma una
cantidad medible, sino que se obtiene por clculo matemtico a partir de los datos de Transmitancia
que mide el sistema fotomtrico.
Si representamos grficamente en un eje de coordenadas la relacin entre la Absorbancia y
concentracin, obtenemos una lnea recta, y la proporcin es directa. La grfica resultante de
representar %T frente a concentracin es una curva, y la proporcin es inversa. Si empleamos papel
semilogartmico, la grfica de %T frente a concentracin se convierte en una recta.
Como hemos dicho, al aumentar la concentracin del compuesto absorbente en solucin, ms luz es
absorbida y menos transmitida, lo que se observa en las grficas de la figura 5.
La relacin entre las cantidades de absorbente en una solucin y el grado en que esta solucin
absorbe la luz, se encuentra regida por las Leyes de absorcin.
La ley de la absorcin, tambin conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer
establece la relacin entre el grado de Absorbancia de una solucin y otras dos variables: la
concentracin del absorbente y la longitud del trayecto que el haz de luz recorre a travs de la
solucin. Segn esta ley, la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la
concentracin y a la longitud del paso de luz: A = a. b. c A = . b. C
Siendo:
A = absorbancia (no tiene unidades es adimensional).
a , = coeficiente de absorcin o absortividad especfica (a) o absortividad molar (). Es
una constante, relacionada con la naturaleza qumica del soluto, y para un compuesto
dado cuando se fijan condiciones de longitud de onda ( = 1/mol.cm; a = 1/g.cm).
b = paso ptico o longitud del paso de luz en centmetros.
c, C = concentracin de absorbente (c = g/L ; C = mol/L)
En la prctica: cuanto mayor sea en una sustancia (cromforo) para condiciones de trabajo
determinadas, mayor ser la absorbancia de ese compuesto en esas condiciones de trabajo y, por
tanto, mayor ser la sensibilidad del mtodo que lo emplea.
La Ley de Beer constituye la base del anlisis cuantitativo de las determinaciones
espectrofotomtricas, basndonos en la relacin lineal entre Absorbancia y concentracin, podemos
conocer la concentracin de una solucin problema.
Haz
incidente
P
0
Como muestra la Figura 4, los fotmetros y espectrofotmetros manuales suelen ir provistos de una
pantalla que tiene una escala lineal que va de 0 a 100% de T. Para que la lectura directa del
instrumento se haga en tanto por ciento de transmitancia, se realizan dos ajustes iniciales,
denominados ajuste de corriente oscura o del 0% de T, y ajuste del 100% de T.
El ajuste del 0% de T se realiza bloqueando la llegada de radiacin al detector por medio de un
obturador mecnico. En ausencia de radiacin muchos detectores presentan una pequea corriente
oscura; por tanto, el ajuste del 0% de T supone la aplicacin de una seal opuesta de tal magnitud,
que d una lectura cero en la escala.
Colormetro de Duboscq.
Pone en forma paralela la luz transmitida por dos soluciones, de manera que ambas puedan ser
observadas por un solo ojo. De esta manera, se puede observar que cualquier diferencia en
matiz o intensidad produce una lnea de separacin entre las dos mitades de un crculo.
El colormetro proporciona un procedimiento cmodo de comparar colores y de medir con
exactitud la profundidad de ambas soluciones, la conocida y el problema. Se supone que dos
Cu Du = Cs Ds Cu = Cs Ds / Du
Espectrofotometra.
La espectrofotometra difiere de la colorimetra en que la absorbancia de una solucin o sustancia
se determina con nicamente una longitud de onda de luz transmitida y medida. En la prctica
ms que una sola longitud de onda se utiliza una luz con una intervalo definido de longitudes de
onda. Con un espectrofotmetro, los pasos bsicos de un anlisis son siempre los mismos.
Pequeas variaciones en cada uno y, a veces, la operatoria de instrumentos diferentes, pueden
alterar ligeramente los detalles del procedimiento.
Curva de calibracin:
1. Prepar una serie de soluciones del analito a partir de una droga de calidad garantizada. La
concentracin debe ser tal que el valor de la absorbancia a la longitud de onda en la cual la
absortividad es mxima, caiga entre 0,3 y 0,7 unidades de A.
2. Utilizando la solucin preparada en 1, efectuar el trazado de la curva espectral o espectro de
absorcin para lo cual se realiza una serie de medidas de absorbancia a distintas longitudes
de onda y concentracin constante.
Tipos de aparatos
En base al sistema selector de longitud de onda, los aparatos se clasifican en dos tipos:
- Fotmetros: emplean filtros, obteniendo luz monocromtica a longitudes de onda discretas.
- Espectrofotmetros: emplean monocromadores, del tipo de prismas o redes de difraccin,
obteniendo luz monocromtica en un intervalo contnuo de longitudes de onda.
Segn la disposicin de los componentes fotomtricos, se pueden clasificar en espectrofotmetros de
haz simple o de doble haz.
Constan esquemticamente de los componentes antes mencionados: la luz emitida pasa a travs de
un monocromador que seleccionar la longitud de onda deseada; unas rendijas de entrada y salida
consiguen que el haz de luz sea estrecho, y evitan la luz difusa; la luz pasa a travs de la cubeta,
donde se produce el proceso de absorcin; la luz no absorbida es transmitida al detector, que
convierte la energa radiante en energa elctrica, que es registrada en un lector.
Al trabajar con estos aparatos, es necesario un ajuste inicial a 0 por 100 de transmitancia, que se
consigue sustituyendo la cubeta por un sistema que no deje pasar la luz hasta el detector. A
continuacin se hace un blanco, colocando una cubeta con todos los componentes de la solucin de
trabajo exceptuando el cromgeno y haciendo un ajuste a 100 por 100 de transmitancia. Se hacen
lecturas de estndares (soluciones de concentracin conocida) y a continuacin las de las soluciones
problemas por comparacin con los estndares.
Componentes
Fuente de energa radiante
La misin de la fuente de energa es proporcionar energa radiante en forma de luz visible o no
visible.
Existen distintas lmparas que emiten en distintas zonas del espectro visible y UV.
Lmparas de filamento de tungsteno: Se utilizan habitualmente como fuentes de radiacin
para longitudes de onda del espectro visible y UV prximo; son fuente de un espectro
continuo de energa radiante entre 360 y 950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: Son de mayor duracin, producen ms
luz a longitudes de onda cortas, y emiten energa radiante de mayor intensidad que las de
filamento de tungsteno. Se emplean frecuentemente las de yoduro de tungsteno.
Lmparas de hidrgeno y deuterio: Producen un espectro continuo en la regin UV (220 a
360 nm). Se emplean para medidas en este regin del espectro, siendo ms usada la de
deuterio, de mayor intensidad que la de hidrgeno.
Lmparas de vapores de mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro de lneas
(313, 365, 405, 436 y 546 nm). Son muy tiles para propsitos de calibracin de longitudes
de onda, pero no son utilizadas en muchos espectrofotmetros. Se emplean en
espectrofotmetros para cromatografa HPLC.
Consideracin prctica: Es importante tener en cuenta que la cantidad de luz emitida por una
lmpara no es constante en un intervalo continuo de longitudes de onda, presentando mximos
y mnimos, propiedad que vara en los diferentes tipos de lmparas, e incluso con los diferentes
fabricante; esto nos llevar a buscar siempre el tipo de lmpara que resulte ms adecuado en la
prctica para los anlisis que queremos realizar.
Conviene tener tambin en cuenta que las lmparas sufren con las subidas y bajadas bruscas de
tensin, que se traducen en cambios en las lecturas de absorbancias, y que la lmpara tiene una
vida limitada, hacindose necesaria su vigilancia para el buen funcionamiento del instrumento.
Rendijas
La funcin de las rendijas de entrada es reducir al mximo la luz difusa y evitar que la luz dispersa
entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
Las rendijas de salida tienen como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta, lo que
generara desviaciones a la Ley de Beer.
Ancho de banda. Es el intervalo de longitudes de onda que pasan a travs de la rendija de salida de
un mecanismo selector de longitudes de onda.
Longitud de onda nominal de una haz de luz. Es la longitud de onda en la que se halla el mximo de
intensidad de luz. Se emplea para definir los filtros.
Ancho de banda nominal. Corresponde a aquellas longitudes de onda centradas sobre la longitud de
onda mxima, que transmite el 75 por 100 del total de luz presente en el haz emergente. Describe el
grado de monocromaticidad de un monocromador.
Cubetas
Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin espectrofotomtrica.
Formas. Pueden ser redondas, cuadradas, o rectangulares, y de tamao menor o mayor.
Habitualmente tienen 1 cm de paso de luz. Se obtienen mejores resultados trabajando con
las cubetas de lados paralelos, a ser posible fundidas en lugar de cementadas. Las de
forma redonda se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posicin.
Materiales. La mayora estn fabricadas en vidrio, lo cual permite trabajar
satisfactoriamente entre longitudes de onda que van de 320 a 950 nm. Tambin existen
cubetas de plstico. Para medidas por debajo de 320 nm Ultravioleta Visible es necesario
emplear cubetas de cuarzo, que tambin se podran emplear para mediciones a longitudes
de onda superiores, pero su costo lo desaconseja.
La sustancia mas comnmente empleada para las ventanas de las celdas para la regin
infrarroja es el cloruro de sodio cristalino, tambin pueden usarse con este fin los dems
materiales transparentes al infrarrojo.
Sistemas de deteccin
Existen dos tipos de detectores empleados tanto en las regiones del visible como del UV: clulas
fotovoltaicas y fototubos. La eleccin de uno u otro sistema depende fundamentalmente de la
energa radiante de que se disponga. Si se han empleado como selectores filtros o
monocromadores de baja dispersin, stos proporcionarn un haz de luz de suficiente energa
como para emplear clulas fotovoltaicas. Si se emplean monocromadores de elevado poder
resolutivo, hay que recurrir a fotomultiplicadores para la deteccin.
1) Clulas fotovoltaicas, en las que la energa radiante genera una corriente en la
interfase entre una capa semiconductora y un metal.
2) Fototubos, en los que la radiacin causa la emisin de electrones a partir de una
superficie slida fotosensible.
3) Tubos fotomultiplicadores, que contienen una superficie fotoemisora as como varias
superficies adicionales, las cuales emiten una cascada de electrones cuando son
alcanzadas por los electrones procedentes del rea fotosensible.
4) Detectores de fotoconductividad, en los que la absorcin de la radiacin por un
Semiconducto produce electrones y agujeros , dando lugar, as a un aumento de
conductividad.
5) Fotodiodos de silicio, el los que los fotones aumentan la conductancia.
Slidos
Estas tcnicas requieren que el tamao de partcula del slido suspendido sea menor que la longitud
de onda del haz infrarrojo. Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente pulverizada (tamao de
partcula 2m) en presencia de unas gotas de un aceite pesado de un hidrocarburo (Nujol).
Otra tcnica consiste en partir de un miligramo o menos de muestra finamente triturada que se
mezcla ntimamente con unos 100mg de polvo de bromuro de potasio desecado. La mezcla se puede
efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeo molino de bolas. La mezcla se comprime luego
en un troquel especial a una presin de 700 a 1000 Kg/cm2 obteniendo un disco transparente,
mejores resultados si el disco se forma al vaco eliminando el aire ocluido. Luego el disco se coloca
en el haz del instrumento para su anlisis espectroscpico.
Gases:
El espectro de un lquido de bajo punto de ebullicin o de un gas se puede obtener permitiendo a la
muestra que se expanda en una cubeta en la que se ha hecho el vaco. Existen una variedad de
cubetas para este objeto, con longitudes de camino ptico que varan desde unos pocos centmetros
a varios metros.
EXPERIENCIAS A REALIZAR
OBJETIVOS:
Adquirir destreza en el empleo del Mtodo de la Serie Estndar y en el uso del Espectrofotmetro.
Estimar las cantidades de distintos componentes por medio de la medicin del grado de absorcin
por sustancias coloreadas.
Trazar curvas de calibracin y aplicarlas en la bsqueda de concentraciones incgnitas.
Tcnica aprobada por el INV (Instituto Nacional de Vitivinicultura), en base a ella se determina
el ndice de color en vinos tintos, factor fundamental al momento de fijar precio en vinos de traslado.
Metodologa:
Preparacin de la muestra:
Para la determinacin del ndice de color, los vinos debern estar completamente limpios,
considerndose como tales, aquellos que transmiten uniformemente la luz de una lmpara y permiten
observar ntidamente el filamento.
Instrumental:
Procedimiento:
Clculos:
Intensidad, por la suma de las absorbencias a 420 nm y 520 nm (I = A 420 nm + A 520 nm)
Tonalidad: por la relacin entre las absorbencias a 420 nm y 520 nm (T = A 420 nm / A 520
nm).
IC = (I/T) x 1000
Interpretacin:
Segn lo resuelto por el INV, a partir de la liberacin de los productos de la Elaboracin 2009,
los vinos tintos nacionales que se liberen al mercado interno, solo se los podr identificar como tales
en sus marbetes, cuando tengan un ndice de color igual o superior a quinientos (500), con una
tolerancia en su circulacin de hasta un diez por ciento (10%) en menos. Resolucin (INV) C. 9/08.
Del 30/5/2008. B.O.: 6/6/2008
A fines del siglo XIX (1883) cuando Joseph Williams, hijo de John Locke Lovibond, destacado
cervecero de Greenwich, Inglaterra, se decidi a encontrar una manera de asegurar una alta calidad
para sus cervezas. En 1883 desarroll el primer colormetro prctico del mundo que consista en una
serie de filminas coloreadas y graduadas que al ser comparadas con el color de la cerveza
determinaban un valor aproximado.
Nace as la escala de colores medida en grados Lovibond (L) que se uso por mucho tiempo
hasta que fue reemplazada por sistemas mas modernos. Hoy da, casi no se usa en cerveceras, pero
el trmino grados Lovibond es empleado a menudo por los fabricantes de maltas para describir el
color que sus granos aportan al mosto.
La variacin natural en la percepcin de los colores de una persona a otra, puso en evidencia
las limitaciones del sistema Lovibond y a mediados del siglo XX fue reemplazado por el uso del
espectrofotmetro de luz y la American Society of Brewing Chemists (ASBC) establece como
estndar el sistema de color Standard Reference Method (SRM). En Europa se haba desarrollado
otro sistema, el llamado European Brewing Convention (EBC) que era usado originariamente como
forma de comparacin visual, pero la tecnologa hizo que 25 aos despus adoptara el uso del
espectrofotmetro de manera similar al SRM.
Es el sistema adoptado en 1958 por la American Society of Brewing Chemists (ASBC) para medir el
color de una cerveza.
En un laboratorio el SRM es determinado midiendo la reduccin de intensidad que sufre un haz de luz
monocromtica de longitud de onda de 430nm (azul), al atravesar pulgada de cerveza. Podemos
definir al SRM como la absorbancia (logaritmo de la perdida de luz) multiplicada por 10. Mtodos y
tecnologas modernas emplean 1cm de cerveza y multiplican la absorbancia por 12.7 aplicando la ley
de LambertBouguer-Beer.
Los valores medidos en SRM y los grados Lovibond son aproximadamente iguales y en la
prctica se pueden usar alternativamente para evaluar la intensidad del color de una cerveza.
En un principio se usaban, en Europa, diferentes sistemas para la medicin del color de maltas y
cervezas. Cuando los mtodos de comparacin visual quedaron obsoletos, tanto el British Institute of
Brewing (IOB) como la European Brewing Convention (EBC) se decidieron por el uso de
espectmetro al igual que la American Society of Brewing Chemists (ASBC). Ambas instituciones
tenan mtodos diferentes basados en la medicin de la absorbancia pero, en este caso, de un haz
de luz de 530 nm de longitud de onda (Verde). Al no existir una relacin lineal con el sistema SRM por
lo general se usaban las siguientes frmulas para la conversin:
En 1991 el sistema del British Institute of Brewing (IOB) queda formalmente retirado aunque
se sigue usando ocasionalmente dentro del Reino Unido. A partir de ese ao el mtodo de la
European Brewing Convention (EBC) pasa a ser el estndar y se modifica adoptando, para sus
mediciones, la longitud de onda de 430 nm y una cubeta de 1 cm.
De esta manera el sistema EBC se vuelve muy similar al SRM diferencindose slo en la unidad de
color que, en el EBC, es 25 veces la absorbancia a 430nm (A430) en vez de las 12.7 veces del SRM.
EBC = 25 x A430
Con esta modificacin, la conversin entre ambos sistemas se simplific quedando las
frmulas siguientes:
Preparacin de la muestra:
Tener en cuenta, como para todo mtodo espectrofotomtrico que las muestras debe ser
totalmente lmpidas, en caso de trabajar con cervezas no filtradas o artesanales con toma de espuma
en botella, se debe centrifugar previamente.
La presencia de burbujas es otro limitante por lo que deben descarbonatarse por trasvasados
sucesivos hasta eliminacin total de las mismas.
Instrumental:
Espectrofotmetro visible. Cubetas de vidrio o plstico.
Clculos:
Conversin de Unidades:
Interpretacin:
El Captulo VIII del CAA (Cdigo alimentario Argentino) legisla sobre bebidas Alcohlicas, en
el art 1080, define cerveza y la clasifica segn color entre otros parmetros. Define cerveza clara,
blanca, rubia o Cerveza , como aquella cuyo color es inferior a 20 unidades E.B.C. (European
Brewery Convention) y Cerveza oscura o Cerveza negra a la cerveza cuyo color es igual o superior a
20 unidades E.B.C..
DETERMINACIN DE HIERRO
Fundamento:
Reactivos:
Tcnica:
- Preparar una curva patrn de Fe con soluciones de 0,1,2,3 y 4 ppm empleando : 0 - 2,5- 5 -7,5 y
10 ml de solucin patrn de Fe de 20 ppm en matraces aforados de 50 ml a los que se agrega
0,1 g de hidroxilamina y 1 ml de solucin de ortofenantrolina, enrasado finalmente a volumen.
- Realizar en un matraz volumtrico de 50 ml una solucin patrn intermedio para que entre en
escala (realizar las diluciones correspondientes)
- Medir absorbancia de la serie de diluciones patrn para trazar la curva de calibracin usando 490
nm de longitud de onda.
- Medir la absorbancia de la muestra y referir el dato obtenido a ppm de hierro, mediante los valores
de la curva patrn.
Resultados:
EJERCITACIN
ESPECTROSCOPA MOLECULAR
Ax = Absorbancia de la muestra
AT = Absorbancia Total
Cx = Cs Ax . Vs Cx = concentracin de la muestra.
(AT - Ax ) Vx Cs = concentracin del estndar.
Vs = volmen del estndar.
Vx = volmen de la muestra.
EJERCICIOS A RESOLVER
1- Calcular:
a) Qu porcentaje de la luz incidente a una longitud de onda dada se trasmite por un medio que, a esa
longitud de onda, tiene absorbancia de 1,033? R= 9,26
b) Cul es la absorbancia de una solucin que absorbe 3/5 de la luz incidente? R= 0,398
3- Una muestra exhibe una absorbancia de 0,70 por 100 mL de un soluto absorbente de la luz. Cul es la
transmitancia en valor absoluto y en porcentaje? R= 0,199 y 19,9%
4- Una solucin que contiene 5 mg de una sustancia absorbente en 250 mL arroja un valor de 50% T cuando se
mide en una celda de 3 cm de paso ptico. Cul ser el % T de una solucin que contenga 1 mg de la
sustancia en exactamente 1 Litro, medida en una celda de 10 cm?
R= 89%
5- Con referencia a la siguiente figura, supngase que dos cubetas contienen soluciones de distintas
absorbancias:
a) Calcular la absorbancia en la cubeta 1 y en la cubeta 2. R= 0,3979 y 0,3979
b) Calcular la absorbancia total. R= 0,7958
c) Calcular la transmitancia en la cubeta 1 y en la 2. R= 0,4 y 0,4
d) Calcular la transmitancia total. R= 0,16
P0 P1 P2
40% P0 40% P1
140 56 22,4
6- Calcular el rango de concentracin molar que puede usarse para trabajar con cromato de potasio que a 370
3
nm de longitud de onda tiene un coeficiente de absortividad molar =4,79 x 10 y ser usado entre 20 a 80%
de T.
4 -5
R= 1,45 x 10- M a 2,023 x 10 M
7- Una solucin que contiene 15 g de soluto (mM= 243,8) absorbente de luz en 200 mL, exhibe 32% de T en una
celda de 3 cm de paso ptico. Calcular:
a) la absorbancia de la solucin R= 0,494
-3
b) La absortividad R=2,19 x 10
c) La absortividad molar del soluto. R= 0,531
8- Se desea determinar hierro mediante espectroscopa de absorcin para lo cual se necesita preparar una
escala patrn de hierro con soluciones de 0, 2, 4, 6, y 8 ppm para realizar la calibracin. En el laboratorio se
cuenta con una solucin patrn de hierro de 40 ppm y matraces de 50 mL para preparar las soluciones que se
necesitan. Calcular cuntos mL de la solucin patrn deben utilizarse para hacer cada dilucin.
9- Se toman de la disolucin original 3 (tres) alcuotas de 10 mL. A la primera alcuota no se le aade nada, a la
segunda se aade 15 L y a la tercera 30 L de la solucin de Cloruro de cobre estndar de 200 ppm.
Lo enunciado se resume en la siguiente tabla: