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Temas de Bacteriologia y Virologia Medica. 2006 PDF
Temas de Bacteriologia y Virologia Medica. 2006 PDF
ISBN 9974-31-194-2
Sumario > Temas de
Bacteriologa y
Seccin I. Aspectos generales
Biologa viral
Morfologa y estructura bacteriana
Fisiologa y metabolismo bacteriano
Gentica bacteriana
Mtodos de estudio de bacterias y virus. Mtodos diagnsticos
Inmunidad contra los agentes infecciosos
Virologa Mdica
Interacciones husped-parsito. Flora normal
Seccin II. Principales procesos infecciosos
Instituto de Higiene
Virus de las hepatitis
Enterovirus
Agentes virales de gastroenteritis. Rotavirus
Herpesvirus
Agentes de infecciones emergentes, Hantavirus, dengue, BSE
Seccin IV. Control de poblaciones microbianas
Inmunoprolaxis Vacunas
Esterilizacin, desinfeccin y antisepsia
Principales grupos de antibiticos
Principales mecanismos de resistencia antibitica
Mtodos de estudio de la sensibilidad antibitica
Antivirales Universidad de la Repblica
Facultad de Medicina
2006
Universidad de la Repblica | Facultad de Medicina
Departamento de Bacteriologa y Virologa
Instituto de Higiene
ISBN 9974-31-194-2
Sumario > Temas de
Bacteriologa y
Seccin I. Aspectos generales
Biologa viral
Morfologa y estructura bacteriana
Fisiologa y metabolismo bacteriano
Gentica bacteriana
Mtodos de estudio de bacterias y virus. Mtodos diagnsticos
Inmunidad contra los agentes infecciosos
Virologa Mdica
Interacciones husped-parsito. Flora normal
Seccin II. Principales procesos infecciosos
Instituto de Higiene
Virus de las hepatitis
Enterovirus
Agentes virales de gastroenteritis. Rotavirus
Herpesvirus
Agentes de infecciones emergentes, Hantavirus, dengue, BSE
Seccin IV. Control de poblaciones microbianas
Inmunoprolaxis Vacunas
Esterilizacin, desinfeccin y antisepsia
Principales grupos de antibiticos
Principales mecanismos de resistencia antibitica
Mtodos de estudio de la sensibilidad antibitica
Antivirales Universidad de la Repblica
Facultad de Medicina
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 9
SECCIN I
Aspectos generales
1. Biologa viral
4. Gentica bacteriana
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10 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 11
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1 Biologa viral
Juan R. Arbiza
Introduccin
Hasta fines del siglo XIX se haba avanzado en la etiologa de muchas enfermedades infecciosas,
sin embargo, quedaban muchas enfermedades en el hombre, animales y plantas en las cuales
no se identificaba un microorganismo causal. En el siglo XX se descubrieron los virus como
causantes de enfermedades infecciosas para las cuales no se haba encontrado una bacteria, un
hongo o un protozoario como responsable. Fue el desarrollo de nuevas tcnicas como los cul-
tivos celulares, el avance en la microscopa y el advenimiento, a fines del siglo XX, de tcnicas
de biologa molecular que han permitido aislar e identificar los virus; adems han permitido
un avance extraordinario en el conocimiento molecular de la biologa de los mismos.
Sin embargo, los virlogos tienen un doble desafo para el futuro: controlar los virus que
ya se conocen, para los cuales no existen frmacos o vacunas efectivas hasta el momento y;
aislar, identificar, caracterizar y controlar los virus emergentes o reemergentes (virus de la
inmunodeficiencia humana, Ebola, Hantavirus, etc.).
Caractersticas generales
Las primeras caractersticas que diferenciaron a los virus de otros microorganismos fueron:
el tamao, estimado por su capacidad de atravesar filtros que retienen a las bacterias y la
incapacidad para reproducirse en medios biolgicos inertes como medios de cultivo para
bacterias, requiriendo para su propagacin de animales o cultivos celulares. Hoy se sabe que
estas caractersticas no alcanzan para diferenciar a los virus de otros agentes biolgicos, dado
que existen bacterias cuyo tamao puede ser similar al de los virus ms grandes y algunas
bacterias como Chlamydias y Rickettsias, son parsitos intracelulares obligatorios.
La organizacin y composicin de las partculas virales ofrecen caractersticas que los
diferencia de otros microorganismos. Los virus poseen un solo tipo de cido nucleico de
pequeo tamao con respecto a otros agentes biolgicos, rodeado por una cscara o cpside
formada por numerosas copias de una protena o de un nmero limitado de ellas. Algunos
grupos de virus presentan por fuera de la cpside una envoltura lipdica de origen celular en
la que se insertan glicoprotenas. No presentan sistemas enzimticos propios, por lo tanto no
son capaces de replicarse por s solos y requieren de clulas animales, vegetales o bacterias
para cumplir su ciclo de reproduccin; esto define su parasitismo celular obligatorio.
Este tipo de reproduccin particular que tienen los virus, es la caracterstica que justifica
su lugar en la escala biolgica. A diferencia de las clulas, en el momento de su multiplicacin,
12 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
los virus no aumentan de tamao para su posterior divisin, por el contrario, ls partcula viral
se desintegra y luego se sintetizan cada uno de sus componentes que se renen por ensamblaje.
Esta forma de multiplicacin en la cual se producen rplicas del virus progenitor, es conocida
con el nombre de replicacin viral y se diferencia del proceso de divisin celular usado por
clulas procariotas y eucariotas.
Se pueden citar dos definiciones de virus. La primera propuesta por Lwoff (1957): en-
tidad estrictamente celular y potencialmente patognica con una fase infecciosa. Posee un
solo tipo de cido nucleico, es incapaz de crecer y reproducirse por fisin binaria y carecen de
enzimas para producir energa. La segunda, pertenece a Luria y Darnell (1967): los virus son
entidades cuyo genoma se replica dentro de clulas vivas usando su maquinaria de sntesis.
Esto determina la formacin de elementos especializados que permiten la transferencia del
genoma viral a otras clulas.
VIROIDES
Son virus simples constituidos por cido ribonucleico (ARN) circular de muy bajo peso
molecular, sin cpside protectora. Producen enfermedades hasta el momento conocidos
exclusivamente en plantas.
PROVIRUS
El genoma viral se puede integrar al genoma celular por un proceso de recombinacin gentica,
directamente en los virus cido desoxirribonucleico (ADN) o previa transcripcin inversa en
los virus ARN. El genoma viral integrado al celular recibe el nombre de provirus.
PRIONES
Ciertos agentes causantes de afecciones degenerativas del sistema nervioso central del hombre,
han sido clasificados como virus no convencionales, dado que no ha sido posible determinar
una estructura similar a virus en el material infectante, ni el tipo de cido nucleico de dichos
agentes. Son extremadamente resistentes a sustancias que inactivan los virus comunes. Al-
gunos han propuesto que corresponderan a viroides patgenos del hombre.
Los priones han sido descritos en los ltimos aos como causantes de muchas enfermedades
del sistema nervioso comentadas anteriormente, principalmente el scrapie en el ganado ovino
y la encefalopata espongiforme bovina (BSE) o comnmente conocida como sndrome de la
vaca loca. En el hombre seran los agentes relacionados con la enfermedad de Creutzfeld-
Jacob y Kuru. Son estructuralmente ms simples que los virus y estn formados solo por
protenas. Cuando se descubrieron, pareca que se poda producir una gran revolucin en el
conocimiento de la biologa, porque la idea de que una protena pudiera autorreplicarse sera
opuesta al dogma central de que la informacin gentica es transmitida desde el cido nucleico
a la protena. El hallazgo de los priones y el avance en el conocimiento de su biologa podrn
dilucidar muchas enfermedades an sin resolver. Muchas son las investigaciones que se realizan
en estos momentos y las hiptesis propuestas para explicar la biologa y permanencia de estas
protenas extremadamente resistentes a sustancias que inactivan a los virus comunes.
ESTRUCTURA
Como ya se mencion la estructura de un virus est basada en su simplicidad, a pesar de esto
existe cierta diversidad que es usada para la clasificacin de estos microorganismos.
Virus desnudos
La estructura de los virus ms simples est compuesta por un solo tipo de cido nucleico
(ADN o ARN) rodeado de una cscara proteica que se denomina cpside (del griego capsa
que significa caja). De la reunin de las subunidades proteicas codificadas por el genoma
viral, que se ensamblan segn principios geomtricos, se forman diferentes tipos de simetras
(icosahdrica o helicoidal). (Ver figura 2 y 3b) Esta estructura bsica de cido nucleico y
cpside recibe el nombre de nucleocpside y constituye en los virus desnudos la partcula
viral completa o virus. Esta se diferencia del trmino virin que es usado para las partculas
virales o virus potencialmente infecciosas.
Cuando se observa al microscopio electrnico una cpside viral, pueden observarse es-
E. coli
Poxvirus
Rhabdovirus
Herpesvirus
Adenovirus
Parvovirus
1000 nm Fig. 1
Figura 1.
14 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
C. Icosahedro envuelto
nucleocpside
nucleocpside
protmeros (protena)
capsmeros (protena)
D. Helicoidal cido nucleico
envuelto espculas (glicoprotenas)
envoltorio (protenas y
lpidos)
tructuras morfolgicas denominadas capsmeros que resultan de la unin por enlaces de las
subunidades proteicas. La forma de distribucin de los capsmeros as como el nmero de
ellos depende de cada tipo de virus.
Virus envueltos
La estructura de las partculas virales de los virus denominados envueltos, est formada
adems de la nucleocpside por una envoltura de origen celular que la rodea (ver figuras 2 y
3a). Dicha envoltura se obtiene en el proceso de liberacin por gemacin (brotamiento) como
se esquematiza en la figura 4. En sta se insertan glicoprotenas de origen viral que reciben
el nombre de espculas o glicoprotenas de superficie y que tienen un papel importante de
reconocimiento de receptores especficos de la superficie celular, en el paso inicial de relacin
con la clula husped para la multiplicacin viral.
cidos nucleicos
El cido nucleico que lleva la informacin gentica y que constituye el genoma viral puede
tener varias formas. Como ya se mencion, una partcula viral tiene en su estructura un solo
tipo de cido nucleico (ADN o ARN), pero la forma de estos puede ser de doble o simple
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 15
Figura 3.
a)
b)
cadena, segmentado o no, circular o lineal, determinando una gran diversidad de utilidad en
la taxonoma viral (ver figura 5).
En la figura 6 se representa un cuadro con los principales virus animales, con sus diferentes
estructuras (con envoltura o sin ella, con simetra helicoidal o icosahdrica) y la composicin
del cido nucleico. Estas dos caractersticas se combinan de diferentes maneras para deter-
minar varios grupos de virus.
Multiplicacin viral
Una partcula viral puede encontrarse en dos estados: activa o inactiva. Para demostrar el
estado inactivo basta incluir una suspensin de virus en un medio de cultivo y observar que
son incapaces de cumplir actividades metablicas necesarias para su multiplicacin. Se deduce
de ello, que los virus carecen como ya se mencion anteriormente de maquinaria enzimtica
que les permita autorreplicarse, an cuando se les brinde nutrientes que seran adecuados
para la propagacin de las bacterias ms exigentes.
Pero si una partcula viral es incorporada a clulas vivas sensibles, se comporta en forma
activa y por lo tanto tomar el comando de la maquinaria enzimtica de la clula husped,
logrando as su replicacin.
16 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
Virion Figura 4.
Protena
Membrana vrica
Plasmtica
Nucleocpside
Figura 5.
RNA DNA
a)
Simple cadena
a) b)
Simple cadena
Doble cadena
b)
Doble cadena
c) c)
Doble cadena
fragmentado
Circular
(simple y doble cadena)
DESNUDOS
ENVUELTOS
tipos celulares a los que se puede llegar por diferentes vas (intraamnitica, intraalantoidea,
en saco de yema, etc.).
INFECCIN VIRAL
La infeccin viral puede ser productiva o, en oposicin abortiva. Esta ltima cumple un ciclo
incompleto en el que no se forman partculas virales infecciosas.
Una infeccin productiva culmina con la generacin de una progenie viral infecciosa;
este proceso requiere una serie de pasos o etapas que son diferentes en los distintos tipos de
virus. Las etapas fundamentales de la infeccin viral son: adsorcin, penetracin, denudacin,
eclipse, replicacin, maduracin y liberacin.
Adsorcin
Intervienen muchos factores. En principio existe una atraccin por fuerzas inicas. A pH neu-
tro, los virus y las clulas tienen cargas negativas, por lo tanto son necesarios iones positivos;
18 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
Figura 7.
a) Fusin b) Viropexis
Cell Cell
dicho requerimiento lo cumple los iones de magnesio. Otro factor importante en esta etapa
es la interaccin de sitios especficos de la partcula viral con receptores celulares especficos.
Esto determina la especificidad de algunos virus para crecer en clulas de origen especfico;
por ejemplo: el virus de la poliomielitis solo puede crecer en clulas humanas y de primates.
Otros virus presentan estructuras en su superficie que les permiten cumplir con esta etapa
de forma muy especializada. Estas son glicoprotenas que reconocen receptores celulares
especficos. Hoy se pueden aislar esos elementos como complejos virus y clula.
Luego de adsorbidos a una clula, los virus pueden ser recuperados conservando sus
caracteres de partcula libre potencialmente infectante. Los poliovirus pueden ser separados
de las clulas con soluciones salinas a altas concentraciones o con detergentes; los mixovirus
(virus de la gripe) que usan tambin una estructura especializada, se separan de las clulas
huspedes por accin de la neuraminidasa.
Penetracin
La penetracin de los virus una vez adsorbidos, puede realizarse de diferentes maneras, por:
viropexis, penetracin o fusin (ver figura 7).
Viropexis
Es un proceso de fagocitosis, en el que se produce una invaginacin de la membrana plasmtica;
as el virus queda englobado en una vescula dentro del citoplasma celular. Es el mecanismo
ms comn de penetracin de los virus.
Penetracin
En algunos virus, la penetracin acontece por simple cruce de la membrana plasmtica; as
la partcula viral queda directamente incluida en el citoplasma.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 19
Fusin
Otro tipo de penetracin se da por fusin de la envoltura viral con la membrana plasmtica.
Tambin en este caso el virus es directamente incorporado al citoplasma.
Denudacin y eclipse
En esta etapa el virus se desintegra, dejando libre su cido nucleico que comanda su propia
replicacin, adems de la sntesis de las protenas necesarias para integrar nuevas partculas.
La manera en la que un virus pierde la cpside y su envoltura (si la tiene), es caracterstico
de cada grupo viral. En los poliovirus parece existir una integracin con los constituyentes
celulares tales como los receptores. En otros virus como los poxvirus y los reovirus el proceso
es ms complejo. Los poxvirus pierden parte de su envoltura en las vacuolas fagocticas,
mientras que un ARN mensajero (ARNm) es sintetizado por una transcriptasa que termina
con la produccin de una enzima nueva que completa la denudacin. Los reovirus penetran
en los lisosomas donde las enzimas proteolticas eliminan la cpside y promueven la trans-
cripcin del genoma.
Los fenmenos descritos (adsorcin, penetracin y denudacin) finalizan con la desin-
tegracin de las partculas virales, pero no siempre el proceso progresa hasta la replicacin
viral. Si interrumpimos el ciclo en esta etapa llamada eclipse, el cido nucleico liberado de
sus envolturas puede recobrarse por disrupcin de la clula husped, pero habra perdido su
capacidad de infectar (algunos autores opinan que an puede recobrarse intacto). Si el pro-
ceso normal contina, comienza la replicacin del cido nucleico y la sntesis de las protenas
estructurales y no estructurales necesarias para la produccin de virus.
cpside en el citoplasma y penetran al ncleo iniciando la replicacin del cido nucleico. Hay
sntesis de ARNm inducidos por el virus, enzimas relacionadas a la sntesis y fragmentacin
del ADN. Los pasos biosintticos descritos pueden relacionarse con el desarrollo de cuerpos
de inclusin nucleares y la formacin de partculas virales.
Los virus ARN tienen un inters especial por la diversidad de formas de replicacin que
presentan; esto depende de que el ARN pueda actuar como mensajero, denominado de po-
laridad positiva. De lo contrario, al ARN que posea la secuencia de bases complementarias
a las del ARNm se le denomina de polaridad negativa.
Cuando consideramos un ARN con polaridad positiva, ste acta como mensajero
entrando en el ribosoma celular e iniciando una traduccin de polimerasas, necesarias para
iniciar la replicacin del cido nucleico. Luego actuar la parte tarda del ARN traduciendo
protenas para la formacin de la cpside y ensamblaje de la partcula viral. Un ejemplo de
este tipo de replicacin son los poliovirus, que tienen como genoma un ARN de hebra nica
con cido poliadenlico en un extremo. Dicho cido sirve inicialmente como molcula de
ARNm para la sntesis de replicasa de ARN, producindose el intermediario replicativo de
ARN, til para la sntesis de molculas de ARN virales de los descendientes. La replicacin
del ARN viral es independiente de las sntesis de ADN de la clula husped.
Por el contrario, si el ARN es de polaridad negativa, la molcula no tiene funcin mensajera
y por lo tanto sintetiza una molcula complementaria a la original con funcin mensajera,
que entra al ribosoma. En este grupo de virus aparece un nuevo concepto en la estructura
viral porque, para sintetizar una copia se necesita una transcriptasa ARN dependiente que
no se encuentra en las clulas. Por consiguiente, en estos virus adems del genoma y las
protenas estructurales, son sintetizadas otras protenas que luego sern incorporadas a la
partcula viral.
Maduracin y liberacin
Hay virus cuya nica cubierta es la cpside, virus desnudos, en oposicin a los que poseen
envoltura por fuera de la cpside, virus envueltos. Es conveniente considerarlos por separado
en esta etapa, que es la finalizacin de la formacin de una progenie viral.
Para los virus desnudos, el fenmeno de maduracin consiste en la unin de los caps-
meros para formar la cpside y la posterior unin de esta con el genoma. Parece existir una
diferencia en la maduracin de este grupo de virus dependiendo si el cido nucleico del
genoma es ADN o ARN. Para los primeros, la sntesis del ADN se realiza con anticipacin
a la aparicin de los elementos estructurales, mientras que para los segundos, se ha demos-
trado con aminocidos radioactivos que las cadenas polipeptdicas se renen rpidamente
en capsmeros y stos en cpside. Adems se destaca que existe concordancia con la sntesis
de la molcula de ARN.
La liberacin en este grupo de virus depende mucho del tipo de virus y de las caracte-
rsticas de la clula husped. Los poliovirus son liberados rpidamente de las clulas HeLa o
HEp-2; dicha liberacin se realiza por rotura de vacuolas superficiales. En los virus ADN que
maduran en el ncleo, el tiempo de liberacin es mayor que en el ejemplo anterior, porque
la liberacin se produce por autolisis celular.
En los virus con envoltura, la maduracin es ms compleja (ver figura 4). Adems de
la unin del cido nucleico con la cpside, el virus debe rodearse de la envoltura. Luego de
haberse formado la cspide, la partcula se aproxima a la membrana plasmtica y se produce
la evaginacin de la membrana y luego el desprendimiento del brote. El brotamiento puede
ser explicado por relacin entre las protenas de la membrana plasmtica y la nucleocpsi-
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 21
Efecto citoptico
El efecto citoptico consiste en alteraciones morfolgicas de las clulas, que resultan en la
muerte celular. Este efecto es diferente dependiendo el tipo de virus. En cultivos infectados
con adenovirus, las clulas se redondean y se agrupan como un racimo de uvas. En cambio,
las clulas infectadas con poliovirus tambin se redondean pero se retraen y se lisan liberan-
do muchos virus. El virus sincicial respiratorio, produce fusin de las membranas celulares,
originando grandes sincicios.
Cuerpos de inclusin
Los cuerpos de inclusin son acmulos intracelualres de material nuevo. Algunos se producen
por acumulacin de viriones o de subunidades virales no reunidas. Estos cuerpos de inclusin
pueden romper la estructura celular o cambiar la funcin y producir la muerte celular. Otros
corpsculos pueden desarrollarse en lugares donde existe sntesis viral, pero no tienen viriones
detectables; por ejemplo los corpsculos eosinfilos intranucleares en las clulas infectadas
por virus del herpes simple.
Transformacin celular
Algunos virus son productores de tumores o de leucemia. Pueden presentar muchos efectos
en las clulas: estimulacin de la sntesis de ADN celular (virus del polioma); alteraciones
de la superficie evidenciadas por especificidades antignicas nuevas (distintas de aquellas
pertenecientes a las subunidades de los viriones); aberraciones cromosmicas y alteraciones
del crecimiento celular. Este cambio de una clula normal a una maligna, ha sido llamado
transformacin.
Bibliografa
Davis B, Dulbecco R, Ginsberg H. Microbiologia. San Pablo, Brasil Harper and Row, 3ra ed. 1985.
Fields B, Knipe D. Virology. New York. Raven Press,2nd ed.. 1990.
Joklik WK, Willett HP, Amos DB, Wilgert CM. editores, Zinsser Microbiologa. 20 ed. BsAs. Panamericana;
1994.
22 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 23
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2 Morfologa y
estructura bacteriana
M. Prez, M. Mota
Los organismos multicelulares, animales y plantas, estn constituidos por clulas eucariotas
(eu de verdadero). Los protistas, los hongos y las algas que se organizan de forma unicelular,
multicelular o en colonias (como los protistas), tambin poseen clulas eucariotas.
Dentro de este esquema, las bacterias son microorganismos unicelulares procariotas. En
este reino, segn criterios evolutivos, diferenciamos el grupo de las eubacterias y el de las
arqueobacterias. Este ltimo comprende bacterias sin peptidoglicano como las anaerobias que
viven en condiciones cidas calientes, las que viven en condiciones salinas y las que reducen
el anhdrido carbnico (CO2) a metano. Por lo tanto stas viven en las profundidades del
mar, en las aguas saladas y en las fuentes cidas. Las eubacterias, en cambio, viven en el sue-
lo, el agua y los organismos vivos; entre ellas se encuentran las bacterias de inters mdico,
las bacterias verdes fotosintetizadoras, las cianobacterias o algas verdeazules y las bacterias
prpuras fotosintetizadoras. A continuacin nos referiremos a las eubacterias simplemente
como bacterias.
Como caracterstica principal, los procariotas no poseen compartimientos intracelulares
delimitados por membranas, por lo que carecen de membrana nuclear, a diferencia de los
eucariotas. Tambin es importante destacar que el ADN procariota es circular y cerrado,
mientras que el eucariota se organiza en cromosomas individuales y se asocia a protenas de
tipo histonas. Las bacterias poseen una pared celular compuesta por peptidoglicano (a ex-
cepcin de los Mycoplasmas) mientras que las clulas eucariotas no tienen este tipo de pared
(la pared celular de los vegetales es de celulosa). La reproduccin en los eucariotas puede
ser tanto sexuada como asexuada, mientras que los procariotas se reproducen por divisin
simple (forma asexuada). El tamao de la clula eucariota es mayor que el de la procariota.
Los procariotas no poseen citoesqueleto, a diferencia de los eucariotas. Otra diferencia es la
presencia de fimbrias o pilis en las bacterias. Los procariotas pueden poseer flagelos, mien-
tras que los de los eucariotas si los poseen, stos tienen una estructura ms compleja. Por
ltimo mencionar que mientras las clulas eucariotas se reproducen por mitosis, las clulas
procariotas lo hacen por fisin binaria. En dicho proceso la clula crece, se forma un tabique
y finalmente se desprenden dos clulas nuevas. En este proceso se produce tambin la repli-
cacin del ADN, de forma que las clulas hijas contienen cada una un duplicado idntico
del genoma de la progenitora.
TAMAO
El tamao de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 m, pudiendo llegar en algunos tipos a 10
m. Las bacterias de inters mdico tienen un tamao entre 0.4 y 2 m. Solo son visibles
entonces, al microscopio ptico o microscopio electrnico. Para observarlas con el microscopio
ptico se usa el objetivo de inmersin (100X), sumergiendo esta lente en una gota de aceite
(aceite de inmersin) en el preparado a observar. A modo comparativo, una clula eucariota
mide ms de 5 m (un eritrocito tiene un dimetro de 7m), mientras que un reovirus mide
menos de 0.1m. Su tamao pequeo determina una relacin entre la superficie y el volumen
elevada, con alta tasa metablica.
MORFOLOGA
Microscpica
La forma de las bacterias al microscopio est determinada por la rigidez de su pared celular.
Bsicamente, se diferencian segn su forma en cocos (esfricas u ovaladas), bacilos (cilndrica
o de bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral); dentro de estas ltimas se encuentran:
Treponema, Borrelia y Leptospira (ver figura 1). Las espirilos varan en el nmero de vueltas,
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 25
desde pocas (Borrelia) a muchas (Treponema). Las bacterias pueden mantenerse unidas unas con
otras despus de la divisin celular, pero conservando siempre la independencia celular. Si el
plano de divisin es nico, podemos encontrar diplococos o cocos en cadena (microorganismos
del gnero Streptococcus). Si los planos de divisin son muchos, los cocos pueden agruparse
en ttradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos (cocobacilos) o
muy largos. Sus extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden estar aislados, en cadenas,
en filamentos o formando letras chinas (Corynebacterium). Los bacilos curvos pueden tener
forma de coma (Vibrio cholerae).
La morfologa bacteriana debe ser observada con el microscopio ptico o el microscopio
electrnico, dado el tamao pequeo de estos microorganismos. El ms usado en el laboratorio
es el microscopio ptico de campo claro, pero existen otros como el microscopio ptico de
campo oscuro en los que los organismos aparecen brillantes en fondo oscuro. Este micros-
copio permite la visualizacin de bacterias difciles de colorear como el Treponema pallidum,
agente de la sfilis.
Las bacterias pueden observarse sin tincin (examen en fresco) si se las coloca en glicerol
o soluciones no acuosas que aumenten el ndice de refraccin o con tincin usando distintas
coloraciones que mejoran su visualizacin ya que son clulas incoloras. Dichas tinciones se
basan en la afinidad que presentan los colorantes por las estructuras bacterianas. Los colo-
rantes catinicos por ejemplo, son atrados por los componentes de carga negativa como los
cidos nucleicos y los polisacridos. Ejemplo de este tipo son: el azul de metileno, el cristal
violeta y la safranina.
26 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
Macroscpica
La mayora de las bacterias se multiplican rpidamente y son visibles como colonias cuando se las
siembra en medios de cultivo slidos adecuados. Requieren una incubacin de aproximadamente
24 horas en una atmsfera que favorezca su desarrollo, a temperatura ptima. Existen excepciones
como M. tuberculosis, que requiere para su desarrollo de dos a ocho semanas de incubacin.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 27
Una colonia est constituida por los descendientes de una o unas pocas clulas. Las
caractersticas de la colonia tambin dependen de la movilidad de la bacteria. El tamao
puede variar desde 0.5 mm (Haemophilus sp. o N. gonorrhoeae) a ms grandes como las ente-
robacterias. La forma de la colonia puede ser circular (Staphylococcus), irregular o filamentosa
(Bacillus). Los bordes pueden ser ondulados (caractersticos de los bacilos largos como Bacillus
anthracis), en sierra o dentados (Yersinia pestis) o lisos (por ejemplo Proteus vulgaris o Esche-
richia coli). La superficie de la colonia tambin es orientadora y puede ser: plana, convexa,
mamelonada, umbilicada (S. pneumoniae). En relacin al pigmento que adquieren, ste puede
ser: verde (P. aeruginosa), amarillo (S. aureus), grisceo (N. meningitidis). Tambin es diferente
el comportamiento frente a la luz: brillante (Streptococcus) u opaca (Staphylococcus). Pueden
presentar olores particulares como el frutal de P. aeruginosa o el putrefacto de los anaerobios.
Por ltimo hay que destacar la consistencia: mucoide (M), liso (S) o rugoso (R). Las colonias
M tienen aspecto acuoso, brillante, propio de las bacterias capsuladas o que forman cubiertas
polisacridas como Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae. Los
polmeros capsulares pueden ser especficos de grupo y son generalmente antignicos. Entre las
bacterias patgenas, las formas capsuladas suelen ser ms virulentas. Por otra parte, las colonias
S son de aspecto homogneo, de textura uniforme y son caractersticas de microorganismos
de tipo salvaje recientemente aislados de su hbitat natural como las enterobacterias. Las
colonias R son de aspecto granulado, en general son cepas mutantes que carecen de protenas
o polisacridos de superficie. Las formas R de enterobacterias, por ejemplo, generalmente no
son virulentas, en oposicin a la mayor resistencia de las bacterias procedentes de colonias S
de tipo salvaje. Un cuarto tipo de colonia es la L y se asocia a la ausencia de la pared celular
como resultado de la exposicin a antibiticos; en general estas formas vuelven a sintetizar
la pared celular una vez que el frmaco se extrae del medio.
Estructura bacteriana
Las diferentes estructuras bacterianas que observamos (ver figura 2) las podemos dividir, segn
sean constantes en las clulas o no, en estructuras permanentes o variables. Dentro de las
primeras se destaca: la pared celular, la membrana celular, los ribosomas y el material gentico.
Las estructuras variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la cpsula y los esporos.
Estructuras variables, son aquellos que existen en algunas bacterias pero no en todas; un
mismo grupo bacteriano o una misma cepa bacteriana las puede presentar o no, dependiendo
de las condiciones en donde se desarrolle. Las estructuras variables no resultan esenciales
para la vida de la bacteria.
Adems podemos clasificar las estructuras bacterianas en internas o citoplsmicas y ex-
ternas o de la envoltura celular. Dentro de las internas destacamos el material gentico, los
ribosomas y los cuerpos de inclusin. La envoltura celular engloba la membrana plasmtica,
la pared celular que la recubre, la cpsula y los apndices como fimbrias o pilis y flagelos.
Contiene los sitios de transporte para nutrientes, interviene en la relacin husped parsito,
es blanco de las reacciones del sistema inmune y puede contener estructuras txicas para el
husped.
Material gentico
cido desoxirribonucleico cromosmico
El ADN tanto procariota como eucariota se compone de dos cadenas helicoidales de nu-
cletidos de purina y de pirimidina, unidos entre s por enlaces de hidrgeno, formando una
doble hlice segn el modelo de Watson y Crick.
Las bacterias no poseen membrana nuclear, nuclolo ni aparato mittico y nunca confi-
guran una masa cromosmica definida. Esto las diferencia de las clulas eucariotas. Aunque
no existe un ncleo delimitado, hay una zona nuclear o nucleoide.
Su material gentico est constituido por una molcula de ADN circular enrollado sobre
s mismo, asociado a protenas bsicas que no constituyen verdaderas histonas.
Plsmidos
Constituyen el material gentico extracromosmico. Estn constituidos por secuencias cortas
de ADN circular bicatenario, que pueden existir y replicarse independientemente del ADN
cromosmico y son heredados por las clulas hijas. Aunque no son esenciales para la vida de
la bacteria, generalmente proveen a sta una ventaja selectiva, por ejemplo: resistencia a los
antibiticos, nuevas capacidades metablicas, patognicas (cuando codifican para factores de
virulencia como toxinas, etc.) u otras numerosas propiedades. Pueden transferirse de bacteria
a bacteria mediante un proceso denominado conjugacin.
Ribosomas
Libres en el citoplasma, estn compuestos por protenas y cido ribonucleico (ARN); su
coeficiente de sedimentacin es de 70S (a diferencia de la clula eucariota que es de 80S)
con dos subunidades de 50S y de 30S. Pueden presentarse aislados o como polirribosomas,
asociados a ARN mensajero (ARNm) y a ADN cromosmico. Un mismo ARNm puede ser
traducido por varios ribosomas simultneamente durante la sntesis proteica. Los ARNm
bacterianos difieren en el nmero de protenas para las que codifican. Algunos representan
un nico gen (monocistrnicos), otros, la mayora, tienen secuencias que codifican para ms
de una protena (policistrnicos).
Su funcin es la sntesis proteica y su cantidad aumenta cuando la bacteria crece en medios
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 29
ricos. Su alto contenido de sustancias cidas los hace sensibles a la tincin con colorantes
positivos o bsicos como el cristal violeta y el azul de metileno.
Cuerpos de inclusin
Son grnulos de material orgnico o inorgnico, algunas veces rodeados de membrana. En
general funcionan como almacenamiento de compuestos energticos que son usados como
fuente de energa (polisacridos, lpidos, polifosfatos). El glucgeno constituye el principal
elemento almacenado por las enterobacterias (40% de su peso). Algunas pseudomonas acu-
mulan carbono como cido poli--hidroxibutirato y las micobacterias contienen grnulos de
polifosfato. Con frecuencia las inclusiones pueden verse directamente con el microscopio de
luz sin tinciones especiales.
Pared celular
Ubicada por fuera de la membrana plasmtica, es una estructura vital para las bacterias que
la poseen. Los frmacos que bloquean su formacin producen la lisis y muerte de las bacterias
susceptibles. Excepto los mycoplasmas todas las bacterias tienen una pared celular que les da
forma y las protege de la lisis osmtica. La pared celular de muchos microorganismos patgenos
tiene componentes que contribuyen a su patogenicidad. La pared puede proteger a la clula
de las sustancias txicas y es el sitio de accin de algunos antibiticos.
Despus de que Christian Gram en 1884 desarrollase la tincin que lleva su nombre, se
30 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
comprob que las bacterias podan clasificarse en dos grupos principales, segn su respuesta
a esta coloracin. Las bacterias grampositivas se tien de color azul violeta y las gramnega-
tivas adquieren un color rosa o rojo. La diferencia estructural verdadera entre ambos grupos
se puso de manifiesto con el desarrollo del microscopio electrnico. La pared de una clula
grampositiva est formada por una nica capa homognea de 20 a 80 nm de grosor de pepti-
doglicano o murena, situada por fuera de la membrana celular. Por el contrario, la pared de la
clula gramnegativa es ms compleja; posee una capa de 2 a 7 nm de grosor de peptidoglicano
rodeada por una membrana externa.
En las microfotografas electrnicas se observa un espacio entre la membrana plasmtica
y la externa de las bacterias gramnegativas y, a menudo entre la membrana plasmtica y la
pared celular en las grampositivas. Dicho espacio se denomina espacio periplsmico y est
ocupado por un gel, el periplasma. El espacio periplsmico de las bacterias gramnegativas
contiene muchas protenas que participan en la captacin de nutrientes, por ejemplo enzimas
hidrolticas (proteasas, lipasas, fosfatasas, -lactamasas) que convierten las macromolculas
en productos ms pequeos que pueden ser metabolizados por la bacteria. El espacio peri-
plsmico contiene tambin enzimas que participan en la sntesis del peptidoglicano y en la
modificacin de compuestos txicos que podran lesionar la clula. En especies patgenas,
tambin encontramos a ese nivel factores de virulencia como colagenasas, hialuronidasas y
proteasas. Es posible que las bacterias grampositivas no tengan un espacio periplsmico visible
y secretan enzimas denominadas exoenzimas, que corresponderan a las periplsmicas de las
bacterias gramnegativas.
El peptidoglicano o murena es un gran polmero compuesto por muchas subunidades
idnticas. (Ver figuras 3 Y 4). El polmero contiene dos aminoazcares: N-acetilglucosamina
y cido N-acetilmurmico; unidos entre s en la posicin 1-4. El esqueleto de este polmero
est formado por residuos alternantes de N-acetilglucosamina y cido N-acetilmurmico.
Una cadena peptdica de cuatro aminocidos D- y L- alternantes est conectada a un grupo
carboxilo del cido N-acetilmurmico. Los tetrapptidos de una y otra cadena de peptidogli-
cano se unen entre s por puentes peptdicos.
Existen diferencias en el espesor de esta capa de peptidoglicano. Las bacterias gramposi-
tivas tienen una capa gruesa de 0,02 a 0,06m en forma de capas mltiples, mientras que las
bacterias gramnegativas y las cido alcohol resistentes tienen una capa fina de peptidoglicano,
de 0,01 m aproximadamente.
En el momento de la divisin celular se debe formar una nueva pared celular. En la pared
de la clula en divisin, enzimas producidas por la misma bacteria (autolisinas), forman como
brechas en la vieja pared. (Ver figura 5). Es en esas brechas o aberturas donde se agrega el
peptidoglicano de la nueva pared en formacin.
A nivel del citoplasma, se forma un precursor o unidad monomrica con uridin-difosfato
cido N-acetilmurmico (UDP-N-AcM). Los aminocidos son adheridos secuencialmente al
UDP-N-AcM hasta formar una cadena de pentapptidos con dos D-alanina terminales.
La segunda etapa en la sntesis de la pared celular se produce en la membrana plasmtica,
donde se encuentra el transportador lipdico: bactoprenol. El pentapptido N-acetilmurmico
se transfiere desde el UDP al bactoprenol y luego una molcula de N-acetilglucosamina se
une al complejo pentapptido N-AcM a travs de este ltimo. El bactoprenol transporta el
bloque formado a travs de la membrana plasmtica.
Cuando llega al espacio periplsmico estos bloques de disacridos son colocados en las
brechas ya formadas y unas enzimas denominadas ligasas unen los monmeros a una cadena
de peptigoglicano en crecimiento. El paso final y fundamental para una correcta funcin de
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 31
la pared es la unin de las cadenas de peptidoglicano entre s. Dicho paso se conoce como
transpeptidacin y consiste en la unin de cadenas peptdicas adyacentes, mediante la for-
macin de una unin peptdica entre una D-alanina de una cadena y una L-lisina o cido
diaminopimlico (DAP) de otra cadena. Esta reaccin de entrecruzamiento se hace con la
participacin de transpeptidasas tambin denominadas penicilin binding proteins (PBP), ya
que son el sitio blanco de accin de la penicilina y otros antibiticos -lactmicos. stos se
unen a las PBP impidiendo la transpeptidacin, provocando la lisis osmtica de las bacte-
rias. Esto se producira aparentemente por la semejanza estructural entre la penicilina y el
dmero D-ala-ala reconocido por las PBP que hace que en presencia de penicilina, las PBP
se confundan y elaboren un complejo penicilina-enzima que resulta letal para la bacteria
(en lugar del complejo D-ala-enzima).
Figura 6. Estructura
del LPS de Salmo-
nella. Abe, abecuo-
sa; Gal, galactosa;
Glc, glucosa; GlcN,
glucosamina; Hep,
h e p t u l o s a ; K D O,
2-ceto-3-desoxioc-
tonato; Man, mano-
sa; NAG, N-acetilglu-
cosamina; P, fosfato;
Ra, L-ramnosa.
sobre un blanco que no es propio del hombre y que es vital para la vida bacteriana (poseen
toxicidad selectiva). Tambin acta como filtro, impidiendo el ingreso de algunas molculas
y permitiendo la entrada de metabolitos imprescindibles y agua. Contiene determinantes
patognicos, como el lpido A del LPS y estructuras antignicas que sirven para identificar y
clasificar a la bacteria (antgeno O de las enterobacterias o polisacrido C del Streptococcus
sp.). Podramos decir entonces, que la pared bacteriana es un gran mosaico de antgenos que
son usados en la clasificacin y en la identificacin bacteriana.
Tambin antgenos de la pared celular (antgeno O del LPS y protenas de la membrana
externa), han sido ensayados como inmungenos en la produccin de vacunas; por ejemplo la
vacuna antimeningoccica para el grupo B. La porcin central del LPS o core, que es invaria-
ble entre las diferentes bacterias y no es txica, tambin se ha ensayado como inmungeno.
Cpsula
Cuando existe est ubicada por fuera de la pared celular. Las bacterias producen material
capsular que, cuando se asocia ntimamente a la superficie celular recibe el nombre de cpsula.
Si su adherencia es dbil y de grosor variable, se conoce como limo.
Generalmente es de naturaleza polisacrida (a excepcin de la cpsula del Bacillus anthracis
que es peptdica).
No es una estructura vital para la clula, su prdida no se relaciona con la prdida de
viabilidad celular, pero s con cambios de la morfologa colonial y con la prdida de la viru-
lencia bacteriana.
La virulencia de algunos patgenos se correlaciona con la presencia de cpsula, como
por ejemplo: Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae tipo b. La cpsula protege a
la bacteria de la fagocitosis, principal mecanismo de defensa que pone en juego el husped
ante la presencia de bacterias capsuladas. Una respuesta efectiva para defenderse de este tipo
de bacterias implica la produccin de anticuerpos que se unan especficamente a la cpsula
facilitando la opsonizacin y la fagocitosis.
De su capacidad antignica se desprende el uso de la cpsula para la produccin de
diferentes vacunas que estimulan la formacin de anticuerpos especficos. Ejemplos de ellas
son las vacunas: anti neumoccica, anti Haemophilus influenzae tipo b y anti meningoccica
A, B y C.
Las bacterias que producen cpsula forman en los medios slidos colonias acuosas,
mucoide (M) o lisas (S), en cambio, las cepas rugosas (R) no producen cpsula. La prdida
de la capacidad de formar cpsula por mutacin S a R se correlaciona con la prdida de la
virulencia y el aumento de la susceptibilidad a la destruccin por los fagocitos; aunque no
afecta la viabilidad. Muchas cepas bacterianas producen cpsula o limo cuando son aisladas
en cultivo por primera vez a partir de un husped. Con los reaislamientos sucesivos, dejan
de producirla, lo que indicara que la presencia de la cpsula no ofrece ventaja selectiva in
38 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
vitro. Su produccin est regulada genticamente, de forma que las bacterias la presentan
cuando es necesaria para la supervivencia dentro del husped.
La presencia de cpsulas tambin se puede demostrar por tincin negativa con tinta
china. La tinta china no penetra la cpsula pero delimita un contorno refringente alrededor
del cuerpo bacteriano en un fondo oscuro.
Los antgenos capsulares son muy tiles en la clasificacin e identificacin de diferentes
bacterias, por ejemplo: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis,
etc.
Fimbrias o pilis
Son estructuras filamentosas, proteicas, que se diferencian de los flagelos por su dimetro
(menor a 8 nm) y por no poseer estructura helicoidal; no cumplen funciones de movilidad.
Son estructuras variables, no vitales para las bacterias que las poseen.
Los pili comunes cumplen funciones de adherencia a receptores especficos y superficia-
les, esto es importante en las especies de relevancia clnica porque median la adherencia de
muchas bacterias a determinados epitelios, jugando un papel fundamental en la colonizacin.
Por ejemplo, las cepas de Neisseria gonorrohoeae patgenas son aquellas que poseen fimbrias
que se adhieren especficamente al epitelio uretral del hombre o al epitelio del crvix uterino
de la mujer. Las cepas de E. coli capaces de causar infeccin urinaria tienen fimbrias que les
permiten adherirse especficamente al epitelio del aparato urinario. Tambin la E. coli ente-
ropatgena (EPEC) tiene fimbrias que le permiten adherirse al epitelio intestinal para luego
producir los cambios que determinarn la diarrea.
Existen otras estructuras llamadas pilis sexuales que son ms largos y poca cantidad (dos
o tres por clula). Estos intervienen en el intercambio gentico entre bacterias, de all su
nombre. El apareamiento de dos bacterias y la transferencia de ADN a travs del pili sexual se
conoce como conjugacin. Se transfiere material gentico de una clula donadora (que posee
un plsmido F que codifica el pili sexual, entre otras cosas) a una receptora. En general el
material transferido es un plsmido o una porcin de cromosoma movilizada por un plsmido.
Una vez unidas las bacterias los pilis sexuales se retraen, permitiendo que las clulas se unan y
pase el ADN de la donadora a la receptora, formndose una verdadera unin (puente) entre
las membranas de las clulas para el pasaje del ADN. La clula receptora est estrechamente
emparentada con la donadora y posee un receptor especfico para los pilis sexuales.
permite el movimiento de avance, mientras que la rotacin en el sentido de las agujas del
reloj hace que las clulas den vueltas.
Los flagelos pueden variar en nmero, desde uno a cientos. Las especies bacterianas
difieren por sus modelos de distribucin de flagelos. Las monotricas (trichous: pelo) tienen
un solo flagelo que si se sita en un extremo de la bacteria y se denomina polar. Las bacterias
anfitricas (amphi: en ambos lados) tienen un flagelo en cada polo bacteriano. En cambio, las
lofotricas (lopho: mechn) poseen un grupo o penacho de flagelos en uno o ambos extremos.
Por ltimo, en las bacterias peritricas (peri: alrededor), los flagelos se distribuyen uniforme-
mente en toda la superficie bacteriana. Los modelos de distribucin de los flagelos son tiles
para identificar a las bacterias.
Los flagelos no son necesarios para la vida bacteriana. Su sntesis est regulada por las
necesidades nutricionales o el estado energtico y ocurre por la adicin de monmeros de
flagelina al extremo distal de los flagelos en crecimiento. La sntesis del filamento es un
ejemplo excelente de autoensamblaje, es decir que la informacin necesaria para construir
el filamento est en la propia estructura de la subunidad de flagelina; no colaboran enzimas
especiales u otros factores. Las bacterias flageladas pueden buscar nutrientes o evitar los
txicos siguiendo los gradientes; la funcin flagelar se debe a respuestas quimiotcticas y la
energa para el movimiento proviene de una corriente de protones.
La movilidad y, por lo tanto, la presencia de flagelos, constituye un factor de virulencia.
El antgeno flagelar recibe el nombre de antgeno H. Las bacterias flageladas reaccionan
con antisueros especficos para flagelos, provocando una aglutinacin tpica.
Las espiroquetas (Treponemas, Leptospiras y Borrelias) se mueven en onda helicoidal; dicho
movimiento les permite penetrar en medios viscosos. Estas bacterias tienen filamentos axiales
que no se extienden de un polo a otro de la clula, sino que se originan en polos opuestos y
se superponen en el centro de la clula, sin presentar conexiones entre s.
40 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
ESPOROS
Algunas bacterias grampositivas pueden formar una estructura especial inactiva de resistencia,
denominada endospora o espora. Se desarrollan dentro de clulas bacterianas vegetativas
(por eso la denominacin de endospora) de los gneros Bacillus y Clostridum entre otros.
Estas estructuras son resistentes a situaciones vitales estresantes como el calor, la desecacin,
la radiacin ultravioleta, los cidos y los desinfectantes qumicos. Debido a su resistencia y
al hecho de que varias especies de bacterias formadoras de esporas son agentes patgenos
peligrosos, las esporas tienen gran importancia en microbiologa alimentaria, industrial y
mdica. El conocimiento de estas formas altamente resistentes al calor (pueden sobrevivir a
la coccin durante una o ms horas) fue esencial para el desarrollo de mtodos adecuados
de esterilizacin para medicamentos, alimentos, medios de cultivo microbiolgicos, etc. En
el ambiente las endosporas permiten la supervivencia de las bacterias cuando la humedad o
los nutrientes son escasos.
Se pueden observar con el microscopio ptico y electrnico. Como las esporas son im-
permeables a la mayora de los colorantes, se observan como reas incoloras dentro de las
clulas coloreadas. Existen adems coloraciones especiales para teir los esporos. La situacin
de la espora en la clula madre o esporangio, es caracterstica para una especie bacteriana
determinada, siendo esto importante para la identificacin de la bacteria. Las esporas pue-
den estar en el centro de la bacteria (C. perfringens), prxima a un extremo o subterminal
(C. botulinum) o en el extremo, terminales (C. tetani). A veces la espora es tan grande que
deforma el esporangio (C. botulinum).
Dentro de una clula vegetativa se produce una espora nica, que se diferencia de la
clula madre en su morfologa y composicin, en el aumento de la resistencia a los ambientes
adversos y en la ausencia de actividad metablica evidente. El proceso incluye la formacin
de numerosas cubiertas y la captacin de calcio con sntesis de cido dipicolnico. Al final de
la esporulacin queda una partcula deshidratada que contiene ADN genmico. Ese ADN se
vuelve resistente a la desecacin, al calor extremo, a la radiacin y al ataque por la mayora
de las enzimas y agentes qumicos. Pueden permanecer en esta forma por aos o convertirse
nuevamente en la forma vegetativa idntica a la que les dio origen; este proceso recibe el
nombre de germinacin de la espora. La germinacin se produce por el calentamiento suave
o la presencia de nutrientes determinados; la espora capta agua, se hincha, se desprenden sus
cubiertas y se forma la clula vegetativa idntica a la original. El ciclo vital de una bacteria
productora de esporos se ilustra en la figura 9.
La estructura de la espora es compleja y se distinguen de afuera hacia adentro: el exosporio,
capa delicada y delgada; la cubierta, compuesta por muchas capas de protenas, puede ser
gruesa; la corteza, constituida por peptidoglicano modificado, con menos enlaces que en la
clula vegetativa, puede ocupar la mitad del volumen celular; la pared celular de la espora
rodeando al protoplasto y el protoplasto, conteniendo las estructuras celulares normales como
ribosomas y un nucleoide.
An no se ha determinado por que la espora es tan resistente al calor y otros agentes
letales. El 15% del peso seco de la espora consiste en cido dipicolnico que forma complejos
con iones de calcio. Quiz el complejo dipicolinato clcico estabilice los cidos nucleicos de
las esporas. Recientemente se han descubierto en endosporas, protenas pequeas, solubles
en cido que se unen especficamente al ADN, lo saturan y lo protegen del calor, la radia-
cin, la desecacin y las sustancias qumicas. La deshidratacin del protoplasto parece ser
muy importante en la resistencia al calor. La corteza puede eliminar osmticamente el agua
del protoplasto y proteger as a la clula del calor y la radiacin. En resumen, la resistencia
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 41
al calor de las endosporas se produce por: estabilizacin del ADN por dipicolinato clcico y
protenas solubles en cido, deshidratacin del protoplasto y mayor estabilidad de las protenas
celulares en bacterias adaptadas a crecer a temperaturas elevadas, entre otras.
La formacin de esporas, esporognesis o esporulacin, comienza cuando cesa el creci-
miento debido a una falta de nutrientes. Los cambios que ocurren durante la esporulacin son
el resultado del cese de la funcin de ciertos genes vegetativos y de la expresin de nuevos
genes. La formacin de esporos se regula negativamente: la clula elabora un represor; a partir
de algn componente del medio, que impide la iniciacin de la esporulacin. Cuando este
compuesto se agota, se libera la inhibicin y se inicia la esporulacin. El factor especfico que
regula la iniciacin de la esporulacin es el trifosfato de guanosina (GTP). La disminucin
del pool de GTP es suficiente para iniciar la esporulacin en algunas especies bacterianas
estudiadas.
La transformacin de esporas inactivas en clulas vegetativas es casi tan compleja como la
esporulacin. Se producen tres fases: activacin, germinacin y crecimiento. La primera es un
proceso reversible que se produce generalmente por calentamiento o por sustancias qumicas.
Una endospora no germinar satisfactoriamente, incluso en un medio rico en nutrientes, si no
ha sido activada. En la germinacin termina el estado de reposo de la espora. Es un proceso
irreversible desencadenado por la exposicin del esporo activado a algunos nutrientes y otros
estimulantes (alanina, otros aminocidos, nuclesidos y glucosa). Se caracteriza por hincha-
zn de la espora, rotura o absorcin de la cubierta de sta, prdida de la resistencia al calor
y otros factores estresantes, prdida de la refractariedad, liberacin de los componentes de
la espora y aumento de la actividad metablica. Por ltimo, en el crecimiento, el protoplasto
de la espora sintetiza nuevos componentes, emerge a partir de los restos de la cubierta de la
espora y se transforma nuevamente en una bacteria activa.
42 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
Bibliografa
Prescott, Harley, Klein. Microbiologa. Mc Graw-Hill Interamericana de Espaa. 4 ed. 1999.
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TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 43
Pgina 43
3 Fisiologa y
metabolismo
bacteriano
G. Varela, G. Grotiuz
Las bacterias son los organismos ms pequeos que tienen la maquinaria requerida para el
crecimiento y la replicacin. Estn compuestas, como las clulas eucariotas, por protenas,
polisacridos, lpidos, cidos nucleicos, entre otros. Estas macro-molculas pueden formar
parte de estructuras celulares ms complejas, como la pared celular y la membrana plasmtica.
El crecimiento bacteriano se define como el aumento ordenado de todos los constituyentes
qumicos de la clula. Es un proceso complejo que supone la replicacin de todas las estruc-
turas y componentes celulares a partir de nutrientes exgenos.
El conocimiento de la fisiologa y del metabolismo bacteriano tiene algunas aplicaciones
prcticas. En principio permite conocer el modo de vida y el hbitat de diferentes especies
bacterianas. El ser humano actuando como husped, ofrece una variedad de nichos ecolgicos
que se diferencian entre s por aspectos fsicos y qumicos (temperatura, concentracin de
oxgeno, pH, presin osmtica, etc.), en los cuales pueden crecer y multiplicarse distintas
especies bacterianas segn sus requerimientos nutricionales, ambientales y atmosfricos.
Adems, permite formular medios de cultivo para el aislamiento e identificacin de los pat-
genos participantes. Desde un enfoque teraputico, nos permite conocer y entender el modo
de accin de algunos antibiticos que bloquean una va metablica o la sntesis de alguna
macromolcula esencial para la bacteria.
El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que se producen en
la clula y tiene tres funciones especficas. La primera es obtener energa qumica del entorno
y almacenarla, para luego usarla en diferentes funciones celulares. La segunda es convertir
los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los componentes macromoleculares de la
clula bacteriana. Y la tercer funcin es formar y degradar molculas necesarias para cumplir
funciones celulares especficas, por ejemplo: movilidad y captacin de nutrientes.
El metabolismo se produce por secuencias de reacciones catalizadas enzimticamente y
se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso por el cual la clula bacteriana sintetiza
sus propios componentes se conoce como anabolismo y resulta en la produccin de nuevo
material celular; tambin se denomina biosntesis. La biosntesis es un proceso que requiere
energa, por lo tanto las bacterias deben ser capaces de obtenerla de su entorno para crecer
y, eventualmente, multiplicarse. El conjunto de reacciones degradativas de los nutrientes
para obtener energa o para convertirlos en unidades precursoras de la biosntesis, se conoce
como catabolismo.
As, hemos visto dos tipos de transformaciones qumicas que ocurren simultneamente
en la bacteria, por lo tanto el metabolismo es el resultado colectivo de ambas reacciones.
44 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
FERMENTACIN
En sta los electrones pasan del dador, un intermediario formado durante la degradacin
del substrato, hacia un aceptor constituido por algn otro intermediario orgnico tambin
generado durante el catabolismo del substrato inicial. Por lo tanto, este proceso de oxidacin
reduccin no requiere el aporte exgeno de un aceptor final de electrones.
Aunque hay distintos tipos de fermentaciones, todas llevan a una oxidacin parcial de
los tomos de carbono del substrato inicial y liberan, por lo tanto una pequea parte de la
energa potencial contenida (Ver figura 1). El rendimiento energtico de este proceso es
menor que el de la respiracin.
En las bacterias se encuentran las tres vas centrales del metabolismo intermediario de
los hidratos de carbono: la glucoltica o de Embden Meyerhof Parnas, la de pentosa fosfato o
shunt de las pentosas y la de Entner-Doudoroff.
La va glucoltica que degrada la glucosa se divide en tres etapas principales. La primera
es preparativa, con reacciones que no son de oxidacin reduccin, sin liberacin de energa
y con formacin de dos intermediarios de tres tomos de carbono cada uno. En la segunda
etapa, s ocurren reacciones de oxidacin reduccin con liberacin de energa, formacin de
ATP por fosforilacin a nivel del substrato (el ATP se genera en un paso enzimtico espe-
cfico) y produccin de dos molculas de piruvato. En la tercer etapa, nuevamente ocurren
reacciones de oxidacin reduccin y se generan los productos finales de la fermentacin, que
varan segn la bacteria en cuestin. Solo una pequea parte de la energa libre que poten-
cialmente puede derivar de la degradacin de una molcula de glucosa queda disponible por
esta va, dado que los productos finales son compuestos en los que el carbono se encuentra
todava en estado reducido.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 45
Por cada molcula de glucosa que entra a esta va, se forman cuatro molculas de ATP
y como se consumen dos en la primer etapa, el balance neto es de dos molculas de ATP
por cada molcula de glucosa fermentada. El destino final del metabolito clave, el piruvato,
depende de los procesos empleados para la regeneracin del dinucletido de nicotinamida
adenina (NAD) a partir del dinucletido de nicotinamida adenina reducido (NADH) y as
mantener el equilibrio de oxidacin reduccin.
Aunque la va glucoltica es la ms importante en las clulas eucariotas y procariotas, no
es la nica. La va de las pentosas es una ruta multifuncional para la degradacin de hexosas,
pentosas y otros hidratos de carbono. Para los fermentadores heterolcticos es la principal
fuente productora de energa, aunque la mayora de las bacterias usan esta va como fuente
de dinucletido de nicotinamida adenina fosfato reducido (NADPH) y de pentosas para la
sntesis de nucletidos.
La va de Entner-Doudoroff es la ruta principal para la degradacin de la glucosa en las
bacterias aerobias estrictas como Neisseria y Pseudomonas. Como sucede en la va de las pen-
tosas, aqu solo se produce una molcula de ATP por molcula de glucosa degradada.
El cido pirvico derivado de la glucosa, es un compuesto clave en el metabolismo fer-
mentador de los hidratos de carbono. En su formacin, el NAD es reducido a NADH y ste
46 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
debe oxidarse nuevamente a NAD para alcanzar el equilibrio final de oxidacin reduccin.
Las bacterias se diferencian de las clulas eucariotas por la forma en que eliminan el piruvato;
en las bacterias la oxidacin incompleta es la regla y se acumula gran cantidad de metabolitos
finales de la fermentacin. El estudio y el conocimiento de las fermentaciones bacterianas
tiene importancia prctica, porque proporciona productos industriales que son tiles en el
laboratorio para identificar las diferentes especies. Entonces, segn los productos finales,
tenemos diferentes tipos de fermentacin: alcohlica, homolctica, heterolctica, del cido
propinico, cido mixta, de butanodiol y del cido butrico.
Fermentacin alcohlica
Es el tipo de fermentacin ms antigua que se conoce. Produce etanol a partir de glucosa.
Aunque ciertas bacterias producen alcohol, ste es elaborado por otras vas.
Fermentacin homolctica
Todos los miembros del gnero Streptococcus, Pediococcus y muchas especies de Lactobacillus
fermentan la glucosa fundamentalmente a cido lctico con poca acumulacin de otros
productos finales. En esta reaccin el piruvato se reduce a cido lctico por accin de la
enzima lctico deshidrogenasa, actuando el NADH como dador de electrones. Esto ocurre
en la tercer etapa de la va glucoltica.
Fermentacin heterolctica
En este tipo de fermentacin solo la mitad de la glucosa se convierte en cido lctico, el resto
se transforma en una mezcla de anhdrido carbnico (CO2), cido frmico, cido actico, etc.
En esta fermentacin se emplea fundamentalmente la va de las pentosas y se produce en las
bacterias del gnero Leuconostoc y Lactobacillus.
Fermentacin de butanodiol
Varias bacterias como Enterobacter, Serratia y Bacillus producen 2,3-butanodiol durante la
fermentacin de la glucosa. Este deriva de la condensacin de dos molculas de piruvato en
una molcula neutra de acetona que luego es reducida a 2,3-butanodiol.
RESPIRACIN
Es el proceso por el cual un substrato es oxidado completamente a CO2 y agua, con participa-
cin de una cadena de electrones ubicada en la membrana plasmtica, en la cual el aceptor
final es el oxgeno molecular u otro compuesto inorgnico (nitratos, sulfatos, anhidrido
carbnico, etc.)anaerobia. Los primeros pasos en la respiracin de la glucosa son idnticos
a los de la gluclisis, pero mientras en esta ltima el piruvato es convertido en productos
finales de la fermentacin (cido lctico, cido propinico, etc.), en la respiracin es oxidado
completamente a CO2 mediante el ciclo de Krebs (ver figura 2). Por cada molcula de piruvato
oxidada en este ciclo, se generan tres molculas de CO2. Al igual que en la fermentacin, los
electrones generados en el ciclo de Krebs, pasan a coenzimas que tienen NAD. Sin embargo,
en la respiracin aerobia, los electrones del NADH son transferidos al oxgeno para regenerar
NAD a travs de un sistema transportador, en lugar de cederlos al piruvato.
transporte y se denominan inhibidores. Tanto los desacopladores como los inhibidores son
venenos celulares que actan en clulas eucariotas y procariotas.
Figura 3. Gluclisis
50 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
por lo tanto, dado que cada molcula de glucosa rinde dos de piruvato, 30 molculas de ATP
son sintetizadas por cada molcula de glucosa que entra al ciclo de Krebs (ver figura 3). Esto,
sumado a las seis molculas de la reoxidacin del NADH y las dos del va glucoltica, da un
total de 38 molculas de ATP por molcula de glucosa respirada. Adems de sus funciones
como mecanismo generador de energa, el ciclo de Krebs sirve como productor de metabolitos
claves para la biosntesis.
La reduccin del oxgeno forma radicales libres que son muy txicos para la bacteria. Entre
los ms importantes se encuentra el superxido. ste es eliminado por las bacterias aerobias
y tolerantes del oxgeno, por la enzima superoxidodismutasa que cataliza la formacin de
perxido de hidrgeno, tambin txico. El perxido de hidrogeno es degradado por enzimas
como catalasa y la peroxidasa, a oxgeno molecular y agua. Estas enzimas estn ausentes en las
bacterias anaerobias estrictas, explicando en parte la susceptibilidad que tienen al oxgeno.
En las bacterias aerobias obligadas, el oxgeno es el aceptor final de electrones. Sin
embargo, las bacterias anaerobias facultativas pueden usar, en ausencia de oxgeno, otros
compuestos inorgnicos como aceptores finales de electrones, por ejemplo: nitrato, fumarato,
sulfato, etc.
Crecimiento bacteriano
Puede ser definido como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de la
clula. Las condiciones fsicas y qumicas del medio donde el microorganismo se encuentra
afectan marcadamente sus actividades. La comprensin de como influye el ambiente sobre
el crecimiento nos ayuda a explicar la distribucin de los microorganismos en la naturaleza y
hace posible disear estrategias que favorezcan el crecimiento o que nos permita controlarlo.
Las bacterias como grupo, son extremadamente verstiles y tienen gran capacidad para utilizar
una amplia gama de nutrientes que van desde compuestos inorgnicos simples, a compuestos
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 51
orgnicos ms complejos. Los nutrientes se pueden dividir en dos clases: esenciales, sin los
cuales la clula no puede crecer y no esenciales, se usan cuando estn presentes pero no son
indispensables. Algunos nutrientes son usados solo como precursores de macromolculas
celulares, otros solo como fuente de energa sin ser incorporados directamente al material
celular y otros cumplen las dos funciones al mismo tiempo. Tambin se pueden clasificar como
macro y micronutrientes segn la cantidad requerida.
MACRONUTRIENTES
El carbono es el mayor constituyente de la clula bacteriana, por lo tanto no llama la atencin
que requiera ms carbono que cualquier otro nutriente. Segn la forma en que lo usa, existen
fundamentalmente dos tipos de bacterias: auttrofas y hetertrofas. Las primeras son capaces
de sintetizar todos sus componentes orgnicos a partir de compuestos inorgnicos como el
CO2. Como ejemplo de este grupo citamos las bacterias del suelo, que carecen de inters
mdico. En cambio, las hetertrofas usan sustancias orgnicas como fuente de carbono. En
este grupo se encuentran todas las bacterias de inters mdico.
La glucosa, por ejemplo, es usada como fuente de carbono y de energa. Tambin existen
bacterias que pueden usar otras sustancias orgnicas como fuente parcial o exclusiva de car-
bono. Entre las bacterias ms verstiles se encuentran las del gnero Pseudomonas, muchas
de las cuales pueden usar ms de cien compuestos orgnicos.
Despus del carbono, el elemento ms abundante en la clula es el nitrgeno que repre-
senta entre el 12 y el 15% del peso seco. Es el constituyente principal de las protenas y los
cidos nucleicos. La mayora de las bacterias son capaces de usar el amonio como fuente de
nitrgeno, mientras que otras pueden usar los nitratos. La reduccin de nitratos, se puede
lograr por dos mecanismos diferentes: reduccin asimiladora, en la cual se reduce por la va
del nitrito y reduccin desasimiladora, donde el nitrato sirve como aceptor final de electrones.
La primera est bastante extendida entre las bacterias, mientras que la segunda solo es comn
en bacterias anaerobias y anaerobias facultativas.
El fsforo es usado para la sntesis de cidos nucleicos y de fosfolpidos. La mayora de las
bacterias lo usan en forma inorgnica como fosfato (PO4=). Los fosfatos orgnicos si bien
estn distribuidos ampliamente en la naturaleza, para ser usados deben ser atacados primero
por fosfatasas, enzimas que clivan estos compuestos liberando el fsforo inorgnico.
MICRONUTRIENTES
Aunque requeridos en cantidades muy pequeas, los micronutrientes son importantes para
la nutricin de la bacteria. Entre estos destacamos el cobalto, el cobre y el manganeso.
FACTORES DE CRECIMIENTO
Son sustancias que deben ser aportadas preformadas, porque la bacteria que los requieren no
pueden sintetizarlos a partir de los nutrientes ya sea por falla o ausencia de una va metablica
determinada. Estas sustancias incluyen vitaminas del complejo B, aminocidos, purinas y piri-
midinas. Las bacterias que no necesitan factores de crecimiento, se denominan prototrficas
y, las que s los requieren, auxotrficas para ese factor.
ductor de energa. Segn su relacin con el oxgeno, existen bacterias: anaerobias obligadas,
anaerobias facultativas, aerobias obligadas y microaerfilas.
De las primeras (anaerobias obligadas), existen las estrictas y las aerotolerantes. Las bac-
terias anaerobias obligadas estrictas, crecen en ausencia de oxgeno, el cual es muy txico e
incluso letal cuando la exposicin es breve. Las segundas (aerotolerantes) tambin crecen solo
en ausencia de oxgeno, pero toleran su presencia un poco ms que las anteriores; por ejemplo:
Clostridium sp. Las bacterias anaerobias facultativas, son capaces de crecer en presencia o en
ausencia de oxgeno. Ejemplo de stas son las bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Las
aerobias obligadas, requieren oxgeno para su desarrollo. Dentro de este grupo se encuentran
la Pseudomonas. Por ltimo, las microaerfilas crecen mejor con presiones de oxgeno bajas
(3 a 5%); las concentraciones altas (21%) inhiben su crecimiento.
En las bacterias aerobias, anaerobias facultativas y anaerobias aerotolerantes, la enzima
superoxidodismutasa impide la acumulacin del radical superxido; esta enzima est ausente en
los anaerobios estrictos. El perxido de hidrgeno formado por la accin de la superoxidodis-
mutasa es destruido con rapidez por la enzima catalasa o peroxidasa, como ya se mencion.
En el laboratorio de microbiologa los requerimientos atmosfricos de oxgeno, pueden
determinarse cultivando la cepa en caldo tioglicolato. Este medio contiene muchos nutrientes,
siendo un caldo de enriquecimiento apropiado para casi todas las bacterias de inters mdico.
El cido tiogliclico acta como agente reductor que disminuye el potencial redox del medio,
generando un gradiente de concentracin de oxgeno a lo largo del tubo. En la superficie del
medio, la concentracin es similar a la atmosfrica y va disminuyendo gradualmente hasta
que en el fondo del tubo no existe oxgeno disuelto. Las bacterias aerobias estrictas podrn
crecer en la superficie del caldo, las microaerfilas crecern en la franja inmediata que est
debajo de la superficie. Las anaerobias facultativas crecern en todo el tubo, mientras que
las anaerobias lo harn en el fondo del mismo.
Anhdrido carbnico
Algunas bacterias como Neisseria y la Brucella, tienen muchas enzimas con baja afinidad
por el CO2 y requieren una concentracin ms elevada (10%) de la que habitualmente est
presente en la atmsfera (0.03%).
Estos requerimientos atmosfricos mencionados deben ser tenidos en cuenta cuando se
realiza el cultivo de estas bacterias.
Temperatura
Es uno de los factores ambientales ms importantes que influyen en la proliferacin y mante-
nimiento de la vitalidad de los microorganismos. Cada bacteria tiene su propia temperatura
mnima por debajo de la cual no puede proliferar, temperatura ptima en la cual el crecimiento
es mas rpido y temperatura mxima por encima de la cual no puede multiplicarse. As, es
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 53
Concentraciones de hidrgeno
Cada microorganismo tiene un rango de pH en cual puede crecer y un pH ptimo bien
definido. Segn en el pH que se obtenga mayor rendimiento, encontramos microorganismos
acidfilos, neutrfilos (la mayora de inters mdico) y alcalfilos, que crecen bien en pH
cidos, neutros y alcalinos respectivamente.
Para la mayora de las bacterias de inters mdico, el pH ptimo es de 7,2 a 7,6. Sin em-
bargo, hay microorganismos humanos como M. tuberculosis que resisten valores muy bajos
de pH.
Como los microorganismos al multiplicarse y realizar sus funciones metablicas, suelen
modificar el pH del medio, ste puede prepararse con amortiguadores de pH (buffer), los
cuales mantiene el pH relativamente constante.
Captacin de nutrientes
La concentracin de solutos en el interior de una clula bacteriana es mayor que en el medio
54 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
extracelular. Esto es aplicable tanto al medio natural como a la mayora de los medios de
cultivo usados en el laboratorio. La principal barrera para el paso de solutos entre la clula y
el medio externo es la membrana celular. Las bacterias estn rodeadas de membranas semi-
permeables, compuestas por una mezcla compleja de protenas, lpidos y glucoprotenas, que
restringen el ingreso de la mayora de los solutos. Sin embargo, tienen sistemas que permiten
el transporte de sustancias pequeas a travs de dichas membranas. Las molculas de mayor
tamao primero deben ser degradadas a molculas ms pequeas por enzimas (exoenzimas)
producidas por la propia bacteria y secretadas al exterior celular. En las bacterias gramnega-
tivas estas exoenzimas se encuentran fundamentalmente en el espacio periplsmico (espacio
virtual ubicado entre la membrana externa y la membrana plasmtica), mientras que en
las bacterias grampositivas estn ancladas en la membrana plasmtica. Dichas enzimas son
activas sobre: protenas, polisacridos, lpidos y cidos nucleicos, entre otros. Bacterias como
S. aureus, S. pyogenes, y C. perfringens, elaboran algunas de estas enzimas que contribuyen
a la virulencia, destruyendo los componentes vitales de los tejidos del husped infectado.
Pueden ser constitutivas (se sintetizan siempre) o inducibles (se sintetizan solo cuando est
presente su substrato).
Con excepcin del agua y el amonio que ingresan a la clula por difusin pasiva en respuesta
a un gradiente de concentracin a ambos lados de la membrana, el resto de los metabolitos
lo hacen por sistemas de transporte ms especficos.
Tanto las porinas, como los canales de maltosa, no requieren consumo de energa. Los
primeros son sistemas inespecficos que permiten el ingreso de molculas pequeas (peso
molecular menor o igual a seis mil dalton). Las porinas son protenas ubicadas en la membrana
externa de las bacterias gramnegativas, que forman canales o poros permitiendo el pasaje de
las molculas pequeas e hidroflicas.
En la difusin facilitada, una protena asociada a la membrana celular facilita el equilibrio
a ambos lados de la misma, actuando en conjunto con una quinasa citoplasmtica dependiente
de ATP. Estas protenas de membrana se denominan permeasas y muchas son inducidas por
el substrato a ser transportado. Cuando la sustancia es fosforilada por la quinasa citoplasm-
tica, queda atrapada dentro de la clula. La difusin facilitada se parece a la difusin simple,
porque el substrato se mueve por un gradiente de concentracin (de mayor a menor), por
lo tanto el propio proceso de transporte no requiere energa. La diferencia que tiene con la
difusin pasiva, es que est mediada por una protena transportadora, es ms rpida y tiene
mayor especificidad de substrato.
El transporte activo permite que los solutos ingresen a la clula en contra de un gradiente
de concentracin, consumiendo energa metablica.
Como ejemplo citaremos al sistema de la -galactsido permeasa, mediante el cual la
lactosa (disacrido) es concentrado dentro de una bacteria como E. coli. El transporte de la
lactosa se produce por una permeasa especfica (protena M); dicha reaccin implica gasto de
energa. La energa se usa para disminuir la afinidad de la permeasa por la lactosa en la parte
interna de la membrana celular, favoreciendo su rpida liberacin dentro del citoplasma. Si la
generacin de energa es bloqueada por el agregado de azida de sodio al sistema, la permeasa
cataliza la difusin facilitada de la lactosa, cesando el transporte cuando la concentracin
del disacrido sea la misma a ambos lados de la membrana.
En medios aerobios y a pH neutro, la baja concentracin de hierro no permite alcanzar
un desarrollo ptimo. Las bacterias han desarrollado varios sistemas para obtener cantidades
adecuadas de dicho elemento. Los siderforos son ligandos de bajo peso molecular cuya funcin
es suministrar hierro a la clula. Aunque existe una variacin importante en la estructura de
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 55
los distintos tipos de siderforos conocidos, la mayora son de dos tipos: catecoles: la entero-
bactina es la ms estudiada; e hidroximatos: producidos por algunos hongos. La enterobactina
es un poderoso quelante que E. coli produce rpidamente cuando existe dficit de hierro y
la secreta al medio externo.
muestra. Dicha tcnica puede realizarse por siembra en la superficie de un medio apropiado
o por siembra incorporada en agar.
El crecimiento de las poblaciones bacterianas en un sistema de cultivo cerrado (sin entrada
ni salida de los componentes del sistema), est limitado por el agotamiento de los nutrientes
o bien por la acumulacin de productos txicos del metabolismo. Cuando las bacterias se
siembran en el laboratorio en un medio lquido (por ejemplo en un tubo de ensayo), se trata
de un sistema cerrado de cultivo. Si se toman muestras a intervalos regulares en diferentes
tiempos de incubacin y se realiza un recuento del nmero de clulas viables por mililitro
de cultivo, la representacin grfica de los datos (conteo de clulas viables en funcin del
tiempo) dar la curva de crecimiento caracterstica que consta de cuatro fases: latencia,
exponencial, estacionaria y muerte.
FASE DE LATENCIA
Las bacterias transferidas de un cultivo en fase estacionaria a un medio fresco, sufren un cambio
en su composicin qumica antes de ser capaces de iniciar la multiplicacin. Hay aumento
de los componentes macromoleculares y de la actividad metablica, casi sin divisin celular,
asociado a un incremento de la susceptibilidad a los agentes fsicos y qumicos. Por lo tanto,
la mal llamada fase de latencia implica intensa actividad metablica.
FASE EXPONENCIAL
Las clulas se dividen a velocidad constante, determinada por la naturaleza intrnseca de la
bacteria y por las condiciones del medio. Existe gran aumento del nmero total de clulas
viables, que puede ser expresado en forma exponencial. Prximo al final de esta fase, se
produce la liberacin de exotoxinas por las bacterias que las producen.
FASE ESTACIONARIA
Eventualmente el agotamiento de los nutrientes o la acumulacin de productos txicos
determina el cese del crecimiento. Hay prdida de clulas por muerte, la cual es balanceada
por la formacin de nuevas clulas. Cuando esto ocurre, el conteo total de clulas aumenta
levemente aunque el de las bacterias viables permanece constante. Hacia el final de esta
etapa, puede ocurrir la esporulacin en aquellas bacterias que poseen este mecanismo de
resistencia.
FASE DE MUERTE
Luego de la fase estacionaria, la tasa de muerte se incrementa, el nmero de bacterias viables
disminuye rpidamente y, por lo tanto la curva de crecimiento declina.
Las caractersticas de la curva de crecimiento pueden variar, dependiendo de las caracte-
rsticas propias del microorganismo, del estado metablico del inoculo, del medio de cultivo
y de las condiciones de incubacin. Las condiciones fsicas y qumicas del medio donde el
microorganismo crece afectan las actividades de stos. La comprensin de cmo influye el
ambiente en el crecimiento, nos ayuda a explicar la distribucin de los microorganismos en
la naturaleza y hace posible disear mtodos que permitan estudiar y controlar el crecimiento
bacteriano.
Adems, existen sistemas de cultivo abiertos que son poco usados en el laboratorio de
microbiologa clnica. El cultivo continuo (con aporte y salida de nutrientes y requerimientos
a una tasa constante), permite mantener a las bacterias en una misma fase de crecimiento
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 57
Medios de cultivo
Son una mezcla equilibrada de nutrientes requeridos a concentraciones que permiten el
crecimiento de los microorganismos. Deben contener todos los nutrientes necesarios en
cantidades apropiadas a los requerimientos de los microorganismos y en condiciones de pH,
presin osmtica, oxgeno disuelto, etc., adecuados para el crecimiento. Aunque los diferentes
microorganismos tienen distintas propiedades fisiolgicas y requerimientos nutricionales, la
composicin qumica de las clulas es constante en todo el mundo vivo.
Los medios ms simples estn compuestos por una base mineral se puede suplementar
con una fuente de carbono, de energa, de nitrgeno y con algn factor de crecimiento re-
querido. Los medios deben esterilizarse antes de ser usados. Esta esterilizacin generalmente
se realiza con calor hmedo, pero algunos medios con componentes sensibles al calor pueden
filtrarse.
Existen muchos medios con diferentes utilidades que pueden ser clasificados de la siguiente
manera. Segn su consistencia en: lquidos, semislidos y slidos. Los medios slidos son usados
para el aislamiento bacteriano, mientras que los lquidos son tiles para el enriquecimiento
de una poblacin bacteriana de inters. Segn su composicin: definidos (de composicin
qumica conocida, medios simples) y complejos (con agregados de sustancias no definidas,
por ejemplo extracto de levadura). Segn la cantidad de nutrientes: pobres (por ejemplo el
agar simple) y ricos (por ejemplo el agar sangre). Tambin pueden clasificarse en medios:
diferenciales, que permiten diferenciar algunas propiedades distintivas del grupo bacteriano
(por ejemplo el uso de lactosa en agar CLED); y selectivos, que permiten el desarrollo de
algunos microorganismos pero no de otros (por ejemplo el Mac Conckey para la seleccin de
bacterias gramnegativas). Tambin existen los medios especiales para el transporte de muestras
o cepas, o aquellos especficos para identificar alguna va metablica determinada.
Bibliografa
Forbes BA, Sahm DF, Weissfeld AS. editors. Bailey & Scotts. Diagnostic Microbiology. 11th. ed. St. Louis,
Missouri. Mosby. 2002.
Joklik WK, Willett HP, Amos DB, Wilgert CM. editores, Zinsser Microbiologa. 20 ed. BsAs. Panamericana;
1994.
58 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 59
Pgina 59
4 Gentica bacteriana
L. Betancor, M. Gadea, K. Flores
Introduccin
Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de adaptacin a diferentes
condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer
sus bases genticas, es decir como est organizada la informacin gentica, como realizan y
regulan su expresin y que mecanismos de variacin gnica poseen.
La capacidad infecciosa de las bacterias patgenas radica en que poseen la informacin
gnica necesaria para colonizar los tejidos del husped, invadirlos y/o producir sustancias
txicas que causarn la enfermedad.
Por otro lado, el conocimiento del funcionamiento gentico de las bacterias, sumado al
hecho de que son de fcil manejo en el laboratorio y que tienen crecimiento rpido, ha per-
mitido usarlas para sintetizar productos tiles a la medicina, tanto para el diagnstico como
para la prevencin y tratamiento de algunas enfermedades. Estas posibilidades se han visto
incrementadas con el desarrollo de la ingeniera gentica y la disponibilidad de tcnicas de
biologa molecular.
denominan bases pirimidnicas o pirimidinas. As, una cadena o hebra de cido nucleico,
tendr una estructura primaria determinada por la secuencia de las bases que la componen.
El ADN como macromolcula, esta compuesto por dos cadenas nucleotdicas o hebras
antiparalelas que se enlazan entre s formando una doble hlice. Los enlaces entre ambas
hebras de ADN estn determinados por puentes de hidrgeno entre las purinas de una ca-
dena, con las pirimidinas de la otra. Entonces, la A forma dos puentes de hidrgeno con la
T, mientras que la C forma tres puentes de hidrgeno con la G. Dicho fenmeno se conoce
como complementariedad de bases, es decir que la A es complementaria a la T y la C lo es
para la G (ver figura 1). Estos enlaces mantienen estable la estructura de doble hlice de
ADN, en la cual se pueden distinguir pares de nucletidos o pares de bases (pb). Estos pb
pueden usarse como unidad de tamao o longitud para las molculas de ADN, de esta manera
podemos decir por ejemplo que el ADN cromosmico de Escherichia coli tiene un tamao de
4,2 millones de pb o lo que es lo mismo de 4.200 kilobases (Kb).
Todas las clulas deben enfrentarse al problema de como lograr contener en su estructura
molculas tan grandes como el ADN. Volviendo al ejemplo de E. coli, los 4.200 Kb de su
genoma implican una longitud de 1,3 mm es decir unas mil veces la longitud de la clula. Las
bacterias no poseen histonas asociadas a su genoma y en consecuencia no tienen la posibilidad
de compactar su ADN en estructuras tipo nucleosomas como las clulas eucariotas. Por lo
tanto, deben compactar su ADN de otra manera. Esto se logra porque el ADN circular cerrado
es capaz de adoptar una estructura terciaria denominada superenrollamiento, que implica el
enrollamiento del eje de la doble hlice sobre si mismo (ver figura 2). Este superenrollamiento
se dice que tiene sentido negativo porque tiene el sentido contrario al enrollamiento de una
hebra de ADN sobre la otra. Esto supone para la bacteria una fuente de almacenamiento
de energa para ser usada en muchos procesos fisiolgicos que la requieren, por ejemplo la
separacin de las dos hebras de ADN necesaria para la replicacin y la transcripcin.
El cromosoma bacteriano es suficientemente largo como para formar muchos lazos cir-
culares, que como tales pueden superenrollarse formando una serie de dominios topolgicos
independientes. Esta organizacin en dominios colabora a la compactacin general del genoma
bacteriano e impide que, con la ruptura de una hebra (en cualquier sitio del cromosoma) se
pierda el superenrollamiento total, manteniendo la energa almacenada.
Las bacterias poseen enzimas (topoisomerasas) capaces de alterar la estructura del ADN,
modificando su superenrrollamiento. Estas topoisomerasas actan agregando o eliminando
vueltas superhelicoidales y cumplen un rol importante en los procesos de replicacin y trans-
cripcin del ADN. Adems, es interesante mencionar que algunas de las topoisomerasas
como la ADNgirasa, son blanco de accin de los antibiticos del grupo de las quinolonas,
como el cido nalidxico.
Figura 1. Estructura
!CIDO DEOXIRIBONUCLEICO !$. del ADN. Apareamiento
de dos hebras de ADN
basado en la comple-
CADENA DE AZCAR
FOSFATO mentariedad de bases. A
(adenina) se aparea con
T (timina) por medio de
0 ! 4 2 puentes de hidrgeno,
3 mientras que C (cito-
3 PUENTES DE HIDRGENO cina) se aparea con G
0 (guanina) por medio de
' # 3 puentes de hidrgeno,
0
3 formando los llamados
pares de bases.
3
0
0 4 !
3
3
0
0 ! 4
3
3
0
0 # '
PAR DE BASES 3
3
0
0 ' #
3
3
NUCLETIDO 0
bacteria, s porta genes que le confieren nuevas propiedades fenotpicas y que en algunos casos
le son tiles para su adaptacin al crecimiento en determinados ambientes.
Muchas bacterias potencialmente patgenas para el hombre, solo son capaces de com-
portarse como tales cuando portan un plsmido que contiene genes que le permiten expresar
molculas de adhesin a los tejidos del husped o sintetizar sustancias txicas para ste.
Como ejemplo la toxina tetnica producida por Clostridium tetani, est codificada plasm-
dicamente.
En otros casos, los plsmidos contienen genes que codifican enzimas capaces de degradar
algunos antibiticos, permitiendo que la bacteria sobreviva a la accin de los mismos. Por
ejemplo la produccin de -lactamasas por cepas Neisseria gonorrhoeae, Staphylococcus aureus
y Haemophylus influenzae est codificada plasmdicamente.
Los plsmidos pueden clasificarse segn distintos criterios, por ejemplo por su tamao,
su nmero de copia o el tipo de genes que contiene (plsmidos de virulencia, plsmidos de
resistencia a antibiticos, etc.). Tambin pueden clasificarse en grupos de incompatibilidad;
62 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
!$. SUPERENROLLADO
CRCULO RELAJADO
se dice que dos plsmidos pertenecen al mismo grupo de incompatibilidad si son incapaces
de coexistir en la misma bacteria. Muchos plsmidos, en general los de mayor tamao (que
pueden portar hasta 50 o 100 genes), suelen ser capaces de transferirse de una bacteria a
otra mediante un proceso llamado conjugacin (vase mas adelante). Estos plsmidos de
conjugacin codifican todos los factores necesarios para su transferencia. Algunos plsmidos
mas pequeos, no conjugativos, pueden ser movilizados, es decir que poseen la secuencia
necesaria para permitir su transferencia, pero ellos mismos no codifican las protenas necesarias
para ser transferidos. Por ltimo, otros plsmidos no se transfieren en absoluto. La adquisi-
cin de ADN plasmdico por una cepa bacteriana, puede realizarse por medios distintos a la
conjugacin como transformacin, la transduccin mediada por fagos o la incorporacin en
el cromosoma, como veremos mas adelante.
sitios dentro de la misma molcula de ADN. Los elementos transponibles estn ampliamente
distribuidos en la naturaleza, tanto en virus, como en clulas procariotas y eucariotas. Exis-
ten dos tipos de elementos transponibles: las secuencias de insercin (elementos IS) y los
transposones (Tn).
Los elementos IS son segmentos pequeos de ADN, de aproximadamente 1 a 2 Kb que
contienen la informacin gentica mnimamente necesaria para la transposicin. Poseen
secuencias especficas en ambos extremos del fragmento que consisten en repeticiones
invertidas una respecto de la otra. Estas secuencias, son reconocidas especficamente por
enzimas codificadas en el mismo elemento IS, denominadas transposasas, responsables de la
integracin del elemento al sitio blanco del genoma.
Los Tn son segmentos de ADN que adems de portar la informacin necesaria para la
transposicin, contienen genes que pueden codificar diferentes propiedades fenotpicas. Dentro
de stas se destaca la resistencia a ciertos antibiticos, como es el caso de la resistencia de alto
nivel a la gentamicina que tienen algunas cepas de Enterococcus sp. Algunos plsmidos poseen
uno o mas Tn que portan determinantes de resistencia a antibiticos; la capacidad de estos
elementos para transponerse de un plsmido a otro, proporciona a la bacteria gran flexibilidad
para desarrollar resistencia, dado que dichos plsmidos son generalmente conjugativos, por
lo que pueden transferirse entre distintas bacterias.
La insercin de un elemento transponible puede producir diferentes efectos sobre la
expresin de la informacin gnica como impedir la funcionalidad de un gen o activar la
expresin de otro.
.EW STRAND
el proceso fuera unidireccional, pudiendo replicar mas de mil pb por segundo. Es importante
destacar que, aunque la velocidad de replicacin es muy elevada, la fidelidad de la misma
tambin es grande, siendo la frecuencia de mutaciones espontneas del orden de una cada
107 a 1011 pb replicados.
La replicacin es semiconservativa porque cada molcula de ADN posee una cadena del
ADN original y una nueva. Esto resalta la importancia de la complementariedad de bases en
la estructura del ADN (ver figura 3).
Las enzimas encargadas de catalizar el proceso de replicacin, se denominan ADN po-
limerasas. Si bien en E. coli se conocen tres tipos distintos, la responsable de la mayora de
los procesos de replicacin es la polimerasa III, mientras que las polimerasas I y II cumplen
principalmente funciones de reparacin de rupturas o de errores en las molculas de ADN.
Tambin participan otras enzimas, como las helicasas responsables de desenrollar el ADN
en el origen o cerca de l, paso indispensable para iniciar la replicacin.
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 65
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PROTENA
polimerasa para sintetizar un producto complementario a una cadena del ADN usada como
molde, que es el ARN. Una de las clases mas importantes de ARN es el llamado mensajero
(ARNm), que porta la informacin para la sntesis de protenas. La ARN polimerasa bacteriana,
es distinta de la que tienen las clulas eucariotas; de hecho, algunos antibiticos que tienen
como sitio blanco de accin la ARN polimerasa (por ejemplo la rifampicina) son efectivos
exclusivamente ante clulas procariotas.
La ARN polimerasa reconoce un sitio especfico en el ADN, llamado promotor, al cual se
une iniciando la transcripcin. Un mismo transcripto, ARNm, puede contener la informacin
correspondiente a ms de un gen, por lo tanto se traducir luego en ms de un polipptido.
El conjunto de genes que son transcriptos en un nico ARNm y que por tanto se expresan
en conjunto se denomina opern. (Ver ms adelante).
Los genes procariotas no poseen intrones como los eucariotas, es decir que una vez
transcripto el ARNm, ste ser traducido directamente en una secuencia polipeptdica, sin
necesidad de realizar ningn procesamiento despus de la transcripcin.
Otra diferencia importante con la expresin de los genes eucariotas, es que como las
bacterias no tienen un compartimento nuclear definido, los procesos de transcripcin y tra-
duccin estn acoplados. Es decir que mientras se est sintetizando una molcula de ARNm,
el ARN naciente puede tomar contacto con los ribosomas e iniciar la sntesis proteica (ver
figura 5). sto es una ventaja para la bacteria y constituye una importante causa de su elevada
capacidad para adaptarse a diferentes ambientes, porque le permite responder rpidamente a
los estmulos sintetizando las protenas necesarias, en el momento adecuado.
La traduccin es un proceso por el cual el ARN ribosmico, el ARN de transferencia
(ARNt) y muchas protenas ribosomales, realizan la lectura del cdigo gentico. Dicho
cdigo est escrito en tripletes de nucletidos o codones portados por el ARNm; de la
TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 67
Las bacterias tienen muchos mecanismos para controlar la expresin de sus miles de genes,
con cual logran que el producto de un gen determinado, solo se sintetice cuando es nece-
sario y, en lo posible en la cantidad ptima. Esto les confiere una importante capacidad de
adaptacin a cualquier cambio de concentracin de nutrientes del medio en que habitan,
activndose determinadas vas metablicas solo cuando son necesario. As, las bacterias evitan
sintetizar enzimas cuando falta el sustrato correspondiente, pero siempre estn preparadas
para fabricarlas cuando aparece dicho sustrato en el entorno.
Un importante mecanismo de regulacin desarrollado por las bacterias, se basa en la
activacin o desactivacin de la transcripcin de un grupo de genes cuyos productos tienen
funciones relacionadas y que estn organizados en una regin del genoma que permite regular
su expresin. Esta forma de organizacin gentica se denomina opern y le permite a la clula
administrar en forma ptima sus reservas energticas.
Un opern consiste en: un promotor, sitio blanco de la regulacin; genes adyacentes que
codifican cada una de las enzimas de una va metablica y una secuencia de terminacin de
la transcripcin. As, todos los genes constituyentes de un opern son transcriptos de forma
coordinada como ARNm policistrnico, es decir multignico. Dicho ARNm es traducido
secuencialmente en protenas por los ribosomas.
La iniciacin de la transcripcin puede regularse positiva o negativamente. Los genes bajo
control negativo se expresan constantemente, excepto que sean inhibidos por una protena
represora que evitar la expresin del gen por su unin a una secuencia especfica del ADN,
68 TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA
denominada operador. Este operador impide que la ARN polimerasa inicie la transcripcin
en el promotor.
Aquellos genes cuya expresin se encuentra bajo control positivo, no sern transcriptos
excepto que est presente una protena activadora que se une a una secuencia especfica del
ADN y ayuda a la ARN polimerasa en los pasos iniciales de la transcripcin.
Los operones pueden ser inducibles o reprimibles. Se considera inducible, cuando la
introduccin de un sustrato en el medio aumenta la expresin de las enzimas necesarias para
su metabolismo. stos solo funcionan en presencia de una pequea molcula, el inductor.
Por otro lado, en el mecanismo de regulacin por represin, disminuye la sntesis de algunas
enzimas cuando existen cantidades suficientes de los productos terminales de la va metablica
correspondiente. Esto se denomina represin por producto final; los metabolitos terminales
son molculas llamadas correpresores (ver figura 6).
Un ejemplo clsico es el opern lactosa (lac), descrito en E. coli. Contiene un conjunto
de genes cuyos productos son las enzimas responsables de la degradacin de la lactosa. En
ausencia de lactosa en el medio, el opern es reprimido por la unin de una protena represora
a la secuencia del operador, esto impide la accin de la ARN polimerasa. La adicin de lactosa
al medio anula dicha represin, dado que el propio azcar acta como inductor unindose a
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ACTIVO
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TEMAS DE BACTERIOLOGA Y VIROLOGA MDICA 69
la protena represora e impidiendo que sta contine asociada al operador. Este mecanismo
de control negativo, asegura que el opern lac se transcriba solo cuando hay lactosa en el
medio. Sin embargo, existe un mecanismo para aumentar al mximo la expresin del opern
lac, basada en un mecanismo de control positivo mediado por protenas activadoras. En E.
coli existe una protena llamada protena activadora del gen por el catabolito (PAC), que
forma un complejo con el monofosfato de adenosina cclico (AMPc) y adquiere la capacidad
de unirse a una secuencia especfica del ADN presente en el promotor. La unin del complejo
PAC-AMPc al ADN, potencia la unin de la ARN polimerasa al promotor y permite aumentar
la frecuencia de iniciacin de la transcripcin. As, no solo se regula la sntesis, sino tambin
la cantidad que se sintetiza, segn los requerimientos de las enzimas responsables de la de-
gradacin de la lactosa. Este tipo de mecanismo regulador de la transcripcin, se encuentra
en muchas bacterias para diferentes vas metablicas.
Tambin existen operones que son regulados en la terminacin de la transcripcin por
un mecanismo especial llamado atenuacin qu es caracterstico de las vas biosintticas de
aminocidos y se basa en el acoplamiento entre transcripcin y traduccin. Este es el caso del
opern triptfano (Trp), en el cual el promotor codifica un pequeo pptido que contiene do
Trp en posicin crtica. Cuando hay suficiente cantidad de este aminocido en el medio, el
pptido se sintetiza rpidamente a partir del promotor que es transcripto y luego traducido.
Esto provoca un cambio en la conformacin del ADN correspondiente al opern, que per-
mite reconocer una seal de terminacin de la transcripcin entre el promotor y los genes
estructurales; sitio donde la ARN polimerasa se separa del ADN y termina la transcripcin.
Por el contrario, cuando no hay suficiente Trp, el pptido no podr sintetizarse y la ARN
polimerasa continuar transcribiendo los genes del opern. As, la clula solo sintetizar el
aminocido, cuando no haya suficiente cantidad de ste en el medio para ser usado en las
vas biosintticas.
No solo en la transcripcin existe regulacin, tambin existen en la traduccin y luego de
ella. La velocidad de la traduccin de las diferentes secuencias de ARN transcriptos, puede
variar ms de mil veces segn el sitio de unin del ribosoma con el mensajero. Generalmente,
el control de la traduccin se basa en la obstruccin del sitio de unin del ribosoma, ya sea por
la unin de una protena al ARN ribosmico en ese sitio o por el apareamiento de bases de
ste con otro fragmento de ARN. Este es el mecanismo usado para la regulacin de la sntesis
de las protenas ribosomales, cuyos genes tambin se encuentran organizados en operones.
Por ltimo, existe tambin la regulacin postraduccional que la bacteria usa para inactivar
enzimas innecesarias. Si bien existen mecanismos para suprimir la produccin de enzimas
cuando no son necesarias, hay que considerar que estas enzimas tienen una vida media rela-
tivamente larga y que en algunas ocasiones es ms redituable energticamente inactivar las
enzimas de una va biosinttica, que asumir el gasto de ATP correspondiente al funcionamiento
de dicha va cuando el producto est disponible en el medio.
Bsicamente, existen dos formas de variacin genotpica en las bacterias. Por un lado,
en el genoma se producen cambios debidos a mutaciones y por otro, las bacterias pueden
intercambiar material gentico y sufrir recombinacin.
MUTACIONES
Una mutacin es un cambio heredable en la secuencia de bases de los cidos nucleicos que
constituyen el genoma de un organismo; sta se produce en condiciones naturales con baja
frecuencia y se deben fundamentalmente a errores en los procesos de replicacin del ADN.
Adems de las mutaciones espontneas, pueden ocurrir mutaciones inducidas, provocadas
por agentes mutagnicos (qumicos, fsicos o biolgicos) que proporcionan una herramienta
para introducir cambios en el genoma bacteriano en el laboratorio. La mayora de estos errores
o alteraciones introducidos en el genoma, son corregidos por los mecanismos de reparacin
del ADN, pero algunos escapan a la correccin y pueden originar cambios heredables que
proporcionan una diversidad gentica. Dada la baja frecuencia de mutaciones, solo los mi-
croorganismos con alta tasa de crecimiento, pueden alcanzar cifras suficientemente altas
como para que sean detectables. Las mutaciones en las bacterias, frecuentemente afectan
propiedades fcilmente reconocibles como requerimientos nutricionales, morfologa o resis-
tencia antibitica.
Algunas mutaciones pueden conferir al mutante una ventaja frente a la cepa que le dio
origen, bajo ciertas condiciones ambientales, de manera que la progenie de dicha clula mu-
tante es capaz de superar el crecimiento de la cepa original y sustituirla. Este es el caso de las
mutaciones que confieren resistencia a los antibiticos, en las que el mutante resistente se
seleccionar en un ambiente en el que las bacterias estn expuestas al antibitico en cuestin.
Este tipo de mutaciones se denominan selectivas. En cambio, frente a una mutacin no selec-
tiva la bacteria no adquiere beneficios en relacin a su progenitor, por ejemplo la prdida de
pigmento de las colonias de Serratia marcescens que se observa cuando se cultivan en agar.
Las mutaciones puntuales, son aquellas que implican un cambio en una nica base; pueden
provocar que se cambie un aminocido por otro en el producto proteico (mutacin por cambio
de sentido). Otras veces no se traducen en ningn cambio (mutacin silenciosa), dado que
como sabemos existe ms de un codn para cada aminocido. Tambin puede suceder que
el codn se convierta en una seal de terminacin (mutacin sin sentido) y en ese caso se
traducir una protena incompleta no funcional.
Las deleciones y las inserciones producen cambios ms notorios en el ADN, provocando
la prdida o la incorporacin de cualquier nmero de pares de bases. Por lo tanto, siempre
que ste no sea mltiplo de tres se producirn mutaciones por desplazamiento del marco de
lectura, que suele provocar la prdida total del fenotipo.
Muchas mutaciones que originan un producto proteico defectuoso, pueden ser suprimi-
das por un segundo evento de mutacin en otro sitio del genoma (mutaciones supresoras),
restaurndose el fenotipo original.
5NIN LAXA
5NIN FUERTE
4RANSPORTE DE $.!
2ECOMBINACIN
F tienen gran capacidad de recombinacin por lo que se denominan cepas hfr por su sigla
en ingls (high frecuency of recombination). Debemos recordar que este es un mecanismo muy
efectivo para la transferencia de genes de resistencia antibitica.
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