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Manual - Microbiologia (Medios) 2002 PDF
Manual - Microbiologia (Medios) 2002 PDF
Tiene en sus manos la 4 Edicin del Manual Bsico de Microbiologa CULTIMED publicado por
Panreac Qumica S.A. Esta nueva edicin revisada y aumentada incluye todos los nuevos productos
que hemos incorporado desde que se realiz la primera edicin en 1996. Se han modificado algunas
formulaciones para adaptarlas a las especificadas en distintas Normas Internacionales.
Las placas preparadas para anlisis de aguas incluyen todos los parmetros definidos en la directiva
CE/98/83 para el anlisis microbiolgico de aguas destinadas a consumo pblico. Las formulaciones
de estos medios son las definidas en las correspondientes normas ISO y destacan especialmente las
placas preparadas de agar m-CP para la enumeracin de Clostridium perfringens, tal y como se indica
en dicha directiva.
En lo relativo al control de higiene, para el control de puntos crticos dentro de sistemas ARCPC, el
programa de placas preparadas CULTIMED ofrece los medios ms usados para este fin. Cada producto
viene caracterizado por su correspondiente Ficha Tcnica. En cada ficha se describen las aplicaciones,
historia y fundamento del medio, as como las instrucciones para la preparacin y el modo de empleo
aconsejado. Cuando se describe una metodologa est basada en publicaciones cientficas reconocidas.
Sin embargo pueden introducirse las modificaciones que el usuario considere oportunas.
La composicin de los medios est descrita para cada uno de ellos en cantidades aproximadas por litro
de medio a preparar.
Tambin se incluyen informaciones prcticas sobre productos auxiliares, tinciones y otros productos
relacionados. Adems en el catlogo de reactivos Panreac se pueden encontrar muchos otros productos
de aplicacin en microbiologa como sales de alta pureza par la preparacin de medios especificos.
La gama de productos para microbiologa bajo la marca Cultimed de Panreac Qumica, S. A. ha ido
creciendo y adaptandose a sus necesidades a lo largo de estos aos, gracias a la confianza y
comunicacin con nuestros clientes, porque durante todo este tiempo hemos mantenido un excelente
nivel de calidad, unos precios competitivos y un fcil acceso a los productos a travs de la extensa red
de distribuidores de Panreac Qumica S.A.Vamos a seguir creciendo en este campo y para ello
contamos con nuestra experiencia y su colaboracin. Queremos que CULTIMED satisfaga sus
necesidades en el campo del control microbiolgico de alimentos y aguas. Hganos saber que necesita
y mientras tanto esperamos que utilize este manual en su trabajo diario. Gracias por su confianza.
Noviembre de 2002
SUMARIO
V Comparacin de Denominaciones
VI Aplicaciones
(Determinaciones ms Habituales en
la Industria Alimentaria y Cosmtica)
vi
Conservacin de los medios preparados Conservacin de los medios preparados,
Lo ms recomendable es preparar el medio cuando listos para su uso
se va a emplear, aunque en muchos casos por razo- Los medios preparados listos para usar tienen un
nes obvias una parte del medio preparado se consu- tiempo limitado de conservacin, que es de varios
me y el resto se guarda como medio preparado. El meses si las condiciones de almacenamiento y trans-
tiempo de vida del medio preparado depender de la porte son las adecuadas.
propia naturaleza del medio, de la hermeticidad de Se recomienda su almacenamiento por regla general
los recipientes que lo contienen, de la temperatura por debajo de los 20C y protegidos de la luz.
de conservacin y de las condiciones medioambien- Algunos medios deben conservarse entre 2-8C,
tales. Si la hermeticidad es buena y la temperatura siendo este requisito especificado en la etiqueta del
baja, 2-8C, la vida del medio puede llegar a ser de 4 producto. Los medios de cultivo con Agar no deben
a 6 semanas. De todas formas la refrigeracin favore- guardarse por debajo de 0C, ya que se alterara la
ce la deshidratacin y en algunos casos, como por estructura del gel.
ejemplo, los medios para anaerobios, la conservacin La prdida de agua puede provocar precipitados o
es mejor a temperatura ambiente que en frigorfico. hacer que cristalicen ciertas sustancias del medio
Se deben evitar las condensaciones ya que el dep- de cultivo, as como originar grietas en las placas
sito de gotas de agua podr ser causa de una altera- preparadas.
cin casi inmediata del medio. Tampoco deben em- En los medios de cultivo que deben refundirse y que
plearse medios preparados en los que se observe un deben contener aditivos lbiles, se suministra el
efecto de deshidratacin. medio basal preparado y segn la necesidad se
deben aadir los aditivos de forma estril.
Conservacin de los medios
deshidratados Refundido de medios slidos
Cuando se precisa refundir los medios slidos, pre-
Como regla general y si no se establecen condiciones
parados y estriles en frascos y tubos, para verterlos
particulares los medios deshidratados deben almace-
en placa, es aconsejable hacerlo en bao mara, en
narse en lugar fresco, seco y al abrigo de luz directa
microondas o en autoclave a vapor fluente. En ningn
del sol.
caso debe aplicarse calor directo.
Existen unos medios en concreto, que requieren un
Una vez fundidos, debern dejarse enfriar hasta unos
almacenamiento entre 2-8C, que son:
50C para aadir los aditivos, si fuera necesario y para
414703 Selenito Verde Brillante, Caldo distribuirlos o sembrarlos. Hay que tener en cuenta
414680 Marino, Agar que los medios refundidos tienen una cierta tenden-
413824 Selenito, Base de Caldo cia al oscurecimiento y precipitacin, que aumenta
414698 Marino, Caldo cuando se mantienen fundidos durante periodos de
413809 Selenito y Cistina, Caldo tiempo prolongados y a temperaturas entre 45-65C
414722 Emulsin Yema de Huevo y que ello puede suponer una prdida de las carac-
414723 Emulsin Yema de Huevo-Telurito tersticas nutritivas o selectivas del medio, por lo que
414724 Potasio Telurito solucin 3,5% es aconsejable, no fundirlos ms de una vez y no
En la manipulacin de los frascos se debe procurar mantenerlos en el calor largos periodos de tiempo.
que las aperturas y cierres sean los menos posibles y En este sentido son recomendables los mtodos rpi-
que el tiempo durante el cual el frasco permanece dos como el que se obtiene con el fundido de medios
abierto sea el mnimo. De lo contrario el medio se ir en el microondas, donde se debe dosificar la intensi-
rehidratando, con lo que comenzar a apelmazarse y dad de la radiacin y durante tiempos lo ms cortos
endurecerse, ya que son generalmente higroscpicos. posibles. Las fuertes intensidades de radiacin, pue-
Incluso podra llegar a tener lugar un crecimiento bac- den provocar refundidos parciales, ebulliciones sbi-
teriano en superficie. En estas condiciones debe dese- tas con eventuales derrames del medio pudiendo
charse el producto. alterar las cualidades del mismo.
vii
Destruccin y desinfeccin Medios para tcnica de filtro de membrana,
Una vez realizados los cultivos, el medio debe ser recomendaciones:
autoclavado a 121C durante 30 minutos antes de su La utilizacin de las tcnicas de filtracin se han
desecho definitivo. De igual manera se debe proceder impuesto en diversas disciplinas por una serie de
con el material de laboratorio empleado en los culti- ventajas que aporta a distintas problemticas. La fil-
vos antes de su lavado y nuevo uso. tracin permite la concentracin de grandes vol-
menes de lquidos con pequeas poblaciones de
Control de Calidad
microorganismos, permite separar a los microorga-
Los ingredientes que forman parte de los medios de nismos del medio en que se encuentran, incluso
cultivo presentan ciertas oscilaciones debido a su ori- transferirlo a otros, sin interrumpir su ciclo de creci-
gen biolgico. Las formulaciones descritas para cada miento.
medio son por tanto aproximadas, ya que estas osci- Esencialmente la tcnica consiste en filtrar el pro-
laciones en las propiedades de los ingredientes ducto a travs de un filtro de 0,22 micras o 0,45
deben ser compensadas para obtener medios de cul- micras, segn determinacin, ayudado por un sis-
tivo constantes. Nuestros laboratorios disponen de tema de vaco. Si el fluido filtrado contena inhibido-
una cepoteca formada por cepas patrn procedentes res, se lava la membrana varias veces para asegu-
de ATCC o de CECT para realizar el control micro- rar su eliminacin. La membrana se recupera de
biolgico de los medios de cultivo y garantizar la forma asptica y se coloca en el medio de cultivo
constancia de las caractersticas de stos. adecuado segn la determinacin que se desea
En la ficha de cada medio de cultivo se detalla el con- realizar.
trol de calidad correspondiente. Bsicamente consta Para la enumeracin de colonias, se utiliza un
de dos apartados; uno fsico-qumico en el que se medio slido o una almohadilla absorbente impreg-
verifica el aspecto, la solubilidad y el pH del medio y nada de medio lquido. La membrana debe entrar
otro microbiolgico. En ste se realiza un control de en contacto con el medio sin que queden burbujas
crecimiento de las cepas patrn y en algunos casos, de aire entre ellos que limitara el crecimiento de los
la tasa de recuperacin. microorganismos. Por regla general los medios
usuales pueden utilizarse en estas tcnicas, sin
Caducidad embargo en la microbiologa de aguas se han desa-
Nuestros medios deshidratados tienen una caduci- rrollado unos medios y un tamao de placa, para
dad general de 4 aos*, a excepcin de los enume- utilizar en estas tcnicas.
rados a continuacin, cuya caducidad les indica-
mos:
413824 Selenito, Base de Caldo 3 aos
413809 Selenito y Cistina, Caldo 3 aos
414722 Emulsin Yema de Huevo 6 meses
414723 Emulsin Yema de Huevo-Telurito 6 meses
414724 Potasio Telurito sol. 3,5% 1 ao
414703 Selenito Verde Brillante, Caldo 3 aos
Nuestros medios preparados tienen un periodo de
vida de meses, ms o menos largo dependiendo de
su presentacin. Las placas para microbiologa de
aguas y las placas de contacto tienen por regla
general 7 meses, a excepcin de:
425463.0922 m-CP, Agar 45 das
424955.0922 y
444955.0922 Tergitol 7, Agar 6 meses
434855.0922 Rosa de Bengala y
Cloranfenicol, Agar 4 meses
Los medios utilizados en los anlisis de rutina tienen
3-4 meses de vida cuando estn distribuidos en
placas de 90 mm, cuando se presentan en tubos o
frascos suelen tener 12 meses de vida.
viii
Medios de Cultivo
Deshidratados
Agua de Peptona
Peptone Water
Cd.: 413794 Envase: 500 g
Se emplea como diluyente en muestras alimentarias, aguas y materiales diversos. Para la realizacin de la
prueba del Indol en aquellos microorganismos capaces de producirlo.
Fundamento Preparacin
La peptona tiene una elevada concentracin de Triptfano, Suspender 15 g en 1 l de agua destilada; agitar hasta disolu-
el cual es degradado a Indol por un cierto nmero de micro- cin total. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
organismos entre ellos E. coli. La deteccin de este produc-
to se hace aadiendo el reactivo de KOVACS despus de la Modo de empleo
incubacin (ver pg. IV - 8). Este medio es adecuado para Tratar segn los fines a conseguir.
determinar los organismos Indol-positivos y puede utilizarse
en lugar de los Caldos Triptfano. En usos generales se
puede emplear para el cultivo de una gran variedad de Reactivos auxiliares
microorganismos, siempre y cuando no presenten exigen- Ref. Descripcin Envase
cias particulares.
252908 Reactivo de Kovacs DC * 100 ml
Frmula (por litro) * Producto Opcional
Peptona ......................................................... 10 g
Sodio Cloruro ................................................ 5 g
pH final: 7,2 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco-crema. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea como diluyente de muestras originales de productos alimenticios como leche y sus derivados,
concentrados y productos de origen animal. Tambin se emplea como caldo de enriquecimiento no selecti-
vo, especialmente de Enterobactericeas patgenas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 19430 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografa
Meat and Meat Products-Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Preparacin
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 19430 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Satisfactorio
Bibliografa
Ph. Eur. IV (2002)
BP (2000)
Antibiticos n 1, Medio
Antibiotic Medium n 1
Cd.: 413735 Envase: 500 g
Antibiticos n 2, Medio
Antibiotic Medium n 2
Cd.: 413736 Envase: 500 g
Antibiticos n 3, Medio
Antibiotic Medium n 3
Cd.: 413737 Envase: 500 g
Antibiticos n 5, Medio
Antibiotic Medium n 5
Cd.: 413738 Envase: 500 g
Antibiticos n 8, Medio
Antibiotic Medium n 8
Cd.: 413739 Envase: 500 g
Antibiticos, Medio n 1 n 2 n 3 n 5 n 8 n 11
Extracto de Carne 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g
Extracto de Levadura 3,0 g 3,0 g 1,5 g 3,0 g 3,0 g 3,0 g
D(+)-Glucosa 1,0 g 1,0 g 1,0 g
Peptona de Casena 4,0 g 4,0 g
Peptona de Gelatina 6,0 g 6,0 g 5,0 g 6,0 g 6,0 g 6,0 g
Potasio di-Hidrgeno Fostato 1,32 g
di-Potasio Hidrgeno Fosfato 3,68 g
Sodio Cloruro 3,5 g
Agar Bacteriolgico 15,0 g 15,0 g 15,0 g 15,0 g 15,0 g
Total 30,5 25,5 17,5 25,5 25,5 30,5
pH: (0,2) 6,6 6,6 7,0 7,9 5,7 7,9
Medios
Antibitico n 1 n 2 n 3 n 5 n 8 n 11
Ampicilina l
Bacitracina l
Canamicina l
Carbomicina l
Cefalotina l l
Cloranfenicol l
Clorotetraciclina l
Eritromicina l
Estreptomicina l l
Gentamicina l
Neomicina l
Oleandomicina l
Oxitetraciclina l
Paramomicina l
Penicilina l l
Tetraciclina l
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Antibiticos n 1, Medio
Antibiticos n 2, Medio
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Satisfactorio
Micrococcus luteus ATCC 10240 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Antibiticos n 3, Medio
Antibiticos n 5, Medio
Antibiticos n 8, Medio
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas, y aadidos 50 ml de Emulsin de Yema de Huevo-Telurito.
Halos de
Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia
Lecitinasas
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Proteus mirabilis ATCC 25933 Satisfactorio Marrn
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio Negro +
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Moderado Negro
Bibliografa
J. App. Bact., 27: 78-82 (1964)
J. App. Bact., 25: 12-19 (1962)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea como medio diferencial para Enterococos y se recomienda para su aislamiento e identificacin
presuntiva.
Historia Preparacin
Rochaix fue el primero que demostr que la hidrlisis de la Disolver 64 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
esculina por los enterococos era una prueba apta para su hasta ebullicin. No sobrecalentar. Esterilizar a 121C
identificacin. Ms tarde Meyer y Schonfeld demostraron durante 15 minutos.
que esta hidrlisis en medio biliar era la mejor prueba dife-
rencial para enterococos. La formulacin del medio corres- Modo de empleo
ponde a la dada por Swan. El medio se puede emplear en placas o en tubos, en este
caso solidificndolo en plano inclinado.
Fundamento Puede aadirse suero de caballo una vez esterilizada, a
La presencia de la bilis de buey no inhibe el crecimiento de razn de un 5% en la concentracin final. Para algunos
los enterococos, pero s el del resto de las bacterias Gram- autores esta adicin mejora el crecimiento de los
positivas. Esta caracterstica junto con la capacidad de Enterococos, para otros no es apreciable. Incubar entre 35
hidrolizar la esculina son propiedades constantes de los y 37C de 18 a 24 horas.
Enterococos. El producto resultante de la hidrlisis de la Se acepta que el material sembrado no contiene
esculina es la esculetina que forma un complejo con el Enterococos, si no hay oscurecimiento del medio despus
Hierro(III) Citrato de un color pardo oscuro. de 3 das de incubacin.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado. pH: 6,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Bact. Proceedings M33. (1969)
J. Clin. Path., 7: 160 (1954)
Clin. Lab. Forum. (1970)
Fundamento Preparacin
Por la presencia simultnea de violeta cristal y sales bilia- Suspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
res se asegura en gran parte la inhibicin de la flora tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Dejar enfriar a
acompaante. La degradacin de la glucosa a cido se 45C y emplear de inmediato. Se puede esterilizar con cui-
pone de manifiesto por el cambio de color del indicador. dado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).
La presencia de halo en estas colonias corresponde a un NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
precipitado biliar.
La mayora de organismos que presentan estas caractersti- Modo de empleo
cas son Enterobacterias, sin embargo no es completamen- Transferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-
te especfico, por ejemplo, las Aeromonas se comportan de sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con el
forma similar. medio enfriado a una temperatura entre 45 y 48C, aadir
a cada placa 15 ml del medio lquido. Homogeneizar giran-
Frmula (por litro) do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriar
Mezcla de Sales Biliares ........................ 1,5 g hasta solidificacin. Aadir a cada placa 10 ml ms del
Violeta Cristal.......................................... 0,002 g medio lquido y volver a dejar solidificar. Al haber asegurado
Rojo Neutro ............................................ 0,03 g la anaerobiosis no tendr lugar el crecimiento de bacterias
D(+)-Glucosa .......................................... 10,0 g Gram-negativas no fermentadoras. Incubar a 37C durante
Extracto de Levadura ............................ 3,0 g 24 horas. La formacin de colonias de color prpura viole-
Peptona de Gelatina ............................... 7,0 g ta, rodeadas de un halo del mismo color, indica presencia
Sodio Cloruro ........................................ 5,0 g de Enterobacterias.
Agar ...................................................... 15,0 g
pH final: 7,4 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rojizo. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 84: 381 (1962)
J. Appl. Bact., 26: 444-452 (1963)
Historia Preparacin
El primer trabajo original fue de M. H. Mac Crady en 1932 Suspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
para el anlisis de leches. Ms tarde Bartram y Black lo hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Se puede esterili-
emplearon para el recuento de Coliformes en leche cruda, zar con cuidado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).
pasteurizada y certificada. As mismo Miller y Prickett lo NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
emplearon en un caso prctico de recontaminacin de la
leche. La formulacin de este medio corresponde a las Modo de empleo
recomendaciones de la APHA. Transferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-
sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con el
Fundamento medio enfriado a una temperatura entre 45 y 48C, aadir
La presencia simultnea de violeta cristal y sales biliares a cada placa 15 ml del medio lquido. Homogeneizar giran-
asegura la inhibicin del crecimiento de las bacterias Gram- do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriar
positivas. A su vez la fermentacin de la lactosa da lugar hasta solidificacin. Aadir a cada placa 10 ml ms del
por un lado a la formacin de cido, que hace virar a rojo el medio lquido y volver a dejar solidificar. Incubar a 37C
indicador, y por otro a la precipitacin de las sales biliares durante 24 horas para el recuento de Coliformes.
alrededor de las colonias. Las colonias, presentan un color
rojo prpura y aparecen rodeadas por una franja rojiza.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rojizo. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA. (1976)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Salmonella en leches y productos lcteos, carnes y alimen-
tos en general.
Fundamento Preparacin
La Bilis y el Verde Brillante inhiben el crecimiento de la flora Disolver 63 g en 1 l de agua destilada. Calentar (mximo
Gram-positiva. Las bacterias reductoras del tetrationato 50C) y agitar hasta disolucin total. Distribuir en tubos
como Proteus y Salmonella crecen de forma ptima, estriles repartiendo el precipitado de calcio carbonato. NO
mientras que Coliformes y flora habitual del intestino ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Los mejores enriqueci-
queda inhibida. mientos se consiguen despus de dejar el Caldo preparado
Puede aadirse Novobiocina a una concentracin de en reposo 2 3 das a temperatura ambiente.
0,04 g/l de Caldo para inhibir el crecimiento de Proteus.
El carbonato clcico neutraliza el cido formado en la Modo de empleo
reduccin del tetrationato. Sembrar la muestra e incubar a 37C durante 24 horas.
Pasado el tiempo de incubacin sembrar en medio selectivo.
Frmula (por litro)
Bilis de Buey desecada ............................ 8,0 g
Potasio Tetrationato .................................. 20,0 g Reactivos auxiliares
Verde Brillante........................................... 0,07 g
Ref. Descripcin Envase
Calcio Carbonato...................................... 20,0 g
Novobiocina *
Peptona de Carne .................................... 8,6 g
Sodio Cloruro ........................................... 6,4 g * Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: presenta un precipitado de Calcio Carbonato.
Color: crema a lo sumo con tinte verdoso. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Crecimiento
Microorganismos Concentracin del inculo 6 horas 24 horas
Escherichia coli ATCC 11775 aprox. 99% < 30% < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 aprox. 1% > 70% > 95%
Bibliografa
J. Clin. Path., 12: 568-571 (1959)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea como medio selectivo y diferencial para determinar la densidad relativa de bacterias Coliformes
en agua, aguas residuales y alimentos.
Historia Preparacin
Se trata de una rplica del medio propuesto por Noble y Suspender 20,6 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Tonney para la determinacin de bacterias Coliformes en tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
aguas. Est concebido como indicador del grado de conta- esterilizar a 121C durante 15 minutos.
minacin de la muestra.
Modo de empleo
Fundamento El medio preparado es fotosensible por lo que se reco-
La presencia conjunta del verde brillante y de la bilis hacen mienda almacenarlo al abrigo de la luz, y prepararlo poco
que el medio sea selectivo para bacilos Gram-negativos, los antes de su utilizacin.
cuales al fermentar la lactosa dan lugar a colonias intensa- Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
mente rojas rodeadas de un halo rosa, que contrastan con
el fondo verde azulado del medio.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: prpura claro. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Noble y Tonney, Journal of American Water Works Association, 27: 108 (1935)
Se emplea para la investigacin y recuento de bacterias Coliformes en aguas, leches, productos alimenticios
y cualquier material de inters sanitario. Recomendado para el enriquecimiento selectivo y enumeracin de
E. coli, y para la tcnica del NMP.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige verdoso. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Meat and Meat products-Detection and Enumeration of Presumptive coliform Bacteria and Presumptive Escherichia coli. ISO 3811. (1975)
Historia Preparacin
Este medio se basa en la formulacin original dada por Suspender 36 g en 1 l de agua destilada, aadir 10 ml de
Bordet y Gengou a la que se han introducido algunas modi- glicerina y mezclar bien. Calentar y agitar hasta ebullicin y
ficaciones hasta tener la frmula actual. Su principal aplica- disolucin total. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
cin ha sido el diagnstico de la tos ferina. Como se trata Dejar enfriar hasta 45C y aadir aspticamente 150-200 ml
de una base se debe aadir sangre desfibrinada. de sangre de caballo desfibrinada y estril. Mezclar bien sin
hacer burbujas y distribuir en placas de Petri estriles. Antes
Fundamento de distribuir puede aadirse el antibitico.
El medio con glicerina y sangre est indicado para el cre- Las placas deben estar ms bien llenas de medio y no deben
cimiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertus- secarse puesto que tendrn incubaciones prolongadas.
sis. Se puede conseguir que el medio sea selectivo si se
aaden 0,25 unidades de Penicilina por cada ml. En las Modo de empleo
muestras de secreciones nasofarngeas hay mucha flora Incubar a 37C de 3 a 4 das.
acompaante de Bordetella resistente a la Penicilina, por Las colonias de Bordetella pertussis son prcticamente
lo que se recomienda la adicin de 40 mg de cefalexina transparentes, poco definidas, brillantes y de dimetro
por litro de medio. inferior a 1 mm con un estrecho halo de hemlisis tipo:
beta. Bordetella parapertussis tiene un crecimiento ms
Frmula (por litro) rpido. Las colonias son similares y dan una coloracin
Infusin de Patata....................................... 4,5 g verde oscura al medio.
Proteosa Peptona....................................... 10,0 g Las colonias de cocos Gram-positivos son opacas y ms
Sodio Cloruro ............................................. 5,5 g oscuras.
Agar............................................................ 16,0 g Pasados 6 das de incubacin sin crecimientos caractersti-
pH final: 6,7 0,2 cos puede considerarse que las muestras son negativas.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
131339 Glicerina PA-ACS-ISO 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
Sangre de Caballo
Penicilina *
Cefalexina *
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: puede tener un ligero precipitado.
Color: beige. pH: 6,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 Satisfactorio
Bordetella pertussis ATCC 8467 Satisfactorio
Bordetella parapertussis Satisfactorio
Bibliografa
J. Path. Bact., 35: 831-842 (1932)
Amm. Inst. Pasteur, 20: 731-741 (1906)
Se emplea para el cultivo y aislamiento de Brucella en productos lcteos y muestras biolgicas. Aadiendo
sangre permite el cultivo de grmenes aerobios y anaerobios con exigencias particulares.
Fundamento Preparacin
Se trata de un medio muy nutritivo dado el elevado conte- Suspender 43 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
nido de peptonas. El extracto de levadura es una fuente de hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
complejo vitamnico B. La glucosa aporta la energa nece- 121C durante 15 minutos. Suplementar el medio segn los
saria para el desarrollo de los microorganismos. Como base objetivos deseados.
permite aadir sangre y otras vitaminas segn se desee.
Para hacerlo ms selectivo se pueden aadir antibiticos Modo de empleo
como la Polimixina B, la Bacitracina y la Cicloheximida, Para la determinacin de Brucella, los cultivos primarios se
sobre todo si se trata de investigar Brucella, tambin puede incubarn 4-5 das en atmsfera al 10% CO 2. Si no hay cre-
aadirse Violeta de Metilo. Las concentraciones de estos cimiento, la incubacin se prolongar hasta 21 das. Para la
aditivos con los que se suplementa este medio son: determinacin de Campylobacter la inoculacin se realizar
Bacitracina..................................... 25000 UI/l en una atmsfera rica en CO 2. A 37C crecen las especies
Polimixina-B ................................... 6000 UI/l de Campylobacter ms habituales, para seleccionar
Cicloheximida ................................ 100 mg/l Campylobacter jejuni, hacer la incubacin a 42C.
Violeta de Metilo ............................ 1,25 mg/l
Esta base tambin puede ser usada como: Advertencia: Las especies de Brucella son muy infecciosas
Medio basal para Campylobacter jejuni. Mediante la adicin (vehculo de transporte el aire), por lo que deben ser mani-
de los siguientes antibiticos; por litro de medio. puladas en cabina de seguridad.
Vancomicina .................................... 10 mg/l
Polimixina-B..................................... 2500 UI/l
Reactivos auxiliares
Trimetoprim...................................... 5 mg/l
adems de estos tres productos si la muestra a analizar Ref. Descripcin Envase
puede estar contaminada con Candida albicans aadir: Bacitracina *
Cefalotina ............................................. 15 mg/l 374952 Polimixina B Sulfato PB * 1g
Amfotericina B ..................................... 2 mg/l 375266 Cicloheximida PB * 1 g; 5 g; 25 g
Vancomicina *
Frmula (por litro)
Trimetoprim *
Extracto de Levadura ................................. 2,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 1,0 g Cefalotina *
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g Anfotericina B *
Peptona de Casena ................................... 10,0 g 252079 Violeta de Metilo DC * 25 g; 100 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g * Producto Opcional
Sodio Hidrgeno Sulfito .............................. 0,1 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
en atmsfera de CO2 y observados a las 24-72 horas.
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Satisfactorio
Brucella melitensis ATCC 4309 Satisfactorio
Brucella suis ATCC 4314 Satisfactorio
Bibliografa
J. Bact., 66: 502-504 (1953)
Amer. J. Clin. Path., 27: 482-485 (1957)
Se emplea como medio selectivo para el recuento de microorganismos proteolticos (degradadores de pro-
tenas) en alimentos.
Historia Preparacin
Este medio est basado en las formulaciones originales Suspender 29 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
de Frazier y Rupp y modificado hasta obtener resultados hasta ebullicin. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
ptimos. Distribuir en placas de Petri estriles mezclando bien el pre-
cipitado que se forma. El medio debe ser opalescente.
Fundamento
El medio preparado ha de ser opalescente debido a la pre- Modo de empleo
sencia de casena. El procedimiento se fundamenta en que Se puede inocular por extensin en superficie o por vertido
los microorganismos proteolticos degradan la protena en placas y la incubacin puede durar de 2 a 3 das. Para
producindose un halo de transparencia alrededor de las facilitar el recuento de las colonias, con halo de transparen-
colonias. Si no se produce este halo el resultado de la cia, se puede cubrir la superficie de la placa con cido ac-
determinacin es negativo. Si se desea intensificar la turbi- tico entre el 5 y el 10%.
dez del medio se pueden aadir de 5 a 10 g de leche des-
cremada en 1 l de medio.
Reactivos auxiliares
Frmula (por litro)
Ref. Descripcin Envase
Calcio Cloruro ........................................... 0,05 g
Calcio Hidrxido ....................................... 0,05 g 131008 Acido Actico glacial PA-ACS-ISO * 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l;
60 l; 200 l
Casena (Hammarsten).............................. 2,5 g
Extracto de Carne .................................... 3,0 g Leche desnatada *
Peptona de Carne .................................... 5,0 g * Producto Opcional
Sodio Cloruro ........................................... 5,0 g
Agar.......................................................... 13,5 g
pH final: 7,2 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente.
Color: beige claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
FRAZIER & RUPP., J. Bact., 16: 57-63 (1928)
Se emplea para la deteccin, aislamiento y confirmacin de Enterococos en alimentos, aguas y otras mues-
tras biolgicas.
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
CeNAN Tcnicas para el Examen Microbiolgico de Alimentos y Bebidas. Madrid. (1982)
Peligrosidad
Se emplea para el cultivo de bacterias exigentes como Estreptococos, Neumococos, Meningococos y otros.
Por la adicin de Estreptomicina, Gentamicina o Cloranfenicol resulta un medio selectivo para hongos.
Historia Preparacin
Este medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primeros Suspender 52 g (Agar) 37 g (Infusin) en 1 l de agua
estudios demostraron que el medio era ms eficaz que otros destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir duran-
como base glucosada en el aislamiento de determinadas te 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minu-
bacterias. Si adems se le aada antibitico el medio se tos. Agitar el medio antes de usar. Para preparar un medio
haca selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobre selectivo para hongos, el medio esterilizado y fundido se
todo en muestras altamente contaminadas por bacterias. debe enfriar hasta 50C y aadir aspticamente 20.000 UI
de penicilina y 40 mg de estreptomicina por litro de medio.
Fundamento Se obtiene un medio ms estable aadiendo 0,05 mg de
Por la presencia de peptona, infusin de cerebro de ternera cicloheximida y 0,5 mg de cloranfenicol por litro, antes de
e infusin de corazn de res, se tienen los componentes esterilizar.
necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La gluco-
sa se emplea para la fermentacin y el fosfato como Modo de empleo
tampn. Por la adicin de antibitico es un medio adecuado Incubar a 37C de 24 a 72 horas.
para el estudio de hongos patgenos. Debido a su conteni-
do de glucosa es menos indicado para la caracterizacin de
hemlisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre. Reactivos auxiliares
Frmula (por litro) de Cerebro Corazn (BHI), Ref. Descripcin Envase
Infusin Sangre *
Infusin de Cerebro de Estreptomicina *
Ternera (a partir de 200 g) ............................. 12,5 g Gentamicina *
Infusin de Corazn de 143481 Cloranfenicol (RFE, BP, Ph. Eur.) 25 g; 100 g; 500 g
Res (a partir de 250 g)................................... 5,0 g PRS-CODEX *
D(+)-Glucosa .............................................. 2,0 g 375266 Cicloheximida PB* 1 g; 5 g; 25 g
Peptona de Gelatina ................................... 10,0 g
* Producto Opcional
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
di-Sodio Hidrgeno Fosfato........................ 2,5 g
pH final: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Bibliografa
J. Bact., 62: 613 (1951)
Historia Agar.......................................................... 14 g
Mossel concibi este medio para la deteccin y enumera- pH final: 7,2 0,2
cin de Bacillus cereus en todo tipo de alimentos. Adems
del recuento, este medio permite definir determinadas Preparacin
caractersticas de este microorganismo: la resistencia a la Suspender 40 g en 950 ml de agua destilada. Calentar y
Polimixina B, la produccin de lecitinasa y la no fermenta- agitar hasta disolucin total. Distribuir y esterilizar a 121C
cin del Manitol. durante 15 minutos. Enfriar a 50C; aadir aspticamente
100.000 UI de Polimixina B y 50 ml de emulsin de yema
Fundamento de huevo estril por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.
La adicin de Polimixina-B Sulfato a esta base de agar
inhibe el crecimiento de la flora secundaria. B. cereus es Modo de empleo
manitol-negativo, lo que permite su distincin de la flora Las placas sembradas se incuban a 30C de 18 a 24 horas.
acompaante manitol-positiva, que hace virar el Azul de Pueden existir confusiones con colonias de otros bacilos
Bromotimol a amarillo. Al tratarse de un microorganismo Gram-positivos.
con actividad lecitinasa se forma un halo de precipitados Las pruebas confirmativas a realizar son: fermentacin de
blancos alrededor de la colonia, como resultado de la glucosa, la utilizacin de la gelatina y reduccin de nitratos,
degradacin de la lecitina del huevo. pruebas positivas para Bacillus cereus.
B. cereus en condiciones normales y cuando su nmero es
limitado no se considera patgeno, sin embargo es capaz
de producir intoxicacin alimentaria al hombre cuando un Reactivos auxiliares
alimento esta muy contaminado o cuando las condiciones
Ref. Descripcin Envase
de conservacin no son adecuadas. Se utiliza, tambin,
como indicador del mantenimiento de la cadena del fro en 374952 Polimixina B Sulfato PB 1g
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-40 horas despus de aadir Emulsin de Yema de Huevo y Polimixina B Sulfato.
Bibliografa
Appl. Microbiol., 15: 650-653 (1967)
J. Bact., 75: 499-509 (1958)
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Chapman, Food Res., 13: 100 (1948)
Chapman, J. Bact., 63: 147 (1952)
Medio recomendado para la determinacin del nmero de Coliformes totales, fecales y presuncin de E. coli
en aguas potables y envasadas por el mtodo de filtro membrana.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige azulado. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas.
Bibliografa
J. Bact., 53: 504 (1947)
J. Appl. Bact., 25: 20-29 (1962)
Orden n 21936. BOE n 193. (1983)
ISO 9308: 1 (1990)
Fundamento Preparacin
Koser descubri que aportando como nica fuente de car- Suspender 5,7 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-
bono el cido ctrico o su sal sdica, Enterobacter aeroge- lucin total. Distribuir en tubos a razn de 6 ml por tubo y
nes se desarrolla bien mientras que Escherichia coli queda- esterilizar a 118C durante 15 minutos.
ba inhibida. De esta manera los tubos que despus de la
incubacin quedan opalescentes indicarn presencia de Modo de empleo
microorganismos citrato-positivos. El suministro de nitrge- Sembrar el medio e incubar a 37C de 18 a 24 horas.
no se aporta a travs del ion amonio.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco. pH: 6,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Enterobacter cloacae ATCC 23355 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Nulo
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
A14459 Inosita * 5 g; 25 g; 100 g
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: verde. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
SIMMONS, J. S. J. Infect. Dis., 39: 209-241 (1926)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Historia Preparacin
Sandys fue el primero en trabajar sobre un medio que per- Suspender 36,1 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
mitiera la observacin de colonias al mismo tiempo que se tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
evitara la aglomeracin por Proteus. Ms tarde, conjunta- 121C durante 15 minutos. Homogeneizar y distribuir en
mente con Mackey, fueron modificando las formulaciones de placas de Petri estriles.
los primeros ensayos hasta llegar a la composicin actual.
Modo de empleo
Fundamento Sembrar por estra en la superficie del medio.
El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentacin Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
cida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las
Enterobactericeas y el bajo contenido en electrolitos redu-
ce la difusin de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne
y la Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige verdoso. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
App. Microb., 19: 409
Se emplea para la deteccin y recuento de organismos Coliformes fecales en aguas. Muy utilizado en la
tcnica de filtracin por membrana.
Fundamento Preparacin
La formulacin del medio corresponde a Geldreich y cola- Suspender 37,1 g en 1 l de agua destilada. Aadir 10 ml de
boradores. Por la presencia de las sales biliares n 3 se le Acido Roslico al 1% en una solucin de Sodio Hidrxido
confiere un carcter selectivo para las Enterobactericeas, 0,2N, calentar y agitar hasta ebullicin. Si deseamos prepa-
que a su vez se hace selectivo para los Coliformes fecales rar un medio slido suspender: 15 g de Agar Bacteriolgico
al incubar a 44,5C. Este medio suplementado con Acido en 500 ml de agua y esterilizar a 121C durante 15 minu-
Roslico hace que las colonias de coliformes fecales apa- tos, dejar enfriar hasta 45-50C. Preparar 500 ml de medio
rezcan de color azul y las dems de color gris. doble concentrado; una vez disuelto mezclar con los 500 ml
Al adicionar 15 g de Agar-Agar al Caldo se obtiene el Agar de Agar. Dejar enfriar y distribuir.
para coliformes fecales (mFC) utilizado, habitualmente, en la En lugar de Agar el medio lquido puede depositarse sobre
tcnica de filtracin por membrana. El filtro a travs del cual Almohadillas absorbentes estriles, que harn de soporte
se ha filtrado la muestra, se coloca sobre la superficie del para el filtro.
Agar. Pasadas 24 horas de incubacin a 44,5C se cuentan
las colonias de Coliformes. Modo de empleo
Sembrar el inculo deseado en el tubo o en la superficie del
Frmula (por litro) medio si es un agar.
Azul de Anilina ............................................ 0,1 g Incubar a 37C durante 24 horas. Si se desea una total
Extracto de Levadura ................................. 3,0 g selectividad de Escherichia coli incubar a 44,5C.
Lactosa ...................................................... 12,5 g
Proteosa Peptona n 3 ............................... 5,0 g
Sales Biliares n 3 ....................................... 1,5 g Reactivos auxiliares
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Ref. Descripcin Envase
Triptosa....................................................... 10,0 g
121051 Acido Roslico PA 10 g; 25 g; 50 g
pH final: 7,4 0,2 131687 Sodio Hidrxido lentejas 500 g; 1 kg; 5 kg;
PA-ACS-ISO 25 kg; 50 kg
402302 Agar Bacteriolgico Tipo 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Europeo CULTIMED *
Almohadillas absorbentes *
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas, despus de haber aadido 10 ml/l de cido roslico al 1%.
Bibliografa
J. Amer. Water Works Association, 57: 208 (1965)
ISO 9308 - 1:1990
Se emplea para el cultivo y aislamiento de microorganismos en general y en particular de aquellos que son
especialmente exigentes a partir de una amplia variedad de muestras. Permite la adicin de sangre, de com-
ponentes selectivos o factores de crecimiento.
Historia Preparacin
Tanto la formulacin del medio como sus distintas variacio- Suspender 42,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
nes especializadas fueron descritas por Ellner y colabora- tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
dores. Este medio permite obtener diferentes medios de esterilizar a 121C durante 15 minutos. Se enriquece con
cultivo, ptimos para microorganismos exigentes. diversos materiales, segn la determinacin que se vaya a
realizar:
Fundamento
Las peptonas aportan la base nutritiva del medio, el almidn - Agar Sangre Columbia
se constituye como fuente de energa, el Sodio Cloruro A 950 ml de Base de Agar Columbia aadir 50 ml de
mantiene el nivel salino necesario para el buen desarrollo de sangre de carnero desfibrinada y estril.
los grmenes y la sangre desfibrinada, que se suele aadir, - Medio selectivo Gardnerella vaginalis
permite la observacin de las reacciones hemolticas. A par-
A 940 ml de Base de Agar Columbia, aadir 50 ml de
tir de esta base se prepara el agar sangre y el agar choco-
suero de caballo o de conejo y 35 mg de Acido Nalidxico;
late; tambin puede utilizarse para ensayos de toxicidad de
4 mg de Gentamicina y 2 mg de Amfotericina B disuelto
Corynebacterium (Herman y col. 1958), como base para la
en 4 ml de Etanol.
preparacin de Agar vaginalis (Greenwood y col. 1977),
para el aislamiento de Campylobacter (Karmaly y col. 1986), - Medio COBA
adems de otras muchas variantes. A 930 ml de Base de Agar Columbia aadir 50 ml de
sangre de caballo desfibrinada y estril. Aadir 10 ml de
Frmula (por litro)
Solucin acuosa (0,1%) de Sulfato de Colistina y 10 ml
Almidn de Maz ......................................... 1,0 g de Solucin acuosa (0,05-0,1%) de Acido Oxolnico.
Peptona...................................................... 10,0 g
Peptona Biotriptasa .................................... 10,0 g Modo de empleo
Peptona Msculo Cardaco ........................ 3,0 g Utilizar segn los fines a conseguir.
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 13,5 g
pH final: 7,3 0,2 Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
Sangre *
Gentamicina *
Acido Nalidxico *
Sulfato de Colistina *
Acido Oxolnico *
Amfotericina B
* Producto Opcional
Bibliografa
Am. J. Clin. Path., 29: 181-183 (1958)
Handbook of Microbiological Media. (1993)
Health Lab. Sci., 14: 102-106 (1977)
J. Clin. Microbiol., 23: 456-459 (1986)
Se emplea en la conservacin de cepas de microorganismos exigentes, para los estudios de movilidad y fer-
mentacin con la adicin de hidratos de carbono.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas.
Bibliografa
J. Lab. Clin. Med., 16: 294 (1930)
Se emplea para el cultivo de hongos y bacterias del suelo, adems de otros microorganismos capaces de
desarrollarse con sodio nitrato como nica fuente de nitrgeno. Tambin se usa para la produccin de cla-
midosporas por Candida albicans.
Historia Preparacin
Este medio se prepara de acuerdo con la frmula original de Suspender 45,4 g en 1 l de agua destilada y agitar hasta
Thom y Church. Indicado para el cultivo e identificacin de disolucin total. Distribuir y esterilizar a 115C durante
hongos, desarrollo de bacterias del suelo no exigentes y 20 minutos.
ensayos de resistencia de mohos.
Modo de empleo
Fundamento Las temperaturas y tiempos de incubacin estn en funcin
La modificacin respecto a la frmula original consiste en la de la clase de hongo. En principio incubar a 25C de una a
sustitucin del Magnesio Sulfato y el di-Potasio Hidrgeno dos semanas y de 24 a 48 horas para Candida albicans.
Fosfato por Magnesio Glicerofosfato, evitando de esta
manera la precipitacin del tri-Magnesio di-Fosfato.
Para el aislamiento de Hongos puede aumentarse la selec- Reactivos auxiliares
tividad con la adicin de Estreptomicina a 30 mg/l o de
Ref. Descripcin Envase
Aureomicina a 2 mg/l.
Estreptomicina *
Frmula (por litro) Aureomicina *
Hierro(II) Sulfato ........................................ 0,01 g * Producto Opcional
Magnesio Glicerofosfato ........................... 0,5 g
Potasio Cloruro ......................................... 0,5 g
Potasio Sulfato ......................................... 0,35 g
Sacarosa .................................................. 30,0 g
Sodio Nitrato ............................................ 2,0 g
Agar.......................................................... 12,0 g
pH final: 6,8 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado, floculento uniforme.
Color: beige muy claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 30C
y observados a las 24-72 horas.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Nulo/Ligero
Bacillus subtilis ATCC 6633 Moderado
Candida albicans ATCC 10231 Moderado
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografa
Thom y Church. The Aspergilli, 39: (1926)
Thom y Raper. Manual of the Aspergilli, 39: (1945)
Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
413777 Cerebro Corazn (BHI), Infusin 500 g; 5 kg
CULTIMED *
* Producto Opcional
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 30C
y observados a los 7 das.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Inhibido
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Candida tropicalis Inhibido
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Inhibido
Trichophyton equinum ATCC 22443 Satisfactorio
Bibliografa
J. Bact., 60: 104 (1950)
Mycopath. Mycol Appl., 13: 113 (1960)
Peligrosidad
Historia Preparacin
La formulacin del medio es, en esencia, la descrita por Disolver 46 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Leifson para la diferenciacin de bacilos entricos, funda- hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar.
mentada en la fermentacin de la lactosa como caracters- NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar hasta
tica diferencial de los Coliformes. 45C y distribuir en placas de Petri estriles.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de patgenos entricos, especialmente de
Salmonella y de Shigella.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
131621 Sacarosa PA-ACS * 500 g; 1 kg; 5 kg;
25 kg; 50 kg
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Se emplea como medio diferencial ligeramente selectivo para el aislamiento de bacilos entricos Gram-nega-
tivos. Tambin se usa para el recuento de bacterias Coliformes en aguas, leches, productos lcteos y otros
productos alimenticios.
Historia Preparacin
Este medio fue desarrollado en su origen por Leifson. Este Suspender 42,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
medio corresponde a las recomendaciones de la APHA tar hasta ebullicin y disolucin total. No sobrecalentar. NO
para anlisis de alimentos. ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,1 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea como medio selectivo para el aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos procedentes de
heces, orina y otros especmenes.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Path. Bact., 40: 581 (1935)
J. Infectious Diseases, 18: 596 (1916)
Historia Preparacin
Weckman y Catlin pusieron de manifiesto que el aumento Suspender 42 g en 1 l de agua destilada. Si se desea se
de la actividad productora de DNasa guarda una estrecha puede aadir 10 g de manitol y 0,025 g de azul de bromo-
relacin con la produccin de coagulasa. Tambin se timol por cada litro del medio. Calentar y agitar hasta ebulli-
demostr que la produccin de DNasa es una indicacin cin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 118C durante
fiable en la determinacin de Estafilococos patgenos. 15 minutos. Dejar enfriar a 45C y distribuir en placas de
Petri estriles.
Fundamento
Los microorganismos productores de DNasa depolimerizan Modo de empleo
el cido desoxirribonuclico que contiene el medio, dando Inocular en superficie por estra. Incubar a 37C de 18 a 24
lugar a unas zonas de transparencia alrededor de las zonas horas. Inundar la placa con Acido Clorhdrico 1N y observar
sembradas, despus de inundar la placa con cido clorh- la transparencia alrededor de la estra. Si se ha suplemen-
drico 1N. La acidificacin del medio con cido clorhdrico tado el medio con Manitol y Azul de Bromotimol, el medio
provoca la precipitacin del ADN quedando el medio turbio, es azul, pero las colonias Manitol-positivas son de color
excepto, alrededor de las colonias DNasa-positivas. amarillo con halo amarillo alrededor.
Para aumentar la informacin sobre la caracterizacin de
Estafilococos patgenos, puede demostrarse el consumo
de Manitol suplementado el medio con este producto y un Reactivos auxiliares
indicador de pH como el azul de Bromotimol.
Ref. Descripcin Envase
Frmula (por litro) 181021 Acido Clorhdrico 1 mol/l (1N) SV 1 l; 2,5 l; 10 l
Acido desoxirribonuclico ........................... 2,0 g 132067 D(-)-Manita PA-ACS * 500 g; 1 kg; 5 kg
Peptona de Casena ................................... 15,0 g 251167 Azul de Bromotimol DC * 5 g; 25 g
Peptona de Soja......................................... 5,0 g
* Producto Opcional
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,3 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 73: 747 (1957)
J. Bact., 78: 520 (1959)
Se emplea para la diferenciacin y enumeracin de Coliformes y E. coli en agua, aguas residuales, alimen-
tos, otros materiales y fauna marina.
Historia Preparacin
Perry y Hajna desarrollaron este medio con el objeto de Suspender 37,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
poder tener una buena deteccin de los microorganismos tar hasta disolucin total. Distribuir en tubos de ensayo con
fecales y de la Escherichia coli. Este medio es de los reco- campana Durham y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
mendados por los mtodos oficiales para aguas potables. Evitar las burbujas de aire en la campana de fermentacin
antes de inocular los tubos.
Fundamento
La presencia de las sales biliares n 3 determina que se inhi- Modo de empleo
ba el crecimiento de los formadores de esporas y de Inocular el medio e incubar a la temperatura adecuada:
Estreptococos fecales. La mezcla de fosfatos regula el pH 37C para determinar Coliformes totales y 44C para
del medio. La Triptosa es el elemento nutritivo y el Sodio Coliformes fecales. Este medio se utiliza en la prueba con-
Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen creci- firmativa de presencia de E. coli en el anlisis de aguas;
miento de los grmenes. La Lactosa favorece a los para ello se inocula el tubo de medio EC y se incuba a
Coliformes y el consumo, se pone de manifiesto por la pro- 44,5 0,5C durante 24 2 horas.
duccin de gas. La presencia de gas en la campana de Durham y la prueba
complementaria de produccin de Indol (pg. IV - 8, IV - 24)
Frmula (por litro) son confirmativos de E. coli.
Lactosa ...................................................... 5,0 g
Potasio di-Hidrgeno Fosfato ..................... 1,5 g
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ..................... 4,0 g Reactivos auxiliares
Sales Biliares n 3 ....................................... 1,9 g
Ref. Descripcin Envase
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Triptosa....................................................... 20,0 g 960002 BioFix Indol * 50 tiras
252908 Reactivo de Kovacs DC * 100 ml
pH final: 6,9 0,2
413794 Agua de Peptona * 500 g; 5 kg
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de
44,5 0,5C y observados a las 24 horas 2 horas.
Bibliografa
Am. J. Pub. Health., 34: 735-738 (1944)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: verde claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografa
J. Bact., 84: 381 (1962)
J. Appl. Bact., 24: 444-452 (1963)
Se emplea para la investigacin y recuento de Coliformes en aguas, productos lcteos y alimentos en general.
Historia Preparacin
El inicio fue el trabajo de Endo para encontrar un medio que Suspender 36 g en 1 l de agua destilada, aadir 4 ml de
no tuviera sales biliares y que permitiera diferenciar las Pararrosanilina base al 10% p/v en etanol 96% v/v y hervir
Enterobactericeas que fermentan la lactosa de las que no. hasta disolucin total. Esterilizar a 121C durante 15 minu-
En su origen fue desarrollado para el aislamiento e identifi- tos y mezclar bien.
cacin de los bacilos del tifus, aunque posteriormente apa- Advertencia: para la Pararrosanilina se deben tomar las
recieron otros medios ms eficaces, al tiempo que se medidas adecuadas para no ser inhalada y que no entre en
encontr ser de los medios ms indicados para el anlisis contacto con la piel.
bacteriolgico del agua.
Modo de empleo
Fundamento Incubar entre 35 y 37C de 24 a 48 horas. Las placas pre-
La presencia de Sodio Sulfito y Pararrosanilina inhibe el paradas son de color rosa y deben conservarse entre 2-8C
crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Adems las y protegidas de la luz para evitar la oxidacin de la
proporciones de ambos son tales que la Pararrosanilina se Pararrosanilina.
mantiene decolorada, de tal manera que slo con el ace- El medio preparado debe utilizarse durante los das siguien-
taldehdo generado en la fermentacin de la lactosa se tes a su preparacin, ya que la oxidacin del medio lo hace
consigue restablecer su color original. As, las bacterias volver cada vez ms rojo e inservible.
lactosa-negativas permanecern incoloras, mientras que
las lactosa-positivas toman un color rojo intenso que llega
a colorear el medio que las rodea. La colonia de E. coli, Reactivos auxiliares
adems del color rojo intenso, puede presentar un brillo
Ref. Descripcin Envase
metlico.
254615 Pararrosanilina base DC 10 g
Frmula (por litro) 121085 Etanol 96% v/v PA 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l;
Lactosa ...................................................... 10,0 g 60 l; 200 l
Peptona...................................................... 10,0 g
tri-Potasio Fosfato ...................................... 3,5 g
Sodio Sulfito ............................................... 2,5 g
Agar............................................................ 10,0 g
pH final: 7,5 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciacin de bacterias entricas Gram-negativas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: prpura rosado. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Examination of Dairy Products. 10th ed. APHA. (1953)
Se emplea para la investigacin y diferenciacin de bacilos entricos y microorganismos Coliformes. Con este
medio se puede identificar Escherichia coli y Enterobacter. Tambin permite la identificacin de Candida albicans.
Historia Preparacin
Los primeros en desarrollar este tipo de medio fueron Holt- Suspender 37,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Harris y Teague que empleaban lactosa y sacarosa como tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
componentes capaces de ser fermentados. Ms tarde esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta
Levine modific el medio suprimiendo la sacarosa y aumen- 45C y agitar suavemente antes de usarlo.
tando la proporcin de lactosa, lo que permita fcilmente
diferenciar Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. Modo de empleo
Incubar a 37C de 24 a 48 horas.
Fundamento Para el cultivo de Candida albicans, las placas suplemen-
La eosina y el azul de metileno son productos que inhiben tadas con Clortetraciclina que sern de color azul se incu-
parcialmente el crecimiento de microorganismos gram- ban en jarra de anaerobiosis en una atmsfera con 10% de
positivos, entre ellos los Estreptococos fecales. Adems, la dixido de carbono.
combinacin del azul de metileno y la eosina permite dife- Para el cultivo confirmativo de E. coli, las placas se incu-
renciar los grmenes lactosa-positivos de los lactosa-nega- barn a 44,5 1C con lecturas a las 24 y 48 h.
tivos. Los Coliformes dan colonias violeta oscuro, con una Las colonias de E. coli en este agar miden 2-3 mm de di-
zona central ms oscura, mientras, que los lactosa-negati- metro, son planas o ligeramente cncavas, con centros
vos dan colonias incoloras. Este medio es utilizable para la oscuros, casi negros. Con luz reflejada, casi siempre se
identificacin de Candida albicans cuando se suplementa observa un brillo metlico verdoso. Enterobacter forma
con Clortetraciclina clorhidrato a razn de 100 mg/l inhi- colonias ms grandes (4-6 mm) con centro pardo, mientras
biendo el crecimiento de la flora acompaante. que Salmonella y Shigella forma colonias translcidas,
desde incoloras a mbar. Klebsiella da colonias mucosas
Frmula (por litro) parduzcas. Candida albicans da colonias en forma de tela-
Eosina Amarillenta .................................. 0,4 g raa o de pluma.
Azul de Metileno ..................................... 0,065 g
Lactosa .................................................. 10,0 g
Peptona de Gelatina ............................... 10,0 g Reactivos auxiliares
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ................. 2,0 g
Ref. Descripcin Envase
Agar........................................................ 15,0 g
Clorotetraciclina Clorhidrato *
pH final: 7,1 0,2
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente con precipitado.
Color: rosa-rojizo. pH: 7,1 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Journal of Infectious Diseases, 23: 43-47 (1918)
USP IV (2002)
Historia Preparacin
Stone fue el primero en describir un medio en que los Suspender 149 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Estafilococos patgenos daban positivo a la prueba de la hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
gelatinasa. Despus de diversas modificaciones Chapman 121C durante 15 minutos. Resuspender el precipitado agi-
lleg a la formulacin definitiva del medio. tando suavemente para evitar la formacin de burbujas y
distribuir en placas de Petri estriles an caliente. Se puede
Fundamento emplear sin esterilizar hirvindolo durante 5 minutos y uti-
El carcter selectivo del medio se debe a la alta concentra- lizndolo seguidamente.
cin de Sodio Cloruro que tiene y que hace que la mayora
de los microorganismos diferentes de los Estafilococos que- Modo de empleo
den inhibidos. Es un medio con un alto grado de diferencia- Sembrar la muestra en la superficie de la placa e incubar
cin, basado en: crecimiento restringido a microorganismos entre 35 y 37C durante 48 horas.
con elevada tolerancia a la sal comn, capaces de degradar Las colonias sospechosas de ser Estafilococos patgenos
el manitol, lisar la gelatina y formar pigmento. El resto de los aparecen de color amarillo (produccin de pigmento). La
componentes asumen las funciones nutricionales. fermentacin del manitol produce un descenso del pH del
Para mejorar la inhibicin de microorganismos del gnero medio alrededor de las colonias, ello se pone de manifiesto
Bacillus el medio se puede suplementar con Azida Sdica a porque al gotear una solucin al 0,04% de Azul de
razn de 65 mg/l de medio. Bromotimol vira a amarillo. La modificacin de la gelatina se
pone de manifiesto por una zona clara alrededor de la colo-
Frmula (por litro) nia 10 minutos despus de haber goteado una solucin
Extracto de Levadura ................................. 2,5 g saturada de Sulfato Amnico.
Gelatina ...................................................... 30,0 g
Lactosa ...................................................... 2,0 g
D(-)-Manita.................................................. 10,0 g Reactivos auxiliares
Peptona de Casena ................................... 10,0 g
Ref. Descripcin Envase
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ..................... 5,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 75,0 g 131167 Azul de Bromotimol 5 g; 25 g
PA-ACS
Agar............................................................ 15,0 g
131140 Amonio Sulfato 500 g; 1 kg; 5 kg;
pH final: 7,0 0,2 PA-ACS-ISO 25 kg; 50 kg
162712 Sodio Azida PS * 100 g; 250 g; 5 kg
281168 Azul de Bromotimol 100 ml; 250 ml
solucin 0,04% RV
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 51: 409-410 (1946)
J. Bact., 63: 147 (1952)
Se emplea para el aislamiento de Enterococos en agua, ya sea por siembra directa o previa filtracin por
membrana y aplicando el procedimiento correspondiente.
Historia Preparacin
Este medio se prepara de acuerdo con la frmula original de Suspender 76,4 g en 1 l de agua destilada; calentar y
Kenner, Clark y Kabler. Est recomendado por la American agitar hasta ebullicin y disolucin total y hervir durante
Public Health Association para el recuento en placas de 1 minuto. Esterilizar cuidadosamente en autoclave a
Enterococos en agua, siendo uno de los mejores para este fin. 121C durante 10 minutos. Dejar enfriar hasta 50C y
aadir 1 ml de 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio cloruro al 1%
Fundamento por cada 100 ml de medio.
La maltosa y la lactosa son los hidratos de carbono fer-
mentables, que con la peptona y el extracto de levadura Modo de empleo
constituyen el conjunto nutriente del medio. El Sodio Azida Se recomienda la tcnica de filtracin por membrana o el de
es el agente selectivo. La adicin del 2,3,5-Trifenil-2H- numeracin en placa.
Tetrazolio Cloruro da lugar a que los Enterococos, capaces Incubar entre 34 y 37C durante 48 horas.
de reducirlo, presenten colonias de un color rojo oscuro. Proceder al recuento de las colonias de color rojo oscuro.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas. Placas preparadas aadiendo 1 ml de TTC 1% por cada 100 ml de medio.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Peligrosidad
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Enterococos en aguas potables, aguas residuales y pro-
ductos alimenticios.
Reactivos auxiliares
Ref. Descripcin Envase
122329 Glicerina 87% PA 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Inhibido
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 19433 Satisfactorio
Bibliografa
Am. J. Pub. Health, 33: 550-556 (1943)
Peligrosidad
Se emplea para el recuento de aerobios en placa en aguas potables y de drenaje. Tambin se emplea en el
recuento de bacterias en leches y derivados.
Historia Preparacin
Se trata de una variante del agar con leche desnatada, glu- Suspender 24 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien,
cosa y triptona de Bowers y Hucker. Despus de mltiples calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
investigaciones se ha demostrado que es uno de los mejo- Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar
res medios para el recuento de aerobios totales en placa en enfriar a 45C y verter en cpsulas de Petri estriles.
aguas potables, siendo recomendado por la APHA. Los
Standard Methods for the Examination of Dairy Products Modo de empleo
recomiendan este medio para bacterias termoflicas. Habitualmente se utiliza la tcnica de incorporacin en
gelosa.
Fundamento Incubar entre 31 y 33C de 24 a 48 horas.
Este medio presenta una combinacin de nutrientes que se
acomoda ptimamente a los fines apetecidos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Enterococcus faecalis ATCC 11700 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bueno (formacin de pigmento)
Bacillus cereus ATCC 11778 Bueno
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 15 th ed. APHA. (1985)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Sinnimos Preparacin
Levadura Glucosa, Agar Suspender 35 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
hasta ebullicin y hervir hasta disolucin total. No sobreca-
Historia lentar. Esterilizar a 118C durante 15 minutos.
Este medio fue descrito por Windle Taylor para el recuento
de microorganismos en placa. En el Reino Unido es el ms Modo de empleo
empleado para el recuento de bacterias heterotrficas en Sembrar la placa segn los fines a conseguir.
el agua. Habitualmente se hacen siembras en incorporacin en
gelosa y se incuba a 37C durante 24 horas o 20-22C
Fundamento durante 3 das.
Los nutrientes de este medio permiten el crecimiento de
una gran variedad de microorganismos (bacterias, hongos y
levaduras). Para hacer recuentos de hongos y levaduras Reactivos auxiliares
debe suplementarse con antibiticos por ejemplo
Ref. Descripcin Envase
Cloranfenicol a razn de 0,05 g por litro de medio.
143481 Cloranfenicol (RFE, BP, Ph.Eur.) 25 g; 100 g; 500 g
Frmula (por litro) PRS-CODEX
Extracto de Levadura ................................. 5,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g
Agar............................................................ 20,0 g
pH final: 6,5 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 6,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Penicillium spp Satisfactorio
Bibliografa
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 1002 (1993)
Windle Taylor E. The examination of waters and waters Supplies. 7th Ed. Churchill Ltd. London 394-398 (1958)
Se emplea para el aislamiento y recuento de mohos y levaduras. Tambin se puede emplear para pruebas
de esterilidad en relacin a la presencia de estos microorganismos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: blanco a beige claro. pH (Agar): 4,6 0,2 pH (Caldo): 4,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de
25-30C y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Saccharomyces uvarum ATCC 9080 Satisfactorio
Bibliografa
Thom and Church. The Aspergilli. (1926)
Se emplea para el cultivo de Gonococos y aislamiento de Neisserias patgenas. Como tal base debe ir
acompaada de uno o varios suplementos segn el fin que se persiga.
Historia Preparacin
Johnston desarroll un Agar Chocolate que debidamente Suspender 7,2 g de Base de Agar GC en 100 ml de agua
suplementado produca un crecimiento acelerado en 24 destilada para obtener una base de doble concentracin.
horas de la Neisseria gonorrhoeae. Ms tarde Carpenter y Calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
Morton introdujeron modificaciones a la formulacin original Preparar 100 ml de disolucin de hemoglobina al 2%, agi-
de Johnston encontrando resultados ptimos para el culti- tar hasta obtener una suspensin uniforme. Esterilizar las
vo de este microorganismo. El medio permite una amplia dos suspensiones separadamente a 121C durante 15
variedad de aplicaciones en funcin de los suplementos minutos. Dejar enfriar la base hasta 50C y aadir asptica-
que se le aadan. mente los 100 ml de solucin de hemoglobina. Distribuir en
placas de Petri estriles.
Fundamento
La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del Modo de empleo
medio. Los dos fosfatos tamponan el pH y el Sodio Cloruro Sembrar un inculo abundante en la superficie del medio.
mantiene el nivel salino adecuado para el buen crecimiento Incubar entre 35 y 37C de 24 a 48 horas.
de los grmenes. El Almidn de Maz ejerce una accin
neutralizante ante la posible presencia de txicos produci-
dos en el metabolismo bacteriano. La adicin de los suple- Reactivos auxiliares
mentos como la sangre de caballo lisada o hemoglobina
Ref. Descripcin Envase
soluble completa la funcionalidad del medio.
402876 Hemoglobina CULTIMED 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Pueden adicionarse antibiticos para evitar el desarrollo de
flora acompaante.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente.
Color: blanquecino. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Haemophilus influenzae ATCC 19418 Satisfactorio
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografa
J. Venereal Disease Inform., 26: 239. (1945)
Fundamento Preparacin
Antes de emplear el agar como agente gelificante en la ela- Suspender 128 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien y
boracin de los medios de cultivo se empleaba la gelatina. calentar ligeramente (50C) hasta disolucin total. Distribuir
No obstante, presentaba inconvenientes tales como la pre- en tubos de ensayo y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
sencia de determinados microorganismos que eran capaces
de utilizar la gelatina, el medio se licuaba debido a la pro- Modo de empleo
duccin de gelatinasa. Actualmente, la capacidad de degra- Sembrar la muestra por picadura. Incubar el medio con el
dar la gelatina por parte de algunos microorganismos se uti- microorganismo a estudio a 20-22C, o bien a la tempera-
liza como carcter en la determinacin e identificacin oficial. tura ptima para el microorganismo. Si la incubacin se rea-
liza a temperatura superior a los 20-22C (la gelatina ser
Frmula (por litro) lquida) antes de proceder a la lectura los cultivos deben
Gelatina ......................................................120,0 g enfriarse en la nevera para no dar falsos positivos.
Peptona de Gelatina ................................... 5,0 g Por regla general se aconsejan incubaciones mximas de
Extracto de Carne de Res .......................... 3,0 g 14 das con lecturas cada 3, pero debe tenerse en cuenta
pH final: 6,8 0,2 que ciertos organismos pueden tardar hasta varios meses
en licuar la gelatina.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados de 1-7 das. Para la lectura de la prueba de la gelatinasa se enfran hasta 20C.
Historia Preparacin
Giolitti y Cantoni desarrollaron y pusieron a punto el medio Suspender 54,2 g en 1 l de agua destilada; calentar suave-
con el fin de enriquecer pequeas cantidades de mente y agitar hasta disolucin total. Distribuir en tubos de
Staphylococcus aureus en muestras de alimentos: Incluso ensayo con 19 ml de caldo y esterilizar a 121C durante
est recomendado para leches en polvo y alimentos infan- 15 minutos. Aadir a cada tubo 0,3 ml de Potasio Telurito al
tiles en los que est establecido que 1 g de producto debe 3,5% (0,03 ml cuando se analice carne o productos crni-
dar ausencia de este microorganismo despus del cultivo. cos) antes de usarlo. El medio no se puede conservar com-
pletado; si no se utiliza de inmediato conservar en nevera
Fundamento sin el Potasio Telurito no ms de 10-15 das.
El Staphylococcus aureus ve favorecido su crecimiento por
la presencia de la Manita, el Sodio Piruvato y la Glicina. A su Modo de empleo
vez por la presencia del Litio Cloruro se inhibe el creci- Sembrar el material en estudio (habitualmente 1 g para lc-
miento de los grmenes Gram-negativos y por la del teos y 0,1 g en crnicos) y sellar los tubos con aceite de
Potasio Telurito y Glicina la de los Gram-positivos a excep- vaselina estril.
cin de S. aureus y alguna especie de Micrococcus. Los Incubar anaerbicamente a 37C durante 48 horas. Si
dos extractos y la triptona aportan los elementos nutritivos no se produce ennegrecimiento del medio, el ensayo se
y el Sodio Cloruro la salinidad adecuada. considera negativo; en caso contrario, ser necesaria la
confirmacin. Mediante resiembra en Baird-Parker,
Frmula (por litro) Vogel-Johnson o cualquier otro medio selectivo de
Extracto de Carne ...................................... 5,0 g Estafilococos. El ennegrecimiento o precipitado negro
Extracto de Levadura ................................. 5,0 g se deben a la reduccin del telurito a teluro metlico.
Glicina ........................................................ 1,2 g
Litio Cloruro ................................................ 5,0 g
D(-)-Manita.................................................. 20,0 g Reactivos auxiliares
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Ref. Descripcin Envase
Sodio Piruvato ............................................ 3,0 g
Triptona ...................................................... 10,0 g 414724 Potasio Telurito sol. 3,5% CULTIMED 50 ml; 100 ml
141003 Aceite de Vaselina (RFE, USP, 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
pH final: 6,9 0,2 BP, Ph. Eur) PRS-CODEX
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 40-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Micrococcus luteus ATCC 10240 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Satisfactorio (ennegrecimiento)
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio (ennegrecimiento)
Bibliografa
J. Appl. Bact., 29: 395-398 (1966)
Meat and Meat Products-Detection and Enumeration of Staphylococcus aureus. ISO 5551. (1977)
Se emplea para recuento de una amplia variedad de microorganismos. Por la adicin de sangre se puede
usar como agar sangre con glucosa.
Historia Preparacin
Este medio se basa en los estudios de Norton que emple Suspender 43 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien,
con xito un agar con sangre desfibrinada y glucosa para el calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto.
aislamiento de microorganismos procedentes del pus, as Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si se desea acidu-
como tambin en el cultivo de Haemophilus, Bordetella y lar el medio, dejar enfriar hasta 45-50C y aadir 7,1 ml de
Neisseria. Acido Tartrico al 10% estril. Homogeneizar y distribuir en
Placas de Petri estriles. Para fabricar placas de Agar san-
Fundamento gre con glucosa aadir 5% de sangre al medio esterilizado
La glucosa constituye una fuente de energa muy importan- y a una temperatura entre 45-50C.
te para una gran variedad de bacterias, consiguindose
unos crecimientos rpidos y abundantes. En el caso de Modo de empleo
anlisis de alimentos congelados es necesario acidular el Incubar a 37C de 18 a 48 horas.
medio con cido tartrico. Es importante tener en cuenta
que un medio acidulado y solidificado ya no se puede vol-
ver a refundir, porque su acidez hidrolizara al propio agar. Reactivos auxiliares
Para realizar un estudio de fermentacin de la glucosa,
Ref. Descripcin Envase
complementar el medio con 0,02 g/l de Prpura de
141066 Acido L(+)-Tartrico (RFE, USP-NF, 500 g; 1 kg; 5 kg;
Bromocresol; el indicador cambiar de color si existe fer-
BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX * 25 kg; 50 kg
mentacin de glucosa. Este estudio tambin se puede rea-
lizar con el Agar Glucosa y Triptona. Sangre *
121546 Prpura de Bromocresol PA * 5 g; 25 g
Frmula (por litro) 413841 Glucosa y Triptona, Agar CULTIMED * 500 g; 5 kg
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g * Producto Opcional
Extracto de Carne ...................................... 3,0 g
Peptona...................................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 6,9 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas. Sin adicionar sangre.
Microorganismos Desarrollo
Bordetella pertussis ATCC 9797 Satisfactorio
Clostridium perfringens ATCC 12919 Aceptable
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Bibliografa
J. Lab. Clin. Med., 17: 585 (1932)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Am. J. Clin. Path., 21: 884 (1951)
Medio para el recuento en placa (Agar) o por la tcnica del NMP (caldo) y aislamiento de Hongos en diver-
sos tipos de muestras, especialmente en leches y productos lcteos.
Modo de empleo
El medio slido suele sembrarse por incorporacin en
gelosa o por profundidad. Ambos medios slido y lquido
suelen incubarse entre 22-25C durante 3-5 das.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: completa.
Color: beige. pH: 6,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 32C
y observados a los 3-7 das.
Microorganismos Desarrollo
Candida albicans ATCC 2091 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Aspergillus sp Satisfactorio
Lactobacillus casei ATCC 9595 Inhibido
Bibliografa
Milk and Milk Products - Enumeration of Yeast and Moulds - Colony Count Technique at 25C - ISO 6611 - (1981)
Se emplea para la identificacin, cultivo y recuento de levaduras y hongos, principalmente en productos lc-
teos y otros productos alimenticios.
Historia Preparacin
Shadwick demostr que este medio, en un estudio compa- Suspender 39 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
rativo con otros, daba muy buenos resultados en el recuen- hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esteri-
to de levaduras y hongos en las mantequillas saladas y sin lizar a 121C durante 15 minutos. Para obtener un pH de 3,5
salar. La APHA lo recomienda para anlisis de productos aadir aproximadamente 12 ml/l de Acido Tartrico al 10%
lcteos y otros alimentos. La propia Farmacopea de los estril. No refundir el medio.
Estados Unidos lo ha recomendado para el control de pro-
ductos farmacuticos. Modo de empleo
Sembrar por incorporacin en gelosa o en superficie
Fundamento por estra.
Por una parte la infusin de patata propicia un desarrollo sin Incubar entre 20 y 25C de 3 a 5 das.
restricciones de los hongos, complementado a su vez por el
contenido de glucosa del medio. Por otra parte su pH lige-
ramente cido (5,6), selecciona el crecimiento de los hongos Reactivos auxiliares
en relacin al de las bacterias. Incluso se puede bajar ms el
Ref. Descripcin Envase
pH con cido lctico o cido tartrico para hacerlo an ms
141034 Acido L(+)-Lctico (RFE, BP, Ph. Eur.) 1 l; 5 l; 25 l; 60 l
selectivo. Se puede llegar hasta un pH de 3,5.
PRS-CODEX *
Frmula (por litro) 141066 Acido L(+)-Tartrico (RFE, USP-NF, 500 g; 1 kg; 5 kg;
D(+)-Glucosa .............................................. 20,0 g BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX * 25 kg; 50 kg
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 5,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de
21-25C y observados a los 5 das.
Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA. (1978)
Compendium of Methods for the microbiological examination of foods. 3rd ed. APHA. (1992)
Se emplea como medio semislido en aplicaciones de carcter general en microbiologa. Tambin como
medio diferencial de aerobios y anaerobios, en estudios sobre la fermentacin de la glucosa y de movilidad.
Historia Preparacin
Este medio se desarroll principalmente en la industria con- Suspender 28,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
servera para determinar las causas de los efectos acidifican- tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
tes que tenan lugar como consecuencia del deterioro de los tubos llenndolos hasta la mitad y esterilizar a 118C
productos alimenticios cuando fermentaba la glucosa. durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta temperatura
ambiente. El medio puede ser usado varias semanas des-
Fundamento pus de su preparacin.
Por la presencia del Azul de Bromotimol, cuando se produ-
ce la fermentacin de la glucosa y el pH del medio baja, el Modo de empleo
indicador cambia de color. Como adems se trata de un El medio, que se distribuye en tubos, se inocula por pun-
medio semislido la formacin de gas se traduce en la apa- cin hasta una profundidad de la mitad de su altura.
ricin de burbujas e incluso de una espuma en la superficie Incubar entre 30 y 37C de 72 horas para mesfilos y
del medio. Tambin se puede determinar la movilidad del 55-60C durante 48 horas para termfilos.
microorganismo. Si el grmen es mvil se difunde por todo
el medio y lo enturbia. En cambio si no es mvil slo se
desarrolla donde se sembr. Puede aadirse Agar-Agar a Reactivos auxiliares
razn de 12 g/l para que sea medio slido, de esta forma
Ref. Descripcin Envase
podr sembrarse la muestra utilizando la tcnica de incor-
402302 Agar Bacteriolgico Tipo Europeo 500 g; 5 kg;
poracin en gelosa. El medio slido es til cuando se desea
CULTIMED * 25 kg; 50 kg
observar la colonia.
* Producto Opcional
Frmula (por litro)
D(+)-Glucosa ............................................ 5,0 g
Peptona de Casena ................................. 20,0 g
Azul de Bromotimol .................................. 0,01 g
Agar.......................................................... 3,5 g
pH final: 7,3 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige verdoso claro. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 9th ed. APHA. (1948)
Se emplea para el cultivo selectivo de Enterobactericeas, especialmente Shigella, en todo tipo de muestras.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Enterococcus faecalis ATCC 11700 Ligero
Bacillus cereus ATCC 11778 Nulo
Bibliografa
Amer. J. Clin. Path., 26: 411-417 (1956)
Publ. Health. Lab., 13: 59-62 (1955)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. AOAC, 57: 992-996 (1974)
Appl. Mic., 21: 32-37 (1971)
Appl. Microbiol., 16: 557-578 (1968)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente (puede tener un ligero precipitado).
Color: beige rosado. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base Gas H2S
Inclinada
Citrobacter freundii ATCC 8090 Bueno Amarilla Amarillo + +
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Amarilla Amarillo +
Proteus vulgaris ATCC 6380 Bueno Roja Amarillo +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Roja Amarillo
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno Roja Amarillo + +
Bibliografa
KLIGLER. Am. J. Publ. Health., 7: 1042-1044 (1917)
Se emplea como medio diferencial para Salmonella y Arizona, basado en la descarboxilacin de la Lisina.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 6,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base H2S
Inclinada
Citrobacter freundii ATCC 8090 Bueno Rojo-prpura Amarillo +
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Rojo-prpura Amarillo
Proteus mirabilis ATCC 25933 Bueno Rojo-profundo Amarillo
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno Rojo-prpura Rojo-prpura +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Rojo-prpura Amarillo
Salmonella arizonae Bueno Rojo-prpura Rojo-prpura +
Bibliografa
App. Microb., 9: 478-480. (1961)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Superficie
Microorganismos Desarrollo Base Gas H2S
Inclinada
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno Amarilla Amarillo +
Proteus vulgaris ATCC 13315 Bueno Amarilla Amarillo + +
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno Roja Amarillo + +
Shigella flexneri ATCC 12022 Bueno Roja Amarillo
Bibliografa
J. Bact., 49: 516 (1945)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Lab. Clin. Med., 44: 301-307 (1954)
USP 24 (2000)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA (1981)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para el recuento y deteccin de microorganismos Coliformes en aguas, leches y productos ali-
menticios. Tambin se emplea en estudios del proceso de fermentacin de la lactosa.
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalina.
Color: tostado claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA (1981)
Se emplea para la identificacin y diferenciacin de bacilos entricos con capacidad de descarboxilar ami-
nocidos, en este caso la L-Lisina.
Historia Preparacin
El inters de este medio y en general de todos aquellos que Disolver 14 g en 1 l de agua destilada. Distribuir en porcio-
contienen aminocidos reside en poder diferenciar aquellos nes de 5 ml en tubos con tapn roscado y esterilizar a
microorganismos que son capaces de descarboxilar deter- 121C durante 15 minutos.
minados aminocidos y los que no. Moeller fue el primero
que puso en prctica un ensayo de diferenciacin basada Modo de empleo
en este principio. Ms tarde se fueron desarrollando medios Sembrar el medio a partir de un cultivo puro de bacteria
diferenciales de uso corriente conteniendo Lisina, Ornitina o entrica extrado de un medio selectivo o de purificacin.
Arginina segn el caso. Incubar a 37C durante 4 das, observando cada da los
posibles cambios de color.
Fundamento La reaccin de la Lisina-descarboxilasa forma parte de un
Cuando se procede al cultivo, todas las Enterobactericeas conjunto de pruebas bioqumicas para identificar las
fermentarn la Glucosa y el pH del medio bajar. A partir Enterobactericeas. El resultado obtenido en este medio se
de aqu, si son capaces de descarboxilar la L-Lisina, vol- puede considerar indicativo de gnero o especie, pero es
ver a subir el pH del medio, por lo que el Prpura de preciso hacer ms pruebas bioqumicas para la identifica-
Bromocresol recupera el color prpura. Los tubos positivos cin final.
tomarn un color prpura o violeta mientras que los tubos
negativos sern amarillos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Lisina
Salmonella typhi ATCC 6539 +
Salmonella paratyphi A CECT 698
Proteus vulgaris ATCC 13315
Salmonella gallinarum NCTC 9240 +
Serratia liquifaciens (+) lenta
Bibliografa
J. Bact., 71: 339 (1956)
Fundamento Preparacin
Por el contenido de hidrolizado enzimtico de casena y de Suspender 25 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
extracto de levadura se aportan los elementos nutritivos del hasta disolucin total. Distribuir y esterilizar a 121C duran-
medio. El sodio cloruro aporta la concentracin salina nece- te 15 minutos.
saria para mantener un nivel osmtico apropiado para el
buen desarrollo de los microorganismos. Como tal base de Modo de empleo
medio permite la adicin de suplementos para aplicaciones Tratar segn los fines previstos. Como caldo de enriqueci-
de carcter singular a criterio de cada usuario. miento se incuba entre 35 y 37C de 18 a 24 horas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Modo de empleo
Sembrar por estra en la superficie de la placa.
Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,1 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para la investigacin de Coliformes en aguas, leches, productos alimenticios y otras muestras de
inters sanitario.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Hyg., 8: 322-334 (1908)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparacin
Se trata de una modificacin del Agar MacConkey espe- Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
cialmente formulada para la aplicacin enunciada. hasta ebullicin y hervir hasta disolucin total. Distribuir y
esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Fundamento
Por la presencia de los colorantes los Estreptococos Modo de empleo
fecales fermentadores de la lactosa dan colonias fuerte- Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
mente rojas, pequeas y rodeadas de un halo plido. A
su vez los grmenes no fermentadores de la lactosa dan
colonias incoloras.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosado. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
MacConkey, J. Hyg., 5: 33 (1905)
J. Clin. Path., 16: 32 (1963)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
World Health Organisation. International Standards for Drinking Water, 2nd. Ed. WHO (1963)
Dept. of Health Social Security. The bacteriological examination of water supplies. 4th Ed. HMSO. London (1969)
Windle Taylor E. The examination of waters and water supplies. 7th Ed. Churchill Ltd., London (1958)
Fundamento Preparacin
Al tratarse de un medio semislido las bacterias con capa- Suspender 22 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
cidad de movimiento se difundirn a partir de la lnea de in- hasta ebullicin. Distribuir en tubos de ensayo hasta tener un
culo dando lugar a un enturbiamiento homogneo debido a fondo de 6 a 7 cm y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
la distribucin aleatoria de los microorganismos. Al contra-
rio las bacterias inmviles permanecern en la misma lnea Modo de empleo
de aplicacin. Si adems los grmenes son capaces de fer- Sembrar a partir de un cultivo puro con el asa de picadura.
mentar el manitol acidularn el medio y se producir un Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
cambio de color al amarillo. Cuando esto no sea as se con-
servar el color rojo inicial. Si a su vez son capaces de redu-
cir el nitrato a nitrito, la presencia de este ltimo se puede Reactivos auxiliares
poner de manifiesto al aparecer un cambio de color en el Ref. Descripcin
medio al aadir los reactivos de Griess-Ilosvay.
171569 Reactivo de Griess-llosvay A RE 100 ml
Frmula (por litro) 171570 Reactivo de Griess-llosvay B RE 100 ml
D(-)-Manita................................................ 7,5 g
Peptona de Casena ................................. 10,0 g
Potasio Nitrato.......................................... 1,0 g
Rojo de Fenol ........................................... 0,04 g
Agar.......................................................... 3,5 g
pH final: 7,6 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosado. pH: 7,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 27C.
Microorganismos Desarrollo
Vibrio fischeri Satisfactorio
Vibrio harveyi Satisfactorio
Bibliografa
J. Marine Research, 4: 42 (1941)
Limnology and Oceanography, 5: 78 (1960)
Se emplea para el recuento microbiano en leches, carnes, productos alimenticios en general, productos far-
macuticos, productos cosmticos y cualquier tipo de muestra.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 13762 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Bibliografa
J. Appl. Bact., 33: 363-370 (1970)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 15 th ed. APHA. (1985)
Se emplea para el cultivo y recuento de Lactobacilos, tanto en productos lcteos como en productos ali-
menticios en general. Si se acidifica a pH=5,5 0,1 permite el recuento de los Lactobacilos propios del yogur.
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C,
en anaerobiosis y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus acidophilus ATCC 9224 Bueno
Lactobacillus casei ATCC 393 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Moderado-bueno
Bibliografa
J. Appl. Bact., 23: 130-135 (1960)
J. Appl. Bact., 22: 329-340 (1959)
Se emplea como medio diferencial para bacterias, principalmente Enterobactericeas, segn la reaccin del
Rojo de Metilo y la de Voges-Proskauer.
Fundamento Preparacin
Clark y Lubs observaron que en un medio apropiado los Suspender 17 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
microorganismos Coliformes eran capaces de dar una hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
reaccin cida importante (bajar el pH del medio al menos tubos de ensayo y esterilizar a 121C durante 15 minutos.
a 4,4) al fermentar la glucosa, mientras que los aergenos
slo producan una ligera acidificacin del medio. Para Modo de empleo
reconocer este fenmeno emplearon Rojo de Metilo como Sembrar 2 tubos para cada muestra.
indicador. El Rojo de Metilo presenta color amarillo por Incubar entre 30 y 37C de 24 horas a 4 das. Aadir a uno
encima de un pH de 5,1 y slo presenta color rojo cuando de los tubos 0,3 ml del Reactivo A y 0,1 ml del Reactivo B
el pH desciende hasta 4,4. de Voges Proskauer por cada ml de cultivo. Si aparece
Voges y Proskauer observaron que tambin en un medio coloracin, la prueba es positiva. Coger el otro tubo de cul-
apropiado determinados grmenes eran capaces de dar tivo y aadir 0,1-0,2 ml del Reactivo Rojo de Metilo. Si se
una reaccin colorimtrica en base a la produccin de observa la aparicin de coloracin roja la prueba es posi-
2,3-Butanodiol obtenido a partir de la fermentacin de la tiva. Si los resultados son dudosos repetir el ensayo incu-
glucosa. La mezcla de peptonas constituye el componente bando 5 das a 30C.
nutritivo del medio y el tri-Potasio Fosfato acta como ele-
mento regulador del pH.
Para ms informacin consultar pgina IV - 8 y pgina IV - 9 Reactivos auxiliares
de este manual. Ref. Descripcin Envase
Frmula (por litro) 254833 Reactivo A de Voges Proskauer DC 100 ml
D(+)-Glucosa .............................................. 5,0 g 254832 Reactivo B de Voges Proskauer DC 100 ml
Peptona...................................................... 7,0 g 251618 Rojo de Metilo solucin 0,1% DC 100 ml
tri-Potasio Fosfato ...................................... 5,0 g
pH final: 6,9 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas.
Microorganismos Desarrollo MR VP
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Bueno (amarillo) + (rojo)
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno + (rojo) (sin cambio)
Klebsiella pneumoniae ATCC 23357 Bueno + (rojo) (sin cambio)
Bibliografa
J. Bact., 20: 121 (1930)
J. Path. Bact., 34: 401 (1931)
Meat and Meat Products Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Se emplea para ensayos de sensibilidad de los microorganismos frente a antibiticos y sulfamidas. Tambin
en aislamiento primario de Gonococos y Meningococos.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 33186 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Satisfactorio
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Listeria monocytogenes ATCC 19113 Satisfactorio
Bibliografa
Amer. J. Clin. Pathol., 45: 493-496 (1966)
J. Clin. Microbiol., 22: 369-374 (1985)
Standardization of Methods for Conducting Microbic Sensitivity Test. WHO. (1961)
Historia Preparacin
Se trata de una modificacin del medio original de Suspender 49 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Nickerson para el estudio de varias cepas de Candida. tar hasta ebullicin y disolucin total. No sobrecalentar.
NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Al distribuir girar sua-
Fundamento vemente para homogeneizar el precipitado.
El Extracto de Levadura, la Glicina y la Glucosa constituyen
los elementos nutritivos y energticos necesarios para el Modo de empleo
crecimiento de las variedades de Candida. El Sulfito Sembrar la muestra en superficie e incubar 2-3 das a 22C
Bismuto, que inhibe el crecimiento de la flora secundaria, es aproximadamente.
reducido a sulfuro por la accin del grmen, dando lugar a Las colonias lisas de color pardo hasta negro son general-
colonias pardas, que en algunos casos determinan que, mente levaduras.
alrededor de la colonia, el medio tambin presente el mismo Para confirmar la presencia de C. albicans deben realizarse
color. Puede mejorarse la selectividad del medio aadiendo otros ensayos.
Neomicina a razn de 2 mg/l.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Infect. Dis., 93: 43-56 (1953)
Medio recomendado para el cultivo de gran variedad de bacterias y para el recuento de organismos en aguas,
heces y otros materiales.
Microorganismos Desarrollo
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Satisfactorio
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Salmonella typhi ATCC 19430 Bueno
Proteus vulgaris ATCC 13315 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 6301 Bueno
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA. (1980)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 667 (1993)
Medio para la diferenciacin de bacilos Gram-negativos, basado en la determinacin del metabolismo oxi-
dativo y/o fermentativo de los carbohidratos.
Sinnimo Preparacin
Hugh Leifson, Medio Suspender 9,8 g en 1 l de agua destilada y dejar humectar
durante 5 minutos. Calentar y agitar hasta disolucin total.
Historia Esterilizar a 118C durante 10 minutos. Aspticamente
Este medio se basa en la frmula de Hugh y Leifson para aadir el hidrato de carbono a una concentracin final del
diferenciar y clasificar microorganismos Gram-negativos 1%, esterilizado por filtracin. Distribuir en tubos estriles y
capaces de metabolizar o no Glucosa, Lactosa, Sacarosa u aadir el Aceite de Vaselina a la mitad de ellos.
otro azcar, con o sin oxidacin, ya sea en ambiente de
aerobiosis o anaerobiosis. Se trata de una base de medio a Modo de empleo
la que habr que aadir el azcar que se desea estudiar. Sembrar un tubo (O) y otro (F) por picadura a partir de un
cultivo puro de la cepa que se desea estudiar.
Fundamento Incubar entre 35 y 37C de 18 a 48 horas. Los microor-
La peptona de casena y el azcar aadido constituyen la ganismos fermentadores dan reaccin en los dos tubos.
base nutritiva y energtica del medio. El Azul de Bromotimol Los oxidativos slo en el tubo sin vaselina. La degradacin
permite identificar las variaciones del pH. El di-Potasio oxidativa (color amarillo) slo se observa en la parte ms
Hidrgeno Fosfato acta como regulador del pH y el Sodio cercana a la superficie del tubo mientras que en la fermen-
Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen creci- tativa, se observa el color amarillo, en toda la columna del
miento de los grmenes. Los ensayos se hacen por dupli- medio. Los inactivos no provocan cambio en ningn tubo.
cado en dos tubos, uno cubierto con aceite de vaselina (F) Tambin puede observarse si la cepa en estudio es inm-
y otro sin (O). Adems del cambio de color del indicador (de vil (crecimiento slo en el canal de picadura) o mvil, (tur-
verde a amarillo) es necesario observar la produccin de bidez en toda la columna con medio).
gas y el tipo de crecimiento obtenido.
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Metabolismo de Carbohidratos
CON CON CON
Microorganismos
GLUCOSA LACTOSA SACAROSA
O F O F O F
Especie ni oxidativa
Alcaligenes faecalis ATCC 8750 K K K K K K
ni fermentativa
Especie fermentativa
Escherichia coli ATCC 25922 AG AG AG AG K K
aergena
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 A K K K K K Oxidativa
Salmonella enteritidis ATCC 13076 AG AG K K K K Especie fermentativa
Especie fermentativa
Shigella flexneri ATCC 12022 A A K K K K anaergena
Bibliografa
J. Bact., 66: 24-26 (1953)
J. Clin. Microbiol., 25: 1730-1734 (1987)
Historia Preparacin
La formulacin de este medio corresponde a la formulacin Disolver 30 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-
dada por Mossel y colaboradores en 1970 para el recuen- lucin y esterilizar a 118C durante 15 minutos. NO
to de hongos y levaduras. SOBRECALENTAR. Dejar enfriar el agar hasta 45-60C y
aadir 1 ml de Oxitetraciclina al 10% 0,5 ml de
Fundamento Gentamicina al 10 %, ambas en solucin acuosa y esteri-
La Glucosa y el Extracto de Levadura son la base nutritiva lizadas por filtracin. Mezclar bien y repartir en placas de
del medio. La adicin de la Oxitetraciclina o de la Petri estriles. No recalentar.
Gentamicina confieren el carcter selectivo al medio. Se
presentan ciertas variaciones en la formulacin de este Modo de empleo
medio, segn las publicaciones consultadas; principalmen- La muestra se diluye y se siembra en superficie. Se incu-
te a nivel de la concentracin de glucosa. ba entre 22-25C durante 5 das. Pueden precisarse
mayores tiempos de incubacin para microorganismos
Frmula (por litro) de crecimiento lento.
Extracto de levadura................................... 5,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 10,0 g
Agar............................................................ 15,0 g Reactivos auxiliares
pH final: 6,5 0,2 Ref. Descripcin Envase
374948 Oxitetraciclina Clorhidrato PB 5 g; 25 g
Gentamicina (Sulfato)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 6,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Inhibido
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Aspergillus niger Satisfactorio
Bibliografa
J. Appl. Bact., 33: 454-457 (1970)
Lab. Pact., 11: 109-112 (1962)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.
Color: beige. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas, despus de haber aadido 10 ml de glicerina.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografa
J. Clin. Path., 18: 752-756 (1965)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparacin
La formulacin del medio es una modificacin de la com- Suspender 37 g en 1 l de agua destilada, aadir 10 ml de
posicin del Medio King B y se basa en las recomendacio- glicerina y mezclar bien. Dejar humectando de 10 a 15
nes de la USP. minutos. Calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante
1 minuto. No sobrecalentar. Esterilizar a 121C durante 15
Fundamento minutos. Si se distribuye en tubos de ensayo dejar solidifi-
Hay Pseudomonas que elaboran fluorescena sin piociani- car en plano inclinado.
na, otras elaboran slo piocianina y otras que elaboran las
dos. Se trata de un medio que potencia la produccin de Modo de empleo
fluorescena e inhibe la de piocianina. Ambos colorantes se Sembrar en superficie para obtener colonias lo ms aisla-
difunden en el medio dando una coloracin amarilla fluores- das posibles.
cente el primero y azul el segundo. Si se obtienen colores Incubar a 37C durante una semana e inspeccionar
intermedios ms o menos verdosos indica que se han pro- cada da.
ducido ambos pigmentos y que por lo tanto la piocianina no
ha quedado completamente inhibida.
Reactivos auxiliares
Frmula (por litro)
Ref. Descripcin Envase
Magnesio Sulfato ........................................ 1,5 g
Peptona...................................................... 20,0 g 131339 Glicerina PA-ACS-ISO 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ..................... 1,5 g
Agar............................................................ 14,0 g
pH final: 7,0 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Lab. Clin. Med., 44: 301-307 (1954)
J. Bact., 23: 135 (1932)
Se emplea como medio selectivo para el aislamiento de bacterias cido-lcticas en la cerveza y en el con-
trol del proceso de fermentacin.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 5,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas, despus de haber aadido 10 ml por litro de Tween 80 y 3 g de Feniletanol.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus fermentum ATCC 9338 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Bibliografa
Procedings of the American Society of Brewing Chemists 9th compress. (1974)
J. Inst. Brewing., 87: 303-321 (1981)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: azul-verdoso. pH: 5,5 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 (conc. 99%) < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 (conc. 1%) > 95%
Bibliografa
J. Clin. Path., 17: 261-266 (1956)
Appl. Microbiol., 7: 63-66 (1959)
Caldo de enriquecimiento para Salmonella, con excepcin S. typhi en alimentos y otros materiales.
Historia Preparacin
La formulacin de este medio corresponde a una modifica- Disolver 26,75 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta
cin del caldo propuesto por Vassiliadis y colaboradores en disolucin y esterilizar en autoclave 115 C durante
1976 basada en una optimizacin de la concentracin de 15 minutos.
Cloruro de Magnesio. Es un buen caldo de enriquecimiento
para Salmonella a excepcin de las muestras en que se Modo de empleo
sospeche la existencia de S. typhi. La siembra se hace con material procedente directamente
de la muestra o de un pre-enriquecimiento en Agua de
Fundamento Peptona Tamponada (cdigo 413795). Habitualmente se
El Verde de Malaquita y el Cloruro de Magnesio inhiben el siembra 0,1 ml de muestra en 10 ml de Caldo. Se incuba
crecimiento de la flora intestinal normal. En este medio res- 24 horas a 42C 1C y se resiembra en medios selectivos.
pecto al Caldo Rappaport (CULTIMED 413798) se han
reducido las concentraciones de los mencionados inhibido-
res, consiguiendo un mejor crecimiento de Salmonella a Reactivos auxiliares
una temperatura de 42C. La peptona de Soja es el aporte
Ref. Descripcin Envase
nutritivo y los fosfatos mantienen el pH del medio.
413795 Agua de Peptona Tamponada 500 g; 5 kg
Frmula (por litro) CULTIMED *
Peptona de soja ..................................... 4,5 g * Producto Opcional
Potasio di-Hidrgeno Fosfato ................. 1,26 g
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ................. 0,18 g
Magnesio Cloruro (anhidro) ..................... 13,58 g
Sodio Cloruro ......................................... 7,20 g
Verde de Malaquita ................................. 0,036 g
pH final: 5,2 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: azul verdoso. pH: 5,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli (conc. 99%) ATCC 25922 < 5%
Salmonella typhimurium (conc. 1%) ATCC 14028 > 95%
Bibliografa
J. Appl. Bact., 54: 69-76 (1983)
J. Appl. Bact., 59: 143-145 (1985)
Appl. Environm. Microbiol., 4: 615-618 (1981)
Se emplea para el recuento bacteriano en leches, leches desnatadas, helados y derivados de la leche
en general.
Fundamento Preparacin
La leche desnatada en polvo, la peptona de casena y el Suspender 24,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
extracto de levadura constituyen los nutrientes del medio, tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
mientras que la glucosa aporta la fuente energtica para el esterilizar a 121C durante 15 minutos.
buen desarrollo de la mayor parte de las bacterias. Este
medio presenta un alto valor nutritivo por lo que cubre un Modo de empleo
espectro ms amplio de grmenes, pudindose obtener Incubar entre 30 y 37C durante 72 horas. Otras condicio-
mayor nmero de colonias. nes de incubacin pueden ser aplicables segn los grme-
nes en estudio.
Frmula (por litro)
Leche Desnatada en polvo ......................... 1,0 g
D(+)-Glucosa .............................................. 1,0 g
Extracto de Levadura ................................. 2,5 g
Peptona de Casena ................................... 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,0 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 13762 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio
Bibliografa
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA. (1976)
Historia Preparacin
Este medio fue formulado por Barnes y Ingram para el cre- Disolver 50 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
cimiento de Clostridios a partir de inculos muy pequeos. hasta disolucin total. Esterilizar a 121C durante 15 minu-
El medio no contiene inhibidores y emplea cistena como tos. Dejar enfriar hasta 45-50C y aadir 0,02 g/l de
agente reductor. Polimixina B en disolucin estril.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Clostridium bifermentans ATCC 19299 Bueno
Clostridium difficile Bueno
Clostridium perfringens ATCC 13124 Bueno
Clostridium perfringens ATCC 10543 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Bacillus cereus ATCC 11778 Bueno
Bibliografa
J. Appl. Bact., 19: 177-178 (1956)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 765 (1993)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparacin
El medio se basa en la frmula original de Rogosa, Mitchell Suspender 75 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
y Wiseman, quienes elaboraron un medio ms selectivo, hasta ebullicin y disolucin total. Aadir 1,32 ml de Acido
para el recuento de Lactobacilos, que los hasta entonces Actico al 96% y mezclar bien. Calentar hasta 90-100C
empleados a base de tomate. En este medio se inhiba el durante 2 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
crecimiento de Estreptococos, Proteus y Mohos. Distribuir aspticamente.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 5,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Lactobacillus casei ATCC 9595 Satisfactorio
Lactobacillus fermentun ATCC 9338 Satisfactorio
Lactobacillus plantarum ATCC 8014 Satisfactorio
Lactobacillus leichmannii ATCC 4797 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Bibliografa
J. Bact., 62: 132-133 (1951)
Lab. Practice, 9: 223-227 (1960)
Medio de cultivo selectivo utilizado en el recuento y aislamiento de hongos y levaduras. Recomendado prin-
cipalmente en muestras procedentes de alimentos y medio ambiente.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 778 (1993)
Historia Preparacin
La formulacin de este medio se debe a Rothe y ha sido Disolver 34,7 g en 1 l de agua destilada para un caldo nor-
recomendado por otros investigadores para el recuento de mal; para uno de doble concentracin disolver 69,4 g.
Enterococos en muestras de inters sanitario siguiendo el Distribuir y esterilizar a 118C durante 15 minutos.
mtodo del nmero ms probable (NMP). Este medio
corresponde a las recomendaciones de APHA para anlisis Modo de empleo
de aguas. Para muestras de volumen superior a 1 ml se utiliza Caldo
doble concentrado.
Fundamento Incubar a 37C durante 24-48 horas.
Por la presencia de Polipeptona y Glucosa se aportan los El crecimiento de microorganismos en el medio se aprecia
elementos nutritivos y energticos del medio. El Sodio por la turbidez que aparece. Para confirmar el indicio de
Azida inhibe el crecimiento de los microorganismos Gram- Enterococos resembrar en Caldo EVA (Cultimed 413743) si
negativos y no afecta el crecimiento de los Enterococos. no hay crecimiento desechar la presencia de Enterococos.
El Sodio Cloruro mantiene el nivel salino necesario para el
buen crecimiento de estos grmenes. Los Enterococos
(E. faecalis, S. durans, S. bovis y S. equinus) son indica- Reactivos auxiliares
dores de contaminacin fecal aun cuando no hay
Ref. Descripcin Envase
Coliformes en la muestra (los coliformes menos resisten-
413743 EVA (Azida y Violeta de Etilo), 500 g; 5 kg
tes pueden haber desaparecido).
Caldo CULTIMED *
Frmula (por litro) * Producto Opcional
Sodio Azida ................................................ 0,2 g
D(+)-Glucosa .............................................. 7,5 g
Extracto de Carne ...................................... 4,5 g
Peptona...................................................... 15,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 7,5 g
pH final: 7,2 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido/Leve
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido/Leve
Enterococcus faecalis ATCC 19433 Bueno
Bibliografa
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 14th ed. APHA. (1975)
Peligrosidad
Se utilizan para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeracin de estos microorganismos en ali-
mentos, muestras clnicas y otros materiales. Los medios lquidos o caldos estn indicados para pruebas de
esterilidad; los agares Sabouraud con glucosa estn especialmente indicados para dermatofitos, mientras
que los que contienen maltosa se favorece el crecimiento de hongos filamentosos.
Se aconseja utilizar un medio suplementado con antibitico cuando las muestras estn altamente contaminadas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige claro. pH: 5,6 0,2
Desarrollo en Sabouraud,
Microorganismos
Medio Lquido
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 26790 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Parcialmente Inhibido
Lactobacillus casei ATCC 9595 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Satisfactorio
Bibliografa
J. Bact., 62: 613 (1951)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. III (2000)
Se emplea para el aislamiento selectivo y recuento de Estafilococos patgenos en productos lcteos, crni-
cos, marinos y otros productos alimenticios. Tambin se emplea con el mismo fin en productos farmacuti-
cos y cosmticos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige rosceo. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 50: 201-203 (1945)
USP 25 (2002)
Historia
Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han encontrado que la
formulacin de este medio es la mejor para el aislamiento Frmula (por litro)
de Salmonella y Shigella. Una de las principales aplicacio- Extracto de Carne ............................... 5,0 g
nes es el diagnstico de las enfermedades diarreicas debi- Hierro(III) Citrato................................... 1,0 g
das a estos grmenes. La composicin del medio permite Lactosa ............................................... 10,0 g
detectar tambin la produccin de Hidrgeno Sulfuro. Peptona............................................... 5,0 g
Su formulacin corresponde a las recomendaciones de la Sales Biliares ....................................... 8,5 g
APHA para anlisis de alimentos. Rojo Neutro ......................................... 0,025 g
tri-Sodio Citrato ................................... 8,5 g
Fundamento Sodio Tiosulfato................................... 8,5 g
Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citra- Verde Brillante ..................................... 0,330 mg
to se consigue la inhibicin de las bacterias Gram-positivas. Agar .................................................... 13,5 g
Por el mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato se pH final: 7,0 0,2
frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus
que podran acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias Preparacin
que no fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mien- Suspender 60 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
tras que las que la fermentan hacen virar el rojo neutro por hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. NO ESTERILIZAR
la produccin de cido y quedan claramente diferenciadas. EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar hasta 45-50C y distribuir en
Tambin se diferencian los microorganismos productores placas de Petri estriles, empleando 20 ml por placa. Dejar
de Hidrgeno Sulfuro que da un precipitado negro de solidificar el medio.
Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de la colonia.
La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos Modo de empleo
suficientes para estas especies patgenas, aunque algunas Sembrar abundantemente por estra en la superficie del
Shigellas muy exigentes se desarrollen lentamente. medio. Incubar a 37C de 24 a 48 horas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: amarillo muy claro a rosa. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 788 (1993)
Se emplea, aadiendo sangre o sangre cocida, para el cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes,
sobre todo patgenos y para su determinacin. Si no se aade sangre, es adecuado como base para la pre-
paracin de otros medios especiales.
Historia Preparacin
Se trata bsicamente del medio de Huntoon modificado. Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
Ms tarde Norton observ que el pH ligeramente bajo era hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
muy til para el cultivo de Estreptococos y Neumococos. 121C durante 30 minutos (para cantidades de ms de
1 litro). Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y
Fundamento esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de Para preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de
prcticamente todos los microorganismos que pudieran Sangre desfibrinada antes de distribuir en placas.
estar presentes. Si se aade sangre se pueden determinar Para una mejor conservacin de la placa de Agar Sangre
las distintas formas de hemlisis que pudieran tener lugar. y para obtener halos hemolticos ms claros ajustar el pH
Si se calienta se obtiene el Agar Chocolate, tambin muy a 6,8 0,2.
empleado. Por la adicin de distintos antibiticos se obtie- Si se utiliza como medio basal se obtendrn mejores creci-
nen medios con caracteres selectivos. mientos a pH 7,3 0,2.
Frmula (por litro) Modo de empleo
Infusin del Msculo Sembrar las placas en la superficie del medio.
Cardaco (a partir de 375 g) ........................... 10,0 g Incubar a 37C de 24 a 48 horas.
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar............................................................ 15,0 g Reactivos auxiliares
pH final: 7,3 0,2 Ref. Descripcin Envase
Sangre desfibrinada
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Placas preparadas con un 5% de sangre de carnero.
Bibliografa
J. Clin. Microbiol., 25: 2040-2043 (1987)
J. Lab. Clin. Med., 17: 558-565 (1932)
Historia Preparacin
Edwards y otros pusieron de manifiesto que el empleo de Suspender 33,2 g en 1 l de agua destilada; calentar y
Sodio Azida permita el crecimiento de la flora Gram-positi- agitar hasta ebullicin y disolucin total y hervir durante
va, mientras inhiba a los Gram-negativos. Los microorga- 1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si se
nismos del gnero Proteus crecen, pero no se dispersan. desea aadir sangre, dejar enfriar hasta 45C y aadir
aspticamente un 5% de sangre de carnero desfibrinada
Fundamento y estril. Mezclar bien y distribuir.
Es un medio con una buena base nutritiva. Si se aade un
5% de sangre es adecuado para determinar reacciones Modo de empleo
hemolticas tpicas y para favorecer el crecimiento de micro- Sembrar en la superficie del medio.
organismos exigentes. Incubar a 37C de 36 a 48 horas.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: tostado. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24-48 horas y despus de aadir un 5% de sangre desfibrinada de carnero.
Bibliografa
J. Bact., 42: 653-664 (1941)
J. Infect. Dis., 67: 113-115 (1940)
Peligrosidad
Se emplea para el cultivo de especies bacterianas anaerbicas presentes en el tracto intestinal. Se puede
usar como base de agar aadiendo sangre, cido nalidxico, colistina, canamicina, vancomicina, neomicina
u otros aditivos adaptndolo a una aplicacin concreta.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro. pH: 7,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Bacteroides fragilis ATCC 25285 Satisfactorio
Clostridium butyricum ATCC 9690 Satisfactorio
Clostridium perfringens ATCC 12924 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografa
J. Exp. Med., 122: 59 (1965)
J. Appl. Micro., 22: 655 (1971)
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Parcialmente inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Citrobacter sp Satisfactorio
Proteus vulgaris ATCC 13315 Satisfactorio
Salmonella gallinarum NCTC 9240 Satisfactorio
Arizona sp. Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografa
Am. J. Hyg., 24: 423-432 (1936)
Compendium of Methods for the microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalacin y por ingestin. Peligro de efectos acumulativos.Txico para los
organismos acuticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al mdico
(si es posible, mustrele la etiqueta). Evtese su liberacin al medio ambiente. Recbense
instrucciones especficas de la ficha de datos de seguridad.
Historia Preparacin
Guth fue el primero que emple un caldo en base de Suspender 23 g en 1 l de agua destilada; mezclar bien
Selenito para el enriquecimiento selectivo de Salmonella y calentar ligeramente hasta disolucin total. Distribuir
despus de haber comprobado el efecto txico del Selenito en tubos de ensayo y esterilizar al bao mara durante
frente a la Escherichia coli. Ms tarde Leifson retom los 15 minutos o por filtracin si se prev un largo almace-
trabajos de Guth y modific el medio para optimizar los namiento. No sobrecalentar. NO ESTERILIZAR EN
resultados. La composicin actual corresponde a la des- AUTOCLAVE.
crita en la USP y APHA. Tras un largo almacenamiento del medio deshidratado el
caldo preparado puede ser rojo/rojizo. Ello altera la eficacia
Fundamento del medio.
Por la presencia del Sodio Hidrgeno Selenito se inhibe el
crecimiento de Coliformes y Enterococos, por el contrario Modo de empleo
Salmonella, Proteus y Pseudomonas no son inhibidos. La Los tubos se incuban a 37C de 18 a 24 horas. La apari-
Cistina tiene un efecto positivo en el crecimiento de cin de un precipitado rojo antes de la inoculacin indica un
Salmonella. El efecto inhibidor del Selenito desaparece a sobrecalentamiento y hace que disminuyan las propiedades
partir de las 18-24 horas de incubacin y el crecimiento de selectivas del medio.
la flora acompaante puede dificultar el de Salmonella. La En caso de que la muestra sea lquida se recomienda utili-
mayora de mtodos de anlisis descritos recomiendan la zar el caldo doble concentrado y mezclar ste con la mues-
utilizacin simultnea de otro caldo de enriquecimiento. tra a proporcin de 1:1. Cuando la muestra es slida y
puede suponer la presencia de abundantes residuos se
Frmula (por litro) recomienda inocular el medio a partir de una dilucin de
Sodio Hidrgeno Selenito ......................... 4,0 g 1:10, puesto que la presencia de residuos puede inactivar
L(-)-Cistina ................................................ 0,01 g el efecto selectivo del medio.
Lactosa..................................................... 4,0 g Despus del enriquecimiento sembrar en un medio selectivo.
Mezcla de Peptonas ................................. 5,0 g
tri-Sodio Fosfato ....................................... 10,0 g
pH final: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Ninguno
Salmonella choleraesuis ATCC 12011 Satisfactorio
Salmonella pullorum ATCC 9120 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Bibliografa
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalacin y por ingestin. Peligro de efectos acumulativos. Txico para los
organismos acuticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acdase inmediatamente al mdico
(si es posible, mustrele la etiqueta). Evtese su liberacin al medio ambiente. Recbense
instrucciones especficas de la ficha de datos de seguridad.
Se emplea para el enriquecimiento selectivo de especies de Salmonella a partir de diversos materiales, prin-
cipalmente alimentos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema ligeramente verde. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Crecimiento
Microorganismos Concentracin del inculo
6 horas 24 horas
Escherichia coli ATCC 11775 aprox. 99% < 30% < 5%
Salmonella typhimurium ATCC 14028 aprox. 1% > 70% > 95%
Bibliografa
Meat and Meat Products-Detection of Salmonella (Reference Method). ISO 3565. (1975)
Appl. Microbiol., 3: 217 (1955)
Peligrosidad
R: 20/22-33-51 Nocivo por inhalacin y por ingestin. Peligro de efectos acumulativos. Txico para los
organismos acuticos.
S: 23c-45-61 No respirar los vapores. En caso de accidente o malestar, acdase inmediatamente al mdico
(si es posible, mustrele la etiqueta). Evtese su liberacin al medio ambiente. Recbense
instrucciones especficas de la ficha de datos de seguridad.
Historia Preparacin
La experiencia adquirida en la diferenciacin de Salmonella Suspender 30 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
y Shigella de organismos Coliformes basada en la produc- hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir en
cin de hidrgeno sulfuro y la movilidad o no de estas bac- tubos y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar solidi-
terias dio lugar a la preparacin de este medio. Actualmente ficar en posicin vertical.
corresponde a las recomendaciones en la APHA.
Modo de empleo
Fundamento Sembrar a partir de un cultivo puro por picadura.
La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
medio. La movilidad se manifiesta mediante una turbidez Si el microorganismo es mvil se observa turbidez en todo
que se forma alrededor de la lnea de siembra. El Sodio el medio, mientras que si es inmvil slo hay crecimiento en
Tiosulfato y el Amonio Hierro(III) Sulfato permiten poner de la lnea de siembra. La presencia de Indol da lugar a una
manifiesto la formacin de Hidrgeno de Sulfuro por el pre- coloracin rojo-prpura al aadir el reactivo de Kovacs (ver
cipitado negro que se forma. La produccin del Indol es pgina IV - 8).
fcilmente detectable al aadir unas gotas de reactivo de
Kovacs al cultivo.
Reactivos auxiliares
Frmula (por litro)
Ref. Descripcin Envase
Amonio Hierro(III) Sulfato............................. 0,2 g
Peptona de Carne ...................................... 6,1 g 252908 Reactivo de Kovacs DC 100 ml
Peptona de Casena ................................... 20,0 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 0,2 g
Agar............................................................ 3,5 g
pH final: 7,3 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Lab. Clin. Med., 25: 649 (1940)
J. Bact., 31: 575 (1936)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Se emplea para la identificacin y recuento de Enterococos en aguas y otras muestras biolgicas, tanto por
la tcnica de recuento clsica como por la de filtracin por membrana.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 74: 591-595 (1957)
DOCE n C131. (1995)
ISO 7899 - 2 (1984)
UNE 77 - 076-2 (1991)
Peligrosidad
Se emplea como medio de uso general para el cultivo de todo tipo de microorganismos.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,3 0,2
Microorganismos Desarrollo
Brucella abortus ATCC 4315 Satisfactorio
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Desarrollo con
Microorganismos Desarrollo Hemlisis
5% sangre de carnero
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Bueno Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno Bueno beta
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Bueno Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Bueno Bueno alfa
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno Bueno beta
Bibliografa
USP 25 (2002)
J. Clin. Microbiol., 23: 600-603 (1986)
Ph. Eur. IV (2002)
Historia Preparacin
Se trata de una modificacin del medio de Wilson y Blair y Suspender 40 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
del de Mossel. Es muy cmodo de emplear al haber inhibi- hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y este-
do el crecimiento de la flora secundaria y dado su carcter rilizar a 118C durante 15 minutos.
moderadamente selectivo.
Modo de empleo
Fundamento Generalmente se siembra por incorporacin en gelosa,
La mayor parte de los Clostridios reducen el sulfito a sulfu- cuando se utilizan tubos stos se sellan con aceite de
ro, que se puede poner de manifiesto por el color negro vaselina estril.
producido con los iones de hierro. El Sulfato de Polimixina Incubar entre 35 y 37C durante 24 horas. El Clostridium
y la Sulfadiazina inhiben el crecimiento de la flora acom- perfringens forma colonias negras al igual que otras espe-
paante y la peptona de casena y el extracto de levadura cies como C. botulinum y C. sporogenes. Cuando se incu-
representan el aporte de nutrientes. ba a 46C, se favorece el crecimiento de C. perfringens. Sin
embargo, deben realizarse pruebas complementarias para
Frmula (por litro) la identificacin.
Sodio Sulfito ............................................. 0,5 g
Sulfato de Polimixina B ............................. 0,01 g
Sulfadiazina .............................................. 0,12 g Reactivos auxiliares
Peptona de Casena ................................. 15,0 g
Ref. Descripcin Envase
Extracto de Levadura................................ 10,0 g
Hierro(III) Citrato ........................................ 0,5 g 141003 Aceite de vaselina (RFE, USP, 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l
BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX *
Agar.......................................................... 13,0 g
* Producto Opcional
pH final: 7,0 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: beige. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Clostridium perfringens ATCC 12919 Satisfactorio
Clostridium sporogenes ATCC 11437 Aceptable
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido-moderado
Bibliografa
Appl. Microbiol., 10: 193-199 (1962)
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella typhi y de otras Salmonellas
en heces, aguas y productos alimenticios muy contaminados.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: con precipitado.
Color: verde claro. pH: 7,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Hyg., 26: 374-391 (1927)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
USP 25 (2002)
J. Appl. Bact., 25: 213-224 (1962)
Se emplea para el cultivo y aislamiento de Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus en productos marinos,
muestras clnicas o de diversos orgenes.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: tostado claro con matiz verde. pH: 8,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Hyg. Camp., 68: 189-196 (1970)
Jap. J. Bact., 18: 387-391 (1963)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Cholera Information. WHO. (1965)
Se emplea como medio de enriquecimiento selectivo para aislar Salmonella en heces, orina, productos far-
macuticos y productos alimenticios.
Historia Preparacin
El origen de este medio hay que buscarlo en los trabajos de Suspender 46 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Mueller para encontrar un caldo que permitiera el creci- tar hasta ebullicin. Distribuir y esterilizar a 121C durante
miento de microorganismos tifoides y paratifoides y que al 15 minutos. Si se va a utilizar el mismo da, aadir aspti-
mismo tiempo inhibiera los Coliformes. Ms tarde Kauffman camente 20 ml de solucin yodo-yodurada por litro de
modific el medio obteniendo un mayor nmero de creci- medio, o proporcionalmente a la cantidad usada.
mientos positivos que con el medio original. La formulacin Eventualmente puede aadirse 10 ml/l de una solucin al
actual es el resultado de sucesivas mejoras y est recono- 0,1% de Verde Brillante, as como Novobiocina a razn
cida por USP. de 0,04 g/l, ambos esterilizados por filtracin.
Al distribuir el Caldo repartir homogneamente el precipita-
Fundamento do existente. No recalentar el medio.
Por la presencia de las sales biliares se inhibe el crecimiento Preparacin de la solucin Yodo-yodurada:
de los microorganismos Gram-positivos. El tetrationato se Yodo ........................................................... 6 g
produce a partir del Tiosulfato, cuando despus de esterili- Potasio yoduro ........................................... 5 g
zar el medio se aade aspticamente la solucin yodo-yodu- H2O destilada.............................................. 20 ml
rada; el tetrationato tiene un efecto inhibidor sobre los
Coliformes y la mayor parte de las bacterias intestinales. Los Mezclar bien y esterilizar por filtracin.
Proteus y las Salmonellas pueden desarrollarse correcta-
Modo de empleo
mente. A su vez el Calcio Carbonato mantiene el pH del
medio al neutralizar el Acido Sulfrico producido por la Sembrar el medio con el inculo e incubar entre 35 y 37C
reduccin del tetrationato, de lo contrario el medio se ira aci- de 18 a 24 horas. Pasado este tiempo sembrar en medios
dificando y se detendra el crecimiento de todos los grme- selectivos.
nes. La mezcla de peptonas constituye el soporte nutritivo.
La USP aconseja la adicin de Verde Brillante que inhibe
principalmente la flora Gram-positiva, sin embargo a veces Reactivos auxiliares
se desaconseja la adicin del Verde porque el medio es muy Ref. Descripcin Envase
inhibidor. Podemos inhibir el desarrollo de Proteus aadien- 131771 Yodo resublimado perlas 100 g; 250 g; 1 kg;
do 0,04 g/l de Novobiocina. PA-ACS 5 kg; 25 kg
131542 Potasio Yoduro PA-ACS-ISO 250 g; 500 g; 1 kg
Frmula (por litro)
5 kg; 25 kg; 50 kg
Calcio Carbonato........................................ 10,0 g
Novobiocina *
Peptona...................................................... 5,0 g
251758 Verde Brillante DC * 25 g; 100 g
Sales Biliares .............................................. 1,0 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 30,0 g * Producto Opcional
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Escaso-nulo
Salmonella choleraesuis ATCC 12011 Satisfactorio
Salmonella typhi ATCC 6539 Satisfactorio
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio
Bibliografa
J. Clin. Path., 12: 568-571 (1959)
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
Para el enriquecimiento selectivo de Salmonella en diversas muestras, especialmente para carnes y sus
derivados.
Historia Preparacin
La formulacin de este medio fue elaborada por Kauffmann, Disolver 82 g en 1 l de agua destilada. Si es necesario,
basndose en el Caldo Tetrationato descrito por Muller y el calentar suavemente y enfriar. NO ESTERILIZAR EN AUTO-
Caldo Tetrationato Bilis Verde Brillante. Esta formulacin CLAVE. Queda un sedimento de Calcio Carbonato.
coincide con las recomendaciones dadas por distintos Distribuir en tubos, repartiendo de forma homognea el pre-
organismos oficiales. cipitado que haya quedado. Antes de usar aadir 20 ml/l de
solucin de yodo y yoduro potsico y 10 ml/l de solucin al
Fundamento 0,1 % de Verde brillante. No recalentar el medio.
El Tetrationato del medio slo se formar a partir del Preparacin de la solucin: 6 g de Yodo, 5 g de Yoduro
Tiosulfato al aadirle la solucin de Yodo. El Tetrationato es Potsico en 20 ml de Agua destilada. Mezclar bien y esteri-
inhibidor del crecimiento de Coliformes y otros organismos lizar por filtracin.
de la flora intestinal habitual. El Calcio Carbonato compen- La base de caldo sin los aditivos se conserva durante bas-
sa la bajada de pH que producira Salmonella y otros orga- tante tiempo a 4C, despus de aadir la solucin de yodo
nismos al reducir el Tetrationato. debe ser utilizado.
A esta base adems de adicionarle la solucin de Yodo es
aconsejable aadirle Verde Brillante que es un buen inhibi- Modo de empleo
dor la flora Gram-positiva. Inocular 1 ml de muestra a 9 ml de caldo ( 10 g de mues-
tra en 100 de caldo).
Frmula (por litro) Se incuba a 37C 42C de 24-48 horas, pasado este
Bilis de Buey............................................... 4,7 g tiempo se resiembra en medios selectivos.
Calcio Carbonato........................................ 25,0 g
Extracto de carne ....................................... 0,9 g
Extracto de levadura................................... 1,8 g Reactivos auxiliares
Peptona de Carne ...................................... 4,5 g
Ref. Descripcin Envase
Sodio Cloruro ............................................. 4,5 g
Sodio Tiosulfato.......................................... 40,7 g 131771 Yodo resublimado perlas 100 g; 250 g; 1 kg;
PA-ACS 5 kg; 25 kg
pH final: 7,6 0,2 131542 Potasio Yoduro PA-ACS-ISO 250 g; 500 g; 1 kg;
5 kg; 25 kg; 50 kg
251758 Verde Brillante DC 25 g; 100 g
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total, salvo precipitado de Calcio Carbonato.
Color: beige. pH: 7,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Meat and Meat Products. Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Comp. Rend. Soc. Biol., 89: 434-437 (1923)
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media
Historia Fundamento
Los grmenes anaerbicos se desarrollan aerbicamente Las Peptonas y/o Extracto de Levadura son los aportes
en presencia de sulfuros. A partir de estas observaciones se nutritivos del medio, mientras que la Glucosa es el aporte
constat que en presencia de compuestos con grupos fun- energtico. El Sodio Tioglicolato y la L-Cistina permiten el
cionales tioalcohlicos se produca un efecto similar. De desarrollo de grmenes anaerobios en condiciones aero-
esta manera se fueron desarrollando una serie de medios bias. La Resazurina indica el estado de oxidacin y el Sodio
de cultivo en base a Sodio Tioglicolato, diferentes entre s y Cloruro aporta la salinidad en el medio.
orientados cada uno de ellos a aplicaciones especficas.
* Producto Opcional
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH (413815 y 413912): 7,1 0,2 pH (413816): 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
USP 25 (2002)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
Ph. Eur. IV (2002)
Se emplea para el cultivo de Estreptococos -hemolticos con fines de tipificacin serolgica. Tambin como
medio general para enriquecimiento de microorganismos patgenos y cultivos con sangre.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige claro. pH: 7,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Neisseria meningitidis ATCC 13090 Satisfactorio
Streptococcus mitis ATCC 9895 Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 Satisfactorio
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Satisfactorio
Bibliografa
App. Microb., 2: 177 (1954)
J. Exp. Med., 81: 573 (1945)
Se emplean para favorecer y conservar la viabilidad de los microorganismos mientras son transportados al
laboratorio.
Historia Fundamento
Stuart y colaboradores fueron los primeros en formular Se trata de un medio no nutritivo, semislido y reductor que
medios que permitieran el transporte rutinario de especme- previene la destruccin de los grmenes y los mantiene en
nes biolgicos. Cada uno de los medios empleados est estado estacionario. Su composicin salina permite conser-
pensado para un determinado abanico de aplicaciones y var la muestra hasta su entrega al laboratorio.
permiten introducir modificaciones en funcin de las carac- En la formulacin del medio de Transporte Stuart, hay Azul
tersticas de la muestra a transportar. Amies, Cary y Blair de Metileno que acta como indicador de la oxidacin del
establecieron la formulacin del medio que lleva su nombre. medio, cuando la mitad del medio contenido en un tubo
presenta color azulado, el medio no est en las condiciones
adecuadas de transporte. Para restablecer la anaerobiosis
debe licuarse, de nuevo el medio.
El medio de transporte Stuart se puede suplementar con
Acido roslico a razn de 10 ml de Acido roslico al 10%
por litro de medio.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: (413734) 7,3 0,2
(413778) 8,4 0,2
(413813) 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Desarrollo
Desarrollo Desarrollo en 413813
Microorganismos
en 413734 en 413778 (Despus de aadir 10 ml/l
de cido roslico al 1%)
Bibliografa
Glasgow Med. J., 27: 131-142 (1946)
Publ. Helth. Rep., 74: 431-438 (1959)
Medio de cultivo para la deteccin y recuento de Clostridium perfringens y otros anaerobios en agua,
alimentos y otros materiales.
Sinnimos Preparacin
Agar Triptosa-Sulfito-Cicloserina, FDA M169. Suspender 42 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar
hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a
Historia 118C durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45-50C.
Por su formulacin este medio corresponde a las reco- Aadir aspticamente 0,4 g de cicloserina en solucin
mendaciones de la International Organization for acuosa esterilizada por filtracin, por litro de medio.
Standardization (ISO), para anlisis de agua y a la FDA
para anlisis de alimentos, entre otras normas. Este Modo de empleo
medio deshidratado es una base que se transfoma en En los anlisis de alimentos, habitualmente, se siembra la
TSC cuando se suplementa con cicloserina o en SFP muestra por la tcnica de doble capa o por inclusin en
cuando se le adiciona Polimixina y Canamicina. gelosa y se incuba a 35C durante 20-24 horas.
En el anlisis de muestras de agua propuesto en la ISO 6461-
Fundamento 2, se filtra la muestra a travs de un filtro de membrana y se
El agar TSC es considerado superior a otros medios de coloca, sobre la superficie del medio boca arriba o boca
cultivo selectivos para el cultivo de Clostridium perfringens abajo sobre una placa de Petri. En el segundo caso, poste-
y otros microorganismos del gnero, que hayan sido riormente, se vierten 18 ml de medio de cultivo licuado,
daados por diferentes factores ambientales. Es un el cual se ha dejado enfriar hasta unos 50C. El cultivo
medio con elevado valor nutritivo, el sulfito y el hierro se incuba en condiciones anaerbicas a 37C durante
hacen que los microrganismos sulfito-reductores presen- 20-24 horas y 4 horas a 44 C.
ten las colonias negras por el precipitado de Hierro
Sulfuro. La cicloserina es un inhibidor de la flora acom-
paante, que da al medio una selectividad superior que el Reactivos auxiliares
que aportan otros antibiticos.
Ref. Descripcin Envase
Frmula (por litro) 375503 D-Cicloserina PB 1 g; 5 g; 25 g
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio. Solubilidad: total.
Color: beige. pH: 7,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn en un medio suplementado con cicloserina, des-
pus de incubacin a temperatura de 37C en anaerobiosis y observados a las 24-48 horas.
Bibliografa
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media (1993)
ISO 6461-2 (1986)
EN26461-2 (1995)
FDA Bacteriological Analytical Manual 8th ed. AOAC (1995)
Historia Preparacin
Este medio a base de Triptona, Sulfito y Neomicina fue ide- Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
ado por Mossel y desarrollado por Marschall y sus colabo- hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. No sobrecalentar.
radores con el fin de conseguir un aislamiento altamente Distribuir y esterilizar a 118C durante 10 minutos.
selectivo de Clostridium perfringens. Se puede aadir un 4% de Sodio Tioglicolato preparado en
una Solucin Tamponada y esterilizada por filtracin. La adi-
Fundamento cin de Tioglicolato mejora las condiciones de anaerobiosis.
El Clostridium perfringens presenta una buena tolerancia a
la Neomicina y a la Polimixina, que inhiben el crecimiento de Modo de empleo
la flora secundaria; la Neomicina inhibe particularmente el Se recomienda incubar en jarra de anaerobiosis a 46C
Clostridium bifermentans. El crecimiento ptimo de C. per- durante 18-24 horas.
fringens a 46C, aumenta an ms el carcter selectivo, ya La siembra suele ser en incorporacin en gelosa. Si se hace
no por el medio en s sino por las condiciones de incuba- en superficie aadir el Sodio Tioglicolato en las condiciones
cin. Como tambin es capaz de producir Hidrgeno anteriormente mencionadas. A pesar de ser un medio muy
Sulfuro tiene lugar la precipitacin del Hierro(II) Sulfuro negro selectivo, deben realizarse pruebas complementarias para
alrededor de las colonias. la identificacin.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: crema. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin en anaerobiosis a
temperatura de 37C y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Appl. Microbiol., 10: 662-669 (1959)
Se emplea para la diferenciacin de bacilos entricos. Est indicado para detectar aquellas bacterias capa-
ces de producir ureasa.
Historia Preparacin
Christensen fue quien orient los primeros trabajos en Disolver 29 g en 100 ml de agua destilada. Esterilizar por fil-
busca de un medio que permitiera la deteccin de bacterias tracin. Disolver 15 g de Agar Bacteriolgico en 900 ml de
capaces de descomponer la Urea. En esencia los trabajos agua destilada. Esterilizar la solucin del agar a 121C
consistieron en ajustar correctamente las proporciones de durante 15 minutos, dejar enfriar hasta 50C y aadir los
elementos nutricionales y de tampn, de tal manera que el 100 ml de medio urea, estril. Mezclar bien y distribuir asp-
medio permitiese el crecimiento de un gran nmero de bac- ticamente en tubos de ensayo estriles. Dejar endurecer el
terias y se observase la degradacin de la Urea por parte no medio en posicin inclinada pero con fondos de unos 2 cm
slo de los fuertes productores de ureasa, sino tambin, de de profundidad. A pH 6,8-7,0 el medio debe tener un color
los ms dbiles (Enterobacter, Klebsiella, Micrococo). amarillo rosado dbil. No refundir el medio.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: naranja-rojo. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 52: 461-466 (1946)
Meat and Meat Products-Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa claro. pH: 6,8 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
J. Bact., 49: 437-444 (1945)
J. Lab. Clin. Med., 28, 1715 - 1720 (1943)
Historia Preparacin
Este medio permite realizar 3 pruebas bioqumicas al mismo Disolver 30 g en 1 l de agua destilada. Aadir 10 ml de
tiempo y que son de inters en la identificacin de especies Etanol 96% y esterilizar por filtracin. Repartir segn nece-
del genero Enterobactericeas. sidades, habitualmente es en fracciones de 1 ml en
pequeos tubos.
Fundamento
El microorganismo con actividad Ureasa alcaliniza el medio; Modo de empleo
este cambio de pH se aprecia por el viraje del indicador Inocular el medio a partir de una suspensin de microorga-
Rojo de Fenol que pasa a rojo-violeta. Esta reaccin, a nismo en cultivo puro. Incubar a 37 C durante 18-24 horas.
veces, es visible a las 3-4 horas de incubacin. Los fosfa- Pasado este tiempo proceder a la lectura de los resultados:
tos se ocupan de mantener el pH del medio y la presencia 1. Si el medio ha adquirido un color rojo es que el micro-
de Triptfano permite detectar la actividad Triptfano- organismo presenta actividad Ureasa.
Desaminasa y/o la produccin de Indol. La actividad 2. Aadir unas gotas de reactivo de Kovacs, si aparece un
Triptfano-Desaminasa (TDA) se revela por la aparicin de anillo rojo el microorganismo ha producido Indol a partir
un color marrn o marrn rojizo al aadir al cultivo una solu- del Triptfano.
cin de Hierro Cloruro; mientras que la produccin de Indol 3. Aadir unas gotas de Hierro cloruro solucin 30% dilui-
se manifiesta por la aparicin de un anillo rojo al aadir unas da a 1/3. Si aparece un color marrn o marrn rojizo es
gotas de Reactivo de Kovacs. que el microorganismo tiene actividad TDA.
E. coli no tiene actividad Ureasa ni TDA y es Indol positiva.
Frmula (por litro)
Proteus vulgaris es positivo a las 3 pruebas.
Urea........................................................ 20,0 g
Potasio di-Hidrgeno Fosfato ................. 1,0 g
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ................. 1,0 g Reactivos auxiliares
Rojo fenol ............................................... 0,025 g
Sodio Cloruro ......................................... 5,0 g Ref. Descripcin Envase
L-Triptfano ............................................ 3,0 g 252908 Reactivo de Kovacs DC 100 ml
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 6,7 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella, salvo la Salmonella typhi, en
heces, carnes y productos alimenticios.
Historia Preparacin
Las primeras formulaciones del medio se deben a Suspender 58 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-
Kristensen y colaboradores, que lo encontraron muy indica- tar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y
do para diferenciar ciertas Salmonellas de otros microorga- esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar enfriar
nismos intestinales Gram-negativos. Posteriormente hasta 45-50C, verter en placas de Petri estriles y dejar
Kauffmann modific la frmula inicial que mejor notable- gelificar durante 2 horas con las cubiertas parcialmente
mente los resultados. La frmula actual corresponde a las abiertas, si fuera necesario. Las placas son de color ana-
recomendaciones de la USP. ranjado-rojizo.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.
Color: rosado. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Appl. Mic., 16: 746
USP 25 (2002)
Historia Preparacin
Este medio se basa en la formulacin original de Zebovitz, Suspender 60 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar
que posteriormente fue modificada por Vogel y Johnson. hasta ebullicin y disolucin total. Esterilizar a 121C duran-
Su formulacin actual corresponde a las recomendaciones te 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45-50C y aadir 20 ml
de la USP. de Potasio Telurito al 1% 5,7 ml de Potasio Telurito al
3,5% estril, por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.
Fundamento Para un medio menos selectivo aadir slo 10 ml de
La presencia del Litio Cloruro, de la Glicina y del Potasio Potasio Telurito al 1%.
Telurito dan a este medio una fuerte accin selectiva donde
la flora secundaria es inhibida casi por completo. Los Modo de empleo
Estafilococos reducen el telurito a teluro metal lo que da Sembrar grandes inculos en la superficie del medio.
colonias negras sobre un fondo rojo si no son fermentado- Incubar a 37C de 24 a 48 horas. Los Estafilococos pat-
res del manitol. Los Estafilococos fermentadores del mani- genos crecen casi siempre durante las primeras 24 horas.
tol, (presuntivamente patgenos), dan colonias negras Las colonias de Staphylococcus aureus sern negras con
rodeadas de un halo amarillo. El cambio de color del medio halo amarillo. Una vez aadido el Potasio Telurito el medio
es debido al viraje del indicador de pH producido por la no debe volver a fundirse, y su conservacin no ser ms
acumulacin de productos cidos, obtenidos en la fermen- de 1 semana a 4C.
tacin del manitol. La selectividad del medio se mantiene
durante las primeras 24 horas, pasado este tiempo pueden
crecer otros microorganismos. Reactivos auxiliares
Frmula (por litro) Ref. Descripcin Envase
Extracto de Levadura ............................. 5,0 g 414724 Potasio Telurito sol. 3,5% CULTIMED 50 ml; 100 ml
Glicina .................................................... 10,0 g
Litio Cloruro ............................................ 5,0 g
D(-)-Manita.............................................. 10,0 g
di-Potasio Hidrgeno Fosfato ................. 5,0 g
Rojo de Fenol ......................................... 0,025 g
Triptona .................................................. 10,0 g
Agar........................................................ 15,0 g
pH final: 7,2 0,2
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: con precipitado.
Color: verde claro. pH: 7,2 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
USP 25 (2002)
J. Bact., 70: 686-690 (1955)
Medio para el cultivo y para las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de las bacterias anaerobias.
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin en anaerobiosis a
temperatura de 37C y observados a las 24-48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Peptostreptococcus ATCC27337 Bueno
Bacteroides melcuinogenicus ATCC15930 Bueno
Bibliografa
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 987 (1993)
Wilkins, T.D. & Chalgren, S. Antimicrob. Agents Chemother. 14: 384-399 (1978)
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 30C
y observados a las 48 horas.
Desarrollo en Desarrollo en
Microorganismos
WL, Agar Nutriente WL, Agar Diferencial
Escherichia coli ATCC 25922 Moderado Bueno
Lactobacillus fermentun ATCC 9338 Moderado Bueno
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Bueno Inhibido
Saccharomyces uvarum ATCC 9080 Bueno Inhibido
Proteus mirabilis ATCC 25933 Moderado Bueno
Bibliografa
Wallerstein Lab. Comm., 13: 357 (1950)
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: rosa. pH: 7,4 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin a temperatura de 37C
y observados a las 24 horas.
Bibliografa
Am. J. Clin. Path., 44: 471-475 (1965)
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)
USP 25 (2002)
Ph. Eur. IV (2002)
FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
ANEXO III
Los siguientes principos, relativos a los mtodos que utilicen parmetros microbiolgicos, se dan ya sea como
referencia, en los casos en que se da un mtodo CEN/ISO, o como gua, en espera de la posible adopcin futu-
ra, conforme al procedimiento establecido en el artculo 12, de nuevos mtodos internacionales CEN/ISO para
dichos parmetros. Los Estados miembros podrn emplear mtodos alternativos, siempre que se cumpla lo dis-
puesto en el apartado 5 del artculo 7.
Filtrado sobre membrana e incubacin anaerobia de la membrana en agar m-CP (nota 1) a 44 1C durante 21 3 horas.
Recuento de las colonias de color amarillo opaco que cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a 30 segundos de expo-
sicin a vapores de hidrxido amnico.
D-cicloserina.............................. 400 mg
B-sulfato de polimixina .............. 25 mg
-D-glucosuro de indoxyl........... 60 mg
Deber disolverse en 8 ml de agua
destilada estril antes de aadirse
Solucin de difosfato
de fenolftalena al 0,5%
esterilizada por filtracin ............ 20 ml
FeCl36H2O al 4,5%
esterilizada por filtracin ............ 2 ml
Bibliografa
DOCE L330/32 Directiva 98/83/ce del Consejo de 3 de noviembre de 1998 (5-12-98)
B.O.E. n 193 (13-08-1983)
B.O.E. n 226 (20-09-1990)
B.O.E. n 114 (13-05-1987)
B.O.E. n 178 (26-07-1991)
ISO 7704 (1988)
Cetrimida, Agar
Cetrimide Agar
Cd.: 423752 Envase: 20 placas 55 mm + filtro Conservacin: 7 meses
Cd.: 443752 Envase: 20 placas 55 mm Conservacin: 7 meses
m-CP, Agar
m-CP Agar
Cd.: 425463 Envase: 10 placas 55 mm + filtro Conservacin: 45 das
Nutritivo, Agar
Nutrient Agar
Cd.: 423792 Envase: 20 placas 55 mm + filtro Conservacin: 7 meses
Cd.: 443792 Envase: 20 placas 55 mm Conservacin: 7 meses
SPS Agar
SPS Agar
Cd.: 424125 Envase: 20 placas 55 mm + filtro Conservacin: 7 meses
Cd.: 444125 Envase: 20 placas 55 mm Conservacin: 7 meses
La Directiva de Higiene de los alimentos 93/43/CEE, establece que las empresas del sector alimentario deben poner
en marcha un Sistema de Autocontrol de sus producciones, basado en el mtodo de Anlisis de Riesgos y Control
de Puntos Crticos (ARICPC), extendiendo esta obligacin no solo a toda la industria de elaboracin o transforma-
cin de la Unin Europea, sino tambin a las empresas de distribucin, restauracin, etc. (DOCE, 1993)
La finalidad del sistema ARICPC es lograr que el control y el esfuerzo se centre en los puntos crticos de control
(PCC), de tal manera que si llegara el caso en el que se identifique un riesgo, y evaluada la posibilidad de su apari-
cin y no se lograra controlar ningn PCC, deber considerarse la posibilidad de modificar el proceso.
Dentro de un sistema de autocontrol de la industria alimentaria, los aspectos relacionados con la limpieza y desinfec-
cin ocupan un lugar importante. La normativa comunitaria obliga a las empresas a verificar la eficacia de los procedi-
mientos de limpieza y desinfeccin mediante controles regulares de la higiene general de las condiciones de produc-
cin, incluso mediante controles microbiolgicos. Dichos controles se referirn a los utensilios, instalaciones y maqui-
naria en todas las fases de la produccin y, si fuese necesario, a los productos.
Los procedimientos de verificacin segn la ICMSF (International Commission for Microbiological Specification for
Foods) y las indicaciones de los inspectores veterinarios de la Comisin Europea son:
1. Inspeccin visual de la limpieza aparente.
2. Controles microbiolgicos mediante anlisis de las muestras procedentes de las instalaciones y utensilios y del
medio ambiente. Al no estar establecidas la periodicidad de los controles ni de los recuentos microbiolgicos
permitidos, se recomienda que cada empresa fije su "estndar de higiene" como conclusin a los muestreos y
anlisis repetidos y vaya aumentando su nivel progresivamente.
3. Controles microbiolgicos en o sobre los productos una vez realizadas todas las operaciones de manipulacin,
ya que el contenido microbiano del alimento es consecuencia parcial de la contaminacin procedente de las
superficies que contactan con el mismo.
4. Muestreo del diagrama de flujo. Se trata de determinar los niveles microbianos en o sobre las muestras de los
alimentos obtenidos en cada una de las fases de transformacin.
El mtodo ms utilizado para verificar el grado de limpieza y desinfeccin de las instalaciones es la toma de mues-
tras con placas de contacto sobre las superficies higienizadas. Es adecuado en las superficies planas tales como
maquinaria, mesas, suelos, paredes, etc.
La diversidad de medios de cultivo y los aditivos que en algunos de ellos se han incluido, permiten seleccionar y
mejorar el control que se va a realizar. La presencia de Cloranfenicol en algunos medios de Hongos y levaduras,
permite el recuento de estos microorganismos sin interferencias bacterianas. El Tween y la Lecitina son agentes
neutralizantes de algunos antimicrobianos y su funcin es inhibir los restos de desinfectantes que puedan haber
quedado sobre las superficies y que podran interferir en el crecimiento microbiano durante el periodo de incu-
bacin de las placas y darnos falsos negativos.
Bibliografa
Ecologa microbiana de los alimentos. ICMSF (International Commission for Microbiological Specification for Foods). Ed. Acriba.
Zaragoza. 141- 149 (1983).
Teixid, A. Importancia de la higiene en el Sector crnico. Eurocarne. (agosto-septiembre).17-20 (1992)
Ingeniera, Autocontrol y Auditora de la Higiene en la Industria Alimentaria. Puig-Durn, J. Ed. Mundi-Prensa. (1999)
Tcnicas para el anlisis microbiolgico de alimentos y bebidas. CENAN. (1982)
Baird-Parker, Agar
Baird-Parker Agar
Cd.: 433744 Envase: 20 placas de contacto Conservacin: 7 meses
Cetrimida, Agar
Cetrimide Agar
Cd.: 433752 Envase: 20 placas de contacto Conservacin: 7 meses
PCA, Agar
Plate Count Agar (PCA)
Cd.: 433799 Envase: 20 placas de contacto Conservacin: 7 meses
TSA-Tween-Lecitina-Agar
TSA-Tween-Lecithin-Agar
Cd.: 435095 Envase: 20 placas de contacto Conservacin: 7 meses
Agua de Peptona
Agua de Peptona con agentes neutralizantes, (Ph. Eur.)
Agua de Peptona Tamponada
Baird-Parker, Agar
Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa (VRBG), Agar
Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Lactosa (VRBL), Agar
Bilis-Verde Brillante 2%, Caldo
Bilis-Verde Brillante 2%, Caldo (2X)
Canamicina Esculina Azida (CeNAN), Agar
Canamicina Esculina Azida, Caldo
Cetrimida, Agar
EC, Medio
EE, Caldo
EMB Levine, Agar
Giolitti-Cantoni, Caldo
Glucosa Cloranfenicol, Caldo
Glucosa Sabouraud, Agar
Glucosa Sabouraud+Cloranfenicol, Agar
Hektoen, Agar Entrico
Hierro de Kligler, Agar
Hierro y Lisina, Agar
Hierro y Triple Azcar, Agar
Lactosado, Caldo
Lauril Triptosa, Caldo
Lauril Triptosa, Caldo (2X)
Legionella, Agar
Letheen, Agar
Letheen, Caldo
MacConkey, Agar
MacConkey, Caldo
m-CP, Agar
MRS, Agar
Nutritivo, Agar
PALCAM, Agar
PALCAM, Caldo
PCA, Agar
Rappaport-Vassiliadis (RVS), Caldo
Rosa de Bengala y Cloranfenicol, Agar
Sal y Manitol, Agar
Salmonella y Shigella, Agar
Selenito y Cistina, Caldo
Slanetz y Bartley, Medio
Soja Triptona (TSA), Agar
Soja Triptona (TSB), Caldo
SPS, Agar
Tergitol 7, Agar (Chapman TTC modificado)
Tioglicolato USP, Medio Lquido
TSA-Tween-Lecitina, Agar
TSN, Agar
XLD, Medio
Agua de Peptona
Peptone Water
Cd.: 463794.0922 Envase: 20 tubos x 9 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 493794.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml
Cd.: 493794.0978 Envase: 6 frascos x 475 ml
Cd.: 493794.0979 Envase: 10 frascos x 225 ml
Baird-Parker, Agar
Baird-Parker Agar
Cd.: 453744.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 3 meses
Cd.: 493744.0922 Envase: 10 frascos x 90 ml Conservacin: 12 meses
Cetrimida, Agar
Cetrimide, Agar
Cd.: 453752.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 3 meses
Cd.: 493752.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
EE, Caldo
EE Broth
Cd.: 463829.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 493829.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
Giolitti-Cantoni, Caldo
Giolitti-Cantoni Broth
Cd.: 463765.0922 Envase: 15 tubos x 19 ml Conservacin: 6 meses
Letheen, Agar
Letheen Agar
Cd.: 495379.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 495379.0980 Envase: 6 frascos x 450 ml Conservacin: 12 meses
Letheen, Caldo
Letheen Broth
Cd.: 465382.0922 Envase: 20 tubos x 9 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 495382.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
MacConkey, Caldo
MacConkey Broth
Cd.: 493780.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
MRS, Agar
MRS Agar
Cd.: 493784.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 493784.0978 Envase: 6 frascos x 475 ml Conservacin: 12 meses
Nutritivo, Agar
Nutrient Agar
Cd.: 453792.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 4 meses
Cd.: 493792.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
PALCAM, Agar
PALCAM Agar
Cd.: 455380.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 4 meses
PALCAM, Caldo
PALCAM Broth
Cd.: 465383.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservacin: 6 meses
SPS, Agar
SPS Agar
Cd.: 454125.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 3 meses
Cd.: 464125.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservacin: 12 meses
Cd.: 494125.0922 Envase: 10 frascos x 100 ml Conservacin: 12 meses
TSN, Agar
TSN Agar
Cd.: 463833.0922 Envase: 20 tubos x 10 ml Conservacin: 12 meses
XLD, Medio
XLD Medium
Cd.: 453826.0922 Envase: 20 placas 90 mm Conservacin: 3 meses
Medio para el cultivo y el aislamiento de las especies de Legionella en muestras clnicas y otras.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio.
Color: negro con matices azules. pH: 6,9 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn despus de incubacin a 37C y observados
entre los 3 y 7 das.
Microorganismos Desarrollo
Legionella pneumophila ATCC33216 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno-moderado
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno-moderado
Candida albicans ATCC10231 Inhibido
Bibliografa
Atlas R.M. & Parks L.C., Handbook of Microbiological Media, 122 (1993)
New England, J. Med; 326: 151 (1992)
New England, J. Med; 302: 365 (1992)
ISO 11731:1998
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio. Volumen (465382): 9 ml
Color: turbio y marronceo. Volumen (495382): 100 ml
pH: 7,0 0,2 Volumen (495379): 100 ml
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn despus de incubacin a 37C y observados a
las 24- 48 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Bueno
Bibliografa
FDA. Bacteriological Analytical Manual. Chapter 23: Microbiological Methods for Cosmetics. 8th Ed. AOAC. (1995)
Atlas R.M. & L.C Parks. Handbook of Microbiological Media. (1993)
Medio de cultivo para el recuento de C. perfringens (incluidas las esporas), en agua destinada al consumo
humano y aguas superficiales.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio.
Color: violeta. pH: 7,6 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de incubacin en anaerobiosis a 37C
durante 24 horas.
Bibliografa
DOCE. Directiva 98/83/CE del consejo, L330: 32-54 (1998)
EPA. ICR Microbial Laboratory Manual. Section XI: 1-15 (1996)
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn despus de incubacin a 37C y observados a
las 48-72 horas
Microorganismos Desarrollo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Listeria monocytogenes ATCC 19118 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio.
Color: rojo. pH: 7,0 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn despus de incubacin a 37C y observados a
las 48 horas.
Bibliografa
Int. J. Food Microbiol., 8, 299-316 (1989)
Atlas R.M. & Parks L.C, Handbook of Microbiological Media , 688 (1993)
FDA Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. AOAC (1995)
VAN NETTEN, P., Liquid and solid selective differential media for the detection and enumeration of L. Int. J. Food Microbiol., 8(4); 299-
316 (1989)
LUND, A.M.: Comparison of Methods for Isolation of Listeria from Raw Milk - J. Food Protect., 54(8); 602-606 (1991)
Medio recomendado para la deteccin y recuento de una amplia gama de microorganismos. La presencia
de Lecitina y Tween permite neutralizar la actividad antibacteriana, facilitando la investigacin de los grme-
nes en productos o superficies que contengan: Aldehdos, derivados fenlicos, o amonio cuaternario.
Control de calidad
Control fsico-qumico
Aspecto: satisfactorio.
Color: beige. pH: 7,3 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patron despus de incubacin a 37C y observados
a las 24 horas.
Microorganismos Desarrollo
Escherichia coli ATCC 25922 Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Bibliografa
USP 24 (2000)
Ph. Eur. III (2000)
Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14 th ed. APHA (1978)
III
Agar-Agar
Agar-Agar
Agente solidificante en medios de cultivo bacteriolgicos y en otras aplicaciones (cultivo de tejido, difusin
inmunolgica, estudios nutricionales, etc.).
El Agar es un poligalactsido que se obtiene a partir de algas rojas marinas. La mayora de microorganismos
son incapaces de degradarlo.
Las concentraciones ms habitualmente utilizadas en los medios de cultivo bacteriolgicos es de 13-20 g/l
para medios slidos y 5-7 g/l para medios semi-slidos. En las distintas aplicaciones, se precisan distintos
grados de pureza. El tratamiento de un Agar y los mtodos utilizados en su purificacin dan, bsicamente,
4 tipos de Agar:
Agar Tcnico
Agar, Technical
Cd.: 401792 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Este Agar es similar al Agar Bacteriolgico Tipo Europeo pero con una menor
fuerza de gel. A una concentracin del 1,5% la fuerza de gel del tipo A es de
600-850 g/cm2, mientras que el tipo E es de 800-1100 g/cm2. Con este Agar
se debe trabajar a mayores concentraciones.
Agar Purificado
Agar, Purified
Cd.: 403904 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Intervalo de fusin del gel al 1,5% .......... 84,5-87,5C Prdida por desecacin a 105C.................... 10 %
Fuerza del gel al 1,5% (Mtodo Nikan) ...800-850 g/cm2 Residuo de calcinacin (en SO4) ..................... 5 %
pH en gel al 1,5%................................... 5,5-7,0
Conservar en lugar fresco y seco
Los extractos son infusiones de carnes, de plantas o de levaduras que producen preparados acuosos
comnmente utilizados como base nutritiva en los medios de cultivo para el crecimiento de diversos orga-
nismos. Estos productos contienen aminocidos, pptidos de bajo peso molecular, carbohidratos, vitaminas
y minerales. El extracto es obtenido al hervir una cantidad de tejido (organismo) y utilizar el lquido o ms
habitualmente el slido obtenido al desecar la infusin.
Lista de los extractos ms comnmente utilizados como ingredientes en diversos medios de cultivo:
Bilis de Buey
Ox Bile
Cd.: 403685 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Extracto de Carne
Meat Extract
Cd.: 403692 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Extracto de Malta
Malt Extract
Cd.: 403690 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Fcula de Patata
Potato Starch
Cd.: 404148 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Sales Biliares n 3
Bile Salts n 3
Cd.: 403896 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Las peptonas y las triptonas son los productos que se obtienen por la degradacin proteoltica de protenas
de diversos orgenes (carne, soja, malta, casena, ...), obtenidas por digestin pptica, trptica, pancretica,
etc. El producto obtenido es rico en aminocidos libres y pptidos de pequeo peso molecular. Es utilizado
como fuente de Nitrgeno por una gran diversidad de organismos. Los diferentes orgenes, dan peptonas
con diferentes aportes nutricionales. Las ms utilizadas son la Peptona de Casena y la Bacteriolgica, sin
embargo, a veces es necesario la mezcla de peptonas de diferentes orgenes para el cultivo de determina-
dos microorganismos.
Peptona Bacteriolgica
Bacteriological Peptone
Cd.: 403695 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Carne
Meat Peptone
Cd.: 403683 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Gelatina
Gelatine Peptone
Cd.: 403686 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Peptona de Soja
Soy Peptone
Cd.: 403684 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Proteosa Peptona
Proteose Peptone
Cd.: 403901 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Proteosa Peptona n 3
Proteose Peptone n 3
Cd.: 403939 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
Triptosa
Tryptose
Cd.: 403903 Envase: 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kg
IV
Lista de Aditivos, Reactivos y Productos Auxiliares
Hemoglobina
Hemoglobine
Cd.: 402876 Envase: 500 g
Preparacin autoclavable de sangre de vacuno utilizable como aditivo en medios de cultivo para aislar micro-
organismos exigentes. Se suele preparar en solucin al 2 %. Se presenta en forma de polvo desecado y se
utiliza como material de enriquecimiento en ciertos medios de cultivo, para aislar grmenes exigentes.
Tween 80
Tween 80
Cd.: 142050 Envase: 1000 ml
Aditivo para medios de cultivo, actuando como nutriente en algunos casos o como emulsionante. Es uno de
los aditivos que aconseja la Farmacopea para la preparacin de muestras poco solubles. Tambin es un adi-
tivo en la preparacin de muestras de origen cosmtico.
Aplicaciones en Inmunologa y bioqumica.
Se utiliza como reactivo para la prueba de la Catalasa. La catalasa es una enzima propia de la mayora de
las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que poseen citocromos, con la excepcin de Estreptococos.
Su funcin es descomponer el Perxido de Hidrgeno (H2O2) desprendiendo oxgeno libre. La catalasa tam-
bin se determina en organismos anaerobios.
Reactivo de Griess-Ilosvay A
Griess-Ilosvays A Reagent
Cd.: 171569 Envase: 100 ml
Reactivo de Griess-Ilosvay B
Griess-Ilosvays B Reagent
Cd.: 171570 Envase: 100 ml
Modo de empleo
Sembrar el microorganismo procedente de un cultivo puro
en un Medio Manitol Movilidad (CULTIMED 413782) o en un
caldo nutritivo al que se le habr aadido 0,2 g/litro de
Potasio Nitrato. Incubar el cultivo a la temperatura ptima
durante 2-4 das. Pasado el tiempo de incubacin, aadir
0,5 ml de solucin A y solucin B mezcladas en iguales
proporciones. Interpretar los resultados como se ha descri-
to anteriormente.
Alcohol amlico, Isoamlico, o Butlico; y el reactivo de 413810 SIM, Medio CULTIMED * 500 g; 5 kg
Ehrlich-Bhme donde el alcohol presente en la solucin es * Producto Opcional
etanol.
Modo de empleo
Al aadir 0,5 ml de reactivo de Kovacs a un cultivo lquido
de un microorganismo productor de Indol, aparece en
menos de 1 minuto un anillo rojo, indicando que la reaccin
es positiva. Si no hay cambio de color es que no existe Indol
en el medio.
Bibliografa
Eine vereinfachte Methode zun Nachweis der Indolbildung durch Backterien; N. Kovacs,A. Immunforsch, 55, 311 (1928)
Las Enterobactericeas son capaces de fermentar la glucosa utilizando diferentes vas. Escherichia y
Salmonella fermentan la glucosa por la va cido-mixta.
Modo de empleo
Aadir 0,1-0,2 ml aproximadamente del reactivo a 5 ml de
cultivo incubado 48 horas en el medio MR-VP u otros
medios equivalentes. Homogeneizar el cultivo y observar la
aparicin de coloracin roja. Si los resultados son dudosos,
debe repetirse el ensayo incubando 5 das a 30C.
Bibliografa
CLARK, W.M. y LUBBS, H.A. "The Differentiation of Bacteria of the Colon-Aerogenes Family by the use of indicators.
J. Infect. Dis., 17: 161-173 (1915)
Bibliografa
BARRITT, M. M., "The intensification of the Voges-Proskauer reaction by the addition of a-naftol" J. Pathl. Bact., 42: 441-453 (1936)
O'MEARA, R. A., "A simple delicated and rapid method of detecting the formation of actylmethyl-carbinol by bacteria fermenting
carbohydrate". J. Pathol. Bact., 34: 401-406 (1931)
Bibliografa
Acta Pathol. Microbiol. Scan. Sect. B84: 245 (1976)
Microbiol. Rev. 55: 335 (1991)
2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro
Aditivo en distintos medios de cultivo para determinar la actividad biolgica. Forma parte de algunos de los
medios aconsejados por la legislacin de aguas para la deteccin de organismos procedentes de contami-
nacin fecal.
Bibliografa
Clark G., "Staining Procedures", 4th Ed., Williams and Wilkins, Baltimore 362 (1981)
E. Surez Peregrin, "Manual Tcnico de Anlisis Clnicos", 9 Ed., Prieto, 344 (1972)
S. Frankel, S. Reitman, A. C. Sonnenwirth, "Gradwohl's clinical laboratory methods and diagnosis", 7th Ed.,
The C. V. Mosby Company 2, 1804 (1970)
Tincin Simple
Las coloraciones simples son aquellas que utilizan un solo colorante y tienen por misin poner en evidencia
la morfologa bacteriana. Adecuada para la observacin y /o recopilacin microbiolgica general.
El procedimiento que se describe es aplicable a dos colorantes distintos y son los utilizados ms habitual-
mente.
Es la coloracin diferencial mas utilizada en microbiologa. Constituye uno de los primeros niveles de iden-
tificacin sistemtica diferenciando dos grandes grupos de bacterias segn la afinidad que presentan al
colorante. Los microorganismos teidos con el primer colorante son los denominados Gram positivos y
se observan de color azul-violceo. Los microorganismos teidos con el colorante de contraste son los
Gram-negativos y se observan de color rojo-rosa. Los mejores resultados se obtienen con cultivos jve-
nes ya que las clulas viejas pierden afinidad por los colorantes. La ruptura fsica de la pared bacteriana
tambin altera la coloracin.
Bibliografa
Bartholomew, J.W. Variables Influencing Results and the Precise Definition of steps in Gram staining as a Means of Standardizing the
Results Obtained. Stain Technol., 37: 139-155 (1962)
Decolorante:
Alcohol de 90% 1000 ml
Acido Clorhdrico 37% 5 ml
Sodio Cloruro 5g
Bibliografa
Manual de Tcnicas en Microbiologa Clnica. Alvarez, M. V., Boquet, E., de Fez, Y. Editado por la Asociacin Espaola
de Farmacuticos Analistas. (1990)
Bibliografa
Manual de Tcnicas en Microbiologa Clnica. Alvarez, M. V., Boquet, E., de Fez, Y. Editado por la Asociacin Espaola de
Farmacuticos Analistas. (1990)
Descripcin D. INTERPRETACIN:
Los ProSpores sirven para controlar los ciclos de esteriliza- Control: La ampolla de control debe presentar turbidez
cin por vapor saturado a 121C. Cada ampolla de y/o cambio de color hacia amarillo. El test no es vlido, si
ProSpore contiene una suspensin de esporas de Bacillus la ampolla de control no presenta cambios.
stearothermophilus (ATCC n 7953) en un medio de cultivo Test: El proceso de esterilizacin no ser correcto si la
que contiene prpura de bromocresol, el cual juega el papel ampolla test presenta turbidez o cambio de color (amari-
de indicador de pH. El crecimiento bacteriano produce llento).
cido que hace virar el indicador prpura de bromocresol a Una ampolla test que conserve su color prpura indicara
amarillo. un ciclo de esterilizacin correcto.
(1) Estas ecuaciones provienen del documento USP 24, pgina 232.
(2) despus del primer tratamiento de calor.
(3) determinado en la fabricacin usando procedimientos
clasificados de Fraccin Negativa.
rentable
sin necesidad de accesorios o aparatos adicionales
econmico
bajo coste por ensayo
Indol-positivo
Escherichia coli
Aminopeptidasa-positivo Aminopeptidasa-negativo
GRAM-negativo GRAM-positivo
Escherichia coli Enterococcus faecalis Oxidasa-negativo
Enterobacter aerogenes
Oxidasa-positivo
Pseudomonas aeruginosa
Procedimiento:
Descripcin N de Cdigo
tests
Control rpido de higiene para grifos de cerveza 20 950 001
Contenido del kit: 20 tubos con medio de control, 40 tubos con medio de deteccin,
20 tubos estriles para toma de muestra, 21 pipetas Pasteur estriles, 1 tabla de
evaluacin para ARICPC
Equipo para toma de muestras para el control de superficies de grifos de cerveza 20 950 002
Contenido del kit: 20 tubos con medio de control, 20 tubos con medio de prueba,
20 tubos con solucin de lavado, 21 bastoncillos de algodn estriles, 21 pipetas
Pasteur estriles, 1 tabla de evaluacin para ARICPC
Accesorios especiales
Mini-incubador "CULTURA" incluyendo 1 termmetro y 1 gradilla para 3 x 6 tubos de 951 001
ensayo; la incubadora tiene capacidad para 3 gradillas
Gradilla para tubos de ensayo para el mini-incubador "CULTURA" con 3 x 6 posiciones 951 002
tamao 18 x 18 mm
Contenido Observaciones
50 varillas reactivas Tomar siempre slo el nmero necesario de varillas reacti-
2 tubos de ensayo pequeos vas. Despus de la extraccin cierre inmediatamente el
envase. No toque con los dedos la zona reactiva.
Utilizacin Para la realizacin de la prueba, lo mejor es un medio com-
Comprobacin rpida del enzima L-alanina-aminopeptida- pleto libre de sustancias inhibidoras, como por ejemplo el
sa en los microorganismos y estimacin del comportamien- agar nutritivo. Para la prueba de la aminopeptidasa
to GRAM de los microorganismos en el diagnstico micro- deberan utilizarse solamente colonias de bacterias sin una
biolgico. coloracin propia.
Para el control se recomienda efectuar siempre una prueba
Composicin comparativa con un grmen positivo a la aminopeptidasa
La zona reactiva contiene como sustancias reactivas (por ejemplo, Escherichia coli) y un grmen negativo a la
L-alanina-4-nitroanilida y sustancias tampn. aminopeptidasa (por ejemplo, Enterococcus faecalis).
Instrucciones de uso Bacterias de control
1. Aadir 0,2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo Aminopeptidasa-positiva: Escherichia coli ATCC 25922
pequeo. Aminopeptidasa-negativa: Enterococcus faecalis DSM 2570
2. Extraer una colonia aislada y bien desarrollada del medio
de cultivo con el asa de inoculacin y suspenderla en el Interferencias
tubo de ensayo pequeo hasta conseguir una turbidez Las colonias bacterianas con una intensa coloracin pro-
evidente. pia o de sustratos nutrientes, que contienen colorantes,
3. Introducir la tira de ensayo en el tubo de forma que la indicadores o sustancias inhibidoras especficos, pueden
zona reactiva quede sumergida totalmente en la suspen- producir resultados incorrectos.
sin de bacterias.
4. Incubar el tubo a +37C entre 10 y 30 minutos. Condiciones de almacenamiento
5. Evaluacin: con los microorganismos aminopeptidasa Proteja las tiras reactivas de la luz solar y de la humedad.
positivos (=GRAM negativos) la suspensin de bacterias Mantenga el envase en lugar fresco y seco a +2C hasta
se vuelve de color amarillo. Con los microorganismos +8C. Controle la fecha de caducidad.
aminopeptidasa negativos (=GRAM positivos) no se pro-
duce coloracin en la suspensin. Eliminacin
Despus de usar, las tiras reactivas deben tratarse
Muestra de identificacin como material contaminado y deben eliminarse segn la
Segn las investigaciones completas realizadas desde buena praxis microbiolgica. Esto puede hacerse
hace tiempo existe una buena correlacin entre la reac- mediante combustin, autoclave o la colocacin en una
cin de la aminopeptidasa y el comportamiento GRAM de solucin desinfectante como mnimo durante 6 horas.
los microorganismos. Segn ello, todos los microorganis-
mos GRAM positivos investigados hasta ahora son nega-
tivos a la aminopeptidasa y todos los microorganismos
GRAM negativos son positivos a la aminopeptidasa.
Constituyen excepciones los siguientes microorganismos
gram negativos, que reaccionan de forma negativa a la
aminopeptidasa: Bacteroides fragilis, Bacteroides vulga-
ris, las especies de Campylobacter, Veillonella parvula.
Utilizacin Interferencias
Para la demostracin rpida de la formacin de indol en el Si las colonias de las bacterias a examinar crecen en
diagnstico microbiolgico. medios de cultivo sin triptfano o peptonas de digestin
trptica, se pueden producir falsos negativos. En este
Composicin caso los microorganismos a examinar deben ser someti-
La zona de ensayo contiene como reactivo 4-dimetila- dos a un cultivo intermedio en un medio que contenga
minocinamaldehdo. triptfano o peptonas de digestin trptica (por ejemplo,
agar nutritivo estndar o medio triptfano)
Instrucciones de uso
1. Coloque una gota de reactivo Indol-1 sobre la zona reac- Condiciones de almacenamiento
tiva amarilla que, de esta manera, se volver incolora. Proteja las tiras reactivas de la luz solar y de la humedad.
2. Tome con el asa de inoculacin una colonia aislada y Mantenga el envase en lugar fresco y seco a +2C hasta
bien desarrollada del medio de cultivo. +8C. Controle la fecha de caducidad.
3. Coloque la colonia en la zona reactiva y extindala con el
asa de inoculacin. Eliminacin
4. Despus de 1 2 minutos se procede a la evaluacin: Despus de usar, las tiras reactivas deben tratarse como
en microorganismos indol-positivos se forma un comple- material contaminado y deben eliminarse segn la buena
jo cromtico azul-verdoso. praxis microbiolgica. Esto puede hacerse mediante
combustin, autoclave o la colocacin en una solucin
Observaciones desinfectante como mnimo durante 6 horas.
Tomar siempre slo el nmero necesario de tiras reactivas.
Despus de la extraccin cierre inmediatamente el envase.
No toque con los dedos la zona reactiva.
Los siguientes cambios en los tubos con medio de deteccin en cuanto a color, turbidez y/o desarrollo de micelios en
comparacin con el tubo que contiene medio de control, pueden ser observados y clasificados como positivos.
Nota: La tabla anterior se refiere a cultivos puros de los microorganismos tpicos. En la realidad hay poblaciones mixtas
de diferentes especies y gneros, por lo que pueden obtenerse otras tonalidades.
Si despus de un mximo de 28 horas no se ha producido ningn cambio de color, ni turbidez, ni desarrollo de micelios
en el tubo de deteccin en comparacin con el de control, el ensayo puede clasificarse como negativo.
Para simplificar el anlisis se recomienda usar la tabla de evaluacin, pudiendo ser copiada para su uso personal.
Interpretacin de resultados
Conservacin
Mantener el equipo de reactivos en la oscuridad y a una temperatura entre +4 y +8C.
Eliminacin
La biomasa que crece en los tubos de deteccin, que se han clasificado como positivos, consisten en bacterias
y/o hongos y deben ser manipulados con precaucin. Por lo tanto, los medios de deteccin de pruebas positivas
deben ser eliminados de acuerdo con las buenas prcticas microbiolgicas. Si no se dispone de equipamiento
apropiado para los mtodos fsicos o qumicos de eliminacin, tratar los tubos de la siguiente manera: Aadir algu-
nas gotas de desinfectante convencional o domstico (p. ej. Sagrotan), dejndolo toda la noche y luego vaciar
los tubos en el desage.
El medio de control y el contenido de los tubos de muestra y de deteccin clasificados como negativos, pueden
ser vaciados directamente en el desage sin ningn tratamiento.
V
Comparacin de denominaciones MERCK - CULTIMED
Ref. Cdigo
MERCK MERCK CULTIMED
CULTIMED
Ref. Cdigo
DIFCO DIFCO CULTIMED
CULTIMED
Ref. Cdigo
OXOID OXOID CULTIMED
CULTIMED
VI
Determinaciones ms habituales en la Industria Alimentaria
Esta clasificacin se ha hecho de forma orientativa, sin embargo, existen otras posibilidades
que no se han incluido en este esquema ya que el objetivo es que sea gil y de fcil consulta.
VII
Smbolos de envase
Envase de vidrio
Envase de polietileno
Tubo de vidrio
? 55 mm Placa preparada de 55 mm de dimetro
? 90 mm Placa preparada de 90 mm de dimetro
> Placa de contacto
Programa completo
Cultimed
segn Aplicacin
VII-I
Esta clasificacin se ha hecho de forma
orientativa, agrupando los medios en base
a su utilizacin ms habitual. Sin embargo
existen otras posibilidades que no se han
incluido en este esquema ya que el objetivo
es que sea gil y de fcil consulta.
Uso general
VII-II
Medios de cultivo deshidratados
Frascos preparados
VII-III
ndice alfabtico de productos