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Mundo Microbiano PDF
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Microbiologa de agua.
Conceptos bsicos
Mara C. Apella1,2 y Paula Z. Araujo2,3
1
Centro de Referencia para Lactobacilos y Univer-
sidad Nacional de Tucumn. Chacabuco 145, San
Miguel de Tucumn, Tucumn CP 4000 Argentina;
2
Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y
Tcnicas; 3Unidad de Actividad Qumica, Centro
Atmico Constituyentes, Comisin Nacional de Ener-
ga Atmica. Avenida General Paz 1499. 1650 San
Martn, Provincia de Buenos Aires, Argentina.
1. Introduccin
El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente
acta como vehculo de transmisin de microorganismos entricos. La materia fecal
puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma ms
comn el ingreso a travs de los sistemas de pozo ciego a napas profundas.
El Cdigo Alimentario Argentino (CAA), la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS) en sus Guas para la calidad del agua potable, la Directiva 98/83/CE1 y otras
normas internacionales, establecen o recomiendan requisitos de calidad para el agua
de consumo humano. En general, la normativa establece que el agua es apta
bacteriolgicamente para consumo si se encuentra exenta de microorganismos
patgenos de origen entrico y parasitario intestinal. Ellos transmiten enfermedades
tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis (Shigella), colera (Vibrio Cholerae),
amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones gastrointestinales (Aeromonas
mesfilas, Helicobacter pylori, Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia),
cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis (Schistosoma), desrdenes
hepticos (virus de hepatitis), etc.
La presencia de microorganismos patgenos en el agua de bebida es un riesgo
que se incrementa en las reas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas
sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser
causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la
calidad microbiolgica de muestras de diversos orgenes.
Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hdricos, potencial-
mente riesgosos para la salud, resultan difciles de llevar a cabo debido a la gran varie-
dad de bacterias patgenas cultivables, a la complejidad de los ensayos de aislamientos
y a la presencia en baja concentracin de varias especies altamente agresivas, sin que el 33
orden detallado indique prioridad. Por esta razn, los anlisis bacteriolgicos apuntan a la
bsqueda de microorganismos indicadores de contaminacin fecal y se centralizan en la
http://www.ine.es/normativa/leyes/incinor.htm
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Tabla 1.
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Replicacin del ADN y divisin de la clula en dos clulas idnticas; 2divisin del ncleo;
duplicacin y distribucin del ADN en las dos clulas hijas; 3divisin celular que origina clulas
con la mitad del nmero de cromosomas (haploides).
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Figura 1
1. Microfotografas de cocos (a) y bacilos (b).
(a) (b)
disponen en cajas de Petri de vidrio o plstico con tapa, donde cada clula microbiana
por divisiones sucesivas da origen a masas visibles denominadas colonias. Este he-
cho es el que permite cuantificar los microorganismos presentes en muestras, a partir
de las cuales se realizan diluciones, siembras e incubaciones, basndose en la premisa
que cada colonia se origina de una clula.
El medio de cultivo requiere una esterilizacin, inmediatamente despus de su
preparacin, para eliminar los microorganismos contaminantes; esto se hace normal-
mente por calor hmedo a menos que en su composicin, el medio contenga sustancias
termolbiles. Su manipulacin posterior, para mantener las condiciones de asepsia, re-
quiere ciertas precauciones, por ejemplo trabajar en flujos laminares o cerca de llama de
mecheros. La transferencia de un cultivo desde un recipiente a otro se lleva a cabo con
pipeta estril o con ansa o aguja previamente esterilizadas por incineracin a la llama.
Los medios de cultivos agarizados son utilizados para el aislamiento microbiano a
partir de muestras donde coexisten diferentes poblaciones, las que posteriormente se
siembran en medios de cultivos lquidos adecuados para obtener un crecimiento mxi-
mo. Tanto en los medios artificiales de laboratorio como en el ambiente natural, la
nutricin de la clula lleva inicialmente a un aumento de tamao y peso que precede a
la divisin celular. En la mayora de los microorganismos, el crecimiento contina
hasta que la clula se divide en dos clulas hijas mediante el proceso de fisin binaria,
el cual conduce al crecimiento de las poblaciones. Es difcil estudiar el crecimiento de
la clula individual, especialmente en los microorganismos, debido a que los mtodos
analticos no son los suficientemente sensibles como para ser aplicados a estructuras
tan pequeas. Es por esto que habitualmente para evaluar el crecimiento se analiza el
aumento de la poblacin microbiana.
El crecimiento de una poblacin tiene lugar en forma exponencial. Una clula se
divide en dos clulas hijas y luego stas se dividen a su vez en dos nuevas clulas, o
sea que en cada perodo de divisin, la poblacin se duplica por lo que la multiplicacin
corresponde a una progresin geomtrica: 20 21 22 23 2n.
El intervalo de tiempo requerido para que una poblacin se duplique se define
como tiempo de generacin o tiempo de duplicacin y se representa con la letra g.
No todas las bacterias tienen el mismo tiempo de generacin. Para algunas, como E.
coli, g es 20 min y para otras, como Nitrosomona y Nitrobacter, g es mucho mayor
(5-10 h). El tiempo de generacin depende de los nutrientes y de las condiciones
fisicoqumicas del medio. A pesar que las bacterias son capaces de crecer en un amplio
rango de condiciones ambientales y utilizar diversos nutrientes, el crecimiento mximo,
para una dada especie, se lleva a cabo bajo condiciones ptimas de pH y temperatura.
El mtodo ms usado para determinar el tiempo de generacin consiste en ino-
cular el medio de cultivo apropiado con las clulas bajo estudio. Al cabo de determina-
dos intervalos de tiempo, bajo condiciones ptimas, se toman muestras para el recuen-
to de microorganismos.
Si se define a g como el cociente entre el tiempo transcurrido (t) y el nmero de 39
divisiones (n) que ocurrieron en ese tiempo:
t
g= (1)
n
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x = 2 n x0 (2)
t
g = log 2
x (3)
log x
o
x
3,3 log x (4)
n
k = = g 1 = o
t t
c
d
b
log x
tiempo
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En la figura 2 se distinguen cuatro fases: fase de latencia o fase lag (a); fase
exponencial o fase logartmica (b); fase estacionaria (c) y fase de muerte (d).
Entre cada una de estas fases existe un perodo de transicin que representa el
tiempo requerido para que todas las clulas entren en una nueva fase.
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Tabla 2
2. Mtodos empleados para determinar el crecimiento microbiano
Determinacin delNmero de clulas
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Tabla 4
4. Clasificacin de los microorganismos segn el rango de pH de desarrollo
Protozoarios
Frecuentemente en el agua contaminada con heces se encuentran dos
protozoarios parsitos con incidencia en salud humana, responsables de epidemias:
Giardia lamblia: es flagelado con un tamao de 15 m y se transmite al
hombre a travs de agua contaminada con materia fecal. Las clulas del protozoario
producen un estado de reposo denominado quiste. Los quistes al ser ingeridos germinan
y causan giardiasis, enfermedad caracterizada por diarreas, calambres intestinales,
flatulencia, nauseas, sntomas que pueden ser agudos o crnicos. La giardisis es una
de las enfermedades parasitarias de origen hdrico ms comunes.
Cryptosporidium parvum: es un parsito del hombre y animales de tamao
muy pequeo (2-5m), redondeado que crece en el interior de las clulas del epitelio
mucoso de intestino y estmago. Los quistes infecciosos producidos por este protozoario
poseen una pared muy gruesa. Los quistes de Cryptosporidium son mucho ms
resistentes a la cloracin que los de Giardia. La criptoposiosis es una infeccin que
se caracteriza por dolores estomacales, nauseas, diarrea y deshidratacin.
Virus
El 87% de las enfermedades virales transmitidas por el agua son causadas por
el virus de la hepatitis (adenovirus y rotavirus).
Bacterias
Ms del 80% de las bacterias descriptas en el Manual de Bergey pueden aislarse
del agua. Teniendo en cuenta la respuesta a la tincin de Gram, a continuacin se
mencionan y describen algunas de las ms importantes.
Bacterias Gram negativas
Entre las especies que se han aislado de aguas, podemos mencionar a las
pertenecientes a los gneros Pseudomonas, Flavobacterium, Gallionella,
Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Achromobacter, Alcaligenes, Bordetella,
Neisseria, Moraxella y Acinetobacter.
Las pseudomonas son las ms comunes en napas freticas debido a su versatilidad
respecto a fuentes de carbono, y a sus bajos requerimientos nutricionales. Ellas son
bacilos psicrfilos, presentan flagelos pertricos, producen pigmentos (verde, azul verdoso,
rojo, marrn) y no forman esporas. La morfologa y el hbitat de muchas pseudomonas
coincide con el de bacterias entricas como Escherichia coli pero se diferencian en
que no fermentan azcares. Segn el Manual de Bergey este grupo admite 7 especies,
siendo Pseudomonas aeruginosa la de mayor relevancia sanitaria, es un patgeno
oportunista por excelencia y el agente etiolgico principal de infecciones en vas urinaria,
intestino, odo y heridas. Por su relativa resistencia al cloro es considerada un indicador
de eficiencia de la cloracin. Su presencia en sistemas de almacenamiento, tanque, y
cisternas, responde a un estado deficiente de dichas instalaciones. El control de
pseudomonas, al igual que el de bacterias aerbicas, debe intensificarse en redes
expuestas a contaminacin o cuando se comprueba cloracin deficiente.
46 Flavobacterium es un gnero ampliamente distribuido en aguas y suelos. No ha
sido encontrado en sedimentos de acuferos profundos pero si en las aguas que se
extraen de ellos. Por esta razn, se duda si las flavobacterias se encuentran naturalmente
en un acufero o simplemente colonizan el pozo luego de su perforacin. Son bacilos
que se caracterizan por falta de movilidad y produccin de pigmentos de color amarillo.
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Tabla 5.
5 Medios de cultivo, temperaturas y tiempos de incubacin, y color de las colonias de
algunas bacterias indicadores de contaminacin
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Mara C. Apella y Paula Z. Araujo
Referencias
[1] APHA, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, American Public Health
Association, New York, (1992).
[2] Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, Williams and Wilkins, Baltimore, (1994).
[3] F.H. Chapelle, Ground-Water Microbiology and Geochemistry, John Wiley, New York, (1993).
[4] H.L. Ehrlich, Geomicrobiology, Marcel Dekker, New York, (1996).
[5] H.J. Glynn y G.W. Heinke, Ingeniera Ambiental, Prentice Hall, Mxico, (1999).
[6] Guas para la Calidad del Agua Potable, Vol. 3, Publicacin Cientfica N 58, Organizacin
50 Panamericana de la Salud, Washington, (1988).
[7] M.T. Madigan, J.M. Martinko y Parker J. Broca, Biologa de los Microorganismos, Prentice Hall,
Madrid, (2004).
[8] J. Rodier, Anlisis de las aguas, Omega, Barcelona, (1989).
[9] H.G. Schlege, General Microbiology, Cambridge University Press, Cambridge, (1987).
[10] F.A. Skinner y J.M. Shewan, Aquatic Microbiology, Academic Press, New York, (1977).