Servicio

Antimicrobianos, Laboratorio Nacional de Referencia en Antimicrobianos, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. M albrn

- BLUE CARBA -
Deteccin rpida de carbapenemasas
directo de placas de cultivo
Protocolo del Servicio ANTIMICROBIANOS, Laboratorio Nacional de
Referencia en Antimicrobianos, INEI-ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn
Adaptado de Pires J. y cols 1

Alcance del ensayo:

se podrn evaluar todos los bacilos gram negativos
A) Preparacin y almacenamiento de Solucin A (csp 100 ml):
(i) Disolver 40 miligramos de azul de bromotimol en 100 ml H2O
(concentracin final 0.04%). Se encuentra disponible comercialmente
solucin de esta concentracin.
(ii) Disolver en la SN anterior 1,6 miligramos de SO4Zn (concentracin
final 0.1 mmol/L). Nota 1: algunas sales de SO4Zn son penta o hepta
hidratadas, por lo que deber realizar los ajustes de clculos
correspondientes para lograr la cc de 0.1 milimolar)
N
(iii)Medir pH de la SN y ajustar a pH a 7.0. CRITICO !!!
R A
(iv) Filtrar con Millipore (opcional)
L B
Conservar en heladera. Vigile que no se produzca decoloracin espontanea
A
S M
hacia el verde/amarillo durante conservacin (generalmente ocurre luego de
4-6 semanas de uso diario).
L I
A N
B) Procedimiento:
I -
1. Por cada cepa a ensayar, utilice 2 pocillos deE
I N una policubeta de 96 pocillos o dos
. agregue:
o s
tubos eppendorf. En cada uno de ellos,
100 microlitros de n
(i)
ia Solucin A (pocillo/tubo control) o
b Solucin A + imipenem 3 mg/ml (pocillo/tubo de
(ii)
o
100 microlitros
cr
i
reaccin).

t
Nota 2: Se impuede utilizar la formulacin farmacutica de imipenem (frasco
A
ampollan Tienam-MSD y/o genricos). La Solucin A + imipenem (3 mg / ml)
tiene que ser preparado en el momento del ensayo. Sin embargo, pueden ser
preparados de antemano los lotes de polvos de imipenem (pesadas) y
mantenerse a 4 C durante 2 semanas o > de 2 meses en freezer, si no se aade
la solucin A. Recuerde realizar los clculos necesarios considerando la
potencia de la formulacin que utilice.
Nota 3: recuerde incluir una cepa control positivo (cuyo genotipo de productor

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de carbapenemasa sea conocido, por ejemplo alguna perteneciente a la

coleccin de cepas enviadas en el Programa Nacional de Control de Calidad en
Bacteriologa) y un control negativo (cuyo genotipo de NO productor de
carbapenemasa sea conocido, por ejemplo alguna perteneciente a la coleccin
de cepas ATCC).
2. Agregue en cada pocillo o tubo, una ansa de 5 microlitros completa con
colonias crecidas en placa de MH, TSA, BHI, CLDE, placa colorimtrica
(MH+resazurina), Agar Sangre o ChromKPC y resuspndala en el liquido de
reaccin. Si slo dispone de ansa de 10 microlitros, resuspenda solo la mitad de
la misma en cada tubo o pocillo.
Nota 4: nunca utilice medios basados en la fermentacin de hidratos de carbono
como Levine o Mc Conkey que podran producir un test invalido.
N
Nota 5: la hemoglobina de los medios suplementados con sangre podra
R A
producir un viraje espontneo del tubo control del azul a verde. En caso que
L B
ello ocurriere, utilice los criterios III y V para interpretar el ensayo
MA como
positivo o negativo, respectivamente (ver abajo punto 6)
I S
3. Tape la policubeta o los tubos eppendorf.
N L
4. Incube a 35-37C por un mximo de 2 horas en agitacin
I -A (si no cuenta con un
agitador continuo, agite manualmente cada 15 E
N
minutos).
5. I
Lectura a ojo desnudo del color de cada.pocillo/tubo.
s
6. Interpretacin o
npocillo/tubo Interpretacin
Color pocillo/tubo
b ia
Color Criterio
control
c r o reaccin No.
(sin imipenem) i (con imipenem)
Azul
t im Amarillo Carbapenemasa positivo I
Azul n
A Verde Carbapenemasa positivo II
Verde Amarillo Carbapenemasa positivo III
Azul Azul Carbapenemasa negativo IV
Verde Verde Carbapenemasa negativo V
Amarillo Azul o verde o amarillo Test invlido VI

El tiempo de reaccin usualmente requerido por los distintos mecanismos es:

KPC: 2 a 30 minutos
MBLs (VIM, IMP, SPM): 30 min a 1 hora
OXAs y NDM: 1 a 2 horas

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7. 7) Desempeo: la eficiencia final del mtodo depender de la prevalencia local de

Mecanismo de Pires J. y cols1 Pasteran F. y cols2
resistencia

Sensibilidad KPC 100% 100%

MBLs 100% 100%
OXAs OXA-48: 100% OXA-48: 90%
OXAs Acinetob.: 100% OXAs Acinetob.:100%

OXA-163/247 (Arg.): 20%

Especificidad No productores 100% 99%
de carbapenemasa
mecanismos circulantes, a saber:

N
A
C O N S I D E R A N D O F I N A L:
R
Un resultado POSITIVO d el BLUE-CARBA indicar invariablemente
L B
cepa productora de carbapenemasa. Por el contrario, A
M en escenarios
con aumento de la prevalencia de OXA-48/OXA- 48-like, como en
Argentina, un resultado negativo con el BLUE- L ISCARBA requerir de
pruebas adicionales para definir la presencia
A N de esta carbapenemasa.
I-

N E
I

Ejemplo:
.
suestra entre parntesis
La interpretacin del BLUE-CARBA se m
no
Control Reaccin ia

o b
icr
t im
An

3
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N
R A
L B
MA
LI S
A N
EI-
. I N
o s
ia n Tubo
Tubo
o b Reaccion
Control
icr (+)
t im

A n
Bibliografa :
1. Pires J, Novais A, Peixe L. Blue-carba, a n easy b iochemical test for detection of diverse
carbapenemase producers directly from bacterial cultures.
J Clin Microbiol. 2 013; 51: 4 281-3.
2. Pasteran F, Veliz O, L ucero C, Rapoport M, Ceriana P, Corso A. Blue Carba Test (BCT) for Rapid
Detection of Carbapenemases i n Gram-n egative S pecies: Performance against a Panel of
Challenging Carbapenemases. 54th I CAAC, Abstract 9 63; 2 014

Consultas:
atb@anlis.gov.ar
fpasteran@anlis.gov.ar

Tel/Fax 5411 4 303 2812

Versin 1
2 5-0 9-2 014