03 Inmunoglobulinas

F. Garca-Cozar, E. Aguado y J. Pea

Estructura Isotipos Dominios Subclases Alotipos Idiotipos Distribucin

Funcin Propiedades Unin ag-ac IgG y otras

INTRODUCCION

A finales del siglo XIX, Von Behring observ que los sueros de animales que haban padecido
difteria contenan sustancias que neutralizaban el efecto de la toxina diftrica. A estas sustancias,
que se caracterizaban por ser termolbiles y no dializables, se les denomin anticuerpos, debido
a su capacidad de reconcer a las toxinas bacterianas.
En 1937 Tiselius descubre la electroforesis y aplica este nuevo mtodo al fraccionamiento de
protenas plasmticas, identificando as los anticuerpos como las protenas del suero que se
desplazan ms lentamente. Esta fraccin recibi el nombre de g-globulina, quedando as
asociados temporalmente, los conceptos de anticuerpo y de g-globulina, como equivalentes
(Figura 3.1).Posteriormente, se comprueba que no todos los anticuerpos migran
electroforticamente con las g-globulinas, sino que muchos de ellos lo hacen con las a y b
globulinas. Esto se observ analizando los niveles de las distintas fracciones de globulinas
antes y despus de la inmunizacin de animales con un antgeno (Figura 3. 2). Se concluye
entonces, que no todos los anticuerpos son gammaglobulinas, por lo que Hebermans propone el
trmino de inmunoglobulinas para designar a todas las sustancias con capacidad de anticuerpo.
Hoy se conocen cinco tipos de inmunoglobulinas: IgM, IgA, IgG, IgD e IgE, cada una de ellas con
ciertas caractersticas distintas (Tabla 3.1).

ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

Las inmunoglobulinas son glicoprotenas que, segn ya indic Porter en 1959, estn formadas
por cadenas polipeptdicas agrupadas, dependiendo del tipo de inmunoglobulina, en una o varias
unidades estructurales bsicas.

Unidad estructural bsica

Cada unidad est compuesta por cuatro cadenas polipeptdicas unidas entre s por puentes
disulfuro y otras uniones de tipo no covalente (Figura 3.3.). Para su estudio se han empleado
diferentes procedimientos. Por ejemplo, tras la rotura de los puentes disulfuro por sustancias de
carcter reductor, como el mercaptoetanol, se individualizan las cuatro cadenas polipeptdicas y
stos atendiendo a su tamao, son de dos tipos: de bajo peso molecular (aproximadadamente
22 KD) y de alto peso molecular (50-70 KD, dependiendo del tipo de Ig). Los polipptidos de bajo
peso molecular reciben el nombre de cadenas ligeras o cadenas L (Light) y las de alto peso
molecular, cadenas pesadas o cadenas H (Heavy) (Tabla 3.2).
Dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas se agrupan de tal manera que existe una
proximidad espacial entre los cuatro extremos amnicos de las cadenas ligeras y pesadas por una
parte, y entre los dos extremos carboxlicos de las cadenas pesadas por otra.
Esta estructura bsica de las inmunoglobulinas puede ser fraccionada mediante la utilizacin de
enzimas (papana, pepsina, etc.), como fue efectuado por Porter en 1959, obtenindose
diferentes tipos de fragmentos (Figura 3 4). El tratamiento con papana produce la ruptura
especfica de las cadenas H, en el espacio comprendido entre el puente disulfuro que las une
entre s y los que las unen a las cadenas ligeras. Se obtienen tres fragmentos: uno denominado
Fc, que determina la actividad biolgica, contiene el alotipo y determina la clase y subclase de
cadena pesada y dos denominados cada uno de ellos Fab, que contienen el idiotipo y es por
donde la molcula se une al antgeno.
Cadenas Ligeras.
Hay dos tipos de cadenas ligeras, estructuralmente diferentes, que se conocen como cadenas
ligeras tipo kappa (k) y cadenas ligeras tipo lambda (l). La familia de genes que codifica para la
cadena ligera k se localiza en el cromosoma 2 y los loci de los genes homlogos que codifican
para la cadena l, en el cromosoma 22. En cada molcula de inmunoglobulina las dos cadenas
ligeras son del mismo tipo, k o bien l, pero nunca existe una de cada tipo en la misma
inmunoglobulina.
Las cadenas ligeras estn formadas por unos 200 aminocidos con la particularidad de que
existen dos puentes disulfuro que unen grupos de unos cincuenta aminocidos. Concretamente
la IgG1 posee 214 aminocidos y su estructura secundaria y terciaria estn determinadas por dos
puentes disulfuro intracatenarios que unen los aminocidos 23 con el 88 y 134 con el 193, (Figura
3.5) . A su vez, estas cadenas ligeras tienen otro puente disulfuro intercatenario, por el cual cada
una de ellas se une a una cadena pesada para constituir la unidad bsica de las
inmunoglobulinas. Este puente se encuentra en el ltimo aminocido (214) de la parte carboxlica
para el tipo k y en el penltimo para el tipo l.

Cadenas pesadas.
Estas cadenas poseen unos cuatrocientos aminocidos establecindose entre algunos de ellos
puentes disulfuro (intracatenarios) que asocian unos 60 aminocidos y que condicionan la
estructura secundaria del polipptido. Por ejemplo, las cadenas pesadas de la IgG1 poseen 440
aminocidos y los puentes disulfuro unen el aminocido 22 con el 96, el 144 con el 200, el 261
con el 321 y el 367 con el 425.
Estas dos cadenas pesadas estn unidas la una a la otra por puentes disulfuro intercatenarios, ya
indicados anteriormente, y que pueden ser de uno a cinco dependiendo del tipo de
inmunoglobulina.
En estas cadenas pesadas, y a nivel de los puentes disulfuro intercatenarios, hay una zona de
unos 15 aminocidos, de gran flexibilidad debido a su estructura y constituye lo que se denomina
zona bisagra por donde se deforma la molcula de inmunoglobulina cuando se produce la unin
con el antgeno, facilitndose as su acoplamiento con ste. Los loci de los genes que codifican
para la cadena pesada se localizan en el brazo largo del cromosoma 14.

Parte variable y constante de las cadenas ligeras y pesadas.

Estructuralmente, las cadenas ligeras poseen dos partes: una corresponde al extremo carboxlico
que diferencia las cadenas ligeras en dos tipos k y l, y constituye la parte constante de las
cadenas ligeras (CL). La otra corresponde al extremo amnico, que es muy variable y constituye
la parte variable de las cadenas ligeras (VL) y corresponde a la zona de interaccin con el
antgeno. Las partes constante y variable son prcticamente de igual tamao en las cadenas
ligeras.
Tambin las cadenas pesadas poseen una parte variable y otra constante. Aproximadamente el
tercio del extremo amnico de estas cadenas se caracteriza por ser estructuralmente muy
variable, por lo que se conoce como parte variable de las cadenas pesadas (VH). La estructura de
este fragmento, al igual que en las cadenas ligeras, depende del tipo de antgeno que reconoce,
dado que este extremo tambin participa en la unin de la inmunoglobulina con el antgeno. Por
el contrario, aproximadamente los dos tercios del extremo carboxlico de todas las cadenas
pesadas de un mismo tipo de inmunoglobulinas poseen una estructura idntica. De ah que esta
parte de las cadenas pesadas se conozca como parte constante de las cadenas pesadas (CH).
Esta parte constante es diferente segn la clase de inmunoglobulina que consideremos,
determinando la existencia de cinco tipos de cadenas pesadas: g, a, m, d y e que definen a su
vez las cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE respectivamente. (Figura 3. 6).

Caractersticas de los distintos tipos de inmunoglobulinas

Debido a esta distinta estructura, las cadenas pesadas van a presentar distintas propiedades
biolgicas, tales como la capacidad de unirse entre s, fijar complemento, fijar la pieza de
secrecin y unirse a macrfagos, neutrfilos y clulas NK. En la tabla 3.1 se recogen las
principales tipos de inmunoglobulinas y en la tabla 3.3 las principales propiedades de las
mismas. Hemos de considerar que incluso entre molculas de una misma clase existen, segn a
la subclase a la que pertenezcan, ciertas diferencias cmo se observa en la Tabla 3.4.
Isotipos
Si inmunizamos un animal de una especie con inmunoglobulinas procedentes de una especie
distinta, la mayora de los anticuerpos generados (antisuero heterlogo) irn dirigidos contra la
regin constante de la inmunoglobulina que hayamos inyectado, permitiendo definir lo que
llamamos el isotipo de una inmunoglobulina determinada. Los genes que codifican para las
distintas variantes isotipicas estn presentes en todos los individuos sanos, es decir, todos los
individuos sanos poseen los genes g1, g2, g3, g4, m, a1, a2, d, e, k y l; que codifican
respectivamente para las regiones constantes G1, G2, G3, G4, M, A1, A2, D y E de las cadenas
pesadas y para las regiones kappa y lambda de las cadenas ligeras. Existen cinco isotipos de
cadena pesada (M, G, A, D y E) y dos de cadena ligera (k y l). As diremos que el isotipo de una
determinada inmunoglobulina es G1 o que esa inmunoglobulina es de la clase G y subclase 1,
que a su vez puede tener unas cadenas ligeras del isotipo kappa o lambda.

Dominios moleculares en las cadenas ligeras y pesadas.

Tanto las cadenas pesadas como las ligeras poseen grupos de aminocidos unidos por puentes
disulfuro intracatenarios. Estos segmentos repetidos en las cadenas L y H se conocen como
dominios. Los dominios de la parte constante de las cadenas pesadas presentan una gran
homologa secuencial no slo entre ellos, sino tambin con la regin constante de la cadena L.
De forma similar, los nicos segmentos variables en las cadenas L y H presentan cierta
homologa entre ellos y en menor grado a los de la regin constante.
La cadena L tiene dos dominios, uno corresponde a la regin variable (VL) y otro a la constante
(CL). La cadena H tiene un dominio en la regin variable (VH) y tres o cuatro en la constante
dependiendo de la clase de inmunoglobulina que consideremos (tres en la IgG, IgA e IgD y cuatro
en las IgM e IgE). Estos dominios de la regin C se denominan CH1, CH2, CH3 y CH4 cuando
aparece este ltimo (Figura 3. 7).
Los dominios V son los responsables de la unin con el antgeno y los dominios C, con excepcin
del CH1, constituyen el fragmento Fc que, como ya se ha indicado, determina las propiedades
biolgicas de las inmunoglobulinas. Concretamente es por el dominio CH2 por donde se produce
la unin a las protenas del complemento y se establece el enlace con la cadena glicosilada que
completa la molcula glicoproteica de las inmunoglobulinas. Es entre los dominios CH1 y CH2
donde se establece la zona bisagra..

Regiones hipervariables
Las zonas variables, tanto de la cadena L como H, poseen a su vez unas regiones en donde se
concentra fundamentalmente la variabilidad. Son tres pequeos segmentos que constituyen las
denominadas regiones o segmentos hipervariables o regin determinante de complementariedad
CDR (Complementarity Determining Region), pues determinan la forma del centro activo que
permite el reconocimiento y unin al antgeno. Cada una de estas regiones hipervariables se
componen de 17 a 20 aminocidos y cambios en muy pocos aminocidos de estas zonas
suponen una enorme diversidad de posibilidades de unin al antgeno sin variar el resto de la
molcula (Figura 3. 8.). El resto de la parte variable es relativamente constante, de modo que
sustituciones en los residuos que la constituyen, no afectan la especificidad de combinacin;
constituye un sostn de trabajo pues su misin es presentar adecuadamente en el espacio las
regiones hipervariables al antgeno, por lo que los residuos que componen esta zona se
denominan residuos FW (Framework).

Molculas adicionales a la unidad estructural bsica.

En las inmunoglobulinas aparecen, adems de las cuatro cadenas polipeptdicas bsicas, un
componente glucdico (que representa el 2-14 % del peso total de la molcula) y en algunas
clases de inmunoglobulinas, glicoprotenas adicionales conocidas como cadena J y pieza de
secrecin (Figura 3. 9.).
La cadena J es una glicoprotena con un 12 % de azcares y un peso molecular de 15 kD que
une, mediante puentes disulfuro, extremos Fc en la IgA e IgM. La pieza de secrecin es una
glicoprotena de 58 kD de peso molecular que sintetizan las clulas epiteliales de las mucosas y
glndulas exocrinas.
Estructura espacial de las inmunoglobulinas.
Una vez conocida la secuencia primaria de aminocidos en las cadenas peptdicas de las
inmunoglobulinas, la deduccin de su estructura espacial permiti entender la forma en que
millones de diferentes sitios de unin al antgeno son construidos sobre una estructura comn.
Las inmunoglobulinas pueden estar constituidas por unidades bsicas simples, como es el caso
de la IgG, IgD e IgE; en forma de dmeros (dos unidades bsicas unidas), como es el caso de la
IgA, o incluso por hasta cinco estructuras bsicas unidas por sus extremos Fc como es el caso de
la IgM. Esto se debe a la cualidad que tienen las cadenas m y a de unirse entre s. Esta unin se
realiza a travs de la cadena J y mediante puentes disulfuro (Figura 3.10).
Las cadenas pesadas y ligeras estn plegadas sobre si mismo, tal como se ha visto mediante
anlisis cristalogrfico (Figura 3.11.).
Cada uno de los dominios de las cadenas est constituido a modo de cilindros en los que se
encuentran plegados en forma de sandwich dos grupos de cadenas proteicas, una con tres
cadenas polipeptdicas y la otra con cuatro, que presentan estructuras secundarias es de hoja
plegada b. Estas dos capas proteicas estn alineadas paralelamente rodeando un espacio
interior en el que predomina la presencia de aminocidos hidrfobos (Figura 3.12.) . La unin de
esas dos capas se efecta por puentes disulfuro. En las zonas constantes, las capas de cuatro
segmentos estn en el exterior de la molcula y las de tres en el interior, mientras que en las
variables es al contrario; por lo dems, el modelo global de plegado guarda gran semejanza entre
los dominios variables y constantes. Sin embargo, las regiones hipervariables constituyen tres
bucles adicionales que no se someten al plegamiento del resto del dominio.

Subclases de Inmunoglobulinas.
Se sabe que no todas las Inmunoglobulinas de una misma clase tienen idntica estructura, sino
que dentro de las clases se pueden establecer subclases considerando la secuencia de
aminocidos de la regin constante de las cadenas H y el diferente nmero y situacin de los
puentes disulfuro intercatenarios establecidos entre las cadenas pesadas. As, la IgG humana se
divide en cuatro subclases (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) y la IgA e IgM en dos (IgA1 e IgA2; IgM1 e
IgM2) respectivamente. En la tabla 3.4 se exponen las distintas propiedades biolgicas de las
subclases de inmunoglobulinas G.
Las regiones constantes de las cadenas pesadas de estas diferentes clases y subclases de
inmunoglobulinas se conocen, como veremos en el apartado siguiente, con el nombre de
variantes isotpicas y son las mismas en todos los individuos normales de la misma especie.

Alotipos
Las inmunoglobulinas, como protenas que son, pueden actuar como antgenos. Esta propiedad
se ha aprovechado para generar anticuerpos contra ellas, que posteriormente han sido utilizados
como instrumentos para analizar su estructura y funcin. Mediante el uso de los anticuerpos
generados contra las inmunoglobulinas se ha podido detectar la existencia de variaciones en las
mismas.
Si inmunizamos un animal con inmunoglobulinas de otro animal de la misma especie (Figura
3.13.) obtendremos antisueros homlogos. Estos antisueros homlogos pueden ir dirigidos
contra las regiones constantes de las inmunoglobulinas, solo contra aquellas zonas que sean
distintas entre ambos animales. Estas diferencias reflejan variaciones mnimas, a veces de un
solo aminocido debidas a diferencias en la secuencia de ADN de los genes que codifican para
las inmunoglobulinas. Los genes que codifican para las inmunoglobulinas se heredan en forma
de alelos mendelianos, por lo que a cada uno de este tipo de variante se le denomina variante
allica y al conjunto de variantes allicas, se le denomina alotipo. Los determinantes alotpicos o
simplemente alotipos, se sitan como hemos dicho en la regin constante de las cadenas
pesadas y ligeras. En el hombre se han descrito tres tipos de alotipos:

Gm en las cadenas g de las IgG.

Am en las cadenas a de las IgA.

Km en las cadenas ligeras k que dan lugar a tres alotipos: Km (12), Km (1) y Km (3), cuyas
diferencias estructurales se recogen en la tabla 3.5.
Idiotipos

Los antisueros homlogos que referamos anteriormente que se producen al inmunizar animales
con inmunoglobulinas de otro animal de la misma especie, tambin pueden ir dirigidos contra las
regiones hipervariables de las cadenas H y/o L de las inmunoglobulinas. Todas las
inmunoglobulinas que poseen los mismos determinantes antignicos en sus regiones
hipervariables se dice que pertenecen al mismo idiotipo, o que poseen los mismos determinantes
idiotipicos. Los determinantes idiotpicos son exclusivos para las molculas producidas por un
clon determinado de clulas productoras de anticuerpos. Todos los animales tienen una
representacin de todas las regiones hipervariables posibles, generadas por recombinacin
gentica (como veremos en el capitulo 5). Estas en condiciones normales, no dan lugar a una
masiva produccin de anticuerpos al encontrarse cada una en cantidades muy pequeas, cuando
experimentalmente inyectamos una cantidad suficiente de inmunoglobulinas de una especificidad
determinada, se desarrollara una respuesta de anticuerpos contra el idiotipo de esa
inmunoglobulina en particular (Figura 3.14.). Los idiotipos parecen tener importancia fisiolgica
en la regulacin del sistema inmune. Segn la teora de la red de Jerne, frente a los idiotipos se
formaran anticuerpos que al unirse a los mismos formaran un entramado (red) de anticuerpos
unidos a otros anticuerpos que tendran como accin final la regulacin del proceso de sntesis de
nuevas inmunoglobulinas. Como decamos anteriormente, cada uno de los idiotipos se encuentra
representado en tan pequea cantidad que pasa desapercibido para el sistema inmune, sin
embargo, cuando un determinado clon de clulas B reconoce su antgeno especifico, prolifera, se
diferencia a clula plasmtica y produce una gran cantidad de inmunoglobulinas de una misma
especificidad, sus determinantes idiotipicos pasaran a encontrarse en mucha mayor cantidad y
ahora s darn lugar a una respuesta de anticuerpos contra ellos, anticuerpos anti-idiotipo, que
podrn unirse a las inmunoglobulinas que ocasionaron su generacin. La unin de los
anticuerpos anti-idiotipo al idiotipo que los origino podr dar lugar al bloqueo de las
inmunoglobulinas solubles que compartan ese idiotipo o unirse a las inmunoglobulinas de
membrana presentes en linfocitos B de la misma especificidad, o incluso a las regiones
hipervariables del receptor para el antgeno de la clula T que reconocen ese mismo antgeno,
con efectos en cada uno de los casos inhibidores o estimuladores. Los idiotipos se encontraron
mediante estudios serolgicos, al observarse que cuando en un conejo se inyectaban anticuerpos
antisalmonella de otro conejo del mismo alotipo, producan anticuerpos que reaccionaban con el
anticuerpo inyectado, incluso aunque los dos conejos fueran genticamente idnticos. Estos
anticuerpos anti-idiotipo, en la mayora de los casos, estn dirigidos contra la estructura exclusiva
de la porcin fijadora de antgeno y por tanto solo reconocen a inmunoglobulinas de la misma
especificidad, sin embargo en algunos casos, los anticuerpos anti-idiotipo pueden estar dirigidos
contra zonas de la regin hipervariable distintas de la porcin fijadora del antgeno y en este caso
podrn unirse a inmunoglobulinas de varias especificidades distintas regulando la respuesta
inmune frente a varios antgenos.

DISTRIBUCIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS.

Las inmunoglobulinas se encuentran distribuidas en todos los fluidos orgnicos de la economa

de los vertebrados y en las membranas de los linfocitos B y clulas plasmticas. Las cantidades
relativas de cada una de las clases de inmunoglobulinas en los diferentes compartimentos del
organismo son muy diferentes.
En el torrente sanguneo predomina la IgG mientras que en las secreciones (saliva, lgrimas,
secrecin bronquial, as como en el lquido cefalorraqudeo y mucosas) la IgA es la predominante.
Los niveles de inmunoglobulinas sricas fluctan ampliamente en funcin de diversos aspectos,
tales como el estado nutricional, la edad, etc. Los valores normales en suero de un hombre adulto
(entre 20 y 40 aos) se recogen en la tabla 3.6.
Ontognicamente se producen mltiples cambios en los niveles de inmunoglobulinas desde el
nacimiento hasta los 8 10 aos, en que estos se estabilizan. En la figura 3.17 se expresan las
concentraciones de inmunoglobulinas desde antes del nacimiento hasta los 5 aos de edad. Los
niveles de Ig G son muy altos en la vida fetal y en las primeras semanas de vida extrauterina,
debido a que esta inmunoglobulina es la nica que pasa de la madre al feto a travs de la
placenta. Durante la lactancia, descienden los niveles de IgG por catabolismo de esas molculas
que no son repuestas por carecer el nio an de la capacidad de sntesis de las mismas.
Tambin en la edad fetal se sintetizan pequeas cantidades de IgM (Figura 3.15.).
Cuando las inmunoglobulinas se encuentran insertas en la membrana de los linfocitos
(inmunoglobulinas de membrana), actan como receptores de las seales de activacin
antignicas por su capacidad de reconocimiento del antgeno constituyendo el receptor para el
antgeno del linfocito B.

SUPERFAMILIA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

La estructura de las cadenas pesadas y ligeras de las inmunoglobulinas posee ciertas similitudes
entre s (por ejemplo, la estructura en dominios equivalentes). Esto hizo pensar que ambas
cadenas procedan de una molcula ancestral comn. Idntica similitud se ha observado con la
b-2-microglobulina y con una gran cantidad de molculas, todas ellas agrupadas, por tanto, bajo
el mismo epgrafe de superfamilia de las inmunoglobulinas. Estas molculas son: el receptor T
para el antigeno, las molculas de histocompatibilidad clase I y II, LFA-3, ICAM-1 y otras muchas
que irn siendo estudiadas en diferentes captulos de este libro, especialmente en el captulo 8,
donde se estudian las molculas de adhesin (Figura 3.16.).

FUNCIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS.

La funcin esencial de las inmunoglobulinas es la de unirse al antgeno. De esta manera las

inmunoglobulinas actan como receptoras de seales antignicas o bien pueden colaborar en la
destruccin antignica. La primera funcin se presenta cuando las inmunoglobulinas se
encuentran insertas en la membrana de los linfocitos B (inmunoglobulinas de membrana), y para
la segunda requieren la colaboracin del complemento, macrfagos, neutrfilos y clulas NK, que
tienen la propiedad de unir las inmunoglobulinas por su extremo Fc.

Unin antgeno anticuerpo.

Los eptopos de un antgeno pueden estar formados por aminocidos consecutivos en la
secuencia de la protena, como las protenas se encuentran normalmente dobladas sobre si
mismas segn lo que llamamos estructura terciaria, en la mayora de los casos los anticuerpos
generados contra este tipo de eptopos solo reconocern a la protena desnaturalizada o
linearizada y por ello se les llama epitopos lineales. En la mayora de los casos los eptopos
suelen estar formados por aminocidos del antigeno que solo se encuentran suficientemente
cerca unos de otros en la protena nativa, es decir en la protena que tiene estructura terciaria
conservada, es decir una conformacin adecuada, por lo que a estos eptopos se les llama
epitopos conformacionales (Figura 3. 17.). Cuando inmunizamos un animal con una protena,
generaremos una serie de anticuerpos dirigidos contra los distintos eptopos de la misma, todos
esos anticuerpos se encontraran circulando en el suero del animal al que, una vez extraido,
llamaremos antisuero. El tipo de anticuerpos que compondrn ese antisuero depender en gran
medida de la forma en que hayamos preparado la protena para la inmunizacin, si la hemos
preparado desnaturalizada, solo existirn eptopos lineales, mientras que si hemos inyectado la
protena en su estado nativo, coexistirn en el antisuero anticuerpos que reconozcan eptopos
conformacionales con otros que reconozcan eptopos lineales. En el caso de anticuerpos
monoclonales, todas los anticuerpos procedern de un clon de clulas plasmticas y por tanto
estarn dirigidos contra un solo eptopo que ser de un tipo u otro. La importancia radica, en que
dependiendo del tipo de epitopos que reconozcan los anticuerpos, las aplicaciones diagnosticas o
de investigacin sern distintas. En general, los anticuerpos que reconocen epitopos lineales
sern tiles para tcnicas de Western Blot (donde se analiza la protena generalmente
desnaturalizada) mientras los que reconocen eptopos conformacionales lo sern para tcnicas
de inmunofluoresencia, inmunoprecipitacin, etc.

Paratopo.
Las inmunoglobulinas se unen a los epitopos de los antgenos por sus sitios activos, constituidos
como se ha indicado anteriormente, por los segmentos variables de las cadenas pesadas y
ligeras (Figura 3. 18) y donde intervienen principalmente las regiones hipervariables. Esta zona
de unin al eptopo se conoce con el nombre de paratopo.
Fuerzas de unin Ag-Ac
La unin del antgeno (Ag) con el anticuerpo (Ac) o inmunoglobulina es semejante a la que se
establece entre la enzima y su substrato o entre protenas que pertenecen a cualquier va de
sealizacin intracelular. Estas interacciones se deben a la formacin de mltiples enlaces no
covalentes (enlaces de hidrogeno, interacciones electrostticas, de Van der Waals e hidrfobas),
cada uno de los cuales por si solos son dbiles. Sin embargo, como se establecen mltiples
interacciones, la fuerza total de la unin puede ser muy elevada. Para que las interacciones
mencionadas lleguen a ser efectivas, los grupos entre los que se establece deben estar situados
a distancias muy cortas, y para que esto sea posible y se puedan producir un gran numero de
interacciones, el eptopo y el paratopo deben encajar perfectamente, dependiendo de ello la
fuerza de la interaccin que conocemos con el nombre de afinidad. La afinidad esta interaccin
es de vital importancia, por cuanto de ello depender tanto la utilidad diagnsitca y de
investigacin de un anticuerpo como su importancia fisiopatolgica. Para cuantificar la afinidad de
una interaccin, deberemos entender primero una serie de conceptos de los que nos ocuparemos
a continuacin. Al tratarse de uniones no covalentes, la unin Ag/Ac ser reversible de modo que
cuando el antgeno y el anticuerpo se mezclan en solucin, se estarn formando y disociaciando
complejos constantemente de acuerdo con la siguiente ecuacin:

KA
Ag + Ac = == Ag-Ac
KD

donde ka representa la constante de velocidad y kd la de disociacin.

Llegara un momento en que la velocidades de asociacin y disociacin se igualen, es decir, que
el numero de complejos Ag/Ac que se formen sea el mismo que el que se disocie, entonces
decimos que se ha llegado a una situacin de equilibrio dinmico. Una forma indirecta de medir la
afinidad de la interaccin de una pareja Ag/Ac, ser medir la velocidad de asociacin y
disociacin antes de que se llegue al equilibrio, lo cual puede realizarse actualmente mediante
biosensores. Cuanto mayor sea la velocidad de asociacin y menor la de disociacin mayor ser
la afinidad de la interaccin de esa pareja Ag/Ac. Otra forma complementaria y ms directa de
cuantificar la afinidad de la interaccin Ag/Ac, es hacerlo una vez que se ha alcanzado el
equilibrio y utilizando concentraciones bajas de anticuerpo. En estas condiciones la concentracin
de antgeno que permite que la mitad de los anticuerpos estn unidos a ellos y la otra mitad libre,
medida en molaridad, se denomina constante de disociacin (KD) y es una medida directa de la
afinidad de la interaccin. Cuanto menor sea la KD mayor ser la afinidad puesto que indica que
es necesaria una menor concentracin de antgeno para que la mitad de los anticuerpos estn
ocupados. La inversa de la KD es la constante de asociacin (KA) cuyo valor es directamente
proporcional a la afinidad de la interaccin. Para determinar experimentalmente estas constantes
tendremos que conocer las concentraciones de antgeno libre y unido, para lo cual existen varios
mtodos entre los que destacan anlisis mediante dialisis de equilibrio (Figura 3.19). Esta tcnica
se basa en la utilizacin de una membrana semipermeable de un poro tal, que permita el paso de
un antgeno suficientemente pequeo (un hapteno) pero no del anticuerpo. A concentraciones
bajas de antgeno, la concentracin de anticuerpo libre ira bajando rpidamente hasta que se
alcance el equilibrio, puesto que todo el antgeno que entre a travs de la membrana
semipermeable quedara retenido por el anticuerpo. Realizando el experimento anterior con varias
concentraciones de antgeno, podremos encontrar aquella en la que la mitad del anticuerpo se
encuentra unido al antgeno que como hemos dicho corresponde a la KD. La afinidad que
hayamos calculado corresponder exclusivamente a la de la interaccin de esa pareja Ag/Ac. Un
determinado anticuerpo podr unirse a mas de un antgeno con afinidades distintas en cada
caso.

Avidez de la unin Ab-Ac

Como apuntbamos anteriormente, el fenmeno de la unin Ag/Ac es en realidad mucho ms
complejo, pues cada uno de los antgenos poseen varios eptopos distintos, por lo que podrn
unir mas de un anticuerpo. Cada molcula de anticuerpo, por su parte, podr unir al menos dos
molculas de antigeno, una por cada Fab y en el caso de la IgM hasta diez molculas (como se
comento anteriormente las inmunoglobulinas IgM se ensamblan en unidades funcionales
constituidas por cinco molculas de anticuerpo). Finalmente en un antgeno, un determinado
eptopo puede estar representado varias veces siendo capaz de unir varias molculas del mismo
anticuerpo. La fuerza total de la interaccin que considera todas las interacciones
eptopo/paratopo que tienen lugar entre antgenos y anticuerpos multivalentes (con varios sitios
de unin), se denomina avidez y es mucho mayor que la suma de las afinidades puesto que las
distintas interacciones se estabilizan entre ellas. Estas interacciones multivalentes poseen una
gran importancia fisiopatolgica por cuanto cuando se encuentren Ag y Ac en solucin, como es
el caso del plasma o los tejidos, se formaran agregados constituidos por muchas molculas que
denominamos Inmunocomplejos. A concentraciones equivalentes de Ag y Ac estos
inmunocomplejos sern de gran tamao y podrn quedar atrapados en los tejidos, iniciando una
respuesta inflamatoria y dando lugar a las llamadas enfermedades por deposito de
inmunocomplejos.

Especificidad de la unin Ag-Ac

La unin entre el Ag y la Ig tiene una gran especficidad, de tal manera que una Ig se unir
fundamentalmente y con mayor avidez, a un antgeno determinado. En algunos casos la
inmunoglobulina podr unirse a antgenos con eptopos muy similares, aunque en este caso la
afinidad de la unin es mucho menor (Tabla 3.7). Tambin es posible que un mismo eptopo se
encuentre con dos antgenos diferentes en cuyo caso el anticuerpo reaccionara con los dos
antgenos, dicindose entonces que existe una reactividad cruzada.

La consecuencia final de la accin de las inmunoglobulinas es la de destruir al antgeno y/o

neutralizar los efectos nocivos de los mismos. Para la consecucin de estos objetivos todas las
inmunoglobulinas poseen, como ya se ha indicado, una caracterstica esencial y comn, que es la
de unirse especficamente al antgeno, caracteristica que depende como hemos dicho, de sus
regiones hipervariables contenidas en el fragmento Fab. Sin embargo, tanto la neutralizacin
como la destruccin del antgeno, lo consiguen de muy diversas formas, dependiendo del tipo y
manera de encontrarse el antgeno y tambin del tipo de inmunoglobulina que interviene en cada
caso utilizando para ello, las regiones constantes y concretamente sus extremos Fc.
Tras la unin del antgeno y la inmunoglobulina, sta puede anular la accin del antgeno por
neutralizacin, precipitacin o aglutinacin del mismo. As si la Ig es especfica para una toxina
bacteriana, cuando se produce la unin Ag-Ac (toxina-antitoxina), quedan neutralizados los
efectos txicos de la toxina. De ah que clsicamente, cuando no se conoca la estructura de las
inmunoglobulinas, se las denominase antitoxinas, precipitinas o aglutininas, en funcin de la
reaccin que se detectaba en cada caso.

Propiedades biolgicas de las inmunoglobulinas.

Los fenmenos de neutralizacin, precipitacin y aglutinacin de los antgenos no son suficientes
por s solos para la destruccin y total eliminacin de stos. Para ello, adems de las
inmunoglobulinas se requiere de la colaboracin de otros muchos elementos, tales como el
sistema del complemento, macrfagos, polimorfonucleares o clulas NK.

Podemos decir que las inmunoglobulinas, al detectar los antgenos y producirse la subsiguiente
unin a ellos, actan como trans-ductores de la informacin de la presencia de los mismos que
seran destruidos por el complemento, macrfagos, los polimorfonucleares o clulas NK a los que
dan especificidad.

Opsonizacin.
Cuando se produce la unin de antgeno e inmunoglobulina G se producen una serie de cambios
alostricos en el extremo Fc de la IgG que hacen que se una a receptores que se encuentran en
la membrana de macrfagos y polimorfonucleares. A este fenmeno se le denomina
opsonizacin (Figura 3.20). Al producirse esta unin, los macrfagos se activan, inicindose el
fenmeno de fagocitosis y subsiguiente destruccin de los complejos antgeno anticuerpo por los
procesos lticos intracelulares, propios de la accin de los enzimas contenidos en los lisosomas
de estas clulas. Estos receptores pueden ser de distinta naturaleza, conociendose en la
actualidad tres de estos receptores: FcgRI, FcgRII y FcgRIII, conocidos en la actualidad como
CD64, CD32 y CD16 respectivamente. Adems de en los macrfagos estos receptores se
encuentran en otras clulas como plaquetas, linfocitos B y NK (Tabla 3.8). Cuando se produce la
unin a clulas NK estas se activan y lisan a las clulas portadoras del antgeno por un
mecanismo conocido como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC).
Cuando la inmunoglobulina que se une a un antgeno es de las clases IgM o IgG, en sus
extremos Fc se producen ciertos cambios alostricos gracias a los cuales stas adquieren la
propiedad de fijar y activar uno de los componentes del complemento. Las fracciones activas del
complemento poseen diferentes acciones muy importantes en la defensa del organismo, una de
las cuales es la lisis celular. Este fenmeno se conoce con el nombre de citotoxicidad mediada
por el complemento.
Adems de estas funciones, las inmunoglobulinas tienen la capacidad de ser esenciales en el
fenmeno de reconocimiento del antgenos por parte de linfocitos B cuando se encuentran
ligadas a la membrana celular de estas clulas como inmunoglobulinas de membrana
constituyendo el receptor para el antgeno del linfocito B. Esta propiedad ser estudiada
extensamente en captulos posteriores.
En la actualidad y utilizando tcnicas de Ingeniera Gentica, podemos construir anticuerpos
monoclonales que contengan una especificidad determinada y que sean del isotipo que
deseemos para que predominen unas u otras funciones biolgicas. Incluso podemos, con fines
teraputicos generar anticuerpos monoclonales de una determinada especificidad en ratones y
posteriormente aislar el ADN que codifica para las regiones hipervariables que confieren la
especificidad y fusionarlo con el ADN que codifica para las regiones constantes humanas, estos
anticuerpos monoclonales humanizados tendrn indudables ventajas desde el punto de vista
teraputico al no ser considerados como extraos por el sistema inmune humano (ver captulo 4).

Propiedades y funcin de cada una de las inmunoglobulinas

Aunque en los apartados anteriores se ha hecho mencin a las propiedades y funcin de las
inmunoglobulinas, a continuacin estudiaremos brevemente y por separado las caractersticas
funcionales ms importantes de cada una de ellas (Figura 3.21).

Inmunoglobulina G.
Son las inmunoglobulinas ms abundantes y representan ms del 70 % de las Igs sricas totales;
las diferentes subclases se presentan en proporciones muy diferentes. La IgG1 es la subclase
ms frecuente (ms del 60 %), seguida de la IgG2 (aproximadamente un 18 %), mientras que
IgG3 e IgG4 se encuentran en mucha menor proporcin.
Esta Ig posee capacidad neutralizante, precipitante, de fijar complemento, de unirse a clulas NK
y a macrfagos (opsonizacin) y son capaces de atravesar activamente las membranas
biolgicas. La propiedad de atravesar activamente las membranas biolgicas es de sumo inters
por lo que, adems de ejercer esta inmunoglobulina, su efecto en toda la economa del
organismo, lo hace tambin en el feto al atravesar la placenta desde la madre, merced a la
existencia de receptores para la porcin Fc en el sincitiotrofoblasto.
Como el feto slo sintetiza pequeas cantidades de inmunoglobulinas, adquiere de este modo la
posibilidad de defensa, no solamente mientras se encuentra en el seno materno, sino incluso
durante la lactancia, perodo en el cual todava no ha desarrollado la capacidad total de sntesis
de inmunoglobulinas.
Sin embargo, este paso de IgG desde la madre al feto no siempre es beneficioso para el feto. De
todos es sabido que cuando hay incompatibilidad del tipo Rh entre la madre y el feto, se puede
desarrollar el sndrome de eritroblastosis fetal como consecuencia de la destruccin de glbulos
rojos fetales, de nefastas consecuencias si no se acude a tiempo. Esto no se presentara si la IgG
no pasase de la madre al feto
La IgG se sintetiza tardamente tras un primer contacto con el antgeno, sin embargo, tras un
segundo contacto la mayora de las Igs formadas pertenecen a esta clase (Respuesta
Secundaria) ( Tabla 3.9).

Inmunoglobulina M.
Los anticuerpos del tipo IgM son los que mas rpidamente se forman en respuesta a un estmulo
antignico (Respuesta primaria). Esta Ig se caracteriza tambin por poseer capacidad
neutralizante, precipitante, aglutinante, fijar complemento, activar la respuesta inmune, sin
embargo no atraviesa activamente las membranas biolgicas. Esta ltima propiedad hace que
esta inmunoglobulina ejerza su accin normalmente en los espacios intravasculares.
Representa del 5 al 10 % de las Igs sricas totales y junto a la IgD es la ms frecuentemente
encontrada en la superficie de los linfocitos B como inmunoglobulina de membrana.
Inmunoglobulina A.
Esta inmunoglobulina posee capacidad neutralizante y precipitante, mientras que su capacidad
de fijar complemento y de opsonizacin son muy dbiles, limitndose su efecto a neutrfilos y no
a macrfagos.
La propiedad ms importante de esta inmunoglobulina viene determinada por su capacidad de
unirse por el extremo Fc a la pieza secretora, gracias a la cual puede ser secretada por las
mucosas y glndulas exocrinas, ejerciendo su accin ms importante en la superficie de mucosas
y lquidos biolgicos (sobre todo IgA2), tales como el liquido cefaloraquideo, secrecin bronquial,
lgrima, saliva, etc. Esto es importante porque as protegen precisamente los puntos ms
vulnerables del organismo, esto es, las puertas de entrada al mismo, como son ojos, boca,
aparato digestivo, sistema respiratorio, vagina, etc. No olvidemos que, por ejemplo, si
desplegamos la mucosa del aparato respiratorio, la superficie que cubriramos es de unos 300
m2, superficie que se encuentra en contacto directo con el exterior a travs del aire que se
respira. Se deduce de ello que, sin duda, deben ser importantes los mecanismos de defensa local
entre los cuales la IgA tiene un papel esencial.
Esta inmunoglobulina se encuentra tambin en la leche materna. Los niveles de todas las
inmunoglobulinas, a excepcin de la IgG en recin nacidos son muy bajos, siendo por tanto de
gran significacin el hecho de que la IgA se transfiera desde la madre al lactante a travs de la
secrecin lctea. De ah que tengamos que insistir en que los lactantes se amamanten en el
mayor grado posible directamente por las madres y no con leche de otros orgenes, a lo que
actualmente existe excesiva tendencia.
La IgA recibida de la madre ejerce un importante papel de defensa a nivel de todo el aparato
digestivo. En ello parece que influyen las especiales caractersticas de pH gstrico del lactante
que es menos cido que en el adulto y una especial resistencia de esta inmunoglobulina frente al
mismo, por lo que no se destruye a su paso por el estmago.
Inmunoglobulina D. .
La concentracin de esta inmunoglobulina en suero es muy baja. Hasta fechas muy recientes no
se haba demostrado que esta inmunoglobulina posea capacidad de unirse a antgenos, por lo
que se dudaba de que actuase con funcin de anticuerpo. Sin embargo, aunque actualmente se
ha demostrado su accin de anticuerpo, no se conoce con precisin cules son sus funciones
especficas, aunque se piensa que colabora de forma importante en la activacin de linfocitos B al
actuar como receptor en la superficie de los mismos.
Inmunoglobulina E.
En muchos individuos alrgicos esta inmunoglobulina se presenta en grandes cantidades. El
estmulo para su sntesis puede proceder de una gran variedad de antgenos, a los que en este
caso se conocen como alergenos. Estos alergenos pueden penetrar en el organismo a travs de
la piel o de las mucosas respiratoria, ocular, del aparato digestivo, etc., as como por inyectables,
como es el caso de la penicilina u otros medicamentos.
La vida media de la IgE en sangre perifrica es de 24-48 horas. No tiene capacidad de atravesar
la placenta, por lo tanto, las reacciones de hipersensibilidad inmediata no pueden transferirse de
manera pasiva de la madre al feto. Sin embargo, puede existir una predisposicin de tipo familiar
a padecer enfermedades de naturaleza alrgica. Esta predisposicin parece estar relacionada
con una tendencia a producir anticuerpos de tipo IgE en la respuesta secundaria frente a
antgenos, en lugar de IgG que seria la respuesta normal en individuos no alrgicos.

La IgE se encuentra en forma libre en sangre (Tabla 3.10) en donde se observa que los niveles
cambian a lo largo de la edad. Tambin la IgE se encuentra en otros lquidos biolgicos as como
unida a basfilos y clulas cebadas, gracias a la propiedad que tiene esta inmunoglobulina de
unirse por su extremo Fc a receptores de superficie presentes en dichas clulas. Estas clulas se
caracterizan por encontrarse en la piel y mucosas y por contener abundantes grnulos
citoplasmticos, ricos en sustancias vasoactivas que liberan una vez se activan.
BIBLIOGRAFA.

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