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Fund. Biologia Cel y Mol de Robertis PDF
Fund. Biologia Cel y Mol de Robertis PDF
JOS HIB
FUNDAMENTOS DE
.
BIOLOGIA CELULAR
YMOLECULAR
DE DE ROBERTIS
Rdiftffial El AtL~eo
Eduardo M. F. De Robertis
Es doctor en Medicina y se gradu con
Medalla de Oro en la Facultad de Medicina
de la Repblica Oriental del Uruguay.
Adems es doctor en Bioqumica de la
Facultad de Ciencias Exactas de la
Universidad de Buenos Aires. Despus de
completar su doctorado en la Fundacin
Campomar se traslad a Cambridge, Inglaterra, para continuar
su entrenamiento con Sir Gurdon en embriologa de anfibios.
Desde 1985 es profesor titular de Bioqumica de la Facultad de
Medicina de la Universidad de California, Los Angeles, donde
ocupa la Norman Sprague Endowed Chair for Molecular
Oncology. En 1994 recibi la distincin de ser nombrado
Investigador del Howard Hughes Medicallnstitute. Ha sido
elegido miembro de la European Molecular Biology (EMBO), de
la Organizacin Iberoamericana de Biologa Molecular (IMBO) y
es miembro correspondiente de la Socit de Biologie de Paris.
Ha recibido distinciones de la Fundacin Konex, del College de
France de Paris y de otras entidades. Es miembro de Consejos
Asesores de numerosas organizaciones internacionales.
Recientemente ha sido elegido miembro de la American
Academy of Arts and Sciences.
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d.l'-
Jos Hib
Se gradu en la Facultad de Medicina de
la Universidad de Buenos Aires. Es
doctor en Medicina de esa universidad y
doctor en Biologa de la Universidad del
Salvador. Tempranamente se dedic a la
docencia y se traslad --como becario
de la Organizacin Mundial de la Saludal Centro latinoamericano de Perinatologa de Montevideo,
dirigido por el profesor Roberto Caldeyro-Barcia.AII realiz
sus primeros trabajos de investigacin, vinculados con la
contractilidad de los rganos del sistema reproductor
masculino y su regulacin farm acolgica y hormonal. Luego se
radic en Buenos Aires, donde como miembro del CONICET
continu con sus investigaciones, que fueron registradas en ms
de 30 publicaciones en revistas extranjeras, o comunicadas en
congresos nacionales e internacionales de la especialidad. En
1986 fue nombrado profesor adjunto del Departamento de
Biologa Celular, Histologa, Embriologa y Gentica de la
Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires y desde
1996 es profesor titular de esa asignatura en la Universidad
Abierta lnteramericana. Fue miembro del Comit Cientfico del
Primer Congreso Panamericano de Androloga y ha sido
premiado por el Ministerio de Educacin de la Nacin por su
t rabajo Contraailidad de/ epiddimo. Es autor de los libros
tnl>rlolo:la Mdica Histologa de Di Fiore - Texto y Atlas-; este
'lt lnu ..11 l:oal q111 lwtlwntlllo~. h:1 sido t raducido al portugus.
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Editorial El At~~~J
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Fundamentos
de Biologa Celular
y Molecular
de De Robertis
Fundamentos
de Biologa Celular
y Molecular
de De Robertis
Eduardo M. F. De Robertis .
Jos Hib
e)Editorial El Ateneo
De Robertis, Eduardo
Fundamentos de Biologa Celular y Molecular de De Robertis
De Robcni s, Eduardo-Hib. Jos
4' ed. - Buenos Aires- El Ateneo, 2004
444 pginas. 16 x 23 cm
ISBN 950-02-0414-2
1. Biologa Celular- 2 fl iologa Molecular- l. Jos Hib JI. Ttulo
CDD 618.2
Prlogo
Tercera edicin publicada en ponugus con el ttulo
De Rober1is - Bases da Biolog ia Celular e Molecular
Guanabara-Koogan, Ro de Janciro. 2001
la
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En primer trmino deseamos expresar nuestro reconocimiento por los numerosos mensajes recibidos de colegas complacidos por la aparicin de la tercera edicin de Fundamentos, celebrando la posibilidad de que este texto clsico de biologa celular pueda continuar siendo consultado por los estudiantes. Es que en una
poca como la actual, en que importantes descubrimientos sobre la clula se publican casi cotidianamente, los libros que describen las estructuras y funciones celulares persisten en la consideracin de los docentes slo si se los actualiza con cierta periodicidad. Sin embargo, antes de sumar datos nuevos stos deben seleccionarse criteriosamente a fin de que lo novedoso no prevalezca sobre lo esencial e invada el lugar de Jos conocimientos bsicos que los estudiantes tienen que aprender
al comienzo de sus carreras, ya que con frecuencia abordan el estudio.de la clula
con escasas nociones sobre su funcionamiento. Aadido a Jo anterior, a lo largo del
libro hemos tratado de orientar el inters de los estudiantes para que comprendan
que en el conocimiento de las estructuras y funciones celulares normales se hallan
los cimientos de la mayora de los temas que debern aprender cuando cursen otras
asignaturas.
Todos los captulos de esta cuarta edicin han sido revisados y puestos al da,
en especial las secciones correspondientes a la migracin celular, las cubiertas de
las vesculas transportadoras del sistema de endomembranas, la incorporacin de
protenas a la mitocondria, la transmisin intracelular de seales, el pasaje de molculas a travs del complejo del poro, la importancia del ARNxist, las propiedades de los rnicroARN, la influencia del enrollamiento de la cromatina sobre la actividad de los genes (cdigo histnico), el ribosoma, la sntesis de la cadena retrasada del ADN, los telmeros, el complejo sinaptonmico, la muerte celular, el anlisis de la funcin de los genes con la ayuda de ARN pequeos de interferencia, etc.
Del mismo modo que en la edicin anterior, hemos tratado de presentar los temas razonablemente abreviados a pesar de que, como se dijo, las publicaciones derivadas de la investigacin cientfica son cada da ms numerosas. No obstante,
cuidamos de no hacerlo a costa de la claridad didctica, propsito que se vio enor111 m nt fav orecido al contar esta edicin con ilustraciones coloreadas. Al respeclo, l'i 1 wr aprec ian~ que a cada componente de la clula se le asign un color que
111 lllltiiiiiVO u lucias Js fi11ras doacl ' l componente aparece. Asimismo, las sec<'i"n'" t' ll que 11<' tli v itltn lo': < 'l tdiJilt~s h:111 s ido t'lwnht'l',ndns pm l'digos s 'IH;illos
V 111
que se repiten cada vez que se hace referencia a cuestiones vinculadas con sus contenidos, lo que facilitar la bsqueda de los temas y agilizar los intentos de integrarlos.
Como es natural, la preparacin de una nueva edicin es una tarea compleja que
depende del esfuerzo de mu chas personas. Entre los colaboradores ms dedicados
se destaca el diseador grfico Alejandro F. Demartini, quien tuvo a su cargo la recreacin de las ilustraciones, la elaboracin de las figuras nuevas y la diagramacin de las pginas. Deseamos resaltar el incalculable aporte que nos brind, no slo por su pericia editorial sino tambin por el empeo con que afront los pro blemas que se presentaron, pues no cej hasta que la esttica y la informacin de las
figuras llegaran al nivel que desebamos.
Merece un a mencin especial el seor Arnaldo Saita, de qui en dependi la correccin del texto original a fin de alcanzar -y no dudamos que lo consigui- la
mayor precisin idiomtica posible. Cabe tambin mencionar a la seorita M arina
von der Pahlen y a los seores Amrica Ruocco, Miguel A. Romero y Roque Quinteros por la colaboracin proporcionada en distintas etapas de la preparacin del libro. Finalmente, dejamos sentado nuestro agradecimiento a la Directora Editorial
de El Ateneo, seora Luz Henrquez, por su anuencia para que se publique esta
nueva edicin de Fund.amentos, y al Editor del Departamento de Medicina, seor
Enrique Lohrmann, por su generoso e incondicional apoyo desde que se gest el
proyecto.
Los A UTORES
Indice
l. LA CELULA
Introduccin......
Niveles de
Caractersticas general es de las clulas .................................... .............. ................. 3
organizaci~::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::: ;
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................................. ......................
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IND!CE
12. EL NUCLEO
Descripcin general........
........................ .... .... .................. ... ................. ... 21 9
Envoltura nuclear ...... ... ................ ... ......... .. ..... ........................ .. .. ......................... 220
Cromosomas. ............... .
...................... ..................... ............................... 225
Eucrolllat ina y heterocromatina ................................................:......................... ... . 10
( ';11 inl n ..... .. ... .. ... .. ..... ... .. .. ... ...... .... .... .... ...... ... .. .. .. .. .. .... ...... .. .. ..... .... ... .... .. .. ..
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XI
XII
La clula
INTRODUCCION
1- 1. Las clu las son las un idades co n que se construyen
los org an ismos vivos
El estudio del universo biolgico nos muestra que la evolucin produjo
una inmensa diversidad de formas vivientes. Existen alrededor de cuatro millones de especies de animales, vegetales, protozoos y bacterias, cuyos comportamientos, morfologas y funciones difieren e ntre s. Sin embargo, a nivel
1110lccular y celular estas entidades vivientes presentan un plan maestro de or~ unizacin nico. El campo de la biologa celular y molecular es, precisalllt.:nte, el estudio de ese plan de organizacin unificado; en otras palabras, es
l' i anlisis de las molculas y de los componentes celulares con que se conslruyen todas las formas de vida.
La clula es la unidad estructural y funcional fundamental de los seres vivos, as como el tomo es la unidad fundamental de las estructuras qumicas.
Si por algn medio se destruye la organizacin celular, la funcin de la clu111 tambin se altera.
Los estudios bioqumicos demostraron que la materia viviente est com(111 sta por los mismos elementos que constituyen el mundo inorgnico, aunqut.: con diferencias en su organizacin. En el mundo inanimado existe una
1rndcncia continua hacia el equilib1io termodinmico, en el curso de la cual
11r producen transformaciones contingentes entre la energa y la materia. En
l'lllllbio, en los organismos vivos existe un manifiesto ordenamiento en las
1111nsformaciones qumicas, de modo que las estructuras y las funciones bio, .~ i cas no se alteran.
l ~n el captulo 23 se describen ordenadamente los mtodos de estudio que
u oporcionaron los conocimientos esenciales sobre la estructura ntima de
lun c lulas y permitieron descubrir la organizacin subcelular hasta un nivel
111111 ' ular.
El presente captulo tiene como objetivos principales ofrecer una introdtt<'l:i<ln para el estudio de la estructura y las funciones de la clula y presen'"' 111 nomenclatura de los componentes celulares. Despus de mencionar los
11 v 1s d organizacin concernientes a la biologa, se describir la organiza' J, 11 structural de los procariotas y los eucariotas - los dos tipos principal, 11 d or.~un i s mos vivientes- y se sealarn sus semejanzas y diferencias.
' i'n llthl 11 intmdut.:id al lector en los procesos generales de las divisiones mi'"'11'11 y 111oi 11 u d las t.:6lulns.
Mttlluntl 111 llll'lll ll 1 '!Jt llm de ~te cupftulo s obt ndrli una perspectivl
l. thll i oh 111 1' 111111, ljlll' H\IJ'V ir dL' h11s ' p111'11 oillpl'lllllli1.1\ll' <iiJ IIIIIICJ'ill l Jll' 1111111 111 1'l.J-!' 1 111Nio 1dt 1 11111,.,
l. LA CELULA
NIVELES DE ORGANIZACION
Ondas de radio
100 )lm
Infrarrojo
Dimensin
Rama
Estructura
Mtodo
> 0,1 mm
Anatoma
Histologa
Citologa
Organos
Tejidos
Clulas
Bacterias
Componentes celulares
Virus
Posicin de los tomos
100-1 0 J.m
10-0,2 J.m
200-0,4 nm
< l nm
M icroscopia electrnica
Difraccin de rayos X
lo cual ampla el campo de observacin hasta el mundo de las macromolculas. Los resultados logrados mediante la aplicacin de la microscopia electrnica han transformado el campo de la citologa en un grado tal que gran parIL! de este libro est dedicado al estudio de los conocimientos obtenidos con
esta tcnica. Por otra parte, los estudios de la configuracin molecular de las
protenas, los cidos nucleicos y otros complejos moleculares de gran tamano - incluidos algunos virus- se realizan mediante el anlisis de las muesIras por difraccin de rayos X .
En la figura 1-1 se indican los tamaos de las clulas eucariotas, las bacIL:rias, los virus y las molculas en escala logartmica, y se los compara con
las longitudes de onda de las radiaciones y con los lmites de resolucin del
oj o humano, del microscopio ptico y del microscopio electrnico. Puede advertirse que el microscopio ptico permite un aumento de 500 veces con respecto a la resolucin del ojo, y el microscopio electrnico un aumento 500
v ces mayor que el microscopio ptico.
En la tabla 1-2 se presentan las relaciones generales entre las dimensiones
lineales y los pesos que se manejan en el anlisis qumico de la materia viviente. Es esencial familiarizarse con estas relaciones para el estudio de la
biologa molecular de la clula. El peso de los -componentes celulares se expresa en picogramos (1 pg = 1 J.l.J.l.g, es decir, 10- 12 g) y el de las molculas
on llalton. Un dalton (Da) es equi valente al peso de un tomo de hidrgeno,
p ro a menudo se utiliza el mltiplo kilodalton ( 1 kDa = 1.000 Da). Por
l"iL!mplo, una molcula de agua pesa 18 Da y una de hemoglobina 64,5 kDa.
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Visible
Ultraviole ta
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10nm ]
Rayos y y X
1 nm
lineo/
y los pesos
Terminologa
Peso
t - - - - - Protenas
ArYIIrlo"nldoll
Bioqulrnca convencional
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Micrmulmicu
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l. LA CELULA
con protenas
Cromosomas
Unicos
Mltiples
Nuclolos
Ausentes
Presentes
Divisin
Fisin binaria
Mitosis o meosis
Ribosomas
Endotnembranas
Ausentes
Presentes
Mitocondrias
Ausentes
Presentes
Cloroplastos
Ausentes
Presentes en
clulas vegetales
Pared celular
No eelulsica
Celulsica en
clulas vegetales
IZxocitosis y endocitosis
Ausentes
Presentes
( 'ihJesqueleto
Ausente
Presente
l. LA CELULA
1".
Membrana externa
protoplasma contiene agua, iones, otros tipos de ARN, protenas estructurales y enzimticas, diversas molculas pequeas, etctera.
El cromosoma bacteriano es una molcula circular nica de ADN desnudo, plegado apretadamente dentro del nucleoide, el cul, visto con el microscopio electrnico, se observa como la regin ms clara del protoplasma (fig.
1-3). Es importante advertir que el ADN de la Escherichia coli, que posee
una longitud aproximada de 106 nm (1 mm), contiene informacin gentica
para codificar entre 2.000 y 3.000 protenas distintas.
El cromosoma de los procariotas se halla unido a la membrana plasmtica. Se cree que esta fijacin contribuye a la separacin de los dos cromosomas hijos despus de la replicacin del ADN. Tal separacin se producira al
crecer la membrana plasmtica interpuesta entre ambos cromosomas.
Adems del cromosoma, algunas bacterias contienen un ADN pequeo
-tambin circular- denominado plsmido. E l plsmido puede conferir a la
clula bacteriana resistencia a uno o a varios antibiticos. Mediante el uso de
tcnicas de ingeniera gentica (cap. 23-34) es posible aislar los plsmidos,
insertarles fragmentos especficos de ADN (genes) y luego traspl antarlos a
otras bacterias.
Micoplasmas. La mayora de las clulas procariotas son pequeas (miden
entre l y 10 f..Lm), pero algunas pueden alcanzar un dimetro de hasta 60 f..Lm.
E ntre Jos organismos vivos que poseen la masa ms pequea, los que mejor
se adaptan para su estudio son las pequeas bacterias llamadas micoplasmas,
las cuales producen enfermedades infecc iosas en di ferentes animal es y en el
h01nbrc y pueden ser cultivadas in vitro como cualquier otra hn 1 'ri ll.
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nor que el tamao promedio de una bacteria y un milln de veces menor que
el de una clula eucariota.
Virus. Los virus fueron reconocidos por su propiedad de atravesar los poros de un filtro de porcelana (de ah su denominacin original de virus filtrabies) y por los cambios patolgicos que producen en las clulas. El tamao
de los virus vara entre 30 y 300 nm y su estructura muestra diferentes grados de complejidad. Muchos presentan simetra icosadrica (fig. 1-4); sta
deriva del modo como se combinan entre s ciertas unidades proteicas llamadas capsmeros, que forman la envoltura del virus o cpside.
Los virus no son considerados clulas verdaderas. Aunque participan de
algunas propiedades celulares -como la autorreproduccin, la herencia y la
mutacin gnica-, dependen de clulas huspedes (procariotas o eucariotas)
para ponerlas de manifiesto. Fuera de la clula husped los virus son metablicamente inertes y hasta pueden cristalizarse; se activan (es decir, se reproducen) cuando ingresan en una clula.
De acuerdo con el tipo de cido nucleico que contienen, existen dos tipos
de virus: 1) los que poseen una molcula de ARN como cromosoma (por
ejemplo, el virus del sida), y 2) los que tienen una molcula de ADN (por
ejemplo, los virus bacterianos o bacteri6fagos).
Los virus replican sus genes para reproducirse. Tambin los transcriben
(en ARN mensajeros), pero dependen de la maquinaria biosinttica de laclula husped (es decir, ribosomas, ARN de transferencia, enzimas, aminocidos, etc.) para sintetizar sus protenas (por ejemplo, los capsmeros).
Los virus son producidos por un proceso de agregacin macromolecular,
lo cual significa que sus componentes son sintetizados separadamente en diferentes lugares de la clula husped y luego reunidos de manera coordinada
en otra parte de ella.
Los bacterifagos son virus que usan como huspedes a clulas bacterianas. El ADN se halla en la cabeza del bacterifago y es inyectado en la bacteria por medio de una cola que se adhiere a la pared de la clula husped y
acta como una jeringa. Los procesos ulteriores en la bacteria son muy rpidos y comienzan con la hidrlisis enzimtica de su ADN. Los nucletidos resultantes son utilizados para sintetizar el ADN de los nuevos bacterifagos.
A partir de este ADN se sintetizan los ARN mensajeros y las protenas estructurales de los virus. Finalmente, se renen todos estos componentes y se arman los bacterifagos maduros dentro de la bacteria infectada. Como se ve
Fig. 1-4. Micrografa electrnica de virus coloreados negativamente . El dibuj o del re-
d 1 lo l l 1 il f1 N11111f IH l
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l. LA CELULA
1-7. Exist e una gran diversidad morfolgica ent re las clu las eucariot as
Las clulas de un organismo multicelular tienen formas y estructuras variables y se diferencian de acuerdo con sus funciones especficas en Jos di stintos tejidos. Esta especializacin funcional hace que las clu las adquieran
caractersticas singulares, aun cuando en todas ellas persiste un modelo de organizacin comn (fig. 1-8).
Algunos tipos celulares, como Jos leucocitos, cambian de forma constantemente. Otros, como las clulas nerviosas y la mayora de las clu las vegetales, poseen una conformacin bastante estable. La forma de una clula depende de sus adaptaciones funcional es, del ci loesqueleto presente en su citoplasma, de la accin mecnica ejercida por las c lulas adyacentes y de la rigidez de la membrana plasmtica.
El tamao de las clulas oscila dentro de amplios lmites. Si bien algunas
clulas pueden observarse a simple vista, la mayora son visibles nicamen-
Membrana plasmtica
Pared celular
Fig. 1-6. Esquema de la ultraestructura de una clula vegetal idealizada, con sus principales componentes.
Cloroplasto
10
Cilio
l. LA CELULA
Microvellosidad
Vescula de
pinocitosis
oo
o
;;o
Membrana
plasmtica
La membrana plasmtica slo puede verse con el microscopio electrnico, que revela sus numerosas diferenciaciones y Jos distintos tipos de estructuras que unen a las clulas entre s o que las conectan con ciertos componentes de la matriz extracelular (fig. 1-7).
La membrana plasmtica controla de manera selectiva el pasaje de solutos. Adems promueve el ingreso y la salida de macromolculas mediante
procesos llamados endocitosis y exocitosis, respectivamente (tabla 1-5). En
las clulas animales la membrana plasmtica suele poseer abundantes hidratos de carbono (fig. 3-14), mientras que en las clulas vegetales su superficie
est cubierta por una segunda envoltura de grosor relativamente estable, denominada pared celular (fig. 1-6).
1-9. El citoplasma contiene una matriz denominada citosol
Lisosoma
te con el microscopio, puesto que tienen unos pocos micrmetros de dimetro (fig. 1- 1) .
El volumen de la clula es bastante constante en los distintos tipos celulares y es independiente del tamao del organismo. Por ejemplo, las clulas del
rin o del hgado tienen casi el mismo tamao en el elefante y en la rata. As,
la masa de un rgano depende del nmero, no del volumen de las clulas.
1-8. La membrana plasmt ica separa el contenido de la clu la
del med io externo
idml
11 Nll NIIJH'I
fi l"i!',
Princ!pales componentes
Subcomponentes
Funcin principal
Membrana celular
Pared celular
Cubierta celular
Membra11a plasmtica
Proteccin
Interacciones celulares
Permeabilidad, exocitosis
y endocitosis
Ncleo
Cromosomas
Nuclolo
Informacin gentica
Sfntcsis de ribosomas
Citosol
Enzimas solubles
Ribosomas
Gluclisis
Sntesis proteica
Citocsqueleto
filamentos inte1medios
Microtbulos y centrosoma
Filamentos de actina
Forma
y movilidad
de la clula
l'structuras microtubularcs
Movilidad ciliar
<h i(unnidcs
Rctlculo cndoplasmtico
tomplcjo de Golgi
Fndosnmos y Iisosomas
Sntesis y procesamicnlo
de lpidos y glcidos
Digestin
Slnlcsis de t\:1'1'
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O lllt
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12
l. LA CELULA
13
Clula
epitelial
mucosa
Clula
epitelial
ciliada
Clula
mucosa
bierta por ribosomas, los cuales sintetizan las protenas destinadas al sistema
de endomembranas y a la membrana plasmtica. El retculo endoplasmtico
liso se contina con el rugoso e interviene en la sntesis de diversas molculas. Del retcuJo endoplasmtico deriva la envoltura nuclear, compuesta por
dos membranas concntricas. Estas se unen entre s a nivel de los poros nudeares, que son orificios que permiten el paso de molculas entre el ncleo
y el citosol. La membrana nuclear interna se halla en contacto con los cromosomas, mientras que la externa suele estar cubierta por ribosomas.
El complejo de Golgi est formado por pilas de sacos aplanados, t bulos
y vesculas (figs. 1-7 y 1-10). En l se procesan molculas provenientes del
retculo endoplasmtico, las cuales son luego incorporadas a endosomas o
son liberadas (secretadas) fuera de la clula por exocitosis.
Los endosomas son organoides destinados a recibir enzimas hidrolticas
provenientes del complejo de Golgi as como el material ingresado en la clula por endocitosis. C uando suman ambos contenidos se convierten en lisosornas.
Los lisosomas son organoides polimorfos (figs. 1-7 y 1-11 ). Contienen las
~.:nzimas hidrolticas responsables de la digestin de las sustancias incorporadas a la clula por endocitosis. Tambin degradan a los organoides obsoletos
( aut.ofagia).
Ovocito
Clulas
de Ja
sangre
M I'Jt1CIIIil
Clula
liol hllldo
lh.
1.as mitocondrias se encuentran prcticamente en todas las clulas euca' iotas. Son estructuras cilndricas de alrededor de 3 .tm de largo por 0,5 .tm
dt di. utclm que poseen dos membranas. La membrana mitocondrial externa
, ,. llllllu stparada d la m<.: u1hrana int erna por e l espacio intermembranoso. La
lllt"tlllll illlll iulnua rodta 11 lu 111111ri1. nliltli"OIIdrial y s halla plt:g:id:t. T":il s
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14
1. LA CELULA
15
triz (figs. 1-7 y 1- 11). La membrana interna y la matriz mtocondrial contienen numerosas enzimas que intervienen en la extraccin de la energa de los
alimentos y en su transferencia al ATP.
Las clulas vegetales poseen organoides denominados plstidos, Jos cuales estn ausentes en las clulas animales. Algunos, como los leucoplastos,
son incoloros y participan en el almacenamiento del almidn. Otros contienen pigmentos y se denominan cromoplastos; entre los ms importantes se
encuentran los cloroplastos, con un pigmento verde llamado clorofila (fig.
1-6). El cloroplasto posee dos membranas, una estroma y un compartimiento singular formado por sacos aplanados denominados tilacoides. En los cloroplastos tiene lugar la fotosntesis, que es el proceso mediante el cual las
plantas captan la energa de la luz y, con el aporte de H 20 y C0 2, sintetizan
diversos compuestos orgnicos que aprovechan como alimento y que sirven
para alimentar a Jos organismos hetertrofos.
Tanto las mitocondrias como los cloroplastos contienen cromosomas circulares pequeos, cuyos genes forman ARNt, ribosomas y unos pocos ARNm
necesarios para elaborar algunas protenas pertenecientes a los propios organoides.
11'1". 1 111. MkroJ.II':I!'fa e lectrnica de una clula plasmlica. Cerca del ncleo (N) se obse1va el complejo de Golgi (G), conslilnltlo p111 pcqll<'l\ns .:islcnms aplanadns
xi,.il' 111111h1111tlanl<' ,.,.,(culo <'IH iopla~nl~liCIII'IIfiO.~o (lli'.'/1) Cllll cistcmns llenas de material amorfo (jle-
, l1n\) NI , llhni~HII lllt. ; /1 / , t11ll1 otuldu.: f.'N, t nvtd lnln ntultm. dH,OOOX; l'l 'llnch'o , I OO.OOCIX. ( lk 1:. 1), 1)( 1\ oh~r'li s
,u,.,,di
lrdth )
y A. P lk-
16
l . LA CELULA
17
Las clulas pasan por dos perodos en el curso de sus vidas: uno de interfase (no divisin) y otro de divisin (en el cual se producen dos clulas hij as). Este ciclo se repite en cada generacin celular, pero el tiempo vara considerablemente de un tipo celular a otro. La funcin esencial del ncleo es
proporcionar a la clula la informacin gentica almacenada en el ADN.
Las molculas de ADN se duplican durante un perodo especial de la intetfase denominado fase S (por sntesis de ADN), en preparacin para la divisin celular (fig. 18-2).
Durante la interfase la informacin contenida en los genes es transcripta
en diferentes clases de molculas de ARN (mensajero, ribosmico y de transferencia), las cuales, despus de pasar al citoplasma, traducen esa informacin y sintetizan protenas especficas.
F:n el ncleo interfsico humano se reconocen las siguientes estructuras
(fig. 1-7): 1) la envoltura nuclear o ca r ioteca, compuesta por dos membranas perforadas por orificios llamados poros nucleares; 2) la matriz nuclear
o nucleoplasma, que ocupa gran parte del espacio nuclear; 3) el nuclolo,
que es ms grande en las clulas con sntesis proteica muy activa, por lo general esfrico; puede ser nico o mltiple y en l se sintetizan los ARN ribosmicos, los cuales se asocian con numerosas protenas para formar Jos ribosomas; 4) 46 cromosomas o fibras de cromatina; stas se compnen de
ADN y de protenas bsicas llamadas histonas.
El ADN y las histonas forman estl1lcturas gran ulares de unos 10 nm de
dimetro - conocidas como nucleosomas- , que alternan con tramos de
ADN libres de histonas. La cromatina as dispuesta es la ms delgada (fig.
12-10) y es capaz de enrollarse sobre s misma en di stintos grados. En la intelfase pueden verse regiones de eucromatina, donde las fibras se encuentran menos enrolladas, y regiones de heterocromatina, que representan las
partes de la cromatina ms condensadas. Durante la divisin celular las fibras
de cromatina se enrollan al mx imo, de modo que se las puede observar con
el mi croscopio ptico bajo la forma de cromosomas (del griego chr oma, color, y soma, cuerpo) (fig. 12- 14).
1-15. Los ncleos de las clulas somticas contienen dos juegos
de cromosomas homlogos
Los organismos plu ricelulares que se reprOd':Jcen sexualmente se desanollan a partir de una sola clula -el cigoto o clula huevo- , que resulta de
la unin de un ovocito con un espermatozoide durante la fecundacin.
Las clulas somticas descendientes del cigoto conti-enen dos juegos idnticos de cromosomas. En otras palabras, los cromosomas se presentan de a
pares. Un cromosoma de cada par es aportado por el ovocito y el otro por el
espermatozoide.
Los dos miembros de cada par de cromosomas se denominan homlogos,
y para indicar el nmero de cromosomas de una especie se hace referencia a
los pares de cromosomas o a los pares de homlogos. Por ejemplo, el ser humano posee 23 pares de cromosomas, 46 en total. Los homlogos de cada par
son prcticamente idnticos, pero los distintos pares de homlogos son diferentes entre s.
Para hacer referencia a la presencia de los dos juegos de cromosomas homlogos se utiliza la expresin diploide (2n). En las clulas somticas ambos juegos de cromosomas se conservan durante las sucesivas divi siones celulares a lo !arpo d ] desarrollo mbrionario, el '1' .:itn<'III<> ''"IJ"" "I y ,.
lllllllh'lllllli<'lllo .,. los !ejido,;"" l:o v ida l" "'"alal.
Fl, 1 11 , l T i " perifrica de 1111a ' lula hcp~lica en la que, Clllre otros componentes, se observan Jisosomas (L), el ncleo
1Nl. "" <'llulll h'ulu hi linr (1 '/1) , ouioocundrin" (M) , 1 rctf u lo udoplasmoico (NJo.') e illclu.,inn<:s de glucgeno (G /). 3 1.000x .
( j ,
11 ~l f ll d t ~
1 1{ 1 1111 1 ~1 )
1
18
l. LA CELULA
MITOSIS
11(' 11 C"ll
el
MEIOSIS
Interfase
2n
Interfase
Profase
(larga y
compleja)
Profase
(corta)
l
_;)?
Metafase
<~
~
Metafase 1
19
H
~
Ana fase
<'
-- ()
Anafase 1
.( ).
1
Tolofase
2n
Telofase 1
J \
Telofase 11
1n
1n
1n
1n
l"l11. f- 12. 1\Nqttr ttutS otnparutivos el lutnitosis y la mc iosis de ttna clttla d iploidc (2n) con cuatro cromosomas. Los cromo1111111 PII U't'lh'IIIC\ln~.-ndn prngtniltll' t'll~ n rtpr{WIIIndot: l'llll'l,lll y 'rl r(ljo, r-csf)'clivamcnlc. P.nln mitosis, la divisin es ecua~
1111111 ,
tH
lrl lr~lllt iW
tpl('ll'll
lu l l lt 'U if~irl f'l rcthu t lllllll , 1,IW t iC I/ tliviNitiiH'N tk Ju llll" itr~dN 1h 111 1111 nr n C:llll(l'tl t'~ lrtl us lutplr1itlcs (/n)
A tli 11 1/ht , dtll !llt ll 111 lll('luNh.j 1~11( Mil' 1111 111 11 11 '11111hl11 d( Nt,J,A IIH~IIItl/, (' 11111' lo. t'llllllllf.tllllll/1,
20
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Los componentes
qumicos de la clula
INTRODUCCION
2- 1. Los componentes qumi cos de la clula se clasifican
e n inorgnicos y orgnicos
La estructura de la clula es la consecuencia de una combinacin de molculas organizadas en un orden muy preciso. Aun cuando queda mucho por
aprender, se conocen los principios generales de la organizacin molecular de
la mayora de las estructuras celulares, como los cromosomas, las membranas, los ribosomas, las mitocondrias, los cloroplastos, etc. La biologa de la
;lula es inseparable de la de las molculas; de la misma manera que las clulas son los bloques con que se edifican los tejidos y los organismos, las molculas son los bloques con que se construyen las clulas.
Al principio el estudio de la composicin qumica de la clula se hizo
tnediante el anlisis bioqumico de rganos y tejidos enteros, como el hgado, el cerebro, la piel o el meristema vegetal. Estos estudios slo poseen un
valor citolgico relativo porque el material analizado est compuesto generalmente por una mezcla de diferentes tipos celul ares y contiene material exlracelular. En los ltimos aos el desarrollo de diversos mtodos de fracciouamiento celular (caps. 23-28 a 23-32) penniti aislar los elementos subcelulares y recoger una informacin ms precisa sobre la estructura molecular
d..: la clula.
Los componentes qumicos de la clula se clasifican en inorgnicos (agua
minerales) y orgnicos (cidos nucleicos, hidratos de carbono, lpidos y
protenas).
Del total de los componentes de la clula un 75 a 85% corresponde a
IIJ.:Ua , entre el 2 y el 3% son sales inorgnicas y el resto son compuestos or.ft nicos, los cuales representan las molculas de la vida. La mayor parte de
l11s estructuras celulares contienen lpidos y molculas muy grandes -denoruinadas macromolculas o poJmeros-, integradas por unidades o monnreros que se enlazan entre s por medio de uniones covalentes.
En los organismos existen tres importantes polmeros: 1) los cidos nul'lclcos, conformados por la asociacin de cuatro unidades qumicas diferenlts d nominadas nucletidos; la secuencia lineal de los cuatro tipos de nuk <ilidos en la molcula de ADN es la fuente primaria de la informacin ge11\'I :r; 2) los polisacridos, que pueden ser polmeros de glucosa - con la
<' ll i rl s1 l'onna lucgeno, almidn o celulosao comprender la repeticin
.,. ptms lltollosa;ridos, con los que se forman polisacridos ms comple.,il, y \) lus Jll'flfcinus (polip <pliclos), que estn constituidas por aminoci..,;r xi:.lnr 20 lipos t't>11rhi11:rdos L' tt dikro111 s propor io11s; l:rs distinl l t ~ l ' h lllitf nd ( ~/l
e,/
pn,hll',', dt 1",(11:;
hlplll'
ll
22
J'i~.
un extraordinario nmero de combinaciones, Jo que determina no sio la especificidad sino tambin la actividad biolgica de las molculas proteicas.
Adems de destacar las caractersticas y propiedades de los componentes
qumicos de la clula, en este captulo abordaremos el estudio de las enzimas
- un tipo especfico de protenas- como instrumentos moleculares capaces
de producir transformaciones en muchos de esos componentes.
Tambin veremos cmo las macromolculas pueden agregarse y organ izarse en estructuras supramoleculares ms complejas hasta resultar visibles
con el microscopio electrnico. Es probable que tales agregaciones moleculares hayan actuado durante el perodo de evolucin qumica y biolgica que
dio origen a la primera clula. Por tal motivo, al fi nal del captulo haremos
algunas consideraciones especulativas acerca del posible origen de las clulas procariotas y e ucatiotas, es decir, de la aparicin de la vida en nuestro planeta. Los conceptos vertidos en este captulo slo sirven como una introduccin elemental para el conocimiento de la biologa molecular y celular. El estudio ms amplio de sus temas compete a los textos de bioqumica.
AGUA Y MINERALES
ele la clula. La retencin ele iones produce un aumento de la presin osmtica y, por lo tanto, la entrada de agua.
Algunos iones inorgnicos (como el Mg2) son indispensables como cofactores enzimticos. Otros forman parte de distintas molculas. El fosfato,
por ejemplo, se encuentra en los fosfolpidos y en los nucletidos ; uno de stos, la adenosina trifosfato (ATP), es la principal fuente de energa para los
procesos vitales de la clula. Los iones de Ca2 que se hallan en las clulas
desempean un importante papel como transmisores de seales. Otros iones
presentes en las clulas son el sulfato, el carbonato, etctera.
Ciertos minerales se e ncuentran en forma no ionizada. As ocmTe con el
calcio, que en los huesos y en los clientes se halla unido al fosfato y al carbonato bajo la forma de cristales. Otro ejemplo comprende al hieno, que en la
hemoglobina, la ferritina, los citocromos y en varias enzimas se halla ligado
por uniones carbono-metal.
Para mantener la actividad celular normal son indispensables diminutas
cantidades de manganeso, cobre, cobalto, yodo, selenio, nquel, molibdeno y
cinc. Casi todos estos elementos vestigiales (u oligoelementos) son necesarios para la actividad de ciertas enzimas. El yodo es un componente de la hormona tiroidea.
ACIDOS NUCLEICOS
2-3. Existen dos clases de cidos nudeicos, el ADN y el ARN
Los cidos nucleicos son macromolculas de enorme importancia biolgiTodos los seres vivos contienen dos tipos ele cidos nucleicos, llamados
cido desoxirribonucleico (ADN) y cido ribon ucleico (ARN). Los virus
contienen un solo tipo de cido nucleico, ADN o ARN.
El ADN constituye el depsito de la informaci n gentica. Esta informa~ in es copiada o transcripta en molculas de ARN mensajero, cuyas secuencias de nucletidos contienen el cdigo que establece la secuencia de los
aminocidos en las protenas. Es por ello que la sntesis proteica se conoce
tambin como traduccin del ARN. A esta serie de fenmenos se le asigna
el carcter de dogma central de la biologa molecular, que puede expresruse
ele la siguiente manera:
~a.
transcripcin
traduccin
ARN
ADN
-----~
PROTEINA
,,;,,,,.
{ l'hlmidhliH'
A uu''''''HII ,,
dcsoxirrihosa
ribosa
adcnina, llllllinn
('iltulhtn, liminn
adcnina, guanina
ji(
),J 1,
ci!osinn, umrilo
1'0,11'
23
24
25
Localizacin
. Principalmente en el ncleo
(tambin en las mitocondrias y los cloroplastos)
. Papel en la clula
Acido ribonucleico
Principalmente en el citoplasma
(tambin en el ncleo, las mito
condrias y los oloroplastos)
Informacin gentica
Sntesis de protenas
Pentosa
Desoxirribosa
Bases pirimidnicas
Citosina
Ribosa
Citosina
Uracilo
Timit1a
Bases purnicas
Adenina
Guanina
Adenina
Guanin.a
En 1953, basndose en los datos obtenidos por Wilkins y Franklin mediante difraccin de rayos X, Watson y Crick propusieron un modelo para la
( lll
ln.lnht CA'f'l'),
26
estructura del ADN que contemplaba las propiedades qumicas antedichas, pero tambin las propiedades biolgicas, en especial la capacidad de duplicacin de la molcula.
La molcula de ADN se ilustra en la figura 2-4. Est formada por
dos cadenas de cidos nucleicos helicoidales con giro a la derecha,
que componen una doble hlice en torno de un mismo ej e central.
Las dos cadenas son antiparalelas , lo cual significa que sus uniones
3',5'-fosfodister siguen sentidos contrarios. L as bases estn situadas
en el lado interior de la doble hlice, casi en ngulo recto con respecto al eje helicoidal. Cada vuelta completa de la doble hlice comprende 10,5 pares de nucletidos y mide 3,4 nm.
Ambas cadenas se hallan unidas entre s mediante puentes de hidrgeno establecidos entre los pares de bases (seccin 2- 10). Puesto
que entre las pentosas de las cadenas opuestas existe una distancia fija, pueden establecerse dentro de la estructura solamente ciertos pares de bases. Como se advierte en las figuras 2-4 y 2-5 , los nicos pares posibles son A-T , T-A, C-G y G-C. Es importan te observar que
entre las A y las T se forman dos puentes de hidrgeno, y entre las C
y las G, tres. En consecuencia, el par C-G es ms estable q ue el par
A-T. La doble estructura helicoidal se mantiene estabilizada gracias
a los puentes de hidrgeno y a las interacciones hidrofbicas existentes entre las bases de cada cadena .
Si bien en las distintas molculas de ADN las secuencias de las
bases a lo largo de las cadenas varan considerablemente, en una misma molcula de ADN las secuencias de las dos cadenas son complementarias, como se aprecia en el siguiente ejemplo:
Cadena J
5' T
1
Cadena 2
3' A
G
1
1 1
G A
G A
1 1
e
1
3'
5'
Fig. 2-5. Los dos pares de bases del ADN. Las bases complementarias son adenina y ti
mina (A-T ) y citosina y guanina (C-0). Obsrvese que en el
par A-T hay dos puentes de hidrgeno, mi entras que en el
G T 3'
1
A 5'
Debido a esta propiedad , al separarse las cadenas durante la duplicacin del ADN, cada cadena individual sirve de molde para la sn5'
3'
tesis de una nueva cadena complementaria. De este modo se generan
Fig. 2-4. Se muestra la doble
dos molculas hij as de ADN con la misma constitucin molecular que posea
hlice del ADN . Las cadenas
la progenitora (cap . 17-2).
desoxirribosa-fosfato se dibu
jaron como cintas. Las bases
2-5. Exist en varios tipos de ARN
son perpendiculares al eje del
ADN, de ah que en esta vista
La estructura del ARN es semejante a la del ADN, excepto por la presenlateral aparezcan representa
das por barras horizontales.
cia de ribosa en lugar de desoxirribosa y de uracilo en lugar de timina (tabla
Advirtase que las dos cade
2-1). Adems, la molcula de ARN est formada por una sola cadena de nunas son antiparalelas y que la
cletidos.
doble hlice da una vuelta
completa cada 10 pares de ba
Existen tres clases principales de ARN: 1) ARN m ensajero (ARNm); 2)
ses (3,4 nm). Obsrvese ade
ARN r ib osmico (ARNr), y 3) A RN de transferencia (ARNt). Los tres
ms que la doble hlice da luintervienen en la sntesis proteica. El ARNm lleva la informacin gentica
gar a dos bendiduras exteriores, el surco mayor y e l surco
-copiada del ADN- que establece la secuencia de los aminocidos en la
menor del ADN.
protena. El ARNr re presenta el 50% de la masa del ribosoma (el otro 50%
son protenas), que es la estructura que proporciona el sostn molecular para
las reacciones qumicas que dan lugar a la sntesis proteica. Los ARNt identifican y transportan a los aminocidos hasta el ribosoma.
Aun cuando cada molcula de ARN tiene una sola cadena de nuc le6tidos,
eso no significa que se encuentra siempre como una estru~ tlll'll liut:JI siJllpl .
En las molculas de ARN suelen ex istir tramos l:Oll has,... ' '""'I,J, '"' 111111 !IS ,
lo que cla lu gar a pucnl<'s dt hidr!lg<'ll<>. <'S tk r i1 . 11 lu 1~>111 111 11111 d1 1""' 1 ,J,
27
11ucletidos A-U y C-G entre varias regiones de la misma molcula. Las figuras 14-20 , 15-4, 15-5, 15- 11 y 16-3 muestran cmo la mol cula de ARN
puede aparear algunas de sus pai es. En ellas suele formarse una estructura
l1elicoidal semejante a la del ADN. Las estructuras tridimensionales de los
/\ RN tienen importantes consecuencias biolgicas.
HIDRATOS DE CARBONO
2-6. Los hidratos de carbono const it uyen la princi pal fuente
de energ a de la c lula
Los hidratos de carbono, compuestos por carbono, hidrgeno y ox[geno,
re presentan la principal fuente de energa para la clula y son constituyentes
structurales importantes de las membranas celulares y de la matriz extracelular. De acuerdo con el nmero de mo nmeros que contienen, se clasifican
un monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos .
Monosacridos. Los monosacridos son azcares simples con una frmub general C 11 (H 2 0 ) 11 Sobre la base del nmero de tomos de carbono que
,<>nti cnen, se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas y hexosas.
Cnnto vimos, las pcntosas rihosa y desoxirribosa se hallan en los nucl.erid<>s ( f'i g. 2-2). l .a losa 's 1111:1 pentosa presente en algunas glicoprotenas
(1 ig. ' 11 ). l .n glrti'II.Wt, qu s una li 'xosa ( fig. 2-6), constituye la fuente prilll!n ill dt l'lll'll' fll pfll lt 111 v lnl:t. t )!las lil' X t~s!l s IIIIIY difnndid;ts q u ' su len
, ~JI I u l 'ltlt 1nd .,r. t 'IIIH ,r lt!I Jtl h1lnrn11 clt illi r nnJu'nrldon o pnli ~n, rid l)s
.~ tHJ
1
,;,,., V t l titJ
28
---o
~H
o - CH - TH
90
HNCOCH3
S erina
GalNAc
Gal- GaiNAc -O- ST
Gal - GaiNAc /
CH,OH
-- - 0
CH,
~H
o - eH - TH
HNCOCH3
Protena
GaiNAc
?O
Treonina
GlcNAc
llnpnrnnlna
~
'f;ll
11
11
111
HcXH2
HO~H 2
HO H2
R
H
1111
fl
11
)1
1 lH
29
11
'111
30
CH, -O H
-- 0
o~
'
0 1
0
:
NH
'
'
'
'
o~
s
!-C)'o~
0
NH
''
'
"n
CH O
CH2 -0H
CH 2 -0-C0-(CH2 ln-CH,
+ HOOC-(CH21n-CH,
/Etanolam~r1a
COOH
Agua
CH -
Alcohol
0 - CO - (CH,I, - CH,
Senna
~Colina
~ l nositol
O= P - 0 -
CH 2 -0H
Diacilglicerol
CH, - - CH - - CH,
CH, - 0 - CO - (CH,I,-
CH,
1
C=O
1
(CH 21..
C=O
_.....o-
eH,- o -
1
(CH,I..
P;:;;:gH
CH 3
Acido fosfatdico
CH 3
La combinacin del glicerol con los dos cidos grasos y el fosfato da lugar a una molcula llamada cido fosfatdico (AF) (fig. 2-1 3), que constituye la estructura bsica de los glicerofosfolpidos. Como se acaba de sealar,
.;stos poseen un segundo alcohol, que puede ser la etanolamina, la serina, la
olina o el inositol (fig. 2-14). Con ellos se obtienen los fosfolpidos llama-
(CH2)n
1
Cl-1 3
Los grupos carboxi lo de estos cidos reaccionan con los grupos hidroxilo
del glicerol de la manera expuesta en la figu ra 2-1 2.
Cuando slo dos carbonos del glicerol se hallan li gados a cidos grasos,
la molc ula se llama diacilglicerol (DAG) (fig. 2- 13).
Los cidos grasos tienen siempre un nmero par de carbonos, ya que se
sintetizan a partir de grupos acetilo de dos carbonos. Por ejemplo, el cido
palmtico tiene 16 carbonos, mientras que el esterico y el oleico poseen 18.
La cadena hidrocarbonada suele exhibir uniones dobles (- C=C-), y en este
caso se dice que el cido graso es insaturado. Estas dobles ligaduras son importantes porque producen angulosidades en las cadenas hidrocarbonadas
(fig. 2-20).
NH
1
U! ,
Cll
1
'"
1
' 111
hu t
IHir l l UH fi dd11
+ H,O
Triacilglicerol
Acidos grasos
Glicerol
+ H,O
NH
Xil, xilosa.
+ HOOC-(CH,In-CH,
OH
2-7. Los triac:ilg liceroles, los fosfolpidos y los esteroides son los lipidos
ms abundantes de la clu la
+ H,O
LIPIDOS
CH,- 0 -CO-(CH,In-CH,
+ HOOC-(CH, ln-CH,
31
1 11
O= ~ - o
o ~ ~ - o
o
1
Cll
o'
'
CH1
CH 2 - CH - CH 1
CH 2 - ?H -7H1
o'
o'
o'
'
'
'
ff ff rr
1 q ll!lhlll
t !lhlil
"O
o~
HO
o
C:ll
'
CH,
'
CH,
'
HO
'
'
~H~
H- c - coo
CH ~
1)
CH,
H3C......_. ~ _...CH 1
~HJ
~ll.l
o1
OH
OH
P- o
l
o1
CH1 - CH - CH,
o'
'
o'
'
rr
32
Q;:;~-0-
o =~-o-
?.
O = ~ - o1
O= P- o
O = P- 0
CH - c:H - JH
CH,-c:H -
o1
o1
ff
Foslatidilinositol difosfalo
o1
TH,
ff 'ri
NH
1
ff
Fosfatidilinositol trifosfato
OH
CH,- ?H - ?H
o1
Dado que el nositol del PI suele estar combinado con uno, dos o tres
los glicerofosfolpidos fosfatifosfatos, la clula tiene tambin fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP), fosfatidilinositol fosfato (PIP). fosdilinositol 4,5-difosfato (PIP2 ) y fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato (PIP3 )
falidilinosilol difosfa1o (PIP, )
y fosfatidilinositol trifosfato
(fig. 2-16).
(PIP,).
Por otra parte, en la membrana interna de las mitocondrias existe un glicerofosfolpido doble denominado difosfatidilglicerol, al que comnmente se le
da el nombre de cardiolipina (cap. 8-11 ). Lo componen dos cidos fosfatdicos ligados entre s por una tercera molcula de glicerol (fig. 2-1 7).
El esfingofosfolpido existente en las clulas es la esjingomielina, que se
genera por la combinacin de la fosforilcolin a con la ceramida (fig. 2-18). La
fosforilcolina (un fosfato unido a la colina) se halla tambin en la fosfatidilcolina (fig. 2-15), mientras que la ceramida se forma por el agregado de un
cido graso a la esjingosina, que como ilustra la fi gura 2- 19 es un aminoalcohol que posee una cadena hidrocarbonada relativamente larga.
La figura 2-20 muestra que los fosfolpidos poseen dos largas colas hidrofbicas no polares (dos cidos grasos) y una cabeza hidroflica polar constituida por glicerol (excepto en la esfingomielina), un segundo alcohol y un fosfato. Por lo tanto, los fosfolpidos son molculas anfipticas.
Los fosfolpidos son los principales componentes de las membranas celulares y tanto su anfipata como las caractersticas de sus cidos grasos (nmero de carbonos, presencia de dobles ligaduras) les confieren mu?H~-?H - 7H 1
chas de sus propiedades. Ms an, cuando los fosfolpidos se disperO
OH
O
1
1
O = P - OH
HO - P= O
san en agua, adoptan espontneamente una organizacin idntica a la
1
1
o
o
de las membranas celulares, con sus cabezas polares dirigidas hacia
1
1
?H,- ?H- CH
CH - yH - ?H
afuera y sus colas no polares enfrentadas entre s en el interior de una
o
o
o
o
1
1
1
1
bicapa (cap. 3-2).
Glicolpidos. Los glicolpidos presentes en las clulas se clasifican
en cerebrsidos y ganglisidos.
Los cerebrsidos se forman por la unin de una glucosa o una galactosa con la ceramida (fig. 2-21). As, se trata de esfingomielinas
cuyas fosforil colinas se reemplazan por uno de esos monosacridos.
La estructura bsica de los ganglisidos es similar a la de los ceCardiolipina
rebrsidos, pero el hidrato de carbono no es la glucosa ni lagalactosa
sino un oligosacrido integrado por varios monmems, tlltll :1 l rl's d
Fig. 2-17. Molcula del difosfatidilgicerol o cardiolipina.
los cuales son cidos silicos (fi g. 2-22). Los distintnr. lou or1 do 1'""
Fig. 2-16. Representacin de
OH
Fosfalidilinositol fosfato
OH
o1
CH,
o
HO
OH
CH,
11
i ) l o - ?"
P-o
o:. P-o
o J11 oi ) oH
HO
CH,
H 3C....._.~_...CHl
1
1
~H
CH
11
lf
OH
CH, -CH - CH
1
~H
OH
OH
CH,-CH- CH
1
"NH,
~H
'l f f
Cera mida
Esfingomielina
Esfingosina
glisidos difieren entre s tanto por el nmero como por el ordenamiento relativo de sus monmeros. El monosacrido unido a la ceramida es casi siempre una glucosa y a continuacin se ubica una galactosa. Luego suele hacerlo una N-acetilgalactosamina o una N-acetilglucosamina, y luego otra glucosa u otra galactosa. A veces existe una fucosa. Generalmente el o los cidos
silicos se localizan en la parte final del oligosacrido.
~H , e
Colina {
Fosfatot
Glicerol
H,C- ~ -CH,
'"
1
'1"
o
o-l -o0
1
0
1
~
H
1
H
1
1
o
"-e--c--e-"
1
o
O=C
'
"CHz.
Hz.C,
"'
o= e
H,e
"'' eH,
Hz.C,
H,e
H,C
' eH,
He
eH,
/
' eH,
H,e
H,e
H,e
'
eH,
/
H,c, .
_,eH,
H1C'
' eH,
'
'' "
CH,
,CHa
H1 C,
Colas
hidrofbicas
---+-"'e H
/
eH,
'/ eH,
CH,
/
Oleato y
palmltato
Cabeza
hrdrotflica
"'
HtC,
CH,
eH,
J<'lu. 2-211. l'osfoiCpido ~"" Nll " 'ho7n hhJrorrlicn y sus do.~ colns hidrof'hicns. El fosfolfpi, "1""'"'"'""" " 111 pnliiiii,JI "lt-11 for.I'nlitllkolllln, Oh:u.\,vcso f!lll" In tmlt.11 doble t\11 d
t'ldn uh h 11 prudiH't 1111 lllnhlo d( dlH~l'l i llt~ll In t\IHk nn hidrnt'lllhouudn (//tldllll.
33
34
OH
O- CH1 -
~H
OH
Glucosa
o
galaclosa
CH-
O= C
PROTEINAS
HocH,oH
o
OH
~H
~H
?H
~~ 0 ~0-CH, -CH-CH
OH
11
CH
OH
Acido silico
~H
OH
Galactosa
~H
O= ~
Glucosa
~H
Cerebrsido
Ganglisido
H
1
CH2
11
CH
CH-(CH2 ) 3-CH
CH,
11
CH
: C- CH 3
' 1
: CH
' 11
: CH
CH
'
:
-1--- --n
(15a 19)
1
yH,
CH2 - 0 - PO,"'
Flg. 2-23. Multl uln ele- rok.'ll (rol, dtivudH dt'l oupu sin
tf< 1 / l ' lllfllllltl'l IJ illlllldo tlt ~J.,Jilllll lllltiJinlldthtd t\IIUIIIIt \llll,
Dolicol fosfato
Benzoqulnona
'
: CH- CH 3 :
lsopreno
?H - CH3
Colesterol
:tH:----;
1-----,
' CH
'
: 11
:
11
: CH
'
H,~~~(!~)
' 1
oV
ocH,
OCH3
Ulllqlllll
llfl
1/lllf'll' llnl) V
C1
COOH
1{
y - CH3
CH,
Esteroides. Los esteroides son lpidos que derivan de un compuesto denominado cic lopentanoperhidrofenantreno. Uno de los ms difundidos es el
colesterol (fig. 2-23), el cual se encuentra en las membranas y en otras partes de la clula y tambin fuera de ella. El hidroxilo de su carbono 3' le confiere propiedades anfipticas.
Los esteroides asumen funciones diferentes de acuerdo con los grupos
qumicos que se hallan unidos a su estructura bsica. Los principales esteroides del organismo son las hormonas sexuales (estrgenos, progesterona, testosterona), las hormonas suprarrenales (cortisol, aldosterona), la vitamina D
y Jos cidos biliares.
Polipr enoides. Los poliprenoides son compuestos que derivan del hidrocarburo isopreno (fi g. 2-24). Entre ellos se halla el d olicol fosfato, una molc~la pertenec iente a la membrana del retculo endoplasmtico diseada para mcorporar oligosaciridos a los polipptidos durante la formacin de las
glicoprotenas (cap. 7- 16). Se trata de una cadena de 17 a 2 1 isoprenos que
COntiene entre 85 y 105 tomos de carbono, esterificada con un fosfato (fig.
2-24). Otro poliprenoide com n en las clulas forma parte de la u biquinona,
una molcula de la membrana mitocondrial interna (cap. 8-11) que consta de
una cadena de 10 isoprenos y de una be nzoquinona (fig. 2-24).
CH,
Por ejemplo, en la alanina la cadena lateral R Ltcue un solo carbono, mientras gue en la Jeucina tiene cuatro.
La figura 2-25 mueslra la estructura de los 20 tipos de aminocidos existentes en las protenas. Dos son cidos (cido asprtico, cido glutmico);
tres son bsicos (histidina, lisina, arginina); cinco son neutros polares, es decir, hidroflicos (serina, treonina, tirosina, asparagina, glutamina), y diez son
11eutros no polares, es decir, hidrofbicos (glicina, alaniria, valina, leucina,
isoleucina, cistena, prolina, fenilalanina, triptfano, metionina). Los nombres de los aminocidos se abrevian utilizando las tres primeras letras de la
nomenclatura inglesa (salvo cinco excepciones) o medi.ante un cdigo que
emplea una sola letra.
Advirtase gue dos de los aminocidos contienen un tomo de azufre. En
el caso de la cistena, dos molculas de ella pueden formar un puente disulf'uro (-S-S- ). Esta unin es de tipo covalente, ya que los tomos de H de ambos gmpos -SH son eliminados (fig. 2-27).
La combinacin de los aminocidos para formar una molcula proteica
se produce de modo tal que el grupo NH2 de un aminocido se combina con
el grupo COOH del aminocido siguiente, con prdida de una molcu la de
agua (fig. 2-26). La combinacin -NH-CO- se conoce con el nombre de
unin peptdica. La molcula formada mantiene su carcter anfotrico porque siempre contiene un grupo NH2 en un extremo (ami no terminal) y un grupo COOH en el otro extremo (carboxilo terminal), adems de los residuos laterales bsicos y cidos.
Una combinacin de dos aminocidos constituye un dipptido; de tres, un
tripptido. Cuando se unen entre s unos pocos aminocidos, el compuesto
es un oligopptid o (fig. 2-26). Finalmente, un polipptido est formado por
muchos aminocidos. La protena ms grande del organismo contiene alrededor de 27.000 aminocidos (cap. 5-33).
La distancia entre dos uniones peptdicas es de aproximadamente 0,35
nm. Una protena con un peso molecular de 30 kDa est constituida por 300
aminocidos y, extendida, tiene una longitud de unos 100 nm y un ancho de
!11m.
El trmino protena (del griego protefon, preeminente) sugiere que todas
las funciones bsicas de las clulas dependen de protenas especficas. Se
p11 d~,; decir que sin protenas la vida no existira; estn presentes en cada cilil;t y n cada or unoidc. Ade ms, pueden ser estructurales o e nzimticas.
1\x islt'll III'Utcnns cm\ju~udus, unidas a porciones no proteicas (grupos
p1t>111l'lirw: ), 1\ r ~ laral corfa p ncncccn las :licopmlef11as (asociadas con hiolt itlooM ,, , t 'l llllllllOI) , l aN ll lll'floolfol 11f11a.\' ( t' OIII I<"d01s IIIW!ciros) . las lipopr o l,,l,llt \
(ttlll f' l ll
tl'l) y l 11 ~
t ' lllltn
rn u un~.!< tl, ,,
35
36
un pigmento. Dos ejemplos de cromoprotenas son la hemoglobina y la mioglobina, en las cuales el grupo prosttico es el hem, un compuesto orgnico
que contiene hierro y que se combina con oxgeno.
Acido asprtico
Acido glutmico
Histidina
Lisina
Arginina
(Asp)(D)
(Giu)(E)
(His)(H)
(lys) (K)
(Arg) (l<)
1
H 3 N-C-eOO
1
eH,
1
eH,
1
eH,
1
eH,
1
NH,
H,N-c-coo-
H,N-e-eOO
H,N-e-eoo-
'
eH,
~\
CH,
1
e
eH,
1
e
CH 1
1
e=eH
1
1
NH
HN
~ 1
e
o-
~\
.~
H 3 N-e-eoo-
1
N- H
1
e=NH 1
1
NH 1
Tirosina
Asparagin a
Glutamina
(Tyr)(Y)
(Asn)(N)
(Gin) (Q)
H 3 N-e-eoo-
H,N-e-eoo-
H,-e-eoo-
1
e H,
H - C-OH
e11,
1
OH
eH,
H,N-e-eoo-
eH,
eH,
eH,
#\
NH 1
~\
OH
NH 1
NEUTROS POLARES
Glicina
Alanina
V atina
leucina
(Giy)(G)
(Aia)(A)
(Vai)(V)
(le u) (l)
H,N-c-coo-
H,N-e - eoo-
eH,
H,N-c-coo1
eH
/ '\
Cll,
CH 3
lsoleucina
(lle) (1)
H,N-C-eoo-
Cisterna
Prolina
(Pro)(P)
Fenilalanina
(Phe) (F)
H,N-c-eoo-
H 1 N-e-CooH,e
Nt'l'lll,'llt'IIITIIII
Tript fano
Metion ina
(Trp)(W)
(Met)(M)
H,N-c-eoo-
re) '"
oH
H H
OH H
OH H
OH H
OH H
11
11
11
11
11
H-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-N-C-C-OH
_.,. ...._,
'l
...-)
Y'
C - 0 1-1
CH
CH1
CH 7
CH1
h7 C
CH~
~ .
Carboxilo terminal
CH -....
H3C
CH 1
CH,
OH
H,N-c-coo-
1
eH 1
()j
1
eH,
1
N
H
~O
eH,
CH,
NEUTROS NO POLARES
OH
/\mino terminal
H- C-OH
CH,
CH,
,~,-
CH,
eH,
eH,
eH
H - Cl OH
"-/
CH,
SH
Unin
eH
eH,
1
eH,
H,N-C-eC><Y
H HO H HO
H-~-b-~-~-b-~-OH
/'\
/'\
(Cys)(C)
H
1
H,N - c-eoo-
eH,
CH,
11
(Thr)(T)
H-N-C-C-OH
Treonina
H H
11
Serina
HaN-e-eoo-
11
CH 1
(Ser) (S)
H
eH,
1
eH,
1
eH,
BASICOS
ACIDOS
H H
H- N-e-C-OH
37
S
1
CH 1
lll.'lii!Oil
dtlmjn tk IoN ntupur: !llll iuu y 1'/nhox Hu ;Htulur/ I'Hi kiiU /1 lult' t ll lt 11 1
1111 poltllt ~ .
11111
u lln ~ , 11
d rl lf~fuml ,
(1 ,. 1 ', U
38
39
Fi~.
. La estructura terciaria es consecuencia de la formacin de nuevos plegamtentos en las estructuras secundarias hlice a. y hoja plegada B. lo que da lugar a la configuracin tridimensional de la protena. Los nuevos plegamientos se producen porque se relacionan qumicamente ciertos aminocidos distantes entre s en la cadena polipeptdica. Segn e l plegamiento que adoptan,
se generan protenas fibrosas o globulares (fig. 2-29). Las protenas fibrosas
se forman a partir de cadenas polipeptdicas (o de tramos proteicos) con estructura secundaria tipo hlice CY. exclusivamente. En cambio, las protenas
globulares se forman tanto a partir de hlices a. como de hojas plegadas B. 0
de una combinacin de ambas.
La estructura cuaternaria resulta de la combinacin de dos o ms polipptidos, lo que origina molculas de gran complejidad. Por ejemplo, la hemoglobina es el resultado de la integracin de cuatro cadenas polipeptdicas
(fig. 2-30).
NH 3
o
1
COOH
c~- NH2
NH2 +
CH 3
/ o
C=O
Fig. 2-31. Tipos de uniones
no covalentes que estabilizan
la estructura de las protefnas:
uni n inica (amarillo); interaccin de van dcr Waals (cehsfl) ; puente de hidrgeno
( ro .w ); inhrnc.;ci(HJ hidrof6hi
COOH
]1
.. ,.)
40
COOH NH
coo-NH
3+
coo- NH
"t)'~OO=H~"t)'~oo=-~"t)'""
Fig. 2-32. La ionizacin de
las protenas depende del pH
del medio.
En medio cido
las protenas
tienen carga +
En medio alcalino
las protenas
tienen carga -
A pH igual al
punto isoelctrico
la carga es nula
mientras que las no cova!entes se disocian por fuerzas fi sicoqumicas. Aunque individualmente las uniones no covalentes son dbiles, cuando son numerosas hacen que la estructura molecular se vuelva estable, como ocurre
con la doble cadena del ADN.
ENZIMAS
Es oportuno advertir que en la clula ex isten molculas con actividad enJ irntica q ue no son protenas sino cidos ribonucleicos. Reciben el nombre
d ribozimas y catali zan la formacin o la ruptura de las uniones fosfodisl n entre los nucletidos (ver captul os 15-5 y 16-10).
"'T
[ES]
""
E+P,
Nll
41
42
E n la unin del sustrato con el sitio activo de la enzi ma pa rticipan fue rzas qum icas de naturaleza no covalente (uniones
inicas, p ue ntes de hidrgeno, fue rzas de van der Waals) , c uyo radio de acci n es muy limitado. Esto ex plica por qu el
complejo e nzima-sustrato slo puede formarse si la e nzima
tiene un sitio exacta mente compleme ntario al expuesto e n la
superficie del sustra to .
E+ S
lrato cada vez mayores. En el texto se describen la Vm~x y la Km. La curva es una hiprbola
=o
rES]
K,
En la seg unda etapa el compl ej o ES se desdobl a e n el produc to y la enzima, que queda di spo nible para actuar sobre una
n ueva molcula de sustrato:
K,
[ES]
=o
E+ P
Km+ [S]
los (' fr
1111
inhi
En la secci n anterior se d ijo que si se diagram a la veloci dad de reaccin de una enzima en funcin de la concentraci n
creciente del sustrato, se observa que para muchas enzimas la
curva dibuja una hiprbola (fig. 2-34). As, a med ida que se
agrega ms sustrato aumenta la canlidat.l t.l la u:r.i11 1u 11 1
<.;Oillpl j o ES y au1n nl n la velo idad di' :tp:tl , ,,., ., 1 1"' .,,,..
1!1, JH ~ ru l ' tlll
dt /lf,
d(l
Fig. 2-35. Cintica de la enzima alostrica ATPasa, que muestra una curv:1 sigmoidea caractcrfsticn en lug:11 de una hi p6rhola. Ohs6rvcnsc
V= Vm; x [S ] '
Concentracin de s ustrato
il l 'l lt nl ~ , 11
1 l1od ,1 111
1,1, 11'
~ l lll tnlltt , ll l'ldt t/1 y ( llr d u~J llllt ' ii'II ' U f, r<r. nl llr h1 lr n rri!H'iun dr ~ '11111
111 111 rn 11
dr , ul11 ~ ,
y ,
1lrr11 tll r ll
43
44
45
Evolucin
qufmica
Molculas bigenas,
agua, amonio,
formaldehdo,
cido cianhdrico,
acetonitrilo, etc.
Aminocidos, azcares,
bases de los cidos
nucleicos
Protenas
Polisacridos
lun
l ltcdt t ull ll t
Acidos nucleicos
"---. Proteinoides
Evolucin
l)lolgica
\
Cdigo gentico
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Primer procariota
Primer eucariota
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elCtricas,
luz u~ravioleta
calor, presin
Una vez que se form la primera protena pudieron haber actuado los mecanismos de agregacin o autoensamblaje descritos ms arriba. De esta manera podran haberse originado las funciones en:zimticas. Es probable que en
1 "caldo" primordial las macromolculas hayan formado complejos ms
grandes, denominados proteinoides o coacervados, que tienen una pared semejante a la de una membrana y un interior lquido. Estos proteinoides prilllitivos pudieron tener actividad enzimtica y permeabilidad, como en el caso de las membranas artificiales que mencionaremos en el captulo 3-2. Empero, la ausencia de cidos nucleicos impidi su continuidad, y es posible que
tu vieran una vida muy corta, dado que no podan autorreproducirse.
---~
PROTEINAS
L - - - -->ADN
r11 1:! T ic ; se. inic.: it. a p:utir dl' 1111 solo orgath In t' v o l u t ' l n ll , lll /li ' ln 't IOII !II 1:1', ll tiii iH ' inll t' 'i
46
favorables en las clulas, llevaron ms tarde a una variedad asombrosa de formas de vida.
Es posible que los primeros procariotas fueran hetertrofos (es deci r, se
nutrieran con molculas orgnicas). Ms tarde aparecieron los procariotas auttrofos, como las algas azules. Gracias a la fotosntesis se produjo y acumul el oxgeno en la atmsfera, y ello hizo posible el surgimiento de clulas
procariotas aerbicas.
La clula eucariota pudo haberse originado despus de lu aparicin de una
clula eucariota anaerbica. Esta debi ser parasitada por una procariota aerbica, que ms tarde se conv irti en mitocondria (cap. 8-29).
De acuerdo con cienos restos fsiles, los organismos eucariotas debieron
haber aparecido unos 1.500 millones de aos atrs --al establecerse una atmsfera de oxgeno estable- y, como dijimos, tales organismos pudieron ser
primero anaerobios y luego aerobios. Hasta entonces la vida se hallaba solamente en el agua, desde donde las plantas y los animales pasaroll a la tierra.
El surgimiento de la reproduccin sexual, millones de aos despus, aceler la evolucin de las formas vivientes, que hasta entonces era relativamente lenta. Los sexos hicieron posible el intercam bio de informacin gentica
entre los individuos, mientras que la mutacin y la seleccin produjeron las
diferentes formas vivientes que hoy se e ncuentran en nuestro planeta.
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1'1~.
nul ,11
1111 11 11 11
ndnunll
t '
lul1u
48
49
3 L AS MEMBRANAS CELULARES
Aceite
Fig. 3-5. Micrografa electrnica de cuatro membranas celulares (MC). En cada una se
Agua
misores, factores de crecimiento y otros inductores qumicos. A partir de estos receptores se desencadenan seales que se transmiten por el interior de la
clula; sus primeros eslabones se sitan cerca del receptor, en general en la
propia membrana plasmtica (cap. 11-8).
--~
~-~-
~~ o=
=o
0::= :::::::::::0
0::= ==o
o== :::::::::0
o:=::::= =::o
o== :::=o
::=o
o= =-o
0:=
o:=-:;:;-"()
(.~
Ct
t ,
' l
,1
puestos a las clulas; para ello se los construye en un medio acuoso al que se
le agrega uno o ms compuestos (medicamentos, cosmticos), lo cual asegura su incorporacin al interior vesicular.
Cuando se colocan fosfolpidos entre dos soluciones acuosas separadas
por uh tabique incompleto, forman una bicapa lipd.ica que completa la separacin (fig. 3-4). Aqu tambin las cabezas polares de los fosfolpidos se dirigen hacia las soluciones acuosas y los cidos grasos se otientan hacia el interior de la bicapa, que por tal motivo resulta altamente hidrofbico. Estas bicapas liplicas artificiales se construyen para estudiar la permeabilidad y las
propiedades flsi coq umicas de las membranas biolgicas, dado que exhiben
una estmctura bsica y un compot1amiento semejantes.
3-3. Los fosfolpdos son los lpdos ms abunda ntes
de las membranas celulares
u q11r :-;
hlrnpnt~
"'11
las
50
Rotacin
Desplazamiento
late ral
F'ig.
3~ 8.
M (W inli cn(o,"!
qnt.: cx-
di
[ 1 1 hil 11
tus con soluciones salinas. De la superficie de las protenas emergen los residuos de los aminocidos polares
(fig. 2-25), los cuales interactan con grupos qumicos
de la propia membrana y de los medios que la baan.
Las protenas integrales se hallan empotradas en
las membranas, entre los lpidos de la bicapa, por lo
que para su extraccin se necesitan procedimientos relativamente drsticos, mediante detergentes o solventes
<:speciales. Algunas se extienden desde la zona hidrofbica de la bicapa hasta una de las caras de la membrana, por donde emergen (fig. 3-9). Otras, en
cambio, atraviesan la bicapa totalmente, de ah que se las llame transmembranosas (fig. 3-9). El extremo carboxilo de estas protenas suele hallarse en
d iado citoslico de la membrana y el extremo amino en el lado no citoslico. Dichos extremos se vinculan con los medios acuosos que baan a ambas
sLtperficies de la membrana, por lo que poseen un predominio de aminocidos hidroflicos. En cambio, las partes de las protenas integrales que se hallan entre los cidos grasos de los fosfolpidos presentan una mayor proporcin de aminocidos hidrofbicos. Comnmente la zona intramembranosa
exhibe una estructura secundaria en hlice a, con su superficie exterior hidrofbica en contacto con los cidos grasos, tambin hidrofbicos (fig. 3-1 0).
Muchas protenas transmembranosas atraviesan la bicapa lipdica ms de
una vez -de ah que se llamen multipaso-, por lo que forman una sucesin
de asas cuyas curvas emergen por ambas caras de la membrana (fig. 3-10).
Algunas protenas transmembranosas se asocian con otras para formar estructuras cilndricas huecas, como las que se muestran en la figura 3-21. Sus
aminocidos se distribuyen de tal manera que la pared exterior del cilindro
hueco -en contacto con los cidos grasos- resulta apolar, mientras que la
superficie interna se halla cubiet1a por grupos polares, los cuales delimi.tan un
tnel cuyas bocas se abren en ambos lados de la bicapa. Ms adelante analizaremos las caractersticas de estos tneles y su importancia para el transporte de los solutos a travs de las membranas.
Debe agregarse que existen protenas que se comportan como integrales
-pues requieren mtodos drsticos para ser removidas- pero que tienen posiciones perifricas. Su estabilidad en la membrana se debe a que se hallan li':adas mediante uniones covalentes a un cido graso o a un fosfatidilinositol,
segn estn en el lado citoslico o en el lado no citoslico, respectivamente
(fig. 3-10).
En la seccin 3-7 se ver que muchas protenas membranosas estn asociadas con hidratos de carbono, es decir, son glicoprotenas. Ms an, en la
membrana plasmtica casi todas las protenas pertenecen a esta categora.
51
52
Como los lpidos, las protenas tambin pueden girar en tomo de sus propios ejes y desplazarse lateralmente en el plano de la bicapa. Se las ha comparado con "icebergs" que flotan en la bicapa lipdica. A esta propiedad dinmica de las membranas biolgicas se le da el nombre de mosaico fluido.
La capacidad de migrar por la bicapa indicaria que las interrelaciones qumicas entre protenas y lpidos son efmeras. Sin embargo, en la mayora de
los casos tienen cierta estabilidad. As, los lpidos que rodean a una protena
dada se mantienen asociados a ella, lo cual parece ser importante para asegurar la configuracin de la protena. Comnmente las protenas membranosas
muestran propiedades diferentes cuando se encuentran en las membranas y
cuando han sido aisladas y purificadas. Ello ha llevado a revalorizar el entorno lipdico en que se hallan y a reconocer la existencia de movimientos combinados de las protenas con los lpidos. Ms an, las actividades de las protenas podran variar por modificaciones en los lpidos anexos.
Algunas protenas de la membrana plasmtica tienen restringida su movilidad lateral por hallarse unidas a componentes del citoesqueleto, los cuales las inmovilizan en determinados puntos de la membrana (cap. 5-24) (fig.
5-31). Por otra parte, la unin oclusiva (cap. 6-11) (fig. 6-9) impide que las
protenas pasen de un lado al otro del lmite marcado por ella (fig. 3-27).
3-6. La fluidez de las proteinas en la bicapa lipidica ha si do
comprobada mediante distintas tcnicas biolgicas
+
Clula humana
53
Virus
-----.
Sendai
Clula de ratn
Heterocarin
unin de las clulas se consigue con la ayuda del virus Sendai inactivado o
del polietilenglicol, cuyas propiedades fusgenas propician el contacto y la
integracin de las membranas plasmticas. Si previamente se marcan las clulas con sendos anticuerpos fluorescentes de colores diferentes (como la
fl uorescena, que es verde, y la rodamina, que es roja), luego de la fusin pueden reconocerse en la membrana plasmtica del heterocarin las partes aportadas por cada clula. No obstante, debido a que los receptores marcados se
desplazan por la membrana, pronto Jos dos colores se entremezclan en toda
la superficie de la clula.
En la figura 3-13 se representa el posible mecanismo molecular de fusin
de membranas. Cuando se hallan prximas entre s y bajo la influencia de elementos fusgenos (en nuestro caso, el virus Sendai o el polietilenglicol), se
suceden los siguientes fenmenos: 1) se despejan las protenas mymbranosas,
lo que deja a las bicapas sin otro tipo de molculas que los lpid9s; 2) las bicapas establecen ntimo contacto a travs de sus respectivas monocapas enfrentadas; 3) dichas capas desaparecen y se desarrolla una interfase de estructuras lipdicas hexagonales entre las dos monocapas restantes (esta interfase
parece ser esencial en todos los procesos de fusin de membranas); 4) finalmente, la interfase desaparece y se completa la fusin. El mecanismo descrito se produce en todos los procesos fisiolgicos de fusin de membranas y en
ellos intervienen agentes fusgenos presentes en el citosol. Se describirn
<:uando anal.icemos la dinmica de las vesculas transportadoras en el sistema
de endomembranas (cap. 7-41) y la fusin del espermatozoide con el ovocito durante la fecundacin (cap. 19-19).
Otro mtodo utilizado para estudiar el desplazamiento lateral de las protenas en el plano de las membranas es la tcnica de recuperacin de la fluorescencia despus del foto blanqueo, conocida con la sigla FRAP (por jluorescence recovery after photobleaching). Aqu ciertas protenas membranosas son marcadas con fluorocromos y un pequeo sector de la membrana es
irradiado con rayos lser. Dicho sector se "blanquea", es decir, queda sin
fluorescencia. No obstante, pronto es invadido por protenas fluorescentes
......
54
55
mucosa intestinal las protege del contacto con los alimentos y de los efectos
destructivos de las enzimas digestivas.
2) Debido a la presencia de cidos silicos en muchos de los oligosacrillos del glicocliz, la carga elctrica en su superficie es negativa. Ello atrae a
los cationes del medio extracelular, que quedan retenidos en la cara exterior
lle la clula. Esta condicin es importante particularmente en las clulas nerviosas y en las musculares, puesto que necesitan incorporar gran cantidad de
Na de fcil disponibilidad durante la despolarizacin de sus membranas.
3) Algunos oligosacridos del glicocliz son necesarios para los procesos
lle reconocimiento y de adhesin celular (caps. 6-8 y 6-9).
4) La membrana plasmtica que circunda varias veces el axn de algunas
neuronas para formar la vaina de mielina contiene abundantes glicolpidos,
los cuales contribuyen al aislamiento elctrico del axn.
5) La especificidad del sistema ABO de grupos sanguneos se halla determinada por ciertos oligosacridos muy cortos y parecidos entre s, presentes
en la membrana plasmtica de los glbulos rojos. Estos oligosacridos slo
difieren por sus monmeros terminales y estn ligados a una protena transmembranosa o a una ceramida, como muestra la figura 3-15. As, en los eritrocitos pertenecientes al grupo A el monosacrido terminal de la cadena oligosacrida es la N-acetilgalactosamina y en Jos del grupo B es la galactosa;
cuando estos monosacridos terminales estn ausentes los eritrocitos pertene~:en al grupo sanguneo O (fig. 3-15).
6) En las clulas tumorales malignas se han observado cambios en algunos oligosacridos membranosos, lo cual ha llevado a postular que influyen
n la conducta anmala que ellas asumen. Se cree que alteran la recepcin de
las seales que controlan las divisiones celulares.
7) Algunas toxinas, bacterias y virus se unen a oligosacridos especficos
presentes en la membrana plasmtica de las clulas que atacan. Por ejemplo,
se sabe que algunas bacterias se unen a las manosas de oligosacridos de la
membrana plasmtica de las clulas que infectan como paso previo a su invasin. Por otro lado, para iniciar sus acciones patgenas, algunas toxinas
- como las que elaboran las bacterias del clera, del ttanos, del botulismo y
de la difteria- se unen selectivamente a oligosacridos de ganglisidos presentes en la superficie celular.
8) En algunas clulas, determinadas glicoprotenas del glicocliz tienen
propiedades enzimticas. Por ejemplo, diversas glicoprotenas pertenecientes
al glicocliz de las clulas que revisten el intestino son peptidasas y glicosidasas que tienen por funcin completar la degradacin de las protenas y de
los hidratos de carbono ingeridos, iniciada por otras enzimas digestivas.
Glucosa
Galactosa
N-Acetilglucosamina
N-Acelllgalaclosamlna
1 IJC :C)fl{l
(1
11
56
Existe un flujo continuo de sustancias que entran y salen de la clula y circulan por su interior. Para ello, los solutos (es decir, los iones y las molculas pequeas) deben pasar a travs de las membranas celulares; tal fenmeno
se denomina permeabilidad y ser estudiado en las prximas secciones de este captulo.
En lo que respecta a las macromolculas, para atravesar las membranas
algunas utilizan canales proteicos especiales llamados translocones, otras pasan por poros de sofisticada composicin y otras se valen de vesculas pequeas. Estas transferencias sern analizadas en los captulos dedicados al sistema de endomembranas (caps. 7-1 y 7- 12), la mitocondria (cap. 8-28), el peroxisoma (cap. 10-5) y la envoltura nuclear (cap. 12-4).
3- 1O. El pasaje de solutos a travs de las membran as celulares
puede ser pasivo o activo
Bicapa lipdica
Q)t~
Canal inico
Permeasa
-e: -E
Q)
::>
u g
e !:;
(!)
traciones (fig. 3-17). Esta diferencia se denomina gradiente de concentracin. Si el soluto posee carga elctrica, gravita adems el gradiente de voltaje o potencial elctrico que se establece entre los distintos puntos de la solucin. La suma de los gradientes de concentracin y de voltaje se conoce como gradiente electroqumico. La difusin a favor de tales gradientes es un
proceso que ocurre espontneamente, sin gasto de energa, de ah que lleve
el nombre de transporte pasivo.
3- 12. La difusin simple se produ ce a travs de la bicapa lipidica
El transporte pasivo de solutos puede tambin ocurrir entre compartimientos acuosos separados por membranas semi permeables, como lo son las
bicapas lipdicas de las membranas celulares. Este tipo de transporte se denomina difusin simple. Dichas membranas se llaman semipermeables porque los solutos estn obligados a sortear el tamiz que representa su doble capa de lpidos.
Las sustancias que se disuelven en los lpidos atrav iesan con cierta facilidad la zona hidrofbica de las membranas. Existe una relacin lineal directa
entre la solubilidad en Ipidos de una sustancia y su velocidad de difusin a
travs de las membranas semi permeables. Tal relacin se expresa mediante el
coeficiente de particin aceite/agua, que se mide agitando el soluto en una
mezcla de ambos fluidos. Cuando se separan las dos fases, se determina la
concentracin de la sustancia disuelta en cada una de ellas. La relacin concentracin del soluto en aceite/concentracin del soluto en agua da el valor
del coeficiente de particin.
Las molculas no polares pequeas -como el 0 2 , el C02 y el N2 - difunden libremente a travs de las bcapas lipdicas (fig. 3-18). Tambin lo hacen
compuestos liposolubles de mayor tamao, por ejemplo, los cidos grasos y
los esteroides. A pesar de ser molculas polares, el glicerol y la urea atraviesan fcilmente las membranas celulares porque son pequeas y no poseen
carga elctrica .
La bicapa lipdica de las membranas celulares permite el paso del agua
por difusin simple. Debido a que el agua constituye el solvente en que se haN2
C02
02
H2 0
Urea
Esteroides
Acidos grasos
Glicerol
Nucletidos
Aminocidos
Glucosa
lo~
[;l
Qi
Permeasa
...... ----.
~T~
57
nlfu In
lillllhl
Difusin
lrll;llllnclro
Dlfuuln
lndlltrotlu
58
- Difusin simple
~----7"--1
-Difusin facilitada
Km
Concentracin del soluto
llan disueltos los solutos y dispersas las rnacromolculas, el sentido del movimiento de las molculas acuosas depende del gradiente osmtico entre
ambos lados de la membrana. En la seccin 3-16 se analizarn otros aspectos
vinculados con el pasaje del agua a travs de las membranas celulares.
La difusin de las molculas polares a travs de la bicapa lipdica es tanto menor cuanto mayor es su tamao; las hexosas, los aminocidos y los nucletidos, por ejemplo, prcticamente no difunden. En cuanto a los iones, dada su carga elctrica se unen a varias molculas de agua, lo cual les impide
atravesar la bicapa lipdica por ms pequeos que sean (en el captulo 2-2 vimos que el agua se comporta corno un dipolo).
La difusin simple se realiza en forma espontnea, con una velocidad directamente proporcional a la diferencia de concentracin (o gradiente) del soluto entre uno y otro lado de la membrana, como se observa en el grfico de
la figura 3-19. Debe sealarse que la pendiente de la recta depende del grado
de permeabilidad de la membrana al soluto. Como se vio, el sentido de la difusin depende del lado en que se halla ms concentrado el soluto.
~ vor de gradientes -es decir, sin gasto de energa- lo hacen a una veloci-
~~~~~-~,'
. -
t_
()
59
dad mayor a la esperable si su pasaje fuera por difusin simple. La diferencia se explica por la presencia de ciertos componentes membranosos proteicos llamados canales inicos y permeasas, a travs de Jos cuales se facilita
- aunque tambin se regula- la transferencia de Jos solutos de un lado al
otro de la membrana.
El sentido de la difusin se realiza siempre a favor de los gradientes de
concentracin y voltaje. As, ante una inversin de esos gradientes, el sentido de la difusin tambin se invierte. Como vemos, en la difusin facilitada
la fuerza que im ulsa la movilizacin de las partculas del soluto es el gradiente,_y por Jo tanto no consume energa. D~sde es:epu~~ifu
sin facilitada es similar a la difusin simple; la diferencia reside en que en
la primera participan estructuras proteicas reguladoras y en la segunda no.
Durante el transporte pasivo de solutos por difusin facilitada, los complejos soluto-canal inico y soluto-permeasa muestra ;;_ar~sticas de especificidad y saturabilidad similares a las del complejo enzirna-sustra!Qi As, si en
un sistema de coordenadas se representa la velocidad del flujo en funcin de
la concentracin del soluto, se obtiene una curva hiperbli<:a, lo (' ll i tl n:n a
una notable diferencia con la rclaci6n lineal di r ela de la dilu""" 1'"'1',. (lig.
1- I'J). l .a hip hola s S\'IIU'ianl<' 11 11 di vadu d1 In '" li vu loul o'" """"' ''' ''"
funcin de la concentracin del sustrato (fig. 2-34). Tal comportamiento indica que el proceso es saturable. Cuando en un canal inico o en una perrneasa se alcanza la velocidad mxima de flujo, sta ya no aumenta por ms que
se incremente la concentracin del soluto.
Igual que en el caso de las enzimas, se puede definir la constante Km corno la concentracin de soluto en que se al canza la mitad de la velocidad mxima de flujo. En la mayoa de las circunstancias el valor Km tiene una relacin inversa con la afinidad del transportador por el soluto. ~e/~
~m. mayor es la afinida~ y v~~sa:.1 En consecuencia, en este tipo desiste
ma la velocidad de flujo del soluto puede expresarse mediante una ecuacin
similar a la empleada para las enzimas (cap. 2- 15):
l= _ l mx
_ [S]
_ ,
Km+ [S]
Extracelular
Na
12
145
K'
140
Mg1'
Ca2 '
11 '
('J
1II'Cl ,
0,5
< 0,0005
pll 7,2
JO
,,
1,5
1,5
pH 7,4
110
10
',l
1 (
,r
60
/
Jo"ig. 3-21. Esquemas tridilllCnsionales de los canales illicos d pendientes de vnltaj<
(A) y tk lij\a11d11 (JI).
61
.,, ., d c e ' 11 t
1''
ele
!1 11 11IJ1 d
de .nlllfll' ,,
l. , hu
lh' "
I I U I 1\ h lllht UIHI j!
.,
62
Como en los canales inicos, la pared de las permeasas est comnmente integrad por varias prote.nas transmembranosas multipaso. Cada ermeasa p~s~sitios de uninlespecficos para ~ o dos clase.s de solu~os, accesibles desde- una o desde ambas caras de la bicapa. La fijacin de oluto pr.oduce un_cJ!mbio conf
aco al en la e~asa, merced al cual se transfiere
el material hacia el otro lado de la membrana (fig. 3-24).
En esta seccin slo analizaremos a las permeasas que permiten el traspaso pasivo de solutos, correspondiente al mecanismo de difusin facilitada. La
aclaracin se debe a que la clula posee protenas transportadoras similares
pero conformadas para el traspaso activo de solutos, con gasto de energa
(seccin 3-18).
Existen tres clases de permeasas (fig. 3-25): 1) las que transfieren un solo
tipo de soluto; esta forma de transferencia se llama monotransporte (en ingls, uniport); 2) las que transportan dos tipos de solutos simultneamente,
ambos en el mismo sentido; este mecanismo se denomina cotransporte
(symport); 3) las que transfieren dos tipos de solutos en sentidos contrarios;
esta clase de transferencia recibe el nombre de contratransporte (antiport).
Debe sealarse que en el cotransporte y en el contratransporte las transferencias de Jos dos solutos se hallan acopladas obligadamente, es decir, una no se
produce sin la otra.
,... Son ejemplos de difusin facilitada mediante permeasas: 1) el monotransporte de glucosa y el cotransporte de Na y glucosa en la membrana plasmtica de las clulas de la mucosa intestinal (seccin 3-21); 2) el contratransporte de Na y H a travs de la membrana plasmtica de casi todos los tipos
de clulas; 3) e_l contratrans orte de Cl- y HC03- por una permeasa de la
membrana plasmtica de los eritr2sitos, llan1ada band<:_3 (cap. 5-36); 4) el
contratransporte de ADP y ATP por la membrana interna de la mitocondria
(cap. 8-16) (fig. 8-10).
Monotransporte
Cotransporte
Uno de los sistemas de transporte activo ms difu ndidos es el que establece las diferencias en las concentraciones de Na y de K entre el interior de
la clula y el lquido extracelular, que por ello es responsable del mantenimiento del potencial elctrico de la membrana plasmtica. Se lo denomina
bomba de NaK+ o Na+K+-ATPasa y tiene por funcin expulsar Na al espacio extracelular e introducir K en el citosol (fig. 3-26). Dado que transfiere solutos diferentes en sentidos contrarios, se trata de un sistema de contratransporte.
La bomba de NaK es un complejo integrado por cuatro subunidades
- dos a y dos~ (<Xz~ 2 )-, que son protenas integrales de la membrana plasmtica. Cada subunidad a posee una masa de alrededor de 100 kDa y atraviesa la membrana unas ocho veces. En cambio, cada ~idad p_es una glicoprotena de unos 45 kDa que posee va~"ias ~ oligosacridas en el.extremo que da a la cara no citoslica de la m_:_~b~a. Los lpidos de la bicapa vecios a las cuatro ca enas polipeptdicas infl uiran en el funcionamiento de la bomba, ya que sta se inactiva cuando se la asla y se ex traen los lpidos que la acompaan.
Las subunidades a tienen sitios especficos para la fijacin del Na en sus
extre-;;:;;;;ctoslicos y sitiosrese~;;-dos para la unin del K en sus extremos
~os. La~ transferencias de Na hacia el exterior y de K hacia el citosol
se hallan acopladas: una no puede realizarse sin la otra. Como consecuencia,
el funcionamiento de la bomba provoca el intercambio de Na intracelular
por K extracelular; ambos flujos se reali zan en contra de sus respectivos gradientes.
El sistema necesita e nerga, que se obtiene de la hidrlisis del ATP. Para
ello, la NaK-ATPasa cataliza dicha hidrlisis mediante una reaccin que requiere la presencia no slo de Na y de K sino tambin. de Mg2. El A:TP se
une a un siti espec.fiE.2_ d~ la subunidad a en la cara itoslica de- la mem-
+ ++++ ++
IT ITITITITIT IT
~~~uu~u
63
Contratransporte
Fig. 3-25. Tipos de pcnneasas
segn sean atravesadas por
uno o por dos solutos y, en el
segundo caso, las direcciones
en que lo hacen.
64
\'
e
Glucosa
/\
1'
Na' e
brana y su hidrlisis se halla acoplada al transporte de los iones. Cada ATP que se hidroliza posibilita el transporte de tres Na hacia el espacio extracelular y de dos K hacia el citosol. El resultado
del funcionamiento de la bomba puede resumirse
mediante esta ecuacin:
3 Na + 2 K, + ATP -> 3 Na, + 2 K; + ADP+ P ,
El sentido del flujo puede revertirse s i las concentraciones de Na'e y de K; aumentan por encima de ciertos lmites y se agrega ADP y P; en este
caso la NaK-ATPasa acta como una ATP sintasa. No obstante, normalmente la bomba acta de
acuerdo con la ecuacin antedicha: expele tres Na
~
por cada dos K que ingresan (fig. 3-26). lo crea
Glucosa
la diferencia de voltaje (o el potencial elctnco)
que existe entre ambos lados de la membrana plasmatica, donde el lado citosl.ico es normalmente electronegativo con respecto aliado extracelular (fig.
3-26). A asj_ombas que g~neran o~nciall s elctr~s 9e f(!embrana se las
gefjne como electrog11icas.
"'
K'
Durante su funcionamiento, la NaK-ATPasa atraviesa ciclos de fosforilos capilares sanguneos siJacin y desfosforilacin que determinan cambios alternados en su forma. De
tuados debajo del epitelio.
los mecanismos propuestos para explicar cmo acta la bomba, el que ms se
Aunque la glucosa ingresa en
ajusta a Jos resultados experimentales es el siguiente:
la clula en contra de su gradiente, lo hace pasivamente. (
1) En las subunidades a existen sitios de alta afinidad para tres Na', un
2
Ello se debe a que entra junto
ATP y un Mg ', fcilmente accesibles desde la superficie citoslica de la
con el Na a travs de una
membrana plasmtica. Cuando se produce la hidrlisis del ATP, se libera el
permeasa cotransportadora
pasiva. Sin embargo, este
ADP y el tercer fosfato es transferido a un cido asprtico de uoa de las subtransporte de glucosa insume
a, lo cual propicia la fijacin de tres Na en el interior del transunidades
energa, ya que el Na debe
portador.
ser expulsado hacia la matriz
extracelular por el lado
2) Pronto se produce un cambio conformacional en la estructura de la peropuesto de la clula mediante
measa. Como resultado, los Na quedan expuestos hacia el lado exterior de la
una permeasa activa, la bomclula. Adems disminuye su afinidad por las subunidades a, por lo que Jos
ba de NaK.
Na son liberados en el medio extracelular.
)
.-!..,
,..;--L
'\
4) Tal desfosforilacin hace que el transportador recupere su configuracin original, por lo cual los K quedan expuestos hacia el interior de la clula. Dado que adems disminuye su afinidad por las subunidades a, estos iones ingresan en el citosol, lo cual completa el ciclo.
da_p~<ilid.a_de
Cl- ~luz
deL~.tQm.ago se une al H' y forma
65
1rav 'H dr
1111 ~ontratran~porlador
Unin oclusiva
'-?
. . J.
el-
~
Hco
3\
C02 + H2 0
pn-
\/
t Jf i \
66
ct-
p-
Na
!'-
ct-
ct-
e-
ct-
Fig. 3-29. A. Transporte de CJ- a travs de la protena CFTR, situada en la membrana plasmtica que da a la luz del conducto. B. Bloqueo del pasaje de Cl- a consecuencia de un defecto en la CFTR .
1"'""' 111 1 h
looq11h11 1 11.
67
68
69
Las clulas de las plantas son similares a las de los animales, aunque presentan algunas diferencias (figs. 1-6 y 1-7). Por ejemplo, la clula vegetal posee una gruesa pared celular que envuelve a la membrana plasmtica, como
si se tratara de un exoesqueleto.
Adems de darle proteccin y sostn mecnico a la clula y determinar su
forma, dicha pared participa en el mantenimiento del balance entre la presin
osmtica intracelular y la tendencia del agua a penetrar en el citosol.
Tambin el crecimiento y la diferenciacin de las clulas vegetales dependen en gran medida de la organizacin de la pared celular. As, a partir de sta se produce la diferenciacin de las clulas del cmbium, de los vasos cribosos del floema (los cuales sirven para el transporte de material desde las
hojas) y de los vasos del xilema (que se lignifican).
3-29. La pared celular contiene un retcu lo microf ibrilar
La estructura de la pared celular puede ser comparada con la de un plstico reforzado con fibras de vidrio, ya que est constituida por un retculo microfibrilar incluido en una matriz de molculas unidas entre s.
Las microfibri!las de la pared celular estn compuestas principalmente por
celulosa, el producto ms abundante en la Tierra. Se trata de cadenas rectas
de polisacridos formados por unidades de glucosa, ligadas por enlaces ~1-4
(ftg. 3-30). Estas son las cadenas de glucano, que mediante uniones de hidrgeno intramoleculares e intermoleculares producen la unidad estructural o
microfibrilla, la cual tiene 25 nm de dimetro y est compuesta por casi
2.000 cadenas de glucano. Las microfibrillas de celulosa se asocian entre s
Y compone n un enrejado semicristalino, que se combina con protenas y con
polisacridos no celulsicos para formar la pared celular.
La matriz de la pared celular contiene algu nos polisacridos y lignina, el
principal componente de la madera. Los polisacridos ms importantes son:
1) sustancias pcticas solubles en agua, que contienen galactosa, arabinosa y
cido galacturnico, y 2) hemicelulosas, compuestas por glucosa, xilosa, manosa y cido glucurnico. La lignina se encuentra slo en las paredes de las
clulas maduras y est formada por un compuesto aromtico derivado de la
polimerizacin de fenoles.
Algunas paredes celulares pueden tener sustancias cuticulares (ceras) y
depsitos minerales, corno silicatos y carbonatos de sodio y de magnesio. En
los _hongos y las levaduras la matriz de la pared celular contiene quitina, un
pohmero de la glucosamina.
3-30. La pared celular se compon e de una pared primaria
y una secundara
La pared celular es complej a y en algunos vegetales se halla muy diferenciada. Suele contener dos componentes -la pared primaria y la pared secundaria-, que se desarrollan secuencialmente y se distinguen por la composi cin de sus matrices y por la disposicin de sus microfibrillas.
La pared primar ia comienza a form arse cord divisi6u r <'lular, 11 partir
de una estructura llamada placa c~; lular, qttl' ap;trc'l'l' dttr:utlt ' lt ,,., ol tt1t1 , 11 .. 1
plnun <-' l'll:tlorial utrr las f'ullltm: ,. l11lm: ltiju, (t 'ttp. 1~ ' 11 1 11 11111 11 1 t11
__.,.
~-Glucosa
~
Corte transversal
de una microfibrilla
Fibrilla elemental
(micela)
Celulosa
d, dll
JI / () 11111
d, ~ 111ft d ~ !
11 lll
IH'I
In~.
11( 11 !I H , , . l 't
vch
1111111
cJio:l
qw
Parte de una
macrolibrilla
Fig. 3-30. Elementos estructurales de la celulosa en sus sucesivos niveles de organizacin. (De D. K. Mhlethaler.)
70
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El citosol
4-1. Introduccin
En el captulo 1-3 se vio que las clulas eucariotas poseen algunas semejanzas con las procariotas. As, el citosol---{) matriz citoplasmtica- de la
clula eucariota contiene muchos de los componentes que se encuentran en
el protoplasma de la bacteria, por ejemplo, complejos enzimticos de diverso orden y molculas de ARN ribosmico, mensajero y de transferencia. Las
diferencias entre ambos tipos celulares estn dadas por la presencia en la clula eucariota de varias estructuras singulares, como el ncleo, el citoesqueleto, los organoides que integran el sistema de endomembranas, las mitocondrias, Jos cloroplastos (en la clula vegetal) y los peroxisomas.
La clula eucariota se halla dividida en numerosos compartimientos, entre los cuales sobresale el ncleo. La parte de la clula que no corresponde al
ncleo -es decir, el citoplasma- puede ser subdividida esquemticamente
en dos espacios, el correspondiente al citosol y el encerrado en el interior de
los organoides. En este esquema, el citosol es considerado como el verdadero medio interno celular, que se extiende desde la envoltura nuclear hasta la
membrana plasmtica y que llena el espacio no ocupado por el sistema de endomembranas, las mitocondrias y los peroxisomas (fig. 1-7).
En promedio el citosol representa el 50% del volumen del citoplasma, cifra que aumenta en las clulas embrionarias y en las menos diferenciadas.
El pH del citosol es de 7,2.
4-2. El citosol contiene compon entes muy variados
s u cl ~'
contner inclusiones
'H
u u lit I 'III IH1 lnllll!ll\ l 'tll aw tlllll'l dclt, tnhh'll C'OII tlntit ' fttN&'npio
hulu lu......
q111 1 1111 ,, 11
1
di IHiulhu
cltnuurinudus
72
4. EL CITOSOL
73
Por ejemplo, tanto en los hepatocitos como en las clulas musculares estriadas es comn la presencia en el citosol de grnulos de glucgeno (figs.
1-11 y 4-1). Se llaman glicosomas, miden entre 50 y 200 nm y estn compuestos por subpartculas de 20 a 30 nm de dimetro. Es preciso sealar que
en las imgenes ultramicroscpicas los glicosomas no corresponden directamente al glucgeno; representan a las protenas enzimticas que intervienen
en la sntesis y en la degradacin del polisacrido, cuya molcula no toma los
colorantes electrnicos de uso corriente. Los grnulos de glucgeno constituyen depsitos de energa para las clulas; ello es claramente visible en laclula muscular, en la que los grnulos desaparecen durante las contracciones
debido a la glucogenlisis producida para proveer glucosa. Existen enfermedades congnitas producidas por mutaciones de los genes que codifican a las
enzimas que regulan la sntesis y la degradacin del glucgeno, conocidas
como glucogenosis . En ellas las clulas muestran una acumulacin excesiva
de inclusiones de glucgeno o formas anormales del polisacrido.
Diversos tipos de clulas contienen gotitas de grasa (triacilgliceroles) en
el citosol, que tambin constituyen reservas de energa. Son muy comunes
en los hepatocitos y en las clulas musculares estriadas. En las clulas musculares las inclusiones de grasa se localizan cerca de las mitocondrias, hacia
las cuales se dirigen los cidos grasos de los triacilgliceroles para su oxidacin (cap. 8-8). Las clulas llamadas adipocitos contienen una gran gota de
grasa - con numerosas gotitas a su alrededor- que ocupa casi todo el citosol (fig. 1-8).
En el citosol de las clulas secretoras de la glndula mamaria en actividad
se generan gotas de grasa que se convierten en elementos importantes de la
leche. Durante la secrecin mamaria cada gota sale de la clula envuelta por
una fina capa de citosol rodeada por una fraccin de la membrana plasmtica (secrecin apocrina) (fig. 4-2).
En algunos tipos e hilares el citosol contiene pigmentos (sustaudas ou
t'OIOI'
pl'opio) que
flP
P X I t"ll l n1
lo;)
La sntesis de las protenas celulares tiene lugar en los r ibosomas, de cuyo estudio nos ocuparemos en el captulo 16. Se trata de estructuras ribonucleoproteicas muy complejas, la mayora de las cuales se localizan en el citosol (en los captulos 8-11 y 9-15 se ver que tambin existen ribosomas en
las mitocondrias y los cloroplastos).
Solamente una parte de las protenas que se si ntetizan en los ribosomas
citoslicos permanece en el citosol, ya que las restantes emigran hacia el ncleo, el sistema de endomembranas, las mitocondrias y los peroxisomas (fig.
4-3).
Como es lgico, para que las protenas puedan llegar a esos destinos se requiere de un sistema de seales especficas que sean capaces de discriminarlos, a fin de asegurar la llegada de cada protena al lugar que le corresponde.
Tales seales se encuentran en las mismas molculas proteicas y consisten en
una o varias secuencias de unos pocos aminocidos, denominadas pptidos
seal y seales de anclaje (cap. 7- 12).
Segn cul sea el destino de la protena que emerge del ribosoma, esas secuencias se localizan en el extremo amino, en el extremo carboxilo, o en uno
o ms puntos intermedios de la cadena proteica. La tabla 4-l informa sobre
las seales ms comunes halladas en las protenas que se dirigen al ncleo, al
sistema de endomembranas, a las mitocondrias y a los peroxisomas. Naturalmente, las protenas que no emigran y se radican en el citosol no necesitan
Fig. 4-2. Esquema de una clula mamaria activa, con numerosas gotas de grasa en el
citosol. Obsrvese la salida de
las gotas de grasa por secrecin apocri na.
4-5. Las chape ronas asisten a las prot enas para su oportuno
y adecuado plegamiento
Si bien las protenas adoptan formas tridimensionales que dependen de la
secuencia lineal de los aminocidos que las componen (cap. 2-9), no siempre
se pliegan correctamente. Para que sus plegamientos sean correctos se necesita, entre otros requisitos, que se produzcan en el lugar adecuado y en el mo-
CITOSOL
l
Retculo endoplasmtico
1'llln><l
Fig. 4-3. Dcslinos de las protc hJII~. ~i nl l't i'lldltll ('ll ln tl 1iho
1111 111 1
Mlhtctnn hlu
'l ttllliiN t
hulolli u-..
4. EL CITOSOL
74
75
Chaperonina
Oligopptidos ('"'o../
hsp70
hsp60
mento oportuno, lo cual se logra por la intervencin de unas estructuras llamadas chaperon!'\5, que se designan as porque acompaan a las protenas y
-sin ejercer acciones directas sobre ellas- previenen sus plegamientos prematuros y cuidan que sean correctos.
Existen tres familias de chaperonas, denominadas hsp60, hsp70 y hsp90
(por heat shock protein). La sigla hsp se debe a que en las clulas sometidas
a golpes de calor se pierde el plegamiento de las protenas (se desnaturalizan)
y aumenta considerablemente el nmero de las chaperonas. las cuales asisten
a las protenas desnaturalizadas para que vuelvan a plegarse. El nmero que
acompaa a la sigla hsp corresponde al peso molecular de la primera chaperana descubierta en cada grupo.
Las chaperonas hsp70 son monomricas y poseen un surco en el que cabe
slo una parte de la protena asistida, de manera que se necesitan varias chaperonas hsp70 para cada protena (fig. 4-4). En cambio, las chaperonas hsp60
son polimricas y estn integradas por 14 o 18 polipptidos denominados
chaperoninas, los cuales componen una estructura cilndrica en torno a un
espacio central, adonde ingresa la protena que va a ser asistida (fig. 4-4).
Para ejemplificar cmo actan las chaperonas hsp70 y hsp60 analizaremos sus efectos sobre las protenas del citosol. A medida que emana del ribosoma, cada protena citoslica se asocia con sucesivas chaperonas hsp70, cuya funcin es prevenir el plegamiento prematuro -a menudo errado- de los
tramos proteicos que van saliendo del ribosoma. Adems evitan que la protena naciente se combine con molculas inapropiadas. Cuando tennina de
sintetizarse y su plegamiento concluye, la protena se desprende del ribosoma y de las chaperonas hsp70 y fija residencia en el citosol. No obstante, si
algunas de sus partes no se plegaron o lo hicieron mal, ingresa temporalmente en una chaperona hsp60, dentro de la cual -aislada de los dems componentes citoslicos- termina de plegarse o deshace su plegamiento incorrecto y se pliega de nuevo, tratando de hacerlo sin errores.
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Ubiquitina
PROTEASOMA
Polipptidos
reguladores
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hsp~~be agregarse que las chaperonas consumen energa derivada del ATP y
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1111 111
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11
ulll.l<l! l
76
Para poder ingresar en el proteasoma, las protenas destinadas a desaparecer deben ser previamente "marcadas" por un conjunto de polipptidos citoslicos iguales entre s, de 76 aminocidos cada uno, llamados ubiquitinas.
En la figura 4-5 se resume el ciclo seguido por estas molculas. La plimera
ubiquitina es activada por la enzima El, que la transfiere a la enzima E2. A
continuacin, con la ayuda de la ligasa E3, el complejo ubiquitina-E2 se une
a la protena que debe degradarse. Puesto que el proceso de transferencia entre las enzimas El y E2 se repite varias veces, la protena queda conectada
con una corta cadena de ubiquitinas.
De inmediato este complejo es reconocido por los polipptidos reguladores de uno de los casquetes, los cuales separan a las ubiquitinas, deshacen el
plegamiento de la protena y la introducen en la cavidad del proteasoma, donde es degradada por las proteasas. Se originan oligopptidos cortos, los cuales salen del proteasoma y se vuelcan en el citosol.
El proceso descrito consume energa. Esta es cedida por molculas de
ATP, de cuya hidrlisis se encargan seis ATPasas situadas en los casquetes del
proteasoma.
Cuando finaliza la degradacin de la protena, el proteasoma y las ubiquiti nas quedan disponibles para su reutilizacin.
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El citoesqueleto
Forma y motilidad
Microtbulos
llrrlliiJntnn dn n<:ilna
78
5 . EL CITOESQUELETO
79
FI LAMENTOS INTERMEDIOS
5- 2. El dimetro de los filament os int erm edios es de 10 nm
En el citoesqueleto de la mayora de las clulas existen filamentos de 10
nm de dimetro; se denominan intermedios porque tienen un grosor menor
que el de los microtbulos y mayor que el de los filamentos de actina (fig.
5-1).
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NH 2
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Monmero
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0
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11
e ..A:"
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Tetrmero
~N ~
S,N
Protofilamento
dclualli vu
cara interna de la envoltura nuclear, de modo que se trata de filamentos intermedios que no se localizan en el citoplasma sino en el interior del ncleo. La
distribucin de los filamentos intermedios puede apreciarse en la figura 5-3B ,
que muestra a una clula epitelial tratada con anticuerpos antiqueratina fluorescentes.
Los filamentos intermedios contribuyen al mantenimiento de la forma
celular y establecen las posiciones de los organoides en el interior de la clula. No obstante, su funcin principal es de ndole mecnica, de ah que se
encuentren mucho ms desarrollados en las clulas sometidas a grandes tensiones.
5- 3. Diversas propiedades caracterizan a los distintos tipos
de filamentos intermedios
La siguiente es una breve descripcin de las caractersticas principales de
los seis tipos de filamentos intermedios:
L aminofilamentos. En todas las clulas, apoyada sobre la cara interna de
la envoltura nuclear existe una malla delgada de filamentos intermedios conocida como lmina nuclear, compuesta por filamentos intermedios llamados larninofilamentos, que son los nicos que no se localizan en el citosol
(cap. 12-2) (fig. 12- 1). Los laminofilamentos contienen tres clases de manmeros, con pesos moleculares que van de 65 a 75 kDa. Estos monmeros poseen dominios fibrosos ms largos que los de los filamentos intermedios cil.oslicos y su ensamblaje genera una malla aplanada, no una red tridimensional. La lmina nuclear es responsable de la forma y la resistencia de la envoltura nuclear.
Filamentos de quer a tina. Los filamentos de queratina - llamados tambin tonofilamentos- se encuentran en las clulas epiteliales, particularmente en la epidermis y sus derivados (pelos, uas, etc.), en las mucosas y en
las glndulas. En los captulos 6-7 y 6- 13 veremos que se asocian a los hemidesmosomas y a los desmosomas, con los cuales componen una trama filamentosa continua desplegada por todo el epitelio, al que le confieren gran
parte de su resistencia mecnica.
Una protena ligadora denominada ftlagrina une a los filamentos de queratina donde se entrecruzan.
Los mon meros de los filamentos de queratina se llaman citoqueratinas.
Existen alrededor de 30 c itoqueratinas distintas, clasificadas en dos grupos:
las de clase /, que son cidas, y las de clase 11, que son neutras o bsicas.
l .os dislirrlos tipos tk t:<:lulas epiteliales contienen filamentos de querati1111 cl ikll\llt l".'l ddidn :1q1w r all11 11110 fabrica i1oq11cratinas d distinta calidad.
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80
81
(fig. 5-l).
.
1) t
De acuerdo con su localizacin, los microtbulos se clasifican en: Cl oplasmticos, presentes en la clula en interfase; 2) mitticos, correspondie~
tes a las fibras del huso mittico; 3) ciliares, locahzados en el eJe de l~s Cilios, y 4) centriolares, pertenecientes a los cuerpos basales y los centnolos.
Aunque todos tienen las mismas caractersticas morfolgicas, difieren en
unas pocas propiedades. Por ejemplo, los Cihares y los centnolares son muy
estables comparados con los citoplasmticos y los rrutt1.cos, que cambian
permanentemente de longitud.
.
.
.
Las protenas accesorias de los mtcrotubulos (reguladoras, hgadoras Y
motoras) reciben el nombre de MAP (por microtubule-assoCLaled protetns).
5- 5. Los microtbul os citopl asmt icos nacen en el_centrosoma,
que cont iene un par de centrolos y una matnz
Los inicrotbulos citoplasmticos nacen en una estructura contigua al ncleo llamada centrosoma. Desde all se extienden por todo el Citoplasma hasta arribar a la membrana plasmtica, en la que se fijan; en consecuencia, parecen rayos que van del centro a la periferia celular (fig. 5-4A). Esta disposicin de los microtbulos puede apreciarse en la figura 5-4B, que muestra a
una clula cultivada tratada con anticuerpos antitubulina fluoresce~tes . ,
El centrosoma se llama tambin centro organizador de los mJcrotubuJos 0 MTOC (por microtubule-organizing centre). Est co:npuesto por un par
de centrolos o diplosoma (del griego diplos, doble, Y som_a, cuerpo) Y ~na
sustancia aparentemente amorfa que los circunda, la matnz centrosmica
(figs. 5-4A y 5-23). Esta matriz contiene una red de fibras muy delgadas Y un
complejo de protenas reguladoras denominadas y-tubulinas.
..
Dada la semejanza de Jos centrolos con los cuerpos basales de los cilios,
sern descritos junto a stos en la seccin 5- 14.
5- 6. La tubulina es el componente monom rico de los microtbulos
Los microtbulos son polmeros compuestos por unidades proteicas llamadas tubulinas. A su vez, cada tubulina es un heterodmero de ~ 10 a 120
kDa, cuyas dos subunidades -denominadas artubulina y ~tubulma- son
protenas de tipo globular (fig. 5-5). Existen seis tipos diferentes de a-tubu-
MICROTUBULOS
5-4. El dimetro de los microtbulos es de 25 nm
Los microtbulos son fil amentos del citoesqueleto que sc hull a u \ "JI asi
lodas las ~:6lulas cucariotas y pos 'en un di{lmctro de 2.5 11111 ( lir 1 'll ;;,, r11
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Protofilamento
Fig. 5-S. Formacin y organizacin estructu ral de los nucrotbulos. Se ilustra el modo
como se combinan las u-tubulinas con las ~-tubulinas para formar la pared tubular, integrada por trece protofil amentos.
5. EL CITOESQUELETO
82
83
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~~~~~~~~~~~~~~~~~~ ~
CD
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[+]
[-]
Fig. S-6. Polimerizacin (alargamiento} y despolimerizacin
(acortamiento} de Jos microtbulos por sus dos extremos.
linas y seis de ~-tubulinas, pero siempre se combinan una a-tubulina con una
~-tubulina, nunca dos a-tubulinas ni dos ~-tubulinas entre s.
En el captulo 16-21 sern analizados los mecanismos que regulan la produccin de las a-tubulinas y de las ~-tubulinas en los ribosomas.
Adems de ser distintas, las dos subunidades de las tubulinas son muy afines, lo cual permite que la subunidad a de cada tubulina pueda combinarse
no slo con la subunidad ~ del propio heterodmero sino tambin -por medio de su extremo libre- con la subunidad ~de otra tubulina (fig. 5-5). Adems, los heterodmeros pueden unirse entre s por sus flancos, y lo hacen de
un modo tal que se cierran en crculo. Estas particularidades llevan a la formacin de una estructura tubular cuya pared parece estar integrada por varios
filamentos que recorren el eje longitudinal del microtbulo, conocidos como
protofilamentos. Observado el microtbulo en un corte transversal, puede
verse que contiene 13 protofilamentos (fig. 5-5).
La figura 5-5 permite comprobar que existe un desfase entre las a-tubulinas y las ~-tubulinas de los protofilamentos contiguos. Es por ello que en los
cortes transversales de los microtbulos no se observa una alternancia regular entre las a-tubulinas y las ~-tubulinas sino dos o tres subunidades iguales
contiguas (fig. 5-5).
Debido a la polaridad de las tubulinas, el propio microtbulo resulta polarizado, ya que en uno de sus extremos quedan expuestas las subunidades a y
en el otro las subunidades ~ Los heterodmeros pueden agregarse (polimerizarse) o retirarse (despolimerizarse) por ambos extremos. Como es obvio, durante la polimerizacin el microtbulo se alarga, y durante la despolimerizacin se acorta.
Uno de Jos extremos del microtbulo se llama ms (+]; el otro, menos(-]
(fig. 5-6). Estas designaciones se deben a que por el extremo(+] el microtbulo se alarga y se acorta ms rpidamente que por el extremo (-] (fig. 5-6).
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5. EL CITO ESQUELETO
84
85
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Los microtbulos citoplasmticos constituyen verdaderas vas de transporte por las que se movilizan macromolculas y organoides (mitocondrias,
vesculas transportadoras, etc.) de un punto a otro del citoplasma. Esta funcin es realizada con la asistencia de dos protenas motoras, la quinesina y
la t:;::na. Cuando se hallan "cargadas" con el material a transportar, la quinesina se desliza hacia el extremo [+] del microtbulo y la dinena hacia el
extremo [-) (fig. 5-11 ).
Estas protenas motoras estn compuestas por cuatro cadenas polipeptdicas, dos pesadas y dos livianas (fig. 5-12). Cada cadena pesada contiene un
dominio globular (o cabeza) y uno fibroso (o cola). El fibroso se conecta con
el material a transportar y el globul~ se une al microtbulo.
En la membrana de los organoides y de las vesculas transportadoras se
han identificado las protenas transmembranosas quinectina y dinactina,
con las cuales se unen la quinesina y la dinefna, respectivamente.
La energa consumida durante el transporte es aportada por l'l i\TP. lu go
,.. su hidrlisis por ATPasas presentes n las ~;ah za ~ ti!' 1 11 ~1 t""''' 11 ti' lllPio
Quines~. .
[+]
[-]
..
Fig. 5-12. Unin de las vesculas transportadoras a la quinesina y a la dinena mediante las protenas transmembranosas quinec_tina y dinactina,
respecti vamente.
Los microtbulos contribuyen al establecimiento de las formas que adquieren las clulas. Adems, mediante protenas accesorias, mantienen al retculo endoplasmtico y al complejo de Golgt en sus poscones en el Cttoplasma, 0 que determina la polaridad celular. Se ha comprobado que en la
estabilizacin de estos organoides intervienen, respecttvamente, la qumesma
y la dinena, dos protenas motoras.
.
En las neuronas, los microtbulos se hallan tambin en las dendntas Y en
el axn (fig. 5-13). Ms an, el crecimiento del axn depende del alargamiento de sus microtbulos. Durante ese alargamiento, a la altura del cono de crecimiento del axn, se ha descubierto entre los microtbulos a la antes mencionada dinamina. Provoca el deslizamiento de algunos microtbulos sobre
otros, Jo que se.ra necesario para el proceso de avance del cono por la matnz
'
tnJ~. ~- l.t
86
5. EL CITOESQUELETO
tubulinas en los extremos de los microtbulos. Ejerce tambin una funcin ligadora, ya que establece puentes entre los microtbulos contiguos y les confiere estabilidad. Otras MAP ligadoras, llamadas MAPl y MAP2, .crean
puentes similares entre los microtbulos neuronales.
Las tau contienen un nmero determinado de fosfatos, cuyo aumento altera su funcionamiento normal. El aumento de los fosfatos podra producirse
por la presencia de quinasas sobreactivas o de fosfatasas hipoactivas. Esto
ocutTe en la enfermedad de Alzheimer, caracterizada por un deterioro neuronal progresivo a consecuencia de la inestabilidad de los microtbulos. Como
se vio en la seccin anterior, stos son imprescindibles para el transporte intracelular de organoides y de otros materiales vitales para la clula.
5-1 O. Los microtbulos mitticos movilizan <l los cromosomas
durante la mitosis y la meiosis
Las funciones de los microtbulos mitticos sern analizadas detalladamente en el captulo 18-14.
La clula en mitosis y en meiosis posee dos centrosomas en lugar de uno;
y los microtbulos citoplasmticos que se observan en la intetfase son reemplazados por Jos microtbulos mitticos, llamados tambin fibras del huso
mittico (fig. 5-14). A diferencia de los citoplasmticos, en los microtbulos
mitticos el extremo [-] no se halla bloqueado por la matriz centrosmica, de
modo que los microtbulos pueden polimerizarse y despolimerizarse tambin
por ese extremo.
Se puede hacer desaparecer a los microtbulos mitticos mediante el uso
de la vinblastina y la vincristina. Estas drogas actan de forma semejante a
la colchicina (seccin 5-7), aunque lo hacen casi selectivamente sobre las fibras del huso, de ah que se las utilice para bloquear las divisiones de las clulas neoplsicas en el tratamiento del cncer. El taxol es otra droga usada para tratar el cncer, pues impide la despolimerizacin de las fibras del huso e
induce su crecimiento descontrolado, incompatible con la divisin celular.
5-11. Los microt bulos ciliares forman el eje de los cilios
Microtbulo B - - - - - --.
~-----------Microtbulo
,-------Nexina
Doblete
Brazo
externo
(',,1-Vl.:- - - Brazo
interno
Protelna
radial
Vaina
interna
central
Doblete
y los flagelos
Los cilios son apndices delgados -de 0,25 j..l.m de dimetro y varios micrones de largo- que surgen de la superficie de diversos tipos celulares (fig.
1-7). Los de mayor longitud se llaman flagelos. Cada uno est compuesto por
un eje citoslico - la matriz ciliar- envuelto por una prolongacin de la
membrana plasmtica. En medio de dicha matriz, siguiendo el eje longitudinal del cilio, se enc uentra un armazn filamentoso regular llamado axonema,
integrado por varios microtbulos paralelos entre s asociados con protenas
accesorias (figs. 5-15 y 5-16). Ms adelante describiremos su composicin y
sus funciones.
Cada cilio nace en un cuerpo basal o cinetosoma (del griego kineets,
movible, y soma, cuerpo), que es una estructura idntica a un centrolo del
dplosoma. Los cuerpos basales y los centrolos sern analizados en la seccin 5-14.
'
Brazo
externo
Protelna
radial
Brazo
interno
central
Vaina
interna
~ ~~
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Los cilios son estructuras que se mueven. Segn las clulas en que se hallan, sus movimientos sirven para arrastrar fluidos y partculas (l'""'" <><"lllTC
en ul ;\rbol respiratorio), pam desplazar a otras clulas (po1' 'i''"'(iln, i <lf, csP<'IUIIII<>I.oidts, 1 ovoito o 1 ig oto n la l roll l(lil ult'duu) " 1''"" "'""el'""'
11 l ' dnl l l!l ! 11114Hitiiii! III H'III(' ( jiOI'
<" klllpJu,
Fig. 5-16. Arriba. Esquema de un corte transversal del axonema que muestra la configuracin 9 + 2 caructcrlstica de los micronhulos del cilio. L a vista se dirige de la ralz a la punta del cilio. Debe resallars la disposi i6 n de los nlicmt1hulos pt:rifricos, los cuales se hallan asociaclos cn1rc sf de a pares, lla11111tlos tlohl tlr :.. Oh~~t<z vcww In. dl.d nt n.~ (')mH'/1 de pz'otcum: llgadorns y tlmo las fH'otnns II IOitii'HS til'
dhll'lllll lotll lllll "hllll n N" otll,ul ndn,14 1~11 fu dhn 't'lou il lur: ngujwl tl(' l l clo j
1 11 d. 1111 '"~ ~~~~~ 11111 11
87
88
5. EL CITOESQUELETO
El movimiento ciliar puede ser pendular, unciforme, infundibuliforme u ondulante. En el movimiento pendular el cilio parece rgido y se flexiona en su base. En el unciforme (el ms comn en los
metazoos) el cilio se dobla y adquiere la forma de un garfio. En el
infundibuliforme, rota describiendo una figura cnica. En el ondulante, caracterstico de los flagelos, el movimiento se desplaza desde el extremo proximal al extremo distal del cilio.
En las superficies epiteliales cubiertas por cilios puede verse que stos se
mueven coordinadamente y dan Jugar a verdaderas ondas que se desplazan
por el epitelio en una determinada direccin. Estas ondas se producen porque
cada cilio se mueve con un pequeo retraso (o adelanto) con respecto al situado por delante (o por detrs) de l. El paso de la onda de una clula a la
vecina derivara del pasaje de ciertos solutos (seales) a travs de las uniones
comunicantes que vinculan a las clulas epiteliales entre s (cap. 6-14) (fig.
6-12).
El movimiento ciliar es producido por el axonema (figs. 5-15 y 5-16). Observados en un corte transversal, los microtbulos del axonema muestran
una configuracin especial, conocida como "9 + 2". Ello obedece a que en la
parte perifrica de esta estructura se observan nueve pares de microtbulos
-los cuales forman un crculo-, y en la parte central, dos microtbulos
ms. Se dice "9 + 2" porque los dos microtbulos de cada par perifrico estn firmemente unidos entre s -forman un doblete- y los del par central
estn separados. Uno de Jos microtbulos de cada par perifrico, identificado
con la letra A, es completo, es decir, posee 13 protofilamentos; el otro, llamado B, es incompleto, pues posee 10 u 11 protofilamentos (fig. 5-17). Los dobletes se disponen en forma oblicua, de modo que el microtbulo A se halla
ms prximo al centro del cilio que el microtbulo B. Adems, los extremos
(-]de ambos microtbulos apuntan hacia el cuerpo basal (fig. 5-18).
El axonema contiene protenas ligadoras y protenas motoras (fig. 5-16).
Las protenas ligadoras unen a los dobletes entre s y los sostienen en sus
posiciones en el interior del cilio, lo cual mantiene la integridad del axonema
durante el movimiento ciliar. As, las nexinas unen el microtbulo A de un
doblete con el microtbulo B del doblete vecino; la vaina interna rodea a los
microtbulos centrales, y Las protenas radiales unen a los microtbulos A
con esa vaina.
Las protenas motoras estn representadas por la dinena ciliar. Esta se
diferencia de la dinena citoplasmtica porque es ms grande y tiene tres cadenas pesadas y tres cadenas livianas, en lugar de dos de cada una (seccin
5-8). Las colas de la dinena ciliar estn ancladas en el microtbulo A de un
doblete, mientras que las cabezas globulares -con sus respectivas ATPasasestablecen uniones intermitentes con el microtbulo B del doblete vecino.
As, las dinenas forman puentes inestables entre Jos dobletes contiguos.
Las dinenas tambin se denominan brazos internos y externos del axonema (fig. 5-16), lo cual indica que algunas nacen en el microtbulo A en posiciones ms perifricas respecto de' otras. Si se mira al axonema desde la raz
del cilio, dichos brazos se orientan en la direccin de la marcha de las agujas
del reloj.
El movimiento ciliar se produce porque las cabezas de las dinenas recorren un pequeo tramo del microtbulo B hacia su extremo r- 1(fig. 5- 18) (en
la seccin 5-8 sealamos que esta clase de protena motor:t S<' tlltl<' Vl' si mpr \'ll sa dir .: i6u). D hido a qu ~.: los microthuloN d,l II XP III 1111<:li' illl lla1t
Jljcl/.
(IIIC'dialllt
lu.
89
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sus extremos proximales estn anclados en el cuerpo basal, el desplazamiento de las dinenas sobre el microtbulo B hace que ambos dobletes se curven,
puesto que no pueden desplazarse linealmente en direcciones contrarias. Como ello ocurre con las dinenas localizadas entre varios de los nueve dobletes, la suma de fuerzas hace que todo el axonema se doble, lo que genera el
movimiento ciliar (fig. 5-19). El desplazamiento de las dinenas se produce
como consecuencia de la formacin y la mptura alternadas de los puentes
transversales de dinena. Este proceso requiere energa, que es tomada del
ATP.
Durante el movimiento ciliar no todos los dobletes operan a la vez. Ms
an, se sospecha que los situados en un lado del axonema flexionan al cilio y
Jos del lado opuesto intervienen en el movimiento de retorno.
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90
5. EL CITOESQUELETO
91
Protena ligadora
e
B
A
del cuerpo basal o del centrolo est formada por 9 unidades microtubula.res,
cada una compuesta por tres microtbulos fusionados entre s, llamados A, B
y e (figs. 5-20, 5-21 y 5-22).
El microtbulo A es completo, pues posee 13 protofilamentos; en cambio,
los microtbulos B y C son incompletos, ya que contienen 11 protofilamentos cada uno (fig. 5-20). Como los dobletes en el axonema, estos tripletes se
disponen en forma oblicua, de manera que el microtbulo A se halla ms cerca del centro del centrolo que el microtbulo C (fig. 5-21).
Los 9 tripletes del cuerpo basal estn conectados entre s por dos clases de
protenas ligadoras. Unas son fibras cortas que enlazan el microtbulo A de
un triplete con el microtbttlo C del triplete vecino. Las otras son fibras largas que unen a los tripletes de forma semejante a los rayos de una rueda (fig.
5-21).
Vimos que cada cilio nace de un cuerpo basal, el cual, como el cilio, se
halla perpendicular a la membrana plasmtica (fig. 5-15). Cabe agregar que
los microtbulos A y B de los dobletes del cilio se continan con los microtbulos A y B de los tripletes del cuerpo basal. Se ignora el significado de los
microtbulos C de los tripletes y dnde se originan los microtbulos centrales del axonema.
A menudo el extremo libre del cuerpo basal muestra una raz fibri lar corta que se interna en el citoplasma y que tiene por funcin sostener al cilio.
longitudinal de la raz de un
cilio (Ci), con su cuerpo basal
o cinetosoma (CB). Derecha.
Cortes transversales de cilios
y cuerpos basales. 70.000x.
(Cortesa de .J. Andr y E.
Fauret-Fremiet.)
Los cuerpos basales se diferencian de los centrolos del diplosoma por las
siguientes particularidades: 1) los prirceros se localizan cerca de la superficie
celular (en la raz de los cilios) y los segundos cerca del ncleo (figs. 5-4A y
5-15); 2) los cuerpos basales no poseen la matriz centrosmica que envuelve
a los centrolos (fig. 5-23); 3) los cuerpos basales suelen estar formados por
una sola unidad, mientras que los centrolos se presentan de a dos, ambos perpendiculares entre s (fig. 5-23).
5- 15. En la cilognesis los microtbulos del axonema se desarrollan
a partir del cuerpo basal
En la ciliognesis los microtbulos A y B del cuerpo basal cumpl en la funcin de la -y-tubulina del centrosoma, es decir, actan como moldes para el
nucleamiento (polimerizacin) de las primeras tubulnas de los microtbulos
A y B del axonema. Las tubulinas del axonema naciente se unen a los extremos [+] de los microtbulos A y B del cuerpo basal, que apuntan hacia la superficie de la clula. Por lo tanto, los extremos(-] de los microtbulos de los
cilios se localizan junto al cuerpo basal. Luego del nucleamiento inicial se
agregan nuevas tubulinas, lo cual alarga a los microtbulos del axonema hasta que el cilio alcanza su longitud definitiva.
5-16. Los cuerpos basales derivaran cte los centrolos del centrosoma
Por lo dicho en la seccin anterior se deduce que antes de que los cilios
nazcan se forman los respectivos cuerpos basales. Estos apareceran como
consecuencia de una reproduccin dicotmica por parte de los centrolos del
diploson1a, 111 dia111 1111 prn ' w has: ulo '11 1 d sarrollo de procentrolos sillliliu 11l
,f , lltl\ 0 , ln 111
1
IX
centrosmica
Centriolo
92
FilAMENTOS DE ACTINA
Fi~.
5-25. A. Distribucin de
Nucleacin
Actina G
bulos (seccin 5-7), derivado de la formacin de un capuchn cuyos manmeros demoran un tiempo en convertir sus ATP en ADP.
Puesto que el mantenimiento de esta inestabilidad tiene un alto costo en
ATP, cuando el filamen to alcanza la longitud deseada, varias protenas reguladoras se colocan en sus extremos para estabilizarlo.
Apare ntemente la polimerizacin de los monmeros de actina depende de
una protena reguladora llamada profilina, a pesar de que induce la hidrlisis de los ATP en los monmeros ya polimerizados.
En el proceso de despolimerizacin participan varias protenas reguladoras, entre las cuales se destacan la timosina y el ADF (por actin-depolymerizingfactor). La timosina inhibe elnucleamiento del trmero inicial de actinas
G y su polimerizacin en el filamento en crecimiento. En cambio, el ADF se
une al filamento de actina y lo despolimeriza progresivamente.
La droga citocalasina B provoca la despolimerizacin de los filamentos
de actina debido a que se une a sus dos extremos y bloquea su crecimiento,
con la consiguiente desaparicin de los capuchones de actinas con ATP.
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93
5. EL CITOESQUELETO
94
95
Miosina 11
Miosina 1
pendiente de Ca2 situada en la propia cabeza. La miosina I se desplaza aproximadamente 10 nm por cada ATP que consume.
La miosina V "camina" sobre elfilamento de actina. y cada "paso" que da
la hace avanzar unos 37 nm. Su composicin se analiza en la seccin 5-28.
5-24. En las clulas conectivas los fila me ntos de acti na transeelula res
se ll a ma n f ibras tensoras
En las clulas conectivas la distribucin de los fi lamentos de actina transcelulares -denominados fib ras tensoras- es semejante a la indicada en la
seccin anterior, aunque componen atados ms gruesos y ms numerosos.
En cada atado, la protena Jigadora o:-actinina une a los filamentos de actina entre s.
Adems, cada filamento se liga a la membrana plasmtica mediante una
estructura conocida con el nombre de contacto focal (fig. 5-31 ). El extremo
del filamento se conecta con una protena transmembranosa heterodimrica
llamada integrina, por medio de las protenas ligadoras talina, o:-actinina,
paxilina y vinculina. El conjunto integrado por el extremo del filamento de
actina, las protenas ligadoras y la integrina constituye el contacto focal. En
el captulo 6-6 se ver que por su dominio externo la integrina se liga a una
protena de la matriz extracelular llamada fibronectina, y sta a una fibra de
colgeno.
Cintur n adhesivo
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l>'lg. S-28. Filamentos de acti '" ' d 1 cinturn adhesivo (va'"' l i,. 1>- 10). Mc1w d 11 l">llw:
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5-23 . En las clu las e pite lia les los f ila me nt os de actin a transcelulares
sirven pa ra t ransportar o rga noides
Como en todas las clulas, en las epiteliales los filamentos de actina transcelulares se hallan tendidos entre puntos opuestos de la membrana plasmtica y entre sta y la envoltura nuclear, de modo que atraviesan el citoplasma
en mltiples direcciones (fig. 5-25). Asimismo, cerca de la envoltura nuclear
existe una red de filamentos de actina que descansa sobre la malla perinuclear
de fil amentos intermedios (seccin 5-2); a esa red se ligan los filamentos de
actina que parten de la envoltura. En cambio, a nivel de la membrana plasmtica los filamentos transcelulares se conectan con los filamentos de actina
corticales o se unen a protenas membranosas especiales.
Los filamentos de actina transct;lulares actan como vas para transportar
organoides por el citoplasma. Este transporte es mediado por las protenas
motoras miosina I y miosina V.
La miosina 1 posee una cabeza y una cola, pues uno de sus extremos es
globular y el otro fibroso (fig. 5-29). Cuando esta protena motora funciona,
su cola se liga a la membrana del organoide que va a ser trasladado - por lo
general una vescula del sistema de endomembranas (cap. 7-1}- y su cabeza
se une intermitentemente a un filamento de actina vecino, esto ltimo porque
la abeza de la miosina 1 cambia de posicin repetidamente. 1,as rurion s y deNIIIIt>ll ' S altt:rnadas hacen que la mOSina J se deslice t:ll dirci(lll clfl l'X II" "'" lt 1 clll l"ilalllt"nlo th.; i l tina (l'ig. 5-30).
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Paxilina
97
CITOSOL
as ca ezas
d
n umones mtermitentes con los filamentos de actina adyacentes. Dao que se deshzan sobre ellos en direcciones contrarias - hacia los respecti~os ~x tremos (+]-los tensan y generan fuerzas mecnicas en los contactos
oca es, lo cual, adems de producir leves pero continuas deformaciones en
1~ superfiCie celular, contribuye al establecimiento de la forma o-Jobal de la
e lula._Es por estas propiedades que en las clulas conectivas
filamentos
de actma transcelulares llevan el nombre de fibras tensoras El
.
h
mecamsmo
molecula
.
r que ace posible el deslizamiento de las miosinas II sobre los filamentos de actma ser analizado en la seccin 5-33, referida a la co t tt' ldad muscular.
n ac 1
lo:
Debe agregarse que las fibras tensoras y los contactos focales se forman
.
mediante la mduccn de la protena Rho (por la letra . " )
gneba P , que es miembro de una fa T d GTP
asas que actan asociadas a las protenas regulad
G
mi Ia e
oras . EF y GAP, de cuyo an~lisis nos ocuparemos en el captulo 7-38.
D~ tgual modo que en las celul(ls epiteliales, las fibras tensoras sirven cov~as iara tran~p~rtar organoides por el citoplasma, con intervencin de la
mwsma Y la mwsma V (secciones 5-23 y 5-28).
m?
En las clulas conectivas rodeadas por matriz extracelular los fil amentos
de actina corticales se distribuyen de una manera caracterstica y adems
cambiante. Esto ltimo origina modificaciones cclicas en la consistencia de
la zona perifrica de las clulas, lo cual, junto con las tensiones en los contactos focales, produce los incesantes movimientos que se ven en la superficie celular.
Aqu los filamentos de actina arman una especie de andamio que incrementa la viscosidad del citosol, la que disminuye cuando el andamio se desarma a causa de la despolimerizacin de los fil amentos de actina (fig. 5-32).
As, en la zona perifrica de las clulas conectivas se alternan estados de mayor viscosidad (ge{) con otros de menor viscosidad (so{), lo cual provoca
cambios continuos en la forma de la superficie celular.
En la construccin del andamio interviene -adems de la profilina (seccin 5-18)- una protena ligadora llamada filamina o ABP (por actin-binding protein), que une a los filamentos de actina entre s (fig. 5-32). El andamio se desarma cuando acta -antes de que lo hagan las protenas despolimerizantes timosina y ADF- la gelsolina, una protena dependiente de Ca2+
que fragmenta a los filamentos de actina (fig. 5-32).
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Ca2+
Gelsolina
O
Filopodio
filarnina y gelsolina
ni al'mado y el dcs:tr'nuulo,
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98
Fig. 5-34. Din micn de los filamentos de actina e n los lamclipodios y los filopodios.
Los punto' de ramificacin y
de polimerizacin han sido
marcados con cfrculos verdes
y crculos azule.Y, respectiva~
mente. En ambos interviene la
protefna reguladora Arp2/3 .
que a ni vel de los puntos de ramificacin hace que se formen
11ng ulos de 70 e ntre los fila111 ntos y sus ramas.
futuro movimiento se forman varias lminas citoplasmticas horizontales llamadas lamelipodios, de cuyos
bordes libres nacen prolongaciones digitiformes denominadas filopodios (figs. 5-33 y 23-6). Tanto los lamelipodios como los filopodios alternan perodos de alargamiento con perfodos de acortamiento, los cuales, como se ver, son esenciales para la motilidad celular.
La fonnacin de los lamelipodios es inducida por la
protena Rae (por related to the A and C kinases), que
como la Rho (seccin 5-24) es miembro de una familia
de GTPasas que son regu ladas por las protenas GEF y
GAP (cap. 7-38)
Los lamelipodios s urgen y se alargan por obra de la
protena reg uladora Arp2/3 (por actin-related protein),
que induce la formacin de armazones especiales de actina en la corteza cel ular. Como muestra la figura 5-34,
la protena Arp2/3 hace que los filamentos de actina se
ram ifiquen y -en colaboracin con la profilina (seccin 5-18)- que nuevas actinas G se agreguen en los
extremos de los fi lamentos, tanto en los preexistentes
como en sus ramas. La figura 5-34 muestra tambin que
los armazones son aplanados y que cada rama de actina
compone con el filamento de origen un ngulo de 70.
El acortamiento de los lamelipodios se debe al desarme de tales armazones, causado por las protenas reguladoras timosina, ADF y gelsolina (secciones 5-18 y
5-25).
Adems de alargarse y acortarse, los lamelipodios se mueven permanentemente, lo cual es posible porque en sus races hay molculas de miosina Il
dimricas que hacen deslizar a los filamentos de actina en direcciones opuestas (fig. 5-30).
La formacin de los filopodios es inducida por la protena Cdc42 (por
cell-division cycle) , que al igual que las protenas Rho y Rae pertenece a una
familia de GTPasas reguladas por las protenas GEF y GAP (cap. 7-38).
Debe agregarse que durante la migracin celular las protenas Rho, Rae y
Cdc42 funcionan coordi nadamente. Lo hacen.tras recibir "rdenes" de receptores localizados en la membrana plasmtica, los cuales se activan cuando
son inducidos por molculas extracelulares implicadas en la estimulacin de
la motilidad. Puede decirse, entonces, que las protenas Rho, Rae y Cdc42
funcionan como eslabones entre las seales extracelulares y los componentes
del citoesqueleto involucrados en la mi gracin.
Los alargamientos y acortamientos de los filopodios se explican por la
presencia en sus ejes de haces de filamentos de actina que alteman ciclos de
polimeri zacin con ciclos de despolimerizacin (fig. 5-34). Los filamentos
parten del borde libre de los lamelipodios y terminan en la membrana plasmtica de la punta de los filopodios, en la que se anclan mediante contactos
focales. Adems, se unen entre s por medio de una protena ligadora llamada fimbrina, y los ms perifricos se conectan con la membrana plasmtica
del filopodio por intermedio de la miosina l. Esta protena motora se une a
los filamentos y a la membrana a travs de su cabeza y .le su m la. rcsp<;livam ntc (fig. 5-30). Lu minNinu 1 111ov 'l'fu ni fi i0J)<)diu u n""l'l o 11 '""' !',,
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99
La migracin celular es consecuencia de los siguientes fenmenos. En primer Jugar los filopodios se alargan. Luego, a travs de sus puntas -pobladas
de contactos focales- algunos se anclan en fibras colgenas de la matnz extracelu.lar mediante molculas de fibronectina (caps. 6-4 y 6-5). A continuacin, mientras los filopodios anclados se acortan - lo cual tracciona a laclula hacia los puntos de anclaje-, otros filopodios se alargan y se_anclan en
fi bras colgenas situadas ms adelante en la matriz extracelular. Fmalmente,
los primeros filopodios se desprenden de las fibras colgenas y los segundos
se acortan, de modo que la clula avanza un poco ms. La migradn celular
resulta de la reiteracin de estos episodios. Como se ve, el anclaje de los filopodios en los elementos fijos de la matriz extracelular - es decir, en las fibras colgenas- es transitorio, suficiente para que la clula ~ueda ser traccionada. Si el anclaje persistiera, el avance celular se detendna.
Lejos de vagar sin rumbo, las clulas se desplazan hasta sus puntos de destino siguiendo itinerarios predetenninados, y no se dehenen antes de alcanzarlos ni avanzan ms all. Los derroteros son marcados por algunos componentes de la matriz extracelular aledaos a la clula en movimiento, por ejemplo, la concentracin y la orientacin de las fibronectinas que se hallan en los
lugares de paso. Estas molculas tendran funciones relevantes durante la migracin celular, pues fijaran los itinerarios al orientarse adecuadamente Y
concentrarse en proporciones crecientes a lo largo de las rutas. La locomocin celular guiada por gradientes de concentracin de molculas no solubles
en el medio extracelular -como ocurre con la fibronectina- se denomma
haptotaxis (del griego hptein, enganchar, y taxis, colocacin).
Las sutiles seales posicionales emanadas de las f!bronectmas son tanteadas por las clulas en movimiento, para Jo cual sus fi lopodios se extienden Y
retraen (crecen y se acortan) como si estuvieran "olfatendolas". Cuando los
filopodios "perciben" las seales correctas, se adhieren al colgeno; SI no,
.
continan "explorando" el medio extracelular hasta dar con ellas.
Los desplazamientos de las clulas son tambin dirigidos por sustanc1as
solubles emitidas por otras clulas -a veces distantes-, que pueden provocar su atraccin o su repulsin. Si existe atraccin, el fenmeno lleva el nombre de quimiotaxis, que define la conduccin de las clulas mtgratonas hacia el lugar de mayor concentracin de la sustancia sol uble. Se ha comprobado que las sustancias quimiotcticas estimulan - en la membrana pl:smuca
de las cl ulas en movimiento- a receptores que ponen en marcha senales JJ~
tracelulares que activan a la protena Arp2/3. El fenmeno op~esto a la ~ut
miotaxis, es decir, la quimiorre:-_:>ulsin, depende de una protema denommada semaforina.
Los mecanismos por los cuales las clulas migratorias reconocen a otras
clulas en sus lugares de destino y se establecen en ellos se anahzan en los ca,ptulos 6-8 y 6-9.
5-28. El avance de los axones presenta algunas semejanzas
con la motilidad celular
Como se sabe, las neuronas se hallan conectadas entre s y con las clulas
musculares y secretorias por medio de prolongaciones citoplasmticas llama-
dlls 11xo 11 s. J.as clulas asf concctuclas pueden estar separadas por dtstancws
t' t>lll: idnu hl 1 ~.
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S. EL CITOESQUELETO
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Jllfl. ~-36. Traslado d del rminndas
IIPinounl n llnv<_<s dr In pn11.: d tll'i luho
111111111 Jlllnd!lvn, g nindu/1 po1 t \Jullw
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1111
111thnl
~.
A medida que van ocupando los lugares vacos, las clulas que se
reproducen en los cultivos de tejidos migran y establecen contactos
con sus vecinas. No obstante, cuando una clula queda rodeada por
otras, deja de dividirse y pierde su motilidad. Este fenmeno --denominado inhibicin por contacto-- ocurre en todas las clulas del
cultivo, por lo que terminan formando una monocapa celular caracterstica. Debe sealarse que las clulas cancerosa~ cultivadas no cxpcrimentan esta clase de inhibicin y, dado que s siotll'll di viditntlo
y lllllvi ndo, se npilun tnuts soiln otras hasla f'otnuu ntu "' tt" ttllt
ll"; tlo VIII lt,, (' 11(1111. dt (>ll>ftttllillilltl (1 o ,
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Sustancia
amorfa
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Filamento
de actina
\1
(Vt.. lllll'
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f1 H),
102
5. EL CITOESQUIJLL'.'I't 1
Membrana
plasmtica
1111
Reticulo sarcoplasmtico
Tbulo T
Disco Z
Jiig. 5-39. Fibras del mscu lo
estriado en las que se ilustran
las miofibrillas con sus sarctncros (obsrvense las bandas
A e [ y los discos Z), el retculo sarcoplasmtico y la membrana plasmtica. Los tbulos
'1' son invaginaciones de Ja
rnc mbrana plasmtica que se
vinculan con el retculo sarcoplas mtico, organizadas para
co nducir impulsos desde la
s uperficie de la clula al inte' ior de sta, a fin de que todas
l:ts miofibrillas se contraigan
sincrnicamente.
ca que lleva el nombre de membr ana terminal, desde la cual nacen los filamentos de actina que ingresan en las microvellosidades (fig. 5-38). Es necesario agregar que en las clulas epiteliales el permetro de la membrana terminal se contina con los filamentos de actina del cinturn adhesivo (seccin
5-21 y cap. 6-12) (fig. 6-8).
Volviendo al eje de la microvellosidad, sus filamentos de actina se unen
entre sf por medio de dos protenas ligadoras, la villina y la fimbrina (fig.
5-38). Adems, los filamentos de actina ms perifricos se conectan con protenas integrales de la membrana plasmtica por intermedio de molculas de
miosina l. Se desconoce por qu esta protena motora se localiza en una estructura celular inmvil.
5- 33. En la cont ractilidad de las clulas musculares estriadas
intervienen f ilamentos de actina y varias protenas accesorias
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'''
..
H. Huxley.)
104
5. EL CITOESQUELETO
tos de actina, y cada uno de stos por tres fibras de miosina; por consiguiente, el nmero de filamentos de actina duplica al de fibras de miosina. Por otro lado, los cortes transversales a nivel de la lnea M revelan la existencia de puentes proteicos entre las fibras de miosina.
Es necesario describir cmo se asocian los monmeros de miosina II para formar las fibras gruesas interpuestas entre Jos filamentos de actina. Cada una de estas fibras se halla integrada por numerosas molculas de
miosina II, cuya combinacin da lugar a una estructura
bipolar con forma de vara (fig. 5-42). Esta exhibe una
zona "lisa" -correspondiente a la banda H del msculo contrado-- en medio de dos regiones "rugosas", que se ven as por la presencia de las cabezas
de las miosinas II, las cuales se proyectan desde la fibra como si fueran brazos. En la figura 5-42 puede observarse que las cabezas de las miosinas II estn opuestamente orientadas en las dos regiones mgosas, Jo que le da a la fibra gruesa su condicin bipolar.
Las cabezas de las miosinas II surgen del eje fibroso a intervalos regulares de 7 nm y con una diferencia angular entre ellas de 60, por Jo que en conjunto describen, a Jo largo de dicho eje. una trayectoria helicoidal (fig. 5-42).
Esta es la razn por la que cada fibra de miosina JI interacta con seis filamentos de actina simultneamente (fig. 5-40).
Los cambios que ocurren en el sarcmero durante la contraccin de la clula muscular pueden observarse con los microscopios de fase y de interferencia (caps. 23-7 y 23-8). La banda A no se modifica, pero las hemibandas
1 se acortan en forma proporcional al grado de contraccin. El acortamiento
de las hemibandas 1 se debe a que los discos Z se acercan mutuamente. Al hacerlo empujan a los filamentos de actina hacia el centro del sarcmero, de
manera que las reas de superposicin de los filamentos de actina con las fibras de miosina JI se amplan (fig. 5-43). Si la contraccin se acenta, los extremos libres de los filamentos de actina pueden llegar hasta la lnea M (fig.
5-43). Todos estos fenmenos se revierten durante la relajacin.
Los desplazamientos observados durante la contraccin se deben a que las
cabezas de las fibras de miosina se deslizan activamente sobre los filamentos
de act.ina. Para ello, cada cabeza se flexiona en relacin al tallo fibroso, co-
1 11111111111111
1
1 11111111111111
~
11111111111111
11111111111111
111111111111 11
Hllllllllllll
111 ::::::::
llllltllllllll
11111111111111
Contraccin
Contraccin mxima
Actina
Tropomiosina
l11lt'ho
v , "II IJH,
Ututhn.
'1
cercanos al disco z.
Troponinas
11'1~~- :"-43. IZ~luicrdu. Esquemas ~~u~ muestran, en un conjunto de seis sarcmcros, el mecanismo d l'elajnri 111 nnl tllt 'du dd
1111Wr11lo ("~! nado. 1 manir la rrh\lllrtfa la h1111da~ 11 ~e amplan. D11ranlc la conlraccin los filam~nl oH clr 11'!11111 ~ 1! ~l l t n u 11 11
1 In
105
pl Oh \ (111111 ''\1ltladotll'l dt In
111
106
S. EL CITOESQUELETO
w-AdiM
5-34. En la contractilidad de las clulas musculares cardacas
participan estruct uras similares a las del msculo estnado
Fig. S-46. Desplazamiento de
la tropomiosina antes de la
__
A------+--
107
Una de las diferencias ms notables entre las clulas musculares esquelticas y las clulas musculares cardacas es la presencia en stas de los discos
intercalares, encargados de unir a las clulas cardacas por sus extremos. Estos discos se comportan como si fueran discos Z, pues de ellos nacen los filamentos de actina y de titina.
Los discos intercalares contienen desmosomas (cap. 6-13); stos se asocian a filamentos intermedios de desmina que derivan -de los que unen a las
miofibrillas entre s, mencionados en la seccin anterior. Adems poseen
uniones comunicantes (cap. 6-14), necesarias para sincronizar las contracciones de las clulas miocrdicas.
,_
H----,
Titina
Actina
11'111. !i-47. Representacin es'l'll'lllllticn pnrcinl del surc11111111, qu iu~luyc In.~ mnl6cultHt th' lillnn. Sl ,'iPnnlu ol lnr
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111
108
gos entrelazados, llamados a y p (o banda 1 y banda 2, respectivamente). Dado que los dmeros se conectan por sus puntas, se forman tetrmeros, cuyos
extremos se unen a filamentos de actina cortos (o banda 5).
La figura 5-49 permite ver que cada filamento de actina se conecta con varias espectrinas tetramricas; tales conexiones son mediadas por la protena
ligadora aducina. Muestra tambin que los filamentos de actina se unen a
una glicoprotena transmembranosa llamada glicoforina mediante la protena ligadora banda 4.1.
Adems, el filamento de actina se halla asociado a otras dos protenas: la
tropomodulina , que determi nara su longitud, y la tropomiosina, cuya funcin se desconoce.
Cerca de su parte media cada tetrmero de espectrina se conecta con la
protena transmembranosa banda 3, que es el contratranspottador de CJ- y
HC03- descrito en el captulo 3- 17. En esta unin interviene la protena ligadora anquirina.
Es preciso sealar que el conjunto de este sistema de protenas citoesquelticas y membranosas le confiere al eritrocito su forma bicncava y la flexibilidad necesaria para poder circular por los capilares sanguneos de dimetros menores que el suyo.
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1111111 H. l. nnd llill
11 11 11111/d
lt d JI IIIIi"ll
MATRIZ EXTRACELULAR
6-:'. La matriz extracelular contiene ele ment os fluidos y fibrosos
llpllt ollltHI11.lln
e lu ' ''''u,nllutn
Unidad disacrida
Acido glucurnico; N-acetilglucosamina
Acido glucur6nico; N-acctilgalactosamina sulfato
1\c idn idurnico; N-acctii!Jnlactosamina sulti110
11
110
l 11
~--Tropocolgeno
hialu rnico
l<'ig. 6-1. Esquema de un agregado molecular compuesto
por numerosos proteoglicanos
unidos a un cido hialu rnico.
Glicosaminoglicano
sulfatado
un medio por el que arriban a !as clulas las sustancias inductoras (seales)
proven ientes de otras clulas (cap. 11 -2).
Los componentes de la matriz extracelular puede n clasificarse en fluidos
y fibrosos. Los fluidos conesponden principalmente a glicosaminoglicanos y
proteoglicanos (cap. 2-6), mientras que los fibrosos se dividen en protenas
estructurales (colgeno) y protenas adhesivas (fibro nectina, \aminina).
6-3. Los glicosaminoglicanos y los proteoglicanos son componentes
fluidos de la matriz extracelular
La fase lquida de la matriz extracelu!ar contiene una clase especial de po!isacridos llamados glicosaminoglicanos, los cuales suelen hallarse asociados entre s y con protenas, con las que componen grandes complejos glicoproteicos denominados p roteoglicanos (cap. 2-6) (figs. 2-10 y 2-11). Pueden
asociarse ms de 100 cadenas de g!icosaminoglicanos a una sola protena y
en ocasiones varios de estos proteoglicanos se unen a una molcula de cido
hia!urnico - que es el glicosaminoglicano de mayor tamao- , lo cual origina agregados molecu lares de enormes proporciones (fig . 6- 1).
Los glicosaminoglicanos son hidratos de carbo no compuestos por una sucesin de unidades disacridas repetidas y alternadas, en las q ue uno de los
monosacridos posee un grupo amino, puesto que es una N-acetilglucosamina o una N-acetilgalactosamina, y el segundo es un cido glucur nico, un cido idurnico o una galactosa (cap. 2-6).
En la tabla 6- 1 se mencionan los principales glicosaminoglicanos y sus
unidades repetitivas. Como puede apreciarse, a excepcin del cido hialurnico, estn sulfatados. A causa de la presencia de los sulfatos y a que poseen
numerosos grupos carboxilo, Jos g\icosaminoglicanos son molculas muy
cidas, con numerosas cargas negativas que atraen grandes cantidades de Na
-y, por lo tanto, de H 20-, lo cual aumenta la turgencia de la matriz extracelular.
Colgeno
d' d d d 67
cas del mismo tamao trenzadas en forma helicoidal. La peno ICt a e
nm en las e striaciones de las fibrillas colgenas se debe a que los tropocolgenos se agregan en paralelo y se superponen en unas tres cuartas partes de
1111 ~ vn .
lu
11\tlllll n
(,up. '/ 1 ) ,
112
Filamentos
intermedios
11]
Durante las respuestas inmunitarias, la reparacin de las heridas y la detencin de las hemorragias es necesario que algunos tipos celulares establezcan uniones transitorias con otras clases de clulas. Las uniones se producen
gracias a los fenmenos biolgicos llamados reconocimiento y adhesin
celular.
Ambos tienen lugar cuando determinadas clulas de la sangre (neutrfilos,
monocitos, linfocitos, plaq uetas) se conectan fugazmente con las clulas endote!ia!es de ]os capilares sanguneos, lo cual es un prerrequisito para poder
salir de la san<>re y pasar a los tejidos (fig. 6-4). La adhesin se produce porque en la me;brana plasmtica de las clulas sanguneas existen, glicolpidos
y glicoprotenas que interactan especficamente con ghcoprotemas ~ompl e
mentarias -llamadas selectinas- presentes en la membrana plasmauca de
las clulas endoteliales. Inversamente, en otras ocasiones los glicolpidos Y
las glicoprotenas se localizan en las clulas endoteliales y las selectinas en
las clulas sanguneas.
Estas interacciones son necesarias para que las clulas sanguneas se detengan en el lugar apropiado y pasen entre dos clulas endoteliales conti~uas ,
lo cual les permite alcanzar el tejido donde - segn el caso- parttctparan en
la respuesta inmunitaria, en la cicatrizacin de la herida o en la detenctn de
la hemorragia.
La especificidad de la unin es provista de un lado por los oligosacridos
de Jos glicolpidos y de las glicoprotenas y del otro por los oligosacridos de
las selectinas. Los oligosacridos interactuantes son diferentes entre s, de
modo que se establecen conexiones entre molculas de distinta composicin
(uniones heteroft1icas) (fig. 6-5). Las selectinas deben su nom~re a las ad~e
siones selectivas que median y a que son lectinas, es decir, moleculas que tienen una gran avidez por hidratos de carbono.
Otras adhesiones celulares heteroflicas transitorias tienen lugar entre las
clulas mieloides (durante su proliferacin), enue los linfocitos By T (durante ]a activacin de los primeros) y entre los oligodendrocitos o las clulas de
Schwann y las neuronas (durante la mie!inizacin). En todos estos casos, oligosacridos de una de las dos clulas interactuantes reconocen especficamente a glicoprotenas llamadas sialoadhesinas, presentes en la membrana
plasmtica de la clula opuesta.
.
_.
En el curso del desarrollo embrionario se producen adheswnes heterofthcas similares a las descritas, aunque son ms comunes las adhesiones homoflicas que se analizan en la prxima seccin. Finalmente, otro ejemplo de adhesin heteroflica se da durante la fecundacin del ovocito por el espermatozoide (cap. 19-19).
Fig. 6-S. Uniones moleculares heterofflicas y homoflicas. En las uniones homofflicas mediadas por las cadherinas interviene el Ca2\ ilustrado como un rectngulo de color amarillo.
11 Mll ll/11 11
'
luh11
I IIII<'IIIIIIIIIIOIIIIr;ll
116
117
Filamentos
intermedios
6-1 2. El cinturn adhesivo contie ne glicop rote na s II<Jm adas cadh e.ri nas
El cinturn adhesivo (llamado tam bi n desmosoma en cinturn, desmosoma en banda, banda de adhesin., barra terminal o zonula adherens) es
otro tipo de unin que desarroll an las clulas epite liales para mantenerse ligadas entre s.
Se localiza por debajo de la uni n oclusiva (fig. 6-7) y en su co mposicin
intervienen gli coprotenas transmembranosas de la famili a de las cadherinas
(secci n 6-9) y la franja de filame ntos d e actina corticales estudiada en el
captulo 5-2 1. All se adelant que las cadhe rinas se conecta n con los filamentos de actina mediante las protenas ligadoras, placoglobina, catenina,
0'.-actinina y vinculin~
.__
Como m uestra n las figuras 6-8 y 6-1 O, las cadherinas dan lugar a una franj a proteica que circunda las paredes late rales de la clula, del mismo ancho
que la franja de fil ame ntos de acti na con la que se hallan conectadas. Las figuras 6-8 y 6- 1O muestran tambi n que la uni n intercelular se produce en
virtud de que las cadherinas se conectan a travs de sus dominios externos.
Segn se vio e n la seccin 6-9, se trata de uniones ho moflicas, pues las molculas que interactan son iguales e ntre s (fig. 6-5).
El nombre de cinturn adhesivo hace refere ncia a las dos caractersticas
ms no torias de este tipo de uni n: la di sposicin circular de las cadhrinas y
los filame ntos de actina y la propiedad de las primeras de adherirse mutuamente.
El conjunto de cinturones adhesivos forma un e nrej ado tra nsepitelial, del
cual deri va parte de la resistencia lateral de los epitelios.
dcsmocolinn 11.
lrr :rl qow <' 11 d r inirrr lll lldlresivo, las l'IHIIw oi nns tic l11 "''
~ 't ' ll fi ' N /1\ \ llllt ' ll . 'llll t ' ( pt11 '/111, tfllll i iiiH'l t ':d nllllll ( 11 1' l 1 111
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rul v 1
1 H 1 HH i d 11 ~ ~~
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Cadherinas
dominios citoslicos se asocian con fi lame ntos inte rmed ios de queratina (no
con filamentos de actina) . Esta ltim a asociacin es mediada por una placa
discoidal que incluye las protenas ligadoras desmoplaq uina 1, desmoplaquina II y pla coglobina. Una cara de la placa se relaciona con las cadhennas y la otra con los filamentos de queratina, los cuales -como horqUillasingresan en el d isco, se c urvan y vuelven al citosol (fi g. 6-11 ).
Adems de unir fuertemente a las clulas epiteliales e ntre s, los desmosomas y los filamentos de queratina compone n una red transcelular extendida por todo e l epitelio. al que le confieren una gran resistencw mecmca. Es
por ello que en los distintos tejidos el nmero de desmosomas es proporciOnal al grado de tensin o de estiramiento a que son some tidos. Por eJemplo,
en el epitelio de la mucosa de la vejiga urinaria los desmosomas son muy
abundantes.
En el captu lo 5-34 se vio que los d iscos intercalares que ligan a las clulas m usculares cardacas contienen desmosomas asociados con fila mentos de
desmina.
118
119
Fig. 6-13. Vista superfic ial ultramicroscpica, con coloracin negativa, de numerosos
concxones en la membrana
plasmlica de la clul" he pti
ca. 425.000x . En el recuadro
se observa que cada unidad
1icne la forma ele un anillo he
xagonal cuyos lados cones-
das por una distancia ele 2 a 4 nm . Por este motivo a la unin comun icante se
la llama tambi n unin e n he ndi dura (fig. 6- 12).
En las clulas epiteliales los conexones se encuentran e ntre Jos desmosomas. No estn uniformemente distribuidos sino agrupados en conjuntos aislados, cada uno compuesto po r unos pocos o por cie ntos de conexones.
La figura 6-!3 corresponde a una imagen ultramicroscpica con coloracin negati va de numerosos conexones e n la mem brana plasm tica de un hepatocito. Los conexones aparecen como anillos que forman un enrejado hexagonal con una periodi cidad de 8.5 nm. En el recuadro se obser va una representaci n lograda mediante el procesamiento densitomtrico computarizado de las imgenes electrnicas.
El conducto central d el conexn tiene un dimetro de alrededor de 1,5 nm.
Po r l pasan li bremente algunos sol u tos (iones, monosacridos, nucletidos,
a minocidos, etc.) del citoplasma de una cl ula al citoplasma de la clula veci na, pero no las macromo lculas. Tales pasajes indican que existen acoplamientos me tablicos y elctricos e ntre las clulas contiguas.
La estructura de los conexones es comparable a la de los canales inicos
vistos en el captulo 3-14 . Debe recordarse q ue los canales dependien tes de
voltaj e y de ligando estn compuestos, respectivamente, por c uatro y cinco
protenas transmembranosas, en lugar de las seis de los conexones. Estos, como los canales inicos , no son estructuras estticas, ya que tienen la capacidad de abrirse y de cenarse. Comnmente se hallan a biertos, y se cienan
cuando aumenta la concentracin de Ca 2 en el citosol. La figura 6-12 muestra que el cien e o bedece a un cambio de inc linacin de las conexinas.
Las conexinas contienen c ua tro dominios transmembranosos y sus extremos amino y carboxilo se hallan orientados hacia el citosol. El dominio contiguo al extremo carboxilo tiene una funcin importante de bido a que s u fosforilacin modifica la posicin de la conexina y lleva al cierre del cnnexn.
Dado que en una unin comunicante la clausura de un C<>rlo<'>ll se rroduce independienteme nte del o tro, el cie rre del canal pu de Nc'> ' '"'"ll'<'ll(' llc'in ek
la clau sura
d llllo <k
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El sistema de
endomembranas
Digestin y secrecin
El sistema de endomembranas est integrado por los siguientes organoides (fig. 7-1 ):
1) el retculo endoplasmtico, que comprende dos sectores, denominados liso y rugoso
(debe agregarse adems la envoltura nuclear,
que ser analizada en el captulo 12-2); 2) el
complejo de Golgi; 3) los endosomas, y 4) los
lisosomas.
Las membranas de estos organoides y las
de las vesculas transportadoras estn constituidas por una bicapa lipdica similar a la de la
membrana plasmtica. Como es obvio, una de
las caras de estas membranas se relaciona con
el citosol y la otra con la cavidad de los organoides. Se denominan, respectivamente, cara
citos6lica y cara lumi11al.
l .as 111 'lnhrauas pose n gli 'Pifpidos . y g li
C'll)tlllh' frllt fl
Retfculo
endoplasmtico
122
12.'
--
Formacin de
una vesicula
transportadora
Fusin de
membranas
(vase Fig. 3-13)
Compartimiento
receptor
sentan ms del 80% ele su peso (fig. 3- 14). Los hidratos de carbono se orientan siempre hacia la cavidad de los organoides.
El tamao del sistema de endomembranas vara en las distintas clases de
clulas. Es muy pequeo en los ovocitos, en las clulas poco difere nciadas y
en las que producen protenas para el c itosol exclusivamente, como los reticulocitos.
RETICULO ENDOPLASMATICO
7-3. Generalidades
El RER est muy desarrollado en las clulas que realizan una activa sntesis proteica. En su composicin predominan los sacos aplanados, que cuando son abundantes se encuentran separados por un angosto espacio citoslico repleto de ribosomas (fi g. 7-4).
Estos ribosomas se hall an adheridos a la cara citoslica de la membrana
del RE (fig . 7-6). Por lo general componen complejos llamados polisomas o
polirribosomas , consistentes en grupos de ri bosomas enlazados por una molcula de ARNm (figs. 7-3 y 16-7) (cap. 16- 11 ). La afinidad del RER por los
ribosomas se debe a que en su membrana existen receptores especficos (seccin 7-12), de los cuales carece el REL.
COMPLEJO DE GOLGI
7-6. Generalidades
En 1898, utilizando un mtodo de coloracin argntica, Camilo Golgi descubri una estructura reticular en las clulas nerviosas que posteriormente
llev su nombre. Medio siglo despus, con el advenimiento de la microsco-
l'ig. 7-4. M icrografa eleclrnica del retculo endoplasmti co rugoso. Obsrvense los
ribosomas unidos a la membrana del organoide (uno aparece marcado con una !lecha).
208.000x . (Cortesa de G. t:.
Paladc.) En el r cuadro ~e
d is tiugm, u las ~uhun i d adt..'"
111\' llnl (M,) y n1n 111 (Mt J ih' l
1 lhtll,i 111111. d 1!l , I H III ~ ({ 'nlt '
'l fll
124
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
125
Vesculas destinadas
a la membrana plasmtica
o a los endosomas
___..----- Red trans
./""- - - Cisterna trans
Vesculas
provenientes
del RE
pia electrnica, el fraccionamiento celular y las tcnicas de anlisis citoqurnico, pudo revelarse su estructura y su composicin molecular.
En una clula idealizada el complejo de Golgi se halla entre el RE y la
membrana plasmtica, con los endosomas y los lisosomas situados entre sta y el complejo (fig. 1-7). Estas relaciones espaciales son el reflejo de otras
de ndole funcional, ya que, por medio de vesculas transportadoras, las molculas provenientes del RE alcanzan el complejo de Golgi, lo recorren, se
desprenden de l y arriban a la membrana plasmtica o a los endosomas (fig.
7-1). Estos flujos comprenden tanto molculas membranosas como molculas luminales. As, segn la va seguida, se transfieren fragmentos de membrana del RE a la membrana plasmtica o a la membrana de los endosomas,
mientras que las molculas provenientes de la cavidad del retculo se vuelcan
en el medio extracelular - esto se denomina secrecin- o ingresan en la cavidad de los endosomas.
Corno se ver, en ambos casos el complejo de Golgi desempea un papel
fundamental, dado que las molculas que lo recorren experimentan modificaciones necesarias para sus actividades biolgicas. Por otro lado, algunas molculas son sintetizadas directamente en el complejo de Golgi, sin la intervencin del retculo endoplasmtico.
l'ln. 7-7. M k HI\IHin th'J, utupk \n d' f ;1111'1 qHt' l'''' 'ull'
1 1 l! lti V III
12(,
Diacilglicerol aciltransferasa
Triacilglicerol + CoA
CoA
CoA
Acil CoA
Acidos grasos
Los triacilgliceroles (triglicridos) estn compuestos por tres cidos grasos unidos a una molcula de glicerol (cap. 2-7).
Su sntesis tiene lugar en e l citosol, donde Jos cidos grasos se unen a la
coenzima A (CoA) -mediante una tioquinasa- y se forman molculas de
acil CoA (fig. 7-8).
CoA CoA
Tioquinasa
Acido graso + CoA + ATP - - -- --+ Acil CoA + ADP+P
Por su lado, el glicerol se fosforila en su C3' mediante una glicerol quinasa, lo cua l genera glicerol 3-fosfato.
Glicerol + ATP
l~
~ ~
CoA
CH, - CH - CH,
CH
U-1
OH
UH
1 '
Cl l
CoA
CoA
Glicerol 3-fosfato
Glicerol qujnasa
Dlacilghcerol (DAG) + p
AF
rm~nn
CpA
1 Citosol
guMUM
ITIT*nn
guMUM
Dihidroxiacetona fosfato
Glicerol 3-fosfato
DAG
CpA
niT~niT ~
~uuu~
Aci ltransferasa
rrr +c"
Triacilglicerol (TAG)
(se traslada al citosol)
ITITiiTIT
UUUUQ
Fosfatasa
Acido fosfatdico - -- - - > l ,2-diaci lglicerol + P
ITIThiT
uuuu~
46
Fi n<ilmc nle, mediante la ciiac ilg lic rol aciltran~ l'crasa , lllllllii('Viiii(' I C11i\
ll !ll".f'j,.,l' s11 ;cido g raso al ('V dl'i 1) diiil' I~ I 1'<'1'111. HJin, o"'f'll'i .J 111 .1 11 1
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Jo'iJ'. 7-H.
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127
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
128
Fosfatidilcolina. Debe recordarse que los glicerofosfolpidos estn integrados por una molcula de glicerol, dos cidos grasos, un fosfato y un segundo alcohol (caps. 2-7 y 3-3) (figs. 2-14 y 2-20).
La fosfatidilcolina se forma en la rnonocapa citoslica del RE por la unin
del 1,2-diacilglicerol (seccin 7-8) con la citidina difosfato-colina. La reaccin es catalizada por una fosfotransferasa especfica (fig. 7-8).
Fosfotraosferasa
1,2-diacilglicerol + CDP-colina
Previamente, la CDP-colina se sintetiza en dos pasos. En el primero, mediante una quinasa, la colina es fosforilada con un fosfato tornado de la adenosina trifosfato.
Fosfatidilinositol. Las reacciones responsables de la sntesis del fosfatidilinositol (PI) son similares a las de la fosfatidilserina, excepto porque se
agrega el polialcohol cclico inositol en lugar de la serina.
Este fosfolpido se convierte enfosfatlilinositolfosfato (PIP), enfosfatidilinositol difosfato (PJP2) y en josfatlilinositol trifosjato (PIP1) por el
agregado sucesivo de fosfatos (fig. 2-16). Estas fosfonlac10nes son catahzadas por quinasas con fosfatos tornados de molculas de ATP.
Quinasa
Pl + ATP
Quinasa
PJP+ ATP
Quinasa
PIP2 + ATP
Quin asa
Colina + ATP - -- - - > Fosforilcolina + ADP
Transferasa
Esfingosina + Acil CoA - - - - - - > Ceramida + CoA
El rmrolpido se
fonna o ) l'lllllhinai'St;
1'1111
,.
La sntesis de la esfin gomielina se completa en la cara luminal del complejo de Golgi, de modo que la ceramida debe translocarse -merced a la fli- abandonar la membrana del RE y transferirse a la membrana del
pasa ,
.
1
complejo. Como se sabe, esta transferencia se realiza mediante ves1cu as
transportadoras.
.
.
En su nueva localizacin la ceramida se combina con la fosfonlcohna
merced a otra transferasa, lo que la convierte en esfingomielina.
Transferasa
Ceramida + Fosforilcolina - - - - --> Esfingomielina
Colesterol. La membrana del RE incorpora molculas de colesterol ingresadas en la clul a por endocitosis (seccin 7-42) y tamhin las sinleli7.a. Igual
qu(' los fosfollpidt ts, l rok~ii'I'Ol sr 1ransfi n: a las r stanl cs .nJ<:lllhr:lllas tk
In
~ .11 11
:p11iulow 11 t ~~ lt1
11 wn1'hrm1H
plu:antk
lllttl nuah v c N
tulw~
129
130
Transfcrasa
- - - - -->
Galactocerebrsido + UDP
La sntesis de los glucocerebrsidos (fig. 2-21) es si milar, salvo por el hecho de que se transfiere la glucosa de la UDP-glucosa mediante otra transferasa.
Ceramida + UDP-glucosa
Transferasa
- - - -- ->
Glucocerebrsido + UDP
Los ganglisidos (fig. 2-22) se forman cuando a la cera mida se unen -de
a ~tno por vez- los monmeros de las cadenas oligosacridas. El primer monomero que se agrega es la glucosa; luego lo hacen -en diferentes cantidades Y ordenamientos seg n el tipo de ganglisido- la galactosa, la N-acetilglucosamma, la N-acetilgalactosam ina, el cido silico o N-acetilneuramnico y la fucosa (cap. 2-7).
Igual que la galactosa y la glucosa de los cerebrsidos, los monosacridos
~ue participan en la sntesis de Jos ganglisidos se presentan unidos a nucletidos (por ejemplo, UDP-glucosa, UDP-galactosa, UDP-N-acetilglucosamina, UDP-N-acetdgalactosami na, CMP-cido silico y GDP-glucosa).
7-1 2. Las pt:otenas destinadas a l RE se insert a n en la membrana
o se ltbera n e n la cavidad del organoide
Las protenas, excepto unas pocas pertenecientes a las mitocondrias se
sinte tizan en Jos ribosomas del citosol (cap. 16-9). Si bien todos Jos rib~so
mas citoslico~ son iguales, algunos estn dispersos en el citoso l y otros se
hallan adosados a la membrana del RER (tig. 16-8). A continuacin veremos
por qu y cmo.
Los primeros pasos en la sntesis de una protena destinada al RE se pro-
cia de alrededor de 30 aminocidos -5 a 10 altamente hidrofbicossituada en el extremo amino o cerca de l (tabla 4-1).
Las protenas que se liberan en la cavidad del RER poseen slo esa
seal , localizada en el extremo amino de la molcul a. En cambio, las que
se insertan en la membrana del organoide contienen, salvo excepciones,
un pptido seal cercano al extremo amino y otras seales, cuyo nmero depende de la cantidad de veces que la protena cruza la bicapa lipdica
(fig. 3-1 0). Por ejemplo, si la protena trans membranosa atraviesa la bicapa
una sola vez (monopaso), necesita una sola seal adicional, llamada seal de
anclaje por motivos que se vern ms adelante. Cuando se trata de una protena multipaso, sta contiene tantas seales como veces cruza la bicapa, consistentes en pptidos seal que se alternan con seales de anclaje. Las seales de anclaje contienen secuencias de aminoc idos de largo semejante al de
los pptidos seal (tabla 4-1 ).
Cualquiera que sea el nmero y la localizacin de las seales, apenas el
primer pptido seal sale del ribosoma es reconocido por la partcula de reconocimiento d e la seal (o PRS) (fig. 7-9), que es un complejo ribonucl eoproteico compuesto por seis protenas diferentes y una molcula de ARN denominada ARNpc (por pequeo citoslico; en ingls seRNA , por small cywsolic) (fig. 7- 10). Las caractersticas y el procesamiento de este ARN se anali zan en Jos captulos 13-2, 14-18 y 15-12.
En la figura 7-9 puede observarse cmo, ligada al pptido seal, la PRS se
dirige hacia el RER y se une a su membrana mediante un receptor especfico. Esta unin insume energa, la cual es cedida por un GTP hidrolizado por
una GTPasa presente en el receptor.
La misma figura permite ver cmo la PRS atTastra al ribosoma hacia el
RER (en la seccin 7-5 se dij o que la membrana de este organoide posee receptores para los ribosomas) y cumple otra importante funcin: detiene la
sntesis de la protena para que sta no salga del ribosoma, ya que fuera de l
se plegara y no podra ingresar en el RER.
Muestra adems que cuando el ribosoma se une a su receptor, la PRS se
separa del suyo. Dado que la PRS se separa tambin del pptido seal, se reanuda la sntesis de la protena, cuyo extremo sale del ribosoma e ingresa en
un tnel proteico que cruza la membrana del RER (fig. 7-9). En el captulo
3-9 se dijo que los tneles de esta clase -utilizados por las protenas para
atravesar las membranas de los organoides- se denominan translocones. El
translocn del RER se diferencia de los translocones de los otros organoides
porque se asocia al receptor del ribosoma, con el que forma un complejo unificado (fig. 7-9).
Volviendo a la PRS, cuando se separa de su receptor (y del pptido seal)
puede ser usada nuevamente. Algo si milar ocurre con el ribosoma al cabo de
la sntesis de la protena (fig. 7 -9).
7-13. Las protenas destinadas al RE cont iene n una o ms
seales segn te nga n que liberarse en la cavidad
del organoide o insert arse e n su membrana
Como se dijo en la seccin anterior, las protenas destinadas a la cavidad
del RE R poseen un solo pptido seal, localizado en el extremo amino. Por
lo tanto, el tramo de la molcula que primero ingresa en el translocn incluye al pptido sct al inevitahlcmcnt , s n s v n la fi gura 7- 11 .
Dthido a 1]11<' ('] p ptido S\'ll:tl ]1\'llll,llll\'t'<' t'lll'llt:lllslodut , t'llllllllolo:; 11'11
IIIC I'l plctf f' h 'll!"' tp lt'
Ju
}3 1
J32
133
CITOSOL
Pptido
seal
CAVIDAD DEL RE
quilla. Luego, en virtud de que el pptido seal es escindido por una proteasa conocida como peptidasa seal, el pptido se pierde y se genera en la protena un nuevo extremo ami no, que pasa a la cavidad (fig. 7-11). Finalmente,
sta recibe a los restantes tramos de la protena, cuya sntesis contina en el
ribosoma por el incesante agregado de aminocidos en su extremo carboxilo
(cap. 16-13).
Al trm.ino de la sntesis, la protena se libera en la cavidad del RER (figs.
7-9 y 7- ll ). Segn de qu protena se trate, pe rmanecer en el RE o se dirigi r, mediante vesculas transportadoras, al complejo de Golgi, donde residin en forma permanente o se transferir, tambin por medio de vesculas
transportadoras, a un endosoma o a la membrana plasmtica, en el ltimo caso para su secrecin.
En la seccin anterior tambin se dijo que, salvo excepciones, las protenas destinadas a la membrana del RER poseen un pptido seal en el ex tremo amino y una o ms seales adicionales. Tales protenas se insertan en la
membrana del RER por alguno de los siguientes mecanismos (figs. 7-12, 7- 13
y 7- 14).
Fi~.
11
Si la protena posee una sola seal adicional, sta se ancla en la bicapa Jipdica - de ah el nombre de seal de anclaje- y el pptido seal es escindido por la peptidasa seal. Como consecuencia, se forma una protena transmernbranosa monopaso (cruza la bicapa una sola vez), con el extremo amino dirigido hacia la cavidad del RE y el extremo carboxi!o en el lado ctoslico (fig. 7-12A).
Fig. 7-13. Mecanismo de insercin de las protenas bipaso en la mem brana del RER.
134
rr~nrr,~rrffrrrr~rrnM
ffurr~~ ~rrnrrrrnrrnniTIT,~ITITftiT
"
convierte en un anticuerpo). En ambos pasos la molcula es prcticamente idntica, salvo por el hecho de que en
el primero posee un segmento adicional que la mantiene
anclada en la membrana. Este segmento corresponde a
una seal de anclaje cercana al extremo carboxilo de Ja
protena, inexistente en la inmunoglobulina que se secreta (cap. 15-7).
7- 14. Po li pptidos fabricados por ri bosomas
libres en e l ctoso l se incorporan a l RE
Como excepcin a la regla, existen polipptidos - generalmente de tamao muy pequeo- que ingresan en e l
RE a pesar de ser fabricados por ribosomas libres en el
citoso l. Se incorporan al RE a travs de tneles constituidos por protenas transportadoras de la familia ABC
(cap. 3-26), presentes normalmente en la membrana de
ese organoide.
7- 15. Chaperonas hsp70 aseguran el plega miento
norma l de la s protenas en ll cavidad del RE
} Nacetilglucosaminas (2)
} "'"""o:
} Glucosas (3)
135
GDP
d, J l111111(1 oli ' ''~' tH ' IItid,, 1'~. ,N llt'tilil r fth .,1 11 111 1111 y
'n'
11
Asn -
Fig. 7-16. Esquema que i lustra cmo el oligosac<rido precursor (de catorce hcxosas) se
desprende del dolicol y se liga
a una protena de la membrana del RER. Asn, asparagina.
N-acelilgluco amina
O Mnnonn
(l thl(lfO/ofl
Alf ln 11 11 ,,
'
111 t ulu
111111111 11 111
tll
1 ,
11
136
137
CARATRANS
J):
Q._r;=:
--~Agregado de N-acetilglucosaminas
L
~
_.:)'--- T -A_g-re_g_a-do y remocin de manosas
.._
_ ___
'-"'e ~) _
Fosforilacin de manosas
CARA GIS
7- lJ. La s nt esis de
, En el captulo 2-6 se vio que los oligosacridos que se hallan unidos a protemas por enlaces 0-glicosdicos se ligan a una serina o a una treonina. Su
sntesis se cumple en la cavidad del complejo de Golgi por el agregado -mediante ghcosiltransferasas especficas- de sucesivos monosacridos. Primero se liga una N-acetilgalactosamina a una protena de la membrana del organoide Y luego -de a uno por vez- se agregan los otros monosacridos. Por
lo general la cadena oligosacrida incorpora cidos silicos en su periferia.
,k.
o
o
Preproinsulina
:
2
(f)
::S
D..
o
o
z
..J
::J
:::
w
a:
--
Proinsulina
Pptido
seal
Pptido
Insulina
138
\
ENDOS OMA
(~~----~n
~
- ---"~
-
MEMBRANA
PLASMATICA
MP
Endocitosis
<-----Q-<~----
V.R.
V. R.
---
Enzima hidrolitica
MP
-( Receptor para la MP
f:\
Seal
fC
Inductor
Manosa 6-fosfato
Protena de exportacin
Protena de exportacin
Estos grupos son las seales que conducen a la~ enzimas hasta la regin
de salida _del compleJo de Golgi y las colocan en los sectores reservados para su envl hac1a los endosomas (fig. 7-20).
La manosa 6-fosfato se forma apenas la enzima hidroltica -proveniente
del RE- amba a la regin de entrada del complejo de Golgi (fig. 7-18). Es
generada por la accin de dos enzimas, la N-acetilglucosamina fosfotran sferasa Y la N-acetilglucosamina g licosidasa. La pri mera agrega una N-acetilgl ucosam ina fosfato al C6' de una de las manosas de los oligosacridos de la
enz1ma hidroltica (como vemos, sta es una gl icoprotena). La segu nda remueve a la N-acetilglucosamina pero no al fosfato, que queda retenido en el
C6' de la manosa. Conviene agregar que durante el procesamiento de las enztmas en el complejo de Golgi las manosas fosforiladas nunca son removidas.
Una vez arribada la enzima hidro ltica al lugar correcto de la reain de salida del complejo de Golgi, se liga -a travs de la manosa 6-fosf~to- a un
receptor especfico presente en la membrana del organoide, que corresponde
a ese lugar. Luego la enzima es despachada hacia el endosoma mediante el
mecanismo selectivo que se analizar en la seccin 7-40.
La importancia del arribo de las enzimas hidrolticas a los Jugares correctos del complejo de Golgi se confirma por la existencia de una rara enfermedad lisosm~ca que se produce por la falla de dicha funcin. As, en la enfermedad de celulas 1 (por tnclusin), a causa de trastornos genticos los fibroblastos no poseen N-acetilglucosamina fosfotransferasa, de modo que no se
forman manosas 6-fosfato en las enzi mas hidrolticas destinadas a Jos endesomas. Por consecuencia, las vesculas que transportan a esas enzimas se dirigen hacia la membrana plasmtica y se secretan en el medio extracelular. La
falta de enzimas en los endosomas impide la digestin de las sustancias endoctadas, las cuaJes pasan al citosol y pueden acumularse como inclusiones
(cap. 4-3).
El hallazgo de la manosa 6-fosfato y de su receptor llt:v al d1s,uhri
mie nto de otras seales in volucradas en l<t distribuci6n y lu 1:u1:1i ir 111 1u 11 el
las prol dn~ls a tr:1 v s del sist<nm dt <'llcl<>lllt'lllhr:1111s, S!' 1'" ' 1111 111 1111111 1 11 111
l ll hl ll 1 1
139
Transporte
K.DEL
KKXX
GPI
Manosa 6-fosfato
Varias Le Y
YQRL
NI' XY
11, .~ uiP .I'IPHIIII'II: F. ftrulntdnl 'u nh 11. A 11<~111 1, 1, h-uc. inu: N , nMpiu:w iuu; /', p1nlnm: (l, Jl ni!IIIIIIIH;
/( lll j1 UIIIIH,)
111 11'111111, \ ,lll d tlllt l lll lllllt 111:, 1 ,/ ' /, h cno,din, jluliluui'IIUI
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBR AN AS
140
rios entre la membrana plasmtica y el complejo de Golgi, ya que ste se halla en el cuerpo de la neurona, muy lejos del terminal axnico. Adems de recibir a las vesculas recicladoras, los endosomas de las terminaciones nerviosas generan las vesculas sinpticas que se cargan de neurotransmisores, cuya exocitosis completa el ciclo.
7-23. La clu la produce dos clases de secreciones,
una constitutiva y otra regu lad a
El proceso que provoca la descarga del contenido de las vesculas transportadoras en el medio ex tracelular se de nomi na secrecin. Esta puede ser
constitutiva o regulada (fig. 7-20)
En la secrecin constitutiva las molculas se secretan en forma automtica, confo rme el complejo de Golgi emite las vesculas que las transportan.
En cambio, en la secrecin regulada las molculas son retenidas en el c itoplasma - dentro de sus respectivas vesculas transportadoras- hasta la llegada de una sustancia inductora u otra seal que orde ne su liberacin. Esta
secrecin de molculas "por encargo" supone que la clula las descarga sbilamente, en el momento en que son de mandadas. Las vesculas transportadoras que interv ienen en las secreciones reguladas se denominan vesculas
ENDOSO MAS
7-28. El e ndosoma posee una bomba de H+ e n su membf'Jna
Los endosomas (del griego ndon, dentro, y soma, cuerpo) son organoides localizados funcionalmente entre el complejo de Golgi y la membrana
plasmtica (fig. 7-1 ). Sus formas y dimensiones son variadas, aunque por lo
general constituyen vesculas o cisternas rel ativamente pequeas.
La membrana del endosoma posee una bomba protnica (cap. 3-24) que
cuando se activa transporta H del citosol hacia el interior del organoide, cuyo pH desciende a 6,0 (fig. 7-22). En el capitulo 4-1 se vio que el pH citos-
lico es de 7,2.
Antes de analizar las funciones de los endosomas conviene describir el
proceso de endocitosis.
7-29. Existen dos formas de endocitosis, llamadas
pinocitosis y fagocitosis
En el captulo 3-10 estudiamos la permeabilidad de las membranas celulares y vimos que los solutos atraviesan la membrana plasmtica por transporte pasivo o activo e ingresan en la clula. Las macromolculas y las partculas entran mediante un mecanismo completamente distinto, denominado
endocitosis (fig. 7-22). De acuerdo con el tamao y las propiedades fsicas
del material que se va a in;mporar, este mecanismo es llamado pinocitosis o
fagoc itosis (fi g. 7 2 ).
1.HillnudtusiN(dtl 1"" 1" ,,,,,,.ll, lwhcr) ompr mk t:l ingrl'Stl de lfquido,,
iunln t 'IJII l1 /l lll lh ' llllllull t ul ll
y lt!ll
141
142
7. EL SISTEM A DE ENDOMEMBRANAS
ENDOSOMA
________,..
------~
VR.
"'1-------~ <~------ -
PINOCITOSIS
INESPECIFICA
Vesicula pinocittica
----Y-Y4--
Endocitosis
PINOCITOSIS
REGULADA
pH
143
=7,2
Vesicula pinocittica
Bomba de H
FAGOCITOSIS
MEMBRANA
PLASMATICA
- (Receptor
c.n lisosoma.
Fagosoma
Material incorporado
porque porciones circunscritas del lquido que se halla en contacto con la superficie externa de la clula son atrapadas mediante invaginaciones de la
mem brana plasmtica, lo cual da lugar a fositas y finalmente a vesculas que
se liberan en el citosol.
El proceso de pinocitosis puede demostrarse experimentalmente mediante el uso de una solucin de protenas marcadas con colorantes fluorescentes;
a veces es tan rpido que parec iera que la solucin es "bebida" por la cl ula.
Segn la calidad de la sustancia que habr de incorporarse a la clula, la
pinocitosis puede ser inespec fi ca o regulada (fig. 7-23). En la pinocitosis
inespecfica las s ustancias ingresan automticamente, lo cual ocurre en todos
los tipos celu lares. En cambio, e n la pinocitosis regulada las sustancias interactan con receptores especficos locali zados en la membrana plasmtica y
ello desencadena la formacin de las vescu las pinocitticas. Debido a la selectividad de este mecanismo, una sustancia puede ingresar en algunas clulas pero no en otras, de acuerdo con los receptores presentes en sus membranas plasmticas.
La fagocitosis (del griego pflagen, comer) tiene lugar en unos pocos tipos celulares, particularmen te en los macrfagos y en los leucocitos neutrti los. Segn las circunstancias, constituye un medio de defensa o de limpieza, capaz de eliminar parsitos pequeos, bacterias, clulas perjudiciales, daadas o muertas, restos de clulas y todo tipo de partculas extraas al orgamsmo. Como vemos, la fagocitosis permite la incorporacin de partculas relat vamente grandes y estructuradas.
Una vez que el material se fija sobre la superficie externa de la clula, la
membrana plasmtica emite prolongaciones envolventes que lo rodean hasta
dejarlo englobado en el interior del citoplasma, lo cua l forma una vescula
mucho ms grande que la pinocittica, llamada fagosomu (i'ig. 7 2. ).
l'ar:1poder ser fagocitado, clnl:ll cri;d d h 'OIIi <.: ll<:l o :u lq11 ili , ,u' '''" s
i ll dt \ tI H' SOII J'n,.' O IIOl 'ida s p or l't '(' l'plnt\'S fc H'a fi t.: Hiil~ t'll j ltl tllhl tllll t pl.t ,
III II IH 1 tft
/,
cadas" por anticuerpos llamados opsoninas (de l griego pson, mnnjar), provistos por el sistema inmunitario.
Fig. 7-23. Esquemas que ilustran cmo se incorporan maleri~lcs en la clula mediante distintas formas de endocitosis.
144
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
Pinocitosis
..,
\
@
\
Vescula
recicladora
1
1
1
1
G
~
\
\
'
\
\
SANGRE
l lnmunoglobulina A (lgA)
MP
145
En algunos epitelios se produce un proceso llamado transcitosis, mediante el cual materiales ingresados por endocitosis por una cara de la clula atraviesan el citoplasma y salen por exocitosis por la cara opuesta. El cruce a travs del citoplasma lo realizan dentro de la vescula formada durante la endocitosis, aunque en algunos casos emplean un endosoma como estacin de relevo (figs. 7-25 a 7-28).
En el captulo 6- 11 se dijo que en los tejidos epiteliales las uniories.oclusivas imponen diferencias en la composicin de la membrana plasmtica en
las regiones apical y basolateral de las clulas. Tales diferencias parecen ser
necesarias para el proceso de transcitosis.
El ejemplo ms difundido de transcitosis corresponde a las clulas endote!iales de Jos capilares sanguneos, ya que son atravesadas por las macromo!cu!as que pasan de la sangre a los tejidos (fig. 7-25).
Otros ejemPlos de transcitosis se registran en las clulas secretorias de las
glndulas lagrimales y en las mucosas de algunos rganos de los tractos digestivo, respiratorio y urinario (fig. 7-26). A tr<Jvs de ellas, ciertos anticuerpos -las inmunoglobulinas A (lgA)- pasan del tejido conectivo a la luz de
los rganos citados, donde ejercen sus funciones defensivas.
Durante la lactancia se produce un fenmeno semejante en las clulas secretorias de la glndula mamaria. Aqu las inmunoglobulinas A se transfieren hacia la luz glandular, es decir, a la leche (fig. 7-27).
A diferencia de las restantes protenas de la leche,
cuando estos anticuerpos arriban al intestino del recin nacido no son degradados inmediatamente para
su absorcin. De este modo el lactante -<:u yo sistema
inmunolgico an no produce suficientes anticuerpos
propios- puede proveerse de ellos para su defensa.
Este fenmeno ha sido observado en diversos roedores y rumiantes.
En la figura 7-28 se muestra el itinerario seguido
por los anticuerpos luego de ingresar en la clula intestinal por endocitosis: se incorporan transitoriamente 11 un ndosmna pri tllario y post riormcni ahandoFiJ~. 7~27. 'l 'run.-:dlil:-ii:l d(.'
111111 l1 t 't lulu po1 t:w.ol'itor.i rl , ( '111111l :1,: Vt ', t'll ,.,.,,,,s t'il
lio II IIUIIl ll i o ,
In lpA
tltl tpllt
14(,
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
147
SANGRE
+
1
sos el endosoma primario constituye una estacin de relevo para el transporte transcelular, ajena a la degradacin de sustancias. Debe sefialarse que en la
especie humana los anticuerpos que provee la leche materna aparentemente
no se absorben en el intestino y por lo tanto no in gresan en el organismo del
lactante. Sus funciones defensivas estaran confinadas a la luz intestinal, donde permanecen un tiempo antes de ser degradados por las enzimas hidrolticas encargadas de di gerirlos.
Otro ejemplo de transcitosis se halla en la placenta, cuyas clulas son atravesadas por anticuerpos de la familia de las inmunoglobulinas G. Al pasar de
la sangre materna a la fetal, estos anticuerpos le confieren inmunidad pasiva
al feto -y por un tiempo al recin nacido- contra varias enfermedades infecciosas.
USOSO MAS
7-33. Los lisosomas son organoides polimorfos
Todas las clulas contienen lisosom as (del griego isis, di solucin, y soma, cuerpo), que son los organoides que digieren a los materiales incorporados por endocitosis. Adems, mediante un proceso denominado autofagia
(que se analizar en la seccin 7-35) tambin digie ren elementos de la propia
clula.
Como se seal, se cree que los lisosomas se forman a partir de endosomas que recibieron dos clases de vesculas transportadoras, unas con material
endocitado y otras con enzimas hidrolticas (figs. 7-20 y 7-22).
La caracterstica ms saliente de los Jisosomas es su polimorfismo, no slo porque poseen aspectos y tamaos dismiles sino tambin por la irregulaIidad de sus componentes (figs. 1-11 y 7-29). La causa del polimorfismo es
doble; por un lado se debe a la diversidad del material endocitado y por el
otro al hecho de que cada clase de lisosoma posee una combinacin singular
de enzimas hidrolticas, de las que existen alrededor de 50 diferentes.
Las enzimas lisosrnicas se activan a pH 5,0. Este grado de acidificacin
se alcanza gracias a una bomba ele H presente en la membrana del lisosoma,
heredada de la membrana del endosoma secundario (cap. 3-2 y se iu 7 2X)
( l'i . 7-22).
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glicoprotenas (cap. 3-8). Por otro lado, si la membrana del lisosoma se rompiera, las enzimas escapadas no afectaran a los dems componentes celulares debido a que se inacti varan al tomar contacto con el ciloso l, cuyo pH es
de 7,2.
En el interior de los lisosomas las protenas y los hidratos de carbono endocitaclos son digeridos a dipptidos y monosacriclos, respectivamente. Estos y otros productos de degradacin atravi esan la membrana lisosmica y
pasan al citosol, do nde terminan de cligerirse o se aprovechan para construir
nuevas molculas. Por su parte, c ulminadas sus funciones, las enzimas lisosmicas tambin pasan al citosol, donde son degradadas por proteasomas
(cap. 4-6). Finalmente, libres de las enzimas y del material digerido, los lisosomas se reconvertiran en endosomas.
Algunas sustancias endocitadas no termi nan de digerirse y permanecen en
los lisosomas, que por ello adquieren el nombre de cuerpos residuales. En
ocasiones las sustancias no digeridas son expulsadas de la clula mediante un
proceso comparable a la exocitosis. Si esto no ocune, con el tiempo se convierten en pigmentos de desgaste depositados en el citosol (cap. 4-3).
7- 34. Los lisosomas tambin digieren protenas no endoct adas
La clula cuenta con dos dispositivos para degradar a las protenas fabricadas en su propio citoplasma, es decir, no endocitaclas. Uno acta en el citosol e involucra a la ubiquitina y a los proteasomas (cap. 4-6). El otro comprende a los lisosomas, que incorporan protenas citoslicas destinadas a desaparecer y las digieren en su cavidad. Para ello los lisosomas cuentan con
receptores membranosos especficos que reconocen a las protenas, las cualc.:s ingresan en e l organo ide por un lranslocn. Este se valdra ele dos chapem uas du la l':nnil ia J.sp71l (ap. 1] 'i). 111 1a cil os61it:a. (jll(' d sc.:mo llarfa :1 las
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148
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
149
RE
RETICULO
ENDOPLASMATICO
Proveniente del
1
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V.R.
......___Sea....______
MEMBRANA
PLASMATI CA
J Cubierta de COPI
Cubierta de COPII
: ) Cubierta de clatrina
J Cubierta no conocida
Autofagosoma
Diversas enfermedades congnitas se producen por mutaciones de los genes que codifican a las enzimas lisosmicas. Se caracterizan por la acumulacin intracelular de las sustancias que esas enzimas degradan.
Por ejemplo, en la enfermedad de Tay-Sachs algunas neuronas aparecen
repletas de un ganglisido. El defecto se debe a la ausencia de la enzima hexosaminidasa A, que cataliza la hidrlisis parcial del glicolpido. Por consecuencia, ste se acumula en las neuronas, lo que lleva a graves alteraciones
neurolgicas.
La enfennedad de Gaucher se caracteriza por la acumulacin de glucocerebrsido en varios tipos celulares debido a la ausencia de la glicosidasa que
cata liza la hidrlisis del glicolpido en ceramida y glucosa.
1.11 l'l!fermeliad de Niema1111-Pick muc.:slla una :wunud1wiou .,. '"illttt
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VESICULAS TRANSPORTADORAS
7-37. Durante su formacin, las vescu las transportadoras
se envuelven con una cubierta proteica
Con excepcin de los fagosomas, que suelen ser mucho ms grandes, las
vesculas transportadoras tienen un dimetro que flucta entre los 50 y los
250 nm. La medida mayor corresponde a las vesculas secretorias.
La figura 7-31 muestra que las vesculas transportadoras se originan en la
membrana plasmtica y en las membranas de los organoides del sistema de
endomembranas. Lo hacen con el concurso de una cubierta proteica de la que
existen varias clases, aunque de algunas no fueron descubiertas todava sus
protenas. Las ms estudiadas se conocen con los nombres de cubierta de
COP y cubierta de clatrina.
La cubierta de COP (por coat protein) se forma mediante la asociacin
ordenada de mltiples unidades proteicas. Existen dos clases de cubiertas de
COP, las cuales se diferencian no slo porque se componen de unidades proteicas distintas -denominadas COPI y COPII-, sino tambin porque generan vesculas en lugares diferentes del sistema de endomembranas. As, la cubierta de COPII genera las vesculas que se forman en el RE y se dirigen a
la cara de entrada del complejo de Golgi, mientras que la cubierta de COPI
genera tanto las vesculas que se forman en la cara de entrada del complejo
de Golgi y retornan al RE como las que interconectan a las cisternas del complejo de Golgi.
Por su parte, la cubierta de clatrina_.(dellatn clathrun o del griego kleter, enrejado de varillas) resulta de l~sociacin de mltiples unidades proteicas llamadas trisqueliones (del griego skelos, pierna). Genera las vesculas que surgen de la membrana plasmtica durante.: la 'tiCiocilosis y las que s
I'otuuuo L'JI la anod" salida dtl C'onoplcjo el<' ( :ol:i y ~~ dit i:n u los ndo:M
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Fig. 7-31. Esquema que ilustra la participacin de las cubiertas de COP y de clatrina
en la formacin de las vesculas surgidas de la membrana
plasmtica (por endocitosis) y
de los organoides del sistema
de endomembranas.
150
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
o
CITOSOL
1:11 !1'
( 11
Depsito de
unidades COP
o de trisqueliones
A pesar de las numerosas investigaciones realizadas, no se conoce la composicin de las cubiertas proteicas de las vesculas que se forman en la cara
de salida del complejo de Golgi y se dirigen a la membrana plasmtica durante la secrecin constitutiva, ni la de las vesculas que nacen de los endosomas.
La primera cubierta de COPen ser revelada fue la de las vesculas que interconectan a las cisternas del complejo de Golgi, compuesta por unidades
COPL Se denomin wcierta de coatmero (por coar protomer) y, puesto
que se crey que todas las cubiertas que faltaba descubrir eran iguales a ella,
se les dio ese nombre a todas las que no eran de clatrina, la cual haba sido
identificada mucho tiempo antes. A partir del descubrimiento de las unidades
COPII, retiene el nombre de cubierta de coatmero slo la que se compone
de unidades COPI.
Las vesculas transportadoras comienzan a formarse cuando las unidades
proteicas de la futura cubierta se apoyan sobre el lado citoslico de un rea
circunscrita de una membrana celular plana, a la que le proveen la fuerza mecnica para que se curve hacia el citosoL Como muestra la figura 7-32, el progreso de la curvatura desarrolla una fosita, que finalmente se desprende de la
membrana convertida en vescula.
En el caso de las vesculas cubiertas de clatrina, el desprendimiento se
produce cuando varias unidades de la protena motora dinamina rodean el
cuello de las fositas y lo estrangulan hasta seccionarlo (cap. 5-8). Estas vesculas tienen forma esfrica, a diferencia de las vesculas cubiertas de COP,
que en algunos Jugares suelen ser poliedros irregulares y en otros poseen una
apariencia tubular.
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11
111
1~ 1
152
Fig. 7-35. Esquema tridimensional de una vescula cubierta con clatrina. Se resalta un
trisquelin, compuesto por
seis polipptidos (tres grandes
y tres pequeos).
Fig. 7-36. Izquierda. Micrografa electrnica de numerosas cubiertas de clalrina aisladas y coloreadas negativamente. 67 .500x. (Cottesa de B. M.
F. Pearse.) Derecha. Micrografas electrnicas de fragmentos aislados de clatrina coloreados negativa mente. Se
observa un campo general y
tres de sus partes a mayor aumento. 105.000x y 195.000x,
respectivamente. (Cortesa de
R. A. Crowther y B. M. F.
Pearse.)
La serie de micrografas electrnicas agrupadas en la figura 7-34 muestran cmo la cubierta de clatrina forma una vescula transportadora. En la seccin 7-37 se dijo que la cubierta de clatrioa se compone de mltiples unidades proteicas denominadas trisqueliones. Se calcula que una vescula de 200
o m de dimetro contiene alrededor de 1.000 de esas unidades.
El trisquelin est integrado por tres cadenas polipeptdicas grandes y tres
pequeas, cuyo peso es de 180 kDa y de 35 kDa, respectivamente. Como
muestra la figura 7-35, esas cadenas dan lugar a tres brazos flexibles de 44,5
nm de largo, doblados hacia un mismo lado.
Para generar una vescula, los trisqueliones se colocan sobre un rea circunscrita de la cara citoslica de la membrana y se ensamblan entre s hasta
formar un poliedro con aspecto de canasta. La pared del poliedro est compuesta por hexgonos y pentgonos, cuyos vrtices corresponden a Los puntos de convergencia de los brazos de los trisqueliones. En cambio, sus aristas
se forman al adosarse dos o ms brazos de otros tantos trisqueliones vecinos
(figs. 7-35 y 7-36).
La unin de los trisqueliones a la membrana le confiere la fuerza mecnica que provoca su curvatura. Inicialmente forman una fosita, la cual al desprenderse de la membrana se convierte en una vescula que se libera en el citosol. Al igual que las cubiertas de COP, la cubierta de clatrina se desarma inmediatamente y los trisqueliones libres pueden volver a usarse para generar
nuevas vesculas (fi g. 7-32).
La forma como se asocian los trisqueliones entre s permite que las membranas resulten con curvaturas de distintos radios y que se formen vesculas
de diferentes tamaos. No obstante, cuando las vesculas son muy grandes
-como en los fagosomas- . no se forman cubiertas completas sino reas aisladas que cubren parcialmente sus superfi cies.
La unin de los trisqueliones a la membrana vesicular se produce a travs de una protena ARF semejante a las que se unen a las unidades COPI y
COPII (seccin 7-38).
J. ~
7. EL SISTEMA DE EN DOMEMBRANAS
Cada compartimiento del sistema de endomembranas posee en su membrana y en su interior molculas distintas a las de los otros compartimientos.
Como se mencion en las secciones 7-I, 7-2, 7-22 y 7-29, esos compartimientos - junto con la membrana plasmtica y la matriz
extracelular- intercambian algunas de sus molculas meMEMBRANAS
diante vesculas transportadoras, las cuales se trasladan por
1
el citosol movidas por el citoesqueleto (caps. 5-8 y 5-23).
Cuando una vescula transportadora emerge de uno de Jos
compartimientos donantes y se dirige hacia el compartmiente receptor con el que habr de fusionarse, debe avanzar por el camino adecuado y no extraviarse en medio de las
mltiples membranas que atraviesan el citoplasma.
Ello lo logra porque existe un mecanismo diseado para
asegurar la llegada de la vescula transportadora al compartimiento correcto. Depende de dos tipos de protenas receptoras mutuamente complementarias, una perteneciente a la
membrana del compartimiento donante y otra a la membrana del compartimiento receptor. Se denominan, respectivamente, v-SNARE y t-SNARE (por vesicle- y target-SNAP
receptor) (fig. 7-38).
Como muestra la figura 7-39, las t-SNARE no abandonan
nunca la membrana de los compartimientos receptores. En
cambio, las v-SNARE abandonan la membrana de los compartimientos donantes cuando se transfieren a la membrana
<lt: las vesculas lr:UISJH>rtadoras .. La fi gura 7- ';, <) 11u1 stra
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154
7. EL SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
MEMBRANA DONANTE
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MEMBRANA RECEPTORA
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Vesfcula
recicladora
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t
Enzimas hidrolfticas
provenientes
del compleo
de Golgi
fMP\ _______._
\!J
En virtud de que son molculas muy hidrofbicas, el colesterol y sus steres circulan por la sangre como lipoprotenas. El ejemplo ms conocido
corresponde al colesterol-LDL (por low-de11sity lipoprotein), que es un compuesto lipoproteico originado en el REL de los hepatocitos (seccin 7-27). El
colesterol-LDL ingresa en las clulas por endocitosis, previa unin con receptores especficos situados en la membrana plasmtica. Esta unin atrae a
trisqueliones libres en el citosol, los cuales -por intermedio de adaptinas especficas- se conectan con los receptores en el lado citoslico de la membrana y generan una cubierta de clatrina (fig. 7-41).
Como se sabe, la cubierta se desprende de la membrana de la vescula apenas sta se forma. En la luz vesicular el colesterol-LDL contina unido a los
receptores heredados de la membrana plasmtica. La vescula se conecta con
un endosoma primario, cuyo pH cido hace que el colesterol-LDL se desprenda de los receptores, los cuales retornan a la membrana plasmtica con
una vescula recicladora. El colesterol-LDL pasa del endosoma primario a un
endosoma secundario, y ste se convierte en lisosoma al recibir enzimas hidrolticas del complejo de Golgi (fig. 7-41). Las enzimas actan sobre el colesterol-LDL y separan a la LDL del colesterol, que pasa al citosol y se utiliza como materia prima para la sntesis de otras molculas o se incorpora a la
membrana del RE (seccin 7-10) .
La hipercolesterolemiafamiliar es una enfermedad causada por una mulaci(m del gen que codifica al receptor del colesterol-LDL, que res uha defcclullso o est ausent . ('o11111 ons ueneia, el colesturol no ingr sa en las
lulas su I'IIIIL'I'IIII'Iu ' IIII :11 1l vu ~ ~~ la saugn:, lo '1'"' lit- va 11 la ap111 ,. 111 d1
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15.
procesamiento en e1 1isosollln.
156
7. EL SISTEMA DE BNDOMEMBRANAS
Membrana plasmtica
157
ion, lo que ha llevado a compararlas con los tbulos T del msculo estriado
(fig. 5-39).
El mecanismo que interna solutos y sus transportadores mediante caveolas y permite que los primeros ingresen masivamente en la clula se denomina potocitosis (del griego potos, bebida).
CITOSOL
mmmmnmmmm uu111:
MYYMmYMYYmY~YYHHRYllYYM~~
'""'""=
"\\ ~ mmmmmmmm
~t\~YYYYYYYYm,YYYYMYYm~
=
Membrana plasmtica
posee vacuolas
Consideraremos aqu algunas caractersticas especiales del sistema de endomembranas de las clulas vegetales.
En las clulas indiferenciadas del meristema, las membranas del RE son
relati vamente escasas y estn enmascaradas por los numerosos ribosomas libres que llenan el citosol. En cambio, en las clulas vegetales diferenciadas
el RE es abundante y forma tbulos que ingresan en los plasmodesmos (cap.
6-15). En las clulas cribosas, sobre estos tbulos se forman depsitos de callosa, que es un polisacrido compuesto por molculas de glucosa unidas por
enlaces 1- 3~.
Igual que en las clulas animales, en las vegetales el complejo de Golgi es
esencial para la secrecin. En sus cisternas se procesan y concentran Jos productos secretorios, que finalmente se descargan al exterior. Por ejemplo, en
las clulas que sintetizan muclago se observan abundantes vesculas secretorias surgiendo del complejo de Golgi.
Adems, componentes del complejo de Golgi sirven para el transporte de
ciertas protenas de depsito, como la vinicilina y la Jegumina en los cotiledones de algunas leguminosas, y la zena en el endosperma del maz. Estas
protenas se localizan en organoides especiales, denominados cuerpos proteicos o granos de aleurona.
En la mayora de las clulas vegetales existe uno o ms compartimientos
llamados vacuolas, limitados por membranas (fig. 1-6). Segn el tipo celular, en total representan entre el 10 y el 90% del volumen del citoplasma.
Cuando son muy voluminosas el citosol queda reducido a una fina capa por
debajo de la membrana plasmtica. Existen dudas sobre su origen; se cree
que se forman por la fusin entre s de vesculas surgidas del complejo de
Golgi. Las fu nciones de las vacuolas son variadas. Algunas se comportan como lisosomas, ya que contienen enzimas hidrolticas. Otras sirven de depsito para nutrientes y desechos metablicos. Finalmente, otras guardan lquidos
y se usan para regular el volumen y la turgencia de la clula.
En los captulos 3-30, 3-31 y 18-21 se estudia la participacin del complejo de Golgi en la formacin de la pared de la clula vegetal.
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158
Las mitocondrias
Energa celular I
ADP+ P
ATP
MITOCONDRIA _ _ )
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HIDRATOS D CARBONO
111'11){'),,
CO: 11:.0
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8. LAS MITOCONDRIAS
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o
11
11
11
CHz -0-P-O-P-O-P-oo-
o-
o-
tos ingresan en el organismo por el sistema digestivo, salvo el 0 2, que lo hace por el sistema respiratorio. Una vez que la energa ha sido extrada de los
alimentos, quedan como productos de desecho C02 y H20 (tabla 8-1 ), a los
que deben sumarse algunas sustancias nitrogenadas derivadas del catabolismo de las protenas.
No toda la energa depositada en las uniones qumicas de las molculas
alimenticias es transferida al ATP, ya que durante las sucesivas reacciones
que conducen a su formacin parte de esa energa se convierte en calor. Debe sealarse que desde el punto de vista termodinmico el calor que se genera en el escenario celular corno consecuencia de las reacciones qumicas es
tambin un producto de desecho. No obstante, en trminos de aprovechamiento de energa para producir trabajo las clulas son muy eficientes, pues,
comparadas con la mayora de los motores, la relacin consumo de combustible/produccin de trabajo da cifras mucho ms favorables para las clulas.
As, en las clulas el 40% de la energa liberada sirve para actividades provechosas y el 60% se disipa como calor, mientras que en los motores tales cifras suelen ser del orden del 20% y del 80%, respectivamente.
El mejor rendimiento logrado por la clula se debe a que degrada a los alimentos en forma gradual, por medio de enzimas que ella misma sintetiza.
Ello permite que la energa liberada de las molculas alimenticias sea transferida al ADP y se forme ATP con mnima generacin de calor.
En mjtocondrias
Reaccin endergnica:
.
Energa + C02 + H, ~Alimentos + 0 2
Reaccin exergriica:
Hidroliza agua
Forma agua
Libera 0 2
,1
1
oPi
Apenas los alimentos son ingeridos, los polisacridos, los lpidos y las
protenas que los integran comienzan a ser escindidos en molculas cada vez
oN
-O-~-O-CH2~0~
o
11
c
~H2
HWH
HO
OH
Fosfrilacin oxidaiiva
En cloropl~stos
l't' llltht
1
o-
]culas y se forma H20 y C02 , respectivamente. La gradualidad arriba mencionada resulta de tales oxidaciones, puesto que stas se cumplen paso a paso y en algunos de esos pasos se liberan pequeas porciones de energa. Si las
oxidaciones no fueran graduales, la energa qumica se liberara sbitamente
y se disipara como calor.
Deber recordarse que una molcula se oxida no solamente cuando gana
oxgeno (0) sino tambin cuando pierde hidrgeno (H). Debido a que ste
puede disociarse en un electrn (e-) y un protn (H), en un sentido general
toda remocin de e- de cualquier tomo o molcula constituye una reaccin
de oxidacin.
Si el e- removido proviene de un tomo de H, el H resultante puede permanecer en la molcula oxidada (que entonces queda con una carga positiva)
o puede ser removido y pasar al medio acuoso. Ulteriormente los e y los H
pueden volver a unirse -para componer nuevos tomos de H-, por ejemplo, cuando son transferidos e- y H al 0 2 y se forma H20.
Toda oxidacin de un tomo o de una molcula est atada a la reduccin
de otro tomo o de otra molcula, que entonces ganan hidrgeno o e-, o pierden oxgeno.
Durante el procesamiento de los alimentos, en algunas reacciones de oxidacin y reduccin intervienen dos molculas intermediarias cardinales: las
coenzimas nicotinamida adenina dinucletido (NAO) y tlavina adenina
dinucletido (FAD) (fig. 8-4). En su forma oxidada la primera se representa
con la sigla NAD+, y en su forma reducida con la sigla NADH. La segunda,
con las siglas FAD y FADH2 , respectivamente.
ucs~noia
H20
ADP
Slu l ' ll
11
11
R-0-P-0-P-0-
ATP
de la molcula de adenosina
Fotosntesis
11
11
11
R-0-P-0-P-0-P-01
1
1
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161
Alimentos +. 0 2
Libera C02
de luz
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ll'i\11)
162
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Ami~.cido
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Glu~sal
Acidos grasos
LIPIDOS
NADH !, ATP
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Oxalacetato
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Cisaconitato
lsocitrato
J.. co,
Fumarato
u-)Cetoglutarato
Succina~il CoA
co2
ATP
/
1
l
NADH
NADH deshidrogenasa
FADHi
L. Ublquinona
l
l
l
Complejo b-c 1
r.:
Cltocromo e
Citocromo oxidasa
ATP
Citrato
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l l1,l
8. LAS MITOCONDRIAS
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Hexoqwna<:a
7.
ATP
OH
H
OH
lii
OH
r::~SJH,OPOj"
CH OP01 "
lsomen,'lJil
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Glucosa
q'"
roslogluco -
OH
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Glucosa &-roslato
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OH
FruC10&<) 6-loslalo
Fructosa 1,6-dilosla\o
1..
o
11
e -o-
Hu;lnltr.Nnmulit!id
1
HCOPOf1
CH,OH
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(x2)
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11
e - o
3-Foslogl!oeralo
(X2)
QUM'10.S8
ATP
(x 2)
11
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3 -f osi()(J!!Ce' al o
1
HeOH
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CH 2 0PO~ -
HCOH
1
CH 2 0P0 1-
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dt~.tmlroyut lm;,
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(x2)
(x2)
H
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C=O
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lsomoraRa
5 HCOH
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CH 2 0Po~ -
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1
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DihidroJdacetona
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8. LAS MITOCONDRIAS 11
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CH3 H
111
11
HO
1111
0-
o-
1 H
11
CH3 OH O
ACETILO
O
1
O=P-o-
OH
Fig. 87. Estructura qufmica
de la acetilcoenzima A (acetil
CoA).
166
8. LAS MITOCONDRIAS
Membrana
C ITOSOL
~----------
~----
ATP
1(,7
ADN
sintasa
~~~~~~~~'-~-.
2~02 -*~~~~
FADH2
Fig. 8-9. Esquema tridi mensio na l de una mitocondria
cortada longitudina lme nte.
Lns crestas aparecen tapizadas con mo lculas de ATP
s in tasa.
CoA
MATRIZ
NAO+ NAD H
FAD
lulares, como los espermatozoides, los adipocitos y las clulas musculares estriadas, las mitocondrias se hallan inmovilizadas en lugares fij os.
y cw icJ,, 111'"1,
Fig. 8-10. Representacin grfica de la mitocondria. Se ilustran las reacciones correspondientes a la descarboxilac in
oxidati va (verde), al ciclo de
Krebs (rojo), a la P-oxidacin
de los cidos grasos (ai1Ulrillo)
y a la fosfori lacin oxidativa
(azu[). L a acetil CoA deriva
tanto de la descarboxilacin
oxidativa como de la P-oxidac in de los c idos grasos y es
e l punto de partida del ciclo de
Krebs. / , NADH deshidrogenasa; ll, Succinato deshidrogenasa (y FAD); Ubi, U biquitina; lll, Complejo b-e ,; Cir,
C itocromo e; IV, Citocromo
oxidasa.
168
8. LAS MITOCONDRIA S
CH 3 -CO-COOH
1l11l
Acido pirvico
CoA
Piruvato deshidrogenasa
CH 3 -CO-s -
COOH ~
1
CoA
COOH
C=O
1
COOH
C H2
CH 2
1
CH 2
1
~
conitasa
H2 0
COOH
COOH
1
Acido ctrico
+ CoA
HO-C-COOH
COOH
.d
A~ o
oxalactico
H0 1 :~H
Citrato
sintasa
.
..
HOCH
Ac1d0 maiiCO
1
Acetil CoA+ C0 2
CH 2
Fumarasa
1111l
i\llll ; .
11
HC
CH
Acido fumrico
11
COOH
HC
1
COOH
COOH
Succinato
deshidrogenasa
COOH
COOH
CH 2
Pt
H20
1
1
Acido succnico
CH 2
co2
CoA+ CH..,
a-Cetoglutarato
deshidrogenasa
COOH
HOCH
1
e O OH
COOH
co2
-po.;,...o.-
CH 2
1
COOH
1
CH 2
1
CH 2
1
O=C-S-CoA
Succinil CoA
1
CH 2
1
C= O
1
COOH
Acido a-cetoglutrico
Puesto que se necesitan dos vueltas del ciclo de K.rebs para procesar a los
dos acetilos derivados de la gluclisis de una molcula de glucosa, cada uno
de estos monosacridos da lugar a dos ATP, seis NADH y dos FADH 2 . Debe
advertirse que el ATP se forma a partir de GTP, que es el nuclesido trifosfato surgido del ciclo.
Como se aprecia en la figura 8-11, la enzima del ciclo de Krebs encargada de transferir el H2 alFAD es la succinato deshidrogenasa (vimos que la enzima y la coenzima se locali zan en la membrana mitocondrial interna).
En la misma fi gu ra puede advertirse que j un to al prim.;ro y al tercer
NA DI-1 smgidos d 1 id o d l<n.: hs apar e n sendos 11, pu s los susl ralos
oxid;ulos, :1 dil'l : n ' lll'i ll ti!- lt l '1'''' l H'ttllf ~ ' t 't' t: ll l:1 g lutt{li .~ i s, l' ll In d t /'lc nr'ho;~i l :
,. 111 o x id nli vu y t ~ll l! t ltiiii i! I\ ' I HI dd ;,q, nncltl N /\li tl l l! h ' i du .,,, k ili dt
K H ' h tl,
P d t, ll
1111
11 ' '
11
111 !1 11
dt
1111
11
cesos.
170
8. LAS MITOCONDR!AS
17 1
MATRIZ MITOCONDRIAL
Pi ADP
MATRIZ MITOCONDRIAL
TI~TITITITITITITITI~TITITITITITITITITI
TI~TITITITITITITITITITI~TITITI
~MMMMMMMMMMMMMililMMM \ MMMMMMMMMMMM~ilMil
ESPACIO INTERMEMBRANOSO
H+
8-15. Las oxida ciones de I<J fosforrl acin oxidativa tie nen lugar
e n la membrana interna de la mitocondria
La energa contenida en los NADH y en el FADH2 formados durante el ciclo de Krebs se transfiere al ATP despus de una serie de procesos que comienzan con la oxidacin de ambos dinucletidos.
Los tomos de hidrgeno liberados de los NADH y del FADH2 como consecuencia de ambas oxidaciones se disocian en H y e-, del modo expresado
en las siguientes ecuaciones:
NADH - > NAD + 1 H' + 2 e
WH'H'
H+ H+ H+
H+
H+
La energa cedida por los e- es utilizada para transportar a los H (procedentes de los NADH y los FADH2 oxidados) desde la matriz mitocondrial
hasta el espacio intermembranoso (fig. 8-12). La energa es requerida a causa de que ese transporte es acti vo, ya que Jos H son transferidos desde un
medio en que se hallan menos concentrados a otro en que su concentracin
es mayor. El mecanismo que hace posible el pasaje de los H no ha sido determinado. Slo se sabe que los H pasan a travs de los complejos principales de la cadena respiratoria - vase la figura 8-12-, los cuales actuaran como verdaderas bombas de H (cap. 3-25).
La existencia de un gradiente de concentracin de H (o gradiente de pH)
entre ambos lados de la membrana mitocondrial interna es acompaada por
un gradiente de voltaje o potencial elctrico (cap. 3- 11 ), bastante ms positivo en la cara de la membrana que da al espacio intermembranoso. El gradiente electroqumico derivado de la suma de ambas fuerzas se traduce en la energa - llamada protonicomotora- que impulsa a los H a regresar a lamatriz mitocondrial, ahora por transporte pasivo. Los H retornan por el tnel de
la ATP sintasa (figs. 8-10, 8-12 y 8-13).
En sntesis, a medida que la energa suministrada por los e- es utilizada para transferir los H hacia el espacio intermembranoso, es absorbida por los
propiosH+, que la retienen como energa protonicomotora.
Es importante sealar que los e- surgidos de estos procesos poseen un elevado potencial de transferencia, es decir, una gran cantidad de energa. As
ingresan en la cadena transportadora de electrones, cuyos componentes fueron enumerados cuando se describi la membrana mitocondrial interna (fig.
8-12).
Dado que cada componente de la cadena posee por los e- una afinidad mayor que su predecesor, los e- fluyen por ella en el siguiente orden:
Para los e- cedidos por el NADH, el punto de entrada es la NADH deshidrogenasa (complejo I). Desde sta pasan a la ubiquinona, que los transfiere
al complejo b-c 1 (complejo II). Los e- dejan este complejo e ingresan en el
citocromo e, desde el cual pasan al ltimo eslabn de la cadena, la citocromo
oxidasa (complejo IV). Durante este recorrido los e- consumen la mayor parte de su energa -ya se ver por qu- y al concluirlo retornan a la matriz.
mitocondrial (fig. 8-12).
Por su lado, los e- cedidos por el PADH2 tienen como punto de entrada la
succinato deshidrogenasa (complejo II), que los transfiere a la ubiquinona, a
partir de la cual fluyen por los restantes eslabones de la cadena en el mismo
orden en que lo hacen los e- cedidos por el NADH.
El potencial de transferencia de los e va disminuyendo en las sucesivas
reacciones de oxidorreduccin que se producen a lo largo de la cadena respiratoria, de modo que en cada etapa los e- pasan a un estado <1 tll\'lllll' rnrrfa, la cual es bastante reducida cuando los ,. abandonan ,. nll,n, ,:ilul""'
En la seccin 8-11 se dijo que la ATP sintasa est integrada por dos unidades que poseen localizaciones y funciones diferentes. Una atraviesa la bicapa lipfdica (porcin transmembranosa o F0) y la otra da hacia la matriz mitocondrial (porcin F 1) (fig. 8-13). La porcin F0 forma un tnel que permite
el regreso de los H a la matriz mitocondrial, mientras que la porcin F 1 es
responsable de la fosforilacin, es decir, cataliza la sntesis de ATP a partir de
ADP y P. Como se ve, el regreso de los H y la sntesis de ATP, si bien son
procesos acoplados, se cumplen en dos Jugares diferentes de la ATP sintasa.
La energa necesaria para la sntesis del ATP proviene de la energa protonicomotora contenida en los H+, que la van perdiendo a medida que regresan
pasivamente a la matriz mitocondrial.
En sntesis, la ATP sintasa se comporta como una turbina que convierte
una clase de energa (la protonicomotora, derivada del gradiente electroqumico de los H) en otra ms provechosa para la clula, la energa qumica depositada entre el segundo y el tercer fosfato del ATP.
Se generan aproximadamente 2,5 ATP por cada NADH procesado y 1,5
por cada FADH2 .
1(1 ATP sale ;1l l:ihlNol por 1111 contratransportadl\ pasivo localizudo en lu
IIH\IIIhr!ln ll tnilooudti ul r111o 11111', In A'I'I'-AUI' tl'nnsi01:11N11 (fig. X JO). l'o!'
di' Ju n ultun ,
H !lll l l ~ 1111
172
8. L AS MITOCONDRIAS
MITOCONDRIA
CITOSOL
Dihidroxiacetona 3-fosfato
v-
NADH W
~ NAO+
Glicerol 3-fosfato
deshidrogenasa
Glicerol 3-fosfato
des!Jidrogenasa
Cabe ahora indagar sobre el destino de los e , los cuales, Juego de perder
una parte sustancial de su energa, abandonan la cadena respiratoria y regresan a la matriz mitocondrial. Se combinan con los H venidos del espacio intermembranoso y el 0 2 proveniente de la atmsfera, lo que da lugar a la formacin de Hz (figs. 8-10 y 8-12). La atraccin de Jos e por el 0 2 se debe a
que poseen una gran afinidad por ste, mayor que la que tienen por la citocromo oxidasa, lugar por donde salen de la cadena respiratoria. Con la formacin del H20 culmina la fosforilacin oxidativa.
Se necesitan 4 e y 4 I-f+ por cada 0 2 para que se produzcan 2 molculas
de H20 , que es uno de los productos finales del metabolismo (el otro es el
C0 2). El Hz pasa de la mitocondria al citosol, donde puede quedar retenida
o salir al espacio extracelular.
8-1 8. Los NADH generados durante la gluclisis no ingresan
en las mit ocondrias
CITOSOL
------- -----
Malato
Malato
des!Jidrogenasa
y.
NAO +
NADH H+
Malato
NAO+
NAOH
Oxalacetato
lli~.
N1\ 1>1 1
oi UI LI II I. IIi
In
Aspartato aminotmn ~ r ~a
A pnrt te
w..--1
Malato
deshidrogenasa
Oxalacetato
+----- -------
1\.,p ll.t!O
t..l
d, 111 Cl'{lnlas
173
174
Respecto de los cidos grasos, si bien en su degradaci n no existen procesos equivalentes a la gluclisis y a la descarboxilacin o xidativa (fig. 8-5),
aportan ms energa que la glucosa debido a los NADH y los FADH2 suplementarios producidos durante la ~-ox idacin de sus cadenas.
8. LAS MJTOCONDRI AS
Si la energa protonicomotora de los H situados en el espacio intermembranoso no se rescatara para formar ATP, los H, al volver a la matriz mitocondrial, igual se uniran a los e- y al 0 2 para formar H2 0 , pero la energa
protonicomotora, al cabo de la reaccin, se convertira en energa trmica, es
decir, se disipara como calor. Esto es lo que ocurre en las clulas adiposas de
la denominada grasa p arda, cuyas mitocondrias son incapaces de transferir
la energa protonicomotora al ATP. Es que en la membrana interna de estas
mitocondrias existe un transportador de H llamado termogenina, el cual,
debido a que no posee la porci n F 1 -es decir, la funcin enzimtica de la
ATP sintasa-, permite el regreso de los H a la matriz mitocondrial sin que
su energa sea aprovechada para formar ATP. En consecuencia, la energa
protonicomo tora, al reaccionar los H con los e- y el 0 2 atmosfrico durante
la formacin de H 2 0 , se disipa como calor.
La grasa parda es un tejido que poseen los recin nacidos en la regin interescapular. Si el nio nace en un medio muy fro, los cidos grasos de los
triacilglicero les depositados en las clulas de la grasa parda se degradan y generan calor en lugar de ATP. Como vemos, la grasa parda puede ser vital en
el momento del nacimiento, al permitir una rpida adaptacin de los recin
nacidos a las bajas te mperatu ras.
lns
t' t
lul a s , ~: I I'HII SpcHI Hdtl hndn ln ndltll'nlldri rt, dtllld t ~ lll ll l l 'll t i ttt l tlt~
17.
176
Membrana
del retculo
endoplasmtico
8. LAS MITOCONDRI AS
(~ \
CITOSOL
\__~J
externa
Protena intercambiadora
"descargada'
Para tomarlos de l RE, la mitocondria recurre a protenas citoslicas llamadas intercambiadoras, que los sustraen de la membrana del retculo y los
descargan en la monocapa citoslica de la membrana mitocondrial externa
del modo ilustrado en la figura 8-17. Una parte de los fosfolpidos pasa a la
monocapa opuesta gracias a movimientos de "fl ip-flop" (cap. 3-3). Finalmente, el traspaso de fosfolpidos de la membrana ex terna a la me mbrana interna
se produce a travs de puntos de contacto que se crean entre ambas membranas para tal fin.
Algunos glicerofosfolpidos que llegan a la membrana mitocondrial nterna experimentan modificacio nes. Por ejemplo, se unen de a dos y forman difosfatidilglicerol (seccin 8-1 1).
3) Es muy pequeo, pues posee 37 genes solamente. En casi todos los tipos celulares la suma de los ADN tomados de todas las mitocondrias representa no ms del .1% del ADN nuclear.
4) Posee muy pocas y a la vez muy cortas secuencias no gnicas, es decir,
que no se transcriben.
5) Genera 22 tipos de ARNt, en lugar de los 31 que transcribe el ADN del
ncleo.
6) Las dos clases de ARNr (12S y 16S) que codifica dan lugar a ribosomas que poseen un coeficiente de sedimentacin de 55S, inferior al de los ribosomas de los procariotas (70S) y del citosol (80S).
7) En su cdigo gentico existen 4 codones cuyas instrucciones difieren
de las de sus pares del ADN nuclear (cap. 13-4). Se trata de los codones
AGA, AGG, AUA y UGA. En el ADN nuclear los dos primeros corresponden al aminocido arginina, mientras que en el ADN mitocondrial se comportan como codones de terminacin. En el ADN nuclear el codn AUA determina a la isoleucina, y en el ADN m itocondrial a la metionina. En el ADN
nuclear el codn UGA es un codn de terminacin y en el ADN mitocondrial
determina al triptfano.
8) Se transcriben sus dos cadenas. Los genes de los 2 ARNr, de 14 ARNt
y de 12 ARNm se localizan en una de las cadenas del ADN mitocondrial,
mientras que los genes restantes, correspondientes a 8 ARNt y a un A RNm,
se localizan en la otra cadena.
9) Las molculas de ARN que transcribe el ADN se procesan mientras se
sintetizan. El procesamiento comprende la remocin de partes de los ARN.
10) Como se seal, la mitocondria posee varias copias de un mismo
ADN y no dos como el ADN nuclear. Debe sealarse que las mitocondrias de
cualquier individuo son de origen materno, pues todas provienen del ovocito
(cap. 19-19).
" Giu
177
que se representan los 37 genes presentes en sus dos cadenas. Se sealan los genes de
los 22 ARNt (rojo), de los 2
ARNr (marrn) y de los 13
ARNm. Estos ltimos corresponden a dos subunidades de
la ATP sintasa (naranja), a
siete del complejo NADH
deshidrogenasa (verde), a una
del complejo b-e , (celeste) y a
tres del complejo citocromo
oxidasa (viole/a). Puede verse
tambin el rea donde se halla
el origen de replicacin (grisado). B. ADN mitocondrial
de una clula de rata observado con la tcnica de extendido
y sombreado metlico. (Cortesa de B. Stevens.)
178
ATP~
.
ADP
8. LAS MITOCONDRIAS
Trans locacin
Escisin del
pptido seal
Conforme surgen de los ribosomas, las protenas mitocondriales producidas en el citosol se asocian con chaperonas de
la familia hsp70. Estas mantienen desplegadas a las protenas
hasta que aniban a la mitocondria, a cuyo cuerpo no podran
incorporarse si llegaran plegadas (cap. 4-5).
El pasaje de las protenas a travs de las membranas externa e interna de la mitocondria es un proceso complejo. Cuando una de ellas se pone en contacto con la membrana mitocondrial externa, se desprende de las chaperonas hsp70 citoslicas, atraviesa ambas membranas y se asocia con chaperonas ligadas a la membrana mitocondrial interna. Estas chaperonas,
que tambin pertenecen a la familia hsp70, atraen a la protena hacia el interior de la mitocondria por un mecanismo que
consume ATP, tal vez de la manera mostrada en la figura 8- J9.
Una vez en la matriz mitocondrial, la protena se pliega sin
ayuda o con la asistencia de una chaperona de la familia hsp60
(cap. 4-5).
Las protenas se incorporan a la mitocondria a travs de los
translocones denominados con las siglas TOM y TIM (por
translocase of the outer y of the inner mitochondrial membrane), presentes en las membranas mitocondriales externa e intema, respectivamente (cap. 7-12). Como muestran las figuras
8-19 y 8-20, para que la protenas puedan ingresar es necesario que ambos translocones estn juntos y sus luces alineadas, Jo que obliga
a las membranas externa e interna a acercarse mutuamente.
Todas las protenas importadas desde el citosol incluyen en su extremo
amino un pptido seal que las conduce hasta la mitocondria y que es reconocido por un receptor especfico asociado al translocn externo (caps. 4-4 y
16-17) (tabla 4-1 y fig. 8-20). Si el paradero de la protena es la matriz mitocondrial, apenas atraviesa los translocones pierde el pptido seal y se libera
en su interior (el pptido seal es escindido por una proteasa de la matriz)
(fig. 8-20). En cambio, las protenas destinadas a las membranas externa e interna poseen ~eale~ adicionales, distinta~ entr ~r. las n;tks n1 i 'llrn a ambos lipos tk pro1 d 11as c 11 la lllt' llti>rmta ttlt' <'<111'\'SJH>II<it- .
Vimos que las mitocondrias se reproducen por fisin binaria, como lo hacen las bacterias. Esta no es la nica semejanza con los procariotas; se parecen tambin en sus formas y medidas y porque poseen varios componentes
comunes. Tales semejanzas han llevado a sugerir que las mitocondrias son un
producto evolutivo de bacterias aerbicas.
Sustentan esta teora otros supuestos. As, se cree que las plimeras clulas
eucariotas eran anaerbicas y que cuando la atmsfera te1Testre se hizo rica
en oxgeno incorporaron en sus citoplasmas bacterias aerbicas que, tras sucesivos cambios adaptativos, se convirtieron en las actuales mitocondrias. La
simbiosis les permiti a las clulas eucariotas aprovechar el oxgeno atmosfrico, por lo que comenzaron a producir una mayor cantidad de energa a
partir de la misma cantidad de alimentos. Paralelamente, la membrana plasmtica de la clula eucariota qued eximida de realizar procesos energticos
y pudo concentrarse en otras actividades, como controlar la transferencia de
solutos, posibilitar la entrada y la salida de macromolculas, recibir y emitir
seales, etctera.
1711
Plegamiento
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IH'III I.i iiH llu A lU '111 1 1111 llhol f ' /t.
180
Los cloroplastos
Energa celular TI
<' 11
l111 'lul a " ' 11 '""' 'y ,,. lo,; luh n ulos,
..
182
9 . LOS CLOROPLASTOS
Membrana plasmtica
Pared celular
lntergrana
Membrana
externa
Membrana
interna
Espacio tilacoide
ui m i pJdt'"'
t' olnpolll' ll
lu j \~ll llll\1 11
183
E l cloroplasto posee tres componentes principales: la envoltura, la estroma y los tilacoides (fi g. 9-1).
La envoltura de los cloroplastos presenta dos membranas -una externa
y otra interna- , a travs de las cuales se producen los intercambios moleculares con el citosol. En el cloroplasto maduro - a diferencia de su predecesor- no se observa continuidad entre la membrana interna y los tilacoides.
Ambas membranas carecen de clorofila, pero tienen color amarillo por la presencia de pigme ntos carotenoides. Contienen solamente el 2% de las protenas del cloroplasto.
La estroma representa la mayor parte del cloroplasto y en ella se encuentran inmersos los tilacoides. Est compuesta principalmente por protenas.
Contiene ADN y tambin ARN, que intervienen en la sntesis de algunas de
las protenas estructurales y enzimticas del cloroplasto. Es en la estroma
donde se produce la fijacin del C02 -es decir, la produccin de hidratos de
carbono-, as como la sntesis de algunos cidos grasos y protenas.
Los tilacoides constituyen sacos aplanados agmpados como pilas de monedas. Cada pila de tilacoides recibe el nombre de granum (plural, grana),
y a los elementos individuales que forman las pil as se los llama tilacoides de
los grana o intergrana (figs. 9-1 y 9-2). Adems hay tilacoides que atraviesan la estroma y que conectan entre s a dos grana; se los denomina tilacoides
de la estroma (figs. 9-1, 9-2 y 9-3). Empero, la descripcin antedicha es engaosa, pues en rigor existen tilacoides pequeos - que poseen un dimetro
promedio de 1 J.m (la mayora de los tilacoides de los grana)- y tilacoides
grandes y alargados, compartidos por dos grana. En stos se distinguen tres
sectores: dos extremos que aparentan ser tilacoides de los grana, y un segmento intermedio que corresponde al tilacoide de la estroma.
La pared de los tilacoides - llamada membrana tilacoide- es una bicapa lipfdi a poblada de pruld nas y ele otras molculas, casi todas involucradas
1' 11 l!is I'I 'Hctioncs qrr r, Ji,n, dr In r.,losfnlcsis. Esta pared,~cpant el comparti"''."'" ,,. 1..:. l il:" '" " l'
' ,,' " , l ~lndo tihuui<l<'
tk la tsl rorna. /\1t'~ 'l ll l
l.t.
lt t~ 'I ''J
d,
184
9. LOS CLOROPLASTOS
todos los tilacoides estn interconectadas, de modo que existira un solo espacio tilacoide (fig. 9-4).
Por lo tanto, el cloroplasto tendra tres compartimientos: el intermembranoso (entre la membrana externa y la membrana interna), la estroma (entre la
membrana interna y la membrana tilacoide) y el espacio tilacoide. Se ver
que desde el punto de vista funcional el espacio tilacoide equivale a la matriz
mitocondrial.
FOTOSINTESIS
9-4. En la fotos ntesis la energa lumnica se convierte
en energa qumica
La rotosntesis es una de las funciones biolgicas fundamentales de las
clulas vegetales. Por medio de la clorofila contenida en los cloroplastos, los
vegetales verdes son capaces de absorber la energa que la luz solar emite como fotones y transformarla en energa qumica. Esta se acumula en las uniones qumicas entre los tomos de las molculas alimenticias que se forman
con el concurso del C02 atmosfrico. En el captulo 8-15 se analiz la fosforilacin oxidatva que se cumple en la rnitocondria, mediante la cual se procesa la energa contenida en las sustancias alimenticias. La fotosntesis es, en
cierta medida, un proceso inverso, de modo que los cloroplastos y las mitocondrias poseen muchas semejanzas estructurales y funcionales.
En la fotosntesis la reaccin principal es:
Fig. 9-3. Micrografa electrnica del cloroplasto que
muestra dos grana y los tilacoides de la estroma que los
conectan. Las flechas sealan
la cavidad del compartimiento membranoso de Jos grana,
es decir, el espacio tilacoide.
240.000x. (Cortesa de l. Nir
y D. C. Pease.)
n C02 + n H,O
-7
luz-clorofila
-7
(CH20), + n 0 2
1)
que consiste en la combinacin de C0 2 y H20 para formar hidratos de carbono con liberacin de 0 2
Se ha calculado que cada molcula de C0 2 de la atmsfera se incorpora a
un vegetal cada 200 aos, y que el 0 2 del aire es renovado por las plantas cada 2.000 aos. Sin plantas no existira 0 2 en la atmsfera terrestre y la vida
sera casi imposible.
185
E= -
11'
t ' '"'''''
186
9. LOS CLOROPLASTOS
Debe recordarse que en la fosforilacin oxidaliva -en las mitocondriasel flujo de electrones viaja desde el NADH (o el FADH2 ) hacia el 0 2 y se genera H 2 0 (cap. 8-17). En la fotosntesis ocurre el fenmeno opuesto, pues los
electrones fluyen desde el H2 0 -previamente disociada en 0 2 , H y e-hasta el NADPH.
Las reacciones en la oscuridad completan el ciclo fotosinttico. En su
transcurso la energa contenida en Jos ATP y en los NADPH es aprovechada
por la clula vegetal para elaborar diversas molculas alimenticias con el co2
tomado de la atmsfera.
187
ESTROMA
ATP
H,e -eH
CH,
H,e
H,e
o-c
1
o
1
eH,
1
eH
1
e-eH,
1
eH,
1
CH,
1
eH,
1
eH-eH,
1
CH 2
1
eH,
1
eH,
1
eH- eH,
1
CH 2
1
eH,
1
eH,
1
eH-CH,
1
CH 3
Clorofila a
"
"
"
"
/
eH,-e"
CH
He/
eH
eH -C/
"
"
eH
He
eH,
eH,
eH,
.>O
~-Ca rote no
Fl~~
~(
As como en la membrana interna de las mitocondrias hay cadenas transportadoras de electrones que dan
Jugar a la fosfori!acin oxidativa, en la membrana tilacoide de los cloroplastos tambin hay cadenas de complejos moleculares, que aqu son responsables de las
reacciones fotoqumicas. Cada una de las cadenas est
integrada por los siguientes eslabones, los cuales sern
mencionados en el orden n que se ac1iva11 (l'i. ') 6).
Futusist('mn 11. 1\s 1111 ro111pl<' l" 111"1''""l111 '1'"' 1'"
:-.tT du ~ 'lt T1oH '~ t Luutll! ' lll t ' 'lil1111dtl"' 1!1 ,,,,,,,,, qtw d 11
ESPACIO TILACOIDE
plejo b-f y luego a la plastocianina (PC). Esta los transfiere al fotosistema l, que absorbe luz. Luego los elcctrone~ son transportados a la ferredoxina (/(/) y a la NADP
rcducrasa, que reduce el
NADP a NADPH. La acumulacin de protones (f/') en
el interior del tilacoide crea
un gradiente con respecto a la
188
H,c-o--
HO-tH
tooH
9. LOS CLOROPLASTOS
3-Fosfoglicerato
c~
o,
H~:~:
H,t-o-
Ribulos
corboxll
H,O
H,c-o--
Ribulosa
1.5-difosfato
3- Fosfogllceraldehldo
t-o
HC-OH
H. -OH
1
H,Lo-
~=O
",C- 0"
Hl-oH
H-OH
Cs.
e,. e,
"~ . . .
hidratos de carbono
Albulosa
S-fosfato
H,Lo--
da uno de estos electrones pasa al centro de reaccin del fotosistema II y
reemplaza al salido de la clorofila P680, transferido como vimos a la plastoquinona.
A continuacin, el e- pasa de la plastoquinona al complejo b-f, donde parte de su energa es utilizada para transportar un H hacia el espacio tilacoide
en contra del gradiente electroqumico (este H se suma a los generados por
la escisin del H20). El e, con un potencial energtico menor, pasa del complejo b-f a la plastocianina y de sta al fotosistema l. Para explicar su destino, veamos las reacciones que acontecen en el fotosi stema l.
Por accin de la luz ocurren procesos equivalentes a los registrados en el
fotosistema JI, con las siguientes particularidades: 1) el e- energizado en el
centro de reaccin corresponde a la clorofila P700 (no a la P680); 2) este e es
transferido a la ferredoxina (no a la plastoquinona) y es reemplazado por el
electrn de bajo potencial energtico proveniente de la plastocianina (no de
la escisin del H2 0).
El e- transferido a la ferredoxina, que como acabamos de ver se ha revitalizado considerablemente, deja a esa molcula transportadora e ingresa en la
NADP reductasa, donde parte de su energa es utilizada para reducir un
NADP+ a NADPH en la cara de la membrana tilacoide que da a la estroma.
En este proceso se utiliza un H tomado de la estroma.
El ltimo paso de las reacciones fotoqumicas corresponde a la formacin
de ATP a partir de ADP y fosfato, es decir, a la fotofosforilacin. Esta tiene
lugar en la ATP sintasa, que por su porcin F0 permite el traslado pasivo de
los H desde el espacio tilacoide hacia la estroma. Durante ese pasaje la
energa protonicomotora contenida en los H+ es cedida a la porcin F 1 de la
ATP sintasa. Finalmente, la ATP sin tasa utiliza la energa para sintetizar ATP
(fig. 9-6).
Mediante la fotofosforilacin los vegetales verdes pueden producir una
cantidad tic ATP 10 veces mayor que la obt nida u sus 111ilo tmdrias. Por
olrn parh..". las
( 'tllldt lrl/1
t'
poSl'C.' Il
En las reacciones fotosintticas que tienen lugar en la oscuridad, las molculas de ATP y NADPH -producidas por las reacciones fotoqumicasproporcionan la energa necesaria para sintetizar hidratos de carbono a partir de C0 2 y H20. Tal sntesis se produce en la estroma del cloroplasto mediante una serie de reacciones qumicas agrupadas bajo el nombre de ciclo
de Calvin o ciclo C 3 , en las que intervienen varias enzimas localizadas en
la estroma.
Como puede observarse en la figura 9-7, la reaccin inicial por la cual ingresan el C02 y el H2 0 al ciclo de Cal vin es catalizada por la enzima ribulosa 1,5-difosfato carboxilasa. Se trata de una enzima de gran tamao (500
kDa) que se calcula que representa aproximadamente la mitad de las protenas de la estroma.
Por la accin de esta enzima, 6 ribulosas 1,5-difosfato (son pentosas) se
combinan con 6 C02 y se producen 12 molculas de 3-fosfoglicerato. A continuacin, estas 12 triosas son fosforiladas con fosfatos provistos por otros
tantos ATP, lo cual genera 12 molculas de 1,3-difosfoglicerato. Cada una de
estas molculas, de tres carbonos, pierde un fsforo y tiene la capacidad de
aceptar H+ y e- del NADPH, por lo que se convierte en 3-fosfogliceraldehdo. Dos de las 12 molculas de 3-fosfogliceraldehdo abandonan el ciclo y se
convierten en la materia primaa partir de la cual-mediante enzimas especficas- se sintetizan los monosacridos, los cidos grasos y los aminocidos que forman las molculas estructurales y alimenticias de la clula vegetal. Por su parte, las restantes 1O molculas de 3-fosfogliceraldehdo son reducidas a 6 molculas de ribulosa 1,5-difosfato. Estas son fosforiladas (con
fosfatos aportados por otros tantos ATP) a 6 ri bulosas 1,5-difosfato, con las
cuales se inicia - mientras haya C02- otra vuelta del ciclo de Calvin.
9- 12. La fotos ntesis genera agua, oxgeno y hexosas
que representa una acumulacin de 686.000 caloras por mol. Esta energa es
proporcionada por 12 molculas de NADPH y 18 de ATP, que contienen
750.000 caloras. As, la eficiencia alcanzada por el ciclo fotosi nttico llega
al 90%.
Como hemos visto, los fotones absorbidos por la clorofila y otros pigmentos primero son convertidos en energa qumica bajo la forma de ATP y
NADPH. Durante esta fase fotoqumica el H20 pierde su 0 2, el cual se libera hacia la atmsfera como un producto secundario. La reduccin del C02 se
produce en la osr;midad (no necesariamente), siempre que haya ATP y
NADPII. 1.os prodnr ton di' :Ha ras snn hcxo~<.< a partir de las cuales, n
oiii H:
ln v nll ~
eh-
lll'II HII
189
190
9. LOS CLOROPLASTOS
()
NUCLEO
ADN
/
, Subunidad l
CLOROPLASTO
/- - pequea
In / ,
y dvs;nTo ll o de los
p l :~s tido s
vn
Del mismo modo que las mitoconclrias , los proplstidos y los cloroplastos se multipl ican por fisin binaria
(cap. 8-23), proceso que ex ige el crecimiento de propl stidos y cloropl astos preexistentes. los cual s d hvn dnpli
ca r su tanwn. Co1110 !.!S ob v io, l.' Sll" r r n irrr i ~ ttlu 1 1<, 111 i ~:
I IHI l]IW t'll' ,X !II'IiliH'III ll d n
grande
CITOSOL
- + Subunidad
~ RO Casa , )
,/
ADN - + ARfN
1 11 v lt
dt
191
con vertirse en cloroplastos maduros, requiere que se sinteticen los componentes proteicos normales del organoide. En tal sntesis intervienen dos sistemas genticos, uno propio del cloroplasto y el nuclear.
Los cloroplastos contienen ADN, ARN y los dems componentes que intervienen en la sntesis proteica. Sin embargo, la mayora de sus protenas
provienen del citosol, de modo que son codificadas por genes nucleares. Como se ve, los cloroplastos son semiautnomos y dependen de la cooperacin
de dos sistemas genticos, uno propio y exclusivo del organoide y otro perteneciente a toda la clula.
Los cloroplastos poseen un ADN circular ele alrededor de 45 ..t.m de largo y cerca de 135.000 pares de bases (se conoce la secuencia ele la mayora
de sus genes). Adems contienen ribosomas pequeos, que representan hasta
un 50% de los ribosom as totales de las clulas fotosintti cas. Se estima que
alrededor del 10% ele las protenas del cloropl asto se sintetizan en el organoide y que las restantes -es decir, la gran mayora- son tomadas del citosol.
Una ele las enzimas que participa en la elaboracin ele sacriclos a partir
del C0 2 - la ribulosa 1,5-difo sfato carboxilasa (fig. 9-7)- representa cerca del 50% de las protenas solubles totales que se encuentran en los cloroplastos, por lo que podra ser la protena ms abundante de la naturaleza. Posee dos subunidades, una de alto peso molecular (ele alrededor de 400 kDa) y
otra ms pequea (de unos 100 kDa).
La subuniclad mayor es codificada por genes del ADN cloroplstico,
mientras que la menor es codificada por genes nucleares (fig. 9-9). Esta ltima es sintetizada en el citosol (en ribosomas libres) bajo la forma ele una molcula precursora, la cual ingresa en la estroma del cloroplasto y all es divada hasta alcanzar su tamao definitivo. La envoltura del cloroplasto posee receptores que reconocen a los pptidos seal de las protenas que deben ser
incorporadas al organoide. En el caso de la subuniclad menor ele la ribulosa
1,5-di fosfato carboxilasa, luego de ingresar en el cloroplasto su pptido seal
es esci ndido por una proteasa presente en la envoltura del organoide y la subunidad es li berada en la estroma.
1,a ri gur:1 ')-9 resu 1 n ~ tlll ntolk lo que ex pl ica la sny::sis de las dos su bunid;ld rs <k ] rihul<>sa l ,~ di i't>l; l'n lo , nrho.~ il s ;l vtl pm(m~ i<lllCs cqu illl o l~.:ul;
, c .~ . P l tlltult lo :. ll f I'II ' I[IIl 1 lt r ~~~ d nt t l ld i Hitr l' lltll ' ~, ,,~lll~tl:t v ltilltt o ,\: III t~ li ~,, , dt
l 11
'1 "'
l d rtt ll ll
Jr i ' II /
tll l t ll t l r VII
192
Los peroxisomas
Destoxificacin celular
10
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194
gt~nera
H2 0 2 , que es neutralizado
po r la catalasa
superxido dismutasa
-------------l
H 20 2 + 0 2
En las clulas hepticas y renales la catalasa acta tambin como una enzi ma destoxificante. Para ello, ante la presencia de ciertos txicos , en lugar
de convertir al I;l 2 0 2 en H2 0 y 0 2 uti liza al H2 0 2 para oxidarlos y neutralizar
su toxicidad. La reaccin puede expresarse mediante la siguiente ecuacin:
catalasa
Hz0 2 + TH 2 - - - - - - - - l 2 H 20 + T
La germinacin de las semillas suele necesitar de la degradacin de lpidus acumulados en el endosperma (cap. 19-20). En este proceso intervienen
los glioxisomas, que son peroxisomas relacionados con el metabolismo de
,,s triacilgliceroles.
El glioxisoma posee enzimas que transforman a los cidos grasos de la sell li ll a en hidratos de carbono por la va del ciclo del glioxilato , que es una
WI'S in diferen te del ciclo de Krebs (fig. l0-3). La ecuacin que se verifica
1d .:; tho de sus reacciones es:
2 acetil CoA - - ----? succinato + 2 H' + 2 CoA
1,11 di J'c rcncia con el ciclo de Krebs radica en que el ciclo del glioxilato ret ll il'l'< dos 111olcul:1s ti c acclil CoA y util iza dos enzi mas exc lusivas, la iso1 11 1 ''" li t t ~H y 111 lltlll.dtl , i111 1.1-~H. LIISI.,Iras 'Y s n7.im as cit.; csl
' i;lo, l;t awIIIIII NH, In nu d n1t1 d ~ l dd ~t pt\ IIH 11 y 111 vi t1 tt h1 NIIIII Nn. r tlllt' NpttiHh:nl lllllhi (' n :d
1 , 111 "1 '
u 111
195
196
CH,
0~-S-CoA
COOH
tH,
Ho- t-cooH
tH,
tooH
Citrato
COOH
tHOH
Oxalacetato
Hooc-1-H
tH,
tooH
H
coH
Malato
-f
"'-cfp
Ghoxi!ato
lsoc1trato
Jsoctlrato /tasa
CH,-COOH
tH,-COOH
Acetil CoA
Succinato
Las clulas de las hojas verdes poseen un tipo de peroxisorna que mediante una oxidasa especfica cataliza la oxidacin de una molcula de dos carbonos, el glicolato. Este se sintetiza en el cloroplasto en los das secos de sol intenso. La oxidacin del glicolato consume 0 2 y produce H 20 2 y glioxilato.
Luego el H20 2 es descompuesto por la catalasa del peroxisoma (en H 20 y 0 2)
y -siempre en el peroxisoma- el glioxilato se convierte en glicina, que se
metaboliza en la mitocondria y genera C02 .
Este proceso, en el que participan tres organoides -el cloroplasto, la mitocondria y el peroxisoma-, se denomina fotorrespiracin, ya que para la
sntesis y la oxidacin del glicolato se necesita luz y 0 2 y se libera C02 .
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h1 11
qn
11
198
CE LULA
INDUCIDA
CELULA
INDUCTORA
____-_-._.. __-!J.-------1
Sangre
OD
Fig. 11-l . Formas de induccin en los organismos pluricelular es. A. Secrecin endo-
tras que en las cl ulas adiposas esti mula la liplisis. Otras veces, distintas sustancias inductoras producidos por clulas inductoras diferentes generan una sola clase de respuesta por
parle de uno o de varios tipos de clulas blanco.
-- - +
Sustancia
inductora
199
] Receptor
Sntesis
de ARNm
Sntesis
de protena
200
o
11
o
JI
JI
o-P-0 -P
l_
1_
o
o
N~NH2
( : ( :NH
N
0 -~- 0-C~
o
HO
NH2 C:::::::::~~~====~
~
GTP
Regin
activadora de
la transcripcin
N~NH2
N: ( :NH
!/
rckd
ti
Guanilato
ciclasa
El NO secretado por las clulas endoteliales de los vasos sanguneos tiene como blanco a las clulas musculares lisas de los propios vasos (secrecin
paracrina), que se relajan y producen vasodilatacin. En algunos casos el pro~eso se inicia antes, cuando otra sustancia inductora - la acetilcolinamerge de los terminales axnicos que inervan a las clulas endoteliales e inleracta con receptores local izados en sus membranas plasmticas (fig. 11-5).
Debido a ello las clulas endoteliales producen xido ntrico sintasa, una en'ima que genera NO a partir del aminocido arginina. Finalmente, el NO sen etado por las clulas endoteliales induce la relajacin de las clulas muscul:lres lisas de los vasos.
Un ejempl o de induccin de esta clase corresponde a la dilatacin de los
vasos sanguneos del pene durante la ereccin. La vasodilatacin es inducida
por el NO que secretan las clulas endoteliales de los vasos penianos ante la
li<;gada de estmulos nerviosos espec.iales. Otro ejemplo corresponde a la nilroglicerina, que es un frmaco que se emplea para tratar las crisis de angi"a de pecho. A poco de su administracin, los vasos coronarios obstruidos
Ul ' dilatan por perodos relativamente prolongados debido a que la nitroglin rina se convierte en NO en forma lenta y gradual.
+
p
Las sustancias inductoras que se unen a receptores localizados en la mema11a plasmtica ponen en marcha en las c.lulas inducidas una serie de reac, i"11es moleculares hasta que se llega a la respuesta celular. Esas reacciones
.!1111 lugar a distintas vas de conduccin, transduccin y amplificacin de se1''
>illlt:s,
(------------- (---
Sustancia
inductora
'
<
-0 - P--0 OH
JI
o
GMPc
OH
CELULA ENDOTELIAL
hsp90
Oxido nftrico
201
Acetilcolina
Regin que se
asocia al gen
'""
,.,
'"
NO sintasa
Arqinina
Guanilato ciclasa
Fig. ll-5. Formacin de xido ntrico (NO) en l:rs c61ul:rs
cndordiak s y su a c: i 11 ~ ohn
lw. 1' lulu~ IIIIIN<' llll ul " , llww d
lnN \111"111/l 1111 11' 11 111 ' 11''
202
'
Sustancia inductora
GTP
Los receptores de la membrana plasmtica que dan origen a vas de seales intracelulares se componen de una o ms protenas. Cada receptor posee
un dominio externo, un dominio transmembranoso y un dominio citoslico.
Cuando la sustancia inductora se une al primero, el receptor se activa y su dominio citosl ico experimenta uno de los siguientes cambios:
1) Adquiere actividad enzimtica o activa a una enzima independiente del
receptor (figs. 11-6 a 11-!2).
2) Activa a una protena localizada en la membrana plasmtica, llamada
protena G, la cual activa a una enzima (figs. 11 -1 3, 11-16, 11- 19 y 11-21).
11
Las sustancias inductoras que interactan con los receptores que poseen acde serina-treonina quinasa pertenecen a una familia de molculas llall laclas TGF-{3 (por tramfonning growthfactor-jJ), cuyos miembros - algunos
M ' analizan en el captulo 2 1-1 6- regulan diversas actividades celulares.
La figura 11-7 muestra que la llegada de la sustancia inductora a la memlll'a na plasmtica de la clula inducida rene a las cuatro subunidades protei' as que integran el receptor, las cuales se hallan agrupadas de a dos y seran
di rerentes entre s.
A continuacin, mediante fosfatos tomados de molculas de ATP, los dolllinios citoslicos de dos de las cuatro subunidades fosfori lan a serinas y
r 1 oninas de los dominios citoslicos de las otras dos subunidades, que se ac'' van y fosfori tan a serinas especficas de la protena citoslica Smad (por se1'<'11 mothers against dpp, un gen de la Drosophila de los que hay siete anlo:us en los vertebrados).
Luego la Smad se une a otra protena de su misma familia y ambas ingre/.!111 en el ncleo, donde se combinan con factores de transcripcin que acti1i vidad
Sustancia inductora
203
,/
1
Smad 1 1
inactiva
Smad 1
activa
Smad 2
ndn dt 11111
tlt In
do.~ ~ulluuidudtN
l l fll llt ll
204
Sust
inductora
Receptor
GOP
205
GT
r---\
~
~ACTIVA
GTP
p~
Fig. 11-9. Activacin e inacti
vacin de la pro tena Ras mediante las protenas GEF y
GAP. respectivamente.
Sustancia inductora
'
IIO.\'t )
y'" '"
11
--,~
ATP
Fig. 11-10. Receptor membranoso cuyo dominio citoslico posee actividad de tirosina quinasa. El receptor
se co mpone de dos unidades id6nticas. las cuales se
rc(Jncn con la 11 gacln dt lns dos suhunidadcs de la
sustaiH' in incltl<'hnn y l~u ,: un un <'t tffi))ft i<t llomoditut<z lto, ( lh:1 1Vt''t' qw \1 ll' 't1plnl 11'11v' n In l o~:htl i
p!uUI t ' yCI'I t ' yl NI/ , l~ th ulu 111l11pl11 1nftl1t o 11:.11
ADP
Fig. 11-11. Receptor membranoso cuyo dominio c itoslico posee actividad de tirosina quinasa. E l re
ceptor se compone de dos unidades idnticas, las
cuales se renen con la llegada de l:1s dos suhunicladcs de la sustauc ia indu tora y fornm n 1111 compkjt
lloiiiCidilll(oljl.-'0, ()h~:C IVt'~il" tllt' el ll'l't pltll M' II IH' 11
206
S ustancia inductora
'
207
Sustancia inductora
1ico activa a una tirosina quinasa independiente del receptor. Obsrvese que cuando el
reccplor est inactivo se compone de dos subunidades separadas idnticas, las c ua les
se renen con la llegada de la
sustancia inductora y componen un complejo ho modim6rico. En ocros casos se forman
receptores heterodimricos o
heterotrimricos.
STAT
'
Dimerizacin
/)
Existen receptores que cuando son inducidos activan a una tirosina quinasa independiente de sus molculas, localizada en el citosol (fig. ll-12). Las
sustancias inductoras ms conocidas que se unen a estos receptores son la
hormona del crecimiento, la prolactina, la eritropoyetina (cap. 18- 18), algunas citoquinas y los antgenos cuando se unen a los linfocitos B o T.
La va de seales que nace en estos receptores comienza cuando la sustancia inductora interacta con las dos o tres subunidades que integran el receptor. En algunos receptores esas subunidades son iguales entre s y en otros son
diferentes. Como muestra la figura 11 - 12, la llegada de la sustancia inductora rene a las subunidades, lo cual activa al receptor y origina una va de seales que llega al ncleo muy rpidamente, pues se vale de un escaso nmero de molculas intermediarias.
Una de las primeras molculas de esta va de seales es la tirosina quinasa nombrada al comienzo de la seccin. Entre las enzimas ms difundidas de
este tipo se encuentra la tirosina quinasa J AK (por Jpnus kinase), que nos
servir de ejemplo.
As, apenas se activan los dominios citoslicos de las subunidades del receptor, atraen a sendas J AK. las cuales se fosforilan recprocamente y se activan (fig. 11-12).
Luego las JAK fosforilan a los dominios citoslicos del receptor, que se
vuelven a activar y atraen a unas protenas citoslicas llamadas STAT (por
signa! transducer and activators oj transcription), las cuales son fosforiladas
por las JAK. Como se ve, las JAK primero se autofosforilan y luego fosforilan a Jos dominios citoslicos del receptor y a las protenas STAT.
Una vez fo sforiladas, las STAT se dimerizan e ingresan en el ncleo (fig.
11-12), donde se combinan con protenas especiales y forman complejos que
activan a diversos tipos de genes. Estos - y sus productos- varan segn las
sustancias inductoras y las clulas inducidas. Por ejemplo, la prolactina hace
que las clulas de la glndula mamaria secreten leche, mientra que otras inducciones regul an la proliferacin ele.: algunos ti pos e lul:ir s. ,.1 d sarwllo
1.-' lllhrion:lri n , ctv.
tlr 11 l ll
, 1 ( ;l l l'
1"11
11 11
(;'['J'i
1' " " " '
GTP
GTP
208
NH 2
<(~"
N~ ~~
o
O
O
11
11
11
-0- P- 0- P- 0- P- o-~CO
2
111o
o
o
HO
N:;::?
Protena G,
/, ,.,.-
Adenilato ..,
ciclasa
Mg2+
p
+
p
OH
ATP
AMPc
H,O ~
Foslodiesterasa
<=N
N N)
AMP
HO
OH
209
:ustancia inductora
210
JI
Clulas inducidas
Efectos
Adrenalina
Glucagn
Hepatocitos
Degradacin de glucgeno
Menor sntesis de glucgeno
Adrenalina
Musculares estriadas
Degradacin de glucgeno
Adrenalina
M usculares cardacas
Adrenalina
Glucagn
Adipocitos
Degradacin de triacilgliceroles
Menor captacin de aminocidos
folculos ovricos
Tirouopina (TSH)
Tiroideas
Adrenocorticotropina
(ACTH)
Suprarrenales (corteza)
Secrecin de cortisol
Hormona antidiurtica
Renales
Retencin ck agua
Parathormona
Oseas
Odoranlcs
Nltunt pill'lndt"l
l n 11 1
l kh~\d11 1 dt. u h ll
"'
211
A
1)11lnasa A inactiva
Quinasa A activa
~~ ~~~;;
- ----
Glucgeno fosforilasa
inactiva
Gl ucgeno fosforilasa
quinasa inactiva
...
1 1111r.geno
sintasa
activa
GJ
-------
Glucgeno fosforilasa
quinasa activa
'
'
'
Glucgeno fosforllasa
activa
/
/
1 Glucgeno j
'
'~
1Glucosa 1-P 1
Glucgeno s intasa
inactiva
1" 11sc.:cuencia del estrs liberan adrenalina, una sustancia inductora que se
1 111' k:a en la sangre y llega a las clulas musculares estriadas, a cuyas mem1" II II US plasmticas se une. Se conecta con un receptor membranoso llamado
11 ndrenrgico, que activa a la protena Gs. Dado que sta activa a la enzi11 111 ndenilato ciclasa, se genera AMPc y se activa la quinasa A, cuyas sub" ""llldes catalticas fosforilan a dos enzimas citoslicas: la glucgeno fos1, 11l11sa quinas a y la glucgeno sintasa (fig. 11- 17).
1,11 glucgeno fosfor ilasa quinasa se activa y fosforila a otra enzima, la
hu~eno fosforilasa, que degrada al glucgeno mediante la liberacin pro" ' "iva de sus monmeros, representados por molculas de glucosa 1-fosfa11 (<'Stimulacin de la glucogenlisis).
l :n cambio, la glucgeno sintasa se inhibe y deja de sintetizar glucgeno
11'1 11tir de molculas de glucosa (detencin de la glucogenognesis).
t 'u111o se ve, en las clulas musculares estliadas la activacin del recep1111 11. adrenrgico eleva la concentracin de glucosa ! -fosfato y de glucosa.
1 "1" a regar que posteriormente estas dos hexosas se convierten en gluco" , i'nsfato por accin de las enzimas fosfoglucomutasa y hexoquinasa,
11 1''ti va mente.
1ltulo que para generar ATP el organismo consume glucosa 6-fosfato
11 tq 11.. X- y 8-7) (fig. 8-6), en situaciones de estrs recurre a ella en grandes
11111 1"lnd..:s a fin de sostener la contraccin muscular (cap. 5-33). Tal deman"" l11u'<' que.: parte de la glucosa 6-fosfato requerida por los msculos sea pral 1 1 111r c.:l hgado. Para ello, a travs tambin del receptor ~z- adrenrgico,
111 lilt~ n nli na induce al hepatocito a producir glucosa 6-fosfato mediante las
11 11 11111'. <<'acciones de las clulas musculares estriadas. Luego, una enzima
il1111illl 111 l:t membrana del REL, la glucosa 6-fosfatasa, transforma a la
d11, 1 111 , I'osl'alo en glucosa, que sale del hepatocito, pasa a la circulacin
llll f' " ' ll<'l l (l'ap. 7-27) y llega a las clulas musculares, donde la hexoquina" l11 ", 'HI Vit:t'l un gl11cosa 6-fosfato con el fin de generar ATP (fig. 8-6).
1 11", 1 ll' lll[llo dt.: r ~ puesta inmediata mediada por la adrenali na se da en
l 1 11 l11 h1 , ll<ll '.< 'ldlll l'" lisns dl'i 111h11 di rl:sli vu lns lwo11qui os. t:n r~Il' n ~u
212
213
PO'~
1 '
-,oP-oooH
HO
Protefna.Gq
1
o
1
Po'-
OH
OH
1
1'
Fosfolipasa C-1}
O= P - O
1
o1
o1
1 2
o1
c:= o c: = o
CH 2 -~H- ~H,
o
1
o
1
1 '
CH -CH- CH
-,op - O o OH
+
HO
OH
(CH2).(CH2).
~o,-
CH, CH,
C=O C=O
PIP2
(9H2).(9H2).
CH,
DAG
IP3
CH,
la adrenalina se une a un receptor diferente, llamado az-adrenrgico, que activa a la protena G;, la cual funciona de una manera distinta de la esperada,
puesto que no interviene su subunidad a -que segn se vio inhibe a la adenilato ciclasa- sino su complejo j3y. Ms an, este complejo no se une a una
enzima sino a un canal de K de la membrana plasmtica, que se abre y permite que el K se escape de la clula. Debido a ello la membrana plasmtica
se hiperpolariza y su excitabilidad disminuye, con la consiguiente relajacin
de las clulas musculares lisas mencionadas.
La figura 19-20 muestra un sector de la membrana plasmtica del espermatozoide en el que se ilustra otro ejemplo de respuesta inmediata distinta
mediada por una protena G. Obsrvese que aqu la subunidad a se une a la
adenilato ciclasa y que el complejo j3y lo hace con un canal de Ca2' localizado en la membrana (cap. 19-18).
Los dos ltimos ejemplos aaden un nuevo dato sobre las funciones de las
protenas G, dado que en algunos casos sus complejos j3y interactan con canales inicos.
A continuacin se analizar la actuacin de las subunidades catalticas de
la quinasa A que entran en el ncleo y generan respuestas tardas (fig. 11-17).
En el nucleoplasma, mediante un fosfato tomado de un ATP, cada subunidad
cataltica fosforita a una serina de una protena llamada CREB (por cAMP
response element binding protein), que se activa y se une a otra protena nuclear, denominada CBP (por CREE binding protein).
Luego el complejo CREB-CBP se une a la secuencia reguladora de algunos genes, ms precisamente a un segmento llamado CRE (por cAMP response element). Dado que ello estimula la expresin de esos genes, puede decirse que la CREB y la CBP son factores de transcripcin activadores (cap.
14-7).
La secuencia CRE se halla en genes relacionados con la proliferacin y la
diferenciacin celular. Adems se encuentra en el gen de la somatostatina,
una hormona producida por los islotes de Langerhans y la mucosa del tubo
digestivo, que inhibe la sntesis de glucosa y la secrecin de gastrina.
11 - 16. En la tos ferina y en el clera se afect a el funcionamiento
de protenas G
La tos ferituz es una enfermedad producida por la toxina del bacilo Bordetel/a pertussis. La toxina acta en las clulas musculares lisas de los bronquios, donde impide que el GTP se acople a la subunidad a de la protcfna G;,
hecho que conserva a la subunidad a unida al dmero I~Y u fmma pt"llllanen
1 .Ello iruposihilita In accin inhihih>ria d, la protdn11 (ir 1111h11 lll lldt11il11h
ciclasa, por Jo que los niveles de AMPc se mantienen ajtos y la qu inasa A permanece activa. Como consecue ncia, los canales de K+ mencionados en la sec~ i n anterior se cierran y la excitabilidad del msculo liso bronquial aumenla, por Jo que el msculo se contrae en forma sostenida y causa la tos que caracteriza a la enfermedad.
El clera es una enfermedad producida por la toxina del bacilo Vibrio cho/rae, caracterizada por diarreas profusas, desequilibrios inicos y deshidralacin. Estos trastornos se de ben al aumento de los niveles de AMPc en las
clulas de la mucosa intestinal. Es que la toxina bloquea a la GTPasa de la
'.ttbunidad a de la protena Gs, lo cual impide que el GTP se hidro! ice a GDP
y P. Por consecuencia, la protena G, y la adenilato ciclasa se mantienen acri vas y la enzima produce AMPc en forma sostenida. Dado que en las clulas
dl:l epitelio intestinal el AMPc se une a un canal de CJ- de la membrana plastntica, ese canal se abre y el ion pasa a la luz del intestino en forma masiva.
1.a diarrea se debe a que el CJ- arrastra al Na y a que ambos iones provocan
In salida de grandes cantidades de agua.
1t - 17. l a fosfolipasa
En la membrana plasmtica de diversos tipos de clulas la unin de algunas sustancias inductoras con sus receptores activa a la subunidad a de la
troten a G q, que debido a ello reemplaza su GDP por un GTP. A su vez, la
pt otena Gq activa a la fosfolipasa C-~ (PLC-3), una enzima que se halla en
,1 itosol cerca de la membrana (fig. 11- 19).
Un ejemplo de esta clase de inducciones corresponde a la adrenalina
, ttando se une a un receptor distinto de los nombrados hasta aqu, llamado
,-adrenr gico.
En el captulo 3-3 se dijo que uno de los fosfolpidos de la bicapa lipdica
,,. las membranas celulares es el fosfatidilinositol (PI). En la membrana plas" t: I ica se localiza en la monocapa citoslica y, aunque es el ms escaso, ti e'"" un enorme significado funcional debido a que interviene en importantes
vf:ts de seales intracelulares. Para ello se fosforila en el C4' y en el CS' del
ttll>sitol mediante la transferencia de fosfatos tomados de molculas de ATP,
1, ,ttal In convierte primero en fosfatidilinositol 4-fosfato (PIP) y luego en
lu~fnlidilinosito14,5-difosfato (PIP2 ) (figs. 2-16 y 11 -18).
y,,l vil'lldo a la fosfolipasa C-3, una vez activada cataliza la hidrlisis del
1'11' .. ll"'' rn lllll s dijo en la se cin 11-14 se fracc iona en dos molculas re
lll lt VI IItll"nl IW'Irt tta .~. tl hwNIIul 1,4,5-lrifosfulo (11',) 1'1 dint"il littol
t lli\(; ltlr". ' 1 l , 11 I H y 11 1'1) l'tt l.. pt ll \ ttlt.t, 'it'o'l'lllt H"I 1.1 Vt" tl t qt H'
Fig. 11-19. Accin de la subunidad Cl. de la protena Gq sobre la enzima fosfo lipasa C-~
(PLC-/]J.
214
a la quinasa C
Una vez que el PIP2 es fraccionado en DAG e IP3 por la PLC-~ o por la
1'1 .l -y, el DAG permanece en la monocapa citoslica de la membrana plas"'licu, como lo estaba el PIP2 (figs. 11 -10 y ll-19).
Si multneamente, parte del Ca 2+ que se libera del REL por accin del IP3
w une a una enzima citoslica llamada quinasa C (por Ca 2 ) . Luego el comdrjo Ca2-quinasa C se dirige a la membrana plasmtica y se coloca junto
ni DAGa fi n de que ste active a la quinasa C (figs. 11 - 10, 11 -19, 11-22 y
11 23).
omo se ve, el Ca2 citoslico liberado por el IP3 hace posible la activa,., 11 de la quinasa C por medio del DAG, lo que demuestra que el IP3 y el
1 1/\G se relacionan no slo por su origen -el PIP2sino tambin por la
nsislencia que el primero le presta al segundo.
/\penas se activa, la quinasa C fosforita a serinas o a treoninas de protell iiS citoslicas y nucleares, las cuales varan en los distintos tipos de clulas.
U na de las protenas citoslicas es la glucgeno sintasa, que en la clula
1> ptica es fosforilada no slo por la quinasa A sino tambin por la q uinasa
t . omo se vio en la seccin 11-15, el fosfato le impide a la g.lucgeno sinlnsa sintetizar glucgeno a partir de molculas de glucosa (fig. 11 -1 7B).
Otra protena citoslica que fosforita la quinasa C es la Raf, en cuyo caso
lil va de seales deriva en la activacin de genes que inducen el crecimiento
y la diferenciacin celular (seccin 11 - 12) (fig . 11-22).
Otros dos ejemplos en los que la enzima quinasa C fosforila a protenas
itoslicas se dan durante la fecundacin, en las etapas mostradas en las fi1\llras 19-22 y 19-23.
l'or su parte. las protenas nuc leares que se fosforilan mediante la quinasa
<' .~ <lit fa torcs d lnu ts<.: t ip i()n que a ti van o reprimen a un g rupo de genes
ll ' liii'OIIIIclOS I'CIII
t
l!i
4 1 ~ 111 1 11/. lot~ d t' IIII H, III t 11 1 1\', llldl lll /.\"l!l llt 'l ' lllll
215
216
P0 2-
P0 2-
'
Protenas G 13 o G 1
OH
HO
.y
o
1
CH, - ? H - ?H,
o
1
PIP2
OH
-o1
o
O= P- 0
'
-',OP-O O H
HO
O= P - O
1
Fosfatidilinositol
3-quinasa
CH,- CH - CH2
1
o
1
o
1
C= O C= O
C= O C= O
1
1
(9H,),(9H,),
(9H,).,(9 H,),
CH, CH,
CH, CH,
tumorgena de los steres de forbol, los cuales poseen estructuras sim ilares a
la del DAG y al igual que ste activan a la quinasa C. No obstante, debido a
que no se degradan - y, por lo tanto, no se interrumpe la actividad de la quinasa C-, promueven una proliferacin cel ular sostenida, con la consiguiente formacin de tumores.
Debe sealarse que en algunas neuronas del cerebro la quinasa C no fosforila a protenas del citosol ni del ncleo sino a canales inicos de la membrana plasmtica, lo cual los abre, con la consiguiente alteracin de la excitabilidad de la membrana.
La quinasa C interrumpe su acti vidad cuando el DAG se hidroliza. Uno de
los productos de esa hidrlisis es el cido araquidnico, que es un precursor
de diversos eicosanoides, entre los que se hallan las prostaglandinas.
ATP
A
217
ADP
IIIBUOGRAFIA
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1( M , Blllllll ' l 1\ 1 , 1111111' V 11 . 11 11d Kthrl .1.11.
r f'lltl) lnl uhii iPII cd l l , ....,. 111 11 11 d jl c' d MAl ' ~1 1111 \.jl '
lllllc ' V
218
12
El ncleo
La presencia del ncleo es la principal caracterstica que distingue a las clulas eucariotas. El ncleo ocupa un 10% del volumen total de la clula y en
,< se halla confinado el ADN, excepto el de las mitocondrias. Lo delimita la
l'arioteca o envoltura I'!Uclear, compuesta por dos membranas concntricas
que se continan con la membrana del RE (fig. 12~1) .
La carioteca posee numerosas perforaciones -llamadas poros-, que colllunican el interior del ncleo con el citosol. Adems se encuentra reforzada
por dos mallas de filamentos intermedios, una que se apoya sobre la superfiie interna de la envoltura - la lmina nuclear vista en el captulo 5-3- y otra
que lo hace sobre la superficie externa (fig. 12-1).
En el compartimiento nuclear se locali zan:
1) Cuarenta y seis cromosomas, cada uno formado por una sola molcula
dt.: ADN combinada con numerosas protenas.
2) Varias clases de ARN (mensajero, ribosmicos, de transferencia, pequedos), que se sintetizan en el ncleo al ser transcriptos sus genes. Estos ARN
'::den del ncleo por los poros de la envoltura nuclear despus de su procesal! liento (cap. 15).
3) El nuclolo, donde se localizan los genes de los ARNr y los ARNr re'in sintetizados.
4) Diversas protenas, como las que regulan la actividad de los genes, las
que promueven el procesamiento de los ARN, las que se combinan con los
y la
flvollura
nm:knr
:.1...
220
12. EL NUCLEO
221
ARNr en el nuclolo, las ADN poli meras as, las ARN polimerasas, etc. Estas
protenas son fabricadas en el citosol e ingresan en el ncleo por los poros de
la envoltura nuclear.
5) Los elementos mencionados se hallan dispersos en la matriz nuclear o
nucleoplasma , cuya composicin es escasamente conocida.
ENVOLTURA NUCLEAR
12- 2. La envoltu ra nuclear est co mpuesta por dos membra nas
concn tricas atravesadas por poros
Hemos dicho que la envoltura nuclear o carioteca est compuesta por
dos membranas concntricas. Estas se unen a nivel de los poros, los cuales se
hallan distribuidos ms o menos regularmente por toda la envoltura (figs.
12-1, 12-2 y 23-5).
El espacio entre la membrana externa y la membrana interna -o espacio
perinuclear- se comunica con la cavidad del RE. La membrana externa se
contina con la membrana del RE y es comn que aparezca tachonada de ribosomas (fig. 12-2). Las protenas que se sintetizan en estos ribosomas se
incorporan a las membranas de la envoltura o se vuelcan en el espacio perinuclear.
1.a membrana nuclear interna est sostenida por la lmina nuclear, que es
'' "" delgada malla de laminofilamentos entrecruzados (cap. 5-3). La lmina
' " 11 ! ar se interrumpe slo a la altura de los poros (figs. 12-1 y 12-3). Algu1111 . protenas integrales de la membrana nuclear interna sirven como puntos
ti !lltclaje para los laminofilamentos.
1.a lmina nuclear le otorga resistencia a la carioteca y establece su forma,
J<t' lll;ralmente esfrica. Como se ver en el captulo 18-18, ambas estructuras
' <h.:sarman al comienzo de la mitosis y reaparecen cuando sta concluye, al
'"""arse los ncleos en las clulas hijas.
I ,II OSOL
Fig. 12-2. Micrografa electrnica del ncleo de una clula
pancretica. Np, nucleoplasma. Parte de la cromatina (C)
se encuentra junto al nuclolo
(Nu) y parte junto a la cara intema de la envoltura nuclear
(EN) , excepto a ni vel de los
poros nucleares (flechas). Obs~ r vc sc la cara extern a de la
L' ll vollura mu.:lcar cuhicrta de
1ihc ~. t llll n:; , 2 11.0f)( )X. (( 'clr! tsfa
de 1 1\ cidl \ )
1 nrnhtu 1111c:lour
Columna proteica
1+ ----
IOOnm
NIU JII ()
dc j 11
222
12. EL NUCLEO
CITOSOL
Ran
lmportina
~rotena
t.lfOSOL
LS {J ________!~---------. LS <t
t1
+ -,
1
1
1
1
\, ___________
\
1
\l
{] -------- ....,,
1
1
1
1
1
1
1
t
1
1
/ . . . --------+
1
1
/
'
',\//'
Ltl+--------;,~--------- ~.~~l
------------J',,_.~
NIJCLEO
NUCLEO
~rotena
223
1.a entrada de las protenas en el ncleo se realiza mediante un mecanis'"" selectivo que permite el ingreso slo de las apropiadas, las cuales poseen
"" pptid o seal especfico que abre el camino para que puedan pasar por el
, lltplcjo del poro.
l .os pptidos seal ms estudiados se llaman NSL (por nuclear signa/lo' r~li<.ulion) (cap. 4-4). Como muestra la figura 12-5A, no interactan directa""'111 <: con el complejo del poro sino mediante una protena heterodimrica
d 'lltll11inada importina. Debido a que existen distintos tipos de NSL para di11 ' r 11tes grupos de protenas destinadas al ncleo, cada tipo de NSL requ iere
111111 importina especial. Por otra parte, existen NSL que se unen a protenas
dH.Iilllas de las importinas, entre las que se encuentran unas que se volvern
11 111 ncionar ms adelante, ll amadas transportinas.
1:1 pasaje de una protena desde el citosol al ncleo a travs del complejo
d1 l poro se produce en varias etapas. Soo las siguientes y se ilustran en la fi-
1'"'"
12-5A:
1) La protena se une a la importina por medio del NSL y ambas molcul u. s.: colocan cerca del compl ejo del poro. Lo atraviesan previo agranda1111<'1110 de su diafragma, cuyo dimetro puede a.lcanzar los 25 nm.
L ) El pasaje requiere que la importina sea guiada por las fibrillas protei' 111: xternas e internas del complejo del poro de la manera ilustrada en la fil"ll:t 12-6.
\) Durante el pasaje se gasta un GTP, cuya hidrlisis est a cargo de una
1'"'' f11a llamada Ran (por Ras-related nuclear protein). Como se ve, se tra111 d un transporte activo.
11) La Ran pertenece a la familia de GTPasas que actan asociadas a las
I'"'I I'11as reguladoras GEF y GAP. En los captulos 7-38 y 11-12 se dijo que
11111 1tdo son influidas por la GEF, estas GTPasas intercambian el GDP inclui"" <'11 sus molculas por un GTP, mientras que cuando son influidas por la
1 ;\p ltidrolizan e l GTP a GDP y P (fig. 11 -9). La GEF y la GAP que se aso' 111 tt la l<an Sl: loraliz,ut n el n leo y en el ;ilnsol. rcspccl ivamcnlc.
'>) C'<1111<1 llllll'lll ll In 11 '111 !1 1 1 ~ i\. 1'11:11ulo <'1 ('011tpkjo itupollill:t pmldll!l
lllf11 'UI 1' 11 1'1 11111 ' 1 \11
l11
224
12. EL NUCLEO
CITOSOL
~
1
lolmero
Origen de replicacin
Centrmero
1) La protena se une a la exportina por medio del NES. Simultneamenla GEF remue ve el GDP de una Ran-GDP y lo reemplaza por un GTP, de
1110do que se forma una Ran-GTP.
2) La Ran-GTP se une a la protena por medio de la exportina.
3) Unidas entre s, la Ran-GTP, la protena y la exportina se acercan al po" ' nuclear y lo atraviesan previo agrandamiento de su diafragma, cuyo dilllctro puede alcanzar los 25 nm.
4) Al igua l que la importina, durante el pasaje la exportina es guiada por
las fibrillas proteicas del complejo del poro.
5) Al cabo del pasaje, inducida por la GAP, la Ran-GTP hidroliza el GTP
11 C~ DP y P, de lo que resulta una Ran-GDP.
6) Ello hace que la Ran-GDP se independice de la expo rtina, la cual, a su
vez, se independiza de la protena.
7) La protena queda retenida en el citosol. En cambio, la Ran-GDP y la
xportina retornan al ncleo separadamente.
8) Finalmente, la Ran-GDP y la exportina libres pueden ser reutilizadas
ara transferir nuevas pro tenas hacia el citosol.
Respecto de las molculas de ARN, salen del ncleo combinadas con prold nas, aunque estn impedidas de hacerlo si no completaron sus procesa'" i ~: ntos (captu lo 15). Su pasaje a travs de los poros nucleares depende de
1 :~ Ran y de transportinas que reconocen seales especficas en las protenas.
l\",
NUCLEO
rHOMOSOMAS
1l-5. El material de que estn formados los cromosomas
es la cromatina
di a~: i n ,
""s asociadas antes de la di visin celular. Son las siguientes (fig. 12-7):
1) El centrmer o o constriccin primaria , que participa en el reparto a
l.t. r lulas hijas de las dos copias cromosmicas que se generan a consecuen' i.1d la replicacin del ADN (cap. 18-9).
.' ) l.os telmeros, que corresponden a los extremos de los cromosomas,
' "Y" /\DN se replica de un modo distinto al resto del ADN. En la prxima
'"''"'"'"" y u ~: 1 apftnlo 17 t) se v -r: que el ADN telomrico contiene una sc1
111 111
tll l
Sl'
!'c pitc
llllt
225
226
12. EL NUCLEO
el ADN de otros telmeros o puede ser degradado por una nucleasa. Normalmente estas contingencias no ocurren porque el ADN telomrico se dobla sobre s mismo (adopta la forma de un lazo) y es protegido por un capuchn de
protenas llamadas TRF (por telomeric repeat binding facto r) (fig. 17-1 2).
3) En el captulo 17-4 se ver que la enorme longitud del ADN exige que
su replicacin se inicie en muchos puntos a la vez a fin de que su duracin
sea relativamente breve. Esos puntos se denominan orgenes de replicacin
y en ellos el ADN posee secuencias de nucletidos especiales. Ms an, todos los orgenes de replicacin tienen en comn secuencias conservadas de
alrededor de una docena de nucletidos llamadas ARS (por autonomous replication sequence), de las que nos volveremos a ocupar en dicho captulo.
12-7. Los cromosomas poseen secuencias de ADN nicas
y secuencias de ADN repe tid as
En las molculas de ADN se halla depositada la informacin gentica de
la clula y todas las clulas poseen conjuntos virtualmente idnticos de molculas de ADN. La totalidad de la informacin gentica depositada en el
ADN lleva el nombre de genoma. Puede decirse que esa informacin rige la
actividad del organismo desde el primer instante del desarrollo embrionario
hasta la muerte del individuo. De ella tambin depende la inmunidad o la predisposicin del organismo a determinadas enfermedades.
La capacidad o incapacidad funcional del ADN, es decir, su aptitud o su
incompetencia para generar molculas de ARN (proceso conocido con el
nombre de transcripcin del ADN), se basa en la secuencia de sus nucletidos. As, en algunos sectores el ADN exhibe secuencias de nucletidos que
se transcriben -llamadas genes- y en otros presenta secuencias aparentemente prescindibles, al menos a la luz del conocimiento actual.
El 75% del ADN se halla representado por secuencias de nucletidos no
repetidas (copias nicas) o que se repiten unas pocas veces. En esta parte se
localizan los sectores funcionales del ADN - es decir, los genes- , los cuales abarcan alrededor del 10% del ADN (representan el 13% de ese 75%).
Uno de los mayores desafos para los bilogos moleculares es descifrar las
funciones del ADN ajeno a los genes.
El 25% restante del ADN corresponde a secuencias de nucletidos que se
repiten muchas veces, llamado ADN repetitivo. Sus funciones se desconocen, aunque no se descarta que desempeen algn papel en el mantenimiento de la estructura de los cromosomas.
Existen dos clases de ADN repetitivo: el dispuesto en tandas (en el cual el
inicio de una repeticin se halla inmediatamente despus del final de la otra)
y el disperso (cuyas copias no se encuentran agrupadas sino dispersas en distintos puntos de los cromosomas).
ADN repetitivo dispuesto en tandas. A esta categora pertenecen los
ADN satlites, los microsatlites y los minisatlites.
En los ADN satlites el largo de la secuencia repetida, el nmero de veces que se repite en cada tanda y el nmero de tandas varan. El ADN satlite ms destacado se locali za en los centrmeros, y por ello se encuentra en
todos los cromosomas (fig. 12-1 7). Incluye una secuencia repetida de 171 pares de bases a la que se le ha dado el nombre de secuencia alfoide, que vara
muy poco en los distintos cromosomas. Otros ADN satlites se localizan en
el brazo largo del cromosoma Y y en la cromatina aledaa a los centrmeros
de los cromosomas 1, 3, 9, 16 y 19 (ms adelante se indican el signifi ;do
de la numeracin de los cmulosolnas).
hl.~l mmN
dt )111'
f n w l ll
it'm.J
qtw
1Hupo11 '(,n dt ll
227
228
H2A
l 2. EL NUCLEO
H2B
H3
H4
H1
ta de !O nm. B. Nucleosoma
p!IH",
Ncleo
229
d1 \llll l lld ll
230
12. EL NUCLEO
231
Ncleo del
nucleosoma
1 '/-
A
Fig. 12:11. A. Cromatina de
30 nm de dimetro. (De F.
Thoma. T. Koller y A. Klug.)
B. Micrografa electrnica
de una fibra de cromatina de
30 nm de dimetro. (Cortesa
de J. B. Rattner y B. A.
Hamkalo.)
protenas no histnicas (figs. 12-12D y 12-13). Dado que el conjunto de cordones proteicos compone una suerte de andamiaje, en los extremos de cada
lazo el ADN asociado al cordn proteico lleva el nombre de SAR (por scaffold associated regions). Los lazos se hallan firmemente unidos al cordn,
pero se ignora cmo se sujetan a l las SAR.
Se considera que cada lazo constituira una unidad de replicacin del ADN
(cap. 17-3) y, probablemente, una unidad de transcripcin, es decir, un gen
(cap. 14-12).
omo se describir en los captulos 18 y 19, durante el ciclo celular, ser>i >l que la clula est atravesando la interfase o se est dividiendo -por mi'""is o por meiosis-, los cromosomas pasan de estados de menor a mayor
, '1111pactacin. El grado ms alto de enrollamiento se alcanza en la etapa de
oh visin llamada metafase, en que la cromatina de los cromosomas muestra
1111 stado de condensacin similar al de la heterocromatina interfsica (fig.
1! 14).
Tal grado de compactacin hace que los cromosomas lleguen a verse co"'" <:structuras individuales, las cuales, una vez fijadas y fotografiadas, pue-
11
232
12. EL NUCLEO
233
metafase. (Cortesa de E. J.
Duprnw.)
ttl1c1 .
A llu :u
n1
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10
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12
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11
11
234
12. E L NUCLEO
235
Cromtidas
Satlite
Centr mero
. ''
centrmero.
Metacntrico
Submetacntrico
Aorocntrico
trones normales, las bandas constituyen una gua muy valiosa para diagnosticar trastornos genticos, por ejemplo, deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones cromosmicas (cap. 20-J 0). Las tcnicas de bandeado
cromosmico ms utilizadas son las siguie ntes:
Bandeado G. Los cromosomas son tratados con tripsina (para desnatura]izar sus protenas) y teidos con el colorante de Giemsa. Las bandas G, que
aparecen oscuras, contienen ADN ricos en pares de nucletidos A-T.
Bandeado Q. Si los cromosomas son tratados con quinacrina desaiTollan
un patrn especfico de bandas oscuras intercaladas con otras brillantes (Q),
las cuales se identifican con la ayuda de l microscopio de fluorescencia (cap.
23-25). Las bandas Q coinciden casi exactamente con las bandas G, por lo
que tambin son ricas en pares de nucletidos A-T.
Bandeado R . En este caso los cromosomas reciben calor antes de ser teidos con el colorante de Giemsa, lo que da un patrn de bandas oscuras
(bandas R) y claras inverso al conseguido con los bandeados G y Q. El anlisis molecular de las bandas R muestra una mayor proporcin de pares de
nucletidos G-C.
Bandeado C. Este mtodo tie de manera especfica los tramos de cromatina que permanecen condensados en la interfase, por ejemplo, la heterocromatina constitutiva de Jos centrmeros.
10
11
12
13
.14
15
16
17
18
19
20
21
22
yen el caso ms llamat ivo de ordenamiento 1111 1ar. p11 s se agrupan 011 1111
p
q
Jt'lg. 12 17. 1\npll''j' lll tll IH.t t 'lqiiiiiUill u d 1' l t 'll l illlipo lllllllllllll r on hundrndo, que nnrr x1n1 los 2 !llltoson m ~ y los (.'I'IIIIIONOIIIIIN
X ,, Y. , h llt/ n n1111 , / , ' '"' ' ,. ltn l'" 1 .. ,.. ,., 1 luH '! d t l w lt ' lllt' lllllllll in u t'lllll.lilnt i vn (i ndnidn. Ion de- !111. c' t ' l t i ii 1IIII'I O'.) n p ii H 't 'n
1 11 ttdttl lll jt ftl 111111111 11 1 lllto ._, lltl lth U 11 l t ~i lo J! I IIP 'fl V 111/l l lll llt liW lttfl l t illlt l/!ti!I UI H l \, 1 1, 1'., '1 y 1 1 t l ll lll t \ 111 111 Nllll 1!11 tj
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( el
238
239
ADN
ADN ~
l
l
Transcrip cin
Transcripcin
~
ARNm
t"'-"--_.
Transcripto
primario~
(lnlc .)
Procesamiento
PR OTEINA
~t
Traduccin
(Term .)
~
.. ... ...... .. .. Leu (COOH)
ARNm ~
Ribosom: t
l j
Traduccin
Protena
eucariota.
ARN se parece al ADN) y traduccin indica "escritura o expresin en un lenguaje de aquello que anteriormente ha sido escrito o expresado en otro" (es
Jo que ocurre entre la protena y el ARNm). Respecto del trmino replicacin
del ADN, significa "copia que reproduce con exactitud el original" , que es lo
que hace el ADN cuando se duplica (cap. 17- 1).
Al definir al gen como una regin del ADN que genera un carcter fsico
heredable, se sugiere que cada gen da lugar a una sola clase de protena. Si
bien la mayora de los genes que producen ARNm se conduce de esa manera, algunos dan origen a poliprotenas, es decir, productos transitorios que se
escinden en varias protenas. cada una determinante de un rasgo singular.
I~NPpn (en ingls snRNP). Como se ver en el captulo 15-5, estas molculns desempean funciones salientes durante el procesamiento de los ARNm.
Los ARN pequeos nucleolares o ARNpno (en ingls snoRNA , por
\IIIOllnucleolar RNA) , que forman parte de unas ribonucleoprotenas llamaolas RNPpno. Como se ver en el captulo 15-8, estas molculas intervienen
n el procesamiento de los ARNr.
El ARN de inactivacin del cromosoma X o ARNxist (en ingls xistNNA , por X-inactiva/ion specific transcript RNA ), cuyas funciones se descriltc n en el captulo 14-12.
El ARN de la telomerasa o ARNte (en ingls teRNA , por te/amerase
/VA), que integra un complejo ribonucleoproteico cuyas funciones se anali/.!111 en el captulo 17-9.
Los microARN o miARN (en ingls microRNA o miRNA ), cuyas proba! d s funciones se analizan en el captulo 23-44.
llt~ <llt;
....------.....
IC!n
ADN
.....__.....
Tmnscrlpc/n
ARN
Traduccin
Protefna
lt'iJ~ 1 ~~~.
Flu jo dt iul'o111111
240
dos nucleicos (ADN, ARN) como las protenas son molculas formadas por
secuencias de monmeros (nucletidos en los cidos nucleicos y aminocidos en las protenas) dispuestos en lnea.
El sistema de cdigos se basa en la disposicin ordenada de los nucletidos en el ADN, los cuales determinan el ordenamiento de los nucletidos en
el ARN. A su turno, los nucletidos del ARNm determinan el ordenamiento
de Jos aminocidos en la protena (fig. 13-2).
Debido a que en el proceso de transmisin de la informacin gentica cada nucletido est representado por una letra (A, G, e o Ten el ADN; A, G,
e o U en el ARN), el alfabeto contenido en las molculas de ADN o de ARN
-al poseer cuatro letras solamente- no es suficiente para simbolizar a los
20 tipos de aminocidos que pueden hallarse en una protena.
Las clulas resuelven el problema utilizando grupos de tres nucletidos
-en distintas combinaciones- para codificar a cada aminocido. Estos tripletes de nucletidos se denominan codones. Dado que hay 4 tipos de nucletidos, el nmero de tripletes posible, es decir, de codones, es de 64 (4 3 = 64).
El conjunto de 64 codones lleva el nombre de cdigo gentico (fig. 13-4).
eys
eys
Term.
Trp
CAU His
CAC : His
CAA Gln
eAG Gln
CG (J
CGC
CGA
eGG
Arg
Arg
Arg
Arg
Thr
Thr
Thr
Thr
AAU
AA e
AAA
AAG
Asn
Asn
Lys
Lys
AGU
AGe
AGA
AGG
Ser
Ser
Arg
Arg
Ala
Ala
Ala
Ala
GAU
GAe
GAA
GAG
Asp
Asp
GGU
GGe
GGA
GGG
Gly
Gly
Gly
Gly
Phe
Phe
Le u
Le u
u eu
uec
UeA
UeG
Ser
Ser
Ser
Ser
UA U
UAe
UAA
UAG
e uu
cuc
CUA
CUG
Le u
Le u
Le u
Le u
ccu
ccc
CCA
eeG
Pro
Pro
Pro
Pro
AUU
AUe
AUA
AUG
lle
lle
lle
Met
AeU
Aee.
AeA
AeG
GUU
GUC
GUA
GUG
Val
Val
Val
Val
GeU
Gee
GeA
GCG
-G
Tyr
Tyr
Term.
Term.
Glu
Glu
'"' se localizan lejos del codificador. Existen dos tipos de reguladores, los
rullplificadores y Jos inhibidores. Los primeros son ms numerosos y, por
<!lo. Jos ms estudiados.
Cada gen posee una combinacin particular de varios amplificadores y vados inhibidores. Algunas secuencias ampliftcadoras e inhibidoras se repiten
''" genes diferentes, pero nunca dos genes distintos poseen una misma com,.,,acin de esas secuencias reguladoras. Se ha comprobado que cuando se
1li11oina una secuencia amplificadora de un gen, la velocidad de transcripcin
do ,:o ninuye. Opuestamente, cuando se elimina una secuencia inhibidora, la ve, "idad aumenta.
\) Finalmente, en las cercanas del extremo 3' del segmento codificador,
, 1 ~e n posee un tramo de ADN denominado secuencia de terminacin -no
,,.!Jc.: confundirse con el codn de terminacin del ARNm- que marca la
, , '"c lusin de la sntesis del ARN.
A continuacin analizaremos -separadamente- la composicin de los
r <'" s que codifican a Jos distintos tipos de ARN.
1 1 /. Es tructura de los genes que cod ifi can a los ARN mensajeros
1.a fi gura 13-5 muestra los distintos componentes de Jos genes que codifi' "" a los ARNm.
1.1promotor suele poseer dos elementos. La combinacin ms comn in' l11 yo las sec uencias llamadas TATA y C AAT, situadas cerca del codificador.
1 " '!lja TATA se locali;r.a unos 25 nucl etidos "corriente arriba" del primer
111 '' i<'Pi ido dr l .- odifi r :o. ~o r. l.:o r :oja C' AAT se loca li za en el mism o lado pero
1111 IH II 't l 11 1a,..; kjn.'-1 ., :t 1111 11' 4 / 'l llllt ' lt '!"ll idos, c s dvc.: ir, a 50 lii JC le(llidos de la s -
J',l"ll
t ' ll ;i ui :J.;
'l 't\'11\
Tercera.
base
G
UGU
UGC
UGA
UGG
uuu
uu e
UU A
.UUG
13- 5. Exist en 61 codones para cod ifica r a los 20 t ipos de aminoci dos
Dado que se utilizan 61 de los 64 codones para codificar a los 20 tipos de
aminocidos, la mayor parte de ellos pueden ser codificados por ms de un
codn, condicin que ha llevado a decir que existe una "degeneracin" en el
cdigo gentico. Los codones que codifican a un mismo aminocido se llaman "sinnimos". Solamente la metionina y el triptfano, que son los aminocidos menos comunes en las protenas, son especificados por un solo codn. Los tres codones que no codifican aminocidos (UAA, UGA y UAG)
tienen por mandato -una vez que la cadena polipeptdica ha incorporado el
ltimo aminocido- sealar la conclusin de la sntesis de la molcula proteica; reciben el nombre de codones de terminacin (fig. 13-4).
En esencia, las instrucciones del cdigo gentico emanadas del ADN consisten en una retahla de tripletes de nucletidos, cuya secuencia determina la
alineacin de los codones en el ARN, que son Jos que especifican el ordenamiento de Jos aminocidos en la protena.
Debido a que en la mayor parte de Jos transcriptos primarios existen tramos de nucletidos superfluos que se suprimen, stos -y por extensin los
del ADN- no estn representados en el ARN procesado ni en la molcula
proteica.
Exceptuando a Jos tramos superfluos, de lo mencionado hasta aqu se deduce que en cada serie ADN--7ARNprotena las unidades que integran estas
molculas (codones en el ADN y en el ARN, y aminocidos en la protena)
son colineales, ya que Jos codones del ADN se corresponden con los del
ARN y stos con Jos aminocidos de la protena.
Pr imera
base
241
u
e
A
G
1 ~
e
A
G
u
e
A
G
u
e
A
G
---
--
-=
-
242
CAAT
Exn 1
TATA
-75
'-...
REGULADOR
-25'
AG
18S
lntrn 2
Exn 2
lntrn 1
GT
5'
GT
3'
AG
5,8S
243
28S
5'
3'
PROMOTOR
CODIFICADO
f(
Los ribosomas estn formados por dos subunidades, cada una compues11 por ARN ribosmicos combinados con protenas. Los ARNr se identifi' 1111 teniendo en cuenta sus tamaos, expresados como coeficientes de sedi111ntacin (cap. 16-9). As, ex isten cuatro tipos de ARNr, llamados 288, 188,
~ .I!S y SS (fig. 15-9). Los tres primeros derivan de un transcripto primario coIIIIII denominado ARNr 4SS (fig. 15-9). Existen , por lo tanto, dos genes co.lllicadores de ARNr, el correspondiente al ARNr 45S (fi g. 13-7) y el que codll'ica al ARNr SS. Aqu nos ocuparemos del primero.
La clula posee alrededor de 200 copias del gen del ARNr 45S. Se locali/1111 en las constricciones secu ndarias de los cromosomas 13, 14, 15,21 y 22,
li 11adas en el nuclolo. En promedio, cada constriccin secundaria posee
1111:1s 20 copias del gen. Como se observa en la figura 13-7, las 20 copias del
11'11 se hallan alineadas en tndem, separadas entre s por segmentos de ADN
o'"ilmciadores que no se transcriben. En cada uno de estos espaciadores se .lo1 u li ~.an el regulador y la mayor parte del promotor. Veamos los elementos hallutlos en cada copia del gen (fig. 13-8):
Igual que los genes de los ARNm, e l promotor del gen del ARNr 45S se
'' uentra "corriente arriba" respecto del extremo 5' del segmento codifica, l<~r. Se trata de una secuencia de alrededor de 70 nucletidos, 20 de los cual, .,, son adems los 20 primeros nucletidos del sector codifi cador. Por lo tan'" Id da en direccin 5' ___.3', la ltima parte del promotor es la parte inicial
di'! segmento codificador.
1~ 1 regulador, que acta como amplificador, es una secuencia de alrededor
.,. 100 nucletidos. Est ubicado a unos 50 nucletidos "corriente arriba" del
l""lllotor, es decir, a unos 100 nucletidos del extremo 5' del segmento codiI !!' :Jdor.
H2A
11111';,/i, l ~::;o:,
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,, (( '". r(u dt \ M 1 Hh urHII y 1' Potn11111 , )
/WIIl'S
,
c:.J 3'
G'
1
Fi~.
244
13 LOS GENES
,..---~L PROMOTOR \
Fig. 13-9. Estruc tura general
del gen que codifica al ARN
ribosmco 5S.
f-------CODIFICADOR - - --
REGULADOR
---1
Del ge n del ARN SS existen - una tras otra- alrededor de 2.000 copias
separadas por tramos espacia dores de ADN. Todas las copias se localizan en
el extremo distal del brazo largo del cromosoma 1, de modo que no pertenecen al nuclolo.
Cada copia del gen posee dos secuencias especiales de nucle tidos que
constituyen el promotor, situadas e n el interior del segmento codificador, del
que tambin forman parte (fi g. 13-9). Debido a ello, las dos secue ncias del
promotor se transcJiben. Adem s posee una sec uencia situada "corrie nte arriba" del codificador - es decir, e n el espaciador precede nte- cuya funcin
parece ser reguladora.
La secuencia de terminacin , en el ex tremo 3' de cada copia, presenta varias T contiguas, como en el ge n del ARNr 45S.
13-11. Est ructura de los genes que cod ifican a los ARN pequeos
Exjsten mltipl es copias del gen del ARNpc, dispersas e n los cromosomas. Cada copia te ndra su propio promotor, apare nte mente en medio del
segmento codificador. Como se vio e n el captulo 12-7, el gen del ARNpc
posee una extensa homologa con el ADN repetitivo disperso de la familia
Al u.
La mayora de los ARNpn deri van de genes independientes que poseen un
promotor comp uesto por tres secuencias separadas, situadas "corriente arriba" respecto del segm ento codificador (fig. 13-1 1). La secuencia ms prxima al segme nto codificador es una caj a TATA, y las otras dos se identifican
con las siglas PSE (por p roximal sequence element) y OCT (por octamer se-
quence).
El resto de.los ARNpn y todos Jos ARNpno no derivan de genes convencionales sino de la informacin contenida en algunos intrones de los genes de
/
l ~slnu.: lllra H l'lll 'lil l
5'
_ _ _ ___. 3'
5'
13- 9. Estructura del gen que cod if ica al ARN ribosm ico SS
PROMOTOR
PROMOTOR \
.,,
)
' ~r
11 111 1! ,1\11( 11 1
~1
,(
OCT
PSE
TATA
...........CODIFICADOR--!
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ul:11 ion (lf' lrnnscripl chmguli<IIIIIIHII('flllillnllcut 1 /\SI ~II J.
, : H 1 1,
: :
246
11
14
248
249
5'
3'
,..--
,--
A
R
N
o-~-o1
Timina
1-
Adenina~O~H,
IHYH
HO
1
o - P-o-
Guanina 1 1
n
1
L---o
Cltosina~o~H,
HO-P-O-P-0-
o-
IH'HH
1
HO
OH
-o
o
11
0 <"1o
Adenlna 1 1
o-
o-
Uracilov. 0 ~H,
IH
H H
1 HO
OH
3
-o,
11
r Guanina~ 0 ~H,
Fig. 14-1. Unin fosfodister
entre los nuclelidos del
ARN duran te la transcripcin
del ADN.
P-O - P- O- P-0
0 <"
Citoslna 1
o-
o-
IH
HH
1 HO
"-
OH
3'
:acltlnlllt",
,..,
250
Regulador
, t' Otl
\u
ckJ
1\ I ~ N nt ,
Codificador
EaG
Promotor
251
lll s
Para alargar el ARNm, la ARN polimerasa II necesita dos factores adicioll!dcs, los factores de elongacin Sil (o TFIIS) y SIII (o elongina). El fac'' u Sil es una protena monomrica de 38 kDa. El factor SIII es un heterotr"'c;ro compuesto por las elonginas A, B y C, de 110 kDa, 18 kDa y 15 kDa,
,. spectivamente.
Se estima que durante la fase de alargamiento la ARN polimerasa II le
ur rcga a la molcula ele ARN unos 50 nucletidos por segundo.
Como se seal, en los genes que codifican ARNm an no se ha identifi, 11do la secuencia de nucletidos responsable de la terminacin de la trans' 11pcin (cap. 13-7).
1:1conjunto de transcriptos primarios de los ARNm se conoce como ARN
hd crogneo nuclear o ARNhn . Estos transcriptos no se encuentran libres en
' 1 uucleoplasma sino combinados con diversas protenas bsicas, las cuales
11' 1111en a los ARNm a medida que se sintetizan. El conjunto de transcriptos
1" 1111arios y las protenas asociadas lleva el nombre de r ibonucleoprotena
lwlcrognea nuclear o RNPhn . Se considera que las protenas actan como
lt npcronas que mantienen a los ARNm desplegados. Ello evita que se for,,,,." - en una misma molcula- apareamientos entre secuencias de nucle,dos complementarios.
1lcsde que se supo que en los organismos pluricelulares todas las clulas
mismo genoma, se ha planteado la necesidad de responder a este
o tl c'l'rogante: por qu en cada tipo celular ciertos genes son seleccionados
1"" a su transcripcin y no otros? La respuesta presenta varias facetas, cuyos
1' "'l enidos se desarrollan en distintos lugares del Libro. As, en el captulo 11
" una li za cmo responden las clulas al ser influidas por otras, y en las siI' ""'III Cs secciones de este captulo se describen los mecanismos moleculares
' 1'" ' ll evan a la diferenciacin celular. Finalmente, en los captulos 15, 16 y
' 1 :.,. agregan datos que completan el panorama.
1.1os 111ecanismos celulares que determinan qu protena ha de sintetizarse,
v 'n qu ca ntidad, operan en varios niveles, aunque los ms importantes son
l,r, '1"' <.: ontrolan la actividad transcripcional de los genes. No obstante, pue,; " pmdu t.: irse regulaciones despus de sintetizado el ARN, durante el pro' 1 l1111 ic- 111o del lranscriplo JI' iut:trin. Incluso ms tarde, mediante el control
do J , o xpntl:i <"i ,'>ll dcl i\ l' N11 1 11 1 ''"l'I IISIII:I o d(; SU SII J1L;l'ViV"lll;ia cu e! c'illl
1" :< (;en el
252
253
sol (fig. 13-1 ). Finalmente, en algunos casos las regulaciones ocun en durante la traduccin de los ARNm en protenas o a travs de la degradacin de las
segundas. El control de la actividad transcripcional de los genes se analizar
en las siguientes secciones de este captulo, y las regulaciones postranscripcionales se estudiarn en los captulos 15 y 16.
Es oportuno sealar que el ARN de aproximadamente la mitad de los
transcriptos primarios no completa su sntesis. Se ignora si esto se debe a la
existencia de alteraciones en los procesos de transcripcin o si se trata de un
mecanismo generalizado de regulacin de la actividad gnica que opera
abortando la transcripcin antes que la polimerasa II anibe a la seal de terminacin.
Se conocen muy pocos casos de regulacin gnica derivados de la conclusin prematura de la transcripcin. Como veremos, los mecanismos prevalecientes operan en el comienzo de la sntesis de los ARNm, ya que actan sobre las secuencias reguladoras de los genes. Estas secuencias son influidas
por factores de transcripcin especficos, que ingresan en el ncleo para activar o inhibir a los genes.
14-7. Los factores de transcripcin especficos desencadenan
o fren an la transcripcin del ADN
Recordemos que la polimerasa 11 por s misma no puede iniciar la transcripcin del segmento codificador del gen, pues tiene que ser activada por los
factores de transcripcin basales unidos al promotor. A su vez, esta unin depende de la activacin previa de las secuencias regul adoras por factores de
transcripcin especficos.
Como los factores de transcripcin basales son los mismos para casi todos los genes, se dice que son constitutivos. En cambio, los fac tores de
transcripcin especficos, al ser particulares para cada gen, se califica~
roo facultativos.
Aunque los factores de transcripcin especficos se cuentan por millares,
son m~cho menos numerosos que las secuencias reguladoras que tienen que
controlar. No obstante, logran la especificidad mediante la creacin de mltiples combinaciones entre ellos, lo cual aumenta el nmero de posibilidades
en forma extraordinaria. As, cada clase de clula elabora slo una seleccin
de esos factores, nada ms que los imprescindibles para crear las combinaciones capaces de regular sus propios genes. Debido a que cada gen suele tener varios amplificadores y varios inhibidores, dos o ms genes distintos
pueden poseer algunos reguladores comunes, aunque nunca la misma combinacin.
Una vez que los factores especficos se han unido a las secuencias reguladoras, cmo actan sobre el promotor? (recurdese que ambas partes del gen
suelen estar muy distanciadas). Simplemente, el gen se curva y forma una
horquilla, como muestra la fi gura 14-3. Obsrvese el modo como los factores especficos unidos a las secuencias reguladoras interactan con los factores basales situados en el promotor. Ello es posible porque los factores especficos cuentan con dos dominios, uno que se conecta con el ADN regulador
y otro que lo hace con los factores basales, ms precisamente, con las subunidades TAF del factor TFllD.
Cuando el complejo queda integrado, los factores basales activan a la
ARN polimerasa II y sta inicia la transcripcin de l gen. Por su parte. los factores especficos di sponen el nmero de polinlllntsus q1w una Iras o1r:1
h:u(lu ' llmhajo, locuul rq ula la t"illllidud dt !I I~N 111 'JIIt ' ilt' l"ulll kar{!,
11
n.
."le (k spun\11- di
lo111' I11d .
Fig. 14-4. Micrografa electrnica que muestra dos genes transcribindose. 35.000x .
(Cortesa de O. L. Miller y B.
R. Beatty.)
255
254
Los genes que producen ARNm a tan alta velocidad no son muchos, pues
la mayora se transcribe a un ritmo relati vamente moderado. Los ms lentos
inician una nueva transcripcin despus de concluir la anterior. En estos casos el gen se vera como un tronco con una sola rama -el ARNm-, cuya
longitud y posicin en el tronco dependeran del instante en que es tomada la
N--< A ~N H- N~ T }-H
N=<
}-N
teractuantes.
Originariamente se crey que los factores de transcripcin abran la doble
hlice del ADN y reconocan a los grupos qumicos que participan en la formacin de los puentes de hidrgeno entre las bases de Jos nucletidos. Esto
ha sido descartado. Si bien se confirm qu.e los factores de transcripcin reconocen al ADN de los promotores y de los regu ladores por sus bases, en
ellas identifican a grupos qum icos locali?..ados en la parte exterior de la doble hlice, a nivel de los surcos mayor y menor. All , sin necesidad de romper los puentes de hidrgeno, los aminocidos de los factores de transcripcin interactan con las bases y se unen a ellas.
14-1 O. Los factores de t ranscripcin se asocian a los regu ladores
y al promotor del gen a t ravs de ;'!tomos expuestos
en los surcos del AD N
Visto desde el surco mayor del ADN (fig. 2 4), cada par de nucletidos
-en las cuatro combinaciones posibles (A-T. T-A, G-C y C-G)- muestra un
tomo de oxgeno, uno de hidrgeno y uno de nitrgeno (fig. 14-5), que son
capaces de establecer uniones no covalentes (como puentes de hidrgeno)
con tomos de Jos aminocidos de los factores de transcripcin. En cada par
de bases esos tres tomos se presentan combinados de manera diferente. Por
ejemplo, el par A-T muestra la combinacin N~. y el parT-A, la combinacin 0 - H- N; como vemos, una es la imagen invertida (en espejo) de la
otra. Algo semejante ocurre con Jos pares G-C y C-G, en los cuales los tomos forman las combinaciones N-0-H y H-0-N, respectivamente.
La informacin c ifrada en el surco menor del ADN (fig. 2-4) es menos
ampli a que la del surco mayor, tal vez porque resulta estrecho para la entra
da de algunos ami nocidos.
Adems de estas asociaciones especficas, entre los factores de transcrip
cin y el ADN se producen uniones inespecfi cas; en una de ellas participa el
esqueleto de ..fosfatos del ADN y, si bien no le confiere especificidad a In
unin, la estabiliza.
Por lo general cada factor de transcripcin entabla unos 20 contactos cou
el ADN, lo que significa que aproximadamente 20 aminocidos inl l!racllau
con otros tantos pares de nuclctidos. sea en 1 promotor o n 1 r T Uiadm drl
n . Oado que las Lornhiu:rriours de pans de hn. rs :m nr rr~rlr ll (i\ T, T A. 1:
clm , 111111'. lf,()
()(JI) ( 1fl 1)
O. H- N
'r--(0N=<
SURCO MAYOR
YH
SURCO MENOR
H~
r H
H=<-0-H
N~~
N-{
)=N
SURCO MAYOR
o.. . H- N/
CH
SURCO MENOR
Hy NrlN" H.O')---{'CH
microfotografa.
SURCO MAYOR
SURCO MAYOR
NM-H
}-N
N-H .O
H~
H -N~y
N~
)=N
N - H O
O H - N
'\,
SURCO MENOR
SURCO MENOR
t' ll
256
la hlice lectora (llamada tambin hlice de reconocimiento) vara en los distintos factores de transcripcin.
Cuando una hlice-vuelta-hlice est acompaada
por otra simlrica, entre ambas componen un dmero.
Las respectivas hlices de reconocimient9 se encajan
en sendos surcos del ADN, que corresponden a los dos
lados del palndromo.
Se han identificado estructuras hlice-vuelta-hlice
en diversos factores de transcripcin. Por ejemplo, en algunos factores involucrados en la formacin del plan corporal durante el desarrollo embrionario
(cap. 21-22), en los factores implicados en la diferenciacin de las clulas
musculares, etctera.
Cremallera de leucina. Consta de dos cadenas polipeptdicas dispuestas
en paralelo, ambas con forma de hlice. Cada cadena posee dos sectores, uno
que se une al ADN y otro que lo hace con su homlogo, con lo cual se forma
un dmero (fig. 14-7). Los sectores unidos entre s presentan, cada siete aminocidos -que corresponden a dos vueltas de la hlice-, una leucina que da
al interior del dmero. Estas leucinas se encastraran como los dientes de los
cierres relmpago, de ah el nombre de cremallera. Los sectores no dimerizados poseen una alta proporcin de aminocidos bsicos, que son los que generan la unin especfica del factor de transcripcin con el ADN.
Entre otros, poseen cremalleras de leucina los factores de transcripcin
que regulan la actividad de los protooncogenes myc, fos y jun (cap. 18-31).
Dedos de cinc. Cada dominio del factor de transcripcin est compuesto
por una secuencia de unos pocos aminocidos y un tomo de cinc, el cual se
liga tetradricamente a cuatro cistenas, o a dos c istenas y dos histidinas (fig.
14-8). Esos dominios se proyectan como dedos, cuyo nmero y secuencia de
aminocidos varan en los distintos factores de transcripcin. Adems, los dedos de cinc se asocian de a dos para formar dmeros.
Los dedos de cinc son las estmcturas ms difundidas entre los factores de
transcripcin. Se encuentran, por ejemplo, en los receptores citoslicos mencionados en el captulo 11-6. Estos ingresan en el ncleo y actan como factores de transcripcin especficos cuando se les unen las sustancias inductoras. Otro ejemplo corresponde al TFIIIA, uno de los factores de transcripcin
del ARNr 5$ (seccin 14- 16).
Hlice-bucle-hlice. Esta estrucl1tra tiene una configuracin dimrica
muy parecida a la cremallera de leucina, pues posee<!os cadenas polipeptdicas con dos sectores funcional es en cada una: el especlfu:o - reservado para
la unin del factor de transcripcin con el ADN- y el responsable de la dimerizacin (fig. 14-9). El primero es rico en aminocidos bsicos. Este diseo se diferencia de la cremallera porque sus partes dimerizadas no se encastran.
Tipcional en su ADN. Ello no implica que en la relativamente extendida eucromatina se produzca automtiamente la transcripcin, ya que en las clulas la mayor
parte de esa cromatina se halla inactiva pues se transcriben slo los genes que reciben el mandato de hacerlo
- va factores de transcripcin- , como se vio en la secin anterior.
Por otra parte, en el captulo 12-9 se dijo que algunos lazos de la fibra de
, romatina de 30 nm podran constituir verdaderas unidades de transcripcin,
de modo que cada gen abarcara el ADN perteneciente a un lazo.
Adems, en ese captulo se analiz el papel que desempean las histonas
en el enrollamiento de la cromatina. Aqu se ver cmo regulan la transcripin de los genes, sin olvidar que esa funcin requiere que el ADN est relativamente desenrollado y libre de molculas adosadas que puedan obstaculit.ar el contacto de la ARN polimerasa con el segmento codificador del gen.
Si bien se acepta que la cromatina de 10 nm es la ms apta para la transripcin (fig. 12-10), la ARN polimerasa no puede actuar si no se desenrollan
los tramos de ADN de los nucleosomas, al menos localmente y mientras du111 la transcripcin.
Se ha sugerido que los factores de transcripcin basales no slo activan al
promotor del gen sino tambin el desarmado de los nucleosomas en la parte
Inicial del segmento codificador, lo que permite la separacin local de las dos
<'lldenas del ADN para que la ARN polimerasa pueda comenzar la transcrip1'1 m. Al parecer, los factores de transcripcin actan directa o indirectamenll' sobre las histonas H4, que se modifican y desencadenan la remocin de las
ulrus histonas, comenzando por las H2A y las H2B.
Ms adelante, a medida que avanza por el segmento codificador del gen,
lu propia ARN polimerasa sera la responsable de desenrollar el ADN de los
nu<.:leosomas, los cuales se rearman conforme la enzima los deja atrs.
Diversos datos revelan que el grado de enrollamiento de la cromatina es
l<'gulado por el agregado o la remocin de gmpos acetilo, gmpos metilo y
111pos fosfato en las "colas" de las histonas, las cuales estn expuestas a esos
<'ll mbios porque se proyectan hacia fuera de los nucleosomas (cap. 12-9).
Por ejemplo, la acetilacin de algunas lisinas de la histonas H3 y H4 dis,duuye el enrollamiento de la cromatina, lo que favorece el acceso de los
l111'lOres de transcripcin basales al promotor del gen, con la consiguiente
1'" sta en marcha de la actividad gentica. En cambio, la desacetila cin provn~a el efecto contrario, ya que incrementa el enrollamiento de la cromati1111 y puede llegar a convertirla en heterocromatina. Debe sealarse que el
111 r gado y la remocin de los grupos acetilo son catalizados, respectiva" "' nle, por acetilasas y desacetilasas localizadas en la
111 1triz nuclear.
Respecto de la metilacin y la demetilacin, prodnl' '11 efectos opuestos a los de la acetilacin y la desa'' 'llnc in, respectivamente. As, el agregado de gmpos
1111 tilo a una de las lisinas de la histona H3 aumenta el
' l""llamiento de la cromatina, mientras que su remo, lun lo disminuye.
l'or 1ltimo. la fosforllacln y la desfosforilacin de
, 1111111 s ri11us y lr 'OII IIIW lnl'llli 'l llllns n la "cola" de la
l1 1u1111 111 111111hi 11 1""'""'' 11' 111''" opnC"stos a los de
l11 111'1 tllul'iou y In d1 "' 1111111 ,,.1, " 1'' l'tl vnutl'lll l'.
257
258
H..._ /H
N
tJ
N
Citosina
Fig. 14-10. Metilacin de la
citosina (obsrvese el grupo
C 3 H en la melilcitosina).
En sntesis, la acetilacin, la demetilacin y la desfosforilacin de distintas histonas disminuyen el enrollamiento de la cromatina y propician la actividad de
los genes. Contrariamente, la desacetilacin, la metilacin y la fosforilacin aumentan el enrollamiento y bloquean la actividad gentica.
Cabe sealar que en diversos tipos celulares los prode los genes contienen histonas que presentan
motores
Metilcitosina
-en lo re lativo a su nmero y distribucin- una
combinacin particular de esos cambios qumicos, lo que sugiere que algunas combinaciones estimulan y otras sile ncian la actividad de los genes. Ello
ha impulsado a los que trabaj an en este tema a darle el nombre de cdigo
h istnico al conj unto de tales combinaciones.
Debe agregarse que en los tipos celulares diferenciados que se di viden, las
clul as hijas heredan la misma heterocromatina de las clulas predecesoras,
lo cual se repite de generacin en generaci n (cap. 21-21). Esta estabilidad
de la heterocromatina se debe a que los factores que la causan se duplican en
las clulas prximas a dividirse y se reparten entre las clulas hijas.
En algunos casos la actividad gnica se inactiva y la cromatina se compacta debido a que intervienen causas adicionales a las citadas, como sucede en
el cromosoma X compactado de las clulas de la mujer, descrito en el captulo 12-11 con el nombre de cromatina sexual o cuerpo de Barr. Si bien el
cromosoma X se compacta y sus genes se inactivan debido a que se desacetilan sus histonas y se metila su ADN (esta metilacin se anali za en la seccin 14-13 y no debe ser confundida con la metilacin de las histonas), ambos cambios son precedidos por la activacin del gen Xist (por X-inactivation specific transcript), que como se vio en el captulo 13- 12 se localiza en
el propio cromosoma X, en una regin cercana al centrmero llamada Xic.
Cuando se activa, el gen Xist genera mltiples copias de un ARN especial denominado AR Nxist (cap. 13-2), las cuales , a partir del Xic, se unen al ADN
de los dos brazos del cromosoma X e inactivan a casi todos sus genes. Cabe
agregar que mediante tcnicas especiales las copias del ARNx ist aparecen en
forma de puntos a lo largo del cromosoma X compactado, lo que sugiere que
se asocian con protenas.
14-13. La mct ilacin del AD N inf luye sobre la actividad gniea
CH3
1
CG
GC
259
CH3
1
CG
GC
1
CH3
CH3
CG
GC
CH3
CG
GC
1
CH 3
260
5'
1<11 11 -racin de la impronta del mismo gen -la del alelo materno y la del ale-
588
1----1 1----1
Espaciador
no transcripto
Espaciador
transcripto
Espacln(hu
no tronoorlptn
Espaciadores
transcriptos
Fig. 14-13. En la parte superior de la figura se observa un extendido con once genes consecutivos del ARNr 4)S, "<'1"""""
por segmentos espaciadores que no se transcriben. En la parte media aparece uno de dichos genes con mayor
" ~ rlml
l :wu kc~ . l
nnn1 ~nto ,
(" 'pi,
261
262
263
La transcripci n de las JO a 100 copias de cada uno de los genes que codifican a los distintos ARNt (cap. 13- 10) es dirigida tambin por la enzima
ARN polimerasa lll, la cual requiere que se unan al promotor dos factores
de transcripcin, los recin nombrados TFIIIB y TFIIIC (fig. 14- 15).
Debido a la presencia de varias timi nas consecutivas e n el extremo 3' del
gen, la finalizacin de la sntesis de estos ARN es simil ar a la de los ARNr
45S y 5S.
l'uesto que las bacterias obtienen su ali mento d irecta mente del.medio en
'1'"' viven, los mecanismos que reg ulan la actividad de sus genes debe n adapliii iC rpidamente a los cambios en la calidad y cantidad de las molcu las
1ul11nentos) en dicho medio.
l l n buen ejemplo de control transcripcional lo proporcionan los genes de
111'1 ~:nzimas q ue mterv ienen cuando la bacteria Esche richia coli utiliza a la
lrtt'lom como alimento. La sntesis de estas enzimas puede aumentar hasta
1 11110 veces si se agrega lactosa al medio de cultivo. As , la disponibil idad de
"" sustrato esti mula la produccin de las enzimas que intervie nen en su deViildacin. Esta regulaci n - por induccin enzimtica- se cumple taml tl, " en el caso de las enzimas que degradan a otros azcares y a diversos
"" dnncidos y lpidos.
l .as tres enzimas necesarias para el aprovechamiento de la lactosa como
ll l111<.: nto son la ~-galactos idasa, la permeasa y la transacetilasa, cuya codifi' ill'ti n cotTesponde a una unidad gentica comn denominada opern lac
ul,.. 14- 16).
! In opern es un grupo de genes que se encuentran muy prximos entre s
~ '1" son regulados (activados o inhibidos) en forma conjunta por un operalur (o) Y un promotor (p). Adems suele intervenir un gen inhibidor (i),
'1 ' ~~' ~odifica a una protena denominada rep resor. Los genes se hallan en el
umcnto codificador y son transcriptos en un solo ARNm, que por eso re' n,,, la denominacin de ARN policistrnico. Esto explica por qu las protellltll derivadas de un opern se sintetizan en cantidades equivalentes.
Volviendo al oper n lac, su segmento codificad or posee tres genes - llallllldos z, y y a- , que codifican a las tres enzimas mencionadas. Es regulado
i"" 1 represor lac, un complejo proteico que posee cuatJo subunidades idnCod ificador
Al'lNm i
111111111111 1111111111111
ARNm lac
ll lllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllltiiiiiiiiiiiiJIIIIIIIlllllllllllllllll
Permeasa
11
tlnciO[IICIOOO
Tronr.ncoillnon
ml ,
pt riHlnsn y
264
ARN polimerasa
a--,
i :
*
o
lllllllllllllllllll/llllllllllllllllllllillllll!l831111111111111111111111111111llllllliiii1111111UIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIllllllllllllllllllllllllltlllllllllllllllllllllllllllllllll
265
tosa -y, por lo tanto, de la alolactosa- en el medio es espectacular. Mientras que en ausencia de lactosa la E. coli contiene en promedio slo tres mo16culas de P-galactosidasa, despus de la induccin del opern lac pasa a teHer unas 3.000 molculas, las cuales representan el 3% de sus protenas. Adelns esta adaptacin es muy rpida, ya que la mayora de los ARNm bacteriaIIOS, si bien se sintetizan a gran velocidad, tienen una vida media de unos po~o s minutos.
14-23. La AR N polimerasa se une al promot or cuando el represor
sa le del opera(lor
-------------------~
Fig. 14-17. Regulacin del opern lac en ausencia y en presencia de una sustancia inductora. En el primer caso el represor
lac -que es un tetrmero- se une al operador e interfiere la transcripcin de los genes. La unin simultnea de la ARN polimerasa con el promotor y del represor con el operador es imposible, ya que la enzima es incapaz de unirse al promotor cuando el represor ocupa el operador. En el segundo caso la sustancia inductora se une al represor y le produce un cambio confonnacional que impide su unin con el operador. De esta manera la ARN polimerasa queda en libertad y puede activar la
transcripcin de los genes. En la Escherichia coli la ARN polimerasa posee cinco subunidades: dos a. (de 40 kDa cada una),
dos~ (de 160 kDa cada una) y una cr (de 95 kDa). Advirtase que una vez iniciada la transcripcin la subunidad cr se libera
del complejo.
ticas de 40 k.Da, codificadas por el gen inhibidor (fig. 14-16). El represor lac
se une al operador, que est situado cerca del comienzo del gen z (de la p-galactosidasa).
Como se observa en la figura 14-17, la unin del represor lac al operador
impide la sntesis del ARNm policistrnico. El represor lac se une a una secuencia de 21 pares de bases del operador que tiene regiones con simetra doble (en palndromo), de modo que algunos sectores ubicados en el lado izquierdo se encuentran tambin en el lado derecho, pero en la cadena opuesta
y dispuestos "en espejo" (fig. 14-18).
Se han encontrado secuencias similares en los operadores de otros operones y en los reguladores de los genes de las clulas eucariotas (seccin 14-11).
Las secuencias simtricas representan sitios de reconocimiento para las distintas subunidades del represor.
14-2 2. La sustancia induct ora se une al re presor y ste sale
del opera dor
14- 24. La tra nscripcin de l opern lac est suj eta a un cont rol
positivo por part e del AMP ccli co
Ul tC UCCICIOICC CC II CCCIITIAAICICACifiCCI C ACIC I ITACCC A CCCClCCCIIT A C ICIITIICCttCCCCCf.CCJ.IJCT T ClCTC ~(rll CUIJIC I C I U CU.U C ICCtJTCJCCJT~
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e
, ,l:llillliiiHIIIi l lllll!lllliiii!IIJ iiJHIIi iii!IIIIIIIIIIIJ!III:IIil!lliillllllillllllllllllll :lllil ll!llillli!llilllllll ! llll~ ~n llli!/ll l i ll!ll:ll!lllll
ARNm Trp
Antranllato
sintetasa
Fosforribosil
antranilato
transferasa
Fosforribosll
antranilato
lsomerasa
Triptfano
sintetasa ll
Triptfano
slntetasa ll
Fig. 14-19. Regul"cin por represi n enzimtica de la actividad del opern Trp de la Escherichia coli. Cuando la cantidad de
triptfano es suficiente, el represor Trp inhibe al operador, por lo que se sus pe nde la sntesis del ARNm po licis trnico Trp que
codifica a las cinco e nzimas req ueridas para producir e l aminmlcido . .Debe agregarse q ue el represor es inducido por el propio
triptfano, que cuando se halla en exceso acta como correpresor. En cambio, cuando la bacteria es privada de triptfano, ste y el represor se separan del operador y se rean uda la sntesis del ARNm Trp. (De K. Bertrand y col. )
14- 25. La tran scri pcin del opern Tr p es regulada por dos
meca nismos
En la E. coli las cinco enzimas que se requieren para sintetizar el aminocido triptfano son codificadas por el opern Trp (fig. 14-19), cuya actividad es controlada por dos mecanismos, conocidos como represin enzimtica e interrupcin prematura de la transcripcin. Enseguida se ver que la actividad del opern Trp depende primordialmente de la concentracin del aminocido en la bacteria y que ambos mecanismos de control hacen que las cinco enzimas se produzcan slo cuando son necesarias.
En la represin enzimtica la sntesis del ARNm que codifica a esas enzimas es bloqueada cuando la concentracin del triptfano - es decir, del
producto de las enzimas- sobrepasa ciettos nivel es. Para ello, el represor
Trp derivado del gen inhibidor ingresa en el operador e impide que la ARN
polimerasa se una al promotor, lo cual detiene la transcripcin del gen y, por
ende, la produccin de las e nzi mas. Debe agregarse que para que el represor
ingrese en el operador se requiere que Jo active un correpresor, que en el
caso del opern Trp es el propio aminocido triptfano cuando se halla en
exceso.
La figura 14- 19 muestra cmo obra el opern Trp cuando e l triptfano
bacteriano es insuficiente. Obsrvese que el represor y el COITepresor se separan del operador, que la ARN polimerasa retorna al promotor y que el
ARNm que se .~enera dirige la produccin de las cinco enzimas necesarias
para sinteti zar el aminocido.
Debe sealarse que mediante el mecanismo de represin enzimtica la
bacteria controla tambin la sntes is de otros aminocidos y de las molculas
precursoras de los cidos nucleicos.
Como se dijo, la bacteria posee un mecanismo adicional para regular la
actividad del opern Trp, basado en la in terrupcin prematura d e la trans
cripcin. As, c uando la concentracin de triptfano supera ciertos niveles,
el opern Trp intyn umpe su transcripcin y genera un ARNm corto, incapaz
de producir las enzimas que se necesitan para sintetizar el aminocido. El
ARNm resulta corto porque su molcula forma un bucle que pone fin a la
transcripcin.
Opuestamente, cuando el Trp bacteriano se halla n cantidad insuri i nlr,
s hnt: l no se forma, la lrans -ript: i()n no M' int.-11 "'"1"' y se 1'\'lll'nt 1111
i\I~N JJJ ' '""'l'llo,
1
1
'\
\
.,---~----------
1
11
ADN "
~,
~~ , ,.
267
---------------------, \
1
1
X ~ Y --!.! Z
1
1
1
1
1
1
',
1
1
1
1
1
Enzimas
t
t
ARNm
__ ___Induccin
----- __ _.,
ADN
Represin
....-----------
_.. /
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15
Recibe el nombre de procesamiento del ARN el conjunto de modificaciones que experimentan los transcriptos primarios para convertirse e n ARN
funcionales.
Vimos que alg unos transcriptos primarios contienen tramos de ARN sin
~ ignificado funcional aparente, corno Jos intrones en el ARNm y los espaciadores en el ARNr 45S. Un episodio saliente del procesamiento del ARN es la
remocin de esos segmentos no utilizables. Pero los transcriptos primarios
experimentan otros cambios. Dado que son diferentes en los distintos tipos de
ARN, los estudiaremos separadamente en el ARNm, en los ARNr 45S y SS,
en los ARNt y en los ARN pequeos.
ADN
Fig. 15-1. Esquema de los genes que codifican ARN mensajeros. Se muestran los segmentos correspondientes al
regulador, el promotor y el
codificador, este ltimo con
sus exones e intrones. Obsrvense los cambios que experimenta el ARNm al cabo de l
procesamiento del transcripto
primario.
Intrn 2
Exn 3
Intrn 2
Exn 3
"
1
..
ranscnpc1on
Transcripto primario
Exn 1
Intrn 1
Exn 2
1 .
Procesam1ento
AA Nm
ca
Exn 1
Exn 2
Exn 3
Tradlcci6n
Poli A
270
Un1on
. - - - - tnfosfato
5'-5'
TH3
H,N~N>
H2 N_..l_NjlN
-------.
Cadena de
ARN
5'
~~CH
5' -0-P-0-P-0-P-0-C~H
11
11
11
5'
8ASE1
2
2 O
HO
OH
1
o-
271
1
o-
cap
1
o-
3'
O
1
7-meti\guanosina
O CH3
-o-P=O
1
o
1
5'~0~BASE2
F ig. 15-2. Formacin y estructura qumica del cap (capuchn) en el extremo S' del
ARNm. Puede observarse
que la 7-meti\guanosina se liga al primer nuclctido del
ARNm mediante una unin
5'-5' tri fosfato.
H.
o
1
-o-P=O
1
o
5'
cap
ARN adicional
OH
AON ::::::::::::::~-=======~A~A~T~A~A~A~~~==========~--==============~~======
Seal de poliadenilacin
-Direccin de la transcripcin---+
, /, r/\ '(1 .' :<" " ' " ' ' '" '
1" 11
;\I ~N 111
hl
272
1lplo
11111 11111 11 ,
YNYl ii1AY
1 Mo\11 1
11111 1'111
(H),
Punto de
corte 3'
3'!5'
AC (
273
5'-f.__ _ _ _.;:;;
G,_;JG::..__ _ _-.J... 3'
Exn 1
Exn 2
274
,en de la
o;EIIcitonina
y el eGRP
5'
eatcitonina
A
3'
Transcripcin
~
franscripto
primario
5'
3'
275
EN LA TIROIDES
ARNm
s----1
ealcitonina
A
Procesamiento
~ 3'
EN El HIPOTALAMO
5' - 1
1
A
Traduccin
Prehormonas
H2N - - l
eatcitonina
11
~3'
11111'11 11
eGRP
Traduccin
se conocen tambin como protenas SR (la figura 2-25 informa que esos
aminocidos se identifican con las letras S y R, respectivamente).
Un fenmeno singular se observa en las clu las para foli culares de la tiroides y en un tipo de neuronas del hipotlamo, puesto que ambas producen, entre otros, un transcripto primario prcticamente idntico (fig. 15-8). No obstante, segn la clula, los lugares del transcripto en que se producen los cortes y empalmes varan, de modo que en ambas clulas determinados exones
son removidos, pero no los mismos. Como resu ltado, en las clulas parafoliculares de la tiroides se produce el ARNm de la hormona calcitonina y en las
neuronas hipotalmicas el ARNm de la protena CGRP (por calcitonin generelated product) .
Contr ol de la salida d e los ARNm al citoplasma. Se ha postulado, aunque no probado, que ciertos ARNm no pasan al citoplasma porque son degradados selectivamente en el ncleo, o porque - selectivamente tambin- se
halla impedida su salida por los poros de la envoltura nuclear. Este mecanismo regulatorio se producira en las clulas cuyos citoplasmas finalmente no
requieren de tales ARNm a pesar de haberse sintetizado.
pos llll'tilo se
Fig. 15-S. Proce samiento alternativo del rranscripto primario del gen de la calcitonina y la pro1ena CGRP. Se sintetiza uno u otro producto seg n el tipo celular implicado.
(De S. Amara y col.)
276
277
3'
45S
20S
5,8S
18S
32S
!
28S
ARNr 18S. Algo semejante ocurre con el ARNr 28S, al que se le unen 74 grupos metilo. Igual que la metilacin del ARNm (seccin lS-6), es posible que
en el ARNr 4SS los grupos metilo tengan por funcin proteger a los sectores
utilizables del transcripto primario.
El procesamiento del ARNr 4SS incluye la formacin de las dos subunidades del ribosoma -la mayor y la menor- , cuya composicin se describe
en el captulo 16-9 (fig. 16-S). Para ello, los ARNr 28S, l8S y 5,8S (ms el
ARNr SS) se ensamblan con varias protenas. En este proceso intervienen
tres RNPpno (cap. 13-2) llamadas U3, U8 y U22. Se sabe que algunas protenas ribosmicas se asocian al ARNr 45S mientras ste se sinteliza, es decir, antes de ser cortado y de ser separados sus tres componentes.
Los ARNr desarrollan asas en varios puntos de sus molculas (fig. IS-11).
Ello asegura el establecimiento de sus configuraciones tridimensionales normales, lo cual es imprescindible para que las protenas ribosmicas se ensamblen correctamente. Las asas se forman porque los ARNr contienen secuencias de nucletidos complementarios que se aparean entre s (fig. 1S-ll).
Debe agregarse que los tramos apareados forman dobles hlices similares a
la del ADN.
Finalmente, un grupo especial de RNPpno hace que algunas A, C, G y U
se conviet1an en nucletidos inusuales. As, varias A, C y G se metilan ----es
decir, se transforman en mA, mC y mG- y una parte de las U se convierten
en seudouridinas ( IJI).
La enorme cantidad de ribosomas que necesita la clula es abastecida hol
gadamente por las 200 copias del gen del ARNr 4SS (y por las 2.000 copias
del gen del ARNr SS). Adems, la sntesis del ARNr 4SS se realiza a una ve
locidad constante, lo que sugiere la existencia de una baja regulacin transcripcional. En efecto, se ha comprobado que el nmero de ribosomas que la
clula construye es regulado principalmente mediante el control del procesamiento del ARNr 4SS.
15- 9. La sntesis y el procesamiento del ARNr 455 t ienen lugar
en el nuclolo
aisludttll
lll l i/J 1
1111 111,
!f!H
J'l ' ll ,
ulr u na.
1 'omo se indic en el captulo 13-8, las 200 copias del gen del ARNr 45S
' 11111 distribuidas en las constricciones secundarias de los cromosomas 13,
1 l. 15. 21 y 22 (figs. 12-1S y 12-16). Dada la condicin diploide de los cro'""',olnas, hay lO de esas constricciones, por lo que existen en promedio 20
' '1 1111s del gen en cada una. Los tramos de ADN en que se hallan esos genes
' 1111111an como asas de las constricciones secundarias y en torno de ellas se
111111ruye el nuclolo. Cada asa -y, por consiguiente, las copias del gen con'' 1111las en ella- representa una unidad llamada organizador nucleolar. El
'""'o1no del nuclolo vara con la necesidad de la clula de generar ribosomas.
1 ' vnriacin depende de la regin granular, que se expande o se retrae segn
' 1 ' '''no con que se procesan las subunidades ribosmicas.
< '11ando estas subunidades estn por terminar su procesamiento, abando'""' ol nuclolo y pasan al citosol. Salen del ncleo por los poros de la cario' ' ' 11 Como el dimetro de las subunidades supera el dimetro de Jos poros,
tl1 " ' l"'"lucirse un cambio conformacional en una de las dos estructuras -o
' 11 '" ""liS- para que el pasaje pueda concretarse.
1 1 pt oc samienlo de las sllhllttidadcs ribosmicas se completa en el cito11 111 ' Hilo vila la fotoiiiH in11 oh 1 ihosomas omplelos en el nudcoplasma
1 l t ur o de qut i ll ' '-l ltll ! lO 1 ' ' l'1td1 f tllPI ~ 11 tl irHt tin 1 ft-ltiit' kt),
278
279
Una vez que los ARNpn terminan de sintetizarse, los nucletidos compleII IL:ntarios de sus propias molculas se aparean entre s (fig. 15-5). Luego los
t\ RNpn salen al citosol, se trimetilan en el extremo 5' y se combinan con un
,omplejo de siete protenas denominadas Sm (por small protein), que tiene
lorma de anillo y es igual para todos los ARNpn. Finalmente, los ARNpn unidos a las S m retornan al ncleo y se asocian con otras protenas, esta vez eswcficas para cada tipo de ARNpn. Debe sealarse que lo descrito hasta aqu
V11le slo para los ARNpn que intervienen en los cortes y empalmes de los
t\ RNm, pues del procesamiento de los restantes se conoce poco; por ejemplo,
que la trimetilacin del extremo 5' de algunos de estos ARNpn no ocu1Te en
,. citosol sino en el ncleo.
Antes de sa lir del ncleo, el ARNpc experimenta los siguie ntes cambios:
1) varias secuencias complementarias de su molcula se aparean entre s;
') se asocia con seis protenas diferentes, lo que da lugar al complejo nucleol" oteico P RS (cap. 7- 12). En la figura 7 -1 0 se indican los pesos moleculares
tlt las seis protenas y se muestra cmo se asocian con el ARNpc y entre s.
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(.?000) 'J'hc t' iho~otnl"' i, n liho/,y lllt', S ic n<.;C
' H'IIl /H
lt ~ LI I It ll
11
lt
( ) 4JK I)
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pt d llt , ,U N /\
... :
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280
285: 1685.
V 111111 qth
IIII IIH 't' , (' !/ Jit' t ' fiii ' JI II JI'<II h' l l lllllt lt ; ll ,
16
282
Fig. 16-1. Los dibujos ilustran cuatro de los seis codones que codifican al aminocido le uc ina (Leu). Los dos
de la izquierda se aparean con
un mi smo anticodn, igual
plemcnturia.
uu uu
Le u
GAG
cu c
5' ~ 3'
Le u
Le u
OAU
CUA
GA U
CU G
5' ~ 3 '
5'~ 3'
GAG
c uu
5' ~ 3'
ARNm
, 1, 11
I I AA
lu:.
ll
,,... h''''''''" 1 nt
1111 ~ ~~1
I! I H 11 111
5'
Le u
"'G
AUG
UGA
'-----v------'
283
3'
AAAA
cap
Protena
1G-4. Los am inocidos se ligan por medio de un iones peptid icas
L a unitJ de los ami nocidos entre s para construir una protena se produce de modo que el grupo carboxilo de un aminocido se combina con el
: ~:upo ami no del aminocido sig uiente, con prdida de una molcula de H 2 0
(1 1g. 2-26). En e l captulo 2-8 vi mos que esa combinacin se llama unin
pcptdica.
Cualquiera q ue sea su longitud, la protena mantiene el carcter anfotride los aminocidos aislados. ya que contiene un grupo am i no li bre en uno
d sus extremos y un grupo carboxilo en el o tro extremo. La protena se sinId iza a partir del extremo que lleva el grupo arnino libre. Ello se conespon' 1<' con la direccin 5' - >3' usada para la traduccin del ARNm, la misma con
que el ADN se transcribe (fig. 16-9).
1'"
Antes de describir los procesos que dan lugar a la sntesis de las protenas,
ll ll:tilzaremos cmo arriban los ARNm al citoplasma, qu configuracin po~r .-n los ARNt y cul es la estructura de los ribosomas.
~ 11 11 / 111 111,
d 11111 l1'j
ll, lf, A lf f,
l 11
l u 1,,
IIHI
il llll
yn
tpld d t 1111,
284
,
5
ARNm -
Codn
U U
3,
e-+
A G
Anticodn
y
A
me
'!' - - A
me-G
Asa anticodn
U-A
Asa variable G
mG
G-e
A G-e
mG
U me
AsaT
A G G
GAG
1 1 1 1
mG
A
G
U
A-U
A-U
U-A
U
G
Asa O
El aminocido se liga a su correspondiente ARNt por la accin de una ent ima llamada aminoacii-ARNt sintetasa, que cata! iza la unin en dos pasos.
Durante el primero, el aminocido se liga a un AMP, con el cual forma un
uminoacil-AMP. Por ejemplo, leucinil-AMP, lisinil-AMP, fenilalanii-AMP,
ncclionii-AMP, etc. Dado que el AMP deriva de la hidrlisis de un ATP, se lilwra un pirofosfato (PP) y energa, que tambin pasa al aminoacil-AMP.
A G 0
aminoacil
1 1 1 1 1
mA
U
e-G
G-e
e - G 5'
AA+ ATP
@ Extremo aceptador
3'0)
ARNt es alinear a los aminocidos s iguiendo el orden marcado por los cadones del ARNm.
A fin de ejercer sus funciones, los ARNt adquieren una forma caracterstica, primero parecida a una hoja de trbol y luego a la letra L. Como muestran las figuras 16-3 y 16-4, los cuatro brazos de la hoj a de trbol se generan porque los ARNt poseen cuatro pares de secuencias complementarias
- de 3 a 6 nucletidos cada una- que se aparean como lo hacen las dos cadenas del ADN.
Los extremos 5' y 3' de los ARNt se hal lan juntos en la punta de uno de
los brazos, la cual recibe el nombre de extrem o acepta dor debido a que
acoge al aminocido. Este se conecta con el ltimo nucletido del extremo
3' del ARNt, es decir, con la adenina del trinucletido CCA formado durante el procesamiento (cap. 15-ll ) (fig. 16-4).
Los otros brazos de la hoja de trbol presentan en sus partes distales secuencias de 7 a 8 nucletidos no apareados, con forma de asas, cuyas denominaciones derivan de los nucletidos que las caracterizan. Una de ellas, debido a que posee el trinucletido T\JC, se conoce como asa T (en el captulo 15-11 se dijo que la letra T simboliza a la ribotimidina y la 'V a la seudouridina). Otra, e n virtud de que contiene dihidrouridinas (stas se identifican
con la letra D) se denomina asa D . La tercera contiene el triplete de nucletidos del anticodn, por lo que se llama asa anticod n (obviamente, su composicin vara en los distintos tipos de ARNt).
Existe un asa adicional entre el asa T y el asa anticodn. 1 chido a que su
longitud difiere en cada tipo tle ARNt, n.:t:i bc e l lllllllhr dr IIHI! vnrhlbh;.
E l pi ga111i nlo ulll'rinr ck los Al~ NI han qnc ck jc- udc 1"' " '''' '""' a 111111
hojll dt ladol y : ulqn i t ~ll lll l.a lu1111 . 1 ti 1!1 lt\l ttl 1.. S1 d h1 H t H l d 1'111\ll 'i 1111
sintetasa
AA-AMP+ PP
En el segundo paso esa energa es utilizada por la arninoacil-ARNt sintelusa para transferir el aminocido del aminoacil-AMP a la A del extremo
ur ptador del ARNt compatible, con lo cual se forma una molcula esencial
p01ra Ja sntesis proteica: el aminoacii-ARNtAA que reconoce al codn complementario en el ARNm (fig .!6-4).
285
aminoacil
AA-AMP + ARNt
sintetasa
AA-ARNtAA + AMP
Debe sealarse que la energa del ATP usada en la primera reaccin quedu depositada en la unin qumica entre el aminocido y la A del trinuclelccloCCA.
l li- 8. Existen 20 aminoaci- ARNt sintetasas dif erentes
La clula posee 20 aminoacil-ARNt sintetasas diferentes, cada una dise11uda para reconocer a un aminocido y al ARNt compatible con l. Ambos
,,onocimientos permiten que cada uno de los 31 tipos de ARNt se ligue s., 11 uno de Jos 20 aminocidos usados en la sntesis proteica. Ello es posible
1" crq ue cada aminoacil-ARNt sintetasa identifica al ARNt por el anticodn, la
cric ms especfica del ARNt (fig. 16-3). No obstante, en los ARNt existen
1 as seales que son reconocidas por la enzima, generalmente tramos de nu' ld clidos cercanos al anticodn.
f\111'1'
~ 1111 1
()
(t
f
1 Xh1111 111
)
/ II I!JIII1du
xtromo
fi(;Ollllrlor
e lllll't 'flldo
lu nd nlnll
286
33 protenas diferentes
287
50 protenas diferentes
Subunidad menor
ARNr5,8S
ARNr 28S
ARNr 18S
ARNr 5S
Subunidad mayor
Subunidad
mayor
Subunidad
menor
NH2
'l" t: migra ms rpidamente hacia el fo ndo del tubo por accin de la fuerza
,,ntrfuga. Juntas, las subunidades 40S y 60S forman la unidad 80S, que representa al ribosoma completo (los nmeros no se adicionan debido a que los
<~eficientes de sedimentacin, si bien se re lacionan, no equivalen a los pesos
dv las partculas).
<
Ribo soma
Como es obvio, la existencia de ll clases de ARNt en exceso -o redundantes- hace que algunos aminocidos sean reconocidos por ms de un
ARNt.
Uno de los ARNt redundantes es el llamado ARNt iniciado o ARNt[i],
pues transporta a la metionina destinada exclusivamente al codn AUG de
iniciacin (fig. 16-9). Es muy probable que cerca de ese codn existan seales que diferencien al metionil-ARNt[i]M -portador de la metionina dirigida a l- de los metionii-ARNtM"' comunes, portadores de las metioninas
destinadas a los restantes codones AUG del ARNm.
l; lii:I S qll l ' St' :ut;Jii '/.; 111 , l' S d tT il'. ;laS Vt'ltll,.' id :l(h ' -1 t ' t!lltp 'w ',t dill ll'llf l tllt ' ll l iiHi tl
.t nlldlt :tt 't 'llllilu rn d., . A ~. r tk l.1 . d"' ~ t tl'll l ll tl. ldt
1.a subunidad mayor es tambin muy inegular. De una de sus caras -la
' li"' se relaciona con el canal y los sitios A, P y E de la subu nidad menor""''l' un tnel diseado para que la protena salga del ribosoma a medida que
,. intctiza (fig. 16-6).
111 111
dt'
111111 {t l qt
1 J I)
t: 1111
d t
111111
288
289
-. o
COOH
NH2
NH2
NH2
/
NH2
ARNm.
De inmediato la subunidad menor se desliza por el ARNm y detecta al coAUG de iniciacin, que se coloca en el sitio P. Como es lgico, el segundo codn del ARNm queda colocado al lado, es decir, en el sitio A.
Entre tanto, el metionil-ARNt[i]Mct, ubicado en el sitio P de la subunidad
111enor, se une al codn AUG de iniciacin mediante su anticodn CAU
(UAC). El acoplamiento correcto entre estos dos tripletes es imprescindible
para asegurar el encuadre normal de los siguientes codones del ARNm en los
sit ios E, P y A de la subunidad menor del ribosoma.
La etapa de iniciacin concluye cuando la subunidad mayor se une a la
subunidad menor y se forma el ribosoma. En l se encuentran los dos primeros codones del ARNm: en el sitio P, el codn AUG de iniciaci n - unido al
IIICtionil-ARNt[i]Mc<_ y en el sitio A , el codn que le sigue.
La unin entre s de las dos subunidades ribosmicas se produce a instanr as del factor IF-5, q ue acta despus que se desprenden los factores IF-2
IF-3 .
La etapa de iniciacin de la sntesis proteica es regulada por protenas citoslicas denominadas factores de iniciacin (IF), que provocan dos hechos
separados pero concurrentes, uno en el extremo 5' del ARNm y otro en la
subunidad menor del ribosoma.
El primero involucra al cap y a una secuencia de nucletidos aledaa, localizada entre el cap y el codn de iniciacin (seccin 16-5). Estas partes del
ARNm son reconocidas por el factor IF-4, que se liga a ellas si al ARNm se
le ha unido la protena CBP (seccin 16-5). La conexin del IF-4 con el
ARNm insume energa, que es provista por un ATP.
En el segundo, el metionil-ARNt[i]Mc<se coloca en el sitio P de la subunidad menor del ribosoma. Esta reaccin requiere el factor IF-2 y gasta la energa de un GTP.
l .o~1 ;u lo~ illllho~ a ontlic ionamienlos, otro factor de i11ir ia,i6 11, l'l 11<'-.\,
,.,1111 ny ud.<d l ll ' rf ,ulo acl ex lrl'lllll . 'dl' l AI<N111 ''",""la <'!llll ck la ;;11h
tll dt l l td 111 1 llltl ,,, l tdllt'tl lll !tttH ' )liH'l' h ollln, r:.. , . y A
<1 (.10
290
INICIACION
ALARGAMIENTO
3'
5'
CCUG
b60l;A.
'-.,--'
(Term.)
3'
rrrn
AA AAA
Poli A
5'
1 J
UG
3'
rrrn
A AA AA
TERMINACION
3'
rr-r-r-1
AA AAA
teica en el ribosoma.
rige a la salida del ribosoma, In qu dclt'nllinn l l'in 1il'l s.tnndo pisodiP dtl
:d:u :un it'lll o d la 111oldua.
3'
CCUG
3'
~T
291
5' .
1"
' . ttlllinocidos.
1"
' li ''"' do la ru ptura de la unin qum ica entre el ARNt ubicado en el sitio E y
111 oli11n ido . En la seccin 16-7 se dijo que al formarse cada aminoacilI<NIM, l:1 1111i6n del ami noc ido con el extremo aceptador del ARNt - ms
l" ' ' "'""'t' llk 1:011 su 1 l1inoa adcnina- consume la energa suministrada por
"" \ 11' l'111 l" ' '"''" l:1 r1 wrfa q u np l a la suhunidau mayor uclribosoma
11
)111 11 '''''' .1
11 1dc
lo. ! ll lllllc. H ' i d ~~ . l" :q uJ I :ul:t, \' 11 1il i11 1:1 insl :llll..' i:l , por s A'I'P.
de l.! i ' III ' I J' Id cp11 , ' J'tl'.111po1 ':tdrt !ll llill tt!ll ' iclil cprv "1\' i lll 'tllfll l
11 ltt
1 1 1 111 11 1 JIIH i t 1! 11 1 i ' ll l tll ll ll h ltlll lllllt , ll,lcjlll ' J ld t l !c , p , jl ltlll ' lt 'lll " 1111p1C H 'I" ,II
3'
j
292
muy costoso, ya que se requiere no slo el ATP recin mencionado sino tambin los dos GTP citados con anterioridad: el que se consume en el sitio A para que el aminoacil-ARNtAA se conecte con el ARNm y el que se gasta en la
translocacin.
Como se dijo, con cada translocacin el ribosoma se aleja del extremo 5'
del ARNm y se acerca al extremo 3'. Cabe agregar que cuando el ribosoma
se halla a unos 30 codones del codn de iniciacin, ste es abordado por un
segundo ribosoma y comienza la sntesis de una nueva copia de la protena.
Puesto que ello se repite muchas veces, al cabo de un tiempo se encuentran
mltiples ribosomas a lo largo de todo el ARNm, separados entre s por perodos de 30 codones (figs. 1-10,7-4, 7-6, 16-7 y 16-8). En la seccin 16-11
se dijo que esa asociacin recibe el nombre de polirribosoma.
1G-14. La sntesis proteica concluye cuando el ribosoma alcanza
e l codn de terminacin
La etapa de terminacin de la sntesis proteica es regulada por factores
de terminacin -identificados con la sigla eRF (por eukaryotic releasing
factor)- y tiene lugar tras la ltima translocacin, es decir, cuando el codn
de terminacin del ARNm (UAA, UGA o UAG, indistintamente) llega al sitio A del ribosoma. Debido a que ello deja al sitio A sin el esperado arninoacil-ARNtAA, lo ocupa el factor eRF-1, que es capaz de reconocer a los tres
codones de terminacin (fig. 16-9).
Ante la ausencia de un nuevo aminoacii-ARNtAA, el polipptido del peptidil-ARNt -ubicado en el sitio P- se desliga del ltimo ARNt y se independiza del ARNm y del ribosoma. El desprendimiento del polipptido depende del factor eRF-3. Adems requiere energa, que es tomada de un GTP.
De inmediato las subunidades menor y mayor del ribosoma se separan del
ARNm. En el citosol integran un fondo comn que abastece de subunidades
ribosmicas para la formacin de nuevos ribosomas en el mismo ARNm o en
otros que se estn traduciendo o que van a comenzar a hacerlo (fig. 16-8).
El nmero de ribosomas en el polirribosoma, es decir, la suma de sitios en
los que tiene lugar la sntesis de una protena, se mantiene en forma relativamente constante. Es que cuando un ribosoma abandona el extremo 3' del
ARNm, se ensambla otro en el extremo 5' (fig. 16-8).
Como se ver en las secciones 16-20 y 16-21, esta sntesis continuada de
una protena a partir de un mismo ARNm -por el trabajo simultneo de varios ribosomas- es interrumpida, en el momento que corresponde, por la accin de factores reguladores.
16-15. Dos temas mdicos vinculados con la actividad
de los ribosomas
Al ser invadidas por bacterias, las clulas de algunos organismos inferiores elaboran sustancias llamadas antibiticos para defenderse de la infeccin. En muchos casos Jos antibiticos logran sus objetivos interfiriendo la
sntesis proteica en los ribosomas de las bacterias, lo que las mata. Por ejemplo, el cJranfenicol impide las uniones peptdicas, la tetraciclina no permite que los aminoacil-ARNtAA ingresen en el sitio A, la kirromicina inhibe la
actividad de los factores de elongacin, la estreptomicina afecta el inicio de
la traduccin y distorsiona la fidelidad de la sntesis, la eritromicina bloquea
la translocacin del ARNm y la puromicina usurpa el sitio A del rihosoma,
de modo que la cadena peptfdica se liga al antihi6ti o y 1,10 11 1111 :utti11oucil
Al~NtM, lo qu intcrrump s tt sfnttsis.
nt
1l)- 17. Las protenas emanadas de los ribosomas portan seales que
293
294
-oorr--
295
AAA A
n - - - - Aconitasa
Hierro insuliciente cap
~AUG-------------AAAA
En los dos captulos anteriores se seal que los mecanismos de regulacin ms amplios para decidir qu protenas debe sintetizar la clula operan
a nivel de la transcripcin del ADN y del procesamiento del ARNm.
Aunque menos general izadas, despus que e l ARNm sale al citoplasma se
producen otras regulaciones, ahora para controlar el tiempo y el ritmo de produccin de las protenas y para decidir cundo y a qu velocidad deben degradarse.
16- 20. Existen mecan ismos generales y especficos que regulan
el t iempo y el r itmo de produccin de las protenas
/\s pues, cuando la cantidad de hierro cae, una protena llamada aconitasa o
I RF (por iron responding fa ctor) se une a la secuencia no traducible del extremo 5' del ARNm de la ferritina y bloquea su traduccin. Ello se debe a que
In aconitasa dobla al ARNm y le forma un bucle (fig . 16-1 0), lo cual imped' fa la acc in del IF-4 y, por lo tanto, e l comienzo de la traduccin.
16-21. La degradacin de los ARNm suele ser regulada por factores
que actan en el extremo 3' de sus moleculas
Otra estrategia util izada por la clula para controlar la cantidad de protelta que ha de sintetizar opera sobre la supervivencia de los ARNm en el cito,ol. Los mecanismos que regulan la degradacin de los ARNm son muy va' iados. En la mayorfa de los casos se relacionan con secuencias de nucletidos cercanas al extremo 3' de los ARNm, loca lizadas entre el codn de terltti nacin y la poli A (seccin 16-5). En cambio, en algunos ARNm se vinculun con secuencias cercanas al extremo 5' . Finalmente, en otros ARNm, si
hicn no se han precisado las sec uencias responsables de la degradacin, se
'<lllocen las sustancias que las inducen. Analizaremos algunos ejemplos de
vstos mecanismos, comenzando por el planteado en ltimo tm1ino.
La casena es una protena de la leche producida por las clulas de la glndul a mamaria en respuesta a ciertas hormonas, principalmente la prolactina.
.'> ha observado que la concentracin del ARNm de la casena crece considerablemente en el citosol ante la presencia de esa hormona, no porque se inncmente su sntesis en e l ncleo sino porque aumenta su estabilidad en el cil<~plas m a . Contrariamente, cuando desaparece la prolactina se acelera la deradacin del ARNm de la casena . No se conocen los mecanismos moleculurcs que producen estos efectos.
Es interesante el modo como se regula la degradacin de los ARNm de la
tubulina dimrica, ya que se basa en la concentracin de sus productos proll'cos, es decir, de sus subunidades a y ~ (cap. 5-6). Cuando en el citosol el
nivel de estas protenas es suficiente, una molcula -probablemente un dntcro a~- se une a los primeros aminocidos ele las cadenas proteicas que
L"IIHtnan de los ri bosomas y ello activa a una nucleasa especfica que degrada
11 los ARNm de las tubulinas (fig. 16- 11). Como vemos, se trata de un mecaJI ismo autorregulatorio. La zona receptora de la seal de saturacin abarca a
los primeros nuc letidos del ARNm y a una pequea secuencia no traducible
111 via al codn de iniciacin.
En la sangre el hierro es transportado por una protena llamada transfe' 1nut. Esta, junto con e l hierro, ingresa en el citoplasma por endocitosis prevtn inl ra ~:in con 1 rectlptor de la transferrina, localizado en la mcmbra111 p l n~ t n rt li L'II . C'tu11rtln 111 <'IIJJJ'I' lllr u<' iII de hicrTO aumenta en e l citosol, el
JJIIII H'I" ,( 11 , ., 11tu 1111111 1, IIIII J'.i <tti tJJL di~ tn u n y'. Los ll"L"l'ptorl"s l'HL' Il
296
297
AAAA
Durante la fase S cap - - - AUG
A AAA
Nucleasa --C;;
debido a que el ARNm que Jos codifica es degradado por una nuc~easa especfica. En este mecanismo regulatorio tambin intervtene la acomtasa, ya
que al unirse a una seal ubicada en el extremo 3' del ARNm, cons1s tente en
cinco bucles de ARN con una secuencia CAGUG en cada uno, 1mp1de la accin de la nucleasa. Ello ocmTe cuando desciende la concentracin del hierro (fig. 16-12).
.
Como vemos, al disminuir el hierro en el citosol actan dos mecamsmos
regulatorios simultneos, uno que baja la concentracin de la fenitina (~ec
cin 16-20) y otro que aumenta el nmero de receptores para la transfemna.
En el primero se bloquea la traduccin de un ARNm y en el segundo se unpide Ja degradacin de otro. En ambos interviene una misma molcula -la
aconitasa- , aunque en sectores diferentes de los ARNm ~
.
La corta supervivencia de los ARNm de muchas protemas -por eJem~lo,
algunos factores de crecimiento (cap. 18-28)- , que no supera los 30 mmutos, se debe a la presencia en su extremo 3' de secuencias de unos 50 nucl~
tdos ricas en A y U, localizadas entre el codn de terminacin Y la poh A
(seccin 16-5). Se ha sugerido que estas secuencias atraen a ciertas nucleasas, las cuales, mediante la remocin gradual de las A de la poli A, desestabilizan al ARNm y ello propicia la degradacin de este ltimo por otras nucleasas (fig. 16-13).
La vida media del ARNm de la ~globina , que es de unas 10 horas, depende de la integridad de su poli A. Diversas experiencias han demostrado_ que
el acortamiento gradual de esta secuencia mediante nucleasas reduce el tiempo de vida del ARN mensajero.
La supervivencia de los ARNm que codifican a las histonas depende d~l
momento del ciclo en que se halla la clula (fig. 16-14). En la fase S la VIda media de estos ARNm es de una hora, pero cuando concluye la replicacin del ADN se reduce a unos pocos minutos. No se conoce el mecanismo
por el cual la replicacin del ADN se vincula con la menor ve!ocida~ de la
degradacin de estos ARNm. Slo se sabe que su estabilidad es mflmda po~
una corta secuencia de nucletidos que forma un bucle en su extremo 3
(cap. 15-5) (fig. 15-4).
ARNmde
AUAU--AAAA
factor de cap - AUG ~,t:--=""-!'=---+--(:,.----crecimiento
II.N
'-'---------'-----------..J
Pptido
seal
r~-M.I'/1 y
y-lipolropina;
fi M.\'11. 1""'""'"'"
c-JI1ulh~ulh'' d hl nll'llnu l
{lll'i./\ 1 ndudntll
ln1j ;
298
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17
Mutacin y reparacin
G2
l'ara que puedan form arse dos molculas d e ADN a par11, d\' una, primero tienen que separarse las d os cadenas de
, d"hlc h lice del ADN p rogenitor, pues se utilizan como
"" dd s para la construccin de sendas cadenas complemen-
1111 11" . Dado que las cadenas recin sintetizadas no se sepa' "' ,,. l:ts respectivas cadenas mo lde, se forman dos nuevas
,.,i(,s lt !ices de ADN idnticas a la anterior (fig. 17-3).
11 o ' llt<~S vislo qu; e l i\I)N 1111 \.'~ 1; solo sino combinado
tt 1111 1i d nas ( ltis lott:rs , o'il ', 1 y qrw l:t inlc r;tc it tt de a m has
111.,[ o lll ll', Jlo'VIl 1'1 ll01 11d111 ,[ I ' IUIIIlllillll (li , 1- <)), l ,l
Jlll
1 111 IJ I
dt J.l'
p11d 1 fll !l
1 l llli j dlt
( 1 1 i 1 d tldH I d1
1, ll 'l'f j
Fi~.
17-1.
300
t>T
301
- ADN polimerasa
1'
~/
Meta fase
- ADN polimerasa
5'
1" " s activos, mientras que en la replicacin no queda ning n sector del
1)N sin duplicar. Para la sntesis del ARN las dos cadenas del ADN se se1' tll lll transitoriamente en la zona donde se produce la transcripcin, por lo
' ""1se forma una especie de "burbuja" que se desplaza en direccin 5'-->3' .
1 1i\ RN copia una sola de las dos cadenas del ADN y, conforme progresa la
''""st:ripcin, se despega de la cadena que le sirve de molde. Contrariamen' ' , c- 11 la replicacin las dos cadenas del ADN se utilizan como moldes y una
y, ' s<.: paradas no vuelven a juntarse (porque las cadenas hijas quedan unidas
11 l11s progenitoras). Fi nalmente, la replicacin exige un nmero considerable" ""111 <.: mayor de enzimas que la transcripcin .
l \11 sntesis, a partir de una molcula doble de ADN se originan dos mol1 11las dobles de ADN -<los dobles hlices- , cada una compuesta por una
, '"h-Ila heredada del ADN progeni tor y una cadena recin sintetizada. Dado
'1' " ' las molculas de ADN recibidas por las clulas hijas contienen una cade''" uri ginal (preexistente) y una cadena nueva (recin sintetizada), se dice que
' 1 II ICt:anismo de replicacin del ADN es semiconservador (fig. 17-5).
Molcula
pnle rna
Molculas
hijas
l'lJ~ 17~~.
t
1,11 II'J)Iicnclt.n dd AJ)N Nt' p1111hue prc vlo d tSt' JUOJiurulcnln tlt lttl tln;l t' Utii'IIIW dt 1 In dnhlt lu lu , , t'lullt
1111141 lllltfd, p iU H 11
llftfl/ 111 lil/i t ' lult \1111/1 11111 VIII/ , ( )1111 1 VI' HI q111 f H'llh ~ ~N
dt 111
lng l n
1111 11 .,~
In li t t 11 d l tt 1 , l11 r1
lu1
, ,,
Moi(Jcula
lll() lfHl
302
303
~=~====~!=====~~
Fig.
17-6.
Esquema
que
11 c:mos
1/
1
'u :u1 du en un ori gen de replicacin se abre la doble hlice del ADN se
l:1 ll:unada bmlm,i n rll I'I'J)licacin, cuyo tama o aum enta a medi da
!""""
th
q11 1 II VH II / i l
la
,. ~tl v lt :L"'
en
l,
304
~~a~~~------- 5
305
3'
======::-=-'-3'
5'
3'
5'
5'
3'
En cambio, la otra cadena hUa -que usa como molde la cadena progenitora que corre en direccin 5'-73'- se sintetiza de un modo singular, ya que
para poder crecer debe hacerlo e n direccin contraria al avance de la horquilla. Lo logra porque se fabrica de manera discontinua, Jo cual significa que se
eonstruyen pe~eos tramos de ADN ~llamados fragmentos de Okazakique se Jiganntr~ conforme se van formando (fi g-:1:7:8).
La figura 17-8 muestra cmo se sintetiza un fragmento de Okazaki. Fueel verse que se copia un segmento de la cadena progenitora relati vamente
dejado del ngulo de la horquilla, situado "por detrs" del que diera origen
11 1 fragmento de Okazaki construido con anterioridad. Esto significa que el
. gmento de ADN progenitor ms cercano a la horquilla permanece sin copiar, aunque a esa altura la otra cadena progenitora ya fue copiada por la cadena continua. Es por ello que a esta ltima se la llama tambin adelantada,
a la discontinua, retrasada.
Se dice que la replicacin del ADN es un proceso bidireccional no slo
porque las dos cadenas se sintetizan en direcciones opuestas sino tambin
porque las dos horquillas avanzan en direcciones divergentes.
Adems es asimtrica, ya que una misma cadena se replica en forma continua de un lado de la burbuja y en forma discontinua del otro lado (fig. 17-9).
En suma, cada burbuja presenta cuatro reas generadoras de ADN, dos que
lo hacen de manera continua y dos de manera discontinua, las primeras cruzadas con las segundas (fi g. 17-9). Como vimos, la sntesis continua se produce
en direccin de las horquillas y la discontinua en direccin contraria.
A continuacin anal izaremos de qu modo se sintetiza el ADN en la cadena continua (adelantada) y en la cadena discontinua (atrasada). Por motivos
didcticos lo haremos en secciones separadas, aunque estos procesos -como
los ya explicados y los que falta explicar- ocurren simultneamente.
5'
(fig. 17-6). Ello da lugar --en cada extremo-- a una estructura con forma de
Y denominada horquilla de replicacin, ilustrada en la figura 17-8. Sus ramas representan a las cadenas del ADN separadas, y el tronco, a la doble hlice en vas de separacin.
Las dos horquillas que nacen en cada origen avanzan en direcciones
opuestas. Desaparecen cuando colisionan con sus similares de las burbujas
contiguas, al culminar el acercamiento progresivo entre ellas (fig. 17-9). Co
mo es obvio, esto no ocurre con la horquilla que recorre el tramo distal del
telmero.
El segmento de ADN que se sinteti za a partir de un origen de replicacin
recibe el nombre de replicn. La replicacin concluye cuando se conectan
entre s todos los replicones. La accin cooperativa de miles de ellos es lo que
permite que el ADN se sintetice en un tiempo relativame nte breve para el ciclo vital de la cl ula.
306
3'
5'
_.
1 1 11 1 1 111 11 1 1 1 1 1 1
11 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1
l l l l l l l l l l l ll l ! l !
3'
Abrazadera deslizante
5'
1
ADN polimerasa
Helicasa
'
d tl l ll lj 'lllll d t 1.1
lllll'llldl.t
th
li plll l lt 11111
Cebador
iiJ
SSB
.,. ~
1
ADN primasa
ADN pohmerasa
De manera similar a la ADN polimerasa 8 en la cadena continll:l. la ADN pol imerasa a coloca el ptimer desoxirri bonucletido
p11110 al extremo 3' del cebador del fragmento de Okazaki, lo liga
1> d y agrega los s ucesivos desoxiJTibonucletidos en el extremo
1' tld fragmento en crecimiento. Lgicamente, Jo hace siguiendo
,1 orden marcado por los n ucletidos de la cadena de ADN que
'.II'VC de molde pma formar la cadena discontinua (fig. 17-4).
En la seccin 17-6 se dijo que la cadena discontinua se ll ama
t11111 bin retrasada porque cada fragmento de Okazaki comienza a
' ' 11tstruirse despus de haberse sintetizado un tramo de la cadena
,outinua. Dado que el retraso es ele alrededor de 200 nucletidos,
1'1 ADN molde del fragmento de Okazaki tiene ese largo cuando
'11 1pieza a replicarse. Cabe agregar que la ADN pri.masa y la
Al) N polimerasa a necesitan unos 4 segundos para anexar los 10
dbonucletidos del cebador y los cerca de 200 desoxirTibonu1'1 tidos del fragmento de Okazaki, respectivamente.
Como muestra la figura 17- Il , a medida que avanza la horquilla de replicacin, se acorta el ADN molde y se alarga la doble hli n: que resulta de la sntesis del fragmento de Okazaki. Adems
M ' crea un segundo ADN molde, e l del fragmento de Okazaki que
sintetizar en el prximo ciclo. Obsrvese que dos de los tres
klllentos mencionados - la doble h lice y el segundo ADN
ll>o ldc-- forman un bucle que crece entre la ADN polimerasa a
y l'i ngulo de la horquilla de replicacin.
1~1 bucle se forma porque la ADN polimerasa a no puede desl11.:1rsc activamente sobre e l ADN molde debido a que, como se
vio, s halla en e l ngulo de la horqui lla de replicacin unida a la
i\ 1lN polilllcrasa 8. Por consecuencia, le conesponde al ADN
H>Id d s li ,.ars~.: n r lac i6n a lit enzima, lo cual genera un bucle
>i< loll,IIId l'l<'l'il'lth' IJII<' 11;1('1' lll>sihlc IJII 1i\i)N ll ll>ld ~.: SI' 1.:011
V H ' II ll 1' 11 1111 !1 tlt~h l t Jt, l1 1 1\ ' 111 !11 11 ' Jn /\J)N pn l i ll ll' l ll ~ ! !l I Y :.t I I III V
307
308
va de su lugar. Cabe agregar que existen otros modelos tericos de bucle que
proponen evoluciones distintas a la que se acaba de describir. El modelo presentado aqu es uno de los ms difundidos y, como los restantes, deriva de estudios efectuados en clulas procariotas.
Otro dato que revela la figura 17-1 1 es que los dos ADN moldes --el que
se acorta y el que se alarga- estn asociados a mltiples unidades de una
protena llamada SSB (por single-strand DNA hinding), cuya funcin es mantener relativamente rectos a esos ADN simples para evitar que se apareen las
bases complementarias de sus propias cadenas, lo cual impedira la labor de
la ADN polimerasa a. Debe sealarse que una vez que la clula fabrica las
SSB necesarias, stas se reutilizan mientras dura la replicacin, ya que sus
unidades se transfieren de los ADN molde que se acortan a los ADN molde
que se alargan.
Al igual que las ADN polimerasas o y p, la ADN polimerasa a no se desprende del ADN molde debido a que se le asocia una abrazadera deslizante,
cuyas partes se separan - y la abrazadera se desarma- apenas el fragmento
de Okazaki termina de sintetizarse (figs. 17- 10 y 17-11). Luego el bucle se
endereza y sus dos componentes --el fragmento de Okazaki y el flamante
ADN molde- quedan si tuados en el lado opuesto de la enzima (fig. 17-11).
Ello crea las condiciones para que comience a formarse un nuevo fragmento
de Okazaki, lo cual ocurre una vez que se forma el cebador y que la ADN polimeras a a se une al ADN molde como consecuencia del rearmado de la abrazadera deslizante.
Como se vio en la seccin 17-6, a partir de los orgenes de replicacin cada una de las dos cadenas de la burbuja da origen a dos cadenas divergentes,
una que crece en forma continua y otra en forma discontinua (fig. 17-9). Dada la manera como se construye la cadena discontinua, su extremo 3' corresponde al extremo 3' del primer fragmento de Okazaki sintetizado, y su extremo 5', al extremo 5' del ltimo fragmento. Adems, el primer fragmento se
liga al extremo 5' de la cadena continua del replicn, mientras que el ltimo
se liga con el extremo 3' de la cadena continua del replicn contiguo.
La ADN polimerasa a interrumpe su actividad despus que agrega el ltimo nucletido del fragmento de Okazaki, cuyo extremo 3' queda junto al
extremo 5' del cebador formado precedentemente (fig. 17-8). Del mismo modo que en la cadena continua, los cebadores de la cadena discontinua son removidos por una nu cleasa repara dor a y reemplazados con piezas de ADN
construidas por la ADN polimerasa p. Luego acta la ADN ligasa, que suelda el extremo 3' de esas piezas con el extremo 5' de los fragmentos de Okazaki precedentes.
'
1,
~AUCCCAAUC
AATCCCAATCCC
5'
=== 5,
Telomerasa
3'
3'
AATCCCAATCCC
_ #AUCCCAAUC
;=== s
5'
3'
~
1,
~AUCCCAAUC
AATCCCAATCCC
tr=-== 5'
5'
3'
"Jt\..
.
y
~ n TTAGGGTTAGGGTTAGGG:rTAGGGTTAGGGTTAGGGHAGG{HTAG
~ ~ ~ AATCCCAATCCC
5'
+- AATCCCAATCCCAAUCCC
3'
5' 3'
5'
309
11!11110 de ADN que debe reemplazar al ltimo cebador que se elimina de esa
11ulcna porque carece de un extremo 3' a partir del cual pueda comenzar a
1"1111arse. Por consecuencia, en cada una de las sucesivas divisiones celula" 'N, con la eliminacin del ltimo cebador se pierde un tramo del ADN telo111 rico, lo que provoca su progresivo acortamiento.
Naturalmente, si al cabo de un determinado nmero de divisiones los cro1111 >somas no revirtieran ese acortamiento, no slo perderan los telmeros si"" que comenzaran a perder informacin gentica. En la mayora de las cl11 lns esto no sucede porque despus de alrededor de 50 divisiones el acortalll ll'lltO telomrico llega a un nivel que les impide iniciar uria nueva divisin.
M.1Han, esas clulas envejecen y mueren debido a que desde sus telmeros
"l'"tados surgen seales que activan al gen de la protena P53, lo c ual, como
1 v r en los captulos 18-29 y 22-6, bloquea la divisin y determina la
1111wlt 'de las clulas. As, la muerte sobrev iene antes de que las clulas pier1h111 informacin gentica.
l:u alg unas clulas pertenecientes a las lneas germinativas del testculo y
1 1 1VIII io (cap. 19-3), lo anterior no ocurre a pesar de que se dividen repeti>11111 11'1111', lo <.: ual se debe a que contienen un complejo enzimtico ribonucleoJ I ~<>tt l , dSl' l ado para rtX'IIp<'l lll J i\I)N tCJomriCO que pierden dur:tlltC Jas
310
Fir~.
divisiones. Ese complejo se llama telom erasa y est integrado por varia
protenas y un ARN de alrededor de 4SO nucletidos llamado ARNte (cap
13-2), que incluye la secuencia A UCCCAAUC (fig. 17-12). Veamos cmo
acta la telomerasa, adelantando que sus propiedades catalticas derivan d<
su fraccin proteica.
En los telmeros la cadena 3' ~5 ' del ADN est compuesta por numeros;"
secuencias AATCCC consecutivas que, junto con sus complementaria'
TTAGGG de la cadena S' - >3' , se van perdie ndo durante las sucesivas divisio
nes celulares. La recuperacin del ADN telomrico comienza e n un ciclo ce
luJar ulterior, c uando la secuencia AUCCCAAUC del ARN de la telomerasa
se une al e xtremo 3' de la cadena S' - >3', colocndose en el lado de la caden;
3'~S ' del modo ilustrado en la figura 17- 12.
A partir de ese momento la cadena 5' ~3' re ne los requisitos que le per
miten crecer: tiene su propio extremo 3' libre y una secuencia de nucletido~
que le sirve de molde, la del ARN de la telomerasa. Puesto que a medida qut
crece provoca el corrim iento de la telomerasa, el proceso se reitera varias ve
ces. Concluye cuando la cadena 5' ~ 3' recupera su longitud y el telmero St'
libera de la telomerasa.
Como se ve, la telomerasa es una ADN polime rasa que copia una secuen
cia de ARN, de modo que se comporta co mo una transcriptasa inversa (cap.
17-24).
Resta describir cmo la cadena 3' ~ 5 ' recupera su longitud. Es restaurada
por la ADN polimerasa a, que utiliza como molde el ADN 5' ~3' recin sintetizado y agrega los nucletidos complementarios a partir del extremo 3' del
ARN de un cebador previamente fabricado por la enzima ADN primasa. Fi
nalmente, el cebador es removido y la enzima ADN ligasa une el antiguo extremo 5' de la cadena con el extremo 3' del segmento recin formado.
Dado que no existe un balance exacto e ntre las prdidas telomricas y sus
recuperaciones peridicas, la longitud de los telmeros vara en los distintos
cromosomas.
Se sospecha que los telmeros no son estructuras diseadas nicamente
para evitar el acortamiento progresivo de los ex.tremos de los cromosomas.
En estudios sobre envej ecimiento celular se ha comprobado que en medtos
de cultivo las c lulas provenientes de embriones y de ind ividuos jvenes se
dividen ms veces que las clulas provenientes de individuos de mayor
edad, las cuales, adems, mueren mucho antes. Este fenmeno celular seconoce con el nombre de senescencia replicativa. Muchos investigadores
creen que las clulas jvenes cultivadas viven ms porque sus telmeros recuperan el ADN perdido a una velocidad mayor que los telmeros de las clula s envejecidas, lo cual estara relacionado con la reduccin progresiva de
la sntesis de la telomerasa que tiene lugar en las clulas a medida que se suceden sus divisiones.
Esto ltimo no ocurre en las clulas ca ncerosas, cuya telomerasa no se
reduce o se halla aumentada, lo que
explicara por qu esas clulas suelen
dividirse en forma perpetua cuando s
las cultiva (cap. 2 1-3). Coincidente
mente, varios estudios han de111ostra
do que la telomerasa s sint 1i ~.ad a 0 11
las <Julas d ln urnyorfa dl' los l'I II\"<'
!" hwqnilla
Sil CCII ISt.'l' llt.'IIC ill lllt."C'fl ll it-!1, CVII Ud H p o1 lllk lopcli',IIIIH'I IIWI 'l ,
311
Debido a que el ADN es una molcula compuesta por dos cadenas helioidales apareadas y enrolladas entre s, su sntesis presenta una dificultad
mJ icional, soslayada hasta ahora para no complicar el anlisis de los puntos
1u1teriores.
Hemos visto que las ADN polimerasas copian los nucletidos del ADN
d spus que las dos cadenas de la doble hlice se separan. La separacin es
producida por una enzima especfica llamada helicasa , que se sita en el ngulo de la horquilla de replicacin por delante de las ADN polimerasas y a
corta los puentes de hidrgeno entre las bases complementarias de las dos
,adenas de la doble hlice (fi g. 17-11 ). Este proceso requiere energa, que es
lomada del ATP.
Conforme avanza la horquilla de replicacin, la helicasa deja tras de s traHIOS de las dos cadenas del ADN con sus nucletidos expuestos. Recordemos
que para dar lugar a la cadena discontinua, los nucletidos de la cadena progcnitora 5' ~3' permanecen un tiempo sin replicar, combinados con las SSB.
Dada la naturaleza helicoidal del ADN, la helicasa no puede abrir la doble
hlice del ADN como si abriera un cierre relmpago. El modelo que se muesIra en la figura 17-13 nos ayuda a comprender por qu. Conforme las cadeIHIS del ADN se separan a ni vel de la horquilla, se va acumulando delante de
sta --en la doble hlice no abierta todava- una torsin cada vez mayor.
( 'omo es de suponer, esa torsin hara inviable la separacin de las cadenas
por la helicasa. Por lo tanto, para que la accin de la enzima no sea frenada
,s necesario evitar el superenrollamiento con un desenrollamiento equivalen! , a fin de prevenir excesivas tensiones torsiouales en los segmentos de la
doble hlice an no replicados.
El desenrollamiento es producido por dos enzimas especficas, la topoisolrasa I y la girasa (o topoisomerasa Il). Ambas utilizan energa y evitan las
vueltas en exceso mediante un proceso que se cumple en tres pasos.
En el primer paso, la topoisomerasa 1 corta una de las cadenas de la dohlc hlice; en el segundo, la cadena cortada gira en tom o de su propio eje; en
,. tercero, los extremos cortados se vuelven a unir.
\L
En cambio, la girasa no corta ~n a sino las dos cadenas del AD N, las cuak s restablecen sus umones despues de haber gtrado.
~@.r--~'n
Corno se ve, ambas enzimas se comportan como
.v
"""\:\
uucleasas (cortan al ADN a nivel de las uniones fos~
J..~~
1< ,Ji ster) y ADN ligasas (reconectan las piezas cor?
4f3..
ruJas despus de haber rotado el ADN).
~
~
La girasa es una de las protenas que integra el
~~
ll clamio proteico en el que se sostienen los lazos de
0
,romatina de 30 nm (cap. 9-9); se asocia con el ADN
,,. lazo colocndose cerca de sus extremos, donde
,., un pondra una suerte de articulacin giratoria siu<i lar a la mostrada en la figura 17-14. Con respecto
" la topoisomerasa I, existiran varias en cada lazo,
pl"S operaran entre las burbujas de replicacin.
1,;1 lopoisomerasa I y la girasa se diferencian no
'" '" porqn la primera corta una sola cadena del
Fig. 17-14. Efecto hipottico de la girasa para evitar el su1lN y la sl"gnda corta las dos. sino por la magniJil'l'cnroll:uniento que s producirfa n e l A D~ .cmo const
t ' lli' llt' ill dt lll JI"p UI IU' II 1( 'lli'l dn: rudtnu:./
'' "' .,. ;.u:: vln tus, yu '1 '"" vi d,,anolliunintu '(111"
.1
ft
312
Histonas preexistentes
Origen
Histonas nuevas
111 H4 _
_ _ _N_J_ _ _ _,
:Ar
Nucleoplasmina
NUCLEOSOMA
5'
3'
Origen
""' in. Los nucleosomas nuevos se forman con histonas preexistentes e hislooas nuevas (figs. 17-7 y 17-15).
l.os nuc leosomas se construyen en dos pasos. En el primero, las histonas
11 1 y H4 se ligan e ntre s mediante la protena NI (cap. 12-9) y "son entre1111das" al ADN por un complejo proteico llamado CAF-1 (por chromatin
11\,,.,.nlhly facto r). En el segu ndo, las histonas H2A y H2B, asistidas por la
nudeoplasmina (cap. 12-9), se unen a las histonas H3 y H4 y completan el
"' t ~ mero (figs. 12-8 y 17- 16).
La mayor parte de las histonas nuevas se sintetizan en la fase S y se incor11"' :111 a los nucleosomas apenas el ADN es duplicado (fi g. 17-15).
Durante la fase S, casi todas las copias -entre 20 y 50- de los genes de
lu; cinco histonas (cap. 13-7) se transcriben simultneamente. Por lo tanto, en
11, rase S la concentracin de los ARNm de las histonas es muy alta, aunque
"" slo porque aumenta su sntesis sino tambin porque disminuye su degraoln in (cap. 16-21 ).
La pequea cantidad de histonas que se sintetiza fuera de la fase S servira
1111r;1 reemplazar a las que envejecen. Ello es infrecuente porque las histonas
111 bastante longevas y suelen mantenerse durante toda la vida de la clula.
1/- 14. la replicacin const ituye el prlogo de la divisin ce lular
mutacion < ~
,,
313
' lt~1111 dn por 01!11 , 1 IJ 111 111 1tl j d (dt lcn Ul) dt 11110 41 V:Uins lllll"k llidus, O \ ' JI
314
<
N~
N-H--0
----H-~N
/~
>=N \
A TAA CT A G
t, T A T T G A T
Apurinizacin
C G A T A A C,T A .G
1 1 l. 1 1 1
1 11
GCT
Desaminacin
TTG A TC .
A
0---H-N\
Citosina
111 1 1 1 1 11 1
<>udi ciones para la aparicin de individuos mejor adaptados al medio aml<il'nlc, base de la evolucin de las especies.
H Guanina
Uracilo
Adenina
fN
N-H---0
N/'')---i. ___
~J
CH 3
-H-~~
Adenina
Desaminacin
}-N
Timina
Hipoxantina
Citosina
cl
l .a mayor parte de las mutaciones gnicas que afectan a las clulas se pro"'"' n espontneamente, durante la replicacin del ADN. Ello se debe a que
'"'"do se sintetizan las cadenas hijas pueden insertarse nucletidos incorrec'"'' o nucletidos de menos o de ms. Como se ver en futuras secciones, la
1' In la ha desan ollado mecanismos especiales para corregir tales errores y lo1" 111 la mayor fidelidad posible en la duplicacin del ADN. Esos mecanismos
1ln ni nan el 99,9% de los errores producidos durante la replicacin, de modo
'1'"' de los numerosos nucletidos inconectamente insertados cada vez que
1 opian los millones de pares de nucletidos del genoma humano, en pro""'dio persisten errados slo tres.
Tambin existen mutaciones gnicas espontneas ajenas a la replicacin.
lgunas aparecen como consecuencia de la desaminacin de las bases de los
uudctidos, dada la facilidad con que pierden sus grupos amino. Como
"'"t:stra la figura 17- 17, cuando la citosina se desami na se convierte en ura1"" que se aparea con la adenina y no con la guanina. Si la clula no corri1< 1 error reemplazando al uracilo por una citosina, en la prxima replica' lo1" - al asumir la cadena hija alterada el papel de cadena progenitora- in' 'l <lra una adenina en lugar de una guanina, y esa mutacin se instalara en
<1 gcnoma. Algo anlogo ocurre --espontneamente tambin- cuando se
d, .~ : nn i na la adenina, que al convertirse en hipoxanti na se aparea con la citolila en vez de hacerlo con la timina.
Otras clases de mutaciones gnicas espontneas aparecen a raz de la
npurinizacin, es decir, cuando una base - particularmente una purina- se
dosprcnde de la desoxinibosa del nucletido (fig. 17-18). Por lo tanto, en
< 'il<~s puntos -llamados sitios AP (por apurnico o apirimidnico)- los ge"''S carecen de informacin.
d('
IIIIIIHd OIIl'.o..;.
315
316
CGATAACTAG
1111111111
GeT ATTG A Te
Fig. 17-19. Formacin de dmeros de ti mina por accin de
la luz ultravioleta.
~ Luz UV
AA 0
CGA\Ii 1 TA C)
111
111
GeT I n \ AT C
~T 0
AG TGAeTTAG
ADN ligasa
AGTGAeTTAG
reA eTGAATe
TCACTGAATe
Desa-1 1
minacin
ADN \
ADN
AGTGAeTTAG
TeA TGAATC
glicosidasa~
AGTGAC TTAG .
eA
TGA A
~""'""""~
Foslodieslerasa
La aparicin en el ADN de uracilos en lugar de citosinas - como conse11 ncia de desaminaciones espontneas- da lugar a un mecanismo de repa1 ncin que utiliza una ADN glicosidasa especfica. Esta reconoce y corta Ia
1t>ncxin entre la base errnea -el uracilo- y la desoxirribosa, de modo que
tlcja al nucletido sin su base (fig. 17-20). En forma similar, otra ADN glicoidasa especfica remueve la hipoxantina que se produce al desaminarse la
tull:nina.
Los sitios AP que se generan evolucionan del siguiente modo. La desoxi" ihosa sin base es removida por la AP endonucleasa y una fosfodiesterasa,
qt tl: cortan, respectivamente, el extremo 5' y el extremo 3' del sitio AP y relltlll:Ven el azcar. Luego la ADN polimerasa p coloca el nucletido correcto
1'11 d lugar vaco y la ADN ligasa pone fin a la reparacin.
Estos tres ltimos pasos se utilizan tambin para reparar los sitios AP que
w producen como consecuencia de las apurinizaciones espontneas (sec1 i lll 17-17).
1
17-20. La ADN polimerasa corrige los errores que ella misma comete
Durante la replicacin del ADN, para que un nucletido pueda ser agre
gado en el extremo 3' de la cadena hija en crecimiento es imprescindible que
el nucletido incorporado precedentemente sea el que corresponde. Ms
an, si la ADN polimerasa inserta en forma accidental un nucletido inco
erecto, "percibe" el error y no agrega nuevos nucletidos, de modo que el
crecimiento de la cadena se detiene transitoriamente. El error es resuelto por
la propia enzima mediante el ejercicio de una funcin adicional conocida co
mo "lectura de pruebas".
As, la ADN polimerasa, ante la presencia de un nucletido insertado in
correctamente, retrocede y lo elimina. Para ello utiliza la actividad exonu
cleoltica 3' ~5' de una de sus subunidades. Una vez eliminado el nucletido,
la sntesis del ADN progresa normalmente.
Como vemos, durante la replicacin la ADN polimerasa controla los errores que ella misma comete y adems los corrige. Sin embargo, dada la importancia de la integridad del ADN para la vida celular, si falla esta " lectura de
pruebas" se pone en marcha un segundo sistema de reparacin que se cumple de la manera descrita en la prxima seccin.
17-21. Existe un segundo sistema de reparacin a cargo de una
nucleasa reparadora
1"'
Generalmente las mutaciones inducidas por agentes ambientales son re(lllf'tldas por los mismos mecanismos que se utilizan para la correccin de las
1111t1aciones espontneas. En cambio, los dmeros de timina (fig. 17-19)
producidos por la luz ultravioleta- son removidos por un sistema de en/ ttnas especiales, que hidrolizan simultneamente dos uniones fosfodister,
11tt:l a cada lado de la lesin.
As, luego de reconocer la distorsin provocada por la presencia del dme1 11, sendas nucleasas cortan en la cadena afectada la quinta y la vigsima cuar' " 11nin fosfodister, contadas a partir del dmero en direccin 3' y 5', res('cvli vamente. A continuacin, el segmento de 29 nucletidos --que obviaII H' III incluye al dmero- es separado de la cadena normal por la helicasa,
tll\' corta los puentes de hidrgeno entre las bases del segmento que hay que
" ntovcr y las bases de la cadena normal. La reparacin se completa cuando
111 i\ 1>N polimerasa p reemplaza la pieza ausente por un tramo de ADN nuey., y la i\I)N ligasa lo une al ADN anterior.
:; , 111111 de las nu ka~: 11s 1(11<' l'<~mucvcn los dmeros de timina es dcfici nt
etllllll
317
4 polimerasa p
AG TGAeTTAG
eA UTGAATe
(' 11
Nt'
318
Secuencia
repetida
Secuencia
repetida
Gen de la transposasa
j 111 ,, 1
11 1 1 11111 1 1\ 11 ( 11
! 1 1 ; 1! 11 1 1 1 1 1) 1 1! 1 1 ! ,~i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 [ t ! 1
, 1 1 1 1 l!
extremos.
319
f,
l ! t tll /
11 11 1 ljll d t l t ~l ll \1
1
[; : : : : :: : : : : : : : : 11 11 1 1
\
111111 (
1
j 1 111
!.! 1 1 1 !
11 1 1
) . ), !
11
1!
1 f
1
1::::, ,, :: ~,:, ,, ::::: fii':m:':":':t:c:::::rn :::: :,: :, ::,:::::,.
Reparacin del ADN
1111d color rojo del ojo. La mayora de las mutaciones espontneas en laDro,,,,,!zila son causadas por transposones que saltan dentro de un mismo gen.
En el hombre los elementos transponibles ms abundantes corresponden
'' lts ADN repetitivos dispersos de las familias Alu y Ll (cap. 12-7), cuyas
t'vuencias constituyen aproximadamente el 10% del genoma. La mudanza
h secuencias Alu puede acanear consecuencias genticas importantes. Por
1 1mplo, se sabe que se producen deleciones (cap. 20-10) en regiones no
Jt: nciales de ADN flanqueadas por otras secuencias Alu, por lo que la re' nnhinacin entre secuencias Al u dentro de algunos intrones podra crear
~~' nes nuevos.
Otro mecanismo capaz de crear genes nuevos deriva ele la transposicin
,, , xones, que al combinar sectores funcionales de dos genes preexistentes
1111 t.:de llevar a la formacin de un tercer gen. Por ello se considera que la fiel i.l>ilidacl genmica introducida por los elementos transponibles ha sido funtl ll tll ental para la evolucin. No obstante, la mayora de los genes nuevos han
H l li ll 't~c ido por el mecanismo de duplicacin gentica (cap. 20-10) seguido
1'' n una mutacin en la segunda copia del gen. Eso es lo que ha oc unido con
1 .-: genes de las globinas a y ~- los cuales se formaron a partir de un gen an, , -~ Ira! comn.
1/- 25. La s duplicaci on es gent icas sue len producir seudog enes
Muchos de los genes duplicados no se convirtieron en genes nuevos sino
los llamados seudogenes, que son incapaces de generar ARN. Puesto que
1"' sufren ningn tipo de presin selectiva, estos seudogenes -relativamen''' !'recuentes en el genoma de los mamferos- acumulan mutaciones, lo que
l""' de convertirlos en genes funcionales.
11
320
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La mitosis
Control del ciclo celular
MITOSIS
18-1. Un individuo adulto est formado por una s 10 13 c lulas
La capacidad de reproducirse es una propiedad fundamental de la clula.
Se puede tener una idea de la magnitud de la reproduccin celular si se conoidera que un individuo adulto est formado por billones de clulas (10 13 ), to~
das derivadas de una sola, el cigoto. La multiplicacin celular sigue siendo
notable aun en un ser adulto que ha dejado de crecer. Un ejemplo llamativo
lo dan los eritrocitos, cuya vida media es de slo 120 das. As, el organismo
debe producir unos 2,5 millones de eritrocitos por segundo para mantener su
nmero relativamente constante. Esa reproduccin celular debe ser regulada
de manera perfecta para que la formacin de nuevas clulas compense las
prdidas y se mantenga el equilibrio.
pl lt 'll<" h
18
322
Fig. 18-1. Cambios en el contenido del ADN nuclear durante las fases del ciclo vital
de la clula. La letra e representa la cantidad de ADN
contenida en un juego haploide de 23 cromosomas. 2c,
contenido doble de ADN. 4c,
contenido cudruple de ADN.
15<(
18. LA MITOSIS
323
::f-,~--~\__
_
G1
Duplicacin
del ADN
G2 M
G1
G2
G1
Mitosis
1------------Tiempo
--------------+
con timidina marcada permiti determinar el perodo exacto en que se produce la duplicacin del ADN, y demostr que la sntesis tiene lugar solamente durante un tramo limitado de la interfase, denominado fase S (por sntesis de ADN), que es precedido y seguido por las fases 01 y 02 (por gap,
intervalo), en las que no hay sntesis de ADN. Esto llev a dividir el ciclo
celular en cuatro fases sucesivas: O 1, S, 02 y M (por mitosis) (fig. 17-1). 02
es el tiempo que transcmTe entre el final de la sntesis de ADN y el comienzo de la mitosis.
Como muestra la figura 18-1, durante la fase 02 la clula contiene el doble (4c) de la cantidad de ADN presente en la clula diploide original (2c).
Despus de la mitosis las clulas hijas ingresan en la fase O l y recuperan el
contenido de ADN de las clulas diploides (2c).
PRO FASE
PRO FASE
PROMETAFASE
METAFASE
ANA FASE
TELOFASE
:11 osomas y su reparto entre las clulas hijas. Los microtbulos del huso na,. n de un par de centrosomas, los cuales se forman durante la interfase al dupli carse el centrosoma ilustrado en la figura 5-23 (seccin 18-12).
Como corolario de la mitosis se produce la pa:.ticin del citoplasma y su
distlibucin equitativa en las clulas hijas, fenmeno conocido con elnom1 re de citocinesis.
En general, los procesos que dan lugar a las mitosis son semejantes en todas las clulas del organismo. Las figuras 1-12 y 18-3 muestran las diferen~t s etapas de la mitosis, que son consideradas como fases de un ciclo que co"' icnza al final de la interfase o perodo intermittico- y termina al co::cnzar la interfase siguiente. Las etapas en que se divide la mitosis son:
profase, prometa fa se, m etafase, anafase y telofase . A partir de la penltit:: a comienza la citocinesis -o separacin de los dos territorios citoplasmli os hijos-, que culmina cuando concluye la telofase.
En primer trmino, las distintas fases de la mitosis sern consideradas de
1111a manera eminentemente descriptiva, tratando de dar una idea global de los
k 11menos que ocurren tanto en el ncleo como en el citoplasma. En secciollc's ulteriores se pasar revista a la ultraestructura y a la bioqumica de algutuls de esos fenmenos.
11!-6. Durante la profa se las cromtidas se condensan , se forma
el huso mitt ico y se desintegra e l nuclol o
1,a deteccin de los cromosomas como filamentos delgados indica el cottli cmzo de la profas e. El trmino mitosis (del griego mitos, filamento) ex1" sa este fenmeno, que se vuelve ms evidente a medida que los cromo"'''us se siguen condensando por el enrollamiento de la cromatina. Como
v :1110S en e l captul o 17-1, despus de la duplicacin del ADN en la fase S
111dn n oni OSOil'la cs t;\ onlpli ( NI o por dos molculas de ADN denominadas
I ' IIIIIU~fhlnN ( J'i )', . 17 . ), i\ II II I) J) 11 11' IIVHI1 7,a la prof'HS C, J;s CI'Ont; iidas S '
IIIH 1 11 111 1\N 111)1111 /l v J!l l ll
11
u l
324
A
METAFASE
18. LA MITOSIS
~\~~~~
~/~~Fibras
del sler
B
ANA FASE A
Lleva el nombre de prometafase la transicin entre la profase y la metafas<.:. Se trata de un perodo muy corto, durante el cual la carioteca se desintegra y los cromosomas - algo ms condensados- quedan en aparente desorden. Los centrosomas arriban a los polos de las clulas y -ya desaparecida
la carioteca-las fibras del huso invaden el rea que ocupaba el ncleo. Por
sus extremos libres algunas fibras del huso se conectan con los cinetocoros de
los cromosomas; estas fibras se denominan cinetocricas. Otras fibras - llamadas polares- se extienden ms all del plano ecuatorial de la clula y sus
!ramos distales se entrecruzan con los provenientes del polo opuesto. Existe
un tercer tipo de fibras surgidas de los centrosomas, las fibras del ster; son
ms cortas, irradian en todas direcciones y sus extremos se hallan aparentemente libres (fig. 18-4A).
Volviendo a las fibras cinetocricas. es lgico pensar que, al tratar de conectarse con los cromosomas, no se unan a los cinetocoros todas al mismo
tiempo. As, considerando a un cromosoma en particular, al unrsele primero
las fibras que vienen de uno de los polos y despus las provenientes del polo
opuesto, presenta durante un tiempo movimientos de alejamiento y de aproximacin respecto del plano ecuatorial de la clula. Finalmente, cuando ambas fuerzas se equilibran, el cromosoma se mantiene en ese plano.
marias) se vuelven claramente visibles debido a que se les han asociado dos
placas proteicas llamadas cinetocoros, que dan hacia los lados externos de
las cromtidas (fig. 18-6). Al principio los cromosomas estn distribuidos
homogneamente en el nucleoplasma, pero luego se aproximan a la carioteca, de modo que aparece un espacio vaco en el centro del ncleo. Este movimiento centrfugo de los cromosomas indica que se aproxima el momento
de la desintegracin de la envoltura nuclear. Tambin pueden observarse las
constricciones secundarias de los cromosomas 13, 14, 15, 2 1 y 22. Otro
cambio es la reduccin del tamao del nuclolo, hasta su desaparicin.
Debido a la desintegracin del citoesqueleto, la clula tiende a hacerse esfrica; adems pierde sus contactos con las clulas vecinas o con la matriz extracelular. Simultneamente, el RE y el complejo de Golgi se fragmentan en
vesculas pequeas. Pero lo que ms se destaca en el citoplasma es la formac in del huso mittico. Trtase de conjuntos de haces de microtbulos que
surgen de ambos centrosomas, los cuales se alejan recprocamente pues se
dirigen a los polos opuestos de la clula.
Ms adelante veremos cmo - y en qu fases del ciclo celular- la clula forma el segundo cenuosoma. Como se seal en el captulo 5-5, el centrosoma est integrado por la matriz centrosmica -que es el lugar de nacimiento de los microtbulos- y un par de centrolos. Desde los centrosomas
las fibras del huso irradian en todas las direcciones, pero las ms llamulivas
son las que se extienden hacia el ccn1ro de la clula, dondl' dan ht.m '' 1W11
da,ion s d iiiiJllllllllldll 1'1111\'ionul.
Durante la anafase se produce la particin de las cohesinas de los centrmeros (cap. 17-1 ), hecho que ocurre casi simultneamente en todos los cromosomas (fig. 18-3). De inmediato las cromtidas -o cromosomas hijosse separan y comienzan a migrar hac ia los polos, traccionadas por las fibras
cinetocricas del huso. Los cromosomas suelen adoptar la forma de una V.
Los brazos de la V en los cromosomas metacntricos tienen la misma longitud, pero en los submetacntricos y en los acrocntricos son desiguales (cap.
12- 16). El centrmero, en el ngulo de la V, precede a las partes restantes del
cromosoma en su "carrera" hacia el centrosoma. Como es obvio, en este proceso los microtbulos de las fibras cinetocricas se acortan progresivamente
(fig . 18-4B). En cambio, aumenta la longitud de las fibras polares debido al
mutuo distanciamiento de los polos de la clula, que por ello pierde su forma esfrica y adquiere un aspecto ovoide (figs. 18-3 y 18-4C).
325
326
18. LA MITOSIS
327
Procentriolo
18- 11. La ci t ocines is reparte e l citop lasma entre las c lu las hij as
La citocinesis, es decir, la particin d.el citoplasma, se inicia en la anafase. El citoplasma se constrie en la regin ecuatorial por la formacin de un
surco en la superficie, que se profundi za a medida que la clula se divide.
Tanto las fibras del ster como las polares se red ucen hasta desaparecer. Slo sobreviven los tramos de las fibras polares locali zados en la zona ecuatorial de la clula; componen el llamado cuerpo intermedio, que analizaremos
ms adelante (fig. 18-7). Como es obvio, estas fibras quedan perpendiculares
al surco que divide al citoplasma.
Finalmente se restablece el citoesqueleto, por lo cual las clulas hijas adquieren Ja forma original de la clula predecesora y se conectan con otras clulas (si pertenecen a un epitelio) y a la matriz extracelular. Dirigidos por el
citoesque!eto, los componentes citoplasmticos (mitocondrias, RE, complej o
de Golgi, etc.) se distribuyen en las clulas hijas como estaban en la clula
madre.
Como se dijo, las fibras del huso mittico que se unen a los cromosomas
se implantan en los cinetocoros (figs. 18-4 y 18-6). Estos estn adosados al
centr mero, es decir, al segmento ms estrecho del cromosoma (constriccin
primaria). As, el centrmero no es slo el sector por el que las cromtidas
hermanas se unen entre s a travs de las cohesinas (cap. 17-1), sino tambin
d lugar donde los micro t bulos del huso se conectan -cinetocoros medianle- con los cromosomas. En los captulos 12-7 y 12-11 se vio que la mayor
parte del centrmero contiene ADN repetitivo satlite y que se halla en una
zona de heterocromatina constitutiva.
Los cinetocoros estn situados en los lados del centrmero que dan a las
cromtidas, de modo que en la metafase -que es cuando se ven mejor"miran" hacia sus respectivos polos celulares. En los cortes transversales el
microscopio electrnico revela que cada cinetocoro es una estructura trilaminar compuesta por dos capas densas de unos 50 nm de espesor, y una capa intermedia, ms clara, de 25 nm de espesor (fig. 18-6).
La cara externa del cinetocoro es convexa y en ella se implantan entre 30
y 40 microtbulos. En cambio, su cara interna es plana y est en contacto con
la cromatina del centrmero. Se han observado fibras de cromatina surgidas
de este ltimo que ingresan en la capa densa interna del cinetocoro y que luego de doblarse sobre sf mismas retornan al cromosoma. Aparentemente manti enen a los cinetocoros ligados al centrmero. Volviendo a la cara externa,
posee una especie de corona fibrosa y los extremos de los 30 a 40 microtbulos que se anclan en su superficie estn asociados con protenas motoras de
las familias de la dinena y la quinesina (cap. 5-8) (fig. 18-6).
Ms adelante se analizar el papel que desempean los cinetocoros duranle la separacin de los cromosomas hijos en la anafase.
La esclerodermia es una enfermedad humana que genera autoanticuerpos
llamados CREST (por las iniciales de calcinosis, Raynaud's phenomenon,
l'.wphageal dysphagia, sclerodactyly y telangiectasia), los cuales reaccionan
w ntra los cinetocoros. Ello ha permitido usarlos como marcadores para reconocer y estudiar a las protenas cinetocricas, especialmente las motoras de
las familias de la quinesina y la dinena y las que estabilizan la unin del cinetocoro con la cromatina del centrmero.
Los autoanticuerpos CREST permitieron detectar a las protenas cinetocricas en todas las etapas del ciclo celular, aunque aparecen asociadas a los
Los centrosomas comienzan a duplicarse durante la interfase, ms concretamente, al final de la fase G1 o al comienzo de la fase S. Para duplicarse, los dos cen trolos del diplosoma se separan y cerca de cada uno aparece
un p r ocent rolo, que se dispone en ngulo recto con respecto al centrolo
preexistente (fig. 18-5). Los procentrolos crecen lentamente durante las fases S y G2 y alcanzan su tamao definitivo al comienzo de la profase, que
posee dos pares de. centrolos. Cada par de centrolos se halla en medi o de su
matriz centrosmica, proveniente de la matri z centrosmica ori ginal, que
tambin se ha duplicado.
Como vemos , los centrol os no se duplican por divisin ni a pan ir de l lll
molde . Duelo que los proccn trfo lossurg n c i ' Jl u di stun i <k lps e ut rfolt 1s
pn(kl'l.' SlH' :-; ( no e s t: n
l lld! I\' II I I ~ 'H
y q111'
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328
18. LA MITOS IS
329
{'l'llllftHilll tll
111
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JuJ11,
1'
330
18. LA MITOSIS
331
neamente.
tm, se cree que los filamentos de actina van perdiendo monmeros por des1'' > l i ul o.:ri ;~.acin.
1\1 lugar donde s l'ol'llln 1 anillo contrctil sera determinado - al finali1.111 la lllml'us 1"" 1.,,, ud ,t,tuhulos d 11\str, t!ttyos cxtcmos libres se trasllld lldll u al <'l 'lllld<H 11i l11 11 l11l11 1' 1111i1 Wil fa u la poliutclizaLi >11 <k 111011 llllcli'OS
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1 1111
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tH'IIIIII d 1 l11du d 1
la
332
18. LA MITOSIS
Existen diferencias entre animales y vegetales en la divisin de las clulas somticas. Aqu slo sealaremos las disimilitudes, ya que la mayora de
los procesos que se registran en la di visin ce! ular mittica son comunes a
ambas clases de clulas.
En los vegetales superiores -como las angiospermas y la mayora de las
gimnospermas- las mitosis son anastrales, es decir, carecen de centrolos y
de fibras del ster (fig. 18-9). Esto es lo que indujo a sospechar que los centrolos no son indispensables para la formacin de Jos microtbulos.
Para dar lugar a la citocinesis, la regin intermedia del huso mittico se
transforma en el fragmentoplasto, que equivale al cuerpo intermedio de las
clulas animales (fig. 18-9).
El fragmentoplasto comienza a formarse al promediar la anafase. En el
plano ecuatorial de la clula el microscopio electrnico permite ver que los
microtbulos de las fibras polares del huso se asocian a un material denso y
a vesculas derivadas del complejo de Golgi.
Al principio el fragmentoplasto se dispone como un anillo en la periferia
de la clula, pero luego, por el agregado de nuevos microtbulos y vesculas,
crece centrpetamente hasta extenderse por todo el plano ecuatorial. Las vesculas aumentan de tamao y se fusionan entre s. Dan lugar -en las clulas hijas- a membranas plasmticas relativamente continuas, fenmeno que
coincide con la transformacin del fragmentoplasto en una estructura llamada placa celular (cap. 3-30). Esta sienta las bases para la formacin de lapared celular (cap. 6-15), que es atravesada por tneles muy pequeos denominados plasmodesmos, los cuales permiten el paso de lquidos y solutos entre
los citoplasmas de las clulas contiguas.
Profase
Prometafase
)
Fibra cinetocrica
Metafase
Anafase
CE~ULAR
<'11 lafa.w S, s decir. unti.-n t a 11 r plit:ar su ADN. Ello acontece cuando una
tltJinn (;J ll'li VII 1 !11 IJIIillll 11 ( 'dk2, !11 t'lllll i11i1ia 1111:1 l'lldt'llll el' f'usfut ila
333
334
18. LA MITOSIS
335
IJ
Ciclina M
Cdc2
, .... .... -~
Cdi<2
e:.:ic2---
o~
O}]
G2
G
Punto de arranque
M
Fig. 18-10. Diagrama que
ilustra los cambios de concentracin de las ciclinas G 1 y
~cgunda
se asocia
ciones en sucesivas protenas intermediarias. La cadena culmina con la activacin de las molculas responsables de la replicacin del ADN.
La Cdk2 se activa slo cuando la ciclina O 1 alcanza un determinado umbral de concentracin, ya que ste es un requisito indispensable para que se
produzca la activacin (figs. 18-10 y 18- ll). Ms an, a partir de ese momento la Cdk2 y la cicli na O 1 se unen y componen un complejo proteico denominado SPF (por S phase-promoting j{!clor).
El SPF induce la apertura de los orgenes de replicacin y activa amolculas involucradas en la sntesis del ADN , como las ADN polimerasas, la helicasa, etc. Como se seal en el captulo 17-4, el SFP acta a travs del complejo pre-RC.
Dado que en cierto momento de la fase S la concentracin de la ciclina 01
comienza a declinar, cuando cae por debajo del umbral anteriormente citado
se separa de la Cdk2, con lo cual el SPF deja de existir. Las ciclinas son degradadas por proteasomas (cap. 4-6).
De las dos molculas, la cclina O 1 es la nica cuya concentracin vara,
ya que los niveles de la Cdk2 se mantienen constantes a lo largo del ciclo
celular. En cambio, la ciclina O 1 comienza a sintetizarse a partir del punto
de arranque, se incrementa durante gran parte de la fase S, en un momento
de sta comienza a declinar y desaparece en la fase 02 (fig. 18- 10).
En una fase S normal el ADN se repl ica una sola vez, pues si as no fuese
las clulas hijas tendran un nmero de cromosomas mayor que el normal. El
impedimento para la aparicin de nuevas duplicaciones del ADN ya replicado depende del complejo proteico ORC (cap. 17-4). Los cuadros derivados
de alteraciones en el control de este proceso se denominan poliploidas y sern analizados en el captulo 20-8.
18-25. En la fa se G2 actan mecanismos de seguridad
:1
la ('d~2
mnhus nu,lt":t'lllw
l ' tllnj"'lllll
llllt 'tnnplt-j,,
SPF
G1
/
_., "
)~
Ciclina G1
Cdk2
A continuacin, activada por la ciclina M, la Cdc2 fosforila --directamente o a travs de quinasas intermediarias- a diversas protenas citoslicas y nucleares, en particular a las que regulan la estabilidad de los filamentos del citoesqueleto, a las que componen los laminofilamentos de la lmina
nuclear, a las histonas Hl, etc. Veamos algunas consecuencias de esas fosforilaciones:
1) Se desintegra la red de fllamentos de actina, de modo que la clula pierde contacto con las clulas vecinas (o con la matriz extracelular) y se vuelve
esfrica.
2) Se desarman Jos microtbulos, aunque se forman Jos del huso mittico.
3) Se disgrega la lmina nuclear, y con ella la carioteca.
4) Se modifica la asociacin de la histona Hl con el ADN, lo que aumenta el enrollamiento de la cromatina y la compactacin de los cromosomas.
Cuando la divisin celular concluye, estos y otros fenmenos se revierten
debido a que las protenas que los producen se desfosforilan a causa de la desactivacin de la Cdc2. A su vez, la Cdc2 se desactiva porque la concentracin de la ciclina M cae a un nivel inferior del que se necesita para que ambas molculas se mantengan unidas formando el MPF.
La disociacin del MPF ocurre al comienzo de la anafase. Tiene lugar nic.;amente si todos los cromosomas arribaron al plano ecuatorial de la clula y
todos los cinetocoros se ligaron a los microtbulos cinetocricos del huso mittico, lo cual asegura la segregacin normal de los cromosomas hijos y su
dc.;splazamiento hacia los respectivos polos celulares.
Se ha comprobado que Jos cinetocoros que no se ligan a los microtbulos
del huso producen una seal que impide la cada de la ciclina M -es decir,
la disociacin del MPF- para que la clula detenga la mitosis antes de que
comience la anafase.
En condiciones normales esa seal no se genera y la clula entra en anafas<:. 1.o hace despus de formar un complejo proteico llamado ciclosoma o
i\ 1'(' (por !IIUIJlha.\e-promvtinR complex), que induce la degradacin de la cii' lin: M y d las ,olwsinas (jlll' <1111'11 a las rom{lidas cnlr s (c,;ap. 17- 1 y s ' "'" 1H 'l),
336
t8. LA MITOSIS
t'lldiH ' I
ina),
Antes de ingresar en la fase S la clula controla el estado de sus molculios de ADN. El control es ejercido por una protena citoplasmtica llamada
1'53 (por su masa molecular, de 53 kDa), que es sinteti zada por la propia clula en respuesta a la aparicin de alteraciones en su ADN. El gen p53 que la
oodifica pertenece a una categora de genes conocidos como supresores de tu~
111nres, llamados as por causas que veremos ms adelante.
La P53 se comporta como un factor de transcripcin que promueve la ex~
presin de los genes de otras protenas reguladoras -llamadas P21 y Pl~.
que tienen por misin bloquear la actividad de la Cdk2. Dado que este efecto se opone al de las ciclinas G 1, la clula no replica sus molculas de ADN
y permanece en la fase G l. Finalmente, si se comprueba que el dao en el
/\ DN es peligroso para las futuras clulas hijas, la protena P53 vuelve a ac~
ruar, pero ahora para provocar la muerte de la clula y con ella la desapari~
r in del ADN daado (cap. 22~6).
En lo que atae a la protena P21, si no resultara suficiente para bloquear a
lu Cdk2, le queda otro recurso para impedir la mitosis: en el comienzo de la
1 plicacin del ADN se une a la abrazadera desli zante de PCNA (cap. 17-7) y
unula su funcin.
En la clula existen otras protenas reguladoras de la proliferacin celular,
r omo la protena Rb (la sigla Rb deriva del tumor de la retina llamado retioooblastoma). Es codificada por el gen rb, gue tambin es supresor de tumo~
1 s. La protena Rb inhibe la proliferacin celular cuando est fosforilada. Lo
hace mediante el bloqueo de los genes de ciertas protenas necesarias para la
replicacin.
18- 30. M uchos t ipos de cnceres se producen por la acum ulacin
de alteraciones genticas
v 1 11
qm! aclivan
337
338
18. LA M ITOSIS
a los primeros e inactivan a los segundos-, lo cual al cabo de un tiempo instala la enfermedad en las clulas descendientes.
Por aadidura, en las clulas cancerosas los cromosomas a menudo lucen
rotos o con partes translocadas, y algunos se encuentran varias veces repetidos. Al parecer estos cambios no son consecuencia del desarrollo tumoral, sino que se hallan asociados a sus causas.
18-3 1. Los protooncogenes son genes normales, y los oncogenes,
sus ve rsi ones defectu osas
Los protooncogenes son genes normales que codifican protenas implicadas en el control de la proliferacin celular y la muerte celular. Hasta el
momento se han caracterizado aproximadamente cien, entre ellos los que codifican a las siguientes protenas (los nombres de los genes figuran entre parntesis):
l) Los factores de crecimiento PDGF (sis), EGF (cap. 11 -12) y GM-CSF
(seccin 18-28).
2) Los receptores de los factores de crecimiento PDGF, EGF (erb-B) (cap.
11-12) y GM-CSF (fms).
3) La protena Ras (ras), que es fosforil ada por receptores con actividad
de tirosina quinasa (cap. 11-12).
4) La serina-treonina quinasa Raf (raf), que es activada por la protena Ras
(cap. 11 -12).
5) Las tirosina quinasas Src (src), Fes (fes) y Abl (abl).
6) El receptor de la hormona tiroidea (erb-A), localizado en el citosol
(cap. 11 -6).
7) Varias protenas nucleares que actan como factores de transcripcin,
por ejemplo, las protenas Myc (myc), Myb (myb), Fos (fos) y Jun (jun). Los
productos de los genes que activan promueven la proliferacin celular.
8) La protena Bcl-2 (bcl-2), incl uida en esta categora no porque se halla
implicada en el conuol de la proliferacin sino en la supervivencia de las clulas (cap. 22-4).
La denominacin de protooncogenes se debe a que, como resultado de
mutaciones, pueden dar lugar a sus versiones defectuosas: los oncogenes. Estos se diferencian de los normales porque se transcriben desmesuradamente
y generan cantidades excesivas de sus productos, o porque su transcripcin
origina productos aberrantes. En ambos casos traen como consecuencia un
aumento descontrolado de la proliferacin celular o una disminucin de la
muerte celular (captulo 22).
Diversos virus son portadores de oncogenes. Se cree que ingresaron en el
genoma viral como protooncogenes, cuando - en alguna remota ocasinesos virus infectaron clulas de animales y los "sustrajeron"; una vez instalados en el genoma viral, los protooncogenes se transformaron en oncogenes.
Respalda esta hiptesis el hecho de que en los virus los oncogenes no cumplen ninguna funcin. En la actualidad, cuando esos virus infectan a diversas
especies animales, los oncogenes que les transfieren son causa de cuadros
cancergenos (por ejemplo, el sarcoma de Rous en el pollo, provocado por el
oncogn src).
Si bien varios cnceres que afectan a la especie humana se hallan asociados con infecciones virales (por ejemplo, el virus de la h ~.:palilis 13 aumenta
la incidencia de carci noma h p:lico, el papiloma vi1us iiiVlcIJWula la aparic i6n d c;l uc;n d~: nw llo ulv1 ino, <1 vi1ns dd sida ll1u'< leo uopin ou e l sar
rnrna de 1\.upo,. i , t' lc ', ) , u lurllll llld !llll t'llli ' rrrn p rr1111 de l~lf , I 11 H i r t-~~ lrurrr!IIHH. ~~.
Mientras que los productos de Jos protooncogenes promueven el crecimiento celular, Jos derivados de los genes supresores de tumores inhiben la
reproduccin excesi va de las clulas. As, los defectos de los genes supresores de tumores - a raz de mutaciones gnicas o de aberraciones cromosmicas- dejan a la clula sin esos frenos naturales. Por ende, si la clula adquiere otros defectos genti cos - ahora estimulantes de la actividad mittica- se
genera un cuadro cancergeno.
Dado que los genes supresores de tumores son recesivos, el defecto se manifiesta cuando se alteran los dos ale/os del gen (cap. 20-3).
Hasta el momento se han caracterizado unos 10 genes supresores de tumores. Entre ellos se encuentran:
El gen p53, situado en el brazo corto del cromosoma 17. La mutacin de
sus dos alelos - con la consiguiente falta de protena P53- explica la gnesis de muchos tumores. Las cl ulas sin protena P53 no controlan el estado de
sus molculas de ADN antes de la replicacin (seccin 18-29). Ell o provoca
la acumulacin de alteraciones genticas en las sucesivas generaciones celulares -por ejemplo, en los protooncogenes-, lo cual propicia la aparicin
de muchos tipos de cnceres.
Algo similar ocune cuando se alteran los dos alelas del gen rb, perteneciente al brazo largo del cromosoma 13. En este caso, debido a la falta de protena Rb, se produce un tumor maligno en la retina de los nios, aunque tambin se han detectado defectos del gen rb en cnceres de muchos otros tej idos.
Los defectos en los dos alelas son variados, ya que pueden encontrarse ambos
mutados, ambos ausentes (por delecin), uno mutado y uno ausente, etctera.
Otros genes supresores de tumores son: l) el gen mee (por mutated in colon carcinoma), perteneciente al cromosoma 5; 2) el gen dcc (por deleted in
colon carcinoma), ubicado en el cromosoma 18; 3) el gen a pe (por adenomalou.v wlyposis r!F 1111' co /ou ). localizado en el cromosoma 5 (no emparentado
W ll el C0111]1ItjoHIII<' ' '" /\ I'C vislo en la secci6n Ul-26), y 4) el gen wt (por
Wi /11 1.1' . "'""'.\' {1//1{ 1' /) 11 ,f, "'' ' !' ll l'lll'<liii!>Stllll:t 11.
339
340
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La meiosis
Fecundacin
19
MEIOSIS
19- 1. La meiosis y la rep roduccin sexua l
La meiosis es un tipo especial de divisin celular, exclusiva de los organismos que se reproducen sexualmente. En muchos protozoos, algas y honr os, la reproduccin es asexual, es decir, por divisin celular simple o mitosis. En este caso todos los descendientes tienen una herencia que proviene de
un solo antecesor. En cambio, en la mayora de los organismos multicelularcs (animales y vegetales) la reproduccin se realiza por medio de gametos o
lulas sexuales generados por meiosis -espermatozoides y vulos en los
animales- , los cuales se unen por un proceso denominado fecundacin.
1:llo da origen al cigoto o clula huevo, que porta el material hereditario de
los dos progenitores y se reproduce por mitosis hasta formar un nuevo individuo multicelular.
Las figuras ~ - 1 2 y 19-1 muestran Jos fenmenos bsicos de la meiosis (del
griego meioum, disminuir). El genoma humano posee 46 cromosomas (44 +
XY en el varn; 44 + XX en la mujer). Si la divisin fuese por mitosis, cada
gameto tendra 46 cromosomas y el cigoto 92. Dado que esto se repetira en
las sucesivas generaciones, el nmero de cromosomas se duplicara de generacin en generacin. La meiosis es el mecanismo usado por los organismos
para evitar que ello suceda. As, mediante dos divisiones celulares consecutivas las clulas sexuales reducen a la mitad el nmero de sus cromosomas, con
generacin de gametos haploides (cuatro espermatozoides en el varn; un
vulo y cuerpos polares en la mujer). Los procesos que llevan a la produccin
Jc gametos -llamados espermatognesis y ovognesis- tienen Jugar en las
gnadas, es decir, en los testculos y los ovarios.
Debe advertirse que para entender los aspectos ms importantes de la ci1ogentica (captulo 20) el lector debe tener una clara comprensin de la
meiosis, tanto de su dinmica estructural como de su bioqumica.
En este captulo describiremos la meiosis como un tipo especial de divisin celular. En ella se producen: 1) la reduccin del nmero de cromosomas
a la mitad; 2) la recombinacin gentica, es decir, el intercambio de segmentos cromosmicos, y 3) la segregacin al azar de los cromosomas homlogos
paternos y maternos.
Se define como cromosomas homlogos a los dos cromosomas virtuallll ' nle idnticos -uno aportado por el padre y el otro por la madre- que
ron viven en las clulas diploides. Debido a que en las clulas somticas hu" ':utas ex isten dos juegos hoploides de 23 pares de cromosomas cada uno
1111 juego haploid(' "i""l :ulo por 1 spcrmatozoidc y otro aportado por el
tlV''l
ltl
. :w
) \
,
1'
342
VARON
cf
19. LA MEIOS IS
8 /~8
/
'\
81 \
81 \
Mitosis
81 \
81 \
81 \
8 \
8 8 88 81- 8 88 88 881 88
1
Espermatocito
18
1 8
8y
.t
Espermatocitos
Espermtides
'>o
W
V o
V a
V a
V
8
.t
8 \J
(;: ;,.
1
/J
e--e
C igotos
Meiosis 11
Meiosis 1
Leptonema
Ovogonios
'\
81 \
~ MUJER
8 /~8
Espermatogonios
+XX t "
Cigonema
Pro fase
Ovocito t
aQ
Paquinema
Ovocito 11 y
primer cuerpo polar
Ovulo Y
segundo cuerpo polar
Diplonema
nht~l/ )
343
l' S
1i.1
y 1\11 In
lnlerlase
Anafase
1
A
Gametos
A
B
ll ll ' ll~. l i Ft' IH ' I II 111111 n 1111 \'1 11 1111 tlllll ll cl ~ t \1 11~1 il' ll ,
344
19. LA MEIOSIS
Profase 1
MEIOSIS 1
Preleptonema
Leptonema
Cigonema
Paquinema
Diplonema
Diacinesis
Prometafase 1
Metafase 1
Anafase 1
Telofase 1
Interfase
MEIOSIS U
Profase 11
Metafase ll
Anafase 11
Telofase 1!
laH'ol'a ~t'
d i lplldtlfJ y clilldl ~ ~ d
ll'IIIJHIIIIII dt li1111iloNi::.
Lo~:, . ,.,
345
D
4c
Cl
<(
';J
:g
2ct----....J
o"'
1c
G1
G2
G1
Mitosis
Meiosis
t t
Interfase
Meiosis 11
t
Mitosis
t
Mitosis
llltlllllltll',lli l
346
19. LA ME!OSJS
347
Fig. 19-4. Etapas de la meiosis en la langosta Lapla tacris dispar (2n = 22+X). El cromosoma X aparece sealado por una flecha. (De F. A. Sc1.. )
A LEPTONEMA
E DIACINESIS
B PAQUINEMA
F METAFASE 1
C DIPLONEMA TEMPRANO
D DIPLONEMA TARDIO
rn rl
ltllt l! lltll !l . , t
ttlllltn
G ANAFASE 11
' " las asas aparecen cada vez ms juntas al lado de los componentes laterales del CS. Ms an, igual que en los cromosomas mitticos, en los meitios existe un armazn de protenas no histnicas para sostener a las asas de
nomatina (fig. 19-8); la diferencia con los meiticos es que a stos se les
11 regan los componentes del CS.
La fijacin de los telmeros a la envoltura nuclear ordena espacialmente
11 los cromosomas, lo que favorece el alineamiento de los homlogos. Una
V ~ formados lOS CS, SUS extremOS tambin Se insertan en la envoltura nut'ICar (fig. 19-5). En los puntos donde lo hacen aparecen engrosamientos llarllados
placas de fijacin.
Una de las funciones del CS es estabilizar el apareamiento de los homl"gos y facilitar su recombinacin. As, las molculas proteicas de sus coml"" 'cntes laterales permiten que los ADN de los cromosomas homlogos se
dispongan de manera tal que el intercambio entre ellos resulte favorecido.
1\11 consecuencia, el CS debe ser considerado un armazn proteico que se
<'1111Struyc para que se produzca el alineamiento y la recombinacin de los
11111116i11gos,
! '11:11ul" lmni 'nza el apar ami nlo, el acortamiento de los cromosomas es
\'1 ' ""'Y l'""'"'~~'i : ulo xi.t 1'"' 1" III!'IIIIS 1111:1 rc~lac- i 11 100; 1 <'11l n (' 1 l:11y o
348
1
1
Fig. 19-5. Micrografa electrnica que muestra los componentes latera les (/) y el
componente central (e) del
complejo sinaptonmico entre
los cromosomas homlogos.
Obsrvese la manera en que
los telmeros se fijan a la envoltura nuclear (EN).
del ADN y la longitud cromosmica. Esto significa que slo el 0,3% del ADN
de los cromosomas homlogos se halla en contacto directo con los compo
nentes laterales del CS.
19-8. Durante el paquinema se recomb inan las cromtidas homlogas
ros, uno por cromosoma. Igual que en la mitosis, cada centrmero contiene dos cinetocoros, uno por cada cromtida hermana. Sin embargo, hasta la finalizacin de la meiosis I los cinetocoros hermanos se comportan como una unidad (fig. 19-15).
A lo largo del bivalente, en el CS aparece una sucesin de
ndulos densos de alrededor de 100 nm de dimetro, denominados ndulos de recombinacin (fig. 19-7). Su nmero y sus
localizaciones coinciden con los sitios de recombinacin gentica, lo que sugiere que a nivel de ellos ocurre el intercambio
de los segmentos de ADN entre las cromtidas homlogas.
Para que se produzca la recombinacin, las molculas de
ADN de las cromtidas homlogas deben situarse a una distancia de aproximadamente 1 nm en el componente central del
CS. Se cree que ese virtual contacto ocurre a nivel de los filamentos transversales que unen a los componentes laterales,
por los cuales las secuencias de nucletidos homlogas se buscaran, hecho imprescindible para que tenga lugar el intercambio de los segmentos de ADN. El ndulo de recombinacin podra considerarse la expresin morfolgica de ese intercambio.
Ms a n, el ndulo sera un complejo multiproteico que rene
a las cromtidas paternas y maternas y produce los cortes y
empalmes necesarios para la recombinacin.
Entre las protenas que actan al comienzo de la recombinacin se encuentra la RadSl (por radiation sensitive) , cuya intervencin es
esencial para que se produzcan los cambios que se muestran en la figura
19-12, los cuales ocurriran entre los pasos 2 y 3 del modelo de recombinacin gentica ilustrado en la figura 19-10. Obsrvese cmo la cadena invasora se combina con la doble hlice de la cromtida homloga y da lugar a una
triple hlice transitoria. Se considera que la cadena invasora se acomoda en
el surco mayor de la doble hlice y que sus bases se unen con las de la cromtida homloga mediante puentes de hidrgeno inusuales.
'''"""""'"n
(1111 t'il 't'llllttlllt'ltt , 11tH ltt lpll' t' ll 1111 h i vliii ' Ui t'
tt
1 llfl t tll ll
....;;~=---
349
Componente
lateral
o<""'"- - - Cromtida
(se muestra
slo una
de las dos
cromtidas
hermanas)
Ndulo de
recombinacin
hermanas
Fi~.
u,
t'tll l
1111
ntuhhuu 11111
nntluln d
h'
350
19. LA MEIOSIS
351
Durante la diacinesis (del griego di, a travs) la condensacin de los cromosomas vuelve a acentuarse (fig. 19-4E). Las ttradas se distribuyen homogneamente por todo el ncleo y el nuclolo desaparece. A excepcin del aspecto de los cromosomas, este breve estadio muestra semejanzas con la profase tarda de la mitosis.
Componente lateral
Cromtidu
5'
3'
B-
3- a - l : l
5
A-
3'
D.- 5'
d- 3'
5'
-A- B _ ;;;
;:_
2
a_ b
d_
10
------,_R
_.: X:
_ _A__
h-,----c
--a----~
b----c--- --o--
rl
o_
11
F ig. 19-10. Modelo te,;co de recombinacin gentica entre las cromtidas homlogas. l. Apareamiento de las cromtidas.
Los pares de letras Aa, Bb, Ce y Dd simbolizan a los dos a lelos de Jos cuatro genes representados (cap. 20-3). 2. Corte de las
dos cadenas de ADN de una de las cromtidas y ampliacin de las separaciones mediante exonucleasas. Dado que stas remueven nucletidos en direccin 5'-->3', se fonna -en cada cadena cortada- un extremo 3' libre (no apareado). 3. Uno de
esos extre mos invade la cromtida homloga y se coloca en el lugar de una de sus cadenas, la que a su vez se desplaza hacia
e l s itio qu e deja vacante la cadena invasora. 4. Sntesis de ADN en las cadenas cortadas, para reconstruir los segmentos que
faltan. In tervienen polirnerasas que usan a las dos cadenas de la cromtida homloga corno moldes, por lo que los tramos que
l'a ltan se s inteti za n por un mecanismo similar al de la reparacin del ADN (cap. 17-21). Los pasos anteriores conducen a la
ro rmac i n de dos entrecruzamientos o estructuras de Holliday (llamadas as en homenaje al genetista Robin Holliday, quien
d escri bi esos entrec ru zamicntos en 1964). 5. Corte de las dos cadenas a nivel de uno de los entrecruzamientos !flechas).
(, , l ;mp;dlll \: lulcrul de las cad enc,., cortadas en el paso anteri o r. 7. E nc orvadura de ambas cromtidas a la a ltura d el seg und o
('111 11.' 4..' 1'11 'W IIli ut o y ro ta c i n de 1H0 de un a de las cro mti das. S. Formac in de un a estru ctura de Ho lliday iSol Ctrica . 9. orl t' t \11 1111 11 d ~ In . l..'l ld!'ll :l.'l d v l'H d11 (' I'O III i'i lid a (lhduu ). 10 . F n th." J't,'ZH lllit fl l ( l de la s t: ro m r ti das . 11. n uqmiii H,' lutc r;ll d ~ln s ~ n
d t 11 t1N tl ll d f!N 1\11 1., l p tl t/11 q '
352
,
Cromtida r aterna
Cromatida materna
~ 11 1 111111111 1 1 1 111111 ~:
~ 1111 1 11111111111111111 ~:
5
'llllllllll !
1 11
3'
3'
1 'llrrurrms
IIIIIIIII 1111
5' TTT~~~~
!9. LA MEIOSJS
111
~rrmrrn 5.
~: 1111111111 1 11 111111111 ~:
~: 1111111111111 111111111 ~:
Fig. 19-11. Mode lo simpl iticado de cortes y empalmes entre
las molculas de ADN de las
c rorntidas homlogiS du ranle
la recombinacin ge nlica.
353
5'illilll 1 111
1IDIIJ3'
3'
~ 5'
~: 1111111111111111111111 ~:
~:;:F" ~:
111
3'
5'
5'
3'
!
~:~nn::
; ;~~ ::
;1 ;1
J':ciilimm
3'
Fig. 19-14. Cromosomas plumulados o en cepillo. La figura de la izquierda es un esquema de poco aumento que
muestra dos guiasmas y las
asas de cromati na laterales.
La figura de arriba ilustra dos
asas laterales a mayor aumento y la compactacin de las
cromtidas a nive l de l crommero. (Cortesa de O. L Miller Jr.) La micrografa (contraste de fase) permite observar la sucesin de cromme-
354
19 . LA MEIOSIS
Cinetocoros de las
dos cromtidas
hermanas
(unidos entre si)
ANAFASE 1
METAFASE 1
Cinetocoro del
cromosoma
Cinetocoro de una
de las cromtidas
hermanas
Fig. 19-15. Evolucin seguida por las cromtidas hermanas y los cinetocoros duranre
la meiosis 1 y la meiosis !l.
METAFASE 11
ANAFASE 11
355
356
19. LA MEIOSIS
a
DIPLONEMA
DIPLONEMA
./Corona radiante
METAFASE 1
357
Membrana pelcida
movimientos de hiperactivacin
"'~1ft
Fig. 19-17. Consecuencias
genticas de la meiosis en
tres pares de cromosomas,
uno con un quiasma (a), otro
con dos quiasmas (b) y otro
con tres quiasmas (e). Los
cromosomas paternos se representan en azu 1y los maternos en rojo. Los clrculos
marcan las localizaciones de
los centrmeros.
i ~~
ANAFASE 1
1 1\
~
a
V
b
1 1\
j V
ANAFASE 11
FECUNDACION
19-17. Caractersticas de los gametos en el momento de la
fecundacin
La fertilizacin del vulo por el espermatozoide -o fecundacin- es d
paso que inicia el proceso del desarrollo embrionario, y por ese motivo e~
analizada en los libros de embriologa. Aqu solamente ofreceremos una brl'
ve resea de sus aspectos celulares y moleculares.
La fecundacin suele producirse en el tercio externo de la trompa de ra
!opio, adonde arriba el ovocito II -sin haber completado la meiosis II- IUl'
go de la ovulacin (fig. 19-18).
El ovocito es una clula de tamao sumamente grande, que posee numc
rossimas microvellosidades y se halla envueltl por la membrana pell:idn
y las clulas foliculares de la corona radiante (fig. 19- 18). La membrmm
p elcida contiene abundante cantidad de glicoprotenas, entre las cual s s
destacan la ZP2 y. la ZP3 (por zona pellucida). Por su lado, las clulas d la
corona radiante se hallan unidas entre s por un material cemcntanrc 1in o
en cido hialurnico.
El espermatozoide posee una cabeza, un cuello y una cola. l .a figu1 a 1'1
muestra la cabeza y parle d 1 u llo con sus 1' spel'livos I'IIIIIJHIIIt'llh'N, 1\11 lu
ahc~.H oh-ht rtsaltarst la pl t'St' llt'in dlntT UNIIIIIII, I[IU' t. u; 1 .!111 1vado ll <o<~
V l nit~. llltJ,u dt ~ ~11 / IIIIIH hulll,lilku', du1 d lt~t 1 1 11 ul 1 , lu
fhrivatla
Membrana
interna---~
Fig. 19-19. Esquema que muestra algunas estructuras de la cabeza del espermatozoide. Obsrvese el
acrosoma y la aparicin de reas de fusin entre la
membrana acrosmica externa y la membrana plasrntiticn. con la consiguiente formacin el poroS
(ft' l ll ' l ' i (III IU.' III~ )lllic!l),
358
19 . LA MEIOSIS
de los movimientos de hiper activacin impulsa el avance del espermatozoide. As, mientras la hialuronidasa digiere localmente el cemento intercelular,
los movimientos de hiperactivacin hacen avanzar al espermatozoide. Es posible que este mecanismo acte como un filtro selectivo para que lleguen a la
membrana pelcida slo los espermatozoides ms aptos.
2) Reaccin acrosmica. Cuando el espermatozoide alcanza la membrana
pelcida y se pone en contacto con ella, en su prute frontal se desencadena un
proceso llamado reaccin acrosmica, que da lugar a mltiples reas de fusin
entre la membrana externa del acrosoma y la membrana plasmtica del gameto. Ello genera la formacin de poros - por los que se escapan las enzimas
acrosmicas- y luego la desaparicin de ambas membranas (figs. 19-19 y
19-21BC). Por consecuencia, en la regin frontal del espermatozoide, en
reemplazo de la desaparecida membrana plasmtica queda expuesta al extc
rior una nueva membrana, la acrosmica interna (fig. 19-2 1C). El mecanismo
molecular que lleva a la reaccin acrosmica es el siguiente (fig. 19-22):
La ZP3 de la membrana pelcida interacta con un receptor de la mem
brana plasmtica del espermatozoide, que activa a una protefna G. Esta hace
lo propio con la enzima fosfolipasa C, que genera inositol trifosfato (IP3) y
diacilglicerol (DAG) a partir de fosfatidilinositol difosfato (PIP2) .
Como se vio en el captulo 11 -18, el IP 3 abre canales de Ca2+ en la membrana del REL y permite que el ion pase de ese organoide al citosol. Debido
a que en el espermatozoide la mayor parte del IP3 se convierte en inositol te
trafosfato (IP4) y a que ste abre canales de Ca2+ en la membrana plasmti
ca, el ion ingresa desde el. exterior y se incrementa an ms su concentracin
en el citosol. El pH citosUco tambin aumenta porgue la entrada de Ca2'
desde el exterior se halla acoplada a la salida de H+.
Por su parte, el DAG activa a la quinasa C, que desencadena una sucesin
de fosforilaciones en varias protenas.
La figura 19-22 muestra la acti vacin de las fosfolipasas A y D por medio
de la protena G. Dado que la primera elimina un cido graso de la fosfatidil
colina y la segunda remueve la colina, generan lisofosfatidilcolina y cido
fosfatdico (fig. 2-13), respectivamente.
Aunque no se ilustra en la figura 19-22, la protena G activa tambin a In
enzima adenilato ciclasa, que forma AMPc a partir de ATP. A su vez, el AMPl'
activa a la guinasa A, que fosforita a varias protenas.
Finalmente, todos los cambios mencionados hacen que se formen mlti
pies reas de fu sin entre la membrana acrosmica externa y la membranu
plasmtica del espermatozoide, y que esas fusiones den origen a orificios d
dimetros crecientes que eliminan a las membranas. En sfntesis , dichos cmu
bios desencadenan la reaccin acrosmica (figs. 19-19 y 19-21 BC).
Debe agregarse que antes de la reaccin acrosmica tienen lugar dos pro
cesos biolgicos, el reconocimiento y la adhesin de los gametos. Ambo~
son consecuencia de la interaccin de la ZP3 de la membrana pelcida con l'l
receptor de la membrana del espermatozoide.
En los puntos que siguen se ver cmo la reaccin acrosmica hace posl
ble el desprendimiento de la corona radiante del ovocito IJ, el pasaje del ts
permatozoide a travs de la membrana pelcida y la fusin de las memhrnuu
plasmticas de los gametos.
3) Denudaci6n. La denudacin consiste en el desprendimiento ck lu ''"
rona radiante del ovocito JI. Las clulas foli culares de la t:OI"IIIIII Nllll s JHII 1
das por la hlnluronldnsn qu snl de los 11TOSIIIlllls, ya quC' ClNiu J11 lun1 Id
droli w al( idll hiulurui n ')lit' !11:1 llillllti('lll' 11nidu tli , 1'1 1 1111 ' .
359
Receptor
HtPERACTtVACION
4) Penetraci6n de la membrana pelcida. Como se vio, la membrana
acrosrnica interna queda expuesta cuando desaparecen la membrana plasllltica y la membrana acrosmica externa de la cabeza del espermatozoide.
l'osee el receptor PH20 (por posterior head), que interacta con la ZP2 de
la membrana pelcida. Ello le permite al espermatozoide atravesar la membrana pelcida en busca de la membrana plasmtica del ovocito ll. Lo consigue merced a la acrosina, pues esta enzima hidroliza el material que compo11<: la membrana pelcida y fabrica en ella un tnel que sigue una trayectoria
diagonal (fig. 19-210).
De igual manera que en la penetracin de la corona radiante, el avance del
spermatozoide se debe a la fuerza mecnica generada por los movimientos
dL: hiperactivacin. Esa fuerza es del orden de las 3.000 m_icrodinas, sufi ,icnte para romper cualquier unin covalente.
Volviendo a la acrosina, no hidroliza masivamente a la membrana pelciol a. como cabra esperar de una enzima hidro ltica liberada abruptamente en
.. lmedio. Dijimos que fabrica un tnel , lo cual se explica porgue hidroliza peqllc;as y sucesivas porciones de la membrana pelcida por delante del esper"'atozoide. La hidrlisis controlada se debe a que la enzima se libera como
"" precursor, la proacrosina, la cual, a medida que el PH20 interacta con
1111<:vas ZP2 halladas en el camino, da lugar, en dos pasos, a las formas activus de la enzima, la a -acrosina y la ~-acrosina. Como vemos, igual que en la
lll"IICtracin de la corona radiante, el espermatozoide realiza esta tarea de licadalllente y avanza por el derrotero que l mismo va creando.
5) Fusin. Si bien son muchos los espermatozoides que atraviesan la
" ""'nbrana pelcida, slo uno establece ntimo contacto con la membrana
plusmtica del ovocito Il. Cuando esto ocurre, desaparecen sus movimientos
d, hircractivacin.
1\ l"lllllinuacin, las partes de las membranas en contacto de ambos game,, ,,, :.,. 1"11sionan, por lo que entre los dos citoplasmas se establece la continui-
Fig. 19-20. Mecanismo molecular que desencadena la hiperacti vacin del espermatozoide.
360
J9.LAMEJOSJS
Membrana
plasmtica
E
B
ir
Membrana pelcida -
Membrana plasmtica - - -
Membra~~e~
acrosmica
e
F ig. 1921. Fases de la fecundacin. A. Penetracin de la
corona radiante. B. Reaccin
acrosmica. C. Denudacin.
D. Penetracin de la membrana pelcida. E. Fusin de las
membranas plasmticas de los
gametos y reanudacin de la
meiosis li por pane del ovocito !1. F. Formacin de los proncleos masculino y femenino. G. Unin de los proncleos (singamia). H. Metafase
dad que hace posible la entrada del contenido del espermatozoide en el interior del ovocito (fig. 19-21E).
De parte del espermatozoide, la membrana plasmtica involucrada en la
fusin corresponde a la regin ecuatorial de la cabeza (fig. 19-19). De parte
del ovocito interviene cualquier zona de su extensa superficie, excepto la aledaa al ncleo (ste se halla detenido en la meiosis Il). Recordemos que la
membrana plasmtica del ovocito posee numerossimas microvellosidades, y
es precisamente con ellas que se fusiona la regin ecuatorial de la cabeza del
espermatozoide.
Una vez establecida la continuidad entre ambos citoplasmas, ingresan -en
el siguiente orden- la parte posterior de la cabeza, el cuello y la cola del espermatozoide. Luego Jo hace la parte anterior de la cabeza, que es introducida en el ovocito mediante un proceso que remeda una fagocitosis . El material incorporado tiene una evolucin dispar. As, mientras e l ADN y el centrolo del espermatozoide sobreviven, las mitocondrias y las fibras axonmicas no tardan en desaparecer.
La fusin de las membranas es mediada por protenas fusgenas presentes en las dos bicapas lipdicas (cap. 7-41). Se han descubierto varias de estas protenas en la membrana del espermatozoide; por ejemplo, las denominadas DE y PH30, halladas en la rata y en el cobayo, respectivamente. La DE
est compuesta por dos protenas de 37 kDa (D y E), adquiridas durante el
paso del espermatozoide por el epiddimo. La PH30 tambin est integrada
por dos protenas - ambas transmembranosas- , una que se liga a la protena complementaria del ovocito y otra que es responsable de la fusin .
Se sabe muy poco sobre las protenas fusgenas de la membrana plasmtica del ovocito; no se encontraran en la regin aledaa al ncleo, ctondc tampoco existen microvellosidades.
6) Bloqueo de la poli.1-permia. Un ~o lo ~.:~p nuatot.oid ddw f,~ionllr:ll'
con Ic>Votilo. Para que Hl'll asf. lntH la fu si 111 ch- l~>N f' l!llolnrl Nc Jllculll< 'l' ll
\ ' lll ll hit~'~ < ~IIIII J 'IIIIIIfl ~ q llllt ' (lllll d.J pVt WI Itt, 11 !111 dt ~ 11! ~11111111 /1 11 l 11 1 111 111d11 d1~
1""'' lc llo (:
361
362
ESPERMATOZOIDE
OVOCITO
Protelnas
fosforiladas
Ca2
EXOCITOSIS
Durante la anfimixis en cada polo de la clula hue vo hay un par de centro los. Debido a que Jos c uatro derivan del centro lo aportado por el espermatozoide (vase Fusin ), ste tuvo que duplicarse, lo mismo que los dos primeros centroJos hijos (cap. 18- 12).
La anfimixis representa el f in de la fecundacin; con ella se inicia la primera divisin ele seg mentacin de la clula huevo, es decir, el desarrollo embrionario (figs. 19-3 y 19-21!) (vanse los captulos 18-22 y 2 1-7).
ZP3
[~~~~c~~fF~~~~~
g*g gg tg ug
PLA
(pLDI
>pH
Protenas
tosto riladas
l ;~
363
Los mecanismos celulares que llevan a Ja reprod uccin de las plantas son
bastante diferentes de los observados e n Jos ani males. En las plantas superiores el proceso comienza en los rganos reproduc tores masculino (antera) y
femenino (ovario), los cuales generan mic1osporocitos y megasporocitos ,
respectivamente. Estos se dividen por meiosis, que es esprica y oc urre en un
mome nto intermedio entre la formacin de los gametos y la fec undaci n.
Como se observa en la figura 19-24 , al cabo de la meiosis cada microsporocito origina c uatro m icrosporos haploides funcionales. Por su lado, a partir de cada megasporocito se forman cuatro mega sporos haploides, tres de
los c uales degeneran.
Los microsporos se convierten en gam etofitos masculinos, conocidos comnmente como granos de p olen. En cambio, el megasporo que sobrevive
pasa por tres divisiones m itticas y da lugar al gametofito femenino, que
,onrie n ' \>l:ho n(l!'l!ol h PI>idcs. En !u fecundaci n participan tres de estos
llll!'i!' t>rl , tl ,,. lu t lrtltt
v .,. don mcho.~ mfart'.\'.
,,.,,,.
MEIOSIS 11
364
Microsporocito
)/
'""('
0 0
0
Microsporas
(haploides)
1
Gametot1to \
mascu mo o
gr~~~P~~~gz;en
Fig. 19-24. Ciclo vital de una
planta fanergama.
1 \
Semilla
~~
polni~o
Tegumentos (d1plo1des)
~mbnn
\_
Tubo
Megasporo
(haploide)
'
\:::~~:~to
0""
/,
Megasporo
(haplolde)
Por su lado, cada grano de polen genera una estructura accesoria llamada
tubo polnico y dos espermatozoides haploides, uno de los cuales fecunda al
ncleo de la clula ovular. Se forma as la clula huevo diploide, de la que se
origina --en el interior de la semilla- el embrin de la nueva planta. El otro
espermatozoide se une a Jos dos ncleos polares, lo que da lugar a un ncleo
triploide que al cabo de varias di visiones mitticas genera el endosperma de
la semilla, es decir, el material nutritivo del embrin. Como se ve, la semilla
es un mosaico de tejidos en el que el embrin es diploide, el endosperma es
triploide y los tegumentos poseen clulas diploides de origen materno.
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lhuno.:
/\l l'f'~:.
Yanngimnchi
Yt11 k
20
femem"
":;;:====:~
Espermatozoides (haploides)
(d1p/o1de)
Endosperma
;Jan semillas amarillas y, por lo tanto, slo la caracterstica de uno de los padres. En el seguqdo cruzamiento (F2 ), las plantas presentaban las caractersticas de sus antepasado~ con una proporcin del 75% para las semillas amarillas y del 25% para las verdes, o sea, con una relacin 3: l.
M ndcl sostuvo CJII ' el color de las semillas era controlado por un " factor"
' 1'"' s lransntit fa 11 la tlt"h'''""ucia por medio de los gametos, y qu s "fa~:-
,
1
1
366
tor" - conocido ahora como gen- poda transmitirse sin mezclarse con otm~
genes. Mendel enunci que los genes se separan en los hbridos F 1, entran 'JI
gametos diferentes y se distribuyen en los hbridos F2 A causa de ello, est1
ptincipio se denomina ley d e la segregacin de los genes.
Posteriormente observ que las plantas con sem illas amarillas en la F2 po
seen diferentes constituciones genticas. Un tercio de este grupo siempre da
semillas amarillas en la generacin F3, pe ro los otros dos tercios originan
plantas con sem illas amarillas y verdes en la proporci n 3: l . El 25% de plan
tas de la F2 con sem illas verdes, cuando se cruzan entre s, producen siempre
semillas verdes en la generacin F 3 . Ello demuestra que existen dos lneas puras para ese catcter.
Si en los cruza tnientos se representa a los genes por medio de letras y s~.:
designa con la A a l gen para el carcter amarillo y con la a al gen para el carcter verde, se obtiene el siguiente resultado:
Genes parentales
AA;< aa
Generaci n F,
A a XAa
l
l
Generacin F2
Fenotipo
AA
(homocigota
do minante)
2Aa
1 aa
(heteroc igotas)
(homocigota
recesiva)
3 amarillas
1 verde
~
(e
-~
~
~
367
./
~~
""' Q
~ ~
~a
~a
~ ~
~~
~ ~
((
'
heterocigotos (BbSs ).
Cuando dos de los di hbridos de la F 1 se aparean entre s, debido a que cada uno produce cuatro tipos de gametos (BS, B s, bS y bs), al producirse la fecundacin se originan 16 combinaciones diferentes en los cigotos. Nueve individuos de la F2 son de pelo negro y cotto, tres de pelo negro y largo, tres de
pelo pardo y corto, y uno de pelo pardo y largo. Esta relacin fenotpica de
9:3:3:1 es caracterstica del cruzamiento de dos pares de genes.
(j)
~
~~/
368
1 PROGENITORES 1
369
~~o
~~---~
Genotipos
{~
(-
(lli
(~
Espermatozoides
Fenotipos
Genotipos
Ovulos
.,(_~
(,
~)
(~
""'
A--
1 \
1 \
A
~)
:t
a
b
Fenotipos
@@@
Negro, largo
Pardo. corto
Pardo, largo
Drosophila melanogaster, se observa que la ley de la distribucin independiente no tiene aplicacin universal. As, en los cruzamientos de dos o ms
pares de ale los existe una acentuada tendencia por parte de esos genes a quedar ligados, de modo que se produce entre ellos una proporcin de combinaciones diferente de la esperada.
La Drosophila posee slo cuatro pares de cromosomas, lo que eleva laposibilidad de que sus genes se encuentren en un mismo cromosoma. Si dos genes distintos -por ejemplo, A y B - se localizan en un mismo cromosoma,
y sus correspondientes recesivos --a y b- en el cromosoma homlogo, se
obtienen, para esos genes, dos clases de gametos: AB y ah (y no los cualm
esperados: AB, Ab, aB y ab).
La cocxisiCtH.:ia de dos o mfls g n s n 1 lll sn>o no""'"""ll' s dennii>
11:1 li~lllll i('lltll . l,a fi \lll'll . () \ iJII!il l'l l .-1 IIW! ' ill d :IIIH> dl' Jn I>H ' io .i.'l y J11 1'11111>11
\ inri
a
b
""'
A
b
1 \
A
13
370
METAFASE
371
!!
11
ABERRACIONES CROMOSOMICAS
Fg. 20-5. No disyuncin mitlica. Arriba. Metafase normal. Abajo izquierda Anafase normal. Abajo derecha.
Anafase no disyuntiva (da lu-
20-8. En las poli plo id as las c lu las contienen m lt iplos del nme ro
hap loide de cromoso mas, d ifere nt es del d iplo ide
La tabla 20- 1 muestra las dos clases principales ele cambios en el nmero
de cromosomas. En las poliploidas existe un nmero superior de conj untos
haploides - ms de dos-, pero cada conjunto se presenta equilibrado. As,
en las clulas triploides existen tres conjuntos haploides normales, en las tetraploides, cuatro, etc. En las clulas somticas las poliploidas pueden originarse por la reduplicacin ele los cromosomas (caps. 17-4 y 18-24); en los gametos, por la no separacin de los cromosomas en cualquiera de las dos divisiones meiticas.
Cuadro clnico
Frmula
Co'!'plemento cromosmico*
l'oliploidas
Triploidfa
Tetraploida
3n
4n
Aneuploidas
Monosoma
Trisoma
Tetrasoma
Doble trisoma
Nulisoma
2n- 1
2n+ 1
2n + 2
2n + 1 + 1
2n - 2
(ABCD) (ABC)
(ABCD) (ABCO) (B)
(ABCD) (ABCO) (B) (B)
(ABCD) (Al3CD) (A(')
(AIK) (A ll< 'l
A.
c~jomplo
lniiHI/'41111 111 ,
AN AFASE
No disyuncin
Las aneuploidas se producen por una falla en la separacin de los cromosomas hom logos -denominada no disyu n cin-, durante la di visin celular. La causa inmediata de la no disyuncin es la falta de separacin de una
de las cromtidas hermanas en la anafase; as, al atTibar la clula a la telofase, esa cromtida permanece en una de las clulas bijas junto a la cromtida
hermana. Ello da lugar a una clula con un cromosoma de menos y a otra con
uno de ms (fig. 20-5). La no disyuncin se produce generalmente en la
meiosis, pero tambin puede ocurrir en la mitosis.
La meiosis no disyuntiva da origen a un gameto aneuploide que, cuando
se une a un gameto normal, forma un c igoto portador de una ane uploida. Si
al gameto aneuploide le falta un cromosoma, el cigoto resultar monosmico.
Si le sobra un cromosoma, el cigoto ser tr ismico. As, en los individuos
monosmicos se produce la prdida de uno de los cromosomas, mientras que
en los trismicos hay un cromosoma de ms (tabla 20-1 ).
La mitosis no disyuntiva puede ocurrir en la divisin mittica que precede
a la formacin de los gametos o en las clulas derivadas de la divisin del cigoto. En el primer caso, los efectos son similares a los producidos por la meiosis no disyuntiva. En el segundo -<fado que la no disyuncin tiene lugar en los
primeros estadios del desarrollo embrionario- se originan mosaicos, es decir,
individuos que exhiben lneas celulares somticas con cariotipos diferentes.
dtJ
'IPIIII I 11 1H t l
11
illl rl'sli ia l
thJ
nosoma).
!'"
. l
372
373
Normal
Intersticial
Delecin
{
Terminal
ABeBeD
EFGH
Duplicacin
....
Paracntrica
Inversin
{
Pericntrica
AB C D
Translocacin
....
F GH
Translocacin
robertsoniana
A 8
A 8
20- 12. Las c lulas humanas pueden ser afectadas por aberracion es
cro mosm icas
Las alteraciones cromosmicas ms comunes en el hombre estn representadas por aneuploidas (monosomas y trisomas) y por abe1raciones estructurales. Producen malformaciones congnitas graves, retardo mental y esterilidad, situaciones que actan como mecanismos selectivos para eliminar
de la poblacin esos graves desequilibrios genticos.
El diagnstico de las aberraciones cromosmicas puede hacerse antes del
nacimiento, mediante el estudio de unas pocas clulas fetales obtenidas del
lquido amnitico (amniocentesis) o de las vellosidades corinicas (biopsia)
(fig. 20-8).
comunes.
'l
.;
: 1
Miometrio
Ext raccin
de lquido
amnitico
Extraccin
de vellosidades
corinicas
20- 11. Las rad iaciones y los mutgenos qumicos pueden producir
roturas en los cromosomas
Fig. 20-8. Esquema que ilus-
Cavidad amnitica
~ mni
plll'n
1 h 11 l1 IIN
vllo.Jidncil-1 t'o
374
Monosoma
2n = 45
Disoma
XX
Normal
2n = 46
Trisoma
XXY
Klinefelter
2n =47
Tetrasoma
XXYY
Klinefelter
2n = 48
Trisoma
Tetrasoma
XXXY
Tipo Klinefelter
2n = 48
XXX
Metahembra
2n = 47
Tetrasoma
Metahembra
2n = 48
Penlasoma
XXXXY
Tipo Klinctcltcr
2n 49
l'tuu:nintt
M.~t-ll Uhuo
xxxx
Trisoma
XYY
Sndrome XYY
2n = 47
xo
Turner
Cromatina sexual
Disoma
XY
Normal
2n = 46
=
M .l t UhiU I
375
Mujeres
XO I XY
XO / XXY
XO I XXX
Varones
XX / XXY
XYIXXY
XXXY/XXXXY
XO / XY
Cromatina sexual
Tumer
Tumer
Variable
Klinefelter
Klinefelter
Organos sexuales
poco desarrollados
Hermafrodita
- /+
- / ++
+
+
++ !+++
Sndrome XYY. Los individuos afectados poseen 47 cromosomas (44 autosomas + XYY). Se trata de varones de aspecto normal, altos, con trastornos
de la personalidad.
Sndrome XXX. Se debe a la presencia de 47 cromosomas (44 autosomas
+ XXX) y da Jugar a mujeres con fenotipo prcticamente normal. Algunas
presentan distintos grados de retardo mental o caractersticas psicticas. En
sus clulas se observan dos cuerpos de Barr. Tambin se han detectado pacientes con 48 cromosomas (44 autosomas + XXXX), tres cuerpos de Barr y
severo retardo mental.
Sndrome de Turner. En el cariotipo de estas pacientes existen 45 cromosomas (44 autosomas + X) y no aparece la cromatina sexual. Los individuos
tienen fenotipo femenino, suelen ser de pequea estatura, poseen membranas
cervicales (pliegues de la piel que se extienden desde las mastoides hasta Jos
hombros) y sus rganos sexuales internos son infantiles. El ovario no completa su formacin y a causa de esta disgenesia ovrica no se desarrollan los
caracteres sexuales secundarios.
Mosaicos. En los tejidos de estos individuos conviven clulas con distintos complementos cromosmicos. La tabla 20-3 ilustra los mosaicos de cromosomas sexuales ms frecuentes, tanto en varones como en mujeres.
20-16. Existen varios cuadros producidos por aberraciones
cromosmicas estructurales
La aberracin cromosmica estructural ms comn en el ser humano se
produce por la translocacin de un segmento de uno de los cromosomas del
par 21 a un cromosoma del par 13, 14 o 15 (fig. 20-9). Genera sndromes de
Down, pero menos graves y menos frec uentes - representan el 2% de los
casos- , y su aparicin no guarda relacin con el aumento de la edad materna. A veces la presencia del segmento translocado se halla compensada por
la ausencia del mismo segmento en un cromosoma del par 21. En este caso
los individuos son fenotpicamente normales pero portadores de la aberracin, por lo que pueden transferir la malformacin a sus descendientes.
El sndrome del maullido de gato se produce a consecuencia de una delecin en el brazo corto del cromosoma 5. Da lugar a mltiples malformaciones y a un acentuado retraso mental. Adems, el nio emite un llanto extrao, semejante a un maullido.
Otros cuadros de aberraciones cromosmicas estructurales se originan por
la delecin de una parte de uno de los cromosomas X (genera un cuadro semejante al sndrome de Turner) o por la delecin del brazo corto o largo de
ttno de los cromosomas del par 18 (produce alteraciones faciales, esqueltis y oft:lmi as ju111o '<>11 1111 profundo retardo mental).
.1
376
PROGENITORES
NORMAL PORTADOR SANO
11 .. . 1
1 Cromosoma 21
1 Cromosoma 15
11
1 11
NORMAL
1 11
NO
SOBREVIVE
11
1 11
MONGOLICO
11
GAMETOS
1
1
PORTADOR
SANO
DESCENDIENTES
s ric
377
Muchos de los trabajos sobre la evolucin se refieren a la relacin cito gentica entre el hombre y los grandes monos (chimpanc, gorila, orangutn).
Dado que el hombre tiene 23 pares ele cromosomas y Jos grandes monos poseen 24, por lo menos pudo haber tenido lugar una translocacin robertsoniana en su evolucin (seccin 20-1 0). Se cree que el cromosoma 2 del hombre
c:s el resultado de tal translocacin a partir de dos cromosomas de los monos.
Por otra parte, trece pares de cromosomas humanos son casi idnticos a otros
1antos pares de cromosomas del chimpanc, y en Jos restantes cromosomas se
observan inversiones pericntricas y adicin de material cromosrnico. En
suma, en los primates la evolucin de los cromosomas ha sido consecuencia
de fusiones, translocaciones y, fundamentalmente, inversiones pericntricas
de segmentos cromosmicos, todo lo cual permiti seleccionar a los genes
que dieron origen al Horno sapien.>.
El anlisis de la secuencia del ADN mitocondrial tambin tuvo un impor1ante impacto en los estudios taxonmicos. Permiti establecer relaciones genealgicas entre especies ntimamente relacionadas --como la humana y la
de los monos- y reconstruir el posible rbol evolutivo de esas especies.
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',1) :':l,( ,t )
378
La diferenciacin celular
21 - 1. Introduccin
En la primera parte de este captulo, despus de exponer las caracte sticas generales de las diferenciaciones celulares, analizaremos Jos posi bles
mecanismos que generan las diferencias iniciales entre las clulas de los embriones ms jvenes. Luego veremos cmo se forma el cuerpo del embrin
y estudiaremos los mecanismos que dan lugar a las diferenciaciones celu lares - y el modo como se mantienen- en las etapas ulteriores del desarrollo. Finalmente, nos ocuparemos de los genes responsables del establecimiento del plan corporal en la mosca Drosophila melanogaster y de sus posibles equivalentes en Jos embriones de los vertebrados.
En trminos moleculares, diferenciacin celular significa actividad gnia variada en las clulas de un organismo. La especializacin de las clulas
implica la sntesis de protenas especficas (como la hemoglobina en los eritrocitos, Jos anticuerpos en los linfocitos, los neurofilamentos en las neurouas, etc.); as, en cada tipo celular se expresa un gen singular, distinto de los
expresados en los otros tipos celulares (en realidad, las diferencias no son delc>minadas por un solo gen sino por conjuntos de genes distintos). En el captulo 14 estudiamos los mecanismos que regulan la expresin de los genes.
Muchas de las actuales investigaciones en biologa molecular procuran interpretar cmo se expresan los genes en las distintas clases de clulas.
Obviamente, no todos los genes que se expresan en un tipo celular dado
lo hacen en forma exclusiva. Algunos se activan en todos los tipos celulares;
'i<' llaman genes de mantenimiento y son necesarios para construir los componentes comunes a todas las clulas (por ejemplo, las membranas celula" s, los ribosomas, las mitocondrias, las enzimas glucolticas, etc.). En caml>io, los genes que se expresan en forma diferencial (como los de la bemol' lobina, los anticuerpos, los neurofilamentos, etc.) corresponden a las Jlamadus -en la jerga de la biologa celular- funciones de lujo.
J
21
380
Clula
huevo
Rana
Clulas
epidrmicas
Transferencia
del ncleo
~
Renacuajo
Rana
a . : _mbra donante
~~ del cigoto
~
.'
Extraccin de un ncleo
del blastocisto
Extraccin de 101
proncleos derii'J''"'
~ - ~--- ,
+-
111111 hu 1i11lt1
t , IIIVI '
Carioplasto 0
-_.,:::,.
./\..._.._
Citoplasto
Fig. 21-3. Formaci n de carioplastos y citoplastos a partir de clu las adheridas a una
superficie de plstico y tratadas con citocalasina B.
Clula
n(Jflf:(!llfh ulf:lf l
381
1111 (/''"
,.,,, 1111111'"
MITOSIS
382
entre las primeras clulas embrionarias, diversas experiencias sugieren que algunos de esos componentes son factores de transc1ipcin especficos que activan a genes especiales en las sucesivas clulas hijas a medida que la clula
huevo se segmenta.
21-6. La aparicin de las dif erenciaciones celulares en el embrin
y el modo como se desarrolla el plan corporal constituyen
unos de los principales enigmas de la biologa actual
Los organismos multicelulares se desarrollan a partir de una clula huevo que, tras sucesivas divisiones y diferenciaciones, da origen a la totalidad
de las clulas que componen los tejidos corporales. En primer trmino el cigoto experimenta una serie de divisiones rpidas en las cuales
se duplica slo el ADN (fig. 19-3). Debido a que el citoplasma
de las sucesivas clulas hijas se va reduciendo o segmentando
Ectode rmo
con cada ciclo di visiona!, a estas divisiones se las denomina dt
segmentacin o clivaje (cap. 18-22) (fig. 21 -5).
Notocorda
Cabe sealar que a partir del estadio de 16 clulas los cito
plasmas se vinculan por uniones comunicantes (cap. 6- 14) y
- --Endodermo
las clulas perifricas se enlazan entn: s por uuiou s ol'l usiv:w
(cap. 6- 11 ). uaudo 1 t:rnhriu aleauza t'St' t'~l l:ulio adqnit~t Ir
forrna dl' llllil tsli.ra ."l Jlida t'OIIll ~qwdo th 111111 11 , rr r111ivo por,
lnN llnjlt': dr l t'tuhri{lll
t'lllll lt't 'ilw t ' lllt~llrl>l> ' olt IIIUI' II III (l tl' 11 >1 1)
1
Posteriormente el embrin se convierte en una esfera hueca -denominada blastocisto (fig. 21-5EF)- en la que se visualizan dos tipos de tejidos,
el macizo celular inter no, primordio del futuro cuerpo del individuo, y el
trofoblasto, que interviene en la formacin de la placenta. Dos semanas despus el macizo celular interno da lugar a un embrin plano discoidal compuesto por tres capas epiteliales superpuestas. Estas se llaman ectodermo,
mesodermo y endodermo y entre ellas existen inequvocos signos de diferenciacin (fig. 21-6).
Nos ocuparemos ahora de describir cmo surgen las diferencias iniciales
entre las clulas del embrin primitivo. Dado que las clulas ms tempranas
no escapan a la regla de contener los mismos genes que la clula huevo, las
desigualdades iniciales entre ellas deben buscarse en las molculas distribuidas en sus citoplasmas, que heredan al segmentarse la clu la huevo. En
efecto, se considera que el citoplasma de la clula huevo contiene - asimtricamente distribuidas- molculas que se reparten de manera desigual entre las primeras clulas del embrin y que influyen en la actividad de sus genes (fig. 2 1-7). As, esas molculas --que llevan el nombre de determinantes
citoplasmticos del desa!Tollo- actuaran como factores de transcripcin
especficos (cap. 14-7 y seccin 21 -5).
21- 8. La idea de la distribuci n asimtrica de los det erm inantes
cit oplasmticos fue presentada hace ms de 100 aos
IH 1
384
Polo animal
Espermatozoide
Blastocele
Lado dorsal
lo cual produce, en ese lugar, un rea denominada medialuna gris (fig. 21-8).
Ms tarde esa regin da origen al blastoporo, es decir, el lugar donde las clulas superficiales se invaginan para fonnar el mesodermo. En consecuencia,
el punto de entrada del espermatozoide, que es fortui to, determina la posicin
del eje dorsoventral del futu ro individuo (fig. 21 -8).
Blastoeele
~7 ~~
Polo vegetativo
OVOCITO
Medialuna gris
CELULA HUEVO
na Xenopus /aevis. La gastrulacin comienZ:l a las 1O horas de la fecundacin y durante su transcurso se producen
Blastoporo
Cavidad
intestinal
BLASTULA
Futura cabeza
GASTRULA
RENACUAJO
21-10. Los ovocitos acumu lan sustancias para ser usadas du rante
el desarro ll o incip iente del nuevo ind ividuo
En general, los ovocitos -y por ende, los cigotos- son muy volumino
sos, ya que acumulan muchas de las molculas y de las estructuras que se m
cesitan para que se concreten las primeras etapas del desarrollo embrionario
Por ejemplo, un ovocito de Xenopus contiene 100.000 veces ms ARN poli
merasas, histonas, mitocondrias y ribosomas que una clula somtica dd
mismo animal adulto. Una de las razones para acumular esos materiales no tener que fabricarlos durante la embriognesis temprana- es la extraru
dinaria rapidez de las divisiones celulares durante el clivaje o segmentaci n
de la clula huevo. La velocidad es tao alta que no da tiempo para que se sin
teticen nuevos ARN y protenas. Se sabe que la mayora de estas molcuilw
se forman durante la ovognesis, de modo que estn en el citoplasma del ovo
cito -y de la clu la huevo- mucho antes de que se produzca la fecundu
cin. Obviamente, tales molculas son codificadas por genes pertenecienl<''
a la madre, no al embrin.
La primera divisin de segmentacin en el huevo de Xenopus tiene lua1
90 minutos despus de la fetilizacin. Las once divisiones siguientes se pro
ducen cada 35 minutos, en forma sincrnica. Comprese este tiempo con d
de 24 horas utilizado por una clula comn para dividirse. La produccin,, .
estos ciclos celulares tan cortos se debe a que en el ADN de las primeras \T
lu las embrionarias aparecen muchos ms orgenes de replicacin (lo q111'
acorta la fase S) y las clulas omiten las fases G 1 y 02. As, cada mitosis n
seguida por otra en forma inmediata. El ARN comienza a sintetizarse a p:u
tir de la duodcima divisin de segmentacin. La causa que impide esa s(n
tesis en las etapas previas sera la presencia de una sustancia que se um: u lu
cromatina y anula la transcripcin del ADN. Dado que su cantidad seda .u
ficiente para bloquear el ADN de hasta 4.000 ncleos, esa sustanc ia s a"
tara en la duodcima divisin de segmentacin, moment o en lJII los 1u
comienzan a expresarse.
En mm;has ~:sp i s lalo ;1ii1.acin dt l:ts lnol tlll:ts IIJIIHI IHin:; 11111 11 Vn
l' ito 1111 St' h;lila i'ijada ,,. llllh'lllllllll. l'111 <' i< ' IIIJ'III. 1' 11 tl l1111 VI>,, 't 'tlll/ '11 1 l11
,.
\llllftl
dt
1 Hltlld ll
d f
385
llllllllhl/t llch
21-13. Los va lores posiciona les de las clula s e mbri onarias crea n
las bases para la apa rici n de los fe nme nos inductivos
Las sustancias involucradas en la generacin de las primeras diferenciaiones tienen una responsabilidad adicional: dejar establecidos los cimientos
que condicionan la aparicin de las diferenciaciones futuras. En efecto, a medida que los grupos celulares se ubican en sus correspondientes emplazant icntos corporales, esas sustancias les confieren a las clulas determinados
vulnres poslclnnuk~. di Nti nl tts entre s. Estos valores comienzan a tener vi1 l' lll'illll p11rtir tl lnuult 11111 1'11 CJI Il' lus ~: lulas mbrionari as se dislribuy n en
1'111 1111111 1 mlll'ln Jlhuw frllumlnnl'
ttt t'lt JIIt!l pil<l lui< ' IIJ" '1'"' lit
'
l!:
386
2 1. LA DIFERENCJAC!ON CELULAR
(fig. 21-6)-, lo que da lugar a relaciones de vecindad entre Jos grupos celulares que hacen posible la influencia de algunas clulas sobre otras. As, en
este contexto una clula puede actuar sobre otra -la primera emitiendo una
seal y la segunda diferencindose- al posibilitar sus respectivos valores
posicionales tal accin y tal reaccin . En otras palabras, los valores posicionales crean las bases para la aparicin de los fenmenos inductivos propulsores de la mayor parte de las diferenciaciones venideras. Los estudiaremos
despus de analizar cmo se establece el modelo corporal en los embriones
de los mamferos.
21-14. El plan corpo ral se est a blece muy temprano en los embriones
le u lo de
u n
l /lc1 ,
d1'rlfiiH ~.
387
l
1
,
:1
[.!
11
!'
I "IIIIIIN I11 H
lllJIII',Illll
388
minuyen a medida que tluyen por los citoplasmas de las cl ulas. Segn sus
posiciones en el tejido inducido, las clulas reciben distintas concentraciones
del morfgeno. motivo por el cual se convierten en tipos celulares diferentes.
Ms an, cada umbral de concentracin del morfgeno le provee a las clulas un valor posicional singular. Este se conserva en forma indeleble independientemente de que las clulas se mantengan juntas en el tejido o se separen y se siten en puntos distantes del embrin. Los distintos valores posicionales crean las bases para las conductas futuras de las clulas, incluida la aparicin de nuevas diferenciaciones.
2 1-18. En eta pas ms avanzadas del desarrollo se producen
inducciones entre tejidos distantts
Las clulas adquieren el "compromiso" de cambiar antes que pueda descubrirse que estn diferenciadas. Este compromiso previo, llamado determinacin, es irreversible y puede ser fijado por un determinante citoplasmtico o por una sustancia inductora. Existe, entonces. un perodo de latencia
- que vara en cada tipo celular- entre el instante en que la clula queclu
determinada y el momento en que se hace evidente su diferenciacin.
21-20. Cuanto menos diferenciada se halla una clula,
mayor es su potencia lidad evolutiva
389
En algunos tipos celulares la potencialidad se man tiene relativamente elevada en forma permanente aun
Significado evolutivo
eu la vida posnatal. Por ejemplo, en la mdula sea
existe una clula multipotencial que da origen a los eritrocitos, a los granu locitos, a los linfocitos, a los monoPotencialidad evolutiva
citos y a las plaquetas.
Por otro lado, en situaciones vinculadas con la reparacin de tejidos, clulas que ya han alcanzado su signi l"icado evolutivo final suelen desdiferenciarse y retroFig. 21 -10. Diagrama que receder a un estado ms primitivo. imprescindible para su multiplicacin. Veapresenta la disminucin de la
mos el siguiente ejemplo: si se extirpa una parte del hgado, algunas clulas
potencialidad evolutiva y el
del sector no ex tirpudo se desdiferencian y se multiplican (cap. 18-28); reaumento inversamente proporcional del signijicado evoluticuperado el tamao del rgano, vuelven a diferenciarse y recobran las caracvo en los tejidos embrionarios.
tersticas de las clulas hepticas origi nales.
No ex isten constancias de que una clula pueda desdiferenciarse hasta
reasumir un grado de pote ncialidad evoluti va tal que le permita volver a diferenciarse en otro sentido, esto es, en un tipo celular distinto de aquel al que
perteneca. Es que, una vez que las clulas fueron determinadas, sus estados
di ferenciales qu0dan establecidos a perpetuidad. Veremos en seguida que si
la clula se divide, la estabilidad de su diferenciacin se transmite a las clulas hijas. hecho que ~e repite de generacin en generacin.
2 1- 21. Los estados dt' diferenciacin se mantienen estables
y st transmiten a las clulas hijas
390
d1
1'
O Vt)t 'l lt
391
ili&&&~,M+NJI
Disco imagina!
'1
392
gen y otro, conocida como caja hometica. Su nombre se debe a que fue descubierta en los genes hometicos.
Se han descubietto genes con caja hometica en todas las especies estudiadas -incluida la humana-, ordenados en los cromosomas de modo semejante a los de la Drosophila. Tal hallazgo ha llevado a suponer que los mecanismos genticos responsables del desarrollo del plan corporal se encuentran difundidos en la mayor parte de los organismos multicelulares. Refuerza esta hiptesis el hecho de que en los embriones de los vertebrados se expresan varios genes con caja hometica en las clulas de los somitas y del tubo neural,
rganos que presentan una organizacin metamrica anloga a la de los segmentos de la Drosophila. No obstante, las extrapolaciones en torno a este punLo deben realizarse con cautela, por un lado porque para muchos tal analoga
no existe y, por otro, porque en el ann ado del modelo que lleva a la formacin
del cuerpo de los vertebrados parecen prevalecer los fen menos inductivos.
BIBUOGRAFIA
111
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is nn axiul
mcsod~rm
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La muerte celular
La muerte de las clulas es un fenmeno comn durante el desarrollo embrionario, necesario para remover tejidos provisorios (por ejemplo, las membranas interdigitales durante la formacin de los dedos), eliminar clulas superfluas (como ocurre con casi la mitad de las neuronas en el curso de la ne urognesis), generar conductos, formar orificios, etc.
Tambin se producen muertes cel ulares durante la vida posnatal, cuando
el organismo necesita remodelar tejidos o remover clulas daadas, innecesarias, redundantes, envejecidas o peligrosas para su salud, como lo son las
clulas infectadas, las tumorales o las autorreactivas (por ejemplo, los linfocitos T que reaccionan contra el propio organismo).
Puesto que las clulas destinadas a morir suelen perecer para que sobrevivan las restantes del cuerpo, puede decirse que protagonizan una suerte de inmolacin biolgica. Estas muertes celulares fisiolgicas o programadas oculTen al cabo de una serie de cambios morfolgicos que reciben el nombre de
apoptosis (del griego ap, separado de, y pt6sis, cada), trmino que se usa
para diferenciarlas de las muertes celulares accidentales -producidas por
traumatismos, sustancias txicas , obstrucciones vasculares, etc.- , que se denominan necr osis.
22- 2. La apoptosis genera cambios celulares caractersticos
Los cambios que experimentan las clulas cuando mueren por apoptosis
son caractersticos. Se deben a que se activan unas proteasas citoslicas especiales llamadas caspasas (por f.YSieinyl QJJ2.artate proteinases) y ocurren en
el siguiente orden (fig. 22-l):
1) El citoesqueleto se desarma debido a la ruptura de sus fil amentos. Como consecuencia, la clula pierde contacto con sus vecinas (o con la matriz
extracelul.ar) y se vuelve esfrica.
2) La clula se encoge porque el citosol y los organoides se condensan sin
ser afectadas sus estructuras. La condensacin se debe a que se altera la permeabilidad de las membranas celulares.
3) Los laminofilamentos se disocian, con la consiguiente desintegracin
de la envoltura nuclear.
4) La cromatina se compacta y las molculas de ADN se seccionan por accin de una endonucleasa, lo cual divide al ncleo en pequeos fragmentos
que se distribuyen en el citoplasma.
5) 1) la sii(WII ki.- d t la c l11l a c m c rg n num rosas protrusion ' S, a si tod 1:,
IIIH
lt llli '
22
394
6) Luego las protrusiones se desprenden, convertidas en fracciones celulares llamadas cuerpos apoptt icos. Cabe sealar que sus organoides se hallan relativamente bien conservados.
7) Las fosfatidilserinas de las membranas que envuelven a los cuerpos
apoptticos -previamente localizadas en la monocapa citoslica de la membrana plasmtica (cap. 3-3) - se trasladan a la monocapa externa.
8) Finalmente, atrados por estas fosfatidilserinas, numerosos macrfagos acuden al lugar de la apoptosis y fagocitan a los cuerpos apopttcos.
Como se ve, a diferencia de la necrosis, la remocin de las clulas muertas por apoptosi s preserva la arquitectura original de los tejidos, puesto que
no da lugar a reacciones inflamatorias ni produce cicatrices.
\
Cuerpo apopttico
395
Macrfago
(~.:ap.
(, 1 11
396
Factor trfico
397
Factor trfico
e\
Receptor
MME
EIM
MMI
......--.-........--.
= =o
o==
o = ==.::.."'()
= =o
==
=
=
()::::::'::==0
o:=:::: :==o
()::::::: = o
o=:::.:
==
o=: =:::::::::o
::=:=()
==
Bcl-2 inactiva
~ ;;;;
=-==~ =~e-,
~=
= =
:::::::0
t=:;::~.,~J=l
{):::;::::::
~=
C1tocromoc~~ Apaf-1
Procaspasa
----
~=
:=:.':;()
PTPC
o:==: :::::::::0
():::.:= ~
~~
o--"= ::::--0
()::::::::::=0
~~
=
=
Caspa sa 9
Caspasa 3
APOPTOSIS \
A
cida por el TNF es la unin de sus tres subunidades con los dominios externos
de las tres subuniclades del receptor TNF-R (fig. 22-3). Ello rene a estas ltimas -el receptor se trimeriza- y hace que sus dominios citoslicos se conecten con la protena adaptadora TRADD (por TNF receptor-associated
death domain), la que a su vez se une a otras tres protenas adaptadoras, denominadas FADD (por Fas receptor-associated death domain), RIP (por recep tor-interacting p rotein) y TRAF (por TNF receptor-associated factor).
Las dos ltimas protenas se relacionan parcialmente con la apoptosis, a
diferencia de la FADD, que se une a la procaspasa 8, la escinde y transforma
en caspasa 8. Luego esta enzima activa a la procaspasa 9 y la convierte en
caspasa 9, que como se vio en la seccin anterior escinde a la procaspasa 3
y la transforma en caspasa 3. Los pasos que siguen hasta que se llega a la
apoptosis son similares a los descritos en la seccin 22-4.
El FasL (por f ascicle ligated) es elaborado por linfocitos T citotxicos y
linfocitos asesinos naturales a causa de algunos cnceres e infecciones. Debido a que el FasL no se secreta sino que se sita en la membrana plasmti,a, para que pueda interactuar con el receptor Fas es necesario que los linfo,ilos 111Cnc ionado1: <'t llahlen contacto con las clulas cam:crnsas 11 infc tadas
(lq s. ll lt ~v " 11
398
399
LINFOCITO T CITOTOXICO
O ASESINO NATURAL
FADO
Caspasa 8
@------
Procaspasa 8
Procaspasa 9
~~-----@
CELULA INFECTADA
O TUMORAL
FADO
Caspasa 8
Caspasa 9
----
Procaspasa 9
Caspasa 9
'
'
cap.
~
o a a acumulacin en la clula de perxido de hidrgeno (H2Q2) o de
amones superxidO (Q2- ) (caps. 10-2 y 10-3).
. Ante la presencia de esas alteraciones suele intervenir la protena P53 denvad~ del gen supresor de tumores p53. En el captulo 18-29 se dijo q~e la
protema P53 estabiliza el c1clo celular en la fase Gl y controla la presencia
de alteracwnes en el ADN para procurar su reparacin. Cuando no logra repararlas Y son peligrosas para el organismo, la propia protena P53 induce la
muertep de la clula a fin de impedir el traspaso del ADN daado a 1as ce' 1u 1as.
h..
IJ3S. ara ello la P53 inactiva a la Bcl-2, lo cual pone en marcha el mecanismo que conduce a la apoptosis descrito en la seccin 22-4 (fig. 22-2B).
, A menudo se halla alterado el mismo gen p53, por lo que genera una pro
tema P53 ~.efectuosa, ~.ncapaz de controlar el estado del ADN y de condu~:ir
a la c~lula al SUICidiO . Por consecuencia, si se trata de un tipo de clula qm:
se divide, las clulas que descienden de ella acumulan alteraciones a Jo Juro
de las sucesivas divisiones. Este hecho es grave cuando ~e af'ctan )\ljll -~ 1; 1
phcados en la regulacin ele la pmli~rac in clular, ya qul' ptu1kn . 111- 111 . , 11
a do s11111as l'lasl'S <k ,ou ,.,, .., (1 ' 111' 1H 1? ),
~~----@
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APOPTOSIS 1
Procaspasa 8
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400
rr
FAS E B J. l l :843.
23-1 . Introduccin
La observacin de las estructuras biolgicas se ve dificultada por el hecho
de que las clulas son muy pequeas y transparentes. Ms difcil an es descubrir su organizacin molecul ar y establecer de qu manera actan las molculas para determinar las estructuras y las funciones celulares.
El extrao rdinario progreso experi mentado en los l timos aos por la biologa molecular de la clula es consecuencia del desarrollo de nuevos mtodos para el estudio de los componentes celulares, basados en la aplicacin
de tcnicas bioqumicas y biofsicas de ltima generacin. Debido a que actualmente el ntnnero de metodologas experimentales es muy grande, la idea
de describirlas exhaustivamente en un libro de estas caractersticas resulta
imposible. As, el presente captulo no es ms que una resea de los mtodos generales que se emplean para descifrar las estructuras y las funciones
celulares.
Se describirn los principios generales de la microscopia ptica y electrnica, algunos mtodos especiales que hacen posible el estudio de la clula viva, diversos mtodos de citoqumica, inmunoqumica, radioautografa y fraccionamiento celular, y las tcnicas que se emplean para el anlisis molecular
de los c idos nucleicos.
MICROSCOPIA OPTICA
23- 2. Microscopio ptico
En el captulo 1 se describieron los lmites de resolucin del ojo humano
y de los distintos tipos de microscopios (fig. l-1 ). El ojo es capaz de detectar
variaciones en la longitud de onda y en la intensidad de la luz. Los adelantos
de la microscopia permitieron aumentar ambas posibili dades, tanto mediante
el uso de instrumentos que amplan el poder de resolucin como de tcnicas
que contrarrestan la transparencia de las clulas au mentando el contraste de
sus estructuras.
La mayora de los componentes celulares son transparentes, a excepcin
de algunos pigmentos citoplasmticos que absorben ciertas longitudes de onda de la luz. La baja absorcin de esas longitudes por la clula viva se debe
a su alto contenido de agua, aunque despus de desecada sigue presentando
un contraste muy escaso. Un medio para contrarrestar esta limitacin consis1 en emplear colorantes que tian selectivamente los distintos componentes
<: lulares introduciendo diversos compuestos que absorben longitudes de ontlit s pcc fi~.:as. S in <'llthiiiJII t, 1;11
liiVi
m licncn ,1
I 1111111 V~
111111 11
23
402
an, antes de ser coloreados los tejidos deben ser fijados, deshidratados, incluidos y seccionados, y todos estos procedimientos generan cambios qumicos y morfolgicos en las clulas y en la matriz extracelular.
403
MICROSCOPIO ELECTRONICO
MICROSCOPIO OPTICO
j~ Observador
- Fuente de e lectrones
- -- - Condensador
~&------ Muestra
1- - - - -- Objetivo
0,61 A.
Lmite de resolucin = -
-AN
~-----
Proyector
"'VObservador
1
AN = n . seno o.
Imagen en pantalla
l=====:t
celulares menos organizadas, como el citosol, la preservacin es difcil, de
modo que con frecuencia se producen artificios de fijacin.
Cuando se intenta mantener intacta la composicin qumica de los componentes tisulares se uti lizan mtodos de fijacin fsicos. El ms conocido es
el mtodo de congelacin-desecacin, que consiste en la congelacin rpida
del tejido y su deshidratacin en el vaco a baja temperatura. La fase de congelacin comienza con la introduccin de pequeas piezas de tejido en un bao a una temperatura de -160 a -190 e, lograda con nitrgeno lquido. Tambin se emplea la fijacin con helio lquido a una temperatura cercana al o
absoluto (Kelvin). La desecacin se realiza al vaco entre -30 y -40 c. En
tales condiciones el hielo sublima a vapor y se produce la deshidratacin de
los tejidos.
Las ventajas de este mtodo son obvias: no causa retraccin del tejido, la
fij acin es homognea en toda la pieza, no hay extraccin de sustancias solubles, la composicin qumica se mantiene prcticamente sin cambios Y la
estructura se conserva con muy escasas modificaciones, generadas por los
cristales de hielo. La rapidez de la fijacin tambi n permite sorprender a las
clulas en momentos funcionales crticos.
tu lt l l I P II IPN
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404
405
2> 7. Microscopio de fa se
A
ms grueso.
JaS (..'(- JuJaS fllll' jltl~a"t' ll llllll ' t'IJIU:; I 'IHI J',lllfll l/l 'lllll llltl, t ' lllltll
El microscopio de interferencia se basa en principios similares a los del microscopio de fase, pero
tiene la ventaj a de dar resultados cuantitativos.
Este instrumento permite determinar cambios en
el ndice de refraccin, mientras que el microscopio
de fase slo revela las discontinuidades ms notables. Adems, las variaciones de fase se pueden ret1ejar en cambios de color tan acentuados que las
clulas vivas parecen coloreadas.
Un tipo especial de mjcroscopio de interferencia
es el llamado microscopio de Nomarski, en el cual
un rayo de luz nico atraviesa el material y el objetivo y luego se di vide en dos rayos que se interfieren entre s por medio de un prisma bi.rrefringente.
'1':1mbin se utilizan filtros que actan como polarizadores y analizadores y un prisma compensador
ubicado en el condensador. La imagen resultante
pr s nta un rclicvr l'ararl crstico (fig. 23-4). Este
111inoscopio t'S p ntl t '" li """ ' llt c 1iil para 1 estudio
11 1 l t ufii ii J! II
de
(f7;duu). f ,O S
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406
MICROSCOPIA ELECTRONICA
electrones se concentran en el plano donde se coloca el material. Una segunda bobina funciona como una lente objetivo, por lo que da una imagen agrandada del objeto en observacin. Esta imagen es recibida por una tercera "lente" electromagntica, que al actuar como el ocular o lente de proyeccin aumenta la imagen que proviene del objetivo. La imagen final se observa sobre
una pantalla fluorescente o se recoge en una placa fotogrfica (fig. 23-1).
A pesar de las semejanzas, entre el microscopio ptico y el microscopio
electrnico existen grandes diferencias, algunas de las cuales corresponden al
mecanismo de formacin de la imagen. En el microscopio electrnico dicho
mecanismo se basa en la dispersin de los electrones, que al chocar con los
ncleos de los tomos del material se dispersan de forma tal que caen por fuera de la apertura de la lente del objetivo. En esta dispersin -llamada elstica- la imagen observada en la pantalla fluorescente refleja la ausencia de
esos electrones, ya que -como vimos- caen fuera de la apertura del objetivo. Adems, la dispersin se debe a mltiples colisiones entre los electrones,
que disminuyen la energa de los que logran pasar. En este caso la dispersin
se llama inelstica.
La dispersin de los electrones depende del espesor y la densidad molecular del material y del nmero atmico de los tomos que lo componen. Amayor nmero atmico, mayor dispersin. Gran parte de los tomos que integran las estructuras biolgicas tienen un nmero atmico bajo y contribuyen
muy poco a la formacin de la imagen. Por esta razn, el material debe ser
procesado con tomos pesados para aumentar su contraste (seccin 23- 13).
El poder de resolucin del microscopio electrnico es tan alto que la imagen del objetivo puede ser aumentada por el ocular en una proporcin mucho
mayor que la lograda con el microscopio ptico. As, con un aumento inicial
del objetivo de IOOx, se puede ampliar la imagen con la bobina proyectara
unas 200 veces, lo que equivale a un aumento de 20.000x. Con los instrumentos modernos se obtienen mayores incrementos todava, ya que poseen una o
ms lentes intermedias que permiten lograr aumentos de hasta l .OOO.OOOx.
Ms an, los negati vos fotogrficos pueden volver a aumentarse, lo cual posibilita aumentos finales de 10.000.000x cuando la resolucin de las imgenes lo permite.
Otra diferencia con el microscopio ptico es que el electrnico ofrece una
mayor profundidad de foco.
407
408
409
1. Congelacin y fractura
3. Aplicacin de metal
!!!1!1' !
4 . Aplicacin de carbono
,=
5. Extraccin de la rplica
Fig. 23-5. Arriba. T cnica de congelacin-grabado. l. Congelacin del tejido y fractura con un instrumento cortante. 2. Exposicin de uno de las fragrnenlos y grabado de su super ficie por sublimacin del hielo al vaco. 3. Partes de la superficie grahnda se c ubre n con un nwla l a plicado e n forma o blicua. 4. Las 'h cas de me ta l y las que se hallan e ntre e llas se c ubre n con c:lr1nno, qn( st aplit a~ nu 1111 ll nr tdn eh- 1)0. 5. Disoluc in de l tejido y extraccin de la rplica de nlctal~c.:mhono puna st'l' oh.HT
v:uln cnn cl lll it' HI/jl "1' .. ' lt IH IHt t ' ' Ah1~jn. IU pliea d l' \lll i l t'L~ Iula de rn(' d~,. (..T holla. St oh.'>t ' I VII II In: pnw :. nt~t ' l c !u c, (/ 'N I,
cl nn, hn t N l , lu m cdll u '' 111 11 h u r 1 N ) ,1( ,nrn pkjn ek C, d,i ({;) y 111111 v ll'lln ln 1 \' l. , 0011 (C'11rh' 1flt de 11 ll rn 11111 n 1
410
411
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412
CITOQUIMICA
23-20. Los mtodos citoqu micos permiten identificar co mpuestos
qu m icos en sus loca lizaciones celu la res originales
El principal objeti vo de la citoqumica consiste en la identificacin in si
tu de los diferentes compuestos qumicos de las clulas. Este objetivo nos(\
pnP
ud ll'l ud ll'l
11 (11 h ji d111~
4 1J
414
Diversos componentes celulares tienen la propiedad de absorber especficamente la luz ultravioleta. As, los cidos nucleicos la absorben en la banda
de 260 nm, mientras que las protenas lo hacen en la de 280 nm. Estas sustancias pueden anali zarse cuantitati vamente por medio de instrumentos denominados citofotmetros. En los cidos nucleicos la absorcin especfica de la
luz se debe a la presencia de las bases purnicas y pirimidnicas, por lo que
es semejante en el ADN, el ARN y Jos nucletidos. En consecuencia, la citofotometra con luz ultravioleta permite la localizacin de los dos tipos de cidos nucleicos, sin distinguirlos entre s.
INMUNOCITOOUIMICA
23-26. En las reacciones inmunocitoqumicas se utilizan
anticuerpos marcados
La inmunocitoqumica se basa en las propiedades antignicas de los com
ponentes celulares, que por eso pueden ser detectados mediante anticuerpor~
cuando a stos se le acoplan marcadores capaces de ser vistos con la ayuda
del microscopio ptico, el microscopio de fluorescencia o el microscopio
electrnico.
Mtodos directos. La figura 23-7 ilustra tres mtodos de observacin di
recta del complejo anticuerpo-componente celular. En el primero el ant i 'ttl'l
pose conjuga con un colorante fluorescente que se detectu, scg1n s vio, ro11
el microscopio de fluorescencia. En el segundo 1 a11ti u 1po s< 111a1'n 1 ro11
una susta11 ia radia<tivn (111>1.-jolllplo, Iritio) que S<' nvcla lllcdimll<' 11111 111
clioalltOitlllffn (:11'<'1'11111 '1 ' '!) 1-:ta cl " '" '''"' 1'111111i1auap" u llun 111 p< '" ~
415
dasa, una enzima que en presencia de diaminobencidina y perxido de hidrgeno produce un depsito opaco visible con el microscopio. Adems de la peroxidasa se usan otras enzimas, como la fosfatasa alcalina y la ~-galactosida
sa. Finalmente, otro mtodo inmunocitoqumico de observacin directa emplea anticuerpos acoplados a la ferritina, que es una protena rica en hierro
opaca a los electrones.
Mtodos indirectos. Cuando la sensibilidad de los mtodos directos es
baja debe recurrirse a los mtodos indirectos, en los que la imagen del complejo anticuerpo-componente celular se amplifica debido a que se introduce
un segundo anticuerpo (fig. 23-8). Los dos anticuerpos se obtienen de animales diferentes. Por ejemplo, si el primero se extrae del conejo, el segundo debe ser un anticuerpo anticonejo obtenido de la cabra o la oveja. Igual que en
los mtodos directos, el segundo anticuerpo se marca con colorantes fluorescentes, sustancias radiactivas, peroxidasa o ferritina.
Otro mtodo inmunocitoqumico indi recto que requiere la ayuda del microscopio electrnico se basa en la aplicacin de partculas de oro coloidal,
las cuales son muy opacas a los electrones. Estas partculas se rodean con
protenas extradas del Sraphylococcus aureus -llamadas protenas A- , que
tienen la propiedad de interactuar con el extremo libre del anticuerpo. Las
partculas de oro son fciles de descubrir con el microscopio electrnico. Ms
an , debido a su pequeo tamao permiten identificar claramente los componentes celulares y hacer una estimacin cuantitativa de .Jos mi smos.
RADIOAUTOGRAFIA
23- 27. La radioaut ograf ia tiene mlt iples aplicaciones
La radioautografa se basa en la marcacin de componentes celulares con
r adioistopos, los cuales pueden demostrarse por su capacidad de interactuar
con los cristales de bromuro de plata (BrAg) de las emulsiones fotogrficas.
As, el radioistopo es incorporado a un componente de la clula y luego localizado mediante una emulsin fotogrfica. Para ello, el tejido con el componente celular marcado se pone en contacto con la emulsin fotogrfica durante un tiempo y la radioautografa se revela como una fotografa comn.
Luego la imagen fotogrfica se superpone con otra del tejido (que se proces para ser examinado con el microscopio) y se obtiene una idea bastante precisa sobre la localizacin del componente celular que lleva la marca del radioistopo.
La tcnica radioautogrfica ms usada es la que emplea emulsiones fotogrficas lquidas con cristales de BrAg. El mtodo comprende las siguientes
etapas (fig. 23-9): l ) el corte del tejido se monta sobre un portaobjeto o una
grilla y se sumerge en la emulsin fotogrfica a 45 e; 2) el preparado queda a temperatura ambiente hasta que la emulsin fotogrfica forma una pel..:ul<l de gelatina sohrl' la superficie del tejido; 3) el conjunto se guarda varios
d as o s<'lllatlll' 111 1111 11 '"i" 111'1'111 ti a - para que nn ingrese la luz- a rin d
416
417
-Portaobjeto o grilla
Grano de plata
- ' - - - - - Gelatinn
~------Tejldto
Portaobjeto o grlll
que la radiacin que emite el radioistopo incida sobre los cristales de BrA
de la pelcula y convietta a los iones Ag en granos de plata metlica; 4) la p.lcula se revela y los granos de plata se visualizan como puntos oscuros.
El radioistopo q ue ms se usa es el tritio (lH). Por ejemplo, se utiliza Ji
midina tritiada para estudiar el metabolismo y el mecanismo de replicadon
del ADN, ya que la timidina es un nucles ido especfico de este cido 1111
cleico. Similarmente, se emplea uridina tritiada para estudiar la formacin v
la dinmica celular del ARN. Por otra parte, en el ejemplo que aparece en h1
figura 23-10 puede verse que los ncleos marcados con timidina tritiada q111
se hallan en el fondo de las criptas intesti nales de un ratn inyectado han K
horas, aparecen en el ex tremo libre de las vellosidades intestinales a las 1(,
horas de la inyeccin. As, el marcador revela en forma grfica la evolud un
de alg unas clulas intestinales, mostrando que se multiplican en el fondo,,
las criptas, recorren el epitelio y mueren en la punta de las vellosidades.
En el ejemplo de la figura 23- 11 se realiza la separacin de las fracciones celulares mediante el mtodo de ultracentrifugacin diferencial, que requiere el empleo de ultracentrfugas. Al principio todas las partculas se
hallan distribuidas homogneamente, pero luego de la centrifugacin se depositan en el tubo a distintas alturas de acuerdo con sus respecti vas velocidades de sedimentacin. Las tcnicas de ul tracentrifugacin se facilitan si
previamente se establecen gradientes de densidad, los cuales pueden ser
continuos o disconti nuos. Para lograr gradientes discontinuos se colocan en
el tubo de la centrfuga sucesivas soluciones de densidad creciente, por
ejemplo, soluciones de sacarosa cuya molaridad, parti endo del fondo del tubo, vara entre 1,6 y 0,5 M. Una vez formado el gradiente, se coloca la muestra en el tope de la solucin, que entonces se centrifuga hasta que las distintas partculas a lcancen su posicin de equilibrio con respecto a las sucesivas
fases del gradiente.
La ultracentrifugacin permite separar partculas an ms pequeas -como virus y macromolculas (protenas, cidos nucleicos)- en la ultr acentrfuga a naltica. Con este aparato se determinan los coeficientes de sedimentacin de esas partculas, que como se vio en el captulo 16-9 se expresan en unidades Svedbergs o S.
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418
419
Pero las poblaciones celulares pueden ser separadas mucho ms eficientemente mediante un instrumento llamado citmetro de flujo, en el que las clulas fluyen una tras otra por un tubo muy delgado. Son discriminadas -y
entonces separadas- de acuerdo con la fluorescencia que emiten. El fluorocromo es agregado en los distintos tipos celulares mediante anticuerpos especficos (seccin 23-26).
Homogeneizado
En el captulo 2-11 definimos el mecanismo que da lugar a la electroforesis y vimos que cada protena tiene un punto isoelctrico caractestico.
Ahora veremos cmo pueden ser utilizadas estas propiedades para separar a
las protenas.
En la tcnica llamada de enfoque isoelctrico se hace la electroforesis de
las protenas a travs de un gradiente de pH. Las protenas se desplazan hasta que alcanzan un pH igual al del punto isoelctrico. En ese momento la migracin en el campo elctrico se detiene debido a que las protenas tienen
carga cero.
Se han combinado las tcnicas de enfoque isoelctrico y de electroforesis en geles de poliacrilamida para la separacin bidimensional de las protenas. La figura 23-12 muestra cmo se pueden aislar varios cientos de protenas celulares. Esta tcnica aprovecha dos propiedades de las protenas:
primero las separa por sus cargas (punto isoelctrico) y luego por sus masas
(peso molecular).
Cuando a las protenas se les agrega el detergente inico dodecilsulfato de
sodio (SDS), se separan principalmente por su peso molecular. Ello se debe
a que el SDS se une a las protenas y les confiere un gran nmero de cargas
negativas; se reduce as el efecto de las cargas, de modo que las protenas se
mueven segn sus masas: las protenas pequeas son ms rpidas que las
grandes porque encuentran menos resistencia para atravesar los poros moleculares del gel de poliacrilamida. Este tipo de electroforesis se usa tambin
para determinar el peso molecular de las protenas.
Homogeneizacin
1G
20 min .
Clulas intactas
1.000G
20min.
..
Ncleos
10.000 G
20 min.
105.000 G
120 min.
Oo 0
00
ooo 000 00 o0 o oo
o
o o o o
Desoxlcolato de sodio
105.000 G
20 min.
Retlculo endoplasmtico
'>1'1
fltiH"tlllt l~
t' ,
llllllll o'
Fig. 23-11. Etnpn.< de In tcnica de cenlrifugacin diferencial. En el lado izquierdo se observa un trozo de hfgado homogcnoizn lo y somcll<lo 11 111111 'llrl d contrifugnciones de fueras centrifugas crecientes. En el lado derecho se ihtslrnn 11111 'ltthfllt<'
(lour.1: q111~ dt' uhu ' 1 1111 ,u 11plo ole tr6nico. (D W. Bloom y D. W. Pnw ott; mocJifi ulo.)
1 , ..
420
geno), es posible separar sus dos cadenas por medio del calor y otros tratamientos, como el pH alcalino. Este proceso se denomina desnaturalizacin
del ADN. Dado que la temperatura necesaria para romper el par C-G (que
tiene tres puentes de hidrgeno) es mayor que la requerida para romper el
par A-T (que tiene dos puentes de hidrgeno), la temperatura a la cual se separan las cadenas del ADN -llamada punto de fisin- depende de la relacin CG/AT.
Si el ADN desnaturalizado se enfra lentamente, las cadenas complementarias se aparean en forma ordenada y se restablece la conformacin original
de la molcula. Este proceso se denomina renaturalizacin.
Ms an, una de las cadenas del ADN puede unirse a una cadena de ARN
complementario para formar una molcula hbrida, mitad ADN y mitad ARN.
23-34. Los mtodos de secuenciamiento del ADN han permi tido
con ocer la com posicin molecular de muchos sectores
de los cromosomas
La secuencia de los nucletidos de un gen puede ser parcialmente deducida a partir de la secuencia de los aminocidos de la protena que codifica. Los
resultados que se obtienen mediante este recurso abarcan solamente las partes codificadoras del gen, ya que no aportan informacin sobre los segmentos reguladores ni sobre los intrones. Tampoco tienen en cuenta una de las caractersticas del cdigo gentico, la que establece que la mayora de Jos aminocidos son codificados por ms de un codn (cap. 16-2).
Se han desanollado varios mtodos que permiten obtener un rpido secuenciamiento del ADN, lo cual produjo una verdadera revolucin en el
mundo de la biologa molecular. Gracias a ellos se ha llegado a conocer la
composicin de los cromosomas nucleares y mitocondriales humanos y la de
muchos de sus genes. Adems se ha estudiado el ADN de otros organismos
eucariotas y de numerosos virus y bacterias.
6
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Fig. 23-12. Electroforesis bidimensional de las protefnas del ovocito de Xcmopus lw rNiii,, .
Las clulas se marcaron con m t iouiuu 1 ~S y se homoge neizaron. Luego las prolc fnus .~ M'
pararon por enfoque iscwlc:tctrko (uinlt'l ll di111cnsin) y se ngrcgt. docl il!-iulfnlo ck sodio
sohrc tlll j'CI de polim: d l 11111idu ( ,1 Jtlllldll d l nu 1nNi(w ). Poi' rnclionuto~rnlfn :-.e dclc-rt:uon dcn
hs d Jllold nw., ,.~ lu'-1 qu ' ' Uulun 1!1 111 1 1111 y 11111 ruhulluuv fY
V llf,t que lu ml,un
~o: h IIth~ lfp, JIIHI 11111 t 11 lt '' '"'"ll dltn 11 l~tn ' tt JIIIIJIUII ' Iunu l u l ln~ udlt llll dPI Jll''to n tul
t u hu 11 ,, 1 1\1 l it llnlu 111 1
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421
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70
30
40
50
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CCTGCGTGTA
GCGAACTGCG
ATGGGCATAC
T GTAACCATA
42J
Secuencia
EcoRI
-GAATIC-CTTAAG-
Orige11
J,
-G
-CTTAA
AATICG-
AGCTTA-
GATCCG-
Baci/lus amyloliquefaciens
..\;
J,
Hindfil
-AAGCIT-TICGAA-
-A
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..\;
J,
Bam I
-GGATCC-CCTAGG-
-G
-CCTAG
..\;
J,
Hae/IH
-GGCC-CCGG-
CCGG-
-GG
-CC
Haemophi/us aegypticus
..\;
Algunas endonucleasas producen un corte neto en el ADN (vase la endonucleasa Haellll en la tabla 23- 1). Otras, como la Eco RI, producen cortes
sesgados, por lo que generan extremos de una sola cadena, los cuales pueden
aparearse con otros complementarios (fig. 2)-1 5). As, esos extremos - ll amados " adhesivos"- pueden unirse a cualquier fragmento de ADN cortado
por la misma endonucleasa de restriccin, lo cual se aprovecha en algunas
reacciones de la ingeniera gentica.
23- 37. Los genes d e las c lul as e uca ri ot as pueden ser introducidos e n
pl smidos y clonad os en bacte ria s
En la seccin 23-35 se dijo que las bacterias poseen ADN circulares pequeos - los plsmidos- que se replican autnomamente. Entre los pl smidos ms conocidos se encuentran los que poseen genes que les confieren a las
bacterias resistencia a los antibiticos. Se dij o tambin que con la ayuda de
endonucleasas de restriccin puede incorporarse un fragmento de ADN eucaritico en un plsmido e introducir a ambos en una bacteria para que se multiplique el ADN eucaritico. La combinacin de dos ADN de diferentes procedencias realizada para que uno se multiplique en una clula ajena dio origen a la ingeniera gentica.
La figura 23-16 muestra las diferentes etapas compren1 1 1 1111 1
didas en la produccin de un ADN recombinante. El ADN
circular del plsmido se corta con una endonucleasa de
restriccin, lo cual genera dos extremos de ADN "adhesiFig. 23-15. La endonucleasa Eco Rl reconoce en el
ADN una secuencia de cuatro nucletidos. Los astevos" . Dado que se emplea la misma endonucleasa para
riscos sealan la presencia de nucletidos metilados,
cortar el ADN eucari6tico, en ste se generan segmentos
los cuales impide n que esos lugares scnn l:Ortudm:
dr AJ)N on <'XI Il" lllll'l "11dh sivos" idnticos a los del
po r cndonu lcasns d r striccifm.
1'
424
23 . LOS METODOS DE EST UI) IO 11.N IIIOI.Ot; J\ ("l ' l,l ll .AH
PLASMIDO
Goo~O
resistencia a
un antibitico
PLASMIDOS
="=111111 111~
ADN CELULAR
ADN A INVESTIGAR
Corte con
endonucleasas
de reslriccin
r'\.
m;;~PTT;/1 ""
42~
1111111 1::::IIIIII
Ligamiento
~ con ADN ligasa /
0
O Oo 0
S:o~~~ante
lnlroduccin
de los plsmidos
en bacterias
Plsmido~Cromosoma
./
bacteriano
i ti ~ 't ~
1 t
Colonias
de bacterias
La localizacin, separacin y multiplicacin de un gen en la clula eucariota puede conseguirse siguiendo los pasos mostrados en la figura 23-17. El
proceso comienza con el aislamiento del ADN de varias clulas, que al ser digerido con en zimas de restriccin genera una enorme cantidad de segmentos
cortos de ADN, llamados fragmentos de r est r iccin. Medi ante el procedimiento indicado en la seccin 23-37 tales fragmentos son incorporados a vectores - plsmidos, por ej emplo-, de modo que cada vector recibe uno de Jos
fragmentos. Luego los vectores con sus fragmentos de restricci n se introducen en bacterias, las cuales son sembradas en medios de cultivo.
La multiplicacin de cada bacteria genera una colonia separada de las dems, de modo que en los cultivos se forman miles de colonias. Como conse-
cuencia, cada coloni_a resulta habitada por un clon de bacterias que desciendcll de un anc slrn nn11n. Como es obvio, cada clan contiene un fragmento
tk
H 'S fl i n i ( HI
dll t 1
IIf t
426
""-. /
427
....
/
Usado de las bacterias y desnaturalizacin
del ADN
/
Hibridacin
Radioautografa
El gen buscado se halla en la colonia
representada en amarillo
428
ADN celular
429
/ /</
Radioautografa
Las bandas que contienen los ADN buscados quedan
impresas en la pelcula
Muchos genes pueden ser detectados directamente en los lugares que ocupan en los cromosomas mediante el mtodo de hibridacin in situ. El exp
rimento consiste en la hibridacin del gen que se desea detectar con un ADN
complementario, el cual debe llevar un marcador para que pueda ser idenlil"i
cado en el tejido o en el extendido. Cuando el marcador es fluoresccnt~:, la
tcnica se denomina FISH (porjluorescen.t in situ hybridization).
Esta tcnica permiti localizar un gran nmero d~: gcn~:s Juuuauos: poo
ejemplo, el gen del ARNr 45S '11 las ouslri ' ionl's s~' "'"'"' ius " " los ,.,.
lllOSOIIHIS 13, 14, l . , 2 1 y ~'' (1-u p . 1 1 K) y l'i gen tkl i\ l~N o . 1111 ,, t'Xfli 11110
Entre los 3 x 109 pares de nucletidos del genoma humano hay alrededor
de 30.000 genes que codifican protenas, pero las funciones de la mayora
- es decir, qu protenas codifican los distintos genes- an se ignoran. No
obstante, gracias a una nueva e ingeniosa tcnica ahora es posible estudiar
las runciou:: ,,. 1111 1111111 \' l'<l .,. cicnte de genes, lo cual se logra sin ncccsi-
tl ititlll dtl l11 itl,\1 l:u u ti, 1 t' l"lllll litll lll 1 (t ' qt, 1 1 '1) ,
dnd ck 111 .111 ipul nh d111 111 1111 1111' , t11:111 iohra que s c 1fa
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Cebador
CICLO!
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1 1
1 1 1 1 1 1 1
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1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
CICLO!!
Replicacin
~: 111111
11
11 1
11
1 1 11 3 '
11 ~' 111
11
11 1
11
1 1 1 5'
11
1 1 3'
3'
5'
~: 1111 11 11
111
5'
3' 1 11 111
111
11
11
3'
5'
3'
111 5'
Adicin de cebadores
lt'if~ 2J-2fl. \~ qp~rJPI\I I u h"111 d " lo11 do~; prhneros ciclos de In r accin n cml ru d la poli me ..
(1'( 'H), 111, 1\ ll l! nu" 1
!' JI ,JI
431
432
433
BIBLIOGRAFIA
\ IJt j ti
l 11
lndice alfabtico
A2:ll87,61
ABC. 66, 67, 134. 140
Aberraciones cromosmicas, 3 13, 355,
370, 371 . 373, 375
Abl. JJS. 339
ABO. siSielll<l. 55
.1\BP. 97
Ahrazadcra dcslizamc. 306. 308, 337
A.C. V. lt.denilala cicla.w
Acelil CoA. 163. 168
Acclilcolina . 20 1
N-Acclilgalactosamina, 28
N-Acetilg.lucos~mina. 28
V. Acido silico
dcsoxirribo nucleico, V. AON
fosfatdico, 31. 126, 128,358
fosfrico. 24
glucurnico, 27
grasos, 3 1, 126, 162, 164, 174
~-oxidacin de los, 164, 166,
168, 193. 194
hial urnico, 29, 109, 356,357, 358
idurnico, 28
lctico, 174
nucleicos, 21, 23
retinoico, 200, 387
ribonucleico, V. ARN
silico, 28, 33
Acil CoA, 126
Acon.itasa, 294, 296
Acrosina, 357, 359
Acroso ma, 356, 357, 358
Actina, filamentos de, 12, 77, 92, 97,
101, 104. 108, 116,283,
330, 335
corticales, 92. 93
transcelulares, 92, 94, 95
G, 92,98
a-Actin.ina, 94, 95, 106, 116
Activaci n por precursor, 267
Acti vador, 250
Activina, 387
Acuaporina, 61
Adaptacin inducida, 199
Adaptina, 153, 155
Adenilato ciclasa, 208, 209, 357
Adenina, 24
Adcnosina, 25
~.306,308,3 1 7
. 306. 308
ADN primasa, 305, 306, 310
ADP, 24, 159, 167, 171, 187
Adrenalina, 21 1, 2 13
Aducina, 108
Agua, 21, 22, 57, 172
AIF, 395
Alelo, 366
Aleurona, granos de, 157
Almidn, 29, 18 1, 185
Alteraciones funcionales, 314
Alu, 227, 319
Alzheimer, e nfermedad de, 86
a-Amanitina, 250
Amiloplastos, 181
Aminocidos, 35, 162. 165, 174, 240,
281. 283
l 'lll
436
electrognica, 64
de H', 66, 141, 146, 17 1
de Kw. 65
de Na K+, 63, 64, 65, 66
protnica, 141 , 143, 144
Borde/ella pertu.uis, 21 2
Burbuja, de replicacin, 303
de transcripcin, 247, 250
CAAT, 241
Cadena, respiratoria, 164. 167
tra nsportadora de electrones,
V. Cadena respiraroria
Cadherina, 94, 114, 1 16
CAF- 1, 313
Caja homctica, 392
Calcio, 66, 105, 118, 140, 156, 166,
174, 2 14, 2 15,357, 358,
361,395
Calcitonina, 275
Calmodulina, 105, 2 14
CAM, I1 4
Cmbium, 68
Canal inico, 56, 58, 59, 67
depe ndiente de liga ndo, 60
dependiente de voltaje, 60
Cncer, 66, 194, 310,314,337.338,
339,376,398
cap (capuchn), 269, 283
CAP, 265
Cpside, 7
Caps mero, 7
Cardiolipina, V. Difo.ifatidilglicerol
Cardio tnicos, 64
Carioplasto, 380
Carioteca, V. Envoltura nuclear
Cariotipo, 23 1, 232, 313, 370
en primates, 377
Caroteno, 186
Carotenoide. 181. 183, 186
Casena, 295
Caspasa 3, 395, 397
Caspasa 8, 397
Caspasa 9, 395, 397
Caspasas. 393
Catalasa, 193, 194
Catastrofina, 84
Catenina. 94, 11 6
Caveolas, 156
CaveoJinas, 156
CBP, 212, 283, 288
Cdc2, 333, 334
Cdc6p, 303
Cdc42, 98
Cdk2,333,334,337
Cebador, 305,306.3 10,421, 428
Clula(s), 1
animal. 10, 321
blanco, 197
diploide, 227, 322, 341
eucariota, 3, 8, 45
gemunati vas, V Clulas sexuales
glial radial, 100
haploide, 227. 34 1
HeLa , 380.4 12
hli ... VO, V, ('i8olo
INDICE ALFABETICO
J 1,
( 'lt o::ol,
/ 1, l t)
1
lnt1l11o
Claudina, 115
Clivaje, V. Segmentacin del cigoto
Clon de bacterias, 424, 425
Clo nacin, de fragmentos de ADN,
V. Clonacin de genes
de genes, 424
de mamferos, 380
C loranfenicol. 292
Clorofila, 14, 181, 184, 185, 186
C loroplas to, 14, 18 1, 182
biognesis, 190
envoltura del, 183
origen, 192
C1oroquina, 67
Coacervado, 45
Coatmero, V Cubierta de coatmero
Codificador, 240, 242, 243, 244, 245,
263
Cdigo gentico, 25, 177, 240, 28 1
degeneracin del, 240
Cdigo his tnico, 258
Codominancia, 367
Codn(es), 177, 240, 28 1
de iniciacin, 282, 289
de terminac in, 240, 286, 292
Coenzima(s), 4 1
A. 126, 163, 166
Cohesina, 299, 335
Colgeno, 95, 110, 111
Colcemid, 84
Colchicina, 84
Clera, 213
Colesterol, 34, 48, 49, 129. 155, 174
Coloracin, 404
negativa, 408
Complejo, b-e,. 167, 170, 176
b-f, 187
del poro, 221, 330
sinaptonmico, 345, 349
Comunicacin intercelular. 197
Condensina, 229
Condroitinsulfato, 29, 109
Co nexina, 117
Conexn, 11 7
Congelacin-desecacin, 403
Congelacin-fractura, 408
Congelacin-grabado, 408
Cono de c recimiento, 100
Constriccin, primaria, V. Centrmero
secundar ia, 233
Contacto focal, 95, 99, 11 2
Contratransporte, 62, 65
COP, V. Cubierta de COP
COPI, 149, 150
COPI!, 149, 150
Cordina, 387
Corona radian le, 356, 357, 358
Correpresor, 266
Corte de materiales, 271
Cones y empalmes en el ARNm. 27 1
regulacin de los, 274
Cotranspone, 62
CPSF, 270
CRE, 212
CREB, 212
Cremallera de leucina, 256
CREST, 327
Crestas mitocondriales, V Mtocondra
C riofractura. V. Congelacin-fractura
Cristato, 404
Cromtidas, 18, 232, 299, 323, 325,
345,348
Cromatina, 16. 225, 256, 299, 393
enrollamiento, 227.256,312, 323,
335
lazos de, 229, 302
satlite, V Satlite
sexual, V. Cuerpo de Barr
Cromatograffa. 4 18
Cromatosoma, 228
Crommero, 350
Cromoplastos, 181
Cromoprotenas, 35
Cromosoma(s), 6, 16,219,225,227,
299.322,325,328, 341, 372
acrocntr ico, 23 1, 233, 325
artificiales de levaduras, V YAC
bac1eriano. 6
en cepillo, V. Cromosomas
plumulados
Filadelfia, 376
homlogos, 16, 18, 341 , 345
metacntrico, 233, 325
papel en la evolucin, 376
plumulados, 350
sexuales, 227, 232, 374
submetacntrico, 233, 325
Crossingover, V. Recombinacin.
gentica
CSF, 394
CSTF, 271
CTP, 25
Cubierta de clatrina, 149, 150, 152, 155
de coatmero. 150
de COl', 149, 150
Cuerpo, de Barr, 23 1,258,279,312
apopttico, 394
basal, 86, 89,9 1
intermedio, 326, 328, 330
polar, 352, 353
prolamelar, 190
proteico, 157
residual, 147
Cultivo celular, 100, 411
de lnea establecida, 412
primario, 412
secundario. 412
DAG, V. Diacilglicerol
Dalton, 3
dcc, 339
DE, 360
Dedos de cinc, 256
Deleci n. 3 13,371
Denudacin, 358
Derrnatansulfato, 29, 109
Desarninacin, 3 15, 3 17
Descarboxilacin oxidativa, 163, 166,
168
Desmina, 78, 80, 106, 107
Desmocolina, 11 6
Desmoglena, 116
Desmoplaguina, 117
Desmosoma, 107, 116
Desoxirribosa, 24, 27
Destoxificaci6n, 14 1, 193, 194
Determinacin, 388
437
El , 76
E2, 76
E3, 76
Eco Rl, 422
Ectodermo, 383
Edwards, sndrome de, 374
EF, 289
EGF, 204, 336, 338
Electroforesis, 40, 418, 426
Elongina, 25 1
Embrin, 382, 385
Encaje inducido, 4 1, 199
Encuadre, 282, 3 14
Endocitosis, 139, 14 1, 143, 153, !55
Endoderrno,383
Endonucleasa de restriccin, 422
Endosoma, 13, 121, 124, 139, 141 ,
144, 145
primario, 144
secundario, 144, 148
Endosperrna, 364
Energa protonicomotora, 171, 174, 188
Enfoque isoelctrico, 418
Enlace, N-glicosdico, V Unin N
0-glicosdico, V. Unin O
Envejecimiento celular, 310
Envoltura nuclear, 13, 16, 219, 220,
324,330,335,393
Enzimas, 22. 40. 43. 162.41 3
438
erb, 338
eRF. 292
Eritromicina, 292
Eritropoyetina, 206, 336
ERK, 205
Escherichia coli, 5, 25, 263, 266, 31 8,
422
Esclerodermia, 327
Esfingofosfolpido, 32, 129
Esfngomiclina, 32, 49, 129, 148
Esfngosina, 32, 129
Espacio, intermembranoso, V. MiLocondria
pcritluclear, 220
tilacoide, 183
Espectrina, 93, 101, 107
Espermtide, 344, 353
Espermatocito, 344, 352
Espenn:ttognesis, 34 1
Espermatogonio, 344
Espermatozoide, 86, 2 12, 227, 341,
353, 356, 362
capacitacin, 357
hipcractivacin, 357, 358, 359
madur<1ci6n, 357
Espliccosoma, 272
Esteroides, 34, 14 1, 174
Estre ptomicina, 292
Estroma, 183, 189
Etiolacin, 190
Etioplasto, 190
Eucariotas, 1
Ferredoxina, 187
Ferritina, 115, 294
Fes, 338
PGF, 204, 336, 387
Fibras, del sler, 325, 326, 33 1
cinetocricas. 325
colgenas, 95, 99. 110, 111, 11 2
polares, 325, 330
tensoras, 95, 107
Fibronecti na, 95, 99, 11O, 111, 1 12
Fibrosis qufstica, 67
Fragmentoplasto, 332
Fragmentos, de Okazak, 305. 306
de restriccin. 425, 426
FRAP, 53
Fructosa. 27
Fucosa, 27
Fusi n, 359
celular, 381
Fusgenos, agentes, 53
Ficocianina, 18 J
Ficoerilrin a, 18 1
Fijadores, 402
Pilagrina, 79
Filamentos, Ue actin a, V Actina
gliales, 78, 80
intermedios, 12, 77, 78, 101
Filamina, 97
Pilopodio, 98, 99, 100
Fimbrina, 98, 102
FISH , 428
Fisin binaria, 175, 190, 195
Flagelos, 86
Flavina adenina dinucletido, V FAD
Flip-j7op, 50, 176
Flipasa, 129
Floema, 68
Fluorescencia, 414
recuperacin despus del fotoblanquco, V f'RA P
Fluorocromos, 52, 414
fms, 338
Fodrina, 93
Folistatina, 387
Forbol, 2 16
Forma celular. 77, 79, 85, 93
Fos, 338
Fosfatasas, 2 14
Fosfatidilcolina, 31 , 49, 128
Fosfatidiletanolamina, 3 1, 49, 128
Fosfatidilinositol (PI). 3 1, 49, 129.213
Fosfatidilinositol di fosfato (P1P2), 32,
129,208,2 13,215,217,
358,362
Fosfatidilinositol fos fato (PIP), 32,
129,2 13
Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-K),
205,208,217, 394
Fosfatidilinositol trifosfato (PlP3) , 32,
129,208, 2 17, 394
Fosfatidilseri na, 3 1, 49, 128,394
Fosfodiesterasa, 2 1O
Fosfoglucomutasa, 2 11
Fosfol ipasa A, 2 14, 358
Fosfolipasa C-~. 205. 208,213,21 5,
358, 361
Fosfolipasa C-y, 205 , 214,215
Fosfolipasa D, 2 14, 358
Fosfolpidos, 31, 49, 175
Fosforilacin oxidati va, 164, 167, 170
Fosforilcolina, 128, 129
Fotofosforilacin, 188
Fotorrespiracin, 196
Fotosntesis, 5, 14, 181, 184, 185.
189
Fotosistema, 1R6, 1R7
F rttt.:cio namil'IIIO, n lul:n, tll (,
lllolttulal', 'lit ,
de mantenimiento, 379
1 11 , ' 11
Halofantrina, 67
Haploide, 18, 344
Haptot;txis, 99
Helicasa, 311, 317
Hlice a., 37
Hlice-bucle-hlice, 256
Hlice-vuelta-hlice, 255
Hemidesmosoma, 112
Hepara nsu lfato, 29, 109
Hepatitis, 430
Heterocarin, 52, 381
Heterocigoro, 38 1
Heterocromatina, 16, 230, 23 1, 256,
258,312
constitutiva, 23 1, 327
facultativa, 23 1
Hetertrofos, organ ismos, 4, 14
Hexoquinasa, 21 1
HGF, 204, 336
Hialuronidasa, 357
Hibridacin in silu, 428
Hidratos de carbono, 27, 54
1-!ipercolesterolemia, 155
Hipoxantina, 315,31 7
Histonas, 225, 227,243,257,27 1,
296, 3 12, 335
acetilacin de las, 257
demetilacin de las. 257
desacetilacin de las, 257
desfosforilacin de las, 257
fosforilacin de las, 257
metilacin de las, 257
HIV, V. VirtL~ HIV
1-loja plegada~. 37, 168
llolliday, estructuras de, 35 1
11omeodominio, 39 1
llomocigoto, 366
1lorrnona(s), 198, 388
de crecimiento, 206, 336
esteroideas, 200, 224
tiroidea, 200
Horquilla de replicacin, 304
ilsp60, 74, 178
ilsp70, 74, 134, 147, 178
ilsp90, 74, 200, 224
Iluso rnit 6 tiC(I, Xh, t.
1,
)d , 1 't<
fF, 288
IL-2, 336
!mago, 390
lmportina, 223
Impronta genmica, 259
Inclusiones, 7 1, 141
Induccin, 197, 200,201 ,386, 387
autocrina, 198
endocrina, 197, 336, 388
enzimtica, 263
neuroendocrina, 197
paracrina, 198, 201, 204, 336, 387
l nductor, V Sustancia inductora
lneslabilidad din{lmica, 84
fngeniera genrica, 4 18, 422
JAK, 206
Jun, 338
Ll , 227, 3 19
Lactato, 174
Lactosa, 28
Lamelipodio, 98
Lmina, basal, 106, 109, 11 1, 112
nuclear, 79, 220, 330, 335
Laminina, 106, 11 O, 11 1, 11 2
Laminofi lamentos, 78, 79, 221, 330,
393
Lanzadera, 173
de glicerol 3-fosfato, 173
de malato-aspartato, 173
Lectura de pruebas, 3 16
J. p!nJH' II1a, 14 1
439
440
Microfibrilla, 68, 69
Microfilamentos, 92
Mic rosatlite, 226
Microscopio, electr nico, 2, 406
de barrido, 41 O
de fase, 405
de fluorescencia, 52, 414
de fondo oscuro, 406
de interferencia, 405
ptico, 2, 40 1
de polarizacin, 406
M icrosporocitos, 363
Microsporas, 363
Micrtomo, 403
de congelacin, V. Cristato
Microtbulos, 12, 77, 80, 322, 328, 335
cenrriolares, 81, 90, 91
centro organizador de los, 8 1
c iliares, 8 1, 86, 91
cito plasmticos, 8 1, 82
mitticos, 81, 86, 328
Microve llosidad, 1O1, 356
Migracin celular, 97, 99
M inerales, 23
Minisatlite, 227
Miofibrilla, 103
Miosina, 1, 94, 96, 98, 102
1!, 96, 98, 101 , 103, 105, 330
V, 94, 95, 96, 100
Mitocondria, 13, 46, 66, 75, 159, 165,
194, 2 14, 395
crestas de la, 166
espacio intermembranoso de la, 168
matriz de la, 166, 168, 178
membrana, exte rna de la, 168, 175,
178
interna de la, 166, 170, 175, 178
origen de la, 179
reproducci n de la, 175
Mitosis, 18,299,32 1,322
anastral, 332
Modelo corporal, 390
Mongolis mo, V. Down, sndrome de
Monmeros, 21
Monosacridos, 27
Monosomas, 37 1, 373
Monotransporte, 62, 65
Morfgeno, 385, 387
Mrula, 382
Mosaico fluido, 52
Mosaicos, 371, 375
Motilidad celular. V. Migracin celular
MPF, 335
MTOC, V. Micr01bu/os, centro organizador de los
Muerte celular, 175, 205, 217, 393
Mmaci n(es). en el ADN, 313,3 16,398
gnicas, 194, 3 13, 3 15,3 16
Myb, 338
Myc, 338, 339
Nebulina, 106
Necrosis, 393
NES, 224
Ne urofilame ntos, 78, 80
Neurogenina, 387
Neurotransmisor, 140
Neuro trofinas, 394
Nexina, 88
Ocludina, 11 5
OCT. 244
Oligopptido, 35
Oligosacridos, 28, 54, 134
Oncogenes, 338
Operador, 263, 264
Oper n, 263
lac, 263, 265
Trp, 266
Opsonina, 143
ORC, 303, 334
Organizador, nucleolar, 277
de Spemann, 387
Origen de replicacin, 176, 226, 303
Ouabana, 64
Ovocito, 227,344, 352, 356,358, 359,
362,384
Ovognesis, 341
Ovogonio, 344
Ovulo, 341, 344, 353, 362
~-oxidac in de los cidos grasos.
V. Acidos grasos
Oxido ntrico, 200
O xido ntrico sintasa, 201
PABU, 271
Paquinema, 348
Pared, celular, 5, 11 , 68
primaria, 68
secundaria, 69
Pancula de reconoc imiento de la
seal, V. PRS
Patau, sndrome de, 374
Paxilina, 95
PCNA, V. Abrazadera deslizante
PCR, V. Reaccin en cadena de la
polimerasa
POGF, 204, 336, 338
POK I , 394
Peptidasa seal, 132
Pptido, C, 137
natriurlico auricular (ANP), 203
seal, 73, !30, 223,293
Permeasa, 56, 58, 62
Perxido de hidrgeno, 14, 193, 194,
196, 398
Peroxisoma, 14, 75, 193, 194
reproducci n, 195
PEST, 297
PH20, 359
PH30, 360
Picogramo, 3
Pigmento(s), 72
de desgaste, 73, 147
Pinocitosis, 141
PI 3-K, V. Fo.ifatidilino.,irol 3-qu.inasa
PIP, V. Fosfatidilinositol fosfato
PIP2, V. Fosfatidilinositol difosfato
PIP3 , V. Fosfatidi/inositol trifosfato
Pirimidinas, 24
Piruvato, 162, 168
Piruvato deshidrogenasa, 163, 166, 168
Placa, celular, 332
discoidal , 11 3, 117
de fijaci n, 347
Placoglobina, 94, 116,117
Plactina, 80
Plan corporal, 386, 390
Plasma germinalivo, 384
Plsmido, 6, 422, 423
uso como vector, 424
Plasmodesmo, 11 9, 157, 332
Plstidos, 14, 181, 190
Plastocianina, 187
Plastoquinona, 187
Poder de resolucin, 402
Polen, granos de l, 363
poli A, 270
poli A polimerasa, 271
Poliadenilacin del ARNm, 270, 274
Polmeros, 21
Polipptido, 2 1, 35
Poliploidfas, 334, 370
Poliprenoides, 34
Poliprotenas, 238
Polirribosoma, 123, 288
Polisac\ridos, 2 1, 29, 54
Polisoma, V. Po/irribosoma
Polispermia, bloque~ de la, 360
Porina. 5, 1()t{
P16, 337
1'2 1, 317
i' l 1, I(IJ, 117 , 1111, 1111
Poro(s),%
tk lu t'II VOillllllllllt'it'Hr, 11) , } 1
l'oh')ll'lnltl l'll k o. V (;nul~tnlt'IJ,
l1flllt1/l'
441
Sil, 25 1
SIII, 251
Sales inorgnicas, 21, 22
SAR, 230, 302
Sarl , 15 1
Sarcoglicano, 106
S arc mero, 103
Satlite, 233
Sarurabilidad, 199
Sec, 150
Secrecin, 124, 126, 139, 140
apocrina, 72
constitutiva, 140
regulada, 140, 153
Secuencia, alfoide, 226. 3?X
de terminacin, 24 1, 2tll . J!l , '11
Segmentacin del cigoto. 1 t 1, llt .
363, 382, 3X4, 111 .,
Seg undo mensajero, 202, iiK
Seleclina, 113
Semaforina, 99
Senescencia replicativa. 3 10
Seal(es), de anclaje. 73. 1.1 1
inlfacelularcs. 197
de poliadcnila in, n o
Scrina- lr onina quinii'HI, / 0'
442
Seudogenes, 319
procesados, 319
Seudouoidina, 276, 278
Shh, 387
Sialoadhesina, 113
Sida, V. H/V
Significado evoluti vo, 388
Sinamina, 80
Sinapsis, 345
nerviosa, 198
SINE, 227
Singamia, 362
sis, 338
Sistema de endomembranas, 12, 75,
121,137,157
en la clula vegetal, 157
Sitio(s), A, 287, 288, 289
AP, 3 15,3 17
E, 287,288, 289
P, 287, 288, 289
SLI, 261,276
Sm, 279
Smad, 203
SNAP, 154
SNAPc, 262
SNARE, 153, 154
Solenoide. 229. 302
Solutos, 56
Somatomedina, 336
Sombreado, 408
Somita, 386
Southem blotting, 428
SPP, 303, 334
SR, 275
Src, 338
SSB, 308, 311
STAT, 206
Succinato deshid rogenasa, 167, 169,
170
Sustancia inductora, 197, 199,264,
336, 386
UBF, 26 1, 276
Ubiguinona, 34, 167, 170
Ubiguitina, 76, 147, 297
Ultracentrifugacin, 41 7
Ultramicrtomo, 407
Unidad(es). de replicacin, 302
S (Svedberg), 4, 286, 417
Unin(es), comunicante, 107, 117
covalentes, 39
estrecha, V. Uni n oclusiva
fosfod ister, 24, 247. 249, 300
heteroflicas, 11 3
homofO icas, 114, 116
intercelulares, 109
inica, 39
N, 28, 54, 134
no covalentes, 39, 249, 254
O, 28, 54, 136
oclusiva, 114
peptdica, 35. 283, 286
Uracilo, 24
Uridina, 25, 272, 278
UTP, 25
Xantfila, 186
Xenopus, 379,-384, 387
Xeroderma pigmentoso, 318
Xic, 245, 258
Xilema, 68
Xilosa, 27
Xist, 258
XXX, sndrome, 375
XYY, sndrome, 374
YAC,425