LABORATORIO DE ANATOMIA Y FISIOLOGA HUMANA

PRCTICA 1
POTENCIAL DE REPOSO DE MEMBRANA Y POTENCIAL DE ACCIN
Asignatura: Espacio de Laboratorio de Anatoma y Fisiologa humana
Docentes:
Carlos Fernando Cardozo Hernndez

1. OBJETIVOS
Comprender los conceptos de potencial elctrico de membrana en reposo y potencial de accin .
Determinar los valores de potencial de reposo de membrana calculados mediante la ecuacin de

Goldman, para tres tipos de clula.

Identificar los diferentes parmetros involucrados en el potencial de accin y describir la
secuencia de los eventos que generan un potencial de accin.

2. CONOCIMIENTOS PREVIOS
Gradiente de concentracin, Membrana celular, Canales inicos, Ecuacin de Goldman.
3. SEGURIDAD DURANTE LA PRCTICA
3.1 NORMAS DE SEGURIDAD:
El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad del laboratorio.
3.2 ELEMENTOS DE PROTECCIN:
Usar durante todo el desarrollo de la prctica los siguientes elementos de seguridad:
No se requieren
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado.
Est prohibido su intercambio con los dems compaeros de laboratorio.
3.3 PRECAUCIONES:
Dado que la prctica incluye aplicacin de una corriente elctrica para muscular del sujeto en quien se
hace el registro, las personas con marcapasos cardiacos o con alguna disfuncin neurolgica o cardiaca
no deben ser voluntarias. Si el voluntario experimenta alguna molestia durante el registro, suspenda el
procedimiento y avise al profesor

4. INTRODUCCIN TERICA
Potencial de reposo
El potencial elctrico de membrana en reposo es el potencial que se establece como resultado de la
difusin de un ion a travs de una membrana semipermeable a dicho ion, y con diferente
concentracin en los lados opuestos de dicha membrana (Figura 1A). El potencial de membrana de
una clula real que no est produciendo impulsos se conoce como el potencial de membrana en
reposo. Si la membrana plasmtica solo fuera permeable al Na+, su potencial de reposo sera igual al
ENa de +66 mV

RT

[ Na ]i

como lo predice la ecuacin de Nerst ( Em= zF ln Na

o

).

Si solo fuera

permeable al K+, su potencial de membrana en reposo sera igual al E K de 90 mV realizando la

1
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medicin del interior celular respecto al exterior (Figura 1B). Una clula en reposo real es ms
permeable al K+ que al Na+, pero no es por completo impermeable a este ltimo. Como resultado, su
potencial de membrana en reposo est cerca al E K pero es un poco menos negativo debido a la leve
difusin de Na+ hacia adentro. Dado que el potencial de membrana en reposo es menos negativo
que el EK, tambin habr una leve difusin hacia afuera del K+. Estos escapes se contrarrestan por la
actividad constante de las bombas de Na+/K+ elementos importantes en el mantenimiento de este
potencial de membrana en reposo. El valor real del potencial de membrana en reposo depende de
dos factores:
1. La proporcin de las concentraciones (Xo/Xi) de cada ion en los dos lados de la membrana
plasmtica.
2. La permeabilidad especfica de la membrana a cada ion diferente.
Muchos iones entre ellos K+, Na+, Ca2+ y Clcontribuyen al potencial de membrana en reposo.
Sus contribuciones individuales estn determinadas por las diferencias de sus concentraciones a
travs de la membrana (figura 1), y por sus permeabilidades de membrana. Esto tiene dos
implicaciones importantes:
1. Para cualquier ion dado, un cambio de su concentracin en el lquido extracelular cambiara el
potencial de membrana en reposo, pero solo al grado en que la membrana es permeable a ese ion.
Puesto que la membrana en reposo es ms permeable al K+, un cambio de la concentracin
extracelular de K+ tiene el mayor efecto sobre el potencial de membrana en reposo. Este es el
mecanismo detrs del hecho de que las inyecciones letales son de KCl (lo que aumenta las
concentraciones extracelulares de K+ y despolariza las clulas cardiacas)1.
2. Un cambio de la permeabilidad de la membrana a cualquier ion dado cambiara el potencial de
membrana. Este hecho es fundamental en la produccin de los impulsos nerviosos y musculares.
Mas a menudo, son la abertura y el cierre de los canales de Na+ y K+ los que quedan involucrados,
pero los canales de compuerta para Ca2+ y Cl tambin son muy importantes en fisiologa.

A)

B)

Figura 1. Potencial de membrana en reposo. A) modelo de membrana con los canales y los iones. B) Medicion
del potencial de membrana en reposo

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Potencial de accin
El potencial de accin es in impulso elctrico transitorio y regenerativo en el cual el potencial de
membrana Vm rpidamente alcanza un pico que es aproximadamente 100 mV ms positivo que el
voltaje normal y negativo del potencial de membrana en reposo. ste puede propagarse por largas
distancias a travs de las fibras nerviosas o musculares.
El potencial de accin es una respuesta de todo o nada que consiste en una rpida despolarizacin
seguida por una repolarizacin lenta. Para que se produzca esta respuesta, se debe aplicar un
estmulo que dependiendo de su intensidad o periodo, despus de un periodo de latencia, produce un
aumento del potencial de membrana que deba superar un valor umbral. Superado el valor umbral, se
produce un aumento en la permeabilidad al Na+ produciendo la fase de despolarizacin. Cerca al
valor de potencial de Nerst de equilibrio de sodio, en el cual se alcanza el pico, esta permeabilidad
decae rpidamente, seguida por un aumento en la permeabilidad del K + iniciando la fase de
repolarizacin. Cuando el voltaje de membrana disminuye por debajo del potencial de membrana en
reposo, se produce otra fase llamada de hiperpolarizacin en el que la permeabilidad al Na+ es cero y
la permeabilidad al K+ aun est disminuyendo (figura 2).

Figura 2. Fases del potencial de accin con los periodos refractarios. En la imagen derecha se observa las
permeabilidades al sodio y potasio durante este evento

Desde que se inicia la despolarizacin hasta que se alcanza de nuevo el potencial de membrana en
reposo, se presenta el periodo refractario que se divide en dos: periodo refractario absoluto en el cual
es imposible producir un segundo potencial de accin y comprende desde que se produce la
despolarizacin hasta que en la repolarizacin se est cerca al potencial de membrana en reposo; el
periodo refractario relativo comprende bsicamente la fase de hiperpolarizacion en el cual es posible
producir un potencial de accin pero con un estmulo de mayor intensidad o mayor (figura 2).

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5. MATERIALES Y EQUIPOS
o
o
o
o
o

Sistema de adquisicin de datos Powerlab con transductor de pulso y dinammetro

Equipo de cmputo para visualizacin de las seales de estimulacin y registro
Cinta de enmascarar ancha para sujecin de electrodos de estimulacin
Computador con la ltima versin de Java instalado para correr las simulaciones.
Simulador y graficador (de la ecuacin de Nernst y la de Goldman), de descarga gratuita:

http://www.nernstgoldman.physiology.arizona.edu/ y calculadora cientfica para realizar clculos

manualmente
Simulador y graficador para el potencial de accin en referencia a las concentraciones intra y
extracelulares (http://phet.colorado.edu/en/simulation/neuron) y el simulador del potencial de
accin
en
referencia
a
las
caractersticas
del
estmulo
(http://nerve.bsd.uchicago.edu/nerve1.html)

6. PROCEDIMIENTO
La presente prctica se realizar en dos partes.
1.
La primera consistir en trabajo con los PowerLab disponibles, por lo que se realizar prctica
en cada una de las estaciones dispuestas para esto. Para esto formarn 4 grupos.
2.
La segunda parte ser simulada en el computador y se realizar en la sala de computo de la
facultad. Pueden instalar y/o ejecutar los programas en sus computadoras porttiles.
PARTE 1
Estimulacin nervio cubital (potencial de accin compuesto produciendo contraccin
muscular)
EMG evocado
En la ventana inicial del LabTutor seleccione la actividad Electromyography (EMG) y seleccione
el ejercicio 3 Evoked EMG. Conecte el electrodo de estimulacin en el respectivo modulo del
PowerLab. Con el estimulador apagado, poner los electrodos de estimulacin sobre el nervio
cubital y sujetar con una cinta ancha y conecte los electrodos de registro como se muestra en la
figura 4.

Figura 4. Conexin de electrodos de registro y estimulacin

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Encender el estimulador (Isolated Stimulator) en el PowerLab. Establezca el pulso de corriente en

5 mA. Presione el electrodo sobre la mueca para asegurar que el nervio es estimulado y aumente
la corriente de estimulacin hasta que el voluntario sienta el estmulo. Si no siente el estmulo,
mueva el electrodo hasta ubicar el sitio de mejor estimulacin.
Una vez ubicado el sitio, se busca el valor de corriente de estmulo mnimo que no produzca
respuesta. Posteriormente aumente el estmulo en pasos de 1 mA hasta un mximo de 20 mA.
Escriba los datos obtenidos en la tabla 1.
Tabla 1. Amplitud del electromiograma respecto a la corriente de estimulo
Estimulo (mA)

Respuesta (mV)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Estimulo (mA)

Respuesta (mV)

11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

Realice el grafico de Amplitud del EMG respecto al estmulo (mA) aplicado. (Recuerde que el valor
medido de EMG sera una medida indirecta del potencial de accin compuesto generado.)
En qu valor de corriente se alcanza el 90% de la mxima respuesta en el EMG? Si aumento el
valor del estmulo un ms, que cree que sucede en la respuesta? Explique.
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_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Si aplico el estmulo sobre la piel, por qu de mueve el dedo?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________

Velocidad de conduccin nerviosa

En la ventana inicial del LabTutor seleccione la actividad Electromyography (EMG) y seleccione
el ejercicio 4 Nerve conduction velocity Con el electrodo en la mueca (ver figura 4), tome un
registro con estimulacin de 15 mA.
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Cambie de lugar el electrodo de estimulacin colocndolo en la posicin mostrada en la figura 5 y

estimule nuevamente. Si no siente el estmulo, vari el lugar hasta encontrar la respuesta
adecuada y realice el ejercicio nuevamente realizando los registros de manera seguida. Marque la
posicin del electrodo en este sitio.

Figura 5. Posicin del electrodo de estimulacin para determinar velocidad de conduccin

Realice la medicin de tiempos de latencias, o sea el tiempo tomado desde la aplicacin del estmulo
hasta el inicio de la respuesta y regstrelos en la tabla 2.
Mida la distancia entre las dos posiciones utilizadas para colocar los electrodos y regstrelos en la
tabla 2.
Calcule la velocidad de conduccin usando la siguiente ecuacin

Velocidad=

distancia
tiempo

Tabla 2. Registro de latencias y distancia para clculo de velocidad de conduccin nerviosa

Distancia
Latencia en
Latencia en
Latencia
codoVelocidad
mueca
codo (ms)
(ms)
mueca
(mm/s)
(ms)
(mm)

Explique en sus propias palabras el resultado obtenido?

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_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
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Consulte en internet la velocidad de conduccin nerviosa y compare contra sus resultados y comenta
origen de posibles diferencias.
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_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
PARTE 2
Simulacin del potencial de membrana en reposo en diferentes clulas
Entre a la pgina http://www.nernstgoldman.physiology.arizona.edu/ y ejecute la aplicacin
1. Calcular el potencial de reposo para tres tipos de clulas corporales en condiciones normales de
concentracin intra y extracelular normal de Na+, K+ y Cl- para personas con temperatura normal
(37C), en condicin de fiebre (40C) y en hipotermia (35C) (tabla 3). Tenga en cuenta las siguientes
formulas.

Em=

RT P K [ K ]i + P Na [ Na ] i + PCl [ Cl ] o
ln
F
P K [ K ]o + P Na [ Na ]o + PCl [ Cl ]i

Al simplificar las constantes y cambiando de Ln a Log10 la formula queda:

Em=61,5 mV log

P K [ K ]i + P Na [ Na ] i + PCl [ Cl ] o
P K [ K ]o + P Na [ Na ]o + PCl [ Cl ]i

Tabla 3. Potencial de membrana en reposo para diferentes clulas a diferentes TC

Todos los clculos en anexados

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Tipo de clula
Neurona

Fibra muscular
esqueltica
Eritrocito

ion

intra

extra

K+
Na+
ClK+
Na+
Cl-

145
15
20
145
15
4.2

4.5
140
116
4.5
140
116

100
5
10
100
1
1000

K+
Na+
Cl-

145
15
80

4.5
140
116

100
54
21

E (T=normal)

E (T=40 C)

E (T=35 C)

2. Calcular el potencial de reposo para concentraciones extracelulares de Na+ y K+ fuera de los

niveles homeostticos o normales, as:
a) Paciente con hipernatremia (alta concentracin de sodio)
b) Paciente con hiponatremia (Baja concentracin de sodio)
c) Paciente con hiperpotasemia (alta concentracin potasio)
d) Paciente con hipopotasemia (baja concentracin de potasio)
Utilice los valores de concentracin presentados en la tabla 5 y escrbalos en la tabla 6.
Tabla 5. Valores de Na+ y K+ fuera de los niveles homeostticos

Na
Hiper ( extremo)
Normal
Hipo (Letal Extremo)

150 mEq/L
140 mEq/L
130 mEq/L

K
5.5 mEq/L
4.5 mEq/L
3. 0 mEq/L

Realice los clculos para una temperatura normal y para una persona con fiebre de 40C

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Tabla 6. Valores de Em para valores de Na+ y K+ fuera de los niveles homeostticos

Tipo de
clula
Neurona

Fibra
muscular
esqueltica
Eritrocito

ion

intra

extra

K+
Na+
ClK+
Na+
Cl-

145
15
20
145
15
4.2

4.5
140
116
4.5
140
116

100
5
10
100
1
1000

K+
Na+
Cl-

145
15
80

4.5
140
116

100
54
21

HiperNa

hipoNa

HiperK

hipo
-K

Hiper
-Na
40C

hipo
-Na
40C

Hiper
-K
40C

hipo
-K
40C

Cual es la importancia de mantener una correcta concentracin de los fluidos extracelulares (Consulte
las consecuencias de los problemas mencionados anterioremete: hipernatremia, hiperkalemia,
hiponatremia, hipokalemia).
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________________
Simulacin del potencial de accin
Entre la pgina http://phet.colorado.edu/en/simulation/neuron y presione el boton run now o
descrguelo y ejectelo en su PC.

En el men Control active potential chart, show charges y show concentration.

Establezca el nivel de zoom que considere ms adecuado para observar la dinmica en la membrana
cuando se genera un potencial de accin. Establezca el nivel de velocidad de la simulacin en la
parte inferior en Sim speed. Presione el botn Stimulate neuron.
1.
Cules son los valores de concentracin intra y extraceluar para Na + y K+ antes de producirse
el potencial de accin
Na+ = _________
K+ = _________
2.
Cules son los valores de concentracin intra y extraceluar para Na+ y K+ en el voltaje de
membrana pico en la despolarizacin?
Na+ = _________
K+ = _________
3.

Cul canal se activa primero? ______________

Cul se activa de segundo? _______________
10

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4.

Cules son los estados por los que pasa el canal de sodio dependiente de voltaje?
____________________ _____________________ ____________________

5.

Cules son los estados por los que pasa el canal de potasio dependiente de voltaje?
____________________ _____________________ ____________________
6.
Qu pasa en el potencial (polaridad de la membrana de manera cualitativa) cuando el
estmulo alcanza el plano de observacin?
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
7.
Cul es el mnimo potencial (valor aproximado) que adquiere la membrana y a que fase del
potencial de accin corresponde dicho valor?
Valor: __________________________
Fase: __________________________
8.
Cul es el ion que con mayor permeabilidad cuando el potencial de membrana est
aumentando?
_______________________________
9.
Cul es el ion con mayor permeabilidad cuando el potencial de membrana cae del mximo
valor al mnimo?
_______________________________
Explique en sus palabras lo sucedido en la simulacin.
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Entre la pgina http://nerve.bsd.uchicago.edu/nerve1.html.
Para simular el potencial de accin de membrana, presiones el botn Membrana AP
En el men superior presione el botn pulses-F7. Se abrir una ventana con el protocolo de
excitacin de la membrana simulada.
1.
UMBRAL DE VOLTAJE: Vare el valor del pulso de excitacin PULSE 1 desde 1 uA hasta 5
uA. Qu sucede en estas condiciones? Diga el valor inicial para el voltaje de membrana y el valor
mximo cuando la excitacin es de 5 uA?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
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_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
2.
POTENCIAL DE ACCIN: Realice el mismo procedimiento con valores de excitacin de
PULSE 1 en 6, 7, 8, 9 y 10. Qu puede decir en esta situacin respecto a la amplitud del
potencial de la respuesta y al tiempo de inicio despus del estmulo? Cul es el valor mximo del
potencial de membrana?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
3.
DURACION DEL PULSO: Establezca la amplitud de PULSE 1 en 1 e incremente el valor de
la duracin para el mismo pulso (aumentos de 0.2). Aproximadamente en que valor de amplitud se
produce en potencial de accin
PULSE 1: 1 uA _____________
Qu se puede inferir de esto?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Realice el mismo procedimiento para amplitud de 2, 3, 4 uA y establezca cual es la duracin del
estmulo (PULSE 1) para la cual se produce el potencial de accin
PULSE 1: 2 uA
________________
PULSE 1: 3 uA
________________
PULSE 1: 4 uA
________________
4.
ADICION TEMPORAL DEL PULSO DE EXCITACIN: En la ventana Pulse protocol
establezca para Amplitude de PULSE 1 y PULSE 3 en 2uA. Para Duration establezca para DELAY=
0.25 ms, PULSE 1 Y PULSE 3 = 0.5 ms, PULSE 2= 6
Qu puede decir de esta situacin?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
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PRCTICA 1: POTENCIAL DE REPOSO DE MEMBRANA Y POTENCIAL DE ACCIN

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Variar el valor de Duration para PULSE 2 a 5 ms, 4 ms, 3 ms, 2 ms, 1 ms y 0 ms

Qu sucede ahora?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
5.
PERIODO REFRACTARIO: En la ventana Pulse protocol establezca para Amplitude de
PULSE 1 y PULSE 3 en 20 uA. En Duration establezca para DELAY= 0.25 ms, PULSE 1 Y PULSE 3
= 0.25 ms, PULSE 2= 1.
Qu puede decir de esta situacin? Cmo se conoce a este periodo refractario y por qu?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Vare el valor de Duration para PULSE 2 a 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 ms. Que observa ahora?. En qu
valor se produce un nuevo potencial de accin? Cunto es aproximadamente el valor mximo el
segundo potencial de accin? Cmo se llama a este periodo en el que se puede producir el nuevo
potencial de accion?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Cambie el valor de Amplitude de PULSE 3 a 40 uA. Y repita el procedimiento anterior. Qu se puede
decir ahora? En qu valor de duracin de PULSE 2 se produce el segundo potencial de accin?
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
7. PREGUNTAS ANEXAS
Pregunta de integracin de conocimiento:
1.
Compare el potencial de reposo para la tabla 3 de simulacin de potencial de reposo y
haga la prediccin de cuando se generara el potencial de accin en el caso de dos tejidos, teniendo
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en cuenta el umbral de activacin (Activacin V 0,5) de los canales de sodio dependientes de voltaje
para cada tejido.
Neurona en humanos: Nav1.1 el Voltaje o potencial umbral = -40 mV
Msculo en humanos: Nav1.4 el Voltaje o potencial umbral = -50 mV
2.
Desde su perspectiva y lo visto en clase, cul es la importancia del conocimiento de la
fisiologa de la membrana celular para el desempeo futuro como Qumico Farmacutico?
8. EVALUACIN
Se entrega un informe escrito tipo artculo cientfico con los resultados y su discusin, adems de las
respuestas a las preguntas planteadas.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Fernndez G. N. Manual de laboratorio de Fisiologa. 6 edicion, Editorial McGraw Hill

Tortora G., Derrickson B. Principles of Anatomy and Physiology 12th edition
Guyton, A. C., Textbook of Medical Physiology. ltimas ediciones
Boron and Boulpaep. Textbook of Medical Physiology 2nd updated edition
Fox Ira Stuart, Fisiologa Humana, Editorial McGraw Hill, Espaa, 2011.
Barrett K. E. Ganongs review of medical physiology.; ltimas ediciones

Gua elaborada por: Carlos Fernando Cardozo Hernndez

ANEXO

Conversin de frmula de Goldman-Hodking-Katz desde la versin general a la versin a 37C

Em=

RT P K [ K ]i + P Na [ Na ] i + PCl [ Cl ] o
ln
F
P K [ K ]o + P Na [ Na ]o + PCl [ Cl ]i

J
310 K
P [ K ] + P [ Na ] i+ P Cl [ Cl ] o
Kmol
log K i Na
Coulomb
PK [ K ] o + P Na [ Na ] o + PCl [ Cl ]i
96500
mol
log e

8.315

Em=

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J
310 K
P [ K ]i + PNa [ Na ] i+ P Cl [ Cl ] o
Kmol
log K
Coulomb
PK [ K ] o + P Na [ Na ] o + PCl [ Cl ]i
96500
mol
0,4343

8.315

Em=

Em=6,15 102

P [ K ]i + P Na [ Na ] i + PCl [ Cl ] o
J
log K
Coulomb
P K [ K ]o + P Na [ Na ]o + PCl [ Cl ]i

Em=61,5 mV log

P K [ K ]i + P Na [ Na ] i + PCl [ Cl ] o
P K [ K ]o + P Na [ Na ]o + PCl [ Cl ]i

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