[EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA EN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO]

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Prctica. Efecto del pH y la temperatura

en el crecimiento microbiano

1. OBJETIVOS

Que el estudiante conozca el efecto del pH y la temperatura

como parmetros de control del crecimiento microbiano.

2. INTRODUCCIN
El ambiente donde se desarrolla un microorganismo tiene una gran
influencia sobre su crecimiento, al igual que las dems formas de
vida. Los factores del medio se pueden clasificar en tres grupos:
a) Fsicos: temperatura, presiones externas, humedad.
b) Qumicos: pH, disponibilidad de nutrimentos, presencia de
productos txicos.
c) Biolgicos: las interacciones microbianas entre las especies
coexistentes.
Algunos microorganismos estn adaptados a los hbitats extremos,
donde otros definitivamente no pueden sobrevivir. Pero hay factores
ambientales que se controlan en condiciones de laboratorio con
mayor frecuencia, adems de los factores nutrimentales son los
fisicoqumicos como: la temperatura y el pH.
Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de
crecimiento que los caracteriza, en la cual muestran su tasa ms alta
de crecimiento. Tambin hay lmites de temperatura, como la
temperatura mnima a la cual son inactivos y la temperatura mxima,
donde el crecimiento ya no es posible.
De acuerdo a la temperatura
microorganismos se clasifican en:

ptima

de

crecimiento,

los

Psicrfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 0-20

C. Por ejemplo, Polaromonas vacuolata, hallado en el ocano
Antrtico, siendo su temperatura ptima es de 4 C.
Mesfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 2040 C.
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Termfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 4080 C.

Hipermfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre
80-100 C. La mayora de estos microorganismos son arqueas
como Methanococcus igneus.

La concentracin de iones hidrgeno del medio afecta directamente a

los microorganismos y las enzimas, e influye tambin
en la
disociacin y solubilidad de molculas que requieren. Dependiendo
del pH en el cual se desarrollen los microorganismos se clasifican en:

Acidfilos: Crecen a pH menores de 5. Por ejemplo, Sulfolobus y

Thiobacillus que crece a pH 1-2 oxidando minerales de sulfuro
para producir cido sulfrico.
Alcalfilos: Crecen a pH mayores a 9, como algunas especies de
Rhizobium, bacillus y algunas bacterias entricas.

Cada microorganismo tiene un pH y temperatura ptimos, por lo cual

al modificar estos factores la velocidad de crecimiento se puede
alterar y causar la muerte de los mismos, por lo que se pueden
emplear como factores de control de crecimiento microbiano.

3. MATERIALES

2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 5.

2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 7.
2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 9.
9 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
sin amortiguar.
3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
sin amortiguar.
3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
sin amortiguar.
3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
con amortiguador.
3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
con amortiguador.
3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado
con amortiguador.
1 asa de inoculacin.
3 pipetas estriles.
1 mechero Fisher.
Espectrofotmetro.
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a pH 7
a pH 5
a pH 9
a pH 7
a pH 5
a pH 9

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Microscopio
Soluciones amortiguadoras de pH 4, 7 y 10.

4. PROCEDIMIENTO
Se proporcionar a los alumnos, cultivos lquidos de bacterias:
Escherichia coli y Lactobacillus sp. Y una suspensin de esporas de
los hongos: Aspergillus niger y Penicillium roqueforti. Etiquetando
cada uno de las cajas y tubos para su correcta identificacin.

4.1. EFECTO DE LA TEMPERATURA

1. En 3 cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa divididas en 2
secciones, inocular 0.1 mL de la suspensin de esporas de
hongos en cada seccin.
2. Incubar una caja de Petri a 15 C, otra a 30 C y la ltima
a 45 C en forma invertida durante 72 horas y
posteriormente hacer las observaciones macroscpicas y
microscpicas.
3. En 6 tubos de caldo de microinoculacin ajustado a pH 7,
inocular 3 con cada una de las cepas bacterianas.
4. Incubar 2 tubos de diferente cepa a 15 C, otros 2 tubos a
30 C y los ltimos 2 tubos a 45 C durante 24-48 horas.
5. Medir la D.O.
4.2. EFECTO DEL pH
1. Preparar tres series de tres tubos de caldo de
microinoculacin ajustados a 3 diferentes valores de pH
(5, 7 y 9) con solucin de HCl 1 M o NaOH 1 M.
2. Preparar otra tres series de tres tubos ajustados a los
mismos valores de pH del punto anterior pero utilizando
soluciones amortiguadoras, vase tabla siguiente:
pH

K2HPO4
0.2 M
(mL)

4.4
7.6

0.9
1.9

cido
ctrico
0.1 M
(mL)
1.1
0.1

cido
brico
0.2 M
(mL)
-------

NaOH
0.2 M
(mL)

Caldo
nutritivo
(mL)

-------

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3. Inocular 0.1 mL de cada una de las cepas bacterianas en

la serie de 4 tubos de caldo de microinoculacin ajustados
a diferentes pH con amortiguador y sin amortiguador,
dejando 1 sin inocular como testigo.
4. Incubar los tubos a 35 C durante 24-48 horas y medir la
D.O.
5. Inocular tres cajas de Petri con medio Agar Papa Dextrosa
ajustado a 3 pH diferentes con cada una de las cepas de
hongos.
6. Incubar las cajas de Petri por 72 horas.
7. Realizar observaciones macroscpicas y microscpicas.

5. RESUTADOS
A. Reportar los resultados en los siguientes cuadros de acuerdo
al convenio: no hay crecimiento (-), crece un poco (+), mayor
crecimiento (++), crecimiento abundante (+++).
B. Comparar los resultados obtenidos con la bibliografa
correspondiente.

CUADRO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL

CRECIMEINTO MICROBIANO (Agar Papa Dextrosa)

Aspergillus niger

Temperatura

Morfologa
de la
colonia

Morfologa
microscpica

Penicillium roqueforti
Morfologa
de la colonia

Morfologa
microscpica

15 C

30 C
45 C
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CUADRO 2. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL

CRECIMEINTO MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin)
Escherichia coli
Temperatur
a

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

Lactobacillus sp.
D.O
.

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

D.O
.

15 C

30 C

45 C

CUADRO 3. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMEINTO

MICROBIANO (Agar Papa Dextrosa)
Aspergillus niger

pH

Morfologa
de la
colonia

Morfologa
microscpica

Penicillium roqueforti
Morfologa
de la colonia

Morfologa
microscpica

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CUADRO 4a. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin sin
amortiguador)
Escherichia coli

pH

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

Lactobacillus sp.
D.O
.

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

D.O
.

CUADRO 4b. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin con
amortiguador)
Escherichia coli

pH

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

Lactobacillus sp.
D.O
.

Morfolog
a de la
colonia

Morfologa
microscpica

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D.O
.

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6. CUESTIONARIO
1. Segn los resultados obtenidos por el efecto de temperatura,
dentro de que clasificacin entra E. coli y Lactobacillus sp.?
2. Cmo influy el pH en el crecimiento de hongos y
bacterias? Qu diferencias se observaron en los medios de
cultivo amortiguados y sin amortiguar?
3. Explique brevemente cuales son los mecanismos celulares
que los microorganismos termfilos extremos y psicrfilos
han desarrollado para adaptarse a condiciones extremas de
temperatura y pH?
4. Mencione el nombre de 2 microorganismos psicrfilos, 2
mesfilos, 2 termfilos, 2 Acidfilos y 2 alcalfilos.
5. Reporte la bibliografa consultada.
6. REFERENCIAS

Aquiahuatl R., Mara de los Angeles. (2005). Manual de prcticas

de microbiologa general. Iztapalapa. Extraido de:
http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos
/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_pra
cticas_de.pdf
Ramrez , N., Serrano, J. A. y SandovaL, H. (2006).
Microorganismo extremfilos, actinomicetos en Mxico. Revista
mexicana de ciencias.Vol. 3. Num. 37. Extradido de:
http://redalyc.uaemex.mx/pdf/579/57937307.pdf

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