Metabolismo de Zymomonas mobilis para

produccin del etanol

Villada Arellano Victor Manuel
Ingeniera en Biotecnologa, Universidad Politcnica del Estado de Morelos, Boulevard
Cuauhnhuac #566, Col. Lomas del Texcal, Jiutepec, Morelos

INTRODUCCIN
Los procesos fermentativos son la etapa ms importante de un proceso de
produccin de un metabolito de alto valor agregado como es el etanol. En esta
etapa, tres factores preponderantes han de ser considerados para garantizar la
obtencin de altos rendimientos de producto y estos son: el sustrato, las
condiciones de operacin y el microorganismo fermentador. El sustrato se
describe como el resultado de un pretratamiento que se efecta sobre la materia
prima original tal. En esta etapa una alta cantidad de azcares asimilables son
liberados de los componentes principales de la materia prima convirtindose en el
sustrato que ha de consumir el microorganismo fermentador.(1)

ANTECEDENTES
La humanidad emplea la fermentacin alcohlica desde tiempos inmemoriales
para la elaboracin de cerveza (empleando cereales) y del vino(empleando el fruto
de la vid: la uva en forma de mosto) fundamentalmente. Los griegos atribuan el
descubrimiento de la fermentacin al dios Dionisio. En el ao 1864 Antoine
Lavoisier hizo experimentos en 1789 determinando las cantidades de los
elementos intervinientes en la fermentacin (carbono, oxgeno e hidrgeno). Con
el advenimiento de los descubrimientos qumicos en el ao 1815 el investigador
francs Joseph Louis Gay-Lussac fue el primero en determinar una reaccin de
fermentacin obteniendo etanol a partir de glucosa, Durante los aos 1830s los
qumicos Jns Jakob Berzelius y Justus von Liebig desarrollaron una teora
mecanicista que explica la fermentacin, teoras que estaban en contraposicin
con las creencias de Louis Pasteur en el ao 1857 que se fundamentaba en la
teora vitalista como explicacin de los mecanismo bsicos de la fermentacin,

fue el mismo Pasteur que en el ao 1875 demostr que la fermentacin era un

proceso anaerbico (en ausencia de oxgeno). (Arthur Harden. 1914) (2)

OBJETIVOS
General:

Analizar el metabolismo de Zymomonas mobilis para la produccin de

etanol por medio de la via Entner Doudoroff.

Analizar otras rutas del microorganismo

FERMENTACIN
Los procesos de fermentacin, en sentido metablico, son aquellos en los que se
produce una oxidacin de compuestos orgnicos reducidos siendo el aceptor final
de electrones un compuesto orgnico interno que se reduce. En estos procesos
puede producirse algn rendimiento energtico; pero su principal funcin es la
reoxidacin del NADH+H+ a NAD necesario para poder iniciar los primeros pasos
del catabolismo. Los diferentes procesos pueden identificarse por sus productos
finales.
Las rutas fermentativas son anaerobias porque no requieren oxgeno como
aceptor final de los electrones. Esto no quiere decir que en ausencia de
oxgeno slo se pueda producir fermentacin: el aceptor final de los electrones
puede ser un compuesto inorgnico oxidado que los reciba al final de la cadena
respiratoria producindose un proceso de fosforilacin oxidativa en ausencia de
oxgeno. En estos procesos decimos que los microorganismos son capaces de
respirar otras molculas diferentes al oxigeno como son los nitratos (NO3) los
sulfatos (SO4), etc. Los procesos de fermentacin son universales; esto es: se
encuentran en todo tipo de organismos y, por consiguiente, probablemente
represente una de las formas ms antiguas de conservacin de la energa.
Cuando una clula carece de cadena respiratoria, el NADH+H+ no puede
reoxidarse a NAD+ y, por consiguiente, no se puede regenerar el agente aceptor
de hidrgeno necesario para las primeras fases de la gluclisis. Los procesos
fermentativos reducen el piruvato regenerando el NAD+ necesario para los
procesos metablicos inciales del catabolismo de la glucosa.
Diferentes tipos de bacterias reducen el piruvato de maneras diversas dando lugar
a distintos procesos de fermentacin que se conocen por sus productos finales (3).

FERMENTACIN ALCOHLICA
La fermentacin alcohlica (denominada tambin como fermentacin del etanol o
incluso fermentacin etlica) es un proceso biolgico de fermentacin en plena
ausencia de aire (oxgeno - O2), originado por la actividad de algunos
microorganismos que procesan los hidratos de carbono (por regla general
azcares: como pueden ser por ejemplo la glucosa, la fructosa, la sacarosa, el
almidn, etc.) para obtener como productos finales: un alcohol en forma de etanol
(cuya frmula qumica es: CH3-CH2-OH), dixido de carbono (CO2) en forma de
gas y unas molculas de ATP que consumen los propios microorganismos en su
metabolismo celular energtico anaerbico. (4)
Figura 1 - Fermentacin etanlica o alcohlica: Proceso de fermentacin llevado a cabo por
levaduras y algunas bacterias. El piruvato se reduce para formar etanol y CO2.

PROCESO BIOQUMICO DE LA FERMENTACIN ALCOHLICA

La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa
anaerbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de
oxgeno para ello disocian las molculas de glucosa y obtienen la energa
necesaria para sobrevivir, produciendo el alcohol y CO2 como desechos como
consecuencia de la fermentacin. Las levaduras y bacterias causantes de este
fenmeno son microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y
contribuyen en gran medida al sabor de los productos fermentados. Una de las
principales caractersticas de estos microorganismos es que viven en ambientes
completamente carentes de oxgeno (O2), mxime durante la reaccin qumica,
por esta razn se dice que la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico. (3)

FERMENTACIN MICROBIANA
La sntesis de etanol por va microbiana generalmente es llevada a cabo por
levaduras, siendo la ms representativa Saccharomyces cerevisiae. Sin embargo,
ha sido reportado en la literatura la produccin de bioetanol por Zymomonas
mobilis bajo diferentes condiciones, resultando en procesos altamente ventajosos
comparado con S. Cerevisiae.
Zymomonas mobilis es una bacteria Gram negativa, anaerobia facultativa con
morfologa de bacilo (como se muestra en la Figura 2). Se encuentra
predominante como parte de la flora natural en fermentacin de las savias, por
ejemplo el agave, la palma y la caa de azcar, donde estn presentes altas
concentraciones de glucosa; as como en las cervezas, peras y las sidras, donde
acta como flora de los desechos (M. Coton. et al. 2005) (5)
.Figura 2 y 3 - Zymomona mobilis. Imagenes tomada de la red

Como ya se menciono anteriormente, se ha reportado que puede producir etanol

con rendimientos hasta cinco veces mayores bajo condiciones anaerobias (Tao. et
al. 2005) (6). Produciendo 1 mol de ATP por mol de glucosa, a diferencia de la va
de S. Cerevisiae, que produce 2 mol de ATP por mol de glucosa, este decremento
permite que ms energa sea usada para la formacin de etanol (Wilkins, 2009;
Rogers, Davis, Pearce y Peiris, 2006). (7)(8). En la Tabla 1 se muestran los
microorganismos con sus respectivos rendimientos y sustratos. El rendimiento se
define como la relacin entre los g de etanol producido por cada g de sustrato
consumido y para la produccin de este alcohol el rendimiento terico, que sirve
de referencia para cuantificar la eficiencia de un microorganismo, es de 0.511 g de
etanol producido/g de sustrato consumido. (9)

Tabla 1 comparacin de S. cerevisiae y Z. mobilis, ambos productores de etanol

Z. mobilis presenta altos rendimientos y productividades de etanol debido a que

este microorganismo metaboliza la glucosa anaerbicamente mediante la va de
Entner Doudoroff (ED) en lugar de la de Embde Meyerhof Parnas (EMP) . La va
ED genera slo la mitad del ATP generado por la va EMP por mol de glucosa,
como consecuencia, Z. mobilis genera menos biomasa y por lo tanto una mayor
cantidad de carbono es dirigida hacia los productos de fermentacin. Adems,
todas las enzimas relacionadas con la fermentacin se expresan de manera
constitutiva y comprenden aproximadamente el 50% de la biomasa.
Va de Entner Doudoroff (ED)
La ruta de Entner-Doudorof es una ruta metablica alternativa que cataboliza
glucosa a piruvato usando una serie de enzimas distintos a la gluclisis y a la ruta
de la pentosa fosfato. Es exclusiva de un nmero reducido de microorganismos
carentes de la ruta Embden Meyerhof. El 6-fosfogluconato puede deshidratarse a
2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato. Este compuesto puede desdoblarse luego en
piruvato y gliceraldehido-3-fosfato mediante una aldolasa. Mediante esta ruta se
produce menos NADPH que en situacin en la que el 6-fosfogluconato es
descarboxilado a ribulosa-5-fosfato. Adicionalmente, el gliceraldehido-3-P se oxida
a piruvato por la va de Embden-Meyerhof, descarboxilndose en ambos casos el
piruvato y originando acetato.
Figura 4 Reaccin en general de la ruta de Entner-Doudorof

En Gluconobacter oxydans y
Melanogenes,
el
6fosfogluconato
puede
deshidratarse a 2-ceto-3-desoxi6-fosfogluco
neto.
Este
compuesto puede desdoblarse
luego
en
piruvato
y
gliceraldehido-3-P mediante una
aldolasa. Mediante esta ruta se
produce menos NADPH que en
la situacin en la que el 6fosfogluconato
es
descarboxilado a ribulosa-5-P
Adicionalmente,
el
gliceraldehdo-3-P se oxida a
piruvato por la va de EmbdenMeyerhof, descarboxilndose en
ambos casos el piruvato y
originando acetato tal como ha
sido descrito anteriormente. Esta
va se conoce como va de
Entner-Doudoroff, y es la
mismautilizada por Zymonomas
mobilis para llevar a cabo una
fermentacin alcohlica con una
estequiometria similar a la de las
levaduras (Figura N 2.5 y
Figura N 2.6).

Figura 5 Esquema de la va de EntnerDoudoroff

como estrategias microbianas de fermentacin
alcohlica.

Comienza con las mismas

reacciones de las pentosas
fosfato. Se forma 2-ceto-3desoxi-6-fosfogluconato
o
KDPG. Desde GAL-3P hasta
Piruvato es catalizado porenzimas
comunes a la va Glicoltica. Se
produce 1NADPH y 1 NADH por
molcula de glucosa metabolizada

La mayora de las bacterias tienen las vas glucoltica y de las pentosas fosfato,
pero algunas sustituyen la gluclisis por la Va Entner-Doudoroff. (9)

Figura 7 Esquema resumido de la va de EntnerDoudoroff, el destino de la mayora de los

distintos tomos de carbono. (10)

Figura 7 - Las dos vas del 6-P-gluconato. (a) sistema de la 6-Pgluconato deshidrogenasa (b)
reaccin clave de la va de EntnerDoudoroff (c) origen de los tomos de C de las molculas de
CO2 formadas en la fermentacin alcohlica de la glucosa por las levaduras (va de EmbdenMeyerhorf) y Zymononas mobilis (va de EntnerDoudoroff).

OTRAS VAS METABLICAS DEL ZYMOMONAS MOBILIS

No hay literatura disponible de las otras rutas metablicas que realice este
microorganismo en especfico, sin embargo, se han hecho pruebas del
comportamiento del gnero al estimularlo con diversos nutrientes pero no se han
logrado a entender a fondo como para poder representarlo en un esquema como
se presentaron antes, por ejemplo:
Formacin de acetaldehdo el acetaldehdo puede ser atrapado durante la
fermentacin de la glucosa, este compuesto, junto con cantidades variables de
sulfuro de hidrgeno, contribuye al sabor y olor desagradables del sidra. Esto debe
ser considerado como uno de carcter general y se aplica a un tipo de
fermentacin que se distingue por la descomposicin de los azcares para
producir no solo etanol, si no aldehdos en suficiente cantidad para llamarlo
fermentacin de aldehdos
Se sabe que tambin el gnero Zymomonas lleva a cabo la formacin de
acetilmetilcarbonilo metabolismo de los aminocidos, de alcoholes superiores, de
H2S y el metabolismo del azufre
CONCLUSIN
Zymomona mobilis es una bacteria muy inusual ya que fermentan la glucosa
anaerobicamente por la ruta de Entner Doudoroff. El etanol es un combustible
limpio, renovable, que puede reducir la dependencia del petrleo; sin embargo,
aunque el proceso fermentativo para la produccin de bioetanol es ya bien
conocido, los costos de produccin son todava el impedimento clave para su
amplio empleo como combustible.
Para que esto resulte factible, es necesario seguir llevando a cabo proyectos de
investigacin enfocados al uso de cepas altamente eficientes en la produccin de
etanol, como lo es Zymomonas mobilis, con capacidad de co-fermentar C5/C6,
sustratos de fermentacin econmicos, inmovilizacin de clulas, y optimizacin
de condiciones para que ocurra la fermentacin.
REFERENCIAS
1. Triana Caranton, C.F. (2010). Produccin de etanol a partir de residuos
provenientes del cultivo de caf. Universidad Nacional de Colombia sedes
Manizales, Tesis de posgrado.
2. Arthur Harden, 1914, Alcoholic Fermentation .Ed. Longmans, Green and co
3. http://biolcchn.wikispaces.com/Fermentaciones

4. http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Final
es_Investigacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAP
ITULO%20N%BA%2002.pdf
5. Coton, M., Laplace, J. M., Auffray, Y., y Coton, E. (2005). Duplex PCR
method for rapid detection of Zymomonas mobilis in cider. Journal of the
Institute of Brewing, 111(3), 299-303
6. Tao, F, Miao, J. Y., Shi, G. Y., y Zhang, K. C. (2005). Ethanol fermentation
by an acid-tolerant Zymomonas mobilis under non-sterilized condition.
Process Biochemistry, 40, 183-187.
7. Wilkins, M. R. (2009). Effect of orange peel oil on ethanol production by
Zymomonas mobilis. Biomass and Bioenergy, 33, 538-541.
8. Rogers, P., Davis, L., Pearce, J., y Peiris, P. (2006). Evaluation of
Zymomonas-based ethanol production from a hydrolysed waste starch
stream. Biomass and Bioenergy, 30, 809-814.
9. http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Final
es_Investigacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAP
ITULO%20N%BA%2002.pdf
10. J Swings and J De Ley. 1977. The biology of zymomonas. Bacteriol Rev. 41
(1). 1-46.