Laboratorio 1

Objetivos
Objetivo general:

Reconocer que los microorganismos existen

y estn presentes en una forma

amplia en la naturaleza y que es posible encontrar el mismo microorganismo en

reas diferentes.
Objetivo especfico:

Examinar las caractersticas macroscpicas de los microorganismos cultivados y

observar que aun cuando el origen de las muestras es distinto pueden tener

caractersticas macroscpicas distintas debido a que poseen el mismo organismo.

Observar los frotis de origen distinto sometidos a coloraciones diferentes en el
microscopio y verificar la presencia de algunos

microorganismos

fcilmente identificables por sus agrupaciones o formas caractersticas.

comunes y

Introduccin
El presente trabajo consta del conocimiento terico que explica la distribucin
de la variedad de microorganismos en el planeta tierra en el cual se encuentra
algunos microorganismos comunes en ambientes diferentes o geogrficamente
separados gracias a factoras como corrientes de aire, lluvia o polvo.
De la misma forma expone como en los seres vivos que aun cuando desarrollan
la gestacin en un ambiente estril se necesita que en las primeras horas de
vida adquieren microorganismos que sern tiles para el ptimo desarrollo y
supervivencia en un ambiente cargado de microrganismos
Se plasman las observaciones macroscpicas y microscpicas correspondientes
a la prctica de laboratorio que son de suma importancia para lograr concluir
de forma coherente con la teora adquiriendo as conocimiento de forma
experimental.
Finalmente se completa el cuestionario establecido para esta prctica y se
anexan las imgenes de correspondientes a cada medio ya incubado despus
de 8 das.

Distribucin de los microorganismos en la naturaleza

Los microorganismos cumplen papeles importantes en la regulacin del
ecosistema. Dada la abundancia de microorganismos unos actan como
saprfitos descomponiendo la materia, otros como auttrofos fijando gases
atmosfricos.
El primer hbitat natural de los microorganismos fue el agua. En su evolucin,
algunos se adaptaron al medio terrestre, siendo estos medios sus principales
hbitat en la actualidad, estn en el aire pero en este hbitat su actividad vital
es mnima y llegan a l procedentes de los otros dos medios, tambin podemos
encontrarlos en simbiosis con otro ser vivo y por ltimo, otros pueden
comportarse como parsitos u oportunistas provocando enfermedades.

Microbiologa del suelo

Los microorganismos son los componentes ms importantes del suelo.

Constituyen su parte viva y son los responsables de la dinmica de
transformacin y desarrollo. La diversidad de microorganismos que se
encuentran en una fraccin de suelo cumplen funciones determinantes en la
transformacin de los componentes orgnicos e inorgnicos que se le
incorporan. Esto permite comprender su importancia en la nutricin de las
plantas al efectuar procesos de transformacin hasta elementos que pueden
ser asimilados por sus races. La humificacin de la materia orgnica es un
proceso netamente microbiolgico.
La microflora del suelo est compuesta por bacterias, actinomicetos, hongos,
algas, virus y protozoarios. Entre las funciones ms importantes que cumplen
asociadamente en los procesos de transformacin estn:

Suministro directo de nutrientes (Fijacin de nitrgeno).

Transformacin de compuestos orgnicos que la planta no puede tomar
a formas inorgnicas que si pueden ser asimiladas (Mineralizacin).
Ejemplo: Protena hasta aminocidos y a nitratos.
Solubilizacin de compuestos inorgnicos para facilitar la absorcin por
las plantas. Ejemplo. Fosfato triclcico a Fosfato monoclcico.
Cambios qumicos en compuestos inorgnicos debido a procesos de
oxidacin y reduccin. Ejemplo. Oxidacin del azufre mineral a sulfato.
Oxidacin del nitrgeno amoniacal a nitrato.
Aumento del desarrollo radicular en la planta que mejora la asimilacin
de nutrientes, la capacidad de campo y el desarrollo.
Reacciones antagnicas, parasitismo y control de fitopatgenos.
Mejoramiento de las propiedades fsicas del suelo

Las bacterias del suelo

Son los microorganismos ms abundantes y pequeos (0,1 a 1 micras). Pueden
ser aerobias (crecen con oxgeno), anaerobias (crecen sin oxgeno) o

facultativas (crecen con o sin oxgeno). Pueden tolerar pH cido (acidfilas), pH

bsico (basfilas) o pH neutro (neutrfilas). En suelos cidos algunas bacterias
neutrfilas tienen la capacidad de neutralizar el suelo donde se estn
desarrollando para cumplir su funcin.
Los suelos agrcolas que estn sometidos a la mecanizacin continua, al
monocultivo, al riego, a la aplicacin de agroqumicos y fertilizantes de sntesis,
a la compactacin y a las quemas, tienen una flora microbiana muy baja que
afecta su fertilidad.
Hongos del suelo
Conforman una importante fraccin de la biomasa total microbiana del suelo.
Crecen en forma de red extendindose como micelio hasta su estado
reproductivo donde dan origen a esporas sexuales o asexuales. Son
importantes degradadores aerobios de material vegetal en descomposicin en
suelos cidos. Producen enzimas y metabolitos que contribuyen al
ablandamiento y a la transformacin de sustancias orgnicas. Tambin estas
enzimas forman parte de la actividad de otros microorganismos.
Los gneros de hongos ms importantes asociados a las races de las plantas
son Aspergillus, Penicillium, Rhizopus y Trichoderma. El Aspergillus y el
Penicillium movilizan el fsforo y el nitrgeno del suelo. El Trichoderma sostiene
la humedad en las races en condiciones de sequa.
Algunas levaduras son importantes fermentadoras de carbohidratos
produciendo alcoholes que son utilizados por otros microorganismos como
fuentes de energa. Entre los gneros ms importantes estn el Saccharomyces
y el Rhodotorula.
Existen microrganismos encargados de funciones especficas tales
como:

Fijadores de nitrgeno no simbitico

Nitrofijadores simbiticos
Solubilizadores de la urea
Transformadores de fsforo
Transformadores el azufre
Movilizadores de potasio

Microorganismos en humanos y animales

La mayor parte de los microorganismos que habitan en el cuerpo humano lo
hacen porque se benefician de los nutrientes y del hbitat protegido que este
cuerpo humano les provee. Pero desde el punto de vista del cuerpo humano
esta relacin puede ser mutualismo, comensalismo o parasitismo, segn sea
beneficiosa, neutral o perjudicial, respectivamente. Independientemente del
tipo de relacin, todas comienzan con el contacto, algunos microorganismos se
establecen permanentemente colonizndolo microbiota normal, otros
desaparecen rpidamente y otros invaden los tejidos. Este contacto con los

microorganismos conduce a la infeccin, condicin en la cual el

microorganismo patgeno elude las defensas del husped, penetra en los
tejidos y se multiplica. Cuando los efectos acumulativos de la infeccin daan
los tejidos se produce una enfermedad infecciosa. La relacin husped
parsito comienza con el contacto, progresa a la infeccin y finaliza en
enfermedad. Cuando un microorganismo potencialmente infeccioso est
presente en el cuerpo sin invadirlo todava se le denomina contaminante, por lo
que estar contaminado no es lo mismo que estar infectado ya que no todas las
contaminaciones acaban en infeccin y no todas las infecciones acaban en
enfermedad. De hecho, la contaminacin sin infeccin y la infeccin sin
enfermedad es la regla.
Sin embargo, como en todo ecosistema, si el equilibrio se trastoca o si algn
microorganismo extrao invade alguna regin del organismo de tal modo que
rebase los sistemas normales de defensa, surgen entonces distintos tipos de
enfermedades. Como sabemos, las enfermedades infecciosas son la primera
causa de muerte en el mundo, y los factores ambientales y los cambios en el
organismo husped pueden propiciar que aparezca este tipo de enfermedades.
Desde otra perspectiva, los microorganismos tienen, desde la antigedad y
sobre todo hoy da, un papel de gran importancia en la industria, ya que han
permitido el desarrollo de procesos biotecnolgicos para elaborar insumos y
productos alimenticios, farmacolgicos y muchos otros. De ah que el mundo
microbiolgico sea para el ser humano tan importante como el que aparece a
simple vista, y su conocimiento, explicacin y manejo sea indispensable para
todos los individuos en particular, y ms an para la sociedad en su conjunto.
Asi como los humanos tienen microbiota normal tambin los animales la
poseen y cuando nacen los niveles son bajos o casi nulos pero esta se adquiere
a lo largo del crecimiento y es en su mayora benfica pero la adquisicin de
algunos microorganismos puede afectar produciendo enfermedades o la
muerte del ser vivo.
Microorganismos de ambientes acuaticos
Por lo general los ocanos son una barrera efectiva para el desplazamiento de
esporas sin embargo en algunos casos parece haber tenido xito como la
infeccin de las plantaciones de caf con la roya del caf, la cual se cree que
tubo origen en el occidente de frica y atraves al atlntico del sur. Tambin es
comn que las esporas atraviesan estrechos de aguas cortas como el Canal de
la Mancha o el Mar del Norte.
Si las esporas son trasportadas por corrientes de conveccin o en condiciones
climticas favorables para la elevacin de masas de sistemas frontales, pueden
dispersarse decenas o centenares de kilmetros. La trasmisin de
enfermedades de animales no es, por lo general importante en el aire de
exteriores.

Mientras ms alta esta la partcula ms probabilidades tiene de dispersarse a

mayor distancia, los patrones climticos mundiales tambin influyen en la
distribucin vertical de las esporas en el aire.
Algunas bacterias pierden viabilidad debido a la toxicidad por oxgeno y un
mecanismo desconocido (el factor del aire libre) origina la viabilidad durante la
noche; el factor de aire libre es posiblemente un contaminante qumico del
aire.
3.4 Microbiologa del aire:
La Microbiologa del aire comienza en el siglo XIX, con Pasteur y Miquel que
disearon mtodos para estudiar los microorganismos en el aire y descubrir la
causa de algunas enfermedades. Desde entonces numerosos investigadores
han trabajado en este campo tanto en el aire exterior como en recintos
cerrados.
3.4.1 Nmero y distribucin de microorganismos en el aire
El nmero de microorganismos de la atmsfera cambia segn la altura (10-104
por m3 ), obtenindose el ms alto junto al suelo, sobre todo en los dos metros
inferiores, que constituyen el microclima del hombre, disminuyen hasta los 200
metros y luego se hacen ms escasos hasta los 5.000 metros, su presencia es
rara hasta el lmite de la troposfera y no se encuentran en la estratosfera. El
nmero de microorganismos del aire en las zonas pobladas depende de la
actividad en esa zona, tanto industrial o agrcola, como de los seres vivos y la
cantidad de polvo. El nmero de microorganismos es mayor en las zonas
pobladas y despus en el mar, cerca de las costas. En las zonas desrticas no
hay ms que lo que aportan los vientos de las zonas habitables prximas y en
los casquetes polares no hay nada. En las zonas con clima seco, el aire
contiene numerosos microorganismos y el nmero desciende despus de la
lluvia debido a que sta los arrastra por lavado del aire. Hay variaciones
estacionales en el nmero de microorganismos en la atmsfera. Los hongos
son tpicamente ms abundantes en verano que en el resto del ao, mientras
que las bacterias son ms abundantes en primavera y otoo debido a factores
como la temperatura, humedad relativa del aire, exposicin a la luz solar.
Generalidades en los microorganismo
Permanencia
El tiempo que permanecen los microorganismos en el aire depende de la
forma, tamao y peso del microorganismo y de la existencia y potencia de las
corrientes areas que los sostengan y los eleven. Son factores adversos los
obstculos, que al oponerse a los vientos, disminuyen su velocidad y su
potencia de arrastre, y las precipitaciones, que arrastran al suelo las partculas
suspendidas. La sedimentacin de los microorganismos por gravedad slo es
importante en el aire en calma.

Se denomina Curva de Persistencia a la curva porcentual que se traza

alejndose radialmente del punto de origen de la carga microbiana. Este hecho
es importante sanitariamente para enfermedades transmitidas por el aire, por
el alcance de difusin de los microorganismos causantes de la infeccin.
Supervivencia
Las condiciones fsico-qumicas de la atmsfera no favorecen el crecimiento ni
la supervivencia de los microorganismos por lo que algunos solo pueden
sobrevivir
durante un breve perodo de tiempo, Se llama Curva de
Supervivencia a la curva porcentual de microorganismos vivos respecto del
total de los persistentes en el aire. Es muy difcil que llegue a ser cero, porque
siempre hay algunos microorganismos que son capaces de sobrevivir.
Los principales factores que intervienen en la supervivencia
Temperatura: Est muy relacionada con la humedad relativa, por lo que es
difcil separar los efectos que producen ambas. Existen organismos termfilos y
mesofilos.
Oxgeno: Se ha observado una correlacin negativa entre la concentracin de
oxgeno y la viabilidad, que aumenta con la deshidratacin y el tiempo de
exposicin. La causa de la inactivacin podra ser los radicales libres de
oxgeno.
Materia orgnica: La atmsfera contiene muy poca concentracin de materia
orgnica, y en la mayora de los casos, es insuficiente para permitir el
crecimiento heterotr- fico. El agua disponible es escasa por lo que, incluso el
crecimiento de microorganismos auttrofos est limitado
Radiaciones: La inactivacin que producen en los microorganismos depende
de la longitud de onda e intensidad de la radiacin. Las de longitud de onda
corta (rayos X, rayos () contienen ms energa, son ionizantes y alteran o
destruyen el DNA de los microorganismos. La exposicin a radiaciones de corta
longitud de onda, como la luz ultravioleta, es la principal causa de prdida de
viabilidad de los microorganismos que entran en la atmsfera. Las radiaciones
ultravioletas aumentan con la altura, debido a una menor retencin, lo que
causa mutaciones y la muerte de los microorganismos. Algunos se protegen de
los efectos letales de la radiacin por los pigmentos que producen
Otros factores: Diversos estudios mostraron que el aire atmosfrico produca
un mayor grado de inactivacin que el aire inerte obtenido en el laboratorio. La
causa podra ser las reacciones entre el ozono y las olefinas debido a una
combinacin de factores que incluyen concentracin de contaminantes e iones
en el aire, humedad y fluctuaciones de la presin, al conjunto de los cuales se
les llama factores del aire abierto.
Los microorganismos dispersados por el aire tiene una gran importancia
biolgica y econmica. Producen enfermedades en plantas, animales y
humanos, causan alteracin de alimentos y materiales orgnicos y contribuyen

al deterioro y corrosin de monumentos y metales. Las enfermedades

transmitidas por el aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las
respiratorias (neumona, tosferina, tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe),
sistmicas (meningitis, sarampin, varicela, micosis) y alrgicas.

Laboratorio 2
Objetivos
Objetivo general:

Emplear las algunas de las diferentes tcnicas de cultivo bacteriano que se

usan en los laboratorios de microbiologa as como las coloraciones que
existen para identificar los tipos de microorganismo que se estudia.

Objetivos especficos:

Identificar las caractersticas de cada una de las siembras utilizadas en este

laboratorio.
Hacer un uso adecuado de los microorganismos y reactivos para obtener los
resultados esperados.

Introduccin:
En el presente reporte de laboratorio se muestra una un poco de lo que ha
sido la historia de los medios de cultivo as como quienes fueros los
precursores de los medios de cultivo facilitando de esta manera el estudio de
los microorganismos, adems se establecen cules son las consideraciones que
se tienen cuando se hace uso de los medios de cultivo, la temperatura a la que
se debe trabajar, el pH que presentan y las caracterices que se deben observar
en los medios de cultivo.
Posteriormente se presentan las observaciones que se tuvieron mientras se
realizaba la segunda prctica de laboratorio correspondiente a Procedimiento
de microbiologa tcnicas de cultivo bacteriano y coloraciones.
Se concluye a cerca de las experiencias de laboratorio para finalizar dando
respuestas a las preguntas establecidas en el cuestionario asignado a esta
prctica.

La evolucin de los medios de cultivo

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como
ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la
observacin de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta
a punto de los medios de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante,
marcan dos importantes puntos de inflexin en su evolucin.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se
han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo
Brefeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos
realizados a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor
tamao) y no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo
enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de
patata como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne
lquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un
medio slido transparente ideal para la observacin de la morfologa
macroscpica de las colonias microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en
relacin con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de
cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a
las clsicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta
entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones
sobre las bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre
todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de
enriquecimiento. Disearon este tipo de medios de tal forma que su especial
composicin qumica favoreca el crecimiento de ciertos tipos de
microorganismos que, en funcin de sus procesos metablicos, eran los nicos
capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando
indicadores de pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda

observar la produccin
microorganismos.

de

cidos

en

la

fermentacin

en

ciertos

Medios de cultivo microbiano y condiciones necesarias.

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.
disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas.
En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia
inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las
reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones
de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la
preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo
provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios
es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible
de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no
suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar
los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade
a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales
como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo

productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que
muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.

Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn
adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones
atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de
adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas
en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas
en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de
agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y
evitar as que se deseque el medio.
Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
Potencial de Hidrogeno (pH)
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de
los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con
un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se
debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden

el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus

procesos metablicos normales.
Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre
15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o
incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los
patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos,
alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios.
Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir
el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en
dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).

Clasificacin de acuerdo a su estado fsico

De acuerdo a el estado en el cual el medio de cultivo se conserva despus de
ser preparado podemos clasificarlo como:

lquidos

semislidos

slidos

Identificacin y diferenciacin de bacterias.

En la naturaleza los microorganismos son una mezcla de distintas formas, por
ello se emplean tcnicas especiales para obtener cultivos de una sola clase
cultivos puros.
Identificacin de microorganismos.
Identificacin por medio de claves: se emplean caractersticas de los
microorganismos para establecer claves, se han elaborado muchas claves en
forma, es bastante sencillo seguir las vas para cotejar las caractersticas por
contraste y por ultimo llegar al nombre cientfico del organismo.

Forma o morfologa: caracteres de tincin, caracteres de cultivo, caracteres

bioqumicas; la morfologa de una bacteria varia con los factores y
circunstancias en que se cultiv.
Caractersticas a observar en un cultivo microbiano:

Descripcin de colonias en palcas de agar: tamao, forma, color,

elevacin, aspecto con la luz, bordes.
Cultivos en medios inclinados de agar: filiforme, espinosa, granulosa,
punteada, arborescentes, rizoide.
Cultivo en caldo: turbidez uniforme y nebulosa, sedimento en el fondo,
pelcula en la superficie.