ENCB. IPN.

Departamento de Microbiologa

Laboratorio de Bioqumica Microbiana

Curso terico agosto diciembre 2016

Grupo 5IV1

M en C. Carlos Jorge Martnez Canseco

MODULO 1.

TRANSPORTE DE NUTRIENTES EN PROCARIONTES

1.1. La membrana plasmtica como unidad funcional del transporte
1.1.1. Composicin de las membranas biolgicas: Lpidos, Protenas y Carbohidratos y su importancia en
seales
1.1.2. Modelos de membranas. Modelo del mosaico fluido.
1.2. Metodologa para estudiar el transporte.
1.3. Mecanismos de transporte. Aspectos cinticos y requerimientos de energa

Transporte no mediado (Difusin).

Transporte Mediado: Caractersticas del transporte mediado.
Inhibicin del transporte mediado: competitiva, por saturacin y modificacin qumica
Difusin por transportadores, tipos y mecanismos. Difusin mediante canales y ionforos

1.4. Requerimientos energticos.

1.5 Modelos especficos de transporte.
1.6. Importancia fisiolgica del transporte

Objetivos de la unidad

El alumno explicara los conceptos, modelos y mecanismos moleculares

relacionados con el transporte de solutos a travs de las membranas

biolgicas, de acuerdo a las caractersticas cinticas y energticas, y su

importancia en el metabolismo celular.

1.1. La membrana plasmtica procarionte como unidad funcional del transporte de solutos
procarionte. (Del ingl. procaryote).
1. adj. Biol. Dicho de un organismo: Cuyo cido desoxirribonucleico no est confinado en el interior de un ncleo, sino extendido en
el citoplasma. U. t. c. s.

Ubicacin taxonmica

Real Academia Espaola Todos los derechos reservados

Dominios

Eukarya, organismos con ncleo y

compartamentalizados, todos los multicelulares
y algunos unicelulares.

Bacteria, no compartamentalizados,
unicelulares.

Archaea, unicelulares con membranas

caractersticas y genoma muy alejado del
bacteriano.

Nota: Bacteria (con mayscula) se refiere al dominio

bacteria (con minscula) se refiere a los procariontes, los
miembros de los dos dominios.
Bacteria y Archaea son procariontes.

Caractersticas generales de los procariontes y eucariontes.

Genforo (procariontes)
Un solo cromosoma
ADN c.d. C.C.C.
No membrana nuclear
No histonas

Replicacin material
gentico: No mitosis
Org. citoplasma:
No orgnulos de tipo
eucariticos
No citoesqueleto
Ribosomas 70S

Nucleoplasma (eucar.)
Varios cromosomas
ADN c.d. lineal, terminado el telmeros
Existe membrana nuclear
Histonas unidas al ADN (cromatina)

Replicacin material gentico: mitosis

Org. citoplasma:
Orgnulos (RE, (mitocondrias, cloroplastos,
Golgi)
Citoesqueleto
Ribosomas 80S

Estructuras que envuelven a los procariontes.

a. Paredes celulares procariontes

El peptidoglucano de eubacterias

Algunas variantes de PG en Gram-positivas

Resistencia a las fuerzas osmticas del protoplasto (515 atm). Rigidez en funcin
El grado de entrecruzamiento
Al mismo tiempo, flexibilidad soporta variaciones de
presin osmtica Condiciona la forma celular

L-DAB (diaminobutrico)
L-lisina
L-homoserina
L-ornitina

Paredes celulares de las arqueobacterias (arqueas). Diferencias bioqumicas

fisiolgicas y genticas en relacin a las eubacterias

En muchos casos, la funcin de P.C.

la ejerce la capa S paracristalina, a
base de subunidades de
(gluco)protenas

En Methanosarcina y Halococcus:
capa S rodeada de
metanocondroitina

En Metanobacteriales:
pseudomurena:

Unidades repetitivas de
NAG(1-3)NAT (N-acetiltalosaminournico)

Del grupo NH del NAT sale un

tetrapptido, con aminocidos de
la serie L

Cadenas se entrecruzan por

puentes peptdicos entre aa(4)
de una y di-aa(3) de otra

1.1. Biomembranas.
Membranas biolgicas: bicapa de lipoprotenas que delimitan y proporcionan individualidad a clulas
procariontes y eucariontes.

Las membranas biolgicas se encuentran tanto en procariotes como en eucariotes, en los primeros son
responsables de la individualidad celular, en los segundos, dan lugar a la compartamentalizacin.

1.1.1. Composicin qumica de las membranas biolgicas

A) fase de estudios del comportamiento de los lpidos en el agua

ao 77 D.C

Plinio el Viejo, el
agua del mar puede ser
calmada fcilmente
con el petrleo

1890 Lord Raleigh

Benjamn Franklin,1774

el tamao de la zona que

ocupara determinado
volumen de petrleo al ser
esparcido en el agua, y el
grosor de la pelcula formada

1887 W. Pfeffer

concepto membrana
biolgica propiedades
osmticas en las clulas
vegetales. la existencia
alrededor de la clula de
una capa de protoplasma
con un espesor fino e
invisible, podra tener
propiedades osmticas.

E.Charles Overton 1895

cmo las clulas vegetales

consiguen absorber algunas
substancias y excretar otras,
substancias de origen lipdico
(lipoide) atravesaban la membrana
con relativa facilidad. Similitud
entre membranas y lpidos

Con excepcin de algunos virus, la mayora de los seres vivos contiene membranas, estas son un componente limtrofe y activo
que separa la clula del medio extracelular

El Desarrollo Histrico del Modelo Cientfico de Membrana Plasmtica: perspectivas didcticas. Joglar, Carol; Quintanilla Mario; Ravanal Eduardo; Brunstein, Juan. VIII Encontro Nacional de Pesquisa em Educao em Cincias
VIII ENPEC I Encuentro Iberoamericano de Investigacin en Didctica de las Ciencias I IEPEC Campinas, 5-9 de Dezembro de 2011

1.1.1. Composicin qumica de las membranas biolgicas

A) fase de estudios del comportamiento de los lpidos en el agua

Irving Langmuir. 1916

relat el comportamiento de los

fosfolpidos en el agua, donde sus
grupos polares se disponan
perpendicularmente al agua y los
hidrocarburos en direccin
opuesta a ella

Gorter, Grendel, 1925

los lpidos de las membranas de

eritrocitos de varios animales, tienen
tamaos diferentes, al extenderlos
sobre el agua, ocupaban el doble de
la superficie de cada una de las
clulas de provenan: la membrana
de los eritrocitos est cubierta por
una capa de substancias de
naturaleza lipdica, la cual tiene
como espesor el tamao de dos
molculas

Kenneth Stewart Cole,1938)

concluy que la membrana celular

tena que estar formada por otros
componentes adems de lpidos

James F. Danielli
E. Newton Harvey 1935.

evidenciaron el requerimiento de
un factor adicional en la
membrana, que seran las
protenas

El Desarrollo Histrico del Modelo Cientfico de Membrana Plasmtica: perspectivas didcticas. Joglar, Carol; Quintanilla Mario; Ravanal Eduardo; Brunstein, Juan. VIII Encontro Nacional de Pesquisa em Educao em Cincias
VIII ENPEC I Encuentro Iberoamericano de Investigacin en Didctica de las Ciencias I IEPEC Campinas, 5-9 de Dezembro de 2011

B) La fase del desarrollo de las caractersticas estructurales estticas de la membrana.

cidos grasos
molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada de tipo lineal, y con un nmero par de tomos de carbono. Tienen en
un extremo de la cadena un grupo carboxilo (-COOH).
Saturados: enlaces simples entre los tomos de carbono, mirstico (14C), el palmtico (16C) y el esterico (18C).
Insaturados uno o varios enlaces dobles en su cadena (codos), con cambios de direccin:olico (18C, un doble enlace) y el
linoleco (18C y dos dobles enlaces).
Las dos cadenas de cidos grasos son hidrfobas y tienen longitud variable (14
a 24 C). Una de estas cadenas presenta dobles enlaces cis (es insaturada) y la
otra no tiene dobles enlaces (es saturada).

Las diferencias en longitud y grado de instauracin

afectan la capacidad de las molculas de
fosfolpidos para empaquetarse, modificando su
fluidez.
El tercer C del glicerol est unido por un grupo
fosfato a una molcula orgnica hidroflica, que
generalmente contiene un tomo de nitrgeno o
un hidrato de carbono.
Las molculas con una regin hidrofbica y otra
hidroflica, se denominan anfipticas.

Fosfoglicerolpidos Fosfolpidos
Se caracterizan por presentar un cido ortofosfrico en su zona polar. Son las molculas ms
abundantes de la membrana citoplasmtica.

Clasificacin de los lpidos de membrana. Con base en sus principales constituyentes.

Fosfolpidos (Fosfoglicerolpidos) . Grupo fosfato, son los principales lpidos de membrana.

Glicolpidos. Azucares. En membranas externas, marcadores de superfcie, reconocimiento celular.

Esfingolpidos. Contienen esfingosina amino alcohol insaturado en lugar del glicerol.

2 tipos de fosfogliceridos: con etanol amina, fosfatidiletanoaminas o cefalinas, en eucariotes (cerebro), con
colina fosfatidil colinas o lecitinas

Esfingomielinas: esfingolpidos contienen un cido graso, cido fosfrico, y son

componentes de la mielina que rodea al axn, enfermedades desmielinizantes daan esta
estructura, esclerosis mltiple.

Diferencia entre lpidos de eubacterias y de arqueas

a) las eubacterias forman enlaces ster entre glicerol y cidos grasos

b) las arqueas forman enlaces ter entre el glicerol y cadenas de
alcoholes isoprenoides
c) isopreno, precursor de los alcoholes isoprenoides eterificados con
glicerol en arqueas

Ejemplos de lpidos de arqueas

difitanil-glicerol-diteres. Los alcoholes suelen ser
derivados poliisoprenoides. Este tipo de
membranas son ms rgidas que las de
eubacterias.
Incluso existen arqueas con membranas a partir
de tetrafitanil-diglicerol-tetratereres, que
consituyen bicapas monomoleculares

Composicin Qumica de la Membrana

La membrana plasmtica se encuentra constituida principalmente por dos capas de Fosfolpidos, molculas de Colesterol y
diversos tipos de protenas ( tanto protenas simples como protenas conjugadas )

Cuando se observa la membrana plasmtica a travs de

micrografas, es posible observar una estructura densa
clara - densa. Bsicamente, todas las clulas existentes
parecen mostrar esta estructura de tres capas.

Las protenas que se pueden encontrar en la membrana son principalmente de dos tipos:

Protenas integrales (=endoprotenas)

Atraviesan de lado a lado la membrana
Difciles de extraer respecto de lpidos
Desplazamiento horizontal, pero no flip-flop vectoriales, con polaridad definida

Protenas perifricas (=epiprotenas)

Unin lbil al lado citoplsmico de la membrana.
Fciles de extraer y purificar
Algunas pueden establecer contactos transitorios

C) la fase del desarrollo de los aspectos dinmicos de la membrana plasmtica

1935, Hugh Davson y James Frederic Danielli :
En la actualidad existe un cuerpo de evidencia considerable que apoya la opinin de que las clulas vivas estn
rodeadas por una fina pelcula de material lipdico. El trmino lipoide utilizado aqu se refiere a una sustancia
mucho ms soluble en hidrocarburos que en el agua [...] Esto ofrece un argumento bastante slido respecto a
que en estas clulas la pelcula que separa el contenido de la celda elctrica del medio circundante es de grosor
unimolecular y trimolecular. Si, como parece razonable suponer, la misma membrana de una pelcula se ocupa

tanto de las propiedades elctricas y de la permeabilidad, se convierte en relevante para considerar

si las potencialidades de una pelcula de tal dimensin son suficientes para explicar los fenmenos
observados en los sistemas biolgicos(Danielli & Davson, 1935, pag 495)

estructura de la membrana en forma de emparedado en la que los fosfolpidos estaran en el

centro formando una bicapa y estaran rodeados por protenas y para que hubiera intercambio
propusieron poros en la membrana plasmtica

1957, James David Robertson, mostr las imgenes que se podan observar
de la membrana celular y tambin de su estructura nica, lo que llam de
unidad de membrana (Robertson, 1957), tambin conocido como el modelo
unitario. Este modelo confirma los avances realizados por Gorter & Grendel
(1925) y de Danielli y Davson (1935), se perciba una caracterstica trilaminar
de la membrana donde las dos lneas exteriores serian las capas de protenas
y la interior la bicapa de lpidos.

El Desarrollo Histrico del Modelo Cientfico de Membrana Plasmtica: perspectivas didcticas. Joglar, Carol; Quintanilla Mario; Ravanal Eduardo; Brunstein, Juan. VIII Encontro Nacional de
Pesquisa em Educao em Cincias VIII ENPEC I Encuentro Iberoamericano de Investigacin en Didctica de las Ciencias I IEPEC Campinas, 5-9 de Dezembro de 2011

The Fluid Mosaic Model of the Structure of Cell Membranes

Science, 18 February 1972: Vol. 175. no. 4023, pp. 720 731

S. J. Singer 1 and Garth L. Nicolson

1
2

University of California at San Diego, La Jolla

Armand Hammer Cancer Center of the Salk Institute for Biological Studies, La Jolla, California

Se presenta un modelo de mosaico fluido para la organizacin y estructura gruesa de las protenas y lpidos de
las membranas biolgicas.

Es consistente con las restricciones impuestas por la termodinmica.

Las protenas que estn integradas a la membrana son un conjunto heterogneo de molculas globulares,
cada una de ellas ordenada en una estructura anfiptica

molculas globulares estn parcialmente incrustadas en una matriz de fosfolpidos.

Los fosfolpidos estn organizados como una bicapa discontinua, fluida, desordenada aunque una pequea
fraccin de los lpidos pueden interactuar especficamente con las protenas de la membrana.

El modelo clsico del mosaico fluido de Singer y Nicolson ha sido utilizado como una herramienta valiosa para explicar la
mayor parte de los fenmenos que suceden a nivel de las membranas biolgicas. Sin embargo, en aos recientes, datos
experimentales han demostrado que la compartamentalizacin de ciertos componentes membranales puede ser
importante para que se lleven a cabo procesos que requieren la agrupacin de componentes membranales
especficos, como en el caso de una transduccin de seales efectiva. Transporte de nutrientes?

Modelo de balsas (raft) membranales (balsas lpidicas):

Microdominios membranales. (Simons & Meers, 1988)

Membranas plasmticas eucariotes y procariotes.

ciertas regiones de la membrana plasmtica presentan una fase lquida ordenada y una composicin
lipdica enriquecida en esfingolpidos y esteroles, que le confieren una menor fluidez y por lo tanto
menor movilidad

balsas se encuentran coexistiendo con la fase lquida desordenada cuya composicin es abundante en
glicerolpidos

Las eubacterias son capaces de modificar la composicin de cidos grasos en sus membranas en funcin de las
condiciones de cultivo.
La membrana citoplsmica bacteriana es la estructura de tipo bicapa proteo-lipdica que delimita al protoplasto.
La proporcin protenas: lpidos es superior a la de las membranas celulares eucariticas (80:20)
Las membranas procariticas, por lo general carecen de esteroles.
Las membranas procariticas, a diferencia de las de eucariotas, carecen de esteroles (con las salvedades de Oxyphotobacteria, ciertas
bacterias metilotrofas, y de los Mollicutes).
En cambio, en muchas bacterias existe una peculiar clase de compuestos policclicos, denominados hopanoides (triterpenoides
pentacclico) que parecen condicionar parte de la rigidez de las membranas citoplsmicas.

La membrana citoplsmica procarionte es una estructura multifuncional

Barrera osmtica
Lmite entre el protoplasto y el medio
Permite el paso selectivo de molculas.
Interviene en procesos de obtencin de energa (respiracin, fotosntesis)
Participa en biosntesis de componentes de envueltas (pared, membrana y
cpsulas)
Secrecin de protenas y otras macromolculas

Consecuencias de la Fluidez y Permeabilidad membranal.

El interior hidrofbico de la bicapa lipdica es una barrera altamente impermeable a la mayora de las molculas polares.
Esta funcin es importante, permite a una clula mantener en el citoplasma ciertos solutos a concentraciones diferentes a las que estn
en el fluido extracelular .
Delimita a los organelos y a la clula misma
Intervienen en el mantenimiento de la homeostasis celular.
Tienen un alto impacto en el metabolismo, por lo tanto ste depende, directamente del funcionamiento de la membrana celular.
Para cumplir con esta funcin es necesario que la clula disponga de mecanismos y sistemas de transporte de solutos siendo stos,
molculas que se emplean como fuentes de carbono (energa) o molculas de desecho o con actividad metablica extracelular.

1.3 Cintica de incorporacin de los mecanismos de transporte de SOLUTOS Y NUTRIENTES

1.3.1. Existen diversos mecanismos que les permiten a las membranas cumplir con su funcin. En conjunto
forman una RED DE SISTEMAS DE TRANSPORTE DE SOLUTOS.

Clasificacin de los mecanismos de transporte

1.3.1. DIFUSIN SIMPLE TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO,

TRANSPORTE NO MEDIADO

1.3.2. DIFUSIN FACILITADA TRANSPORTE MEDIADO

1.3.2.1. TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO
1.3.2.2. TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO
1.3.2.3. TRANSPORTE ACTIVO
1.3.2.4. TRANSLOCACIN DE GRUPOS

1.3.1. DIFUSIN SIMPLE TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO, TRANSPORTE NO MEDIADO

Las clulas estan rodeadas por sustancias o molculas a una determinada concentracin.
La difusin es un proceso que se produce como consecuencia de la energa trmica de la
materia.
Cualquier molcula tiende a moverse de forma independiente y al azar, se dispersa de manera
que en equilibrio dinmico, su distribucin es uniforme.
Flujo: movimientos de las molculas en el interior de una solucin.
Para molculas sin carga (neutras) el flujo neto: ley de Fick o ley de la difusin.
Q= flujo neto, tasa de difusin (cantidad/tiempo)
D es el coeficiente de difusin; A es el rea o superficie de membrana disponible para el
movimiento, y c/x es el gradiente de concentracin o diferencia de concentracin a travs
de la distancia x. El signo negativo porque el flujo neto va a favor de gradiente de mayor a una
de menor concentracin.

Q= -DA (c/ x)

Al considerar constantes D , A y x para la difusin de un

soluto:
se agrupan en una nueva constante denominada coeficiente de
permeabilidad P = - (DA/x) ; Q= Pc (tasa de difusin en
funcin de la concentracin del soluto)

En los sistemas biolgicos:

O2, CO2, H2O molculas liposolubles de bajo PM: urea, glicerol.
molculas hidrosolubles neutras de PM < 200 pasan rpidamente. Las
molculas de este tipo pasan entre las cadenas laterales de los fosfolpidos
sin disolverse.
En el caso del agua existen una serie de protenas , acuaporinas, que
permiten un rpido incremento en la permeabilidad de la membrana al agua.

http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-general/materiales-de-clase-1/bloque-ii/Tema%204-Bloque%20II-transporte%20a%20traves%20de%20Membrana.pdf

1.3.2. DIFUSIN FACILITADA TRANSPORTE MEDIADO

1.3.2.1. TRANSPORTE PASIVO INESPECFICO. POROS Y CANALES.
Participan Protenas integrales de membrana.
NO se requiere un cambio conformacional para que se efecte el transporte.
Crean un conducto hidroflico que atraviesa la membrana, solutos polares o inicos.

Pueden cambiar de conformacin y abrirse o cerrarse, pero una vez abiertos los solutos transportados atraviesan el canal por un
proceso de difusin, como si estuviesen libres en disolucin.

Bioenergtica del transporte pasivo inespecfico.

A favor del potencial electroqumico del soluto transportado, no disponen de un mecanismo de acoplamiento entre transporte y una fuente externa
de energa.
Exclusivamente procesos de Difusin facilitada. los solutos se pueden mover en ambos sentidos con igual facilidad, siempre a favor de su potencial, si
el canal se encuentra abierto.
Sin embargo, canales rectificadores (analoga a los diodos rectificadores en electrnica, que permite el paso de los electrones en un sentido y no en el
otro), que solo permiten el movimiento del soluto siempre a favor de su potencial electroqumico- en un sentido.

1.A.1. Canales para cationes controlados por el voltaje. canal de sodio controlado por voltaje de los axones
neuronales.
1.A.2 Canales rectificadores para potasio. in K+, se mueve siempre a favor de su potencial electroqumico. ma
1.A.6 Canales de sodio de animales no regulados por voltaje. Algunos actan como mecanoreceptores,
1.A.9 Canales para cationes o aniones, controlados por ligandos.

http://www.biorom.uma.es/contenido/JCorzo/temascompletos/transporte/Clase

1.3.2. DIFUSIN FACILITADA TRANSPORTE MEDIADO

1.3.2.1. TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO.
Protenas integrales de membrana especializadas: Permeasa, Acarreador, Transportador
Estereoespecficos cuya conformacin determina un canal interior, y por el cual un
determinado sustrato puede alcanzar el interior, sin gasto de energa.
A favor de un gradiente de concentracin (en la direccin termodinmicamente favorable).
Cuando el soluto se une a la parte de la permeasa que da hacia el exterior, esta protena

sufre un cambio conformacional que libera la molcula en el interior.

Este es el fundamento de las protenas acarreadoras, cambio de forma (conformacional)
equivale a cambio de afinidad.

El sitio de unin del soluto se

encuentra alternativamente a un
lado y a otro de la
membrana:Uniporte

El complejo transportador-soluto(s) es un caso particular de la formacin de

complejos protena-ligando(s), por lo que la existencia de un flujo mximo de
soluto (anlogo a la velocidad mxima de una reaccin enzimtica).
Cuando todas las molculas de transportador tienen ocupado su sitio de unin
se saturan respecto a la concentracin de soluto.
Del mismo modo que en el caso general protena-ligando, se puede definir una
K50 que corresponde a la concentracin de soluto que permite un flujo a la
mitad del mximo.

Ejemplo terico de flujo en funcin de la concentracin de soluto dos

solutos diferentes en sus afinidades hacia el transportador, el flujo
mximo, que depende de la velocidad a la que el transportador cambia de
conformacin, se supone igual a 100 moles soluto transportado/minuto

http://www.biorom.uma.es/contenido/JCorzo/temascompletos/transporte/Clase%201.htm

1.3.2.1. TRANSPORTE PASIVO ESPECFICO.

La velocidad especfica de transporte es de uno a dos rdenes de magnitud menor que para los pocos y canales, el
transportador tiene que mover fsicamente al soluto de un lado a otro de la membrana.
Hay dos tipos fundamentalmente diferentes desde el punto de vista bioenergtico:

Uniporte: Se transporta un nico soluto, a favor siempre de su potencial electroqumico. Se trata

de un caso de
Difusin Facilitada

Cotransporte (o Transporte activo secundario): acoplado entre dos ( raramente tres) solutos. Al menos uno de los
solutos se transporta a favor de su potencial electroqumico, lo que suministra la energa necesaria para transportar al
segundo soluto en contra de su potencial electroqumico.
Si se transportan ambos solutos en el mismo sentido se trata de Simporte; si se transportan en sentidos opuestos,
Antiporte.
Concepto de acoplamiento
El soluto que consume energa libre no se puede transportar en ausencia del
soluto que la proporciona.
Pero en los cotrasportadores el soluto cuyo transporte est favorecido
termodinmicamente NO se transporta en ausencia del otro, no por falta de
energa, sino porque el transportador no funciona.
Esto evita que se disipe intilmente el potencial electroqumico de este soluto.
Se denominan procesos de Transporte activo secundario porque:
a) Uno de los solutos se transporta en contra de su potencial electroqumico, y
b) Se requiere un proceso de transporte activo primario para que el potencial
electroqumico del primer soluto sea suficientemente elevado para permitir el
transporte del segundo.
Los procesos de cotransporte son, ms frecuentes que los de uniporte., el
uniporte parece ser un proceso excepcional, limitado al transporte de azcares
en vertebrados, levaduras y alguna bacteria.
Todos los transportadores pertenecen a la subclase 2.A, de la que se han
descrito un total de 81 familias. La subclase 2.B corresponde a transportadores
no sintetizados en ribosomas, de los que la valinomicina es un ejemplo

Principales familias de protenas transportadores celulares.

Canal VIC
Acarreador 2 (FM)

Acarreador tipo
ABC

Translocacin de Grupo (PTS)

2.3.1. TRANSPORTE ACTIVO SECUNDARIO (LIGADO A SIMPORTE DE PROTONES).

Simporte: transporte simultneo de dos sustratos en la misma direccin, por un mismo
transportador sencillo.
Uno de los sustratos (H+) ha creado previamente un gradiente de concentracin, cuya
disipacin es aprovechada por el otro sustrato para entrar con l.
Este otro sustrato puede ser: una molcula de carga negativa Ejemplos: transporte de
iones fosfato, de glutamato, etc.
Una molcula neutra: tiende a disipar no slo el gradiente de concentracin, sino tambin
el gradiente elctrico. Ejemplo: en E.coli, la lactosa usa una -galactsido-permeasa
Molculas catinicas (iones K+, lisina), son transportadas directamente a travs de
permeasas, en ausencia de simporte de protones.

1.3.2.3 TRANSPORTE ACTIVO LIGADO A SIMPORTE DE IONES SODIO.

Algunas sustancias son transportadas indirectamente, a travs de un
gradiente de Na+ que a su vez se origina a expensas de una fuerza protnmotriz.

El sustrato entra por una permeasa, junto con iones Na+, pero a su vez este
sodio se recicla por un sistema de antiporte, a expensas de la disipacin del
potencial de protones.Ejem: melobiosa, en E. coli.

Estos dos tipos de transporte activo ligados a simporte quedan inhibidos si

tratamos las clulas con algn agente ionforo (p. ej., el antibitico

valinomicina), que destruye el potencial electroqumico de protones.

2.3.3. TRANSPORTE ACTIVO SENSIBLE A CHOQUE OSMTICO.

Modelo del mecanismo de este sistema:

1. El sustrato exgeno entra al periplasma a travs de algn canal inespecfico o
porina.
2. La protena periplsmica especfica en una configuracin "abierta, se une a l con gran
afinidad y cambia a la conformacin "cerrada", el sustrato queda "enterrado" entre dos
lbulos de la protena.
3. El dmero de protenas integrales de membrana se encuentra en un estado energizado
pero incapaz de transportar sustrato.
4. Puede unirse por el dominio al periplasma con al complejo formado por la protena
periplsmica "cerrada"
5. El heterodmero de membrana cambia de conformacin y aumenta su afinidad
hacia la protena periplsmica y se abre su canal para el sustrato.
6. El complejo de membrana alcanza su estado de mnima energa, y con ello
descarga el sustrato en el citoplasma y se logra la separacin de la protena
periplsmica (que vuelve a su configuracin "abierta").
La hidrlisis de ATP catalizada por las protenas perifricas ABC (adosadas a la
membrana y asociadas a las protenas integrales) suministra la energa para que el
heterodmero de membrana vuelva a su estado energizado inicial.

2.3.3. TRANSPORTE ACTIVO SENSIBLE A CHOQUE OSMTICO.

Transportadores ABC dependientes de protenas de unin periplsmicas o
ATPasas de trfico.
De manifiesto cuando se forman esferoplastos (se altera o elimine la

membrana externa).
Tratamiento por choque osmtico: E. coli + EDTA + 20% de sacarosa y MgCl2
en fro (0C). Las protenas del periplasma escapan al medio externo, el sistema
de transporte queda inutilizado.
Este sistema no se ve afectado por los agentes ionforos.
bacterias Gram-negativas y eucariotes.
La energa requerida es ATP.

23.3. TRANSPORTE ACTIVO SENSIBLE A

CHOQUE OSMTICO.
"transportadores ABC" en todos ellos existe una
o dos protenas perifricas de membrana
citoplsmica que posee un dominio (de unos
200 aminocidos) conservado evolutivamente,
denominado "cassette de unin a ATP" (las
iniciales de ATP-binding cassette generan la
sigla "ABC").
Existen muchos ejemplos de protenas ABC,
tanto en procariotas como eucariotas (incluido

humanos), y todos ellos estn implicados en

transportar sustancias a uno u otro lado de la
membrana.

Existen transportadores ABC que funcionan "al

revs,son "exportadores" de protenas recin
sintetizadas que deben insertarse en las
envueltas bacterianas o ser excretadas al medio.

23.3. TRANSPORTE ACTIVO SENSIBLE A CHOQUE OSMTICO

Mediante este tipo de sistema de transporte muchas bacterias Gramnegativas, y especialmente las Enterobacterias (como Escherichia coli
o Salmonella typhimurium) logran introducir numerosos tipos de
sustancias:
Azcares: arabinosa, galactosa, maltosa, ribosa, xilosa, etc.
Aminocidos: histidina, glicina, leucina, etc.
Oligopptidos.

Algunas vitaminas y metales.

2.3.3. TRANSPORTE ACTIVO SENSIBLE A CHOQUE OSMTICO

Elementos de este tipo de sistema:
Porinas o protenas de membrana externa para lograr la difusin del sustrato
desde el medio hasta el espacio periplsmico.
Protena(s) solubles de espacio periplsmico que se unen al sustrato con gran
afinidad.
Un heterodmero formado por dos protenas integrales de membrana (cada una
de ellas posee 5 o 6 trechos en -hlice que atraviesan la membrana
citoplsmica), que son la permeasa propiamente dicha del sistema (el canal por
donde pasa el sustrato).
Dos protenas perifricas de membrana citoplsmica, adosadas al lado
citoplsmico, que incluyen el mdulo ABC que acopla la hidrlisis de ATP con
el transporte unidireccional del sustrato a travs de la membrana.

 CMO SE HA LLEGADO AL ESTADO ACTUAL EN EL CONOCIMIENTO DE LOS MECANISMOS DE

TRANSPORTE?

MTODOS EXPERIMENTALES PARA LA CARACTERIZACIN DE LOS MECANISMOS DE TRANSPORTE DE

SOLUTOS EN PROCARIOTES.
MODELOS EXPERIMENTALES.

Micelas y liposomas: Naturales (fracciones de membrana) y artificiales.

Clulas enteras: silvestres y mutantes.

Sustratos: metabolizables (naturales), anlogos no metabolizables.

Efectores: Inhibidores, activadores.
Mtodos de evaluacin del sistema.

DETERMINACIN DEL EFECTO DE DIVERSOS

COMPUESTOS SOBRE LA CINTICA DE
PENETRACIN DE UN SOLUTO.
IONFOROS

INHIBIDORES DE LA FORMACIN DE
ENERGA.
DESACOPLANTES

Existen 6 tipos de venenos que pueden afectar la funcin mitocondrial:

1) Inhibidores de la cadena respiratoria: bloquean la respiracin en presencia de ADP :

cianuro, antimicina, rotenona y TTFA.
2) Inhibidores de la fosforilacin: disminuyen el consumo de oxgeno despus de agregar ADP
pero no tienen efecto sobre la respiracin estimulada por desacoplantes: oligomicina.

3) Agentes desacoplantes: eliminan la relacin obligada entre la cadena respiratoria y el

sistema de fosforilacin en mitocondrias intactas: 2,4 dinitro fenol, CCCP, FCCP.
4) Inhibidores del transporte: evitan la salida de ATP o el transporte de nutrientes a travs de
la membrana interna mitocondrial: atractilosido, cido bongkrekic, NEM.

5) Ionforos: permeabilizan la membrana interna a compuestos a los cuales ordinariamente

son impermeables: valinomicina, nigericina.
6) Inhibidores del Ciclo de Krebs: bloquean una o mas enzimas del ciclo de Krebs: arsenato,
aminooxiacetato.

Compuestos qumicos activos capaces de incrementar la permeabilidad de las

Ionforos.

membranas biolgicas membranas artificiales a iones especficos.

Molculas hidrofbicas de estructura cclica.

Actan acarreadores a travs de la membrana.

Otros son capaces de formar canales a travs de la membrana.

Muchos actan como antibiticos y como agentes desacoplantes al disipar

gradientes inicos membranales.

La parte interna de los ionforos poseen un grupo polar en forma de anillo

que puede envolver un in especfico.

Apagan la carga elctrica del in.

Desacoplantes e inhibidores.

El conocimiento de la funcin mitocondrial se ha obtenido por es estudio de algunos

compuestos txicos.

El uso de inhibidores especficos para distinguir el sistema de transporte de electrones

del sistema de fosforilacin y ayud a definir la secuencia de acarreadores redox a lo largo de
la cadena respiratoria.

Si la cadena transportadora de electrones es bloqueada, los sustratos que permanecen

antes del bloqueador quedaran mas reducidos, mientras que los que quedan del lado del
oxgeno estarn mas oxidados.

D-Glucose Transport System of Zymomonas mobilis

ANTHONY A. DiMARCOt AND ANTONIO H. ROMANO*

APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Jan. 1985, p. 151-157 Vol. 49, No. 1

Microbiology Section, The University of Connecticut, Storrs, Connecticut 06268

Received 6 August 1984/Accepted 26 October 1984
There has been increasing interest during recent years in the bacterium Zymomonas mobilis because of the potential for
developing processes to convert sugars to ethanol.
Although yeasts have traditionally been used for alcohol production, Z. mobilis has a number of advantageous features:
(i)it carries out efficient conversion of glucose to ethanol rapidly and in high yield;
(ii) it is more tolerant to elevated temperature, ethanol concentration, and sugar concentration than Saccharomyces cerevisiae
(iii) it shows uncoupled growth and fermentation; that is, ethanol production proceeds in the
absence of growth. However, Z. mobilis shows one major disadvantage: the range of sugars fermented is very limited-only
glucose, fructose, and sucrose are utilized, and the latter are not utilized in all strains. There is no capacity for utilization of
polysaccharides or many other monosaccharides, such as mannose, galactose, or pentoses . A number of laboratories are now
engaged in efforts to extend the range of carbohydrate utilization by recombinant DNA techniques.

The salient feature of its physiology is that it ferments sugars not by the classical Embden-Meyerhof-Parnas pathway, but by the
Entner-Doudoroff pathway.

MATERIALS AND METHODS

Organisms and media.
Z. mobilis 10988 and CP4 . Cells for sugar uptake experiments were grown in liquid YEP
medium, with 0.1 M glucose or fructose, or on the basal medium of Kluyver and
Hoppenbrouwers .
Selection of a glucokinaseless mutant. A glucokinase-deficient mutant, Z. mobilis CP4-M2, that
could grow on fructose but not glucose as an energy source was selected as follows.
Z. mobilis CP4 was grown overnight in BMY medium with 50 mM glucose and 50 mM fructose,
harvested, washed, and suspended in sterile Na-K phosphate buffer (pH 6.8) containing 0.2 g
of MgSO4 * 7H20 per liter (suspension buffer). After incubation of the cell suspension at 30C
for 1 h to establish a resting state, ethylmethane sulfonate
was added (0.03 ml of ethylmethane sulfonate per 2 ml of cell
suspension) and incubation continued for 2 h.
Uptake of labeled sugars.
(i)Long-term uptake.
(ii)Short-term uptake.
Inhibitors.
carbonylcyanide-m-chlorphenylhydrazone (CCCP) and N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCCD)
were used as inhibitors.
Source of isotopes.
D-[U-'4C]glucose, L-[ 1-3H]glucose, L-[U-'4CJproline, and D-[U-14C]fructose ; 2-deoxy-D-[U4C]glucose and D-[U-14C]xylose.

D-glucose transport system of Z.mobilis were determined by measuring the uptake of nonmetabolizable analogs (2-deoxy-D-glucose and Dxylose) by wild-type cells and the uptake of D-glucose itself by a mutant lacking glucokinase.
D-Glucose was transported by a constitutive, stereospecific, carrier-mediated facilitated diffusion system, whereby its intracellular
concentration quickly reached a plateau close to but not above the external concentration.
D-Xylose was transported by the D-glucose system, as evidenced by inhibition of its uptake by D-glucose. D-Fructose was not an efficient
competitive inhibitor of D-glucose uptake, indicating that it has a low affinity for the D-glucose transport system.
The apparent Km of D-glucose transport was in the range of 5 to 15 mM, with a Vmax of 200 to 300 nmol min-1 mg of protein.
The Km of Z. mobilis glucokinase (0.25 to 0.4 mM) was 1 order of magnitude lower than the Km for D-glucose transport, although the
Vmax values for transport and phosphorylation were similar.
Thus, glucose transport cannot be expected to be rate limiting at concentrations of extracellular glucose normally used in fermentation
processes, which greatly exceed the Km for the transport system.
The low-affinity, high-velocity, nonconcentrative system for D-glucose transport described here is consistent with the natural occurrence of Z.
mobilis in high-sugar environments and with the capacity of Z. mobilis for rapid conversion of glucose to metabolic products with low
energetic yield.

1.5 Modelos especficos de transporte.

Existe una red procariote de mecanismos de transporte de solutos, no se excluyen, se complementan

para seleccionar especficamente el soluto.

TRANSLOCACION DE GRUPOS.
Sistema PTS: Phosphoenol pyruvate:glucose phosphotransferase system (PTS) from Escherichia coli.
Kundig, W., Ghosh, S., and Roseman, S. 1964. Phosphate bound to histidine in a protein as an intermediate in a novel phosphotransferase system. Proc. Natl.
Acad. Sci. USA. 52: 10671074

Supone un ahorro de energa metablica: aunque en el transporte se gasta un enlace rico en energa.
El sustrato queda modificado covalentemente en su paso a travs de la membrana.
En un solo proceso se cumplen dos funciones distintas: transporte y preparacin qumica para la ruta catablica.
Bacterias anaerobias o aerobias facultativas, fermentadores con rutas metablicas con rndimiento energtico menor que los procesos
respiratorios, es "lgico" que se seleccionen mecanismos ahorradores como el descrito).

En 1964, se dedujo una sola funcin para el PTS, la fosforilacin de azucares por un sistema activo primario. Cincuenta
aos despus, ste sistema juega diversos y sorprendentes papeles en la fisiologa celular bacteriana.

Estructura y funcin de los componentes del sistema PTS.

Protenas inespecficas de sustratos (comn a diversos sustratos ), citoplsmicas y sntesis constitutiva.

A. Enzima-I (EI) pts I: 64 kDa, autocataltica, His activa amino terminalse fosforila en un nitrgeno del anillo adyacente a
Treo,subdominios alfa (aa 30-142), y alfa/beta (aa 2-19 y 156-229).
His-P cambia de posicin en el zurco del sitio activo.
B. HPr (protena termoestable, rica en histidina). ptsH: 85 a.as, 4 pptidos antiparalelo, se fosforila His15 . La protena
asume un cambio de conformacin reconocido por EII

Garrett, D.S., Seok, Y.J., Liao, D.I., Peterkofsky, A., Gronenborn, A.M. & Clore, G.M. (1997) Solution structure of the 30 kDa N-terminal domain of Enzyme I of the Escherichia coli phosphoenolpyruvate:sugar
phosphotransferase system by multidimensional NMR. Biochemistry 36, 2517-2530. pubmed PDF
Garrett, D.S., Seok, Y.-J., Peterkofsky, A., Gronenborn, A.M. & Clore, G.M. (1999) Solution structure of the 40,000 Mr phosphoryl transfer complex between Enzyme I and HPr. Nature Struct. Biol. 6, 166-173.
pubmed PDF

http://www.life.uiuc.edu/crofts/bioph354/bergman/kanal/transp/pts/epts.htm

Estructura y funcin de los componentes del sistema PTS.

Protenas especficas de sustrato:
A. Enzima II (EII) opern crr: inducible por el sustrato, compuesta por tres subunidades o dominios:
EIIA (antes EIII): citoplsmico. Tres cadenas, His75 y His90 esta es el aceptor del fosfato de la Hpr, His75 es importante
para la transferencia a la permeasa. En un surco entre las helices a/b y c.

B. EIIB: dominio perifrico de membrana citoplsmica unido a EIIC. II B/C membranal homodmero. Fosforila al sustrato.
C. EIIC : transmembranal 8 veces, dominio de reconocimiento y unin del azucar (permeasa),

Wang, G., Louis, J.M., Sondej, M., Seok, Y.-J., Peterkofsky, A. & Clore, G.M. (2000) Solution structure of the phosphoryl transfer complex between the signal transducing protein HPr and IIAGlucose of the Escherichia
coli phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase system. EMBO J. 19, 5635-5649.
Cai, M., Williams, D.C., Wang, G., Lee, B.R., Peterkofsky, A. & Clore. G.M. (2003) Solution structure of the phosphoryl transfer complex between the signal transducing protein IIAGlucose and the cytoplasmic
domain of the glucose transporter IICBGlucose of the Escherichia coli glucose phosphotransferase system. J. Biol. Chem. 278, 25191-25206.
http://www.life.uiuc.edu/crofts/bioph354/bergman/kanal/transp/pts/epts.htm

2.3.4. Otros solutos acoplados a translocacin de grupos:

Entrada de cidos grasos mediante un sistema de transferencia de Coenzima A, que los transforma en acil-CoA.
Entrada de purinas y pirimidinas, mediante un sistema de fosforribosil-transferasas: purina o pirimidina (exterior) + PRPP ---------> NMP
(interior) + P (PRPP = fosforribosil-pirofosfato) (NMP = nuclesido monofosfato).
Adaptacin a ambientes fsicos y nutricionales

Williams, D.C., Cai, M., Suh, J.-Y., Peterkofsky, A. & Clore, G. M. (2005) Solution NMR structure of the 48 kDa IIAMannose-HPr complex of the Escherichia coli mannose phosphotransferase system. J. Biol. Chem.
280, 20775-20784

1.6. Importancia fisiolgica del transporte de nutrientes

Participacin del sistema PTS sobre la represin catablica y la regulacin de la expresin gentica.

Glc /Lac juntas????

Time hierarchies in the Escherichia coli carbohydrate uptake and metabolism.A Kremling,S Fischer, T Sauter, K Bettenbrock, E.D Gilles Biosystems.Volume 73,1,2004,5771
http://cronodon.com/BioTech/Bacteria_Growth.html

http://www.larousse.fr/encyclopedie/divers/bact%C3%A9rie/25038

Participacin del sistema PTS sobre la represin catablica (carbon catabolite repression, CCR)

The Journal of Antibiotics (2010) 63, 442459; July 2010. Carbon source regulation of antibiotic production.
Sergio Snchez y cols. Departamento de Biologa Molecular y Biotecnologa, Instituto de Investigaciones Biomdicas, Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM), Mxico, D.F., Mxico

El sistema PTS y el balance energtico celular.

Mecanismos que subyacen en la Represin por catabolito (CCR) y la exclusin del

inductor en enterobacterias.

How Phosphotransferase System-Related Protein Phosphorylation Regulates Carbohydrate Metabolism in Bacteria Josef Deutscher,*, Christof Francke and Pieter W. Postma. Microbiol. Mol. Biol 2006: 70:939-1031

El sistema PTS bacteriano: Un principio, varias funciones.

El metabolismo heterotrfico depende de las fuentes de carbono y energa adquirida del medio ambiente.
Como flujo de carbono, es el principal componente de todas las macromoleculas celulares, la incorporacin y flujo
de carbono a travs de las vas meatblicas centrales deben estar estrictamente controladas y coordinadas con todos
los otros procesos.

Muchas bacterias gram negativas poseen el llamado nitrogen PTS (PTSNtr).

Cumplen diferentes funciones, ambos sistemas se comunican a travs del intercambio de fosfato.
PTSNtr regula diversos procesos implicados en el metabolismo del nitrgeno y carbono, es esencial en la virulencia.
Adcicionalmente, juega un papel en la regulacin de la homeostasis regulando la expresin y actividad de un trasportador de alta y
baja afinidad de K+