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Huella Gentica
Cada clula de nuestro organismo posee 46 cromosomas (23 pares) formados por ADN (cido
desoxirribonucleico) que contienen en sus complejas estructuras el Cdigo gentico. Este
ADN est formado por nucletidos dispuestos en una doble cadena helicoidal y compuestos a
su vez por un azcar, pentosa (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Estos
azcares y fosfatos son iguales, mientras que las bases son diferentes, lo que permite
distinguir cuatro tipos de nucletidos cuyas bases les dan nombre: adenina (A), guanina (G),
citosina (C) y timina (T). Las bases se unen unas con otras de una manera especial, las A con
las T, y las G con las C (A-T, G-C) por medio de puentes de Hidrgeno, dos y tres
respectivamente.
La mitad del ADN del genoma humano es no codificante y de ste, la mitad es repetitivo
(aprox. un 25 % del ADN total). A su vez, la mitad de ste, lo forman secuencias repetidas de
dos clases: SINES o elementos dispersos cortos de 500 bp y LINES o elementos dispersos
largos, de ms de 500 bp.
La otra mitad es el ADN repetido en tandem, parte del cual son los llamados satlites (I, II, III y
IV) y los minisatlites, formados por escasos bp, que son los que tienen ms capacidad
individualizadora. Las unidades en tandem son de 15 a 20 bases que se pueden repetir de
200 a 1.400 veces.
Jeffreys y col. (Nature, 314, 1985) sealan que el genoma humano contiene muchas regiones
minisatlites dispersas en tandem, muy polimrficas debido a la variacin allica que se
produce al repetirse. Precisamente ste es el motivo de que las pruebas basadas en la
repeticin de los tandem de una secuencia permitan detectar muchos loci muy variables
simultneamente lo que proporciona as una huella gentica especficamente individual muy
til en el anlisis de materiales diversos.
Las molculas de ADN que constituyen los cromosomas son de gran longitud midindose en
Kilobases (Kb). Cada Kb equivale a 1.000 pares de bases (bp). Para darnos idea de esta
longitud sealaremos que el cromosoma X mide 150.000 Kb y el Cdigo gentico una longitud
de 3.000 millones de bases.
Los anlisis de ADN se basan en la propiedad que tienen sus cadenas de ser rotas por
mtodos fsicos o qumicos a nivel de las uniones de Hidrgeno, obtenindose as segmentos
de ADN de cadena simple con capacidad para ser duplicados formndose ADN de doble
cadena. Para analizar el polimorfismo del ADN usamos las llamadas sondas o segmentos de
ADN marcados con algn elemento radiactivo (P32), enzimas u otros, consiguiendo que se
unan stos con el ADN complementario (hibridacin).
Al cortar el ADN por los lugares adecuados, podemos detectar diferencias en la longitud de los
fragmentos (RFLP, Restriction Fragment Length Polymorphism) y polimorfismos VNTR
(Variable Number of Tandem Repeats).
Las sondas utilizadas pueden ser multilocus con las que se consigue el llamado "DNA
fingerprint" al unirse la sonda a muchos loci. Y pueden ser monolocus o unilocus que detectan
loci VNTR individuales muy polimorfos.
APLICACIONES
Los exmenes tradicionales de manchas de sangre en los Laboratorios de Medicina Legal, o
los de manchas de semen, races de pelos o cabellos, tratan de determinar el sistema ABO,
Hemoglobina (Hb), Peptidasa, Fosfoglucomutasa, Rh, Anhidrasa carbnica, ADA, AK,
Fosfatasa cida eritroctica y otros ms. Pero tienen la limitacin de que los materiales
analizados han de ser recientes. Al mes, estos productos han sufrido una a veces insalvable
degradacin. Otras muestras como las de semen que contienen enzimas proteolticas, o bien
debido a la actividad bacteriana, pueden producir mltiples errores.
En cambio el ADN puede servir como huella gentica y ser analizado en muestras de gran
antigedad como veremos ms adelante.
Pero la huella gentica procedente del alfabeto gentico permite estudiar desde este punto de
vista tejidos orgnicos como la raz de los pelos, los leucocitos de la sangre, los
espermatozoides, la piel, el lquido amnitico o cualquier clula humana y encontrar en el
ncleo de la misma el patrn gentico que caracteriza a cada individuo.
El investigador estudia la muestra tomada de la vagina de la mujer violada y el semen del
sospechoso, los compara y dictamina si se trata de la misma persona, realizando para ello la
hibridacin del material sospechoso y del testigo, marcando la localizacin de los minisatlites
y viendo si se corresponden unos con otros.
Cinco mm3 de sangre o semen bastan para identificar a un culpable. El examen de
Laboratorio permitir ver en el ADN extrado varias decenas de bandas parecidas a los
cdigos de barras utilizados en los productos comerciales, de diverso espesor y longitud
nunca iguales en dos personas, que proceden a partes iguales del padre y de la madre del
sujeto analizado.
La investigacin de la paternidad despus de violacin o incesto puede ser establecida por la
determinacin de grupos eritrocticos, grupos HLA y enzimas eritrocticos, efectuados en
clulas de lquido amnitico o de vellosidades coriales. MANGIN y col. (J.Med.Leg.Droit
Mdicale, 34, 1991) estudiaron 10 casos de aborto consecutivo a agresin sexual (violacin e
incesto). En todos los casos pudieron determinar la huella gentica del feto y comparando con
la huella gentica de la madre, se pudo determinar el alelo transmitido por el padre al feto.
Posteriormente se practic la bsqueda de este alelo en el material gentico del sospechoso.
Esto fu posible en 8 de los 10 casos. En un caso el sospechoso fu descartado. En el dcimo
caso no se pudo hacer la comparacin por no hallarse al agresor.
Hay dificultades en los casos de los fetos macerados. Es fcil en los casos de preez reciente
cuando se puede disponer de tejidos trofoblsticos. La degradacin del ADN fetal en fetos
macerados ha hecho a veces imposible el anlisis. Sin embargo en algunos casos an es
posible obtener buen material para el anlisis, del vrtice del pulmn y del encfalo por ser
zonas ms protegidas por las estructuras seas.
El ADN es muy til para la determinacin de la paternidad. Sabiendo que en cualquier persona
la mitad del genoma procede del padre y la otra mitad de la madre, en el supuesto de que
haya dos individuos sospechosos de ser el padre de una criatura, bastar comparar las
bandas halladas en las huellas genticas del hijo, de la madre y de los sospechosos. Las
bandas correspondientes a la madre se eliminan y quedan las del verdadero padre. Se
comparan stas con las del sospechoso o sospechosos y aparecer con claridad si es alguno
de ellos por la coincidencia visible que se produce en el espesor y situacin de estas bandas.
La probabilidad de error ser de una entre un milln en los exmenes con sonda multilocus y
si se hace con sonda monolocus repitiendo dos o tres veces se alcanza la misma
probabilidad.
Debido a que en ocasiones la muestra que hay que analizar viene alterada o es escasa, el
mtodo de sondas RFLP no basta para llegar a resultados valorables. KARY MULLIS ide otra
tcnica llamada PCR o Reaccin en cadena de la polimerasa, por medio de la cual, con muy
escasa cantidad de ADN se logran excelentes resultados. Consiste en amplificar segmentos
de ADN por sntesis enzimtica de secuencias especficas de ADN, utilizando el fragmento
Klenow de la ADN-polimerasa. Se perfecciona posteriormente el mtodo utilizando la Taqpolimerasa obtenida a partir de una bacteria termfila.
El PCR es tan sumamente sensible que permite analizar incluso muestras degradadas. Esta
tcnica presenta muchas posibilidades en Criminalstica y Ciencias antropolgicas en general.
VERBOVAYA e IVANOV (1991) aislaron ADN de manchas frescas de sangre, sometindolo a
examen rutinario: digestin con endonucleasas de restriccin particulares, fraccionndolo
luego por agarosa-gel-electroforesis. Visualizaron con rayos ultravioleta tiendo con Bromuro
de etidio (EtBr) el gel. As aparece un patrn de banda especfico para el sexo, que depende
slo de la enzima de restriccin utilizada. La tcnica es excelente para la determinacin del
sexo en el ADN en casos criminales. Tambin se puede realizar la determinacin del sexo
utilizando la reaccin PCR.
EL ADN Y LA HUELLA GENETICA EN OTRO TEJIDOS
En los estudios del ADN en diferentes tejidos se ha podido observar que el procedente del
msculo cardiaco, bazo y hueso es el menos degradado, mientras que el que procede el
hgado es el que ms fcilmente se degrada.
No existe una correlacin estricta entre el estado de degradacin del ADN y la data de la
muerte. Se ha encontrado ADN de elevado peso molecular en la pulpa dentaria en casos en
los cuales las condiciones en que qued el cadver fueron muy adversas.
S. PBO (Nature, 314, 1985) estudi 23 momias egipcias obteniendo de ellas ADN. En uno
de los casos se trataba de un nio en el que el ADN pudo ser clonizado molecularmente en un
vector plsmido. En este clonus encontr dos elementos de la familia Alu de la secuencia
humana repetitiva de ADN. Este anlisis demostr que muestras de ADN de momias (3,4 Kb)
pueden ser clonizadas y que los fragmentos de ADN parece que contienen muy pocas o
ningunas modificaciones postmortem.
Las muestras estudiadas variaron desde las procedentes de la VI Dinasta (-2370 -2160 a.C.)
hasta las de los tiempos romanos tardos. Previamente rehidrataba las muestras de tejido
momificado (revitalizacin) y haca cortes microscpicos tindolos con los mtodos clsicos y
con Bromuro de etidio que permite detectar pequeas cantidades de ADN.
Hall ncleos en clulas de cartlagos de la oreja (en una cabeza de mujer del Museo egipcio
de Berln) y de epidermis y tejido subcutneo de la cabeza de un hombre del Museo Viktoria
de Uppsala. Si bien existan pirimidinas modificadas en el segundo caso, lo que haca
imposible su clonizacin, en cambio en un nio de un ao momificado, procedente del Museo
egipcio de Berln, estaban excelentemente conservados los ncleos. La prueba del C14 en
este caso di una antigedad de 2430+120.
La conservacin histolgica de los tejidos momificados fu mucho mejor en los tejidos
superficiales y partes perifricas del cuerpo que en las ms profundas, observacin que
tambin hicieron DANSELS y col. (1970) y CRADEL y col. (1981), debido probablemente a la
imbibicin con natrn y la consiguiente deshidratacin.
Los trabajos de todos estos autores han demostrado que el ADN puede ser estable durante
largos periodos de tiempo (miles de aos) al menos en ciertos restos humanos y en
condiciones especiales de momificacin.
De gran valor antropolgico es el estudio del ADN en huesos y dientes antiguos. Las enormes
posibilidades que brinda para la investigacin de estos restos son evidentes.
As HAGELBERG y col. estudiando huesos muy antiguos de 300 a 5.000 aos encontraron
an ADN estable en ellos (Ancient bone DNA amplified, Nature 342, 1989).
LEE y col. (Genetic markers in human bone, J.For.Sc.36, 1991) aislaron ADN de muestras de
tejido seo humano esponjoso y compacto. Fueron utilizadas para visualizarlo, tcnicas como
la espectrofotofluorometra y las tinciones con Bromuro de etidio en minigeles, as como para
estimar la cantidad y el grado de degradacin del ADN. El extenso polimorfismo detectado por
este tipo de anlisis de ADN est en relacin con el nmero variable de tandems de repeticin
(VNTR) dentro de las secuencias de ADN repetitivo en el genoma humano (HUANG y col.
Advances in Forensic Sc. 3 vol. Chicago 1990).
LEE y col. (J.For.Sc.36:320, 1991) para obtener ADN de huesos toman muestras de 10 a 20
mg de hueso esponjoso y 75 a 100 mg de hueso compacto. Las diversas etapas de
tratamiento de estos materiales pueden resumirse as:
1. Inmersin y agitacin en agua destilada fra (15 min).
2. Pase por etanol (15 min).
3. Pase por ter etlico (15 min).
4. Secado de la muestra.
5. Inmersin en N lquido por 15-30 segundos para congelarla.
6. Reduccin a fino polvo.
7. Extraccin del ADN de este polvillo utilizando el mtodo que se emplea para las manchas
de sangre que es el siguiente:
8. Incubacin durante una noche a 37C con 400 L Extraction Buffer (10 mM Tris, 10 mM
EDTA) y 100 mM (ClNa) pH 8, conteniendo 2% SDS (Sodium dodecyl sulfato) y 4.1 sigma
unidades de Proteinasa K seguido por lo menos de dos extracciones con ClH (pH 8), fenol y
formol equilibrados conteniendo alcohol isoamlico (24:1 v/v).
9. El ADN se precipita con etanol 100 %, se lava con etanol 70 % y se redisuelve en TE (10
mM Tris y 1 mM Na2 EDTA, pH 7.8) buffer.
persona. Result que el joven tena una huella gentica diferente a la del semen del culpable y
fu exculpado, al menos de las violaciones. Se propuso entonces el estudio de la huella
gentica de todos los hombres de la regin, en total 3.300. Dice WERRRETT que an estn
realizando estos anlisis cada uno de los cuales dura por lo menos dos semanas.
Aqu se plantea el problema de la voluntariedad como ocurre con la prueba de la alcoholemia.
La ley no puede obligar a nadie a dejarse practicar esta prueba. El hecho de negarse sin
embargo, puede hacer sospechoso a un individuo. Si el violador est entre los 3.300 varones
examinados, ser perfectamente detectado por medio del estudio de la huella gentica sin
duda alguna.
PROBLEMAS BIOETICOS Y LEGALES
La legitimidad de estos exmenes no est totalmente admitida, porque la Ley suele ir por
detrs de las nuevas tcnicas de investigacin. Por eso este tipo de exmenes plantea
problemas de tipo mdico-legal (el sospechoso puede negarse a ser examinado en su
intimidad) y la Ley no puede violentar los derechos humanos. Y si se demuestra que ha sido
as y la prueba ha sido obtenida en forma "irregular", no servir como tal prueba ante un
Tribunal.
Las tcnicas del estudio del ADN han producido ya mltiples situaciones-problema, creando
fuertes controversias, especialmente en Estados Unidos, donde se ha llegado a proponer que
en el documento de identificacin personal, se incluya un microchip con la huella gentica del
propietario.
Al menos si esto no se ha generalizado, s se han hecho Bancos de Datos y Ficheros de los
violadores "habituales" con sus huellas genticas, ya que suelen ser siempre reincidentes.
Estos registros permiten recurrir a la comparacin inmediata con la huella del semen hallado
en la vagina de una vctima y confirmar o descartar que hay un culpable conocido.
Estos Bancos de Datos de huellas genticas permiten tambin hacer comparaciones con
casos de violacin ocurridos fuera del pas, ya que hoy da con los medios de comunicacin
rpidos, el criminal puede desplazarse al extranjero para cometer sus delitos.
Con objeto de llegar a una standarizacin de los mtodos de estudio del ADN, se cre en
1989 en Estados Unidos y Canad el grupo TWGDAM (Technical Work Group for DNA
Analysis Methods) y en Europa en 1988, el grupo EDNAP (European DNA Profiling Group).
Ambos promueven reuniones peridicas e intercambios de tcnicas, estudios y resultados de
sus experiencias.
En Espaa se realiza el estudio del ADN en diversos centros mdicos, como el Hospital del
Nio Jess (Dr. Vicario), en el Hospital 12 de Octubre ( Dr. Arniz ), en la Universidad de
Santiago (Dr. Carracedo), en el Instituto Nacional de Toxicologa (Dr. Alonso), en Bilbao (Dra.
Pancorbo), en Barcelona (Dr. Huguet y Dr. Gen), en Granada (Dr. Villanueva y su equipo), en
la Escuela de Medicina Legal de Madrid
(Dr. Ruiz de la Cuesta y su equipo) y otros ms.
ROCHE (J. de Mdcine Legale et Droit Medicale, 1990) seala acertadamente que la Etica
no es una especialidad sino la Medicina Legal que constituye el lazo de unin entre el mundo
de la Medicina y el mundo de la Ley, y es quien tiene a su cargo la enseanza de la
Deontologa Mdica en la Facultad de Medicina.
Derecho, Deontologa y Etica: su definicin ha producido infinidad de publicaciones por parte
de juristas y filsofos. Derecho, Deontologa y Etica expresan la cultura de una sociedad en
particular en el dominio religioso.
Es indudable como hemos visto el valor de la huella gentica en Medicina Legal y
Antropologa, extensivo a muchas Ciencias ms y a muchos campos de aplicacin, pero no
hay que olvidar que como todo lo que atae a la intimidad de la persona humana puede
entraar serios problemas ticos y legales que hay que tener siempre presentes.
http://www.criminalistica.com.mx/areas-forenses/genetica-forense/1374-huellagenetica
Resumen.
La identificacin en Medicina Legal tiene unas consecuencias inmediatas sobre el individuo
que no aparecen en otros campos de la ciencia. La identificacin en el contexto mdico-
forense nos identifica al individuo, pero tambin a parte de sus circunstancias, ya que, al
margen de su participacin o no en los hechos nos relaciona a la persona con unos
determinados sucesos criminales, lo cual puede acarrearle una serie de consecuencias
sociales que en ocasiones pueden ser difcilmente reparables y justificables.
Introduccin.
En la dcada del 50 fue descubierto por los cientficos Whatson y Crick la molcula de ADN,
dicha hazaa cientfica revolucion el campo de la medicina especficamente la especialidad
gentica, a partir de ah se comenzaron mltiples intentos de modificar enfermedades que
hasta entonces solo tena tratamiento paliativo y no se podan prever, es importante sealar
que precisamente la parte de la molcula de ADN que se utiliza con fines clnicos es la no
variable ya que es la que consta con aminocidos que codifican a cada gen en cada tejido, sin
embargo no fue hasta 1985 que Dr Alec Jeffreys para la resolucin de un caso de inmigracin
de un joven procedente de Ghana lo aplica con fines forenses por primera vez y en segunda
ocasin dos aos ms tarde, en la investigacin criminal, posibilitando identificar a Robert
Melias, un pen de Bristol de 32 aos de edad, como autor de una agresin sexual a una
mujer enferma de polio, y a Nigel Davis como autor del denominado "caso del condado de
Leicestershire", en el que se produjo la violacin y muerte de dos mujeres del condado, la
primera en 1983 y la segunda en 1985 y donde los mtodos serolgicos clsicos no pudieron
lograr una individualizacin suficiente con los indicios biolgicos, su teora se basba en el
decubrimiento de regiones hipervariable que se extendan entre las codificantes, que no se
repiten entre los individuos y que cada ciertos segmentos vuelven de forma exacta a la misma
secuencia de aminocidos que present al principio lo que hacen identificar de forma absoluta
a
ese
individuo.
La variabilidad de estas zonas radica en diferencias exhibidas por el material gentico, en la
secuencia nucleotdica misma a travs de sustituciones de nucletidos, o en la distinta
longitud generada por una misma secuencia que se repite un nmero diferente de veces.
Cuando fue posible conocer su localizacin y desarrollar una metodologa adecuada para
ponerlas de manifiesto comenzaron a ser estudiadas mediante sistemas de anlisis cada vez
ms
precisos
y
sencillos.
El descubrimiento de regiones hipervariables del genoma con localizacin especfica permiti
el desarrollo de las sondas de locus nico que resolveran el problema, posibilitando el estudio
de una zona conocida del genoma que se visualizaba como dos nicas bandas para la
condicin heterocigota, correspondientes cada una a un alelo, heredado de cada progenitor.
Estas zonas estn constituidas por secuencias repetidas, que aparentemente carecen de
funcin como codificantes de protenas. La menor variabilidad exhibida por estos sistemas de
anlisis se solucionaba empleando un conjunto de cuatro o ms sondas unilocus que
evaluaban
otras
tantas
regiones
del
genoma.
Sin embargo, an persista un inconveniente para el empleo masivo de estas metodologas en
la prctica forense: las sondas multilocus, y en menor medida las unilocus, requeran un ADN
en estado ptimo en cuanto a su integridad, de alto peso molecular, lo cual rara vez ocurre en
cadveres en proceso de descomposicin, o en manchas antiguas de fludos biolgicos o
expuestas a condiciones ambientales adversas. La solucin lleg con el desarrollo de tcnicas
de amplificacin o "copiado" de porciones de ADN mediante la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR), con las cuales fue posible implementar sistemas de anlisis de secuencias
ms pequeas ("microsatlites" o "STRs"), pero menos variables que las anteriores. Con el
advenimiento de esta nueva tcnica, se hizo posible la evaluacin de polimorfismos en cuanto
a la secuencia nucleotdica de la regin variable, adems de las diferencias de longitud. Los
marcadores de identificacin para un locus establecido permite -de acuerdo con la
probabilidad estadstica de ocurrencia- establecer las relaciones filiatorias, en la medida en
que se constata su presencia en el genoma de cada uno de los individuos testeados.
La permanente innovacin metodolgica exige la actualizacin y perfeccionamiento de los
sistemas validados por la comunidad forense internacional, que cuenta al presente con la
posibilidad
de
evaluar
un
centenar
de
regiones
variables
del
genoma.
Bases
Genticas.
CODIFICANTE
Es el encargado de almacenar la informacin gentica en los genes, que son los diferentes
sectores de ADN con un orden concreto en la disposicin de los nucletidos que determina la
secuencia de aminocidos de las protenas que codifican y el grado de expresin del gen en
cada tejido y en cada tiempo. Esta funcin del ADN se corresponde con la idea generalizada
que
se
tiene
sobre
el
mismo.
ADN
NO
CODIFICANTE.
No obstante, existe otra parte del ADN cuya funcin especfica es desconocida en la
actualidad, aunque se sabe que no guarda informacin gentica y que juega un importante
papel en la estructura y en la funcin de los cromosomas y, sobre todo, actuando como puntos
calientes
de
recombinacin.
La identificacin mdico-legal a travs del anlisis del ADN se realiza sobre regiones no
codificantes del genoma, es decir, aquellas que no contienen informacin alguna sobre las
caractersticas fenotpicas de las personas. Es decir, que por medio del anlisis forense del
ADN no se puede saber sin un individuo es rubio, alto, gordo,... ni conocer si va a sufrir alguna
enfermedad o si tiene tendencia a padecer determinados tipos de patologas, ya que el ADN
no codificante no contiene esa informacin. Es cierto que si disponemos un archivo con
material biolgico (sangre o saliva) la muestra podra destinarse a otro tipo de anlisis,
diferente a la identificacin mdico-legal, pero tambin es cierto que las muestras archivadas
en esas bases de datos, al margen de las garantas que el sistema de cada pas disponga
para evitar el mal uso, no podrn ser utilizadas en otros estudios clnicos por la cantidad de
material (que es mnima, suficiente para el estudio forense, pero difcilmente para un anlisis
clnico) y por las condiciones y caractersticas del mismo, ya que este se guardan en forma de
manchas secas, con lo cual
la calidad del ADN se ver afectada.
Las caractersticas generales del ADN no codificante lo hacen especialmente til para su
aplicacin a la identificacin en Medicina Forense. Como se puede deducir de su trascendente
funcin, el ADN esencial est formado por secuencias altamente conservadas con muy pocas
variaciones interindividuales e intergeneracionales, ya que de lo contrario se podran ver
afectadas funciones bsicas para la vida de las personas. Los mnimos cambios que tienen
lugar, cuando son viables, aumentan el polimorfismo de protenas y enzimas, aunque tambin
pueden
tener
efectos
negativos.
Por el contrario, el ADN no codificante presenta una gran variabilidad de unos individuos a
otros, ya que estas secuencia no son conservadoras al no afectar sus cambios a la fisiologa
del individuo. Las variaciones debidas a cambios de bases sencillos, procesos de insercindeleccin o de intercambio de ADN (recombinacin) durante la formacin de las clulas
germinales (meiosis), hacen que se modifiquen el nmero de repeticiones o el orden de las
bases de un determinado fragmento repetitivo, pudiendo producirse en un locus sencillo o e
mltiples loci, siendo este el origen de la variacin que hace que no haya dos personas, a
excepcin de los gemelos univitelinos, que tengan la misma secuencia del ADN.
La repercusin prctica de lo anterior es la existencia de diferentes alelos, es decir la
posibilidad de que encontremos entre la poblacin varias formas de presentarse un
determinado
carcter
o
fragmento
de
ADN
no
codificante.
No obstante, existe otra parte del ADN cuya funcin especfica es desconocida en la
actualidad, aunque se sabe que no guarda informacin gentica y que juega un importante
papel en la estructura y en la funcin de los cromosomas y, sobre todo, actuando como puntos
calientes
de
recombinacin.
Este ADN puede ser de dos tipos: ADN espaciador, el cual est formado por una secuencia
sencilla de bases que se dispone entre regiones codificantes del genoma; y ADN repetitivo,
que lo forma una secuencia que, al contrario que el espaciador, se dispone por todo el
genoma debido a la existencia de mltiples copias. A su vez este ADN repetitivo se divide
segn las caractersticas de la secuencia en "Secuencias repetidas en tndem", en las que
existe una secuencia comn relativamente corta que se repite en tndem de manera continua
(una tras otra) en un fragmento de ADN ---- ATCGG ATCGG ATCGG ATCGG ATCGG ---- y
"Secuencias repetidas intercaladas", tratndose de una secuencia larga de bases que aparece
repetida, pero no a continuacin del primer grupo de secuencia repetitivo, sino en un lugar
diferente
y
distante
del
genoma:
ATCCCCGGGAATCGATAAACGGATC ---------------------ATCCCCGGGAATCGATAAACGGATC
Las caractersticas generales del ADN no codificante lo hacen especialmente til para su
aplicacin a la identificacin en Medicina Forense. Como se puede deducir de su trascendente
funcin, el ADN esencial est formado por secuencias altamente conservadas con muy pocas
variaciones interindividuales e intergeneracionales, ya que de lo contrario se podran ver
afectadas funciones bsicas para la vida de las personas. Los mnimos cambios que tienen
lugar, cuando son viables, aumentan el polimorfismo de protenas y enzimas, aunque tambin
pueden
tener
efectos
negativos.
Por el contrario, el ADN no codificante presenta una gran variabilidad de unos individuos a
otros, ya que estas secuencia no son conservadoras al no afectar sus cambios a la fisiologa
del individuo. Las variaciones debidas a cambios de bases sencillos, procesos de insercindeleccin o de intercambio de ADN (recombinacin) durante la formacin de las clulas
germinales (meiosis), hacen que se modifiquen el nmero de repeticiones o el orden de las
bases de un determinado fragmento repetitivo, pudiendo producirse en un locus sencillo o e
mltiples loci, siendo este el origen de la variacin que hace que no haya dos personas, a
excepcin de los gemelos univitelinos, que tengan la misma secuencia del ADN.
La repercusin prctica de lo anterior es la existencia de diferentes alelos, es decir la
posibilidad de que encontremos entre la poblacin varias formas de presentarse un
determinado
carcter
o
fragmento
de
ADN
no
codificante.
Metodologa
Recuperacin
para
el
y
trabajo
con
limpieza
los
indicios
del
evidencias.
material
Por elemental que parezca, no debemos olvidar nunca que los laboratorios slo estudian
aquello que se remite, y que el anlisis se inicia sobre el indicio en las condiciones en las que
llega, no en las que se manda; de ah la enorme importancia del indicio en el lugar de los
hechos.
Durante la recoleccin, conservacin y envo, debe evitarse la contaminacin, ya que
cualquier material orgnico procedente de los manipuladores o ruptura de la cadena de fro
puede
imposibilitar
el
estudio.
Normas
En
este
generales
sentido
deben
seguirse
las
siguientes
normas
generales:
1.- Procurar condiciones de mxima esterilidad, usando guantes de goma -si se entra en la
escena del crimen- e instrumentos esterilizados o adecuadamente limpiados para la obtencin
de
materiales
(pinzas,
tijeras
etc.).
2.- Volver a limpiar o utilizar un nuevo instrumento para recoger un indicio diferente. Si se
recoge con guantes, cambiar los mismos si se recoge un elemento diferente.
3.- Usar diferentes recipientes para cada indicio, aunque hayan sido recogidos en lugares muy
prximos
o
estuviesen
juntos.
4.- Etiquetar perfectamente cada uno de los recipientes haciendo referencia a:
a.
fecha
y
hora;
b.
identificacin
de
la
vctima;
c.
localizacin
del
indicio;
d.
tipo
de
indicio;
e.
nmero
del
mismo;
f.
nombre
de
la
persona
que
lo
recoge;
g.
referencia
al
caso
judicial.
5.- Enviar lo ms rpidamente posible al Juzgado o laboratorio, asegurando que si hay
muestras
con
cadena
de
fro,
esta
se
mantenga.
6.- Es fundamental y bsico tomar muestras testigo de la vctima y sospechoso. De ser posible
extrayndole sangre, o en su defecto con frotis de la cavidad bucal (siempre con autorizacin
de
la
persona
implicada).
7.- Tomar la filiacin de todas las personas que han intervenido o colaborado en la recogida de
las evidencias por si se produce algn problema de contaminacin cruzada.
Normas
generales
en
casos
especiales
Estas normas generales se completarn con aquellas que son especficas a determinados
vestigios
orgnicos
y
a
su
forma
de
presentacin.
Indicios lquidos. Se deben recoger con una jeringa estril; la sangre debe mantenerse
anticoagulada con EDTA, pero sirve con cualquier otro producto. Tambin se pueden utilizar
algodn, gasa, o hisopos estriles, para la recoleccin, dejndolos secar antes de almacenar.
Indicios hmedos. Se debe dejarlos secar a temperatura ambiente, sin aplicar ninguna fuente
de calor. No deben guardarse en estado hmedo, ya que la humedad favorece el crecimiento
de bacterias y hongos que puede afectar a la calidad del indicio (las enzimas restrictoras
pueden
degradar
el
DNA
de
los
microorganismos).
Manchas secas. Las podemos encontrar sobre objetos transportables (cuchillo, bolgrafo,
armas, elementos de limpieza, etc.) o sobre objetos no transportables (muebles, paredes,
sanitarios, etc.). Dentro de los primeros debemos incluir aquellos que se pueden cortar
(cortinas, alfombras, etc.). En el caso de que se puedan transportar enviaremos el objeto o el
trozo cortado del mismo, excepto si se trata de alguna prenda de vestir que la remitiremos sin
cortar. Cuando el objeto no es transportable (suelo, muebles,) procederemos a raspar la
mancha con un instrumento estril o lo mas limpio, depositando el raspado en un papel de
similares caracteres, que se doblar e introducir en un recipiente hermtico limpio para
mantener el indicio. En el caso de que se localicen pequeas gotas, como consecuencia de
salpicaduras, se debe raspar o tratar de recuperarlas aplicando sobre ellas una cinta
adhesiva.
Restos slidos. Con la misma precaucin, procederemos a su recoleccin y almacenamiento.
Cuando sean antiguos podremos tomarlos directamente usando guantes, pero sin son
recientes,
frgiles
o
maleables
debemos
usar
pinzas.
Pelos. Siempre se mantendr el cuidado que las normas generales aconsejan, debiendo ser
recogidos con pinzas. Debe evitarse un fallo muy frecuente al manejar pelos, ya que hay que
almacenar cada pelo en un recipiente diferente, pese a que aparezcan todos juntos e incluso
parezcan,
macroscpicamente,
proceder
de
una
misma
persona.
Un tema aparte los representan los huesos en casos antiguos o identificacin de restos con
varios aos o meses en cualquier medio, agua, tierra o sales de determinados terrenos.
Tambin se hace hincapi en dos casos que nos tocan muy de cerca por un lado restos de
fosas comunes. En nuestro pas luego del ltimo proceso de reorganizacin nacional. Y un
caso especial como fue el ltimo accidente del avin de Lapa en el aeropuesto Jorge Newbery
de
Capital
Federal.
Huesos. Deben ser manipulados con guantes de ciruga para evitar la contaminacin con
clulas epitaliales o sudor, como se dijo previamente. En lo posible trabajar con los huesos
recientemente desenterrados, sin lavar. El lavado, el secado y posterior almacenamiento
estando hmedo puede enmohecerlo y acelerar el proceso de degradacin. El exceso de
tierra o ceniza se elimina con escalpelo y el hueso se limpia en un chorro abrasivo de arena
fresca de xido de aluminio. Posteriormente, se elimina el polvo del hueso y el xido de
aluminio del hueso limpio utilizando una brocha suave (Hagelberg y Clegg, 1991: 45-46).
Una vez recogido el indicio debe conservarse en fro (+4C) o congelarlo a la mnima
temperatura posible. Se debe tener en cuenta que al conservar de esta manera, muy
posiblemente se invalide las muestras para otros anlisis diferentes a la identificacin de DNA.
Causas
ms
frecuentes
de
recusacin
de
la
prueba
pericial
de
ADN.
Contaminadas.
Con el fin de detectar cualquier fuente de contaminacin se deben tomar algunas medidas de
precaucin.
1. Realizar extractos de control en paralelo obtenidos de especimenes antiguos, para detectar
contaminacin
en
las
soluciones
y
reactivos.
2. Preparar varios extractos independientes de cada individuo y comparar la identidad y la
ausencia
de
ambigedad
en
las
secuencias.
3. En virtud de la fuerte correlacin inversa entre la eficiencia de la amplificacin y el tamao
del producto amplificado observado en el DNA antiguo pero no en el moderno, el tamao del
DNA amplificado puede servir como un criterio adicional de deteccin de contaminacin.
Secuencias superiores a 500 bp prueban invariablemente que la muestra se contamin con
DNA
de
especimenes
modernos.
Errores
producidos
por
cambios
post
mortem
Habitualmente no se espera que predominen los errores especficos producidos por cambios
post mortem en una poblacin amplificada de molculas. Si llegan a predominar y a causar
secuencias incorrectas, el patrn de sustitucin puede afectarse en un sentido predecible. Las
sustituciones pueden estar distribuidas aleatoriamente con relacin a las posiciones de los
codones, de hecho, no obstante, el ndice de cambios silenciosos a cambios por reemplazo al
azar
pueden
ser
de
2
a
8.
Secuencias
en
mosaico
va
PCR
saltarn.
El PCR saltarn es una propiedad adicional que puede afectar la autenticidad de las
secuencias amplificadas. Si las molculas moldes no abarcan el segmento total definido por el
de
las
pruebas
Para que un test forense sea admitido como prueba, ha de cumplir tres condiciones:
1. Que la teora cientfica en cuestin sea considerada vlida por la comunidad cientfica;
2.
La
fiabilidad
de
la
prueba
debe
ser
reconocida;
3. Debe demostrarse que sta se aplic adecuadamente en el caso concreto.
En Estados Unidos se ha utilizado la prueba de DNA en ms de 1.000 casos criminales, pero
slo en unas decenas de casos se le ha cuestionado en audiencias preprocesales. El poder
de la identificacin forense por DNA radica precisamente, no slo en la capacidad de
demostrar que dos muestras exhiben el mismo patrn, sino tambin para sugerir que el patrn
es rarsimo. En este sentido, la validez de los datos y las hiptesis sobre las que se han
basado los laboratorios forenses para estimar la rareza son objeto de debate entre la
comunidad
cientfica.
Los
mayores
problemas
en
la
utilizacin
de
las
pruebas
de
DNA
radican:
1. En los precios de las pruebas. Sus altos costos, la necesidad de recurrir a laboratorios
competentes y en el exterior, los escasos recursos que en los tribunales se asigna a las
pruebas periciales y la baja condicin socioeconmica de los acusados en su mayora
dificultan
su
utilizacin.
2. Para que la prueba tenga una alta confiabilidad se requiere conocer el genoma de la
poblacin comparativa. Un estudio de esta magnitud cuesta varios millones de dlares.
3. La incorrecta manipulacin de las muestras y las condiciones mismas de su degradacin
dificultan
su
utilizacin.
Por ltimo, la aceptacin de estas pruebas depende del conocimiento y caractersticas bsicas
de los test de DNA por parte fiscales, jueces y abogados, para no ser rebasados por la
complejidad del tema. En la medida en que se superen estas dificultades, con una regulacin
y adecuada estructuracin de laboratorios forenses, la nueva tcnica de tipificacin del DNA
cumplir un importante papel en el mejoramiento de las pruebas periciales, base de la justicia
moderna.
El
ADN
la
Investigacin
Biolgica
de
la
Paternidad.
La investigacin de la paternidad es un proceso tpico del derecho civil que se realiza en Cuba
a solicitud de uno de los progenitores para la reclamacin de un presunto padre o para tener
la certeza de una paternidad por un progenitor, sin embargo tambin puede ser causa de
solicitud para el derecho penal estos son los casos de los delitos sexuales donde la
concepcin
no
es
deseada
y
jurdicamente
agrava
el
delito.
Las caractersticas de estos hechos y las circunstancias que los rodean (conocimiento entre el
agresor y la vctima antes de que ocurrieran los hechos, victimizacin secundaria, secuelas
psquicas importantes, naturaleza semipblica del delito,...) hacen que en no pocos casos,
especialmente en los que no ha existido una violencia importante y hay cierto grado de
relacin entre agresor y vctima, o cuando hay alguna enfermedad mental en esta, la denuncia
pueda retrasarse un tiempo considerable respecto a los hechos y sean circunstancias fsicoclnicas las que la precipiten. Nos referimos fundamentalmente a cuando se diagnostica
alguna enfermedad de transmisin sexual o, sobre todo, cuando se produce un embarazo tras
la
agresin.
CONCLUSIONES
El desarrollo cientfico ha permitido la introduccin de la tecnologa del ADN en la
investigacin forense, posibilitando el estudio de indicios biolgicos mnimos, hecho que unos
pocos aos atrs era imposible. El Mdico Forense se encuentra en una posicin privilegiada
para recoger algunos vestigios que por su fragilidad pueden alterarse o perderse como
consecuencia de una actuacin retrasada, permitiendo su estudio y la resolucin del caso, con
las
consecuencias
beneficiosas
que
de
ello
se
derivaran.
Por otra parte, al margen de la profesionalidad y del compromiso deontolgico, se est
produciendo una exigencia por parte de la sociedad, cada vez ms conocedora de la
posibilidades tcnicas existentes a travs de los medios de comunicacin, reclamando una
responsabilidad profesional del personal encargado del caso, al igual que en otros campos de
la Medicina. As en Estados Unidos se han presentado ya querellas criminales contra
hospitales, mdicos y cuerpos policiales no federales por mal praxis y negligencia, al no
recoger indicios criminales que podran haber conducido a la identificacin del autor de los
hechos denunciados (en la mayora de las reclamaciones admitidas, por defectos en la toma o
conservacin
de
supuestos
indicios
de
semen
en
casos
de
violacin).
E
l estudio del ADN ha supuesto un enorme "paso de gigante" en la identificacin mdicoforense, tanto en la investigacin criminal, como en la investigacin biolgica de la paternidad.
Las especiales circunstancias en las que se desenvuelve la primera de ellas hace que el
potencial tecnolgico no sea suficiente para la consecucin del objetivo si previamente no se
ha realizado un buen trabajo por parte del equipo de investigacin encabezado por el Mdico
Forense, que por su formacin y especializacin es el profesional idneo para valorar los
indicios
biolgicos.
En los casos en los que haya que recoger las evidencias, debe hacerse en condiciones de
mxima limpieza o esterilidad todos los indicios de origen biolgico presentes,
almacenndolos independientemente y adecuadamente identificados en cuntos recipientes
estriles sea necesario y mantenindolos custodiados en un frigorfico hasta recibir las
instrucciones oportunas por parte de las Autoridades Judiciales. Cuando se proceda al envo
de las muestras, hay que asegurarse de que no se romper la "cadena de fro".
Parafraseando a BERTILLON, se puede afirmar que "slo se recoge lo que se ve, y slo se ve
lo que se tiene en la mente", lo cual exige una formacin y conocimiento adecuado del trabajo
a realizar.
http://www.criminalistica.com.mx/areas-forenses/genetica-forense/758-lahuella-genetica-en-medicina-legal-adn-con-fines-forenses