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artculo original
RESUMEN
Objetivos. Evaluar la actividad citotxica de extractos etanlicos de races, tallos, hojas y flores de Gnaphalium spicatum sobre algunas
lneas celulares tumorales humanas. Materiales y mtodos. Las lneas celulares HT-29, H-460, MCF-7, M-14, PC-3, DU-145, K-562, y
3T3, fueron expuestas a cuatro concentraciones de extractos etanlicos de races, tallos, hojas y flores de Gnaphalim spicatum, asimismo,
a diferentes concentraciones de cisplatino, que se us como control positivo. Se hall los porcentajes de crecimiento en 48 horas. Luego
se determin la concentracin inhibitoria 50 (CI50) mediante anlisis de regresin lineal, el ndice de selectividad de cada muestra
y finalmente, la relacin dosis-respuesta entre las concentraciones de los extractos y cisplatino, con los porcentajes de crecimiento.
Resultados. El extracto etanlico de las races de Gnaphalium spicatum mostr mayor actividad citotxica en la lneas celulares MCF-7 y
K-562. Los CI50 en g/mL fueron de 98 (r= -0,98 p < 0,01) y 46 (r= -0,97 p < 0,01), respectivamente. Asimismo, su citotoxicidad en la lnea
celular 3T3 fue de 215 (r= 0,97 p <0,01). Los CI50 del cisplatino en g/mL fueron de 2 (r=-0,96 p < 0,01), 7,7 (r=-0,98 p<0,01) y 3 (r=-0,97
p<0,01), para MCF-7, K-562 y 3T3, respectivamente. Los ndices de selectividad del extracto de races y cisplatino fueron 2,2 y 0,3 para
MCF-7, y 4,7 y 1,5 para K-562, respectivamente. Los extractos de tallos, hojas y flores obtuvieron CI50 > a 0,250 mg/mL en todas la lneas
celulares evaluadas. Conclusiones. Los extractos etanlicos de tallos, hojas y flores de Gnaphalium spicatum no mostraron actividad
citotxica en este bioensayo. Los extractos de races mostraron citotoxicidad en las todas las lneas celulares tumorales, excepto en
M-14. Adems fueron menos citotxicos en relacin al cisplatino en la lnea celular 3T3.
Palabras clave: Plantas medicinales; Fitoterapia; Citotoxicidad; Agentes antineoplsicos; Cultivo celular (fuente: DeCS BIREME).
INTRODUCCIN
El cncer es la segunda causa de muerte en el mundo (1),
cada ao, 10,9 millones de personas son diagnosticadas de
cncer y se estima que hay 24,6 millones de personas que
han recibido el diagnstico de cncer en los ltimos cinco aos
(2)
. Desde 1990, ha ocurrido un incremento en la incidencia
del cncer en 22%, siendo los ms frecuentes el de pulmn,
mama, colon y estmago (3). En el Per, el registro de cncer
1
3
4
5
2
Servicio de Medicina General, Centro Mdico Cono Sur, Red Asistencial Tacna, EsSalud. Tacna, Per.
Posta Mdica Paucartambo, Red Asistencial Pasco, EsSalud. Pasco, Per.
Sociedad Cientfica de San Fernando, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima, Per.
Sociedad Cientfica de Estudiantes de Medicina del Centro, Facultad de Medicina, Universidad Nacional del Centro del Per. Huancayo, Per.
Departamento de Microbiologa, Laboratorios de Investigacin y Desarrollo, Facultad de Ciencias y Filosofa, Universidad Peruana Cayetano
Heredia. Lima, Per.
Mdico Cirujano SERUMS b Estudiante de Medicina c PhD en Biologa.
Recibido: 29-09-08
380
Aprobado: 28-12-08
MATERIALES Y MTODOS
Es un estudio biolgico experimental in vitro. La unidad experimental fue cada clula perteneciente a las lneas celulares
humanas: HT-29 (adenocarcinoma de colon), H-460 (carcinoma pulmonar tipo clulas no pequeas), MCF-7 (adenocarcinoma de mama), M-14 (melanoma amelantico), PC-3 (adenocarcinoma de prstata metastsico), DU-145 (carcinoma de
prstata), K-562 (leucemia mieloide crnica) y 3T3 (fibroblastos
normales de ratn) proporcionados por los Laboratorios de In-
N. de
clulas/38mL
MCF-7
5000
1 187 500
K-562
2500
593 750
PC-3
3500
831 250
HT-29
3000
712 500
H-460
1500
356 250
M-14
5000
187 500
DU-145
3500
831 250
3T3
3000
712 500
Lnea celular
381
Callacondo-Riva D et al.
Tabla 2. Diluciones del extracto etanlico de races, tallos, hojas y flores de Gnaphalium spicatum y cisplatino.
Control positivo
Gnphalium spicatum
Diluciones
Races
(mg/mL)
Tallos
(mg/mL)
Hojas
(mg/mL)
Flores
(mg/mL)
Cisplatino (mg/
mL)
1
2
3
4
0,250
0,063
0,016
0,004
0,250
0,063
0,016
0,004
0,250
0,063
0,016
0,004
0,250
0,063
0,016
0,004
0,01563
0,00391
0,00098
0,00024
y=mx+b). Luego, se precis el ndice de selectividad de los extractos, definido como la relacin de citotoxicidad entre clulas
normales y clulas cancerosas: CI50 (lnea celular 3T3) / CI50
(lnea tumoral), el cual es >1 cuando la citotoxicidad para las
clulas tumorales supera a la citotoxicidad en las clulas normales. Finalmente, se determin los coeficientes de correlacin
de Pearson (r), que nos indicaron la relacin dosis-respuesta
entre las concentraciones y el porcentaje de crecimiento. Se
consider un p<0,05 como significativo.
RESULTADOS
Para los extractos de races, tallos, hojas y flores, el comportamiento de las lneas fue el siguiente. Para la lnea MCF-7
los porcentajes de crecimiento estuvieron entre 16,7 a 111,8,
asimismo en la lnea celular K-562, estuvieron entre 25 y 111,6.
Para el caso de PC-3 fueron de 26,3 a 112,7. En HT-29 variaron
de 17 a 115,9. En la lnea celular H460 los valores fueron entre
41,7 a 114,3 y en M-14 fueron de 51,2 a 108. Finalmente, en
la lnea celular control 3T3 fueron -2,1 a 117,4. En el control
cisplatino, el menor porcentaje de crecimiento fue para la lnea
celular DU-145 siendo de -4,8. Por el contrario, el mayor porcentaje de crecimiento frente al control cisplatino fue para la
lnea celular PC-3, siendo 123,1.
En la Tabla 3, se aprecia los valores de CI50 de los extractos de
races, tallos, hojas y flores de Gnaphalium spicatum, as como
del control cisplatino en las lneas celulares tumorales estudiadas. El comportamiento de hojas, tallos y flores de Gnaphalium
spicatum mostr CI50 superiores a 0,250 mg/mL, que fue la mayor concentracin utilizada en el bioensayo, no evidenciando
citotoxicidad en el presente estudio. Por el contrario, las races
mostraron actividad citotxica, en todas las lneas celulares tumorales, excepto para M-14 (CI50 > 0,250 mg/mL).
Tabla 3. Valores de CI50 y citotoxicidad de los extractos etanlicos de Gnaphalium spicatum y cisplatino en clulas tumorales y normales.
Sustancias
citotxicas
Valores de CI 50 (mg/mL)
Clulas tumorales
MCF-7
K-562
PC-3
HT-29
Clulas normales
H-460
M-14
DU-145
3T3
Extractos
Races
0,0975
0,0459
0,1476
0,1343
0,2028
> 0,250
0,1867
0,2151
Tallos
> 0,2500
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,2500
Hojas
> 0,2500
0,1008
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
0,0739
Flores
> 0,2500
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,250
> 0,2500
0,01210
0,0002
0,0077
>0,0156
0,0004
0,0047
0,0005
0,0003
Control
Cisplatino
Concentracin inhibitoria 50
382
Tabla 4. Coeficientes de correlacin de Pearson (r) para las lneas celulares tumorales y controles: grado de relacin dosis respuesta de las
concentraciones de extractos etanlicos de races y cisplatino
Sustancias
Extracto de races
Cisplatino
DU-145
-0,98
-0,99
-0,87
-0,96
MCF-7
-0,98
-0,99
M-14
HT-29
PC-3
K-562
Lnea celular
control (3T3)
-0,99
0,98
-0,99
-0,98
-0,99
-0,97
-0,98
-0,97
-0,99
-0,97
Valor p < 0,05; Valor p <0,01; Valor p > 0,05 (no significativo)
El extracto de races de Gnaphalium spicatum obtuvo una mayor actividad citotxica en las lneas celulares MCF-7 y K-562.
(Figura 1a y b). Sin embargo, su citotoxicidad fue menor en
comparacin al cisplatino para la lnea control 3T3. (Figura 1c)
120
100
80
60
40
20
0
(a)
120
100
80
60
El grado de correlacin de la relacin dosis respuesta fue evaluado mediante el coeficiente de Pearson; los valores variaron
entre -0,98 y -0,99 para el extracto de races y entre -0,87 y
-0,99 para el control cisplatino. (Tabla 4). El extractos etanlico
de races de Gnaphalium spicatum y el control cisplatino, mostraron una relacin dosis respuesta significativa (p < 0,05), en
todas las lneas celulares evaluadas en el bioensayo.
DISCUSIN
40
20
0
(b)
120
60
40
20
G.spicatum (races)
3
2.2
1.6
1.5
1.5
Concentraciones ug/mL
G. spicatum (races)
Cisplatino
1.15
1.06
(c)
4.7
Cisplatino
80
Indice de Selectividad
100
0.75
0.04
PC3
0.03
MCF-7
0.6
0.01
HT-29
K-562
H-460
DU-145
383
384
Callacondo-Riva D et al.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1.
2.
3.
4.
5.
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7.
8.
9.
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